Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-09Bitstream added on 2014-06-13T20:27:58Z : No. of bitstreams: 1 cardoso_m_me_sjc.pdf: 644379 bytes, checksum: 1cc6342f5a099baa07f73649f18af2d4 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A técnica da espectroscopia infravermelha por transformada de Fourier (FT-IR) vem sendo largamente empregada como uma abordagem rápida e simples para a identificação de microrganismos, incluindo a do gênero Candida. A proposta deste estudo foi avaliar o emprego da microespectroscopia FT-IR na identificação e discriminação de 5 cepas clínicas de Candida albicans e 3 de Candida glabrata, as quais foram identificadas previamente por meio de métodos convencionais, e mais duas cepas ATCC de cada espécie. As amostras foram analisadas em triplicata, a partir de culturas independentes, por meio de filmes finos obtidos da suspensão em solução salina estéril a 0,85% da biomassa da colônia que ficou incubada por 24 horas em placas com ágar Saboraud Dextrose. Dez espectros com 32 varreduras foram obtidos na forma de ponto em 10 regiões selecionadas aleatoriamente nas amostras. A média foi obtida dos dez espectros de cada amostra para a análise estatística multivariada, dada pela análise de cluster. Além disso os espectros foram transformados em primeira derivada e três janelas espectrais foram determinadas (900-1250 cm-1, 1300-1600 cm-1, 2800-3000 cm-1). A representação dos resultados foi dada pela construção de um dendograma. Nesse, foi possível separar em dois grupos distintos as duas espécies de Candida estudadas. Dessa forma, pode-se concluir que a microespectroscopia FT-IR foi capaz de identificar e discriminar cepas clínicas de Candida albicans e de Candida glabrata, sendo um método promissor para identificação de leveduras / The technique of infrared spectroscopy Fourier transform (FT-IR) has been widely used as a new approach for rapid identification and simple micro-organisms, including the genus Candida. The purpose of this study was to evaluate the use of FT-IR microspectroscopy for the identification and discrimination of 5 clinical strains of Candida albicans and Candida glabrata 3, which were previously identified by conventional methods, and two-standard strains of each species. The samples were analyzed in triplicate from independent cultures by means of thin films obtained from a suspension in sterile saline and 0.85% of the biomass of the colony that was incubated for 24 hours in Sabouraud dextrose agar plates. Ten spectra with 32 scans were obtained in 10 randomly selected regions in the samples.The average of ten spectra was obtained from each sample for the multivariate analysis, given by cluster analysis. In addition, three windows were determined spectral (900-1250 cm-1, 1300-1600 cm-1, 2800-3000 cm-1) and the spectra were transformed into first derivative. The representation of the results was given by the construction of a dendrogram. In this, we separated into two groups of two Candida species studied. Thus, one can conclude that the FT-IR microspectroscopy was able to identify and distinguish clinical isolates of Candida albicans and Candida glabrata is an important method for identification of yeasts

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-20Bitstream added on 2014-06-13T18:09:12Z : No. of bitstreams: 1 pereira_ca_me_sjc.pdf: 3427201 bytes, checksum: 7d684064d1dd59c89bf2d7b2b63a765e (MD5) / O objetivo do trabalho foi avaliar o efeito antimicrobiano da terapia fotodinâmica (TFD) em biofilmes formados por C. albicans (GI), S. aureus (GII) e S. mutans (GIII), isolados e em associações (GIV-VII). Os biofilmes foram formados em discos de resina acrílica esterilizados imersos em caldo de infusão cérebro coração com 5% de sacarose, inoculados com a suspensão microbiana e incubados por 5 dias. Após o período de incubação, os discos foram lavados com solução fisiológica esterilizada para remover as células não-aderidas. Foram avaliados os efeitos do fotossensibilizador azul de metileno (AM) na concentração de 0,1 mg/mL por 5 min e laser AsGaAl (660 nm) por 98 s, isolados e em conjunto. Os biofilmes foram desprendidos em solução fisiológica em agitador ultrasônico. Foram realizadas diluições e alíquotas semeadas em ágar seletivos e incubadas por 48 h. Os números de UFC/mL em Log10 foram analisados estatisticamente (ANOVA, teste de Tukey, p< 0.05). Também foi realizada a microscopia eletrônica de varredura (MEV) nos discos com biofilmes dos grupos controle e TFD. Foram observadas reduções significativas na viabilidade de todos os biofilmes expostos ao AM e laser. As reduções (log10) foram maiores em biofilmes isolados, com: 40.22% para C. albicans (GI), 55.91% para S. aureus (GII) e 47.35% para S. mutans (GIII). Nos biofilmes mistos as reduções (log10) foram: 35.08% para C. albicans e 43.9% para S. aureus (GIV); 31.54% para C. albicans e 38.7% para S. mutans (GV); 40.12% para S. aureus e 37.14% para S. mutans (GVI); 19.56% para C. albicans, 28.41% para S. aureus e 24.94% para S. mutans (GVII). As imagens de MEV demonstraram uma fotossensibilização letal predominantemente nas camadas superiores dos biofilmes. Conclui-se que a TFD pode ser uma abordagem útil no controle de biofilmes bucais. / The purpose of this study was to evaluate the antimicrobial effect of photodynamic therapy (PDT) in biofilms formed by C. albicans (GI), S. aureus (GII) and S. mutans (GIII), alone and in associations (GIVGVII). The biofilms were grown in acrylic resin discs immersed in sterile brain heart infusion broth (BHI) containing 5% sucrose, inoculated with microbial suspension and incubated for 5 days. On the fifth day, the discs were washed in sterile saline solution in order to remove loosely bound material. The effects of the methylene blue (MB) photosensitizers at a concentration of 0,1 mg/mL for 5 min and AsGaAl laser (660 nm) for 98 s, alone and conjugated were evaluated. The dics were placed into tubes with sterile saline solution and sonicated for 30 s in order to disperse the biofilms. Ten-fold serial dilutions were carried out and aliquots plated in selective agar which were then incubated for 48 h. Then the numbers CFU/mL (log10) were counted and analyzed statistically (ANOVA, Tukey´s test, p< 0,05) Scanning electron microscopy (SEM) on discs with PDT and control biofilms groups were performed. Significant decreases in the viability of all microorganisms were observed when biofilms were exposed to both MB and laser. Reductions (log10) in single-species biofilms were greater than associated biofilms with: 40.22% for C. albicans (GI), 55.91% for S. aureus (GII) and 47.35% for S. mutans (GIII). In associated biofilms the reductions (Log10) were: 35.08% for C. albicans and 43.9% for S. aureus (GIV); 31.54% for C. albicans and 38.7% for S. mutans (GV); 40.12% for S. aureus and 37.14% for S. mutans (GVI); 19.56% for C. albicans, 28.41% for S. aureus and 24.94% for S. mutans (GVII). Scanning electron microscopy micrographs suggested that lethal photosensitization occurred predominantly in the outermost layers of the biofilms. It was concluded that PDT using MB photosensitizer and laser may be a useful approach in the control of oral biofilms.

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3694.pdf: 1040825 bytes, checksum: 07255db3fd1638e75419879ee51ac8ab (MD5) Previous issue date: 2009-09-03 / Universidade Federal de Sao Carlos / Endophytic microorganisms lives in symbiotic association with plants and in one unique biological niche, and they are potential producers of natural bioactive substances with different chemical structure and biological activity. This study aimed to isolate and characterize endophytic microorganisms from Miconia albicans from Cerrado of São Carlos - SP. Samples were characterized phenotypically from typical features of colony morphology and macroscopic measurements, physiological, biochemical and morphodyeing and genotypically by 16S rRNA analysis. We evaluated the antagonistic potential of the isolates against Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922, Serratia marcensis IAL 1475, Enterococcus faecalis ATCC 29212, Shigella sonnei ATCC 10231 and Candida albicans ATCC 10231. Two samples (1 and 3) showed bioactivity against E. faecalis, with inhibition halos of 1.30 and 1.90 cm in diameter, respectively. A single sample (2) showed activity against S. marcensis (3.60 cm) with no significant bioactivity against the other microorganisms tested. In one sample (4) showed activity against four of the six microorganisms tested: E. faecalis (3,15 cm) , S. aureus (3,50 cm), C. albicans (3,35 cm) e S. sonnei (3,20 cm). In another sample (6) was detected bioactivity against E. faecalis and S. aureus, with inhibition zones of 1.80 and 1.50 cm, respectively. One of the samples (8) showed bioactivity against the greatest number of indicator microorganisms with inhibitory halos of 2.60 cm against E. faecalis, 1.50 cm against S. aureus, 2.40 cm against C. albicans, 2.10 cm against E. coli and 2.50 cm against S. sonnei. In two samples (5 and 7) there was no evidence the bioactive ability against indicator microorganisms tested. Phenotypic analysis of 8 endophytic microorganisms isolated allowed us to classify 50% of these (samples 4, 6, 7 and 8) in the Actinomyces group and the others were classified in the genus Streptomyces (samples 1, 2, 3 and 5). In the genotypic analysis of two isolates with bioactivity were identified as Nocardiopsis Dassonville (sample 3) and Amycolatopsis orientalis (sample 8), reporting for the first time his association with endophytic aerial parts of Miconia albicans from Cerrado of São Carlos, SP. / Microrganismos endofíticos vivem em associação simbiótica com plantas e habitam nichos biológicos únicos, além de serem potenciais produtores de substâncias naturais bioativas com estrutura química e atividade biológica diversas. Este trabalho objetivou isolar e caracterizar microrganismos endofíticos a partir de Miconia albicans do Cerrado de São Carlos SP. Amostras foram caracterizadas fenotipicamente a partir de tipicidade de morfologia colonial e determinações macroscópicas, fisiológicas, bioquímicas e morfo-tintoriais e genotipicamente através de análises de RNAr 16S. Foi avaliado o potencial antagônico dos isolados contra Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922, Serratia marcensis IAL 1475, Enterococcus faecalis ATCC 29212, Shigella sonnei ATCC 10231 e Candida albicans ATCC 10231. Duas amostras (1 e 3) apresentaram bioatividade contra E. faecalis, com halos de inibição de 1,30 e 1,90 cm de diâmetro, respectivamente. Uma única amostra (2) apresentou atividade contra S. marcensis (3,60 cm), não apresentando bioatividade contra os demais microrganismos testados. Em uma amostra (4) observou-se atividade contra quatro dos seis microrganismos testados: E. faecalis (3,15 cm) , S. aureus (3,50 cm), C. albicans (3,35 cm) e S. sonnei (3,20 cm). Em outra amostra (6) detectou-se bioatividade contra E. faecalis e S. aureus, com halos de inibição de 1,80 e 1,50 cm, respectivamente. Uma das amostras (8) apresentou bioatividade contra o maior número de microrganismos indicadores, com halos inibitórios de 2,60 cm contra E. faecalis, 1,50 cm contra S. aureus, 2,40 cm contra C. albicans, 2,10 cm contra E. coli e 2,50 cm contra S. sonnei. Em duas amostras (5 e 7) não foi evidenciada habilidade bioativa contra os microrganismos indicadores testados. Análises fenotípicas dos 8 microrganismos endofíticos isolados permitiram classificar 50% destes (amostras 4, 6, 7 e 8) no grupo Actinomyces e os outros foram classificados no gênero Streptomyces (amostras 1, 2, 3 e 5). Na análise genotípica dois dos isolados apresentando bioatividade foram caracterizados como Nocardiopsis dassonvillei (amostra 3) e Amycolatopsis orientalis (amostra 8), relatando pela primeira vez sua associação endofitica com partes aéreas de Miconia albicans do Cerrado de São Carlos, SP.

Submitted by LUNA MARES LOPES DE OLIVEIRA (DINTER) null (lunamares@saolucas.edu.br) on 2017-01-27T02:26:31Z No. of bitstreams: 1 CAPITULO TESE - LUNA MARES LOPES DE OLIVEIRA.pdf: 792305 bytes, checksum: 7e19ae8eb4ac1ad2447d7290d4746ef9 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-01-31T13:11:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 oliveira_lml_dr_araca.pdf: 792305 bytes, checksum: 7e19ae8eb4ac1ad2447d7290d4746ef9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-31T13:11:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 oliveira_lml_dr_araca.pdf: 792305 bytes, checksum: 7e19ae8eb4ac1ad2447d7290d4746ef9 (MD5) Previous issue date: 2016-01-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As propriedades antimicrobianas da romã são atribuídas aos compostos fenólicos, mais especificamente aos taninos hidrolisáveis (THs) galotaninos (ácido gálico) e elagitaninos (ácido elágico), substâncias naturais de defesa da planta. Os objetivos deste estudo foram avaliar os níveis de ácido elágico e fenóis totais, rendimento dos métodos de extração e o potencial inibitório sobre Candida albicans de extratos de partes da Punica granatum. Amostras em triplicata de cascas, sementes e folhas desidratadas, trituradas, pulverizadas, foram submetidas a dois métodos de extração: soxhlet tendo como solventes etanol e metanol e percolação tendo como solvente o etanol. Após a obtenção dos extratos, foram determinados os teores de ácido elágico por cromatografia liquida de alta eficiência e fenóis totais expressos em ácido gálico pelo método espectrofotométrico. A atividade antifúngica dos extratos foi avaliada pelo método de difusão em disco, seguindo-se as normas do National Committee for Clinical and Laboratory Standards (NCCLS document M2-A8, 2003a.). As maiores concentrações de fenóis totais e de ácido elágico foram encontradas nas folhas e na casca da romã. Verificou-se maior eficiência de rendimento por meio da percolação. Os resultados de difusão em disco revelaram maior sensibilidade da cepa de C. albicans aos extratos etanólicos da casca por ambos os métodos de extração. O método percolação alcoólica a 70% e 25ºC e a casca da romã apresentaram a maior eficiência de extração e de atividade anti-fúngica contra uma cepa clínica de C. albicans. / The antimicrobial properties of pomegranate are attributed to the phenolic compounds, more specifically the hydrolyzable tannins (THs) galotaninos (gallic acid) and elagitaninos (ellagic acid), natural plant defense substances. The objectives of this study were to evaluate the levels of ellagic acid and total phenols, yield of the extraction methods and the inhibitory potential against Candida albicans of extracts from parts of Punica granatum. Samples of dried, peels, seeds and leaves were used in triplicates and the extracts were obtained by Soxhlet system and percolation using respectively ethanol, methanol and ethanol solvents. After obtaining the extracts, the ellagic acid contents were determined by high performance liquid chromatography (HPLC) and total phenols expressed in gallic acid by the spectrophotometric method. The antimicrobial activity was evaluated by the disc diffusion method, following the standards of the National Committee for Clinical and Laboratory Standards (NCCLS document M2-A8, 2003a.). The highest concentrations of THs were found in leaves and pomegranate peel. Greater yield efficiency was verified by percolation. The results of diffusion on disc revealed higher sensitivity of the C. albicans strain to the ethanolic extracts of peels by both methods of extraction, presenting inhibition halos of approximately 10 mm. The alcoholic percolation method at 70% and 25ºC and the pomegranate peel showed the highest extraction efficiency and antifungal activity against a clinical strain of C. albicans. / FAPESP: 2014/08643-2 / CAPES: 88881.030445/2013-1

Orientador: Luciane Dias de Oliveira / Banca: Célia Regina Gonçalves e Silva / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Resumo: A técnica da espectroscopia infravermelha por transformada de Fourier (FT-IR) vem sendo largamente empregada como uma abordagem rápida e simples para a identificação de microrganismos, incluindo a do gênero Candida. A proposta deste estudo foi avaliar o emprego da microespectroscopia FT-IR na identificação e discriminação de 5 cepas clínicas de Candida albicans e 3 de Candida glabrata, as quais foram identificadas previamente por meio de métodos convencionais, e mais duas cepas ATCC de cada espécie. As amostras foram analisadas em triplicata, a partir de culturas independentes, por meio de filmes finos obtidos da suspensão em solução salina estéril a 0,85% da biomassa da colônia que ficou incubada por 24 horas em placas com ágar Saboraud Dextrose. Dez espectros com 32 varreduras foram obtidos na forma de ponto em 10 regiões selecionadas aleatoriamente nas amostras. A média foi obtida dos dez espectros de cada amostra para a análise estatística multivariada, dada pela análise de cluster. Além disso os espectros foram transformados em primeira derivada e três janelas espectrais foram determinadas (900-1250 cm-1, 1300-1600 cm-1, 2800-3000 cm-1). A representação dos resultados foi dada pela construção de um dendograma. Nesse, foi possível separar em dois grupos distintos as duas espécies de Candida estudadas. Dessa forma, pode-se concluir que a microespectroscopia FT-IR foi capaz de identificar e discriminar cepas clínicas de Candida albicans e de Candida glabrata, sendo um método promissor para identificação de leveduras / Abstract: The technique of infrared spectroscopy Fourier transform (FT-IR) has been widely used as a new approach for rapid identification and simple micro-organisms, including the genus Candida. The purpose of this study was to evaluate the use of FT-IR microspectroscopy for the identification and discrimination of 5 clinical strains of Candida albicans and Candida glabrata 3, which were previously identified by conventional methods, and two-standard strains of each species. The samples were analyzed in triplicate from independent cultures by means of thin films obtained from a suspension in sterile saline and 0.85% of the biomass of the colony that was incubated for 24 hours in Sabouraud dextrose agar plates. Ten spectra with 32 scans were obtained in 10 randomly selected regions in the samples.The average of ten spectra was obtained from each sample for the multivariate analysis, given by cluster analysis. In addition, three windows were determined spectral (900-1250 cm-1, 1300-1600 cm-1, 2800-3000 cm-1) and the spectra were transformed into first derivative. The representation of the results was given by the construction of a dendrogram. In this, we separated into two groups of two Candida species studied. Thus, one can conclude that the FT-IR microspectroscopy was able to identify and distinguish clinical isolates of Candida albicans and Candida glabrata is an important method for identification of yeasts / Mestre

CAPES / O estudo de alguns dos efeitos das radiações ultravioleta C (UV-C) e terapia fotodinâmica (TFD) em células das leveduras Saccharomyces boulardii e Candida albicans foi realizado expondo-se células destes micro-organismos a diferentes intensidades destas radiações, calculadas com base no tempo de exposição e potência das fontes utilizadas. A exposição à UV-C foi realizada após inoculação dos micro-organismos em ágar YEPD que em seguida foram expostos a uma distância de 35cm da fonte em tempos que variaram entre 5s e 40s para S. boulardii e 10s e 60s para C. albicans. Os experimentos foram realizados em triplicatas, sendo uma para verificação da sensibilidade da célula à radiação e uma para verificação da fotorreativação após a irradiação com UV-C. As células consideradas mutantes, isoladas em um segundo experimento, foram submetidas a provas bioquímicas, para avaliação de alterações em seu metabolismo, e posteriormente a microscopia, para avaliação de alterações morfológicas. Os experimentos com TFD foram realizados expondo-se os microrganismos aos agentes fotossensibilizantes e posteriormente a lâmpada de LEDs em tempos entre 3 min e 12min. Os resultados mostram que a radiação UV-C é eficiente na redução populacional dos micro-organismos estudados, além de terem sido observados, nos testes bioquímicos, alterações no metabolismo da S. boulardii, como perda da capacidade de assimilar açúcares e fontes de nitrogênio. As alterações morfológicas foram o alongamento celular e diminuição no tamanho da colônia. A TFD, por sua vez, não demonstrou ação antimicrobiana com a metodologia utilizada, apenas observou-se uma aparente recuperação das células que foram expostas às substâncias tóxicas utilizadas para sua fotossensibilização. Conclui-se que a levedura patogênica C. albicans é mais resistente à radiação UV-C comparando-se com a S. boulardii, pois necessita 60s de exposição à UV-C contra 40s para redução decimal de S. boulardii. A metodologia para TFD utilizada neste trabalho não provocou redução populacional as células estudas / The study of some effecs of ultraviolet C (UVC) and photodynamic therapy (PDT) in S. boulardii and C. albicans cells was performed by exposing the cells to different radiation intensities, and was computed based on the exposure time and power sources used. The exposure to UV-C was performed after the inoculation of microorganisms in YEPD agar and immediately exposed to UV-C rays at distance of 35 cm from the source for lengths of time ranging from 40s to 5s for S. boulardii and from 10s to 60s for C. albicans. The experiments were performed in triplicate, once for checking the cell’s sensitivity by radiation and once to test the occurrence of photoreactivation after irradiation with UV-C. The cells considered mutants, isolated in another experiment, were submitted to biochemical tests to assess changes in their metabolism, and, later, microscopy to assess morphological changes. The experiments with PDT were done by exposing the microorganisms to the photosensitizing agents and later to the LED bulb for lengths of time ranging from 3 min to 12 min. The results show that UV-C is effective in reducing the population of microorganisms. The biochemical tests also showed changes in the metabolism of the S. boulardii such as a loss in the ability to assimilate sugars and nitrogen sources. The morphological changes were cell elongation and reduction of the colony size. PDT, in turn, showed no antimicrobial action with this methodology. There was only an apparent recuperation of cells that were exposed to toxic substances used in its photosensitization. Our conclusion is that the pathogenic yeast C. albicans is more resistant to UV-C rays compared with the S. boulardii because it needs 60 seconds of exposure to UV-C against 40 seconds for a decimal reduction of S. boulardii. The methodology used for PDT in this study did not cause population reduction in the studied cells.

Orientador: Ana Luicia Machado / Banca: Carlos Eduardo Vergani / Banca: Valtencir Zucolotto / Resumo: Apesar do uso de drogas antifúngicas no tratamento da estomatite protética, freqüentemente a infecção é persistente e a resistência microbiana tem sido observada nos biofilmes de Candida albicans. Dessa forma, existe a necessidade de se desenvolver outros agentes antimicrobianos tais como as nanopartículas de prata (AgNPs). Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de uma solução preparada de AgNPs sobre C. albicans em suspensão. Além disso, os efeitos da incorporação de diferentes concentrações da solução de AgNPs em uma resina acrílica para base de prótese e o armazenamento por períodos de até 180 dias no ângulo de contato, adesão e formação de biofilme foram avaliados. A solução de AgNPs foi sintetizada por meio de redução química utilizando borohidreto de sódio (NaBH4) como agente redutor e polivinil álcool (PVA) como estabilizante, e foi caracterizada utilizando espectroscopia UV-visível (UV-vis), espectrometria de infravermelho por transformada de Fourier (FTIR) e espalhamento de luz dinâmico (DLS). A susceptibilidade antimicrobiana da solução de AgNPs de diferentes concentrações (de 1000 a 20 ppm) foi avaliada em C. albicans suspensão (ATCC 90028). A solução de AgNPs foi também misturada com o pó da resina para produzir resinas acrílicas com AgNPs incorporadas nas concentrações finais de 1000, 750, 500, 250 e 30 ppm. Resina sem AgNPs foi utilizada como controle. Amostras em forma de discos (13 × 2 mm) de cada concentração (n=72) foram preparadas e armazenadas em PBS estéril por 0, 7, 90 e 180 dias (n=18). Após esses períodos, os ângulos de contato foram mensurados em um goniômetro. A seguir, 9 amostras de cada concentração foram utilizadas para o teste de aderência de C. albicans (90 minutos de incubação), e 9 para o teste de formação de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Despite the use of antifungal drugs to treat denture stomatitis, infection is often persistent and antifungal resistance has been observed in C. albicans biofilms. Therefore, there is a need to develop alternative antimicrobial agents such as silver nanoparticles (AgNPs). Thus, the objective of this study was to evaluate the effect of a prepared AgNPs aqueous solution against C. albicans suspension. Additionally, the effects of incorporation of different concentrations of the AgNPs solution into a denture base acrylic resin and storage for up to 180 days on the contact angle, C. albicans adhesion and biofilm formation were evaluated. The AgNPs solution was synthesized by chemical reduction using sodium borohydride as reducing agent and polyvinyl alcohol as stabilizer, and was characterized by UV-visible spectroscopy, Fourier transform infrared spectroscopy and Dynamic Light Scattering. The antimicrobial susceptibility of AgNPs solution of different concentrations (from 1000 to 20 ppm) was performed against C. albicans suspension (ATCC 90028). The AgNPs solution was also mixed with the acrylic powder to produce silver-incorporated acrylic resins at the final concentrations of 1000, 750, 500, 250 and 30 ppm. Resin without AgNPs was used as control. Disk-shaped samples (13 × 2 mm) of each concentration (n=72) were prepared and stored in sterile PBS for 0, 7, 90 and 180 days (n=18). After the storage periods, the contact angles were measured in a goniometer. Then, 9 samples of each concentration... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-17Bitstream added on 2014-06-13T19:00:20Z : No. of bitstreams: 1 wady_af_me_arafo.pdf: 531289 bytes, checksum: f03e54a3a96691d52c47dbbf0cd1479d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Apesar do uso de drogas antifúngicas no tratamento da estomatite protética, freqüentemente a infecção é persistente e a resistência microbiana tem sido observada nos biofilmes de Candida albicans. Dessa forma, existe a necessidade de se desenvolver outros agentes antimicrobianos tais como as nanopartículas de prata (AgNPs). Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de uma solução preparada de AgNPs sobre C. albicans em suspensão. Além disso, os efeitos da incorporação de diferentes concentrações da solução de AgNPs em uma resina acrílica para base de prótese e o armazenamento por períodos de até 180 dias no ângulo de contato, adesão e formação de biofilme foram avaliados. A solução de AgNPs foi sintetizada por meio de redução química utilizando borohidreto de sódio (NaBH4) como agente redutor e polivinil álcool (PVA) como estabilizante, e foi caracterizada utilizando espectroscopia UV-visível (UV-vis), espectrometria de infravermelho por transformada de Fourier (FTIR) e espalhamento de luz dinâmico (DLS). A susceptibilidade antimicrobiana da solução de AgNPs de diferentes concentrações (de 1000 a 20 ppm) foi avaliada em C. albicans suspensão (ATCC 90028). A solução de AgNPs foi também misturada com o pó da resina para produzir resinas acrílicas com AgNPs incorporadas nas concentrações finais de 1000, 750, 500, 250 e 30 ppm. Resina sem AgNPs foi utilizada como controle. Amostras em forma de discos (13 × 2 mm) de cada concentração (n=72) foram preparadas e armazenadas em PBS estéril por 0, 7, 90 e 180 dias (n=18). Após esses períodos, os ângulos de contato foram mensurados em um goniômetro. A seguir, 9 amostras de cada concentração foram utilizadas para o teste de aderência de C. albicans (90 minutos de incubação), e 9 para o teste de formação de... / Despite the use of antifungal drugs to treat denture stomatitis, infection is often persistent and antifungal resistance has been observed in C. albicans biofilms. Therefore, there is a need to develop alternative antimicrobial agents such as silver nanoparticles (AgNPs). Thus, the objective of this study was to evaluate the effect of a prepared AgNPs aqueous solution against C. albicans suspension. Additionally, the effects of incorporation of different concentrations of the AgNPs solution into a denture base acrylic resin and storage for up to 180 days on the contact angle, C. albicans adhesion and biofilm formation were evaluated. The AgNPs solution was synthesized by chemical reduction using sodium borohydride as reducing agent and polyvinyl alcohol as stabilizer, and was characterized by UV-visible spectroscopy, Fourier transform infrared spectroscopy and Dynamic Light Scattering. The antimicrobial susceptibility of AgNPs solution of different concentrations (from 1000 to 20 ppm) was performed against C. albicans suspension (ATCC 90028). The AgNPs solution was also mixed with the acrylic powder to produce silver-incorporated acrylic resins at the final concentrations of 1000, 750, 500, 250 and 30 ppm. Resin without AgNPs was used as control. Disk-shaped samples (13 × 2 mm) of each concentration (n=72) were prepared and stored in sterile PBS for 0, 7, 90 and 180 days (n=18). After the storage periods, the contact angles were measured in a goniometer. Then, 9 samples of each concentration... (Complete abstract click electronic access below)

Os microrganismos associados à cárie são, em sua maioria, microrganismos acidogênicos e acidúricos, anaeróbios estritos e facultativos. A presença de fungos é associada à microbiota de cárie radicular, sendo a espécie fúngica mais relacionada a Candida albicans. Embora estudos de cultivo e de análise de DNA comprovem a presença de fungos na microbiota associada a lesões de cárie radicular, demonstrando um gradiente crescente de colonização com a progressão da doença, pouco se sabe sobre o papel que estes microrganismos desempenham no processo de doença. O objetivo deste trabalho foi estudar o papel de Candida albicans na cárie radicular, através da análise de transcriptoma de biofilmes naturais de superfícies radiculares hígidas (n=10, SRS) e de lesão de cárie radicular ativa (n=9, RC). Foi avaliada a expressão diferencial de genes de Candida albicans, as funções específicas e vias metabólicas associadas a este microrganismo. O RNA total microbiano foi extraído e o mRNA isolado e sequenciado na plataforma Illumina Hi-Seq2500. Foram formados pool (grupamentos) das amostras com valores inferiores a 30ng/RNA para a construção de bibliotecas genômicas. Os dados gerados pelo sequenciamento de RNA-Seq foram compilados em uma tabela de contagem (reads) e mapeados com o genoma de referência (C. albicans SC5314) utilizando o software CLC Genomics Workbench 7.5.1. Para o cálculo do nível de expressão gênica os dados foram normalizados com o algoritmo DESeq. A expressão diferencial foi calculada com binomial negativa e False Discovery Rate (FDR<0,05). Os genes com maior expressão em RC e em SRS foram analisados pela mediana relativa de expressão (RME; Relative Median Expression) e expressão diferencial, assim como as vias metabólicas associadas a genes de virulência e metabolismo de açúcares. Dois genes (CaO19.610, FDR=0.009; CaO19.2506, FDR=0.018) apresentaram expressão diferencial significativa em superfície radicular hígida (SRS) e tem suas funções relacionadas a formação de biofilme. Enquanto que em superfície radicular cariada (RC) sete genes (UTP20, FDR=0.018; ITR1, FDR=0.036; DHN6, FDR=0.046; CaO19.7197, FDR=0.046; CaO19.7838, FDR=0.046; STT4, FDR=0.046; GUT1, FDR=0.046) apresentaram expressão diferencial significativa e tem suas funções relacionadas a atividade metabólica, transporte de açúcares, tolerância ao estresse, invasão e regulação de pH. Candida albicans é um microrganismo importante no desenvolvimento da doença cárie radicular. / The microbiota associated with root caries must be acidogenic and aciduric. S. mutans, Lactobacillus, Actinomyces, Veilonella, Bifidobacterium, and other bacteria play important roles in root caries biofilm. Yeasts are also present on carious and non-carious root biofilms, being the specie Candida albicans the most prevalent yeast found in root biofilms. Although the presence of Candida albicans is stablished in the literature, and there are an increasing gradient of Candida species. colonization with caries progression, the role of this microorganism in root caries has not being totally elucidated. The aim of this study is to analyse the role of Candida albicans in root caries thought a transcriptomic analysis of biofilms of sound root surfaces (n=10, SRS) and root caries lesions (n=9, RC) using a high-throughput sequencing of cDNA (RNA-Seq). The differential expression of genes of Candida albicans SC5314, the specific functions and pathways associated with the gene expression of the present study were investigated. The total bacterial RNA was extracted and the mRNA was isolated (Illumina Hi-Seq2500). Samples with low RNA concentration (less than 30ng/RNA) were pooled, yielding a final sample size of SRS=10 and RC=9. Sequence reads were compiled in a count table and mapped to C. albicans SC5314 genome of reference, using the software CLC Genomics Workbench 7.5.1. Gene expression was calculated in the algorithm DESeq, and the differential expression was calculated with binomial negative (Log2FoldChange) and False Discovery Rate (FDR<0,05). The genes with higher expression in RC and SRS were analysed by the Relative Median Expression (RME), and the virulence factors and pathways and sugar metabolization related with Candida albicans pathogenicity in root caries were analysed. Two genes (CaO19.610, FDR=0.009; CaO19.2506, FDR=0.018) are up-regulated in Sound Root Surface (SRS) have their functions related to biofilm formation and seven (UTP20, FDR=0.018; ITR1, FDR=0.036; DHN6, FDR=0.046; CaO19.7197, FDR=0.046; CaO19.7838, FDR=0.046; STT4, FDR=0.046; GUT1, FDR=0.046) are up-regulated in biofilm of carious dentin (RC) have functions related to metabolic activity, sugar transport, stress tolerance, invasion and pH regulation.

Objetivos: avaliar o papel da Candida albicans (ATCC 90028) no potencial cariogênico e acidogênico de biofilmes in vitro de Streptococcus mutans (UA159). Métodos: biofilmes de dupla-espécie (C. albicans + S. mutans) e de espécie única (S. mutans ou C. albicans) foram cultivados sobre a superfície hígida de blocos de esmalte bovino com dureza inicial conhecida na presença de meio de cultura suplementado com glicose 20 mM e sacarose 3 mM por 24, 48 e 72 horas. O meio foi substituído diariamente e seu pH foi registrado. Blocos de esmalte foram então coletados ao final de cada período experimental e contagens de células viáveis foram realizadas. A desmineralização foi avaliada através da porcentagem de alteração de microdureza superficial (% SMC) e análise de microradiografia transversal (perda mineral integrada e profundidade de lesão). Resultados: o pH do meio de cultura permaneceu constante nos biofilmes de espécie única de C. albicans causando quase nenhuma desmineralização no esmalte. Não houve diferença no potencial acidogênico dos biofilmes de espécie única de S. mutans ao longo dos períodos experimentais sendo estes valores de pH sempre menores quando comparados ao pH relacionado aos demais biofilmes (p < 0.01) A % SMC dos biofilmes de espécie única de S. mutans aumentou significativamente com o tempo. Além disso, lesões de cárie após 72 horas de crescimento de biofilme bacteriano apresentaram maior perda mineral integrada e foram mais profundas do que lesões de cárie relacionadas a biofilmes de dupla-espécie (p < 0.01). O pH do meio de cultura relacionado a biofilmes de dupla-espécie foi baixo no primeiro dia, mas aumentou no decorrer do tempo para valores acima do pH crítico para desmineralização do esmalte. Em consequência, a % SMC permaneceu a mesma depois de 48 horas de crescimento de biofilmes de dupla-espécie e foi significantemente menor do que os valores relacionados a S. mutans em espécie única (p < 0.01). Conclusões: os presentes dados sugerem que a C. albicans apresenta um baixo potencial de desmineralização de esmalte e esse micro-organismo parece reduzir tanto o potencial cariogênico quanto acidogênico de biofilmes de S. mutans pela modulação do pH extracelular durante o crescimento in vitro de biofilmes de dupla-espécie. / Aim: evaluate the role of Candida albicans (ATCC 90028) on the cariogenic and acidogenic potentials of Streptococcus mutans (UA159) in vitro biofilms. Methods: dual-species (C. albicans + S. mutans) and single-species (S. mutans or C. albicans) biofilms were grown on the surface of sound bovine enamel slabs with known baseline hardness in the presence of culture medium supplemented with 20 mM glucose and 3 mM sucrose for 24, 48 and 72 hours. The medium was replaced daily and its pH was recorded. Enamel slabs were collected at the end of each experimental period and counts of viable cells were performed. Demineralization was evaluated through percentage of surface microhardness change (% SMC) and transversal microradiography analysis (integrated mineral loss and lesion depth). Results: spent medium pH remained neutral in C. albicans single-species biofilms causing almost no enamel demineralization. No difference in acidogenic potential of S. mutans single-species biofilms was found among experimental periods and its pH was always lower than pH related to other biofilms (p < 0.01). The % SMC in S. mutans single-species biofilms significantly increased with time. In addition, caries lesions after 72 hours of S. mutans biofilm growth had higher integrated mineral loss and were deeper than caries lesions related to dual-species biofilms (p < 0.01). Spent medium pH related to dual-species biofilms was low in the first day, but increased with time to values above critical pH for enamel demineralization. As a consequence, the % SMC remained the same after 48 hours of dual-species biofilm growth and was significantly lower than S. mutans single-species related values (p < 0.01). Conclusions: the present data suggest that C. albicans has low enamel demineralization potential and may decrease both the cariogenic and acidogenic potentials of S. mutans by modulating extracellular pH during in vitro dual-species biofilm growth.