SANTOS, S. M. L. Síntese e caracterização de sílicas mesoporosas para adsorção de biomoléculas modelo (BSA, Lisozima e Celulase). 2013. 135 f. Tese (Doutorado em Engenharia Química) – Centro de Tecnologia, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by Marlene Sousa (mmarlene@ufc.br) on 2015-04-30T16:23:11Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_smlsantos.pdf: 11070721 bytes, checksum: 6fc6081d469e5467fbc862361d1fda85 (MD5) / Approved for entry into archive by Marlene Sousa(mmarlene@ufc.br) on 2015-05-04T10:33:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_smlsantos.pdf: 11070721 bytes, checksum: 6fc6081d469e5467fbc862361d1fda85 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-04T10:33:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_smlsantos.pdf: 11070721 bytes, checksum: 6fc6081d469e5467fbc862361d1fda85 (MD5) Previous issue date: 2013-09-23 / Part of the cost of production of biomolecules with high purity and yield depends on the separation and purification steps used. In these steps, it is usually necessary to use chromatography techniques and one of the factors that influence on its high performance is the development of stationary phases or suitable adsorbents. The present study investigates the adsorption of biomolecules three model (bovine serum albumin - BSA, lysozyme - LYS cellulase and - CEL) in mesoporous silica obtained from tri-block copolymers as agents drivers structure. We report different synthesis procedures aimed at modifying the surface chemistry and promoting textural changes, such as enlargement and/or pores, and the mesoscopic ordering. In the first part of this thesis were synthesized (i) SBA-15 by two different routes, sol-gel and hydrothermal and (ii) SBA-16 by hydrothermal. In the second part, SBA-15 samples with different pore sizes and channel length were s ynthesized using 1,3,5-trimethylbenzene (TMB), heptane and ammonium fluoride (NH4F). TMB was used to increase the pore diameter and heptane combined with NH4F to modify the size of the channels of SBA-15. In the third part of the work, the acidity of SBA-15 was modified by the addition of zirconium with three molar ratios Si/Zr distinct (5, 10 and 15). The adsorption of the three target biomolecules was studied by experiments in stirred tanks. The results indicate that for pure silicas, higher adsorption capacities are obtained when the pH is close to the isoelectric point of biomolecule. Very promising results for were found the adsorption of proteins on silicas with larger pore diameters (above 10 nm), up to hundreds of milligrams per gram of adsorbent. In the case of materials with zirconium, the best results were fou nd for the materials with the lowest amount of said heteroatom (Si/Zr = 15), which have similar texture to the original support. This suggests that there may be a moderate acidity which-enhances the adsorption of the studied biomolecules or excess zirconium atoms lead to steric hindrances causing a decrease in the adsorption capacity of the biomolecule / Parte do custo de produção de biomoléculas com elevada pureza e o rendimento deste processo depende das etapas de separação e purificação utilizadas. Nestas etapas, geralmente é necessário utilizar técnicas de cromatografia e um dos fatores que influenciam no seu elevado desempenho é o desenvolvimento de fases estacionárias ou adsorventes adequados. O presente trabalho investiga a adsorção de três biomoléculas-modelo (albumina de soro bovino - BSA, lisozima - LYS e celulase – CEL) em sílicas mesoporosas obtidas a partir de copolímeros tribloco como agentes direcionadores estruturais. Relatam-se diferentes procedimentos de síntese que visam modificar a química da superfície e promover alterações texturais como, por exemplo, o alargamento e/ou encurtamento dos poros, bem como a sua ordenação mesoscópica. Na primeira parte da tese, foram sintetizadas (i) SBA-15 por duas rotas distintas, sol-gel e hidrotérmica, e (ii) SBA-16 por via hidrotérmica. Na segunda parte, amostras de SBA-15 com diferentes tamanhos de poros e comprimento de canais foram sintetizados utilizando 1,3,5-trimetilbenzeno (TMB), heptano e fluoreto de amônio (NH4F). O TMB foi utilizado para aumentar o diâmetro dos poros e o heptano combinado com NH4F, para modificar o tamanho dos canais da SBA-15. Já na terceira parte do trabalho, a acidez da SBA-15 foi modificada pela adição de zircônio com três razões molares Si/Zr distintas (5, 10 e 15). A adsorção das três biomoléculas-alvo foi estudada por experimentos em tanques agitados. Os resultados indicam que, para sílicas puras, maiores capacidades de adsorção são obtidas quando o pH está próximo ao ponto isoelétrico da biomolécula. Resultados muito promissores foram encontrados para a adsorção de proteínas sobre as sílicas com maior diâmetro de poros (acima de 10 nm), chegando a centenas de miligramas por grama de adsorvente. No caso dos materiais com zircônio, os melhores resultados foram encontrados para os materiais com a menor quantidade do referido heteroátomo (Si/Zr = 15), que apresentam textura similar ao suporte original. Isto sugere que pode haver uma acidez moderada ótima para a adsorção das biomoléculas estudadas ou que o “excesso” de átomos de zircônio leva a impedimentos estéricos que causam uma redução na capacidade de adsorção da biomolécula

Orientador: Valdecir Farias Ximenes / Coorientador: Aguinaldo Robinson de Souza / Banca: Daniel Rinaldo / Banca: Marinonio Lopes Cornelio / Resumo: A albumina é a proteína solúvel mais abundante no sangue e desempenha um papel crítico na manutenção da pressão osmótica e no transporte de substâncias. A divanilina apresenta propriedades antioxidantes e pode ser usada como intensificador de sabor e cremosidade nos alimentos. Em nosso trabalho realizamos um estudo abrangente sobre a interação da divanilina com a albumina do soro bovino (BSA) aplicando técnicas de fluorescência molecular e dicroísmo circular (CD) para determinar a constante de ligação, as características físico-químicas de suas interações e utilizar a divanilina como sonda suscetível a dicroísmo circular na discriminação de sítios de ligação na albumina a partir do monitoramento do sinal de Dicroísmo Circular Induzido (ICD). Os resultados obtidos indicaram que a divanilina pode se ligar aos sítios I e II, mas liga-se preferencialmente ao sítio de drogas I da BSA com constante de associação (Ka) de 3,33, 2,83, 2,03x105 M-1, em temperaturas de 298, 308 e 318 K, respectivamente. Esses valores foram cerca de 4 vezes mais elevados em comparação com a vanilina. Os valores obtidos de energia livre de Gibbs, variação de entalpia e entropia para a ligação a partir da equação de Van't Hoff foram de -31,5 kJ/mol, -19,42 kJ/mol e 40,8 J/mol.K-1, respectivamente, demonstrando que as forças principais que atuaram para a estabilização do complexo foram ligações de hidrogênio e interações hidrofóbicas. Em presença de BSA a divanilina tornou-se uma molécula quiral, fato evide... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The albumin is the most abundant soluble protein in blood and plays a critical role in maintaining the osmotic pressure and transport of substances. The divanillin has antioxidant properties and can be used as flavor enhancer in food and creaminess. In this work, we carried out a comprehensive study on the interaction of divanillin with bovine serum albumin (BSA) applying molecular fluorescence techniques and circular dichroism (CD) to determine the binding constant and the physicochemical characteristics of their interactions and use divanillin as susceptible probe circular dichroism in discrimination of albumin binding sites from the ICD signal monitoring. The results indicated that divanillin can bind to sites I and II, but preferentially binds to site I of drugs in BSA with association constant (Ka) 3.33, 2.83, 2.03x10M-1, at temperature (298, 308, 3181K) respectively. These values were about 5 times higher compared to vanillin. The values of Gibbs free energy, enthalpy and entropy changes for the connection from the van't Holf equation were - 31,5 kJ/mol, -19,42 kJ/mol and 40,8 J/mol.K-1, respectively, showing that the main forces that have acted to stabilize the complex were hydrogen bonds and hydrophonic interactions. In the presence of BSA, divanillin became a chiral molecule as evidenced by its induced circular dichroism spectrum. The axial chirality was was theoretically confirmed from the study of the most stable conformations adopted by divanillin using the Functional Theory Density (DFT). Axial chirality was theoretically confirmed from the study of the more stable conformations adopted by divanillin using the Functional Density Theory (DFT). Molecular docking studies confirmed the conformational structure to which divanilin bound in BSA with anti-aS having a dihedral angle between 230º and 241º. The preference for site I can also be confirmed by docking due... (Complete abstract electronic access below) / Mestre

Orientador: Marinônio Lopes Cornélio / Banca: Hamilton Cabral / Banca: Marcelo Andrés Fossey / Resumo: Os flavonóides são uma grande classe de polifenóis ocorrendo de forma natural amplamente distribuídos nas plantas, essas moléculas exibem algumas atividades farmacológicas importantes como anti-inflamatória, antioxidante, anticancerígena e antibacteriana. A interação entre os flavonóides Rutina (Ru) e Guaijaverina (Gua) e a Albumina do Soro Humano (HSA) em pH 7,0 fisiológico foi investigado usando a técnica de espectroscopia de fluorescência de estado estacionário, cálculo ab initio e de modelagem molecular. A partir da supressão de fluorescência da HSA pelos flavonóides, a constante de supressão de Stern-Volmer ( SVK ) e sua forma modificada ( aK ) foram calculadas em 298, 303 e 308 K, como também os parâmetros termodinâmicos correspondentes H, G e S, para cada flavonóide. A análise do equilíbrio de ligação foi utilizada para determinar os valores do número de sítios de ligação ( n ) e a constante de ligação ( bK ) para a Rutina e a Guaijaverina em 298, 303 e 308 K. A distância média entre o doador (HSA-214Trp ) e o aceitador (Ru e Gua) foi estimada de acordo com a teoria de transferência de energia ressonante fluorescente. A otimização geométrica dos flavonóides Rutina e Guaijaverina foi realizada nos seus estados fundamentais usando o funcional DFT/B3LYP ab initio com um conjunto de bases 6-31G(d,p) utilizado nos cálculos. O cálculo de modelagem molecular indica que os flavonóides se localizam no sítio I da HSA, dentro do bolso hidrofóbico do subdomínio IIA. Os resultados teóricos obtidos pela modelagem molecular corroboram com os dados de espectroscopia de fluorescência / Abstract: Flavonoids are a large class of naturally occurring polyphenols widely distributed in plants, these molecules exhibit some important pharmacological activities like anti-inflammatory, antioxidant, anticancer, and antibacterial. The interaction between Rutina and Guaijaverin flavonoids and Human Serum Albumin (HSA) at physiological pH 7.0 was investigated by using the technique of fluorescence spectroscopy, ab initio and molecular modeling calculation. From the fluorescence quenching of the HSA by flavonoids, the Stern-Volmer quenching constant ( SVK ) and its modified form ( aK ) were calculated at 298, 303 and K308, as well as the corresponding thermodynamic parameters H, G and S, for each flavonoid. Analysis of binding equilibria was utilized to determine the number of binding sites ( n ) and binding constants ( bK ) values for Rutin and Guaijaverin at 298, 303 and K308 . The average distance between donor (HSA-214Trp ) e acceptor (Ru and Gua) was estimated according to the theory of fluorescence resonance energy transfer. The geometry optimization of Rutin and Guaijaverin flavonoids was performed in its ground state by using ab initio DFT/B3LYP functional with a 6-31G(d,p) basis set applied in calculations. Molecular modeling calculation indicated that the flavonoids are located in site I of HSA, within the hydrophobic pocket of the subdomain IIA. The theoretical results obtained by molecular modeling are corroborated by the fluorescence spectroscopy data / Mestre

Orientador: João Alberto Negrão / Coorientador: Maria Regina Barbieri de Carvalho / Banca: José Jurandir Fagliari / Banca: Maria da Graça Pinheiro / Resumo: O sistema imunológico de bezerros consolida-se com a ingestão do colostro, alimento rico em imunoglobulinas que são proteínas responsáveis por transferir imunidade aos bezerros. A eficiência dessa transferência é influenciada por uma série de fatores, dentre eles a integridade das imunoglobulinas a serem absorvidas. No colostro estão naturalmente presentes os inibidores de tripsina, capazes de preservar as imunoglobulinas da ação de enzimas proteolíticas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a potencialidade dos inibidores de tripsina da soja na transmissão da imunidade passiva de bezerras da raça Holandesa, por meio da análise das concentrações de imunoglobulina G (IgG) e proteína total (PT) e atividade da gamaglutamiltransferase (GGT) sérica. Foram utilizadas 18 bezerras recém-nascidas alimentadas com colostro (T1), colostro adicionado de inibidor de tripsina purificado Sigma tipo I-S (50 mg) (T2) e provenientes da fração albumina da soja 1,08 g (T3). As amostras de sangue foram colhidas por venopunção da veia jugular com 1, 12, 24, 36 e 48 h após o nascimento, sendo a primeira colheita realizada antes do fornecimento do colostro. O colostro apresentou teor de gordura de 3,2 a 7,2 %, de proteína total de 14,10 a 19,52 %, representada por 7,84 a 9,44 % pelas proteínas do soro (PS). A atividade dos inibidores de tripsina variou de 0,766 a 0,945 mg de tripsina inibida.mL-1. Não houve influencia dos tratamentos (p>0,05%) para os parâmetros analisados, porém houve efeito (p<0,05%) do período de amostragem, com aumento nas concentrações de IgG, GGT e PT a partir da 0h com respectivos valores médios de 0,68 g.dL-1; 15,17U.L-1, 4,43 g.dL-1, com pico de absorção às 24 h: 3,06 g.dL-1, 2.779 U.L-1 e 7,54 g.dL-1, respectivamente, indicando transmissão adequada de imunidade passiva. A adição dos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The calves' immune system is consolidated by the ingestion of colostrum, which is rich in immunoglobulin, the proteins that are responsible for transfering the immunity to the calves. This transferring efficacy is influenced by a series of facts, among them the immunoglobulin's integrity to be absorbed. Trypsin inhibitors are naturally present on the colostrum and they are able to preserve the immunoglobulin from the proteoclastic enzyme actions. The aim of this work was to evaluate the potentiality of soya Trypsin inhibitor on the passive immunity of the Holstein female calves, by evaluating the concentration of immunoglobulin G (IgG) and total protein (PT) as well as Gammaglutamil transferase (GGT) activity in serum. Eighteen newborn female calves were taken and they were fed with colostrums (T1), colostrums with purified trypsin inhibitor I-S Sigma (50mg), (T2) and colostrums with soya albumin fraction 1.08 g (T3). Blood samples were collected by jugular veined punch within 1, 12, 24, 36 and 48 hours after they were born, the first collection was done before the colostrums was given. Colostrums have presented 3.2% to 7.2 % of fat contents; 14, 10% to 19, 52 % of total protein represented by 7, 84% to 9, 44 % of serum protein (PS). Trypsin inhibitor activities have varied from 0,766 mg to 0,945 mg of inhibited trypsin mL-1. There was no influence of the treatments (p>0,05%) for the analyzed parameters, however, there was (p<0,05%) a significant effect for the period of collection, with an increase on IgG, GGT and, PT concentrations from 0h with the respective medium values of 0,68g.dL- 15,17U.L-1, 4,43 g.dL-1. The absorption pick was at 24 h: with 3,06 g.dL-1, 2.779 U.L-1 and 7,54 g.dL-1 means, respectively for IgG, GGT and PT, indicating an adequate transmission of passive immunity. The addition of soya Trypsin... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Aguinaldo Robinson de Souza / Coorientador: Valdecir Farias Ximenes / Banca: Nelson Henrique Morgon / Banca: Ignez Caracelli / Resumo: A Albumina do Soro Humano (HSA) desempenha um papel importante no transporte de substâncias com propriedades farmacológicas devido a sua alta concentração e especificidade plasmática, colocando-a como uma das proteínas fundamentais responsáveis pela implicação farmacocinética dos fármacos. O derivado de aminoácido dansilglicina (DanGly) é um marcador fluorescente específico para o sítio II na HSA. Além disso, ao se ligar à proteína, a DanGly adquire quiralidade, uma característica que também pode ser usada para caracterizar o sítio de ligação de novos compostos na HSA. Este trabalho teve como objetivo elucidar a indução de quiralidade na DanGly por sua ligação com a HSA. Os espectros de Dicroísmo Circular Eletrônico (ECD) da DanGly (100 μM) na ausência ou presença de HSA (30 μM) em solução fosfato de sódio 50 mM em pH 7,0 foram obtidos num espectropolarímetro Jasco J-815 a 25o C com uma resolução de 1 nm numa velocidade de 50 nm/min. Os ECDs teóricos foram simulados usando a abordagem da Teoria do Funcional da Densidade (DFT) com os funcionais híbridos B3LYP e CAM-B3LYP no conjunto de bases 6-311 ++ G (2d, p) e o Modelo de Solvação baseado em Densidade (SMD) para os solventes etanol, metanol, acetonitrilo, água e tetra-hidrofurano; os cálculos foram realizados com o programa Gaussian09. A formação do complexo DanGly-HSA em tampão resultou no aparecimento de um espectro positivo de ECD centrado em 346 nm. Considerando que o sinal do ICD deve surgir a partir de uma conformação ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Human serum albumin (HSA) plays an important role in the transport of substances with pharmacological properties due to their high plasma concentration and specificity, placing it as the fundamental protein responsible for the pharmacokinetic implication of the drugs. The dansylglycine amino acid derivative (DanGly) is a fluorescent marker specific for the II site on the HSA. In addition, when binding to the protein, DanGly acquires chirality, a feature that can also be used to characterize the binding site of new compounds in albumin. This work aimed to elucidate the induction of chirality in the DanGly by its bonding to the HSA. Experimental Electronic Circular Dichroism (ECD) spectra of DanGly (100 μM) in the absence or presence of HSA (30 μM) in 50 mM sodium phosphate buffer pH 7.0 were obtained in a Jasco J-815 spectropolarimeter at 25o C. The spectra were obtained with a resolution of 1 nm and a scanning speed of 50 nm/min. The theoretical ECDs were simulated using the Density Functional Theory (DFT) approach with the hybrid functional B3LYP and CAM-B3LYP in the base set 6- 311 ++ G (2d, p) and the implicit Solvation Model based on Density (SMD) for the solvents ethanol, methanol, acetonitrile, water and tetrahydrofuran; the calculations were performed with the Gaussian09 program. The DanGly -HSA complex formation in buffer resulted in the appearance of a positive ECD spectrum centered at 346 nm. Considering that the ICD signal should arise from a chiral conformation of... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Valdecir Faria Ximenes / Banca: Rodrigo Cardoso de Oliveira / Banca: Marinonio Lopes Cornelio / Banca: Paulo Noronha Lisboa Filho / Banca: Aguinaldo Robinson de Souza / Resumo: A proteína presente no plasma sanguíneo e conhecida como albumina humana possui inúmeras funções fisiológicas e propriedades como o transporte de fármacos e metabólitos na corrente sanguínea. Neste sentido, quando se estuda as características farmacocinéticas de um novo fármaco, entre as propriedades estudadas, busca-se elucidar a capacidade de ligação do mesmo na albumina e caracterizar o sítio de ligação da mesma. Neste projeto, estudamos as características espectroscópicas e biofísicas do corante vermelho Congo (VC) como potencial sonda para caracterização dos sítios de ligação da albumina e caracterização de agregados amiloidais. Os ensaios de supressão de fluorescência e dicroísmo circular induzido (ICD) revelaram uma forte associação entre VC e a albumina de soro bovina (BSA). Ensaios de deslocamento de sondas fluorescentes e alteração do espectro de ICD revelaram que o corante VC pode se ligar nos sitios I e II da BSA. Agregados proteicos com características de fibrilas amiloidais foram preparados por aquecimento da BSA a 70°C e caracterizados por fluorescência de tioflavina-T e espalhamento de luz Rayleigh. Observamos um deslocamento no sinal de ICD do VC ligado aos agregados. A monitoração do sinal de ICD em função do aumento de temperatura revelou uma típica curva de alteração de fase da proteína. Considerando que, quando presente, um sinal de ICD pode ser bastante específico e não sujeito às influências espectrais dos compostos presentes, propomos que esta técnica ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The protein present in blood plasma and known as human albumin has countless physiological functions, including transporting drugs and metabolites in the bloodstream. In this regard, when studying pharmacokinetic characteristics of a new drug, between the properties studied, it is common to elucidate its binding capacity in albumin and to characterize the binding site of the drug. In this project, we studied the spectroscopic and biophysical characteristics of Congo Red (CR) dye as a potential probe to characterize the albumin binding sites and amyloid aggregates. The fluorescence quenching tests and induced circular dichroism (ICD) showed a strong association between CR and bovine serum albumin (BSA). Displacement tests of fluorescent probes and change in the ICD spectrum revealed that the CR dye may bind to sites I and II of BSA. Protein aggregates with features of amyloid fibrils were prepared by heating the BSA at 70 °C and characterized by thioflavinT fluorescence and Rayleigh light scattering. We observed a shift in the ICD signal CR connected to the aggregates. When monitoring the ICD signal as a function of temperature, a typical phase change curve was obtained. Considering that, when present, an ICD can be a quite specific signal and not subject to spectral influences of the compounds, we proposed that this spectroscopic technique could be used to aid in the elucidation of the binding sites of the albumin and for the studies of the formation of amyloid aggregates in ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O Diabetes Mellitus (DM) é uma doença metabólica que implica em altas incidências de mortalidade e morbidade. A hiperglicemia crônica é responsável pelo surgimento de inúmeras complicações em longo prazo nestes pacientes. Atualmente, é recomendado por diretrizes internacionais que pacientes com DM sejam monitorados e manejados em seu tratamento a partir dos níveis de hemoglobina glicada (A1C). A A1C é formada por reações não enzimáticas de glicação na hemoglobina, refletindo a glicemia dos últimos 120 dias. A A1C possui forte associação com os desfechos clínicos no DM e apresenta uma excelente padronização de seus métodos analíticos. Contudo, diversas situações clínicas podem interferir falsamente em seus níveis e prejudicar a interpretação de seus resultados, como em anemias (carenciais ou hemolíticas), hemoglobinopatias, gravidez, doença renal crônica, etc. Por outro lado, a albumina glicada (AG) é uma frutosamina formada por glicações na albumina e reflete uma glicemia média de cerca de 2 a 3 semanas. A AG não é influenciada pela concentração de outras proteínas no plasma e também não sofre interferência pelas condições que afetam a A1C. Este marcador tem sido fortemente avaliado como uma ferramenta alternativa para a A1C, a partir da análise de seus níveis por um novo método enzimático descrito em 2002. Estudos tem demonstrado uma forte associação entre estes dois marcadores e grande semelhança em predizer as complicações do DM. Entretanto, a AG se mostra melhor para avaliar flutuações nos níveis de glicose e a resposta ao tratamento terapêutico. Neste trabalho, foi avaliado o desempenho analítico de dois kits enzimáticos de AG e realizado uma comparação entre os métodos, encontrando excelentes resultados. Ainda, foi determinado o intervalo de referência para os níveis de AG em brasileiros saudáveis. A forte correlação encontrada entre AG e A1C demonstra que a AG pode ser um teste útil para o controle glicêmico no DM, principalmente quando a A1C não é recomendada. / Diabetes Mellitus is a metabolic disease with high incidence rates of mortality and morbidity. Chronic hyperglycemia is responsible for several long-term complications in these patients. Currently, international guidelines recommend that glycemic monitoring in DM should be performed by glycated hemoglobin (A1C) levels, to provide a correct clinical conduction. A1C is relative to non-enzymatic glycation reactions in hemoglobin and reflects the glucose levels from the last 120 days. It is well established the great association between A1C and clinical outcomes in DM, besides, its analytical methods present an excellent standardization. However, some conditions may influence and imply misinterpretation in A1C results, such as anemia, hemoglobinophaties, pregnancy, chronic renal disease, etc. On the other hand, glycated albumin (GA) is a fructosamine produced by glycation reactions in albumin and it reflects a mean glycemia at around 2 to 3 weeks. GA is not influenced by the concentrations of other plasma proteins, as well as by those conditions that interfere in A1C. GA has been strongly evaluated as an alternative marker to A1C, through its quantitative measurement by an enzymatic methodology described in 2002. Recent studies have demonstrated a high association between GA and A1C and a great similarity between these tests in predicting DM future complications. Nevertheless, GA has showed be better to assess the glucose fluctuations in blood and the response to treatment. This study evaluated the analytical performance of two GA enzymatic kits and also executed a methods comparison, and found excellent results. Also, we established the reference range for GA levels in healthy Brazilians. The high correlation found between GA and A1C indicates that GA could be a useful test for glycemic control in DM, especially when A1C is unreliable.

Orientador: Celso Koogi Sonoda / Resumo: A melhor forma de tratamento para os casos de avulsão dentária por trauma é o reimplante imediato, no entanto, existem diversas condições que impedem sua realização. Nesses casos, os meios de conservação tem papel fundamental para a manutenção da integridade do ligamento periodontal do dente avulsionado, dando tempo para que um tratamento adequado seja alcançado. Compostos proteicos como o leite, o soro do leite apresentaram resultados favoráveis para esse fim. Acessibilidade e facilidade de manuseio também contribuem favoravelmente. Existem compostos de aminoácidos que poderiam servir para esse fim, assim o propósito desse estudo foi o de analisar se o BCAA (aminoácidos de cadeia ramificada) possui o mesmo potencial como meio de conservação por também ser um composto proteico. Para isso foram utilizados 50 ratos divididos em 5 grupos de 10 animais. Após a extração do incisivo superior direito, os dentes do grupo (IM) foram reimplantados em seus respectivos alvéolos após 5 minutos; No grupo (L) - os dentes foram imersos em 40 ml de leite bovino pasteurizado (UHT); No grupo (SL) - os dentes foram imersos em 40 ml de soro de leite fresco; No grupo (BC) - os dentes foram imersos em 40 ml de uma solução à base de aminoácidos de cadeia ramificada (7 gramas de pó em 200ml de água); No grupo (SE) - os dentes foram mantidos em meio seco sobre bancada. Os dentes serão mantidos em seus respectivos meios por 60 minutos em temperatura ambiente para serem então reimplantados em seus respe... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The best form of treatment for cases of dental avulsion due to trauma is immediate replantation, however, there are several conditions that prevent its implementation. In such cases, the preservative means play a fundamental role in maintaining the integrity of the periodontal ligament of the avulsed tooth, allowing time for proper treatment to be achieved. Protein compounds such as milk and whey showed favorable results for this purpose. Accessibility and ease of handling also contribute favorably. There are amino acid compounds that could serve this purpose, so the purpose of this study was to examine whether BCAA (branched chain amino acids) has the same potential as a preservative as it is also a protein compound. For this, 50 rats divided into 5 groups of 10 animals were used. After extraction of the right upper incisor, the teeth of group (IM) were reimplanted in their respective alveoli after 5 minutes; In group (M) - the teeth were immersed in 40 ml of pasteurized bovine milk (UHT); In group (W) - teeth were immersed in 40 ml of fresh whey; In group (BC) - the teeth were immersed in 40 ml of a branched chain amino acid solution (7 grams of powder in 200ml of water); In group (D) - the teeth were kept in a dry medium on a bench. The teeth will be kept in their respective means for 60 minutes at room temperature and then reimplanted in their respective alveoli. The animals received antibiotic and analgesic in a single dose. Euthanasia was performed 60 days later and the... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O Diabetes Mellitus (DM) é uma doença metabólica que implica em altas incidências de mortalidade e morbidade. A hiperglicemia crônica é responsável pelo surgimento de inúmeras complicações em longo prazo nestes pacientes. Atualmente, é recomendado por diretrizes internacionais que pacientes com DM sejam monitorados e manejados em seu tratamento a partir dos níveis de hemoglobina glicada (A1C). A A1C é formada por reações não enzimáticas de glicação na hemoglobina, refletindo a glicemia dos últimos 120 dias. A A1C possui forte associação com os desfechos clínicos no DM e apresenta uma excelente padronização de seus métodos analíticos. Contudo, diversas situações clínicas podem interferir falsamente em seus níveis e prejudicar a interpretação de seus resultados, como em anemias (carenciais ou hemolíticas), hemoglobinopatias, gravidez, doença renal crônica, etc. Por outro lado, a albumina glicada (AG) é uma frutosamina formada por glicações na albumina e reflete uma glicemia média de cerca de 2 a 3 semanas. A AG não é influenciada pela concentração de outras proteínas no plasma e também não sofre interferência pelas condições que afetam a A1C. Este marcador tem sido fortemente avaliado como uma ferramenta alternativa para a A1C, a partir da análise de seus níveis por um novo método enzimático descrito em 2002. Estudos tem demonstrado uma forte associação entre estes dois marcadores e grande semelhança em predizer as complicações do DM. Entretanto, a AG se mostra melhor para avaliar flutuações nos níveis de glicose e a resposta ao tratamento terapêutico. Neste trabalho, foi avaliado o desempenho analítico de dois kits enzimáticos de AG e realizado uma comparação entre os métodos, encontrando excelentes resultados. Ainda, foi determinado o intervalo de referência para os níveis de AG em brasileiros saudáveis. A forte correlação encontrada entre AG e A1C demonstra que a AG pode ser um teste útil para o controle glicêmico no DM, principalmente quando a A1C não é recomendada. / Diabetes Mellitus is a metabolic disease with high incidence rates of mortality and morbidity. Chronic hyperglycemia is responsible for several long-term complications in these patients. Currently, international guidelines recommend that glycemic monitoring in DM should be performed by glycated hemoglobin (A1C) levels, to provide a correct clinical conduction. A1C is relative to non-enzymatic glycation reactions in hemoglobin and reflects the glucose levels from the last 120 days. It is well established the great association between A1C and clinical outcomes in DM, besides, its analytical methods present an excellent standardization. However, some conditions may influence and imply misinterpretation in A1C results, such as anemia, hemoglobinophaties, pregnancy, chronic renal disease, etc. On the other hand, glycated albumin (GA) is a fructosamine produced by glycation reactions in albumin and it reflects a mean glycemia at around 2 to 3 weeks. GA is not influenced by the concentrations of other plasma proteins, as well as by those conditions that interfere in A1C. GA has been strongly evaluated as an alternative marker to A1C, through its quantitative measurement by an enzymatic methodology described in 2002. Recent studies have demonstrated a high association between GA and A1C and a great similarity between these tests in predicting DM future complications. Nevertheless, GA has showed be better to assess the glucose fluctuations in blood and the response to treatment. This study evaluated the analytical performance of two GA enzymatic kits and also executed a methods comparison, and found excellent results. Also, we established the reference range for GA levels in healthy Brazilians. The high correlation found between GA and A1C indicates that GA could be a useful test for glycemic control in DM, especially when A1C is unreliable.

Introdução: Peritonite bacteriana espontânea (PBE) é uma complicação comum e grave da cirrose. Albumina humana intravenosa (A-IV) previne insuficiência renal (IR) e melhora a sobrevida. Não existe informação da eficácia de menores doses de albumina. Esse estudo foi desenhado com o objetivo de realizar comparação direta de diferentes doses de A-IV em pacientes com PBE em relação à prevenção de IR e mortalidade em 90 dias. Pacientes e Métodos: selecionamos cinquenta e um episódios de PBE que foram randomicamente alocados para receber A-IV na dose usual (ADU) de 1,5 g/Kg no diagnóstico e 1 g/Kg 48 horas após, ou em dose reduzida (ADR) de 1 g/Kg e 0,5 g/Kg, respectivamente. Ambos os grupos foram tratados com cefotaxime. IR foi definida quando a creatinina sérica foi > 1,5 mg/dl ou teve um aumento > 50% em pacientes com creatinina inicial > 1,5 mg/dl. Resultados: nesse ensaio clínico randomizado Jadad 5, não houve diferenças significativas entre os grupos nas características basais. Média do MELD foi 19 no grupo ADR e 19,9 no grupo ADU (p=0,58). IR hospitalar ocorreu em 11 episódios no grupo ADR (42,3%) e em 11 episódios no grupo ADU (44% - p=0,903). Mortalidade hospitalar foi 23,1% no grupo ADR e 20% no grupo ADU (p=0,789). Mortalidade em 90 dias foi similar em ambos os grupos (p=0,931). Níveis da atividade de renina plasmática foram similares nos dias 1 e 7 em ambos os grupos (média dos níveis 12,1 e 13,4 no dia 1 e 8,51 e 8,01 no dia 7). Mortalidade foi maior em pacientes que tiveram IR (10/22=45,45% versus 1/29=3,44% - p<0,001). Conclusão: albumina em doses menores foi tão efetiva e segura quanto o regime usual na prevenção de morte e IR em pacientes cirróticos com PBE. / Background and rationale: Spontaneous bacterial peritonitis (SBP) is a com-mon and severe complication of cirrhosis. Intravenous albumin (IV-A) helps to prevent renal failure (RF) and improves survival. No information exists on the efficacy of lower doses of albumin. This study was designed to allow direct com-parison among different doses of IV-A in patients with SBP in order to prevent RF and 90 days mortality. We enrolled fifty-one episodes of SBP that were randomly assigned to receive IV-A in the standard regimen (SR) of 1.5 g/kg at diagnosis and 1 g/kg 48 hours later, or in the dose reduced regimen (DRR) of 1.0 g/kg and 0.5 g/kg, respectively. Both groups were treated with cefotaxime. RF was defined as serum creatinine (SCr) > 1.5 mg/dl or an increase > 50% in patients with initial SCr > 1.5 mg/dl. Main results: In this Jadad 5 scored trial, there were no significant differences between the groups in baseline data. MELD median was 19.0 in DRR and 19.9 in SR patients (p=0.58). RF during in-hospital stay was recognized in 11 DDR (42.3%) and 11 SR patients (44% - p=0.903). Inpatient mortality was 23.1% for DRR and 20% for SR (p=0.789). Ninety days mortality rates were similar in both groups (p=0.931). Plasma renin activity levels were similar at days 1 and 7 in both groups (median levels 12.1 and 13.4 on day 1 and 8.51 and 8.01 on day 7). Mortality rates were higher in patients who developed RF (10/22=45.45% versus 1/29=3.44% - p<0.001). Conclusion: albumin in lower doses was as effective and safe as standard reg-imen for the prevention of death and RF in cirrhotic patients with SBP.