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Avaliação histomorfométrica e de propriedades mecânicas de meniscos frescos e preservados em glicerina 98%. Estudo experimental em coelhos (Oryctolagus cuniculus) / Evaluation histomorphometric and mechanical properties of meniscus fresh and preserved in glycerin 98%. Experimental study in rabbis (Oryctolagus cuniculus)Vilela, Liana Mesquita 06 October 2008 (has links)
Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-06-16T14:53:59Z
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Previous issue date: 2008-10-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O tratamento de escolha para as lesões de menisco é a sutura, mas esta não pode ser realizada em todos os casos. Uma alternativa seria a retirada do menisco lesionado, o que ocasiona sérias alterações degenerativas na articulação. Assim, a procura de um substituto para este tecido fibrocartilaginoso, com o intuito de evitar lesões degenerativas articulares, permanece como um desafio para a cirurgia ortopédica. Uma opção é a substituição do menisco por um aloenxerto meniscal. Nas últimas décadas, as próteses biológicas passaram a ser utilizadas com maior freqüência nos processos de reparação de tecidos, principalmente pelas facilidades de obtenção, conservação, implantação no leito receptor e pelo baixo custo. Nesta pesquisa foram conduzidos três experimentos, com meniscos mediais de coelhos da raça Nova Zelândia, objetivando a avaliação dos efeitos da preservação em glicerina 98% sobre as fibras colágenas, arquitetura tecidual, a celularidade e a resistência meniscal. No primeiro e segundo experimentos foram utilizados 21 meniscos, distribuídos em três grupos de sete; e no terceiro experimento foram utilizados 30 meniscos, distribuídos em três grupos de dez. Em cada experimento, um grupo foi composto por meniscos frescos - MF e correspondeu ao grupo controle; um por meniscos preservados em glicerina 98%, por 30 dias - MG; e outro grupo foi composto por meniscos preservados em glicerina 98%, por 30 dias, e reidratados em NaCl 0,9%, por 12 horas - MR. No primeiro trabalho, foi realizada avaliação histológica do colágeno, por meio da quantificação dos tipos e análise da disposição das fibras colágenas, além da avaliação do tamanho e do aspecto macroscópico do menisco. No segundo, avaliou-se a arquitetura tecidual, a população celular, assim como a integridade e a distribuição dos tipos celulares presentes: fibroblastos/fibrócitos e condrócitos. No terceiro, os meniscos foram submetidos a testes de resistência à compressão, sendo avaliada a força e deformação ao limite de elasticidade, tensão ao ponto de ruptura e ao limite de elasticidade e o índice de rigidez. Foram realizados testes de Duncan ou Tuckey, conforme a instabilidade da variável. Todos os meniscos do grupo MF apresentaram fibras dispostas obliquamente, nos meniscos dos grupos MG e MR, 42,8% e 14,3% respectivamente, apresentaram desorganização das fibras colágenas em pequenas áreas. O grupo MF apresentou maior x concentração de colágeno tipo I e menor concentração de colágeno tipo III em relação aos grupos MG e MR, isto pode ter ocorrido devido à redução no tamanho dos meniscos e conseqüente retração das fibras de colágeno dos meniscos destes grupos, causada pela desidratação. O grupo de meniscos em glicerina - MG apresentou uma redução significativa no tamanho em relação ao grupo MF. No grupo MR, 85,7% dos meniscos retornaram ao seu tamanho inicial após a reidratação em solução salina. Não houve diferença significativa entre os tamanhos dos meniscos reidratados - MR e dos meniscos do grupo controle - MF. A população celular foi estatisticamente semelhante nos três grupos de meniscos, sendo que todos os meniscos preservados, grupos MG e MR, apresentaram sinais de lise celular. Nos meniscos dos grupos preservados (MG e MR) observou-se retração das fibras colágenas, menor intensidade na coloração do tecido, e diminuição de volume e maior intensidade de coloração dos núcleos (condensação da cromatina), em relação aos meniscos frescos (MF), caracterizando o fenômeno de lise celular. A matriz fibrocartilaginosa dos meniscos dos grupos MG e MR revelou-se bem preservada mantendo a arquitetura tecidual e assim, as propriedades mecânicas do menisco. Quanto à resistência, os meniscos dos grupos preservados - MG e MR tiveram a capacidade de suportar, significativamente, a mesma força do grupo de meniscos frescos - MF, antes de sofrer ruptura total. Os meniscos em glicerina - MG apresentaram estatisticamente, menor capacidade de deformação elástica e maior rigidez que os meniscos do grupo MF e MR (p<0,05), provavelmente devido a desidratação promovida pela glicerina. A glicerina 98% demonstrou ser uma opção de meio de preservação para aloenxertos meniscais com matriz colágena desvitalizada. Este meio aumentou a resistência dos meniscos à compressão, sem alterar o colágeno tipo I e assim a arquitetura tecidual. Os capítulos apresentados como parte integrante desta tese estão seguindo as normas de publicação da Pesquisa Veterinária Brasileira/Brazilian Journal of Veterinary Research, editada pelo Colégio Brasileiro de Patologia Animal (CBPA). / The treatment used for meniscus lesions is the suture, procedure which cannot be applied in other cases. An alternative would be the removal of the meniscus with lesions, which may cause serious degenerative alterations in the articulations. Thus, the search for a substitute for the fibercartilage tissue which would avoid the degenerative lesions remains a challenge for orthopedic surgery. In the last decades, biological prosthesis started to be applied more often in the repair processes, especially because of how easy it can be to obtain, conserve and implant the latter in the receptor and also because of low cost. Another option would be to replace the meniscus by a meniscus allograft. Three experiments were conducted in this piece of research with medial meniscus from New Zealand rabbits. The objective was to evaluate the effects of the meniscus preservation in glycerin 98% on collagen fibers, tissue architecture, cellularity and meniscal resistance. 21 meniscuses were used in the first and second experiments. They were distributed in three groups of seven. In the third experiment 30 meniscuses were used and they were divided into three groups of ten. In each experiment one group was composed by fresh meniscus - MF and therefore corresponded to the control group; the second group was composed by meniscuses preserved in glycerin 98% for the period of 30 days - MG; and, the third was composed by meniscuses preserved in glycerin 98% for 30 days also, but these were rehydrated in NaCl 0,9%, for 12 hours - MR. First, a histological evaluation of the collagen was carried out through the quantification of the collagen types and through the analyses of their fiber arrangement. The analyses of the size and macroscopic aspect of the meniscuses were also accomplished. In the second, evaluate the architecture tissue, the cell population, as well as the integrity and distribution of cell types found: fibroblasts/fibrocytes and chondrocytes. On the third part of the experiment, the meniscuses were submitted to oppression resistance tests. The strength and the elasticity limit were evaluated as well as the deformation at the elasticity limit, the rupture stress and the elasticity limit stress and stiffness index. Duncan or Tuckey tests were applied according to the instability of the variable. All the meniscuses from group MF presented organized fibers; among the meniscuses from groups MG and MR, 42,8% and 14,3% respectively, presented xii unorganized collagen fibers in small areas. The group MF presented higher type I collagen concentration and lower type III collagen concentration when compared to groups MG and MR, this was due to the reduction in size and subsequent retraction of the fibers of collagen of the meniscus from this groups, caused by dehydration. The group of meniscuses in glycerin - MG presented a significant decrease (p<0,05) in size when compared to the MF group. In the MR group, 85,7% of the meniscus went back to their original size after rehydration. The MR group presented significant increase in the meniscuses size when compared to the MG group. The percentage of cell population was statistically similar in all groups of meniscus, and that all meniscus preserved - MG and MR showed signs of cell lysis. In the meniscus of the groups preserved (MG and MR) were observed a lower intensity of color and shrinkage of collagen fibers, reduced volume and higher intensity of staining of nucleus (chromatin condensation), as compared to fresh meniscus (MF), featuring the phenomenon of cell lysis. The matrix fibrocartilaginosa of meniscus preserved proved to be well preserved by maintaining the tissue architecture and thus, the mechanical properties of the meniscus. As for resistance, the meniscuses from the preserved groups, MG and MR, were able to significantly withstand the same strength as the fresh meniscus group MF before going through total rupture. The meniscuses in glycerin - MG presented, statistically, a lower capacity of elastic deformation than the groups MF and MR (p<0,05). The meniscuses from the MG group presented significantly higher stiffness than the ones form the groups MF and MR (p<0,05), probably because of the dehydration promoted by the glycerin. The glycerin 98% proved to be a choice of means of preservation for meniscal allografts with collagenous matrix devitalized. This means increased resistance to compression of the meniscus, without changing the collagen type I and thus the architecture tissue.
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Aloenxerto ósseo cortical desvitalizado com nitrogênio líquido – estudo experimental em ovelhasAlbuquerque, Paulo Barros de January 2012 (has links)
Na ortopedia veterinária, o enxerto ósseo é comumente utilizado em uma variedade de procedimentos ou afecções ortopédicas como artrodeses, fusões espinhais, reparo de fraturas, tratamentos de união atrasada e não-união de fraturas, preenchimento de falhas ósseas, osteotomias corretivas e reconstruções após a ressecção de neoplasia óssea. O uso de enxerto ósseo alógeno, comparado com o enxerto autógeno, tem como vantagens menor morbidez e dor pós-cirúrgica, diminuição do tempo cirúrgico e, principalmente, fornecimento de maior volume ósseo para a reconstrução adequada de uma grande falha óssea. As desvantagens do seu uso são os riscos de reação imunológica e transmissão de doenças, além da necessidade da formação de um banco de ossos, o que aumenta os custos e necessita de espaço apropriado. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a taxa e a forma de incorporação do aloenxerto ósseo cortical submetido ao congelamento em nitrogênio líquido e inserido em tíbias de ovelhas, visando à preservação do membro locomotor. Seis ovelhas clinicamente sadias, da raça Corriedale, com idade estimada entre dois e três anos, foram submetidas à avaliação radiográfica pré-operatória das tíbias para que fosse descartada qualquer alteração óssea. Simultaneamente, realizou-se a ostectomia da diáfise tibial de duas ovelhas para a retirada de um segmento de 7 cm que, após a remoção do periósteo e da medula óssea, foi imerso em nitrogênio líquido, tendo como finalidade a desvitalização óssea, e implantado imediatamente no outro paciente. A estabilização entre os fragmentos e o implante ósseo foi realizada com placa cirúrgica de compressão dinâmica (PCD). Após os procedimentos cirúrgicos, foram realizadas avaliações clínicas e radiográficas a cada 30 dias até o 180º dia de pós-operatório. Aos 60 dias de pós-operatório já se observava o completo uso funcional do membro operado. A união radiográfica das interfaces proximal e distal e a consolidação óssea ocorreram em tempo médio de 95 dias em todos os animais. Conclui-se que o aloenxerto ósseo cortical submetido ao congelamento em nitrogênio líquido é um método apropriado para a preservação do membro locomotor, tendo em vista que a incorporação do mesmo ocorreu gradualmente e a taxa foi de 100%. / Bone grafting is employed in veterinary orthopedics with a variety of purposes as for arthrodesis, spinal fusions, fracture repairs, treatment of delayed or non-unions, filling bone defects, supporting corrective osteotomy, and as replacement in limb sparing techniques for tumor resection. The allograft bone, in contrast to the autologous bone graft, is associated with less site-donor morbidity and pain, reduced surgical time, and adequate bone supply to fill greater defects. Still, the allogeneic bone, besides requiring the establishment of a bone bank, can be a source of diseases and may induce immunogenic response. This study evaluated the allogeneic cortical bone graft incorporation after submission of the harvested fragment to a bout freezing in liquid nitrogen. Six adult clinically healthy sheep were submitted to a 7cm ostectomy of the tibial diaphysis. After removal of periosteum and bone marrow, the fragment was submersed in liquid nitrogen and implanted in another sheep missing a same-sized segment at the corresponding bone. Stabilization of the allograft in the host bone was accomplished by a dynamic compressive plate (DCP). Clinical and radiographic evaluations were performed in the immediate post-operatory period and in every 30 days for six months after surgery. The proximal and distal host-graft interfaces showed radiographic union at a mean postoperative time of 95 days in all the animals. The cortical bone allograft submitted to liquid nitrogen freezing provided adequate bone healing in the sheep model, representing a feasible alternative for limb preservation techniques.
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Aloenxerto ósseo cortical desvitalizado com nitrogênio líquido – estudo experimental em ovelhasAlbuquerque, Paulo Barros de January 2012 (has links)
Na ortopedia veterinária, o enxerto ósseo é comumente utilizado em uma variedade de procedimentos ou afecções ortopédicas como artrodeses, fusões espinhais, reparo de fraturas, tratamentos de união atrasada e não-união de fraturas, preenchimento de falhas ósseas, osteotomias corretivas e reconstruções após a ressecção de neoplasia óssea. O uso de enxerto ósseo alógeno, comparado com o enxerto autógeno, tem como vantagens menor morbidez e dor pós-cirúrgica, diminuição do tempo cirúrgico e, principalmente, fornecimento de maior volume ósseo para a reconstrução adequada de uma grande falha óssea. As desvantagens do seu uso são os riscos de reação imunológica e transmissão de doenças, além da necessidade da formação de um banco de ossos, o que aumenta os custos e necessita de espaço apropriado. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a taxa e a forma de incorporação do aloenxerto ósseo cortical submetido ao congelamento em nitrogênio líquido e inserido em tíbias de ovelhas, visando à preservação do membro locomotor. Seis ovelhas clinicamente sadias, da raça Corriedale, com idade estimada entre dois e três anos, foram submetidas à avaliação radiográfica pré-operatória das tíbias para que fosse descartada qualquer alteração óssea. Simultaneamente, realizou-se a ostectomia da diáfise tibial de duas ovelhas para a retirada de um segmento de 7 cm que, após a remoção do periósteo e da medula óssea, foi imerso em nitrogênio líquido, tendo como finalidade a desvitalização óssea, e implantado imediatamente no outro paciente. A estabilização entre os fragmentos e o implante ósseo foi realizada com placa cirúrgica de compressão dinâmica (PCD). Após os procedimentos cirúrgicos, foram realizadas avaliações clínicas e radiográficas a cada 30 dias até o 180º dia de pós-operatório. Aos 60 dias de pós-operatório já se observava o completo uso funcional do membro operado. A união radiográfica das interfaces proximal e distal e a consolidação óssea ocorreram em tempo médio de 95 dias em todos os animais. Conclui-se que o aloenxerto ósseo cortical submetido ao congelamento em nitrogênio líquido é um método apropriado para a preservação do membro locomotor, tendo em vista que a incorporação do mesmo ocorreu gradualmente e a taxa foi de 100%. / Bone grafting is employed in veterinary orthopedics with a variety of purposes as for arthrodesis, spinal fusions, fracture repairs, treatment of delayed or non-unions, filling bone defects, supporting corrective osteotomy, and as replacement in limb sparing techniques for tumor resection. The allograft bone, in contrast to the autologous bone graft, is associated with less site-donor morbidity and pain, reduced surgical time, and adequate bone supply to fill greater defects. Still, the allogeneic bone, besides requiring the establishment of a bone bank, can be a source of diseases and may induce immunogenic response. This study evaluated the allogeneic cortical bone graft incorporation after submission of the harvested fragment to a bout freezing in liquid nitrogen. Six adult clinically healthy sheep were submitted to a 7cm ostectomy of the tibial diaphysis. After removal of periosteum and bone marrow, the fragment was submersed in liquid nitrogen and implanted in another sheep missing a same-sized segment at the corresponding bone. Stabilization of the allograft in the host bone was accomplished by a dynamic compressive plate (DCP). Clinical and radiographic evaluations were performed in the immediate post-operatory period and in every 30 days for six months after surgery. The proximal and distal host-graft interfaces showed radiographic union at a mean postoperative time of 95 days in all the animals. The cortical bone allograft submitted to liquid nitrogen freezing provided adequate bone healing in the sheep model, representing a feasible alternative for limb preservation techniques.
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Aloenxerto ósseo cortical desvitalizado com nitrogênio líquido – estudo experimental em ovelhasAlbuquerque, Paulo Barros de January 2012 (has links)
Na ortopedia veterinária, o enxerto ósseo é comumente utilizado em uma variedade de procedimentos ou afecções ortopédicas como artrodeses, fusões espinhais, reparo de fraturas, tratamentos de união atrasada e não-união de fraturas, preenchimento de falhas ósseas, osteotomias corretivas e reconstruções após a ressecção de neoplasia óssea. O uso de enxerto ósseo alógeno, comparado com o enxerto autógeno, tem como vantagens menor morbidez e dor pós-cirúrgica, diminuição do tempo cirúrgico e, principalmente, fornecimento de maior volume ósseo para a reconstrução adequada de uma grande falha óssea. As desvantagens do seu uso são os riscos de reação imunológica e transmissão de doenças, além da necessidade da formação de um banco de ossos, o que aumenta os custos e necessita de espaço apropriado. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a taxa e a forma de incorporação do aloenxerto ósseo cortical submetido ao congelamento em nitrogênio líquido e inserido em tíbias de ovelhas, visando à preservação do membro locomotor. Seis ovelhas clinicamente sadias, da raça Corriedale, com idade estimada entre dois e três anos, foram submetidas à avaliação radiográfica pré-operatória das tíbias para que fosse descartada qualquer alteração óssea. Simultaneamente, realizou-se a ostectomia da diáfise tibial de duas ovelhas para a retirada de um segmento de 7 cm que, após a remoção do periósteo e da medula óssea, foi imerso em nitrogênio líquido, tendo como finalidade a desvitalização óssea, e implantado imediatamente no outro paciente. A estabilização entre os fragmentos e o implante ósseo foi realizada com placa cirúrgica de compressão dinâmica (PCD). Após os procedimentos cirúrgicos, foram realizadas avaliações clínicas e radiográficas a cada 30 dias até o 180º dia de pós-operatório. Aos 60 dias de pós-operatório já se observava o completo uso funcional do membro operado. A união radiográfica das interfaces proximal e distal e a consolidação óssea ocorreram em tempo médio de 95 dias em todos os animais. Conclui-se que o aloenxerto ósseo cortical submetido ao congelamento em nitrogênio líquido é um método apropriado para a preservação do membro locomotor, tendo em vista que a incorporação do mesmo ocorreu gradualmente e a taxa foi de 100%. / Bone grafting is employed in veterinary orthopedics with a variety of purposes as for arthrodesis, spinal fusions, fracture repairs, treatment of delayed or non-unions, filling bone defects, supporting corrective osteotomy, and as replacement in limb sparing techniques for tumor resection. The allograft bone, in contrast to the autologous bone graft, is associated with less site-donor morbidity and pain, reduced surgical time, and adequate bone supply to fill greater defects. Still, the allogeneic bone, besides requiring the establishment of a bone bank, can be a source of diseases and may induce immunogenic response. This study evaluated the allogeneic cortical bone graft incorporation after submission of the harvested fragment to a bout freezing in liquid nitrogen. Six adult clinically healthy sheep were submitted to a 7cm ostectomy of the tibial diaphysis. After removal of periosteum and bone marrow, the fragment was submersed in liquid nitrogen and implanted in another sheep missing a same-sized segment at the corresponding bone. Stabilization of the allograft in the host bone was accomplished by a dynamic compressive plate (DCP). Clinical and radiographic evaluations were performed in the immediate post-operatory period and in every 30 days for six months after surgery. The proximal and distal host-graft interfaces showed radiographic union at a mean postoperative time of 95 days in all the animals. The cortical bone allograft submitted to liquid nitrogen freezing provided adequate bone healing in the sheep model, representing a feasible alternative for limb preservation techniques.
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Classificação morfológico, critérios de malignidade, expressão gênica de C-MYC e imunoistoquímica de C-MYC, p53, p21 e p27 no tumor venéreo transmissível canino / Morfhological classification, malignancy criteria, gene expression of myc and immunohistochemical of c-myc, p53, p21 and p27 in canine transmissible venereal tumorLima, Caroline Rocha de Oliveira 19 July 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013-07-19 / The present concept about carcinogenesis is that normal cells are transformed into
tumor by mutations that activate oncogenes, inhibit tumor suppressor genes or
trigger genetic instability. However, studies suggest that some neoplastic types can
behave like infectious agents and be transmitted from one host to another, similar to
what occurs with the canine transmissible venereal tumor (TVT). The TVT
histogenesis is not fully known, because the studies are controversial and do not
bring about the results elucidating cell line that characterized the neoplasm.
However, research continues in order to elucidate this question and identify the
ancestral genetic TVT. Recently, a cytomorphological classification was proposed for
the TVT, including plasmacytoid types, linfocitoide and mixed. Nevertheless, many
features of the development and behavior of this dogs transmissible neoplasm are
still poorly understood. Accordingly, we evaluated the different morphological
patterns of the tumor, the macroscopic aspects, the criteria of malignancy, the
molecular identification of the tumor, by inserting the element LINE-1 in the C-MYC
gene, the immunohistochemical expression of the C-MYC, p53, p21 and p27, and
the relationship between the proteins C-MYC, p53, p21 and p27, the block of the cell
cycle and apoptosis of tumor cells. The results indicate that the cytological
examination allows better characterization of patterns and cytomorphologic criteria of
malignancy of TVT compared to histological examination, which can identify the
types plasmacytoid, linfocitoide and mixed. It was further observed that the TVT
presents morphological peculiarities that may interfere with tumor behavior and
response to chemotherapy, especially those related to more aggressive and have
been observed in plasmacytoid TVT, cytomorphological most common type of this
tumor. The identification of molecular rearrangement LINE-1/C-MYC features specific
molecular changes for TVT that may be introduced as supplementary diagnostic
method of cancer, especially in highly undifferentiated tumors. Immunohistochemical
analysis and the relationship between C-MYC, p53, p21 and p27 revealed functional
abnormalities in these proteins, interfering with biological events in cell cycle control
and apoptosis, and may thus contribute to the genesis and neoplastic progression. / O conceito atual sobre carcinogênese refere que células normais se transformam
em tumorais por mutações que modificam proto-oncogenes transformando-os em
oncogenes, inibem genes supressores tumorais ou que disparam instabilidades
genéticas. No entanto, estudos sugerem que alguns tipos neoplásicos podem se
comportar como agentes infecciosos e ser transmitidos de um hospedeiro a outro, a
exemplo do que ocorre com o tumor venéreo transmissível canino (TVT). A
histogênese do TVT não é totalmente conhecida, pois os estudos são controversos
e não trazem resultados elucidativos quanto à linhagem celular que caracterizou a
neoplasia. Entretanto, as pesquisas continuam com o objetivo de elucidar essa
questão e identificar o ancestral genético do TVT. Recentemente, uma classificação
citomorfológica foi proposta para o TVT, incluindo os tipos plasmocitoide, linfocitoide
e misto. Apesar disso, muitas características de desenvolvimento e comportamento
dessa neoplasia transmissível dos cães ainda são pouco entendidas. Nesse sentido,
foram avaliados os diferentes padrões morfológicos do tumor, os aspectos
macroscópicos, os critérios de malignidade, a identificação molecular da neoplasia,
por meio da inserção do elemento LINE-1 no gene C-MYC, a expressão
imunoistoquímica das proteínas C-MYC, p53, p21 e p27, e a relação entre as
proteínas C-MYC, p53, p21 e p27, o bloqueio do ciclo celular e a apoptose das
células tumorais. Os resultados indicam que o exame citopatológico permite melhor
caracterização dos padrões citomorfológicos e critérios de malignidade do TVT em
relação ao exame histopatológico, sendo possível identificar os tipos plasmocitoide,
linfocitoide e misto. Constatou-se ainda que o TVT apresenta particularidades
morfológicas que podem interferir no comportamento tumoral e na resposta à
quimioterapia, especialmente aquelas relacionadas à maior agressividade e que
foram observadas no TVT plasmocitoide, tipo citomorfológico mais comum da
neoplasia. A identificação do rearranjo molecular LINE1/C-MYC caracteriza
alteração molecular específica do TVT e pode ser utilizada como método diagnóstico
complementar da neoplasia, principalmente em tumores indiferenciados. A análise
imunoistoquímica e a relação entre C-MYC, p53, p21 e p27 indicam anormalidades
funcionais nessas proteínas, interferindo nos eventos biológicos de controle do ciclo
celular e da apoptose, podendo, dessa forma, contribuir nos processos de
crescimento e progressão do TVT.
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