Orientador: Stephen Hyslo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T15:32:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RochaeSilva_ThomazAugustoAlvesda_D.pdf: 9683821 bytes, checksum: 9eaf69e00f5ad25d739e7f014effdaed (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A aranha Vitalius dubius pertence à família Theraphosidae, que compreende todas as caranguejeiras. Sua distribuição é restrita à região Sudeste do Brasil, principalmente em São Paulo e Minas Gerais. Trata-se de uma espécie urbana, pouco agressiva e que não apresenta registros de acidentes com relevância clínica. O presente trabalho teve como objetivo descrever o aparato venenífero e caracterizar bioquímica e farmacologicamente a peçonha desta aranha. A estrutura do aparato venenífero consiste em duas robustas quelíceras anteriores, com grandes ferrões para imobilização de presas e inoculação de peçonha. Cada quelícera é preenchida por musculatura estriada, responsável pela mobilidade dos ferrões, além de abrigar a glândula de peçonha que, por sua vez, encontra-se imersa nesta musculatura, sem estar ligada à mesma. A glândula é envolta por duas túnicas musculares helicoidais entrelaçadas, responsáveis pela contração da glândula para expulsão da peçonha através de um duto interno ao ferrão. Interna à musculatura, uma camada basal rica em elastina sustenta uma complexa rede epitelial produtora de peçonha. Este epitélio extratificado possui células anastomosadas, com núcleos periféricos e prolongamentos citoplasmáticos voltados para a luz da glândula, organizado principalmente por filamentos de actina. Estes prolongamentos formam reservatórios envolvidos na biossíntese de peçonha. A análise ultra-estrutural deste epitélio revelou a presença de organelas envolvidas na síntese protéica, como núcleo com abundante eucromatina, nucléolo, retículo endoplasmático rugoso, polissomos, além de abundantes: retículo liso, aparato de Golgi, mitocôndrias e vacúolos autofágicos. Durante a fase de produção de peçonha, as principais alterações ultra-estruturais observadas foram compactação e remodelamento do epitélio, abundância de organelas e deformidade de núcleos, bem como a presença de hemócitos nos últimos estágios. A extração de peçonha revelou que as fêmeas possuem rendimento maior, em quantidade absoluta [23,1 ± 2,3 (n=11) e 12,5 ± 0,7 (n=16) mg de peçonha/aranha/extração, para fêmeas e machos, respectivamente]. No entanto, quando a quantidade de peçonha é relacionada ao o peso do animal, os machos possuem maior índice. Além disso, as fêmeas adultas com maior peso apresentaram rendimento de peçonha menor que as mais jovens. A caracterização bioquímicofarmacológica da peçonha revelou através de eletroforese que a peçonha de V. dubius possui poucas proteínas de elevada massa molecular, mas é rica em peptídeos e pequenas moléculas. A peçonha contém bastante hialuronidase, mas é destituída de atividade proteolítica, assim como não foi observada ação hemolítica. No imunoensaio de ELISA, a peçonha apresentou reatividade cruzada com soro antiaracnídico do Instituto Butantan, preparado contra as peçonhas de Loxosceles gaucho, Phoneutria nigriventer e Tityus serrulatus. No entanto, o immunoblotting demonstrou que apenas componentes da peçonha maiores que 30 kDa foram responsáveis por esta reação. A peçonha de V. dubius (10 - 300 µg/mL) foi citotóxica para células leucêmicas em cultura e exerceu forte ação edematogênica (10 µg/sítio causou o extravasamento de 90 ± 20 µL de plasma, n = 4) em pele de ratos, mediada em parte por receptores serotoninérgicos e a formação do óxido nítrico. A peçonha não apresentou significativa toxicidade quando testada em coração semi-isolado de barata. Em músculo liso (íleo de cobaia) a peçonha não causou contratura, mas produziu uma pequena potencialização da ação da bradicinina, e o bloqueio parcial de contrações eletroestimuladas em músculo anococígeo de ratos mediado por uma ação pré-sináptica da peçonha. Em preparação de nervo frênico-diafragma de camundongo, a peçonha (80 µg/mL) bloqueou as contrações por estímulos indiretos (95 ± 6% de bloqueio em 56 ± 28 minutos, n = 3). Uma maior potência de bloqueio foi observada em preparação de biventer cervicis de pintainho, onde 25 µg/mL causou 85 ± 4% de bloqueio de contrações indiretamente estimuladas em 52 ± 6 minutos (n = 4); a peçonha também produziu contratura estável. Além disso, as respostas contráteis desta preparação à Ach e KCl foram diminuídas de forma concentração-dependente pela peçonha. O fracionamento da peçonha resultou em dois grupos de proteínas ativas e um inativo tanto no edema quanto na atividade neuromuscular. Estes dados sugerem que ao menos duas toxinas são responsáveis pelo aumento da permeabilidade vascular local. Além disso, o fracionamento da peçonha indicou a presença de, no mínimo, duas toxinas neuromusculares com ações possivelmente de antagonismo nicotínico reversível e promoção de danos à estrutura funcional muscular, respectivamente. / Abstract: Vitalius dubius is a medium-sized, non-aggressive tarantula found in southeastern Brazil. In this work, we examined the histological organization of the venom apparatus of V. dubius and investigated some biochemical and pharmacological properties of this spider's venom. The venom apparatus consisted of two chelicerae fitted with large fangs for prey immobilization and venom injection. Each chelicera contained bundles of striated muscle involved in fang movement and also housed one venom gland that was surrounded by, but unattached to, these muscle bundles. The gland was closely associated with a helicoidally arranged muscle layer responsible for gland compression and venom extrusion through an inner fang duct that opened on the anterior face of the gland. Within the gland, an elastic basal membrane attached to muscles supported the secretory epithelium. This epithelium consisted of anastomosed cells, with peripheral nuclei and cytoplasmic elongations extending towards the gland lumen in an arrangement organized mainly by F-actin filaments. These elongations supported a complex network of vesicles and cisternae involved in venom biosynthesis. Ultrastructural analysis showed an abundance of organelles involved in protein synthesis, including smooth and rough endoplasmic reticulum, Golgi apparatus, mitochondria and lysosomes. Nuclei with evident nucleoli were seen. During venom production, the main ultrastructural changes were epithelial compactation, greater organelle abundance and alterations in nuclear shape. Venom was milked regularly by electrical stimulation. In absolute terms, females yielded more venom than males [23.1+2.3 mg (n=11) versus 12.5+0.7 mg (n=16) of venom/spider/milking], although when expressed in terms of body weight, males had slightly but significantly greater yields. Venom yield decreased with successive milkings and with spider age. SDS-PAGE showed that the venom contained few high molecular mass proteins, but a variety of small molecules (peptides). The venom was devoid of proteases but contained considerable hyaluronidase activity (estimated molecular mass: 45 kDa). ELISA showed that the venom reacted with immunoglobulins from commercial anti-arachnid antivenom raised against the venoms of Loxosceles gaucho (spider), Phoneutria nigriventer (spider) and Tityus serrulatus (scorpion). Immunoblotting showed that only venom components >30 kDa were responsible for this immunoreactivity. Vitalius dubius venom had no hemolytic activity but was cytotoxic to cultured leukemic cells (up to 300 µg/mL). The venom caused potent, dose-dependent (0.1-100 µg/site) dorsal skin edema in rats that was mediated by serotonin and nitric oxide but not by bradykinin or histamine. The edema-forming activity was not neutralized by commercial anti-arachnid antivenom. The venom (100 µg) was weakly cardiotoxic in the cockroach isolated heart and did not contract non-vascular smooth muscle (isolated guinea pig ileum and rat anoccocygeus), nor did it significantly alter the contractile responses to a variety of agonists in these preparations. However, electrically-induced muscle contractures in the anoccocygeus were attenuated by co-incubation with the venom. Reversible neuromuscular blockade was seen in indirectly stimulated chick biventer cervicis preparations (10-50 µg/mL), with a less potent action in mouse phrenic nerve-diaphragm preparations (at 80 µg/mL). Attenuation of the responses to exogenous acetylcholine (110 µM) and KCl (20 mM) in avian preparations suggested that the venom affected postsynaptic nicotinic receptors and had a direct action on muscle. Marked muscle contracture was also seen with the venom. Fractionation of the venom by reverse-phase chromatography yielded three major groups of proteins, two of which produced both edema and neuromuscular blockade while the third was inactive in these assays. These findings indicate that V. dubius venom contains at least two toxins that cause edema and/or produce neuromuscular blockade. / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Vera Nisaka Solferini / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T21:43:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Peres_ElenArroyo_M.pdf: 3413124 bytes, checksum: 396b939134071fb3306c13d15c7080d9 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A Mata Atlântica e uma das mais importantes florestas tropicais do mundo e, devido a sua grande riqueza de espécies e altas taxas de endemismo, e considerada um hotspot mundial para conservação. Entretanto, o bioma tem sido intensamente devastado nos últimos 500 anos, ficando restrito a pequenos fragmentos isolados. A fragmentação do habitat pode afetar diretamente a biodiversidade, já que o tamanho dos fragmentos e a conectividade entre eles exercem grande influencia sobre a estrutura das populações. Embora não tenha efeitos previsíveis sobre a variabilidade genética das espécies, a subdivisão do habitat favorece a ação da deriva genética e, conseqüentemente, o acumulo de divergências entre as populações locais, caso o fluxo gênico entre elas seja diminuído. Assim, as conseqüências da fragmentação dependem da habilidade de migração dos indivíduos entre fragmentos, o que e influenciado pelas propriedades especificas da matriz, pela distancia entre os fragmentos e pela capacidade de dispersão de cada espécie. Sendo um grupo bastante variável quanto aos meios de dispersão, as aranhas constituem um bom modelo para o estudo da fragmentação. O objetivo deste trabalho foi investigar, por meio de PCR-RFLP do mtDNA, a variabilidade genética e estrutura populacional da aranha Araneus venatrix dentro e entre cinco fragmentos de Mata Atlântica do Estado de São Paulo, alem de inferir os prováveis processos evolutivos responsáveis pela distribuição dos haplóipos na região estudada. Foram observados altos índices de variabilidade, o que pode estar relacionado ao habito de forrageamento e comportamento social da espécie. A fragmentação do habitat parece afetar a diversidade genética, apesar de não haver correlação significativa entre tamanho do fragmento e variabilidade, sugerindo que fatores como grau de conservação dos fragmentos e conectividade entre eles também são importantes para a variabilidade genética na espécie. A forte estruturação populacional encontrada sugere que a capacidade de dispersão de A. venatrix e relativamente limitada a longas distancias, ao menos entre as fêmeas. A migração dos indivíduos também pode ter sido prejudicada pela fragmentação do habitat, já que a matriz urbano-industrial e agrícola entre os fragmentos pode ter aumentado o isolamento de algumas populações. As analises fitogeográficas não apontaram para eventos históricos de fragmentação ou expansão demográfica recente entre as populações de A. venatrix, sugerindo que a distribuição dos alótipos provavelmente se deve a restrições ao fluxo gênico entre as populações, sendo influenciada posteriormente pelos efeitos da fragmentação antropica do habitat. / Abstract: Brazilian Atlantic Forest is considered a biodiversity hotspot due to its high pecies richness and endemism. However, this biome has been intensively depleted in the last 500 years, and now the remains are found in more or less isolated patches of different sizes. Habitat fragmentation may directly affect biodiversity once patch size and connectivity play important roles in the structure of communities. Though the genetic effects of habitat subdivision cannot be predicted, it may promote random genetic drift and interpopulational divergence when gene flow is reduced or absent. Therefore, the consequences of habitat fragmentation depend on the dispersal ability of each species, which may be influenced by the properties of the surrounding matrix and the distance between fragments. Spiders are a very diverse group regarding dispersal behavior and, hence, represent a suitable model for fragmentation studies. The aim of this work was to investigate, with analysis of mtDNA PCR-RFLP, intra and interpopulational genetic variability and structure of the spider Araneus venatrix in five patches of Brazilian Atlantic Forest. We discuss the likely evolutionary processes responsible for haplotypes distribution in this region. High levels of genetic diversity were observed, which may be related to species' foraging and social behavior. Habitat fragmentation also seems to affect genetic variance, although no significant correlation between variability and patch size was found, suggesting that levels of disturbance and patch connectivity may also be important for the species genetic diversity. High levels of populational structure reveal limited dispersal ability in A. venatrix, at least among females. Migration may also be affected by fragmentation, since the urban and agroecossystem matrix could isolate some of the patches. Phylogeographic analysis did not indicate fragmentation historic events or demographic expansion in A. venatrix populations, suggesting that the distribution of haplotypes is probably due to restricted gene flow and isolation by distance, influenced by antropogenic habitat fragmentation. / Mestrado / Genetica Animal e Evolução / Mestre em Genética e Biologia Molecular

As peçonhas de artrópodos são ricas fontes de neurotoxinas, verdadeiras ferramentas moleculares com ação seletiva e específica sobre o Sistema Nervoso Central (SNC) de mamíferos, e de grande relevância clínico-científica. Demonstramos recentemente que a peçonha de P. bistriata, quando injetada por via intracerebroventricular (i.c.v.), desencadeava crises convulsivas em ratos, um indício da existência de neurotoxinas pró-convulsivantes na peçonha dessa aranha. O grupo do Prof. Dr. Joaquim Coutinho-Netto isolou da peçonha dessa aranha várias neurotoxinas, dentre as quais uma denominada PbTx 2.2.1, que possui a capacidade de inibir a captação do neurotransmissor GABA em sinaptosomas corticais de ratos (in vitro), uma ação considerada como potencialmente anticonvulsivante. As frações PbTx 2.2.1 e 1.2.3 protegem retinas de ratos após isquêmia. Mas, não se testou o efeito anticonvulsivante dessa fração em experimentos in vivo. O presente trabalho teve dois objetivos: 1- Propor um método cromatográfico para isolar da peçonha de aranhas, neurotoxinas pró-convulsivantes não protéicas e de baixo peso molecular. Isolar e caracterizar parcialmente estas neurotoxinas da peçonha da aranha P.bistriata; 2- verificar se a fração PbTx 2.2.1 possui efeito anticonvulsivante in vivo. O isolamento da peçonha de P. bistriata, realizado com filtração em gel (Sephadex G-50 e G-25), cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) (colunas de fase reversa e troca catiônica), e CLAE-acoplado a espectrometria de massa (CLAE-MS) produziu uma fração (fração 7) e um subcomponente (fração 7.1) com atividade pró-convulsivante, após injeção i.c.v. Tal fração apresenta características típicas de ácidos nucléicos. Confirmou-se, através de ressonância magnética nuclear (RMN) que o constituinte majoritário desta fração é o nucleosídeo inosina. O método cromatográfico mostrou-se muito lento. Uma outra fração (fração 6) da mesma peçonha inibiu as crises causadas por bicuculina i.c.v., ao passo que a fração 1 apresentou atividade de fosfatase ácida e alcalina. A injeção i.c.v. da fração PbTx 2.2.1, 20 min antes do convulsivante bicuculina também i.c.v., bloqueou as crises convulsivas em 71,4% dos animais, o que caracteriza um efeito anticonvulsivante in vivo desta fração. Conclui-se que: 1- A peçonha de P. bistriata possui, dentre muitas, uma fração (fração 7) com efeito pró-convulsivante quando injetada i.c.v. em ratos. Nesta fração, aparentemente o composto majoritário é o nucleosídeo inosina. A peçonha da mesma aranha possui também uma fração com atividade anticonvulsivante (fração 6) e outra com atividade de fosfatase ácida e alcalina (fração 1). 2- o método cromatográfico proposto pode ser otimizado talvez pelo uso de ultrafiltração; 3- a fração PbTx 2.2.1 apresenta efeito anticonvulsivante in vivo no modelo de indução de crises por injeção i.c.v. de bicuculina. / Arthropod venoms are rich sources of neurotoxins, molecular tools with selective and specific actions over the mamalian central nervous system with great clinical and scientific importance. Previous work of our laboratory showed that the spider venom of Parawixia bistriata, when injected by intracerebroventricular (i.c.v.) route, induced convulsive seizures in rats, a sign of convulsant neurotoxins. The group of Professor Joaquim Coutinho-Netto isolated from this spider venom a neurotoxin called PbTx 2.2.1 which is a GABA transporter inhibitor in the rat cortical synaptosomal preparation (in vitro), a potencially anticonvulsant property. The fractions PbTx 2.2.1 and 1.2.3 protected retinal cells against isquemy. But, it has not been tested if the PbTx 2.2.1 fraction also has an in vivo anticonvulsant action. Present work has two objectives: 1- to propose a chromatographic methodology to isolate non-proteic low molecular weigh convulsant neurotoxins from spider venoms. Isolate and partially characterize these neurotoxins from P. bistriata venom; 2- test if PbTx 2.2.1 has in vivo anticonvulsant effect. Biochemical venom isolation by gel filtration (Sephadex G-50 and G-25), reverse phase and cationic exchange in high pressure liquid cromatography (HPLC) and also HPLC coupled to mass spectrometry (HPLC-MS), has pointed that the P. bistriata spider venom has a fraction (fraction 7) and a subfraction (7.1) with convulsant activity when injected i.c.v. in rats. Fraction 7 has nucleosidic characteristics. Nuclear magnetic ressonance (NMR) has showed that the principal component of this fraction is the nucleoside iosine. An other fraction (fraction 6) isolated from the same venom, inhibited seizures induced by i.c.v. bicuculine and the fraction 1 showed acid and basic phosphatase activity PbTx 2.2.1, when injected i.c.v. 20 min prior to the convulsant bicuculline (i.c.v.), has blocked seizures in 71.4 % of the animals, what was considered an anticonvulsant effect. The conclusions are: 1- the spider venom of P. bistriata has a fraction (fraction 7) with convulsant action when injected i.c.v. in rats. The major component of this fraction is the nucleoside iosine. This spider venom also has another fraction (fraction 6) with anticonvulsant activity and one with acid and alcaline phosphatase (fraction 1); 2- the chomatographic methodology can be improved, perhaps by ultrafiltration methods; 3- the PbTx 2.2.1 fraction has anticonvulsant effect in vivo.

Titanoecidae foi proposta por Lehtinen para agrigar cinco gêneros: Titanoeca Thorell (31 spp.), Nurscia Simon (4 spp.), Goeldia Keyserling, (8 spp.), Pandava Lehtinen (2 spp.) e Anuvinda Lehtinen (1 sp.). A família é diagnosticada pela presença de uma dobra dorso-apical complexa na tíbia do palpo dos machos e recentes hipóteses filogenéticas reportam seu parentesco com Phyxelididae, porém as relações internas na família permanecem desconhecidas. Realizamos uma análise cladística com 92 caracteres morfológicos e baseada em parcimônia para Titanoecidae e revisamos os gênero Anuvinda e Goeldia. O grupo-interno contém 32 táxons terminais, incluindo as espécies-tipo dos gêneros, e totalizando 15 espécies de Goeldia, 6 de Titanoeca, 4 de Nurscia, uma de Anuvinda e uma de Pandava. Como grupo-externo foram utilizadas espécies de Phyxelididae (3 spp.) Amaurobiidae (1sp.) Tengellidae (1 sp.) Zoropsidae (1sp.) e de Nicodamidae (2 sp.). Os resultados mostram que Titanoecidae pode ser divididade em dois clados: um formado por Goeldia e Anuvinda como grupo-irmão de Pandava aqui denominado Goeldinae subfam. nov. e outro formado por Titanoeca e Nurscia chamsdo Titanoecinae, Lehtinen, 1967. A revisão de Goeldia revelou sete espécies novas para Brasil (4), Colômbia (1) e Peru (1). Titanoeca guayaquilensis do Equador é transferida para Goeldia Geoldia guayaquilensis comb. nov. e pela primeira vez são descritos o macho de G. nigra e a fêmea de G. guayaquilensis. / The family Titanoecidae was proposed by Lehtinen to include five genera: Titanoeca Thorell (31 spp.), Nurscia Simon (4 spp.), Goeldia Keyserling, (8 spp.), Pandava Lehtinen (2 spp.) and Anuvinda Lehtinen (1 sp.). The family is diagnosed by the presence of a complex dorso-apical fold on the tibia of the male palp. Recent phylogenetic analyses point towards a close relationship between Titanoecidae and Phyxelididae but knowledge on the relations between its genera and species remain uncertain. A cladistic analysis for Titanoecidae was carried out based on parsimony and using 92 morphological characters. The in-group comprised 32 taxa, including the type species of all genera plus 15 species of Goeldia, six Titanoeca, four Nurcia, one Anuvinda and one Pandava. The out-group included species of Phyxelididae (3 spp.) Amaurobiidae (1sp.) Tengellidae (1 sp.) Zoropsidae (1sp.) and Nicodamidae (2 sp.).Results show that Titanoecidae is a monophyletic group and can be divided in two major clades: one including Goeldia and Anuvinda sister to Pandava, herein denominated Goeldinae subfam. nov. and the other, Titanoecinae Lehtinen, including Titanoeca and Nurscia. Based on the results of the cladistic analysis Titanoeca guayaquilensis, from Ecuador, is transferred to Goeldia. In addition The genera Anuvinda and Goeldia are revised. The male of Goeldia nigra and the female of G. guayaquilensis are described for the first time and seven species of Goeldia are newly described: four from Brazil, one from Colombia and one from Peru.

Orientador: Maria Alice da Cruz Höfling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T19:45:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Stavale_LeilaMiguel_M.pdf: 25008584 bytes, checksum: 8754f8fc3865217986eb0137679176e9 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O veneno da aranha Phoneutria nigriventer (PNV), também conhecida como aranha armadeira, é uma mistura complexa de peptídeos com ação neurotóxica em alguns canais iônicos. No sistema nervoso central (SNC) alguns peptídeos do PNV causam permeabilização da barreira hematoencefálica (BHE) e interferem na liberação de neurotransmissores. A BHE, embora essencial para a manutenção da homeostase do SNC, pode representar uma barreira muito restritiva para o acesso de drogas terapêuticas ao microambiente neural. O entendimento dos mecanismos associados à disfunção da BHE é relevante do ponto de vista científico e médico. O objetivo do estudo foi investigar alguns mecanismos envolvidos na neurotoxicidade do veneno da Phoneutria nigriventer em ratos Wistar (Rattus norvegicus). Para esse fim, o efeito vasogênico causado pela neurotoxicidade do veneno no cérebro, foi examinado através da avaliação da expressão de aquaporina 4 (AQP4), uma proteína formadora dos canais de água e abundantemente localizada nos pés astrocitários perivasculares e relacionada com o aparecimento de edema no cérebro. A análise da expressão da proteína foi feita por imunohistoquímica e western blotting e a expressão de RNAm por PCR em tempo real no cerebelo e hipocampo de animais neonatos (14 dias) e adultos (8 semanas). Os resultados obtidos mostraram aumento da expressão de AQP4 e seu RNAm nos animais envenenados, que entretanto foi variável em função do tempo de envenenamento (2, 5 ou 24 h), da região do cerebelo ou hipocampo examinada e da idade dos animais. Os resultados mostraram também intensa marcação anti-AQP4 ao redor de vasos com edema perivascular ou não, como também entre os corpos neuronais e seus prolongamentos. Concluímos que a AQP4 tem papel nas alterações de volume dos astrócitos perivasculares e na formação e resolução do edema ao redor da BHE causado pelo PNV. A dinâmica da expressão da AQP4 no cerebelo e hipocampo em função do tempo, região e idade dos animais sugere a existência de fatores intrínsicos que modulam diferencialmente a funcionalidade da BHE em função do microambiente local. A compreensão dos mecanismos envolvidos no envenenamento por PNV pode contribuir para o desenvolvimento de ferramentas úteis para a intervenção clínica, bem como pode ser relevante para o entendimento dos mecanismos relacionados ao funcionamento da BHE e de proteínas envolvidas na formação de canais de água, como a AQP4 / Abstract: The Phoneutria nigriventer spider venom (PNV), also known as armed-spider, is a complex mixture of ion channels-acting peptides which exhibit neurotoxic action. In the central nervous system (CNS), PNV-containing peptides cause permeabilization of the blood-brain barrier (BBB) and interfere with neurotransmitter release. The BBB, although essential for the maintenance of homeostasis of the CNS, may represent a very restrictive barrier for the access of therapeutic drugs into the neural microenvironment. The understanding of BBB impairment-associated mechanisms are of scientific and medical importance. The aim of this study was to investigate some of the mechanisms involved in the neurotoxicity caused by Phoneutria nigriventer venom in Wistar rats (Rattus norvegicus). To this end, the vasogenic effect caused by the venom neurotoxicity in the brain was examined by evaluating the expression of aquaporin 4 (AQP4), a water channel forming protein abundantly expressed in perivascular astrocytic endfeet processes and associated to the formation and resolution of edema in the brain. The analysis of AQP4 expression was assessed in the cerebellum and hippocampus of neonate (14 day-old) and adult rats (8 week-old) through immunohistochemistry and western blotting, and the expression of mRNA by Real Time-PCR. The results showed increases of AQP4 expression and its mRNA in the envenomed animals, which though showed time- (2, 5 or 24h), regional- (regions of the cerebellum and hippocampus examined) and age-associated differences. Marked anti-AQP4 labeling was found around vessels with or without edema and among the neuron bodies and their processes. We conclude that AQP4 has a role in the volume alterations of the perivascular astrocytes and in the formation and resolution of edema around the BBB induced by PNV. The variability of the dynamics of AQP4 expression in the cerebellum and hippocampus in function of the time, region and animals age suggests the existence of intrinsic factors that modulate the BBB functionality depending on the molecular biology dynamics of the local microenvironment. The understanding of the mechanisms involved in the envenomation by PNV can contribute to the development of useful tools for clinical intervention, and may be relevant for understanding the mechanisms related to the functioning of the BBB and proteins involved in the formation of water channels, such as AQP4 / Mestrado / Histologia / Mestra em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Maria Alice Cruz-Hofling, Carla Beatriz Collares Buzato / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:42:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maluf_LucianaLeSueur_D.pdf: 4903601 bytes, checksum: e268232610cdb57ab9b546daa40ae6cc (MD5) Previous issue date: 2004 / Doutorado

Orientador : Edgard Ferro Collares / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-13T21:44:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bucaretchi_Fabio_M.pdf: 1987105 bytes, checksum: 0b16fba8eea5d2003dcf03bf89feecc1 (MD5) Previous issue date: 1990 / Resumo: Foram analisados os prontuários de 398 pacientes picados por escorpiões das espécies T. bahiensis (58,05%) e T. serrulatus (10,3%), e por aranhas do gênero Phoneutrta (31,75%), atendidos no CCI-HC-UNICAHP, no período de janeiro de 1984 a julho de 1988, com objetivo de avaliar as principais diferenças clínicas e epidemiológicas dos acidentes determinados por esses animais. Constatou-se que a maioria dos acidentes ocorreu dentro das residências, havendo diferenças entre os agentes quando analisou-se a distribuição quanto aos meses do ano, períodos do dia e geográfica, na Região Administrativa de Campinas. Os limites de idade variaram de 3 meses a 85 anos, e a faixa etária mais acometida, dividida em intervalos de 5 anos, foi de crianças com até 10 anos de idade. Predominaram os acidentes no sexo masculino, e, quanto ao segmento anatômico picado, verificou-se que a maioria ocorreu nas extremidades, sendo os determinados por escorpiões principalmente nas mãos e pela Phoneutría sp nos pés. Quanto à sintomatologia, foram mais freqüentes os sintomas locais, principalmente a dor. Utilizando-se uma classificação clínica de gravidade, comum aos três agentes, dividida em 4 estádios; ASSINTOMÁTICO, LEVE, MODERADO e GRAVE, pôde se constatar que, os acidentes foram significativamente mais graves quando os agentes foram T, serrulatu. e Phoneutria .p e em crianças com até 10 anos de idade / Abstract: The medical records of 398 patients attended at the Center for In toxication Control (CCI) \ HC-UNICAHP, victim of scorpion (T. bahinsis.-58,0% and T. Serralus-10,3%) or Phoneutria sp spider sting (31,7), from January 1984 to July 1988, were analysed in order to evaluate the clinical and epidemiological differences among the accidents caused by the these animals. It was found that the majority of the accidents occurred inside the residence, and that the three agents behaved differently when geographical, monthly and diurnal distribution of the accidents was considered. The age of the patients varied from 3 month to 85 years. The accidents occurred preferentially in children up to 10 years of age and in male patients. Host of the accidents involved the extremities , mainly the hands when caused by scorpions and the feet when Phoneutrta sp was the agent. As to the clinical picture, local symptoms were more frequent specially local pain. Using an unified classification of clinical grading from ASSYHPTOHATIC, HILD,HODERATE and SE VERE it was found that the accidents were significantly more serious in children up to 10 years or when T. Serrulatus or Phcneutria sp were the causing agents / Mestrado / Mestre em Ciências Médicas

Spiders and scorpions are efficient predators arachnid (PA) consuming preys larger than themselves. Few studies reported, molecularly, the digestion in PA. This work describes a biochemical, transcriptomic and proteomic analysis of the midgut and midgut glands (MMG) and digestive juice (DJ) from Nephilengys cruentata and Tityus serrulatus MMG. Cathepsin L, B, D and F, legumain, trypsin, astacin, carbohydrases and lipases were identified by these approaches. Peptide isomerase and ctenitoxins, which are venom proteins were identified, showing a correlation among digestive and venom enzymes. Summarily, PA relies in multi peptidase system mainly constituted of astacins for extracellular prey liquefaction and cathepsin L for intracellular digestion, describing a molecular model for digestion. Probably, during evolution, gene duplication led a diversification of astacins in the derived groups of Arachnida, like spiders, distinctly from what is observed in basal groups like scorpions. These data on Arachnida digestion will allow detailed multi disciplinary studies. / Aranhas e escorpiões são aracnídeos predadores eficientes (AP) consumindo presas maiores que eles mesmos. Poucos estudos descrevem molecularmente a digestão em AP. Neste trabalho caracterizamos bioquimicamente, por transcriptoma e proteoma o intestino e glândulas digestivas (IGD) e suco digestivo (SD) de Nephilengys cruentata e o IGD de Tityus serrulatus. Catepsinas L, B, D e F, legumaína, tripsinas, astacinas, carboidrases e lipases foram identificadas. Peptídeo isomerase e ctenitoxina foram identificadas no IGD. Estas proteínas podem indicar uma correlação entre enzimas digestivas e do veneno. Portanto, AP apresentam várias peptidases principalmente astacinas para liquefazer a presa extraoralmente e catepsinas L para digestão intracelular, descrevendo um modelo molecular para a digestão. Provavelmente, durante a evolução, eventos duplicação gênica levaram à diversificação das astacinas aracnídeos derivados, como as aranhas, diferentemente dos grupos basais, como os escorpiões. Estes dados sobre a digestão em Arachnida permitirão estudos multidisciplinares.

Orientador: William Ricardo Amancio Santana / Resumo: O gênero anfi-americano Macrocoeloma Miers, 1879 é composto por caranguejos decoradores de habitats tropicais e subtropicais. Esses caranguejos são encontrados em substratos distintos, incluindo principalmente recifes de corais e rochas. Esse gênero passou por várias alterações sistemáticas em seu status de família, desde sua descrição original até a sua recente exclusão de Mithracidae. No início deste estudo Macrocoeloma era considerado incertae sedis, devido ao pouco conhecimento das relações entre as espécies do gênero e outros gêneros relacionados, sendo sua revisão taxonômica sugerida diversas vezes na literatura. Assim, com o objetivo de suprir essas lacunas taxonômicas e filogenéticas, este estudo empregou abordagens morfológicas e moleculares para reconstruir as relações filogenéticas de Macrocoeloma. Para isso, utilizamos um conjunto de dados moleculares combinados de um gene nuclear (18S) e três mitocondriais (12S, 16S, COI), usando máxima verossimilhança e inferência bayesiana. Além disso, uma inferência de delimitação de espécies foi realizada com o modelo de Poisson tree processes (PTP), usando a filogenia de máxima verossimilhança do gene mitocondrial COI. Foi realizada a revisão taxonômica de Macrocoeloma, com diagnóstico elaborado, descrições detalhadas e mapas de distribuição geográfica com base no material examinado. A monofilia de Macrocoeloma foi demonstrada, após exclusão de Pericera heptacantha Bell, 1836 e P. septemspinosa Stimpson, 1871. O gênero monot... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The amphi-American genus, Macrocoeloma Miers, 1879, is composed of decorator crabs from tropical and subtropical regions. These crabs are found on distinct substrates, including mainly coral reefs and rock. Macrocoeloma has undergone several systematic changes in its family status, since the original description until its recent exclusion of Mithracidae. Prior to this study, Macrocoeloma was considered incertae sedis, due to little knowledge of the relationships between species of the genus and related genera, and its taxonomic revision has been suggested several times in the literature. Thus, in order to address these taxonomic and phylogenetics gaps, this study employed morphological and molecular approaches to reconstruct the phylogenetic relationships of Macrocoeloma. We used a combined molecular dataset of a nuclear (18S) and three mitochondrial genes (12S, 16S, COI) using Maximum Likelihood and Bayesian Inference. In addition, the inference of species delimitation was performed with the Poisson tree processes model (PTP), using Maximum Likelihood phylogeny of the mitochondrial COI gene. The taxonomic revision of Macrocoeloma was provided with elaborated diagnosis, detailed descriptions and maps of geographic distribution based on examined material. The monophyly of Macrocoeloma was demonstrated after exclusion of Pericera heptacantha and P. septemspinosa. The monotypic genus Thersandrus Rathbun, 1897 is a sister group of Macrocoeloma, followed by the new genus proposed ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Filipe dos Santos (fsantos@pucsp.br) on 2018-03-19T12:20:17Z No. of bitstreams: 1 Idê Moraes dos Santos.pdf: 3990015 bytes, checksum: 272dc61d4a5d56ddcef3d0d8a24c4fed (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-19T12:20:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Idê Moraes dos Santos.pdf: 3990015 bytes, checksum: 272dc61d4a5d56ddcef3d0d8a24c4fed (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Fundação São Paulo - FUNDASP / In this study, through documentary analysis, we investigated the teaching of Portuguese Language taught at the Oswaldo Aranha Vocational College. We observed that this educational institution, as early as the 1960s, provided its students with content and activities that valued reflexive thinking geared to the social action of the individual and to the transforming action of a given context, central aspects in the current documents that direct the teaching of Portuguese Language, as is the case of National Curricular Parameters. Motivated to deepen the understanding about the educational context of the Vocational Colleges, and particularly of the Oswaldo Aranha Vocational College, we established two objectives: to analyze the essays of students and documents, such as planning, reports, teacher evaluations, student self- assessments, to verify as was the teaching of Portuguese in the context of this school and establish possible relations between what guide the National Curriculum Parameters of Portuguese Language of elementary education and the Portuguese language teaching taught at the Oswaldo Aranha Vocational College. In order to proceed to this study, we align with the postulates of Koerner (1996), in the area of Linguistic Historiography, related to the principles of contextualization, immanence and adequacy. We found that the Portuguese language had a preponderant role in student development in all areas of knowledge and that through the proposed activities, carried out in groups or individually, the student was led to develop an accurate critical sense and a remarkable capacity for expression, oral and written, even in the first years of school. The research carried out indicates that it is important to seek a more comprehensive and in-depth understanding of Portuguese language teaching in Vocational Colleges, even to understand more clearly the guidelines that guide current teaching, its future implications and possible ways to promote improvements / Neste estudo, por meio da análise documental, investigamos o ensino de Língua Portuguesa ministrado no Colégio Vocacional Oswaldo Aranha. Observamos que essa instituição de ensino, já na década de 1960, proporcionava a seus alunos conteúdos e atividades que valorizavam o pensamento reflexivo voltado à ação social do indivíduo e à ação transformadora de um dado contexto, aspectos centrais nos atuais documentos que direcionam o ensino de Língua Portuguesa, como é o caso dos Parâmetros Curriculares Nacionais. Motivados a aprofundar o entendimento acerca do contexto educacional dos Colégios Vocacionais, e particularmente do Colégio Vocacional Oswaldo Aranha, estabelecemos dois objetivos: analisar as redações dos alunos e documentos, como planejamentos, relatórios, avaliações do professor, autoavaliações dos estudantes, a fim de verificar como se dava o ensino de Língua Portuguesa no contexto dessa escola e estabelecer possíveis relações entre o que orientam os Parâmetros Curriculares Nacionais de Língua Portuguesa do ensino fundamental e o ensino de Língua Portuguesa ministrado no Colégio Vocacional Oswaldo Aranha. De modo a procedermos a esse estudo, alinhamo-nos com os postulados de Koerner (1996), na área da Historiografia Linguística, relacionados aos princípios da contextualização, da imanência e da adequação. Constatamos que a Língua Portuguesa tinha papel preponderante no desenvolvimento do estudante em todas as áreas de conhecimento e que, por meio das atividades propostas, realizadas em grupo ou individualmente, o aluno era levado a desenvolver um acurado senso crítico e uma notável capacidade de expressão, oral e escrita, ainda nos primeiros anos escolares. A investigação realizada indica ser relevante buscar um entendimento mais abrangente e aprofundado acerca do ensino de Língua Portuguesa ministrado nos Colégios Vocacionais, até mesmo para compreendermos mais claramente as diretrizes que pautam o ensino atual, suas implicações futuras e possíveis caminhos para promover melhorias