Orientador: Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T11:05:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Calmasini_FabianoBeraldi_M.pdf: 937196 bytes, checksum: e7b4d280e06537641c107fb45b2ceb67 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A próstata é densamente inervada pelo sistema nervoso autônomo simpático, parassimpático e não-adrenérgico não-colinérgico (NANC) os quais atuam sinergicamente para o correto funcionamento deste órgão. O principal representante da inervação NANC é o óxido nítrico (NO), porém sua função na próstata ainda não está bem definida. Sendo assim, o presente trabalho utilizou o modelo de inibição crônica da NO sintase (NOS) com L-NAME para avaliar possíveis alterações funcionais, morfológicas e bioquímicas da musculatura lisa prostática (MLP) em ratos adultos Wistar (200-250 g). Os ratos foram tratados por 4 semanas com L-NAME na dose de 20 mg/kg/dia através de ingesta hídrica. Especificamente, realizamos os seguintes experimentos na próstata dos ratos controles e tratados com L-NAME: 1) curvas concentração-efeito in vitro à fenilefrina (agonista ?1-adrenérgico) e ao carbacol (agonista muscarínico não seletivo), na presença e ausência do inibidor seletivo da rho-quinase Y27632 (1 uM), e curvas concentração-efeito ao agonista purinérgico, ?,?-metileno ATP, e à estimulação elétrica (contração neurogênica); 2) curvas concentração-efeito a agentes relaxantes como nitroprussiato de sódio (doador de NO), Y27632 (inibidor da rho-quinase) e isoproterenol (agonista ?-adrenérgico); 3) determinação dos níveis de AMPc e GMPc; e 4) análise histomorfométrica. A próstata dos animais tratados cronicamente com L-NAME apresentou aumento em seu peso relativo, alterações histomorfométricas caracterizadas como aumento na área epitelial e na muscular lisa e diminuição no índice de contorno dos ácinos. A contração da MLP induzida pela fenilefrina, carbacol, ?,?-metileno ATP e estímulo elétrico foi maior nos animais tratados cronicamente com L-NAME em relação aos animais controle. A incubação in vitro com o inibidor da rho-quinase, Y27632, restaurou ao nível controle as contrações aumentadas induzidas pela fenilefrina e carbacol no grupo L-NAME. O relaxamento da MLP nos animais do grupo L-NAME produzido pelo isoproterenol foi significativamente menor comparado ao grupo controle. Não houve diferença para o relaxamento induzido pelo SNP e Y27632 entre os grupos. Os níveis de AMPc e GMPc na próstata dos animais tratados cronicamente com L-NAME foram significativamente menores em relação aos animais do grupo controle. O tratamento com L-NAME não alterou os níveis das espécies reativas de oxigênio. Em suma, nossos dados mostram que a inibição crônica de NO leva a alterações funcionais in vitro da MLP caracterizadas por aumento na resposta contrátil à fenilefrina, carbacol, ?,?-metileno ATP e ao estímulo elétrico, além de redução no relaxamento ?-adrenérgico. A inibição da via da rho-quinase in vitro restaurou os padrões contráteis para os agonistas adrenérgicos e colinérgicos. A deficiência crônica de NO gera alterações funcionais, bioquímicas e morfológicas em próstata de ratos com participação da via da rho-quinase nesse processo / Abstract: The prostate is densely innervated by the sympathetic and parasympathetic as well as non-adrenergic non-cholinergic (NANC) autonomic innervation that act synergistically for its correct functioning. The main NANC mediator is nitric oxide (NO), but the role of this mediator in the regulation of prostate smooth muscle (PSM) is not well established. Thus, the present study used the model of chronic NOS inhibition with L-NAME to evaluate the functional, morphological and biochemical alterations in PSM of Wistar adult male rats (200-250 g). Rats were treated with L-NAME (20 mg/kg/day) for 4 weeks in the drinking water. Specifically, we performed the following experiments in prostates from control and L-NAME-treated rats: 1) in vitro concentration-response curves to phenylephrine (?1-adrenergic agonist) and carbachol (non-selective muscarinic agonist) in the presence and absence of the selective rho-kinase inhibitor Y27632 (1 ?M) and concentration-response curves to the purinergic agonist ?-?-methylene-ATP, as well as electrical stimulation (neurogenic contraction); 2) in vitro concentration-response curves to the relaxing agents sodium nitroprusside (NO donor), Y27632 (rho-kinase inhibitor) and isoproterenol (non-selective ?-adrenergic receptor agonist); 3) determination of cAMP and cGMP levels, and 4) histomorphometric analysis. The relative weight of the prostate from L-NAME-treated rats was greater than control animals. Histomorphometric changes characterized by an increase in epithelial acini and smooth muscle area, as well as by a decrease in luminal contour índex were found in L-NAME treated rats. The phenylephrine and carbachol-induced prostate contractions were higher in L-NAME compared with control group. Prior incubation of PSM with the rho-kinase inhibitor Y27632 (1 ?M) significantly inhibited the enhanced carbachol- and phenylephrine-induced PSM contractions in L-NAME group, restoring the Emax to control levels. The PSM contractions induced by ?,?-methylene ATP and electrical field stimulation were also greater in L-NAME compared with control group. The PSM-induced relaxations in response to SNP remained unaltered, whereas isoproterenol-induced relaxations were lower in L-NAME compared with control group. The cAMP and cGMP levels in prostate homogenate were lower in L-NAME compared with control group. No difference was found in reactive oxygen species levels. In summary, our data showed that chronic NO inhibition led to in vitro functional changes in PSM characterized by increased contractile response to phenylephrine, carbachol, ?-?-methylene-ATP and electrical-field stimulation, accompanied by reduction of ?-adrenergic-induced relaxation. The in vitro inhibition of rho-kinase pathway restored the contractile pathway for the adrenergic and cholinergic agonists. The chronic NO-deficiency generates functional, biochemical and morphological changes in rat prostate with involvement of the rho-kinase pathway in this process / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia

A doença renal crônica (DRC) tem sido considerada um problema de saúde pública mundial. Estima-se que cerca de 17% da população adulta dos EUA apresente algum grau de comprometimento da função renal. No Brasil, um estudo realizado na cidade de Bambuí - Minas Gerais detectou-se alteração da função renal variando de 0,48% a 8,19%, sendo mais frequente nos pacientes idosos. Os pacientes que evoluem para DRC terminal necessitam de algum tipo de terapia renal substitutiva (TRS), sendo as opções disponíveis: a hemodiálise (HD), a diálise peritoneal (DP) e o transplante renal (TX renal). No caso da DP, a membrana peritoneal realiza a função de filtrar o sangue do paciente, e esta é utilizada através da implantação de um cateter na cavidade abdominal. No Brasil, segundo dados do Censo Brasileiro de Diálise (2016) existem aproximadamente 122.825 pacientes em diálise, sendo 8,6% em DP. O objetivo do estudo foi analisar a evolução dos pacientes que foram admitidos na Unidade de Diálise do HCFMRP para submeterem-se à DP nos últimos 22 anos. Os dados foram coletados dos prontuários dos pacientes atendidos no período de 1993 a 2015, de onde foram extraídas variáveis demográficas, clínicas e laboratoriais. É um estudo de coorte retrospectiva de 199 prontuários de pacientes atendidos na Unidade de Diálise do HCFMRP-USP. Os resultados demonstram que a população do estudo é em sua maioria do sexo feminino, com média de idade 57 anos. Foi encontrada a mudança de TRS para a hemodiálise como desfecho clínico mais frequente, seguida por óbito. A etiologia da DRC mais frequente foi a hipertensão arterial sistêmica (HAS), seguida por Diabetes mellitus (DM) tipo 2. Houve associação com menor média de idade de entrada em programa (48 anos), desfecho clínico óbito e maior tempo de seguimento (10 anos) com o grupo de pacientes que entraram em programa de diálise em 1993 (p<0,05). Encontramos associação do uso de medicamentos (Cloridrato de Sevelamer e Análogos da vitamina D3 com níveis categorizados de paratormônio, cálcio total e fósforo (p<0,05). CONCLUSÃO: Os pacientes que entraram em programa no período de 1993-2000 apresentaram menor média de idade e maior tempo de acompanhamento quando comparados aos demais grupos. O desfecho clínico mais frequente foi a transferência para HD, tendo como causa principal a ocorrência de peritonites. / INTRODUCTION: Chronic kidney disease (CKD) has been considered a worldwide public health problem, as well as the progressive increase of the population in renal replacement therapy (TRS). With the technological advances accumulated, the survival of patients on dialysis has increased greatly. Peritoneal dialysis (PD) is considered a safe and effective method of SRT, a challenge for the binomial patienthealth team. OBJECTIVES: To analyze the main characteristics and outcomes of patients in a PD program. METHODS: This was a retrospective cohort study of 199 patients submitted to PD in the Dialysis Unit of the HCFMRP-USP from 1993 to 2015. The primary source of data was the individual medical records. The variables were classified as: demographic, clinical and laboratorial. Statistical analyzes were performed using the Chi-square test, ANOVA and Kruskal Wallis. RESULTS: The mean age of the patients was 57 years, with a predominance of females (51.5%); the most frequent clinical outcome was the change in HRT for hemodialysis (37.2%). Type 2 diabetes mellitus (DM) was the most common cause of CKD (31,7). There was an association between lower mean age of program entry, clinical outcome and longer follow-up (10 years) in the group of patients who entered the dialysis program in the period from 1993 to 2000 (p <0.05). There was an association between the use of medications (Sevelamer\'s Hydrochloride and vitamin D3 analogues) with categorized values of parathormone, total calcium and phosphorus (p <0.05). CONCLUSION: Patients who entered the program in 1993-2000 had a lower mean age and longer follow - up when compared to the other groups. The most frequent clinical outcome was the transfer to HD, the main cause being the occurrence of peritonitis.

O transtorno do espectro autista (ASD) é uma doença clinica e geneticamente heterogênea, com mecanismo etiológico ainda pouco conhecido. Assim, os principais objetivos deste trabalho foram descrever as características clínicas e genéticas de pacientes brasileiros com ASD, bem como determinar o risco de recorrência e a herdabilidade. Verificamos que a maioria das comorbidades avaliadas tem prevalência similar àquelas anteriormente descritas. A hipotonia exibiu maior prevalência no sexo feminino. A ausência de fala apresentou prevalência significativamente maior no grupo de pacientes com comorbidades, sendo que a gravidade da fala foi positivamente correlacionada com a presença das crises convulsivas. A herdabilidade estimada foi de 76% e o risco de recorrência ~5%. As alterações citogenéticas e os casos positivos para a Síndrome do X-Frágil explicaram cerca de 8% dos casos de ASD da nossa amostra. As CNVs nas regiões estudadas foram detectadas em 2,7% da amostra. Nós verificamos que há penetrância incompleta do ASD para as regiões. O estudo mais detalhado dos dois casos de duplicação da região 15q13.3, envolvendo somente o gene CHRNA7, mostrou que um dos pacientes (F5240) exibiu uma segunda CNV, possivelmente patogênica. A análise in silico sugeriu que genes que interagem diretamente com o CHRNA7 podem conter mutações patogênicas e, juntamente com a duplicação do 15q13.3, possivelmente estão envolvidos na etiologia do ASD. Este estudo mostrou que é necessário fazer uma ampla caracterização genética dos pacientes, para possibilitar o estudo dos possíveis mecanismos moleculares envolvidos na causa do ASD / Autism Spectrum Disorder (ASD) is a clinically and genetically heterogeneous disease and its etiological mechanisms are still poorly understood. The main objectives of this study were to describe the clinical and genetic features of Brazilian patients with ASD, and to determine the recurrence risk and heritability. Great part of the comorbidities assessed here had comparable prevalence to those of previous works. The hypotonia was significantly prevalent in the female sex. Absent speech was significantly more frequent in patients with comorbidities, and severity of speech problems was positively correlated with presence of seizures. Heritability was estimated as 76% and the recurrence risk as approximately 5%. Cytogenetic alterations and positive results for Fragile X Syndrome explain about 8% of the ASD etiology of our sample. The CNVs at the chromosomal regions 15q11-q13, 16p11.2 and 22q13 were present in 2.7% of the sample. Incomplete penetrance of ASD was observed for the 16p and 15q regions. Further investigation of the two cases with duplication of the region 15q13.3, involving only the CHRNA7 gene, revealed that one of them (F5240) exhibited a second possible pathogenic CNV. In silico analysis suggested that genes interacting directly with the CHRNA7 could harbor pathogenic mutations and, together with the duplication at 15q13.3, could be involved in the ASD etiology. This study showed the necessity of a broad genetic characterization of patients with ASD, to enable the elucidation of possible molecular mechanisms related to ASD etiology

Submitted by Rosana Moreira (rosanapsm@outlook.com) on 2018-09-28T18:40:26Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_GeologiaGeoquimicaIsotopica.pdf: 64951486 bytes, checksum: bae4ce844a5cbb52769e647aeaf8f959 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2018-10-01T12:45:50Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_GeologiaGeoquimicaIsotopica.pdf: 64951486 bytes, checksum: bae4ce844a5cbb52769e647aeaf8f959 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-01T12:45:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_GeologiaGeoquimicaIsotopica.pdf: 64951486 bytes, checksum: bae4ce844a5cbb52769e647aeaf8f959 (MD5) Previous issue date: 1996-12-27 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A região de Monte do Carmo localiza-se na porção centro-leste do estado do Tocantins e comporta em seu quadro geológico rochas da Suíte Lajeado, rochas vulcânicas ácidas, metassedimentos do Grupo Natividade e sedimentos de idades Fanerozóicas. Ocorrem ainda veios de quartzo portadores de mineralizações auríferas com diversos sulfetos associados cortando o Granito Lajeado, as vulcânicas e os metassedimentos do Grupo Natividade. A norte da cidade de Monte do Carmo ocorrem rochas vulcânicas ácidas representadas por riolitos, dacitos, riodacitos e piroclásticas ácidas. Esta unidade foi analisada através método Pb-Pb por evaporação em zircões da qual se obteve urna idade de 2138 ± 11 Ma (2a), também interpretada como a época de cristalização. A Suíte Lajeado, que aflora na região imediatamente a sul de Monte do Carmo, é constituída por granitos, granófiros bem como anfibólio granitos e leucogranitos subordinados. Zircões deste corpo foram analisados através do método Pb-Pb e forneceram uma idade de 2025 ± 26 Ma (2a). Este resultado foi interpretado como a época de cristalização do Granito Lajeado visto que as amostras analisadas eram provenientes de porções não deformadas do granito. Estas duas unidades são seccionadas por zonas de cisalhamento de dimensões métricas orientadas normalmente segundo a direção N-S, as quais comportam veios de quartzo acompanhados de mineralizações auríferas e fases sulfetadas. Nas rochas encaixantes são observadas marcantes modificações mineralógicas e texturais como recristalização, hidratação e neoformação de minerais. Amostras destes filonitos encaixantes foram analisadas através do método Rb-Sr e forneceram uma idade de 565 ± 43 Ma (2a). Com base em dados geológicos regionais que mostram a existência de magmatismo e tectonismo durante este período, bem como a intensa transformação a que foram submetidas as rochas analisadas interpretou-se este resultado como sendo a época da transformação das rochas. Conseqüentemente, obteve-se a época de implantação das zonas de cisalhamento e mineralizações associadas. Dentre os sulfetos que acompanham as mineralizações tem-se principalmente a galena e a pirita. Estes sulfetos foram analisados através do método Pb-Pb em minerais e forneceram composições isotópicas compatíveis com urna evolução durante o Proterozóico Superior a partir de fontes do Paleoproterozóico. A análise microtermométrica das inclusões dos veios de quartzo revelou a presença de dois fluidos distintos. Um fluido de composição carbônica a aquo-carbônica de baixa salinidade aprisionado nos estágios iniciais de formação dos veios a temperatura entre 250°C e 350°C a uma pressão de 2 a 3 Kbars. Com a evolução das zonas de cisalhamento os fluidos passaram a ser aquosos e mais salinos (equivalente em peso de NaCl superior a 22%) com a presença dos cátions Na, Ca que foram aprisionados a temperaturas entre 150°C e 200°C. Na área do Morro do Lajeado, localizado a cerca de 10Km de Porto Nacional ocorrem pequenos corpos de granitóides de composição tonalítica, que são intrusivos em seqüências vulcano-sedimentares. Zircões deste corpo foram também submetidos a análises Pb-Pb da qual se obteve uma idade de 2069 ± 76 Ma (2a). No entanto, nesta análise não obteve-se um platô de idade bem definido, com algumas idades bastante superiores a média (2538 ± 207 Ma), o que faz com que este resultado seja considerado apenas como a idade mínima de cristalização do Granitóide Torre. / The region of Monte do Carmo is located in the middle east portion of the Tocantins state and comprises in its geologic view, rocks from the Lajeado Granite, acid volcanics, metasediments of the Natividade Group and sediments of Phanerozoic age. It consists yet of quartz veins gold bearing mineralizations with several associated sulfides cross-cutting the Lajeado Granite, the volcanics and the metasediments of the Natividade Group. Acid volcanic rocks represented by rhyolite, dacites, rhyodacites and acid pyroclastics occur in the northern part of the Monte do Carmo town. This unity was analised by the Pb-Pb method with zircons vaporization, from which was obtained an age of 2138±11 Ma (2a), also interpreted as the crystallization epoch. The Lajeado Granite, which readly outcrops in the south region of Monte do Carmo, consists of granites, granophyres, as well as amphibole bearing gravite and subordinated leucogranite. Zircons from this body were analysed through the Pb-Pb method and provided an age of 2025±26 Ma (2a). This result was interpreted as the crystallization epoch of the Lajeado Granite inasmuch as the analised samples carne from non-deformed portions of the grafite. These two unities are seccionated by metric shear zones, commonly orientated in the N-S direction, with auriferous quartz veins and sulfide mineralizations. Markable mineralogical and textural transformations of the minerais occur in the wall rock. Samples from these phylonites were analysed through the Rb-Sr method and provided an age of 565±43 Ma (2a). On the basis of regional geologic data, which show the existence of magmatism and tectonism during this period, as well as an intense transformation on the analised rocks, this result was interpretated as the epoch of rocks transformation. Thus, the epochs of the shear zones development and related mineralizations were determined. Within the associated sulfide mineralizations are galena and pyrite. These sulfides were analised through the Pb-Pb method in minerais and yielded the isotopic compositions compatible with an Upper Proterozoic evolution from sources of the Lower Proterozoic. The microthermometric analyses of the quartz veins related inclusions revealed the existence of two kinds of fluids. An aqueous-carbonic fluid with low salinity was trapped in the earliest stages of formation of the veins in a temperature between 250 and 350°C and pressure of 2-3 Kb. With the evolvement of the shear zones, the fluids became more aqueous and more saline (22% weight NaC1), with the existence of the Na and Ca cations that were trapped in the temperatures between 150 and 200°C. In the Morro Lajeado arca localized 10 Km from the Porto Nacional town, small tonalitic bodies occur intrusives in the volcano-sedimentary sequence. Zircon from these granitoids also underwent Pb-Pb analyses, from which was obtained an age of 2069 ± 76 Ma (2a). These analyses however did not yield a well defined plateau, and some ages were much superiors than the average age 2538 ± 207 Ma (2a), what leads to consider this result as a minimum crystallization age to the Granitoid Torres.

Tese de Mestrado Integrado. Engenharia Electrotécnica e de Computadores. Área de Especialização de Automação. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2012

Orientador: Claudio Chrysostomo Werneck / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-18T00:56:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vassequi-Silva_Tallita_M.pdf: 17060353 bytes, checksum: 04c3d8b469909adce6cf7a0f8977283d (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: As fibras elásticas são responsáveis por darem sustentação a tecidos, como artéria aorta, pele, pulmão. São compostas por dois componentes distintos, elastina e microfibrila, quando analisadas por microscopia eletrônica. Anteriormente, os pesquisadores acreditavam que a principal função da rede de microfibrila, composta principalmente de fibrilinas e MAGPs, era na formação das fibras elásticas. Mas, sabe-se hoje, que a rede de microfibrila também é essencial na sinalização molecular. As MAGPs são proteínas aparentemente importantes para a função estrutural das microfibrilas e seu desenvolvimento. Embora sua função biológica ainda não seja conhecida, muitos estudos têm demonstrado sua interação com várias moléculas in vitro, como as fibrilinas 1 e 2, tropoelastina, biglican, decorina e colágeno VI. Até o momento nenhuma patologia foi relacionada à deficiência ou mutações no gene da MAGP1. Entretanto, dados preliminares demonstram que camundongos deficientes em MAGP1, quando submetidos à angioplastia, desenvolvem mais neoíntima quando comparados com animais selvagens. O procedimento de angioplastia resulta muitas vezes no remodelamento vascular, levando a reestenose ou formação de neoíntima. Muitos estudos têm relacionado o TGF-ß com o processo de reestenose após angioplastia, justamente pelo fato desse fator de crescimento ser capaz de modular o desenvolvimento e remodelamento vascular. Levando em consideração dados recentes que demonstram que a MAGP1 tem a capacidade de interagir com o TGF-ß ativo, foi de nosso interesse tratar os camundongos deficientes em MAGP1 e selvagens com losartan (antagonista de TGF-ß) para verificar a função da MAGP1 e a possível participação de TGF-na formação de neoíntima. Os animais foram tratados com losartan ou placebo por 4 semanas e então submetidos ao ensaio de angioplastia, aferição da pressão sanguínea e dosagem de TGF-ß plasmático. Observou-se que todos os animais são normotensos e, que o tratamento com losartan resultou em uma redução na formação de neoíntima em comparação com os animais não tratados e que não houve diferença na formação de neoíntima entre os animais deficientes em MAGP1 comparados com selvagens. Não houve alteração dos níveis de TGF-ß total. Os dados sugerem que a MAGP1 parece não ser importante no processo de formação de neoíntima e que o tratamento com losartan é eficaz na redução da formação da neoíntima, sem alterar a pressão sanguínea e os níveis de TGF-ß / Abstract: Elastic fibers are responsible for providing support to tissues such as aorta, skin and lung. They are composed of two distinct components, elastin and microfibrils, when analyzed by electron microscopy. Previously, researchers believed that the main function of the microfibrils network, mainly composed of fibrilin and MAGPs, was the formation of the elastic fiber. But, today, we know that the microfibril network is essential for molecular signaling also. The MAGPs are proteins apparently important for the structural functions of the microfibrils and development. Although its biological function is not known yet, many studies have demonstrated its interaction with various molecules in vitro, such as fibrilin 1 and 2, tropoelastin, biglycan, decorin and type VI collagen. So far no pathology was related to MAGP1 deficiency or mutations. However, preliminary data show that MAGP1 deficient mice when assayed using angioplasty model they developed more neointima than wild-type animals. The angioplasty procedure often results in vascular remodeling, leading to restenosis. Many studies have shown that TGF-ß is related to this process mainly because this growth factor is able to modulate the development and vascular remodeling. Take into account recent data showing that MAGP1 has the ability to interact with active TGF-ß, it was our interest to treat the MAGP1 deficient and wild-type mice with losartan (antagonist of TGF-ß) to verify the MAGP1 function and possible involvement of TGF-? in the neointima formation. Mice were treated with losartan or placebo for 4 weeks and then tested on angioplasty, blood pressure measurement and serum TGF-ß. It was observed that all animals are normotensive, and that losartan treatment resulted in a neointima reduction compared with untreated animals. No difference in neointima formation was observed between the MAGP1 deficient and wild-type mice. There was no change in total serum TGF-ß levels. Data suggest that MAGP1, apparently is not important in neointima formation and the losartan treatment is effective in reducing neointima formation without affecting blood pressure and levels of TGF-ß / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

O transtorno do espectro autista (ASD) é uma doença clinica e geneticamente heterogênea, com mecanismo etiológico ainda pouco conhecido. Assim, os principais objetivos deste trabalho foram descrever as características clínicas e genéticas de pacientes brasileiros com ASD, bem como determinar o risco de recorrência e a herdabilidade. Verificamos que a maioria das comorbidades avaliadas tem prevalência similar àquelas anteriormente descritas. A hipotonia exibiu maior prevalência no sexo feminino. A ausência de fala apresentou prevalência significativamente maior no grupo de pacientes com comorbidades, sendo que a gravidade da fala foi positivamente correlacionada com a presença das crises convulsivas. A herdabilidade estimada foi de 76% e o risco de recorrência ~5%. As alterações citogenéticas e os casos positivos para a Síndrome do X-Frágil explicaram cerca de 8% dos casos de ASD da nossa amostra. As CNVs nas regiões estudadas foram detectadas em 2,7% da amostra. Nós verificamos que há penetrância incompleta do ASD para as regiões. O estudo mais detalhado dos dois casos de duplicação da região 15q13.3, envolvendo somente o gene CHRNA7, mostrou que um dos pacientes (F5240) exibiu uma segunda CNV, possivelmente patogênica. A análise in silico sugeriu que genes que interagem diretamente com o CHRNA7 podem conter mutações patogênicas e, juntamente com a duplicação do 15q13.3, possivelmente estão envolvidos na etiologia do ASD. Este estudo mostrou que é necessário fazer uma ampla caracterização genética dos pacientes, para possibilitar o estudo dos possíveis mecanismos moleculares envolvidos na causa do ASD / Autism Spectrum Disorder (ASD) is a clinically and genetically heterogeneous disease and its etiological mechanisms are still poorly understood. The main objectives of this study were to describe the clinical and genetic features of Brazilian patients with ASD, and to determine the recurrence risk and heritability. Great part of the comorbidities assessed here had comparable prevalence to those of previous works. The hypotonia was significantly prevalent in the female sex. Absent speech was significantly more frequent in patients with comorbidities, and severity of speech problems was positively correlated with presence of seizures. Heritability was estimated as 76% and the recurrence risk as approximately 5%. Cytogenetic alterations and positive results for Fragile X Syndrome explain about 8% of the ASD etiology of our sample. The CNVs at the chromosomal regions 15q11-q13, 16p11.2 and 22q13 were present in 2.7% of the sample. Incomplete penetrance of ASD was observed for the 16p and 15q regions. Further investigation of the two cases with duplication of the region 15q13.3, involving only the CHRNA7 gene, revealed that one of them (F5240) exhibited a second possible pathogenic CNV. In silico analysis suggested that genes interacting directly with the CHRNA7 could harbor pathogenic mutations and, together with the duplication at 15q13.3, could be involved in the ASD etiology. This study showed the necessity of a broad genetic characterization of patients with ASD, to enable the elucidation of possible molecular mechanisms related to ASD etiology

As Síndromes mielodisplásicas (SMD) são doenças clonais da célula progenitora hematopoética, cursando com citopenias, medula óssea displástica e tendência à evolução para leucemia. As SMD secundárias estão associadas a fatores de risco como doenças congênitas (Anemia de Fanconi), doenças hematológicas adquiridas (aplasia medular, HPN), exposição à quimioterápicos (alquilantes, inibidores de topoisomerase II) e radioterapia e substâncias químicas (benzeno, petróleo). Agentes imunossupressores associados ou não a fatores hemopoéticos particularmente utilizados para tratamento da Aplasia medular também se associam à SMD secundária. A OMS recentemente adotou o termo síndrome mielodisplásica/neoplasia mielóde (SMD/NM) relacionada à terapêutica para englobar casos de neoplasias mielóides que preencham critérios morfológicos não somente de SMD, mas também de leucemia mielóide aguda (LMA) ou neoplasias mieloproliferativas. O objetivo do trabalho foi analisar dados clínicos, morfológicos e citogenéticos de 42 portadores de SMD/NM secundária em uma coorte de pacientes diagnosticados no SH-HCFMUSP no período de 1987 a 2008. Vinte e três pacientes (54,8%) eram homens, com mediana de idade de 53,5 (4-88) anos. 45,2% eram portadores de doenças onco-hematológicas, 26,2% de anemia aplástica, 14,3% de tumores sólidos e 14,3% de outras doenças (auto-imunes e transplante de órgãos sólidos). 33% dos pacientes utilizaram exclusivamente QT, 26% combinação QT e RT, 2% RT isolada e 28% agentes imunossupressores. Cinco (11,9%) pacientes haviam sido submetidos a TCTH autólogo para tratamento de doença oncohematológica prévia. A mediana da latência entre a doença primária e a SMD secundária foi de 85 meses (23- 221 meses). Oito pacientes foram submetidos ao TCTH alogênico aparentado para tratamento da SMD secundária. Anemia, neutropenia, plaquetopenia e blastos circulantes foram observados em 64,3%, 54,8%, 78,6% e 26,2% dos casos respectivamente. Cerca de 1/3 dos aspirados medulares apresentavam hemodiluição, 29,7% apresentavam hipocelularidade global, 62,2% apresentavam contagem de blastos superior a 5% e 14,3% sideroblastos em anel acima de 15%. Displasia da série eritróide, granulocítica e megacariocítica foi observada em 79,4%, 77,1% e 68,2% dos casos respectivamente. A histologia medular realizada em 22 casos revelou hipocelularidade global, ALIPs e nódulos linfóides em 9,1%, 23,8% e 40,9% dos casos. A detecção por imunoistoquímica de células CD34>1%, CD117>1%, agrupamento de células CD34+ e de CD117+ e da proteína p53+ foi observada respectivamente em 77,2%, 82,3%, 59%, 29,4% e 33,3% dos casos. Anormalidades clonais foram observadas em 84,3% dos casos, com grande predomínio das não balanceadas (96%), sendo 37% com monossomia 7, 44,4% cariótipos complexos e 18% com outras anormalidades . A mediana de sobrevida de sobrevida global foi de 5,7 meses, pacientes submetidos ao TCTH alogênico para tratamento da SMD/NM secundária tiveram mediana de 40 meses (p=0,007). Fatores associados à pior sobrevida incluíram: doença oncohematológica prévia, baixa contagem plaquetária, elevação de DHL e ferritina, presença de células CD117+ agrupadas, imunoexpressão positiva da p53, citogenética anormal, IPSS intermediário II ou alto risco. Nenhum parâmetro estudado do aspirado medular se associou à sobrevida. Houve tendência à associação da imunoexpressão positiva de p53 a cariótipo anormal e IPSS de maior risco. Não se observou associação entre a presença de ALIP, porcentagem de blastos na morfologia medular e células CD34+ e CD117+. Estes dados reforçam a importância da análise citogenética e da imunoistoquímica da biópsia de medula óssea para diagnóstico e prognóstico das SMD secundárias e do TCTH alogênico no seu tratamento. Mais estudos com maior número de casos devem ser realizados para confirmar a importância do escore IPSS na SMD secundárias, provavelmente substituindo a porcentagem de blastos ao aspirado medular, pela presença de células precursoras detectadas por imunoistoquímica / Myelodysplastic syndromes (MDS) are clonal hematopoietic stem cell disorders, characterized by cytopenias, dysplastic bone marrow (BM) and propensity to progress to acute myeloid leukemia. Secondary MDS are associated with risk factors such as congenital disorders (Fanconis anemia), acquired bone marrow failures, exposure to chemotherapy (alkylating agents, topoisomerase II inhibitors) agents and radiation and chemicals (benzene, petroleum). Immunosuppressive agents associated with hematopoietic growth factors are also associated with secondary MDS. The WHO classification has recently adopted the term therapy-related myeloid neoplasms for cases of myeloid malignancies that fulfill morphological criteria not only for MDS but also for AML or myeloproliferative neoplasms.The aim of the study was to analyze clinical, morphological and cytogenetic features of 42 patients with secondary MDS/MN in a cohort of patients diagnosed at our institution from 1987 to 2008. 23 patients (54.8%) were male, median age 53.5 (4-88) years. 45.2% had primary hematologic malignancies, 26.2% aplastic anemia, 14.3% solid tumors and 14.3% other diseases (autoimmune diseases and solid organ transplantation). 33% had undergone chemotherapy alone, 2% RT alone, 26% both modalities and 28% immunosuppressive agents. Five (11.9%) patients had undergone autologous HSCT for treatment of previous malignancies. The median latency between the primary disease and secondary MDS/MN was 85 (23-221) months. Eight patients underwent allogeneic HSCT (allo- HSCT) for treatment of related secondary MDS. Anemia, neutropenia, thrombocytopenia and peripheral blasts were observed in 64.3%, 54.8%, 78.6% and 26.2%, respectively. BM aspirates was poorly representative in 1/3 of cases, 29.7% global hypocellularity, 62.2% more than 5% of blast counts and 14.3% more than 15% of ring sideroblasts. Dysplasia in erythroid, granulocytic and megakaryocytic series was observed in 79.4%, 77.1% and 68.2%, respectively. Twenty two BM biopsies were performed. Global hypocellularity, ALIP and lymphoid nodules were shown in 9.1%, 23.8% and 40.9%. The immunohistochemistry showed more than 1% of CD34+ and CD117+ cells, clusters of CD34+ and CD117+ and immunoexpression of p53 protein in 77.2%, 82.3%, 59%, 29.4% and 33.3%, respectively. Clonal abnormalities were observed in 84.3% of cases with high prevalence of unbalanced (96%) rearrangements. 37% showed monosomy 7 and 44.4% complex karyotypes. The median overall survival was 5.7 for all patients and 40 months for patients treated with allo-HSCT (P=0.007). Hematologic malignancies, low platelet count, serum high LDH and ferritin, detection of CD117+ clusters, positive immunoexpression of p53, abnormal cytogenetics, intermediate-II or high-risk IPSS groups were associated with poor survival. No parameter studied from bone marrow aspirate had impact in survival. p53 expression was associated to abnormal karyotype (P=0.092) and IPSS risk (P=0.054). There was no association between the presence of ALIP, BM blast counts and immunoexpression of CD34+ and CD117+. Our study shows that cytogenetic analysis and BM immunohistochemistry are very important in diagnosis and prognosis, and that allo-HSCT could improve the survival of secondary MDS/MN. More studies with larger numbers of cases should be conducted to confirm the importance of the IPSS for secondary MDS, probably replacing the bone marrow aspirate blast counts by the immunohistochemistry detection of precursor cells

Alguns estudos sugerem que as pequenas vias aéreas têm um papel importante na fisiopatologia da lesão pulmonar aguda/ síndrome do desconforto respiratório agudo (LPA/SDRA). O epitélio respiratório que reveste as vias aéreas é capaz de liberar mediadores inflamatórios e está relacionado ainda com a produção de surfactante nas vias aéreas. Até o presente momento, existem poucos estudos que avaliaram se estas funções do epitélio que reveste as pequenas vias aéreas encontram-se alteradas na SDRA. No presente estudo, nós mensuramos a expressão da proteína de surfactante (PS) A e PS-B, a expressão de citocinas inflamatórias interleucina (IL)-6 e IL-8, e um índice de apoptose do epitélio que reveste as pequenas vias aéreas de pacientes com SDRA que foram submetidos a autópsia e comparamos estes resultados com os de indivíduos controle. Foram incluídos no estudo pulmões de autópsia de 31 pacientes com SDRA (PaO2/FiO2200, 45±14 anos, 16 homens) e 11 controles (52±16 anos, 7 homens). A expressão de IL-6, IL-8, PS-A e PS-B no epitélio das pequenas vias aéreas (diâmetro2.0mm) foi verificada através de reações de imunohistoquímica e análise de imagem. O índice de apoptose epitelial das vias aéreas foi avaliado através do método de TUNEL e da expressão de FAS/FASL. Avaliou-se ainda a densidade de células inflamatórias positivas para IL-6 e IL-8 na parede das pequenas vias aéreas. As vias aéreas dos pacientes com SDRA apresentaram maior expressão epitelial de IL-8 (p=0,006) e maior densidade de células inflamatórias expressando IL-6 (p=0,004) e IL-8 (p<0,001) quando comparadas com o grupo controle. Não houve diferenças na expressão epitelial de PS-A e PS-B ou no índice de apoptose epitelial entre os grupos SDRA e controle. Nossos resultados mostram que as pequenas vias aéreas participam da inflamação pulmonar de pacientes com SDRA, caracterizada pelo aumento na expressão de interleucinas próinflamatórias tanto em células inflamatórias da parede da via aérea quanto no epitélio. Nossos resultados sugerem ainda que a apoptose não é um mecanismo importante de morte de células epiteliais das vias aéreas de pacientes com SDRA / Recent studies suggest a role for distal airway injury in the pathophysiology of human ALI/ARDS. The epithelium lining the airways modulates airway function secreting a large number of molecules such as surfactant components and inflammatory mediators. So far, there is little information on how these secretory functions of the small airways are altered in ARDS. In the present study we assessed the airway expression of surfactant protein (SP) A and SP B, the expression of inflammatory cytokines IL-6 and IL-8, and an index of airway epithelial apoptosis of patients with ARDS submitted to autopsy and compared the results with those of control subjects. We studied autopsy lungs of 31 ARDS patients (PaO2/FiO2200, 45±14 years, 16 males) and 11 controls (52±16 years, 7 males). Using immunohistochemistry and image analysis, we quantified the expression of IL-6, IL-8 and SP-A and SP-B in the epithelium of small airways (diameter2.0mm). Airway epithelial apoptosis index was obtained with the TUNEL assay and FAS/FASL expression. We also quantified the density of inflammatory cells expressing IL-6 and IL-8 within the small airway walls. ARDS airways showed an increase in the epithelial expression of IL-8 (p=0.006) and an increased density of inflammatory cells expressing IL-6 (p=0.004) and IL-8 (p<0.001) when compared to controls. There were no differences in SP-A and SP-B epithelium expression or in epithelial apoptosis index between ARDS and controls. Our results show that the distal airways are involved in ARDS lung inflammation with higher expression of pro-inflammatory interleukins in both airway epithelial and inflammatory cells. Our results also suggest that apoptosis is not a major mechanism of airway epithelial cell death in ARDS

Ensaio clínico aleatorizado conduzido para avaliar o impacto de intervenção intensiva para mudança de estilo de vida em indivíduos com sobrepeso em um Centro de Saúde-Escola em São José do Rio Preto, Estado de São Paulo, Brasil. Dos 259 voluntários (203 mulheres e 56 homens; idade entre 25 e 72 anos) que concordaram em participar do estudo, 104 foram elegíveis (83 mulheres e 21 homens), sendo distribuídos aleatoriamente em dois grupos: grupo intervenção (10 homens e 41 mulheres), com acompanhamento nutricional individualizado, e grupo controle (11 homens e 42 mulheres), que receberam somente orientações gerais e folheto explicativo sobre estilo de vida saudável. A avaliação da composição corporal, indicadores bioquímicos, consumo alimentar e estilo de vida - incluindo-se a prática de atividades físicas, foi realizada no princípio, após 6 meses e 1 ano de estudo. A intervenção nutricional consistiu de incentivo ao consumo de frutas, vegetais, óleo de oliva e produtos lácteos pobres em gordura, associados com a redução do consumo de gorduras saturadas e doces, bem como o estímulo à prática de atividades físicas por pelo menos 30 minutos ao dia. O programa de intervenção mostrou-se efetivo na redução do consumo de calorias, gorduras totais, gorduras saturadas, colesterol, freqüência de carnes, óleos/gorduras e doces. Além disso, observamos um incremento no consumo de fibra total da dieta, fibras de frutas e vegetais, ß-caroteno, vitamina A, cálcio, freqüência de consumo de frutas em geral, vegetais em geral, vegetais verde escuros e leite/derivados. O programa mostrou-se viável em unidades básicas de saúde e efetivo na redução de peso, índice de massa corporal, pressão arterial, colesterol total, LDL colesterol, ácido úrico, homocisteína, aumento da prática de atividades físicas, contribuindo para a melhoria da qualidade de vida no grupo intervenção. / Randomized Nutritional Intervention trial was carried out to evaluate the impact of intensive intervention in changing life style of overweight adults attending at a primary health care in São José do Rio Preto, São Paulo State, Brazil. Of the 259 volunteers (203 women and 56 men; 25 to 72 years old) that agreed in participating in the study, 104 were eligible (83 women and 21 men), and were randomly allocated in two groups: Nutrition Counseling group (42 women, 11 men) with individualized dietary counseling, and Control Group (41 women, 10 men) who recieved only general information and leaflets about healthy life style. The assessment of body composition, biochemical indicators, food consumption and life style – including practice of physical activity were carried out at baseline, 6 months and 1 year. The dietary interventions included increased intake of fruits, vegetables, olive oil and skimmed dairy products, together with reduced intake of saturated fat and sweets, as well as instructions for regular practice of physical activity for at least 30 minutes per day. The intervention program demonstrated to be effective in reducing consumption of calories, total fat, saturated fat, cholesterol, and frequency of meets, fats/oils and sweet groups. Moreover, we observed an increment in the consumption of dietary fiber, fiber of fruits and vegetables, ß-carotene, vitamin A, calcium, and in the frequency of fruits, vegetables, dark green vegetables and dairy products. The program demonstrated to be feasible at a primary health care unit and was effective in reducing weight, body mass index, blood pressure, total cholesterol, LDL cholesterol, uric acid, homocysteine, and improved the physical activity level and quality of life in the intervention group.