Orientador: Mara Corrêa Lelles Nogueira / Banca: Alessandra Vidotto / Banca: Fátima Pereira de Souza / Resumo: Acinetobacter baumannii é frequentemente encontrado em infecções hospitalares, ocasionando pneumonia associada à ventilação, bacteremia, infecções de trato urinário e meningite secundária. Nos últimos anos, o uso extensivo de antimicrobianos em hospitais contribuiu para o aumento e emergência de cepas resistentes, incluindo os carbapenêmicos, os principais recomendados no tratamento. Assim, os aminoglicosídeos ganham importância como opção terapêutica. A resistência a estes antimicrobianos é decorrente, principalmente, da produção de enzimas modificadoras de aminoglicosídeos (AMEs) e de enzimas 16S rRNA Metilases. No Brasil, informações sobre o perfil de suscetibilidade e genes que codificam estas enzimas são escassas. Assim, é fundamental a identificação de mecanismos de resistência e reservatórios potenciais, bem como realizar comparação de isolados para controlar a disseminação de A. baumannii no ambiente hospitalar. O presente estudo teve como objetivos avaliar e comparar o perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos, genes de enzimas modificadoras de aminoglicosídeos (AMEs), genes de enzimas 16S rRNA Metilases e similaridade genética entre isolados de A. baumannii com importância clínica no Hospital de Base (HB) de São José do Rio Preto, SP. Além disso, estes resultados foram comparados com um estudo anterior realizado no mesmo hospital. Foram avaliados 32 isolados coletados no período entre dezembro de 2013 a maio de 2014. A identificação da espécie foi realizada por metodologias automatizadas e confirmada por Duplex-PCR. Os testes de suscetibilidade aos antimicrobianos foram resultantes de teste automatizado de microdiluição e disco-difusão, para aminoglicosídeos Amicacina (AK), Gentamicina (CN), Tobramicina (TOB) e Canamicina (CAN), de acordo com o CLSI, 2014 e FDA, 2013. Primers específicos e PCRmultiplex foram usados para a detecção dos genes... / Abstract: Acinetobacter baumannii is found in nosocomial infections, causing ventilator-associated pneumonia, bacteremia, urinary tract infections and secondary meningitis. In recent years, the extensive use of antibiotics in hospitals has contributed to the rise and emergence of A. baumannii strains resistant to a wide range of antimicrobials, including carbapenems, main antibiotics recommended on treatment. In this context, aminoglycosides gain importance as therapeutic options. Resistance to aminoglycosides is mainly due to the Aminoglycoside Modifying Enzymes (AMEs) and 16S rRNA Methylases production. In Brazil, high infection rates to carbapenem-resistant A. baumannii are observated, however information about aminoglycoside susceptibility profile and occurance of this genes are scarce. Thus, it is essential to identify resistance mechanisms and potential reservoirs, as well as perform comparison of isolates to control the spread of A. baumannii in the hospital environment. This study aimed to evaluate and compare the antimicrobial susceptibility profile, genes of aminoglycoside modifying enzymes and 16S rRNA Methylases and genetic similarity among A. baumannii isolates with clinical importance at Hospital de Base (HB) in São José do Rio Preto, SP. Additionally, the results were compared to another previous study achieved in the same hospital. 32 isolates collected between December 2013 and May 2014 were evaluated. Specie identification was performed using automated methodology and confirmed by Duplex- PCR. The susceptibility tests were the result of automated and disc-diffusion tests - for aminoglycosides Amikacin (AK), Gentamicin (CN), Tobramycin (TOB) and Kanamycin (K) - according to CLSI, 2014 and FDA, 2013. Specific primers and Multiplex-PCR were used in AMEs' and 16S rRNA Methylases' genes detection and primers REP1-REP2 were used in molecular typing by REP-PCR. All the isolates of this study... / Mestre

Orientador: Ary Fernandes Júnior / Banca: Rosemeire Cristina Linhares Rodrigues Pietro / Banca: Maria de Lourdes Ribeiro da Cunha / Resumo: A propriedade antimicrobiana das plantas pode ser explicada pela produção de compostos ativos gerados durante o metabolismo secundário. Atualmente os conhecimentos, as vezes empíricos, desta propriedade têm sido confirmados cientificamente, revelando assim o enorme potencial das plantas no controle de doenças infecciosas, enquanto verifica-se um aumento nos casos de microrganismos patogênicos resistentes aos antimicrobianos conhecidos. Extratos e óleos essenciais de plantas têm mostrado efeitos sobre desenvolvimento de microrganismos em inúmeras situações, o que sugere uso prático destes produtos. O estudo teve por objetivo comparar a ação inibidora de extratos e óleos essenciais de quatro plantas (pitanga - Eugenia uniflora, Alecrim do Campo - Baccharis dracunculifo/ia, Camomila - Matricaria chamomilla e Assa Peixe - Vernonia polyanthes) sobre linhagens de Staphylococcus aureus e Escherichia coli, através da diluição dos antimicrobianos vegetais em meio Mueller Hinton Agar e verificação dos valores de Concentração Inibitória Mínima (CIM). De maneira geral verificou-se efeito antimicrobiano para todos os produtos vegetais, com uma discreta tendência de maior susceptibilidade para a bactéria Gram positiva. Os resultados apontam os extratos de pitanga e assa peixe como os mais efetivos sobre S.aureus e E.co/i. Em relação aos óleos, os óleos de alecrim do campo e pitanga foram os mais eficientes sobre s.aureus. Para E.coli, evidenciou-se os óleos de assa peixe e alecrim do campo como os mais eficientes. Em uma segunda etapa do estudo verificou-se possíveis interações entre estes derivados vegetais com drogas antimicrobianas utilizando metodologia dos discos, adaptado de Kirby&Bauer e através da determinação de curvas de sobrevivência utilizando misturas entre as drogas convencionais e antimicrobianos vegetais. Foi verificado nos testes in vitro uma taxa... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The antimicrobial property of plants can be explained by the production of active compounds generated during the secondary metabolismo Currently the knowledge, often empirical, of this property has been confirmed scientifically, thus revealing the potential of plants in the control of infectious diseases, while there is an increasing incidence of pathogens resistant to known antibiotics. Extracts and essential oils of plants have shown effects on development of micro-organisms in many situations, suggesting the practical use of these produets. The study aimed to compare the inhibitory action of extracts and essential oils of four plants (Surinam Cherry - Eugenia uniflora, "Alecrim do Campo" - Baccharis dracunculifolia, Chamomile - Matricaria chamomilla and "Assa Peixe" - Vernonia polyanthes) on strains of Staphylococcus aureus and Escherichia coli, through dilution of plant antimicrobials in Mueller Hinton Agar and the minimal inhibitory concentration (MIe) values were performed. In general it was found antimicrobial effectiveness for alI plant products, with a slight tendency for increased susceptibility to Gram positive bacteria. The results show the extracts of Surinam cherry and "assa peixe" as the most effective on S. aureus and E.coli. For waste oils, "aleCrim do campo" and Surinam cherry were the most effeetive on S. aureus. For E.coli, there was the oils of "alecrim do campo" and "assa peixe" as the most efficient. In a second step ofthe present study, possible interactions between these plant derivatives from antimicrobial drugs using discs methodology adapted from Kirby & Bauer and by determining the survival curves using mixtures of conventional drugs and antimicrobial plant. It was observed in vitro tests a higher rate of synergism between drugs and essential oils, and essential oils of "alecrim do campo" and "assa peixe" showed a higher frequency of synergism with drugs... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Taís Maria Bauab / Banca: Rosemeire Cristina Linhari Rodrigues Pietro / Banca: Carlos Henrique Gomes Martins / Banca: Marcia Nitschke / Banca: Suraia Said / Resumo: A resistência aos antibióticos é reconhecida pela Organização Mundial de Saúde (OMS) como a maior ameaça para o tratamento de doenças infecciosas. Uma estratégia importante para ajudar a combater o problema da resistência envolve a descoberta e desenvolvimento de novos agentes capazes de suprimir parcial ou totalmente os mecanismos de resistência microbiana. As plantas de cerrado são conhecidas como uma fonte de compostos de interesse biotecnológico elevado com aplicações na indústria farmacêutica e de alimentos. Dessa maneira, tornou-se relevante avaliar a atividade antimicrobiana dos extratos de Pouteria torta e Pouteria ramiflora (Sapotaceae), da fração enriquecida de Salacia campestris contendo netzaucoieno e maitenina (FrMN) e das substâncias isoladas netzaucoieno de Salacia campestris (Hippocrateaceae) e maitenina de Maytenus ilicifolia (Celastraceae), pela técnica de diluição em microplacas frente aos micro-organismos Staphylococcus aureus ATCC 25923, Salmonela sp. ATCC 19196, Bacillus subtilis ATCC 19659, Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Staphylococcus aureus multi-resistente isolado de paciente hospitalizado, Helicobacter pylori ATCC 43504 e Candida albicans ATCC 18804. Além disso, também foi utilizada a técnica de Checkerboard frente ao H. pylori e Time Kill frente aos micro-organismos que apresentaram sensibilidade às substâncias testadas. Os resultados obtidos demostraram que o extrato de P. torta inibiu o crescimento das cepas de S. aureus, B. subtilis e E. coli, enquanto as cepas de S. aureus, B. subtilis, E. coli, P. aeruginosa, S. setubal e C. albicans foram mais sensíveis frente ao extrato de P. ramiflora. Das amostras avaliadas, a maitenina e a FrMN foram as que apresentaram as atividades mais promissoras contra bactérias... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The antibiotic resistance is known by the World Health Organization (WHO) as the biggest threat to the treatment of infectious diseases. An important strategy to help tackle resistance involves the discovery and development of new agents able to partially or totally suppress the microbial resistance mechanisms. "Cerrado" plants are known as a source of compounds of high biotechnological interest with applications in the pharmaceutical industry and the food industry. In this manner, it has become relevant to evaluate the antimicrobial activity of the extracts of the Pouteria torta and Pouteria ramiflora (Sapotaceae), of the enriched fraction of Salacia campestris containing netzaucoien and maytenin (FrMN) and of the isolated substances netzaucoyen of Salacia campestris (Hippocrateaceae) and maytenin of Maytenus ilicifolia (Celastraceae), through the technique of dilution in microplates against microorganisms Staphylococcus aureus ATCC 25923, Salmonela sp. ATCC 19196, Bacillus subtilis ATCC 19659, Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Staphylococcus aureus multi-resistant isolated of a hospitalized patient, Helicobacter pylori ATCC 43504 and Candida albicans ATCC 18804. Other than that, the Checkerboard technique against the H. pylori and Time Kill against the microorganisms that were sensitive to the tested substances. The obtained results demonstrated that the P. torta extract inhibited the S. aureus, B. subtilis and E. coli growth, while the P. ramiflora extract, the strain S. aureus, B. subtilis, E. coli, P. aeruginosa, S. setubal and C. albicans were more sentitive. Of the evaluated compounds, the maytenin and the FrMN were within those who presented the most prominent activities against the bacteria Gram-positive S aureus (ATCC) and S. aureus multi-resistente, and B. subtilis... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Gustavo Rezende Siqueira / Banca: Mauro Dal Secco de Oliveira / Banca: Alexandre Mendonça Pedroso / Resumo: A utilização de fontes de proteína não degradável no rúmen em substituição a proteína degradável no rúmen constitui-se em uma possibilidade de aumento da eficiência de utilização do nitrogênio. Outra opção para a diminuição da perda da qualidade natural da proteína é através da utilização de aditivos, como por exemplo, a virginiamicina, que tem o efeito potencial de reduzir a desaminação de aminoácidos no rúmen evitando grandes perdas de nitrogênio. O presente estudo objetivou avaliar o efeito da inclusão de soja tostada (ST) e da virginiamicina (VM) na suplementação da dieta de vacas leiteiras em pastagens. Foram utilizadas 16 vacas mestiças Holandês x Zebu (com predominância de animais ¾ Holandês), em lactação, com peso corporal médio de 550±11,96 kg, produção 21±1,23kg de leite/vaca/dia, divididas em quatro quadrados latinos 4x4 em arranjo fatorial 2x2, sendo duas doses de VM (0 e 340 mg/vaca/dia) e duas formas de inclusão de soja (crua versus tostada). A produção média de leite (Kg/dia) e a produção corrigida para 4% de gordura foram maiores (P<0,10) nas vacas alimentadas com ST. A suplementação de vacas leiteiras com ST em sistema intensivo a pasto aumenta a produção de leite. A VM aumenta a concentração de glicose plasmática (P>0,10) nos tempos 2 e 3 horas após a oferta matinal de concentrado, porém não altera a produção de leite / Abstract: The use of rumen undegradable sources of proteins to replace rumen degradable protein in a possibility of increasing the efficiency of nitrogen utilization. Another option for reducing losses of high quality protein is through the use of additives, as virginiamycin, which has the effect of reducing the potential deamination of amino acids in the rumen, avoiding great losses of nitrogen. The present study aimed to evaluate the effect of adding roasted soybean (ST) and virginiamycin (VM) supplementation in the diet of dairy cows on pasture. We used 16 crossbred (predominantly ¾ Holstein) lactating cows with average body weight of 550 ± 11.96 kg, producing 21 ± 1.23 kg / cow / day, divided into four 4x4 Latin squares in a 2x2 factorial arrangement, with two doses of VM (0 and 340 mg / cow / day) and two forms of soybean (raw versus roasted). Milk production (kg / day) and production 4% fat corrected milk were higher (P<0.10) in cows fed ST. Supplementation of dairy cows with roasted soybean in intensive systems on pasture increases milk production. VM increases the concentration of plasma glucose (P<0.10), 2 and 3 hours after the morning supply of concentrate, but does not change milk production / Mestre

Orientador: Ana Maria Soares Pereira / Coorientador: Bianca Waléria Bertoni / Banca: Glyn Mara Figueira / Banca: Rosa de Belem das Neves Alves / Banca: Lin Chau Ming / Banca: Elzabeth Orika Ono / Resumo: A espécie Cochlospermum regium foi selecionada por apresentar importantes propriedades terapêuticas relacionadas a infecções do sistema reprodutivo feminino, relatadas em levantamentos etnofarmacológicos. Entretanto, alguns estudos realizados com microorganismos in vitro são contraditórios. Este fato pode estar relacionado a fatores ambientais e fenológicos referentes ao cultivo da planta, a forma de preparação dos extratos e/ou também ao microrganismo alvo. No presente trabalho foram avaliadas a atividade antimicrobiana em raízes de plantas de C. regium coletadas em diversas localidades, estádios fenológicos, idade da planta e condições de sazonalidade. Para realização destes testes antimicrobianos foi desenvolvida uma metodologia a qual utiliza diretamente a droga vegetal sem a necessidade prévia de preparação de extratos (STAMP). Além disso, foram realizados estudos fitoquímicos biomonitorados através da bioautografia. Quanto ao STAMP, constatou-se que este é eficiente para avaliar drogas vegetais principalmente com atividade antifúngica. Com relação aos testes que avaliaram o efeito ambiental e fenológico sobre a atividade antimicrobiana de raízes de C. regium, foi verificado que, apesar de a planta apresentar atividade antimicrobiana em todas as condições avaliadas, foi possível observar que as raízes coletadas no outono e inverno apresentaram maior inibição frente a C. albicans, além disso, a idade da planta e substrato de cultivo, também interferem nesta resposta biológica. Desta maneira, para utilização de extratos desta planta contra essa doença infecciosa causada por C. albicans, recomenda-se a coleta de plantas no outono e inverno. Também foi possível observar que a entrecasca e cerne da raiz são os principais responsáveis pela atividade antimicrobiana. Os estudos fitoquímicos, realizados a partir do extrato hidroalcoólico (80%) ... / Abstract: Cochlospermum regium was selected because it has important therapeutic properties related to infections of female reproductive system, which is reported in ethnopharmacological studies. However, some studies with microorganisms in vitro using this plant are contradictory. This fact could be related to environmental or phenological factors relating to the cultivation of the plant, how to prepare the extracts and/or also the target organism. In this study has been evaluated the antimicrobial activity of C. regium roots collected in different localities, growth stages, plant age and seasonal conditions. To conduct these antimicrobials tests, a methodology has developed which uses the powered plant directly without prior preparation of extracts (STAMP). In addition, biomonitored phytochemical analysis were performed by bioautography assays. Regarding STAMP method, it was efficient for evaluating powered plant mainly with antifungal activity. The tests that evaluated the environmental and phenological effects on the antimicrobial activity of C. regium roots showed that despite the plant antimicrobial activity occur in all conditions evaluated, it has observed that the roots collected in autumn and winter showed greater inhibition against C. albicans. Furthermore, the age of the plant and the substrate of culture also affect the biological response. Thus, we recommend collecting plants in autumn and winter to use against infectious disease caused by C. albicans. It has also observed that both inner bark and root cern are the main responsible for the antimicrobial activity. The phytochemical studies, carried out from the hydroalcoholic extract (80%), showed that the active compounds are of medium polarity, since the highest activity has obtained in the ethyl acetate fraction. Gallic acid was found to be the majority compound 4 in this fraction from GC-MS. Two flavonoids have isolated in ... / Doutor

Orientador: João Ruggiero Neto / Banca: Margarete Teresa Gottardo de Almeida / Banca: Mara Corrêa Lelles Nogueira / Banca: Fátima Pereira de Souza / Banca: Fernando Alves de Melo / Resumo: Peptídeos antimicrobianos (PAMs) são componentes do sistema imune inato, que estão presentes na maioria dos organismos vivos cujo interesse é crescente devido à sua potente atividade antimicrobiana contra uma vasta gama de microrganismos, juntamente com a sua baixa toxicidade, em geral, para as células de mamíferos. Esse trabalho teve a finalidade de desenvolver um peptídeo antimicrobiano curto com as mesmas características estruturais do peptídeo Polybia-MP1 (IDWKKLLDAALQIL-NH2) extraído da vespa Polybia paulista que conferem ação antimicrobiana e seletividade, tais como: o posicionamento relativo dos resíduos de aminoácidos carregados, um resíduo ácido na posição N-terminal, a hidrofilicidade e a ampla face polar. Foi idealizado e sintetizado um peptídeo denominado L1A (IDGLKAIWKKVADLLKNT-NH2) e dois análogos com modificações na região do Nterminal; um acetilado (Ac-L1A) e outro com o ácido orto-aminobenzóico (Abz), uma sonda fluorescente extrínseca, ligado covalentemente ao N-terminal, esse peptídeo teve o triptofano substituído por um resíduo de valina (Abz-L1A-W8V). Analisou-se a fluorescência estática e dinâmica do triptofano e do Abz, que apresentaram significante deslocamento quando os peptídeos são adsorvidos em vesículas lipídicas; a supressão da fluorescência por acrilamida mostrou que os fluoróforos em vesículas aniônicas estão menos expostos ao solvente do que em vesículas zwitterionicas. A atividade lítica em vesículas a partir das curvas de doseresposta também reforça que os três peptídeos são mais eficientes em vesículas aniônicas, além disso, que os análogos foram mais eficientes. Estas observações foram compatíveis com o maior teor helicoidal (observado em dinâmica molecular e dicroísmo circular) seus fluoróforos se enterram mais profundamente em vesícula aniônica. Dados de MD e CD demonstraram uma relação entre a estabilidade da hélice e a ausência de carga ... / Abstract: Antimicrobial peptides (AMPs) are components of the innate immune system, which are present in the majority of the living organisms and whose interest is growing due to their potent antimicrobial activity against a broad range of microorganisms, coupled with their usually low toxicity to mammalian cells. In an effort to develop short antimicrobial peptides with the same structural characteristics that imparted selectivity to Polybia-MP1 (IDWKKLLDAALQIL-NH2): the relative positioning of acid and basic residues, an acid residue at the N-terminus, hydrophilicity and the broad polar face. MP1 is a potent antimicrobial, antitumoral and non-hemolytic peptide. We generated a peptide named L1A (IDGLKAIWKKVADLLKNT-NH2) and two analogs with N-terminus modifications; one acetylated (Ac-L1A) and other was extrinsic fluorescent labeled with ortho-aminobenzoic acid (Abz) in which the tryptophan was substituted by valine (Abz-L1A-W8V). We analyzed static and time-resolved fluorescence of tryptophan and ortho-aminobenzoic acid were used and showed significant blue shift when peptides are adsorbed in lipid vesicles and the fluorescence quenching by acrylamide showed that fluorophores in anionic vesicles, are less exposed to the solvent than in neutral vesicles. The lytic activity in vesicles showed from dose-response curves that the three peptides were more efficient in anionic vesicles moreover that the analogs were more efficient. These observations were compatible with the higher helical content (observed in Molecular Dynamics and Circular Dichroism) and deeper burying of the fluorophores in anionic vesicle. MD and CD data demonstrated a relationship between the stability of the helix and the absence of load on the N-terminal. L1A and Ac-L1A presented potent antimicrobial selective against Gram negative bacteria without being hemolyitic while Abz -L1A -W8V was mildly hemolytic / Doutor

Orientador: José Paes de Almeida Nogueira / Banca: Vera Lúcia Mores Rall / Banca: Jean Guilherme Fernandes Joaquim / Resumo: O objetivo do presente trabalho foi avaliar a prevalência de Salmonella spp. e seu perfil de resistência a antibióticos em suínos abatidos em frigoríficos sob inspeção federal localizados no interior do estado de São Paulo. Para tanto foram utilizados diferentes tipos de amostras, tais como fezes e linfonodos mediastínicos, mesentéricos e submandibulares, sendo 50 amostras de cada tipo, possibilitando avaliar a relevância do tipo de material analisado em relação ao real status do animal frente à contaminação pelo patógeno. Com base nas amostras positivas foi realizada a sorotipagem das cepas e teste de resistência aos antibióticos. A prevalência do patógeno foi de 10% no total das amostras (20/200), sendo os maiores percentuais de positividade encontrados nos linfonodos submandibulares com 20% de positivos (10/50) e mesentéricos com 18% (9/50) e os menores valores encontrados nas fezes com 2% de positivos (1/50) e linfonodos mediastínicos com nenhuma amostra positiva. Os sorovares predominantes foram S. Typhimurium com 55% das amostras (11/20), seguido de S. enterica subspécie enterica 4,5,12:i:- com 35% (7/20) e os sorovares S. Brandenburg e S. Derby com 5% (1/20) cada. Todas as amostras isoladas apresentarem resistência frente a pelo menos um dos antimicrobianos testados, sendo que 90% (18/20) apresentaram resistência a pelo menos 4 drogas simultaneamente e 15% (3/20) foram enquadradas como multi drogas resistentes. Os maiores índices de resistência foram encontrados para Ciprofloxacina e Tetraciclina com 90% de resistentes (18/20) cada, seguido de Ácido Nalidíxico com 80% (16/20), Sulfonamidas com 75% (15/20), Cloranfenicol e Estreptomicina com 70% (14/20) cada, Sulfametoxazole- Trimetroprim com 65% (13/20), Ampicilina com 25% (5/20), Cefotaxime com 10% (2/10) e Ceftriaxona e Gentamicina com 5% (1/20) cada. As amostras resistentes à Ciprofloxacina foram testadas para a presença da enzima ESBL, sendo 100% ... / Abstract: The objective of this study was to evaluate the prevalence of Salmonella spp. and their antibiotic resistance profiles in swine slaughtered in abattoirs under federal inspection located in the state of São Paulo. For both types of samples, such as feces and mediastinal, mesenteric and submandibular lymph nodes, 50 samples of each type being possible to evaluate the relevance of the type of material analyzed in relation to the actual status of the animal against the contamination by the pathogen were used. Based on positive samples, serotyping of the strains and antibiotic resistance test was performed. The prevalence of the pathogen was 10% of total samples (20/200) wich the highest positivity found in the submandibular lymph nodes with 20% positive (10/50) and mesenteric with 18% (9/50) and lower found in the feces with 2% positive (1/50) and mediastinal lymph nodes with no positive sample. The predominant serotypes were S.Typhimurium with 55% of the samples (11/20) followed by S. enterica subspecies enterica 4,5,12: i: -, 35% (7/20) and the serotypes S. Brandenburg and S. derby 5% (1/20) each. All isolates were resistant at least one of the antimicrobials tested, among them 90% (18/20) showed resistance to at least four drugs simultaneously and 15% (3/20) were classified as multi drug resistant. The highest rates were found for Ciprofloxacin and Tetracycline resistance with 90% (18/20) each, followed by Nalidixic Acid with 80% (16/20), Sulfonamides 75% (15/20), Chloramphenicol and Streptomycin with 70% (14/20) each, Trimethoprim-Sulfamethoxazole 65% (13/20), Ampicillin 25% (5/20), Cefotaxime 10% (2/10) and Ceftriaxone and Gentaminicine with 5% (1/20) each. Resistant to Ciprofloxacin samples were tested for the presence of ESBL enzyme, 100% of them considered negative / Doutor

Orientador: Mara Correa Lelles Nogueira / Coorientador: Doroti de Oliveira Garcia / Banca: Ana Cristina Gales / Banca: Afonso Luis Barth / Banca: Aripuanã Sakura Aranha Watanabe / Banca: Margarete Teresa Gottardo de Almeida / Resumo: O aumento nas taxas de infecção por K. pneumoniae produtoras de KPC tornou-se um sério problema de saúde pública mundial. Estas enzimas hidrolizam carbapenêmicos, oxyimino-cefalosporinas, cefamicinas e não são inibidas por inibidores das -lactamases tais como o ácido clavulânico, sulbactam e tazobactam. Além disso, em plasmídeos que carreiam o gene blaKPC, geralmente são encontrados genes de resistência a outros antimicrobianos, como quinolonas e aminoglicosídeos. Deste modo, o objetivo deste estudo foi investigar, de forma comparativa, a presença de genes de resistência aos aminoglicosídeos, quinolonas e - lactâmicos entre K. pneumoniae produtoras de KPC, provenientes de diversos hospitais da cidade de São Paulo e de um hospital terciário localizado em São José do Rio Preto, região noroeste do estado de São Paulo. A similaridade genética e a relação clonal entre as cepas isoladas em cada região também foram determinadas. Foram estudadas cem cepas de K. pneumoniae produtoras de KPC, sendo cinquenta de hospitais da cidade de São Paulo, armazenadas na coleção do Instituto Adolfo Lutz de São Paulo, denominadas SP, e cinquenta do Hospital de Base de São José do Rio Preto, denominadas KP. O gene blaCTX-M foi detectado em 76% das cepas KP e em 58% das cepas SP. Entre as cepas KP, 68,4% apresentaram blaCTX-M-15, 23,7% blaCTX-M-2, 2,6%% blaCTX-M-59, 2,6% blaCTX-M-15 e blaCTX-M-59 simultaneamente e 2,6% não identificado. Entre as cepas SP, 51,7% apresentaram blaCTX-M-2, 37,9% blaCTX-M-15, 2,5% blaCTX-M-15 e blaCTX-M-2 simultaneamente e 5% blaCTX-M-14. Dos sete genes de AMEs investigados, foram detectados cinco, sendo aph(3')-VI, aph(3')-Ia, aac(6')- Ib, aac(3)-Ia e aac(3)IIa, distribuídos entre 95% das cepas, sem diferença entre KP e SP. Dos sete genes de metiltransferases 16S RNAr, apenas o gene rmtB foi detectado, em duas cepas SP. Quanto aos genes determinantes de resistência às quinolonas, 42% das cepas KP... / Abstract: The increase in infection rates by KPC producing K. pneumoniae is a serious global public health problem. These enzymes hydrolyze carbapenems, oxyimino-cephalosporins, cephamycins, and -lactamase inhibitors such as clavulanic acid, sulbactam and tazobactam. In addition, the plasmids carrying blaKPC genes generally harbor other antimicrobial resistance genes. Thus, the aim of this study was to investigate, in a comparative way, the presence of genes conferring resistance to aminoglycosides, quinolones and -lactams between KPC producing K. pneumonia from various hospitals in São Paulo City and from a tertiary hospital located in Sao Jose do Rio Preto, northwest of São Paulo state. The genetic similarity and the clonal relationship among strains were also determined. One hundred isolates were studied: fifty from different hospitals in São Paulo (named SP), and fifty from the "Hospital de Base de São José do Rio Preto" (named KP). The blaCTX-M gene was detected in 76% of the KP strains and in 58% of the SP strains. Among the KP strains, 68.4% had blaCTX-M-15, 23.7% blaCTX-M-2, 2.6% blaCTX-M-59, 2.6% blaCTX-M-15 and blaCTX M-59 simultaneously, and 2.6% were unidentified. Among the SP strains, 51.7% presented blaCTX-M-2, 37.9% blaCTX-M-15, 2.5% blaCTX-M-15 and blaCTX-M-2 simultaneously, and 5% blaCTX-M-14. Regarding the genes for AMEs, among the seven types investigated, five were detected: aph (3') -VI, aph (3 ') - Ia, aac (6') - Ib, aac (3) -Ia and aac (3) IIa were detected among 95% of the strains, and no difference was observed between KP and SP strains. Among the seven genes for 16S rRNA methyltransferases, only the rmtB was detected, in two SP strains. Concerning genes that determine resistance to quinolones, 42% of he KP and 14% of the SP strains showed qnrB. The oqxAB gene was detected in 56% and 2% of the SP and KP strains, respectively. Molecular typing by ERIC-PCR revealed that genetical... / Doutor

Orientador: Cristiane Duque / Coorientador: Alberto Carlos Botazzo Delbem / Banca: Denise Pedrini / Banca: Thiago Cruvinel da Silva / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a influência da incorporação de nanopartículas de trimetrafosfato de sódio (TMP) e clorexidina (CHX) nas propriedades microbiológicas, físico-mecânicas e na capacidade de redução da desmineralização de um cimento de ionômero de vidro modificado por resina (CIV) indicado para restauração. Inicialmente, foram determinados nove grupos de estudo: 1) CIV; 2) CIV + CHX 1,25%; 3) CIV + CHX 2,5%; 4) CIV + TMP 7%; 5) CIV+ CHX 1,25% + TMP 7%; 6) CIV + CHX 2,5% + TMP 7%; 7) CIV+ TMP 14%; 8) CIV + CHX 1,25% + TMP 14%; 9) CIV + CHX 2,5% + TMP 14%. Para determinar a atividade antimicrobiana desses CIV contendo ou não TMP e CHX foi realizado o teste de difusão em ágar com Streptococcus mutans, Lactobacillus acidophilus, Actinomyces israelii e Candida albicans. Após 24h, os halos de inibição obtidos pelos CIV foram mensurados com o auxílio de um paquímetro digital. Corpos-de-prova dos CIV foram confeccionados utilizando matrizes específicas e avaliadas as seguintes propriedades físico-mecânicas para cada grupo de materiais do estudo: resistência à compressão e à tração diametral e dureza de superfície, além de determinar a liberação total de fluoreto (F) e de TMP. Foram preparados 80 blocos a partir de incisivos bovinos e selecionados pelo teste de dureza de superfície do esmalte (DS1). Os corpos-de-prova dos CIV foram adaptados aos blocos de esmalte recém-preparados e submetidos às ciclagens de pH. A seguir, foi analisada a dureza de superfície final do esmalte (DS2) para o cálculo da porcentagem da perda de dureza de superfície (%PDS) e verificar a capacidade do material em reduzir a desmineralização. Os dados foram submetidos aos testes de ANOVA e Bonferroni ou Student-Newman-Keuls, considerando p≤0,05. Os resultados mostraram que a adição... / Abstract: The aim of this study was to evaluate the influence of the association of sodium trimetaphosphate nanoparticles (TMP) and chlorhexidine (CHX) on the microbiological, physical-mechanical and enamel demineralization reduction of glass ionomer cement (GIC). Initially, nine groups of the study were defined: 1) control - GIC Fuji LII; 2) GIC+ 1.25% CHX; 3) GIC + 2.5% CHX; 4) GIC + 7%TMP; 5) GIC+ 1.25% CHX + 7%TMP; 6) GIC + 2.5% CHX + 7%TMP; 7) GIC+ 14%TMP; 8) GIC + 1.25% CHX + 14%TMP; 9) GIC+ 2.5% CHX + 14% TMP. The antimicrobial activity of GIC containing or not CHX/TMP was determined by agar diffusion test against Streptococcus mutans, Lactobacillus acidophilus, Actinomyces israelii and Candida albicans. After 24h, the inhibition zones obtained by the GIC were measured with a digital caliper. GIC specimens were prepared using specific stainless steel molds in order to evaluate the following physical-mechanical properties for each material group: compressive and diametral tensile strength and superficial hardness, besides to determine total fluoride and TMP release. Eighty enamel blocks were prepared from extracted bovine incisors and selected through the initial surface hardness test (SH1). GIC specimens were adjusted to the enamel blocks and submitted to pH-cyclings. After that, final superficial hardness (SH2) was determined in order to obtain the percentage of superficial hardness loss (%SHL) and observe the capacity of the materials in reducing enamel demineralization. Data were submitted to ANOVA and Bonferroni or Student-Newman-Keuls statistical tests, considering p≤0.05. The results showed that the addition of chlorhexidine increased the antimicrobial activity of GIC for all groups. The physical-mechanical properties of GIC, especially compressive strength, were jeopardized by the association... / Mestre

Orientador: Marcio Vinícius Bertacine Dias / Banca: Gabriel Padilla / Banca: Daniel Maragno Trindade / Resumo: Vários experimentos têm comprovado que compostos naturais podem ter sua atividade biológica alterada devido à presença ou ausência de halogênios ligados. Os antibióticos glicopeptídicos, como a vancomicina e teicoplanina são produtos naturais halogenados que apresentam destacada importância. Halogenases são enzimas que catalizam a transferência de halogênios para um determinado substrato, porém são muito pouco estudadas, principalmente aquelas envolvidas na biossíntese de produtos naturais, como antibióticos glicopeptídicos, mesmo com o seu potencial de aplicação em biologia sintética. Cepas produtoras de glicopeptideos foram obtidas da coleção NRRL e crescidas em meio TSB. O DNA foi extraído e os genes de 3 diferentes halogenases (staI e staK de Streptomyces toyocaensis, composto 47934 and Orf8* de Actinoplanes teichomyceticus, Teicoplanina) foram clonados em pET28a e pET20a. Um gene sintético foi obtido para enzima ComH (biossíntese de complestatina) e clonado em pET28a. A expressão desses genes foi induzida por IPTG e a purificação se deu em colunas de afinidade e gel filtração. Foram realizados estudos biofísicos (CD e DLS da StaI), bem como modelagem molecular e ensaios de complementação para proteínas StaK e StaI. Três halogenases foram purificadas, StaI, StaK e ComH e apresentaram coloração amarela indicando a co-purificação com FAD. Orf8* apresentou-se somente na fração insolúvel. Análises de CD indicam a presença de -hélices e folhas-β e foi possível observar o estado de oligomerização e polidispersividade em diferentes condições para halogenase StaI. Os modelos moleculares deram insights sobre uma possível diferença de padrão de halogenação catalizada pela StaI e StaK, devido à diferença de resíduos hidrofóbicos que formam os sulcos do sítio ativo. Tentativas de ensaios de cristalização para as enzimas StaI, StaK e ComH foram realizadas. No entanto, apenas a... / Abstract: Various experiments have shown that natural compounds may have their biologic activity altered by presence or absence of halogens. Glycopeptide antibiotics, such as vancomycin and teicoplanin are halogenated natural products and they have substantial importance in the medicine. Halogenases, are enzymes that catalyses the attachment of halogens to a substrate, howerver they are not well understood mainly those ones in glycopeptide biosynthesis. Producing glycopeptides strains were obtained from NRRL collection, they were grown in liquid TSB medium and the DNA was extracted. Three different genes for halogenases [(staI and staK from Streptomyces toyocaensis (compound 47934) and Orf8* from Actinoplanes teichomyceticus (Teicoplanin)] were amplified and cloned into pET28a and pET20a. A synthetic gene for comH from the biosynthesis of complestatin was obtained and also cloned in the pET28a. The expression of these four genes was carried out with the induction by IPTG and the purification was performed by affinity and molecular exclusion. Samples of soluble and insoluble fractions and chromatographic peaks were analyzed on SDS-PAGE gel. Circular Dichroism (CD) and Dynamic Light Scattering (DLS) studies were performed for StaI and ComH. We have also performed molecular modelling for StaI and StaK enzymes because attempts to crystallise all the soluble halogenases did not return any result (only StaI had a single crystal which showed not reproduzible). ComH, StaI and StaK were purified and they had an yellow colour indicating the co-purification with FAD.Orf8* was predominantly insoluble. SDS-PAGE gel showed that StaI had high purity already after the affinity purification and the molecular exclusion indicates that it had a tendency to aggregate. By the analysis of CD was possible to observe the structural integrity of StaI and ComH, which shows, as expected, the presence of -helixes and β-sheets. The DLS analysis shows the oligomerization ... / Mestre