Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-27Bitstream added on 2014-06-13T19:22:36Z : No. of bitstreams: 1 rabelo_rn_dr_jabo.pdf: 419029 bytes, checksum: 56edeae338cf6c261ac2c73378a0f5ac (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A contagem de células somáticas (CCS) do leite de tanques de expansão está relacionada com os índices de mastite no rebanho, enquanto a contagem bacteriana total (CBT) demonstra a higiene de ordenha e do ambiente em que os animais são alojados, além dos procedimentos de limpeza dos equipamentos de ordenha. Partindo dessa premissa, foram caracterizadas as qualidades celulares, microbiológicas, físicas e químicas de leites procedentes de tanques de expansão individuais no período de 2007 a 2011. Os resultados mostraram que para o ano de 2007, das 850 amostras analisadas, as CCS variaram de 5,3x105 céls.mL-1 (maio) a 1,1x106 céls.mL-1 (novembro) e para CBT variaram de 5,2x105 UFC.mL-1 (abril) a 1.,6x106 UFC.mL-1. Para 2008, das 892 amostras analisadas, as CCS variaram de 7,0x105 céls.mL-1 (abril) a 1,1x106 céls.mL-1 (outubro) e, para CBT variaram de 9,0x105 UFC.mL-1 (junho) a 1,8x106 UFC.mL-1 (abril). No ano de 2009 as CCS variaram de 6,7x105 céls.mL-1 (março) a 1,0x106 céls.mL-1 (fevereiro) e, para CBT variaram de 3,8x105 UFC.mL-1 (abril) a 1,7x106 UFC.mL-1 (janeiro). Para o ano de 2010, as CCS variaram de 5,6x105 céls.mL-1 (setembro) a 8,8x105 céls.mL-1 (novembro) e para CBT, variaram de 5,0x105 UFC.mL-1 (agosto) a 1,4x106 UFC.mL-1 (fevereiro). No ano de 2011, as variações foram de 5,1x105 céls.mL-1 (agosto) a 8,7x105 céls.mL-1 (janeiro) para CCS e para CBT essas variações foram de 4,6x105 UFC.mL-1 (maio) a 1,2x106 UFC.mL-1 (fevereiro). As CCS e CBT variaram na série histórica, com tendência à redução; o período de chuvas influenciou a incidência de CCS e CBT fora dos padrões da IN 51 e o período de chuvas e seca não interferiu nos parâmetros físicos e químicos em todos os anos pesquisados, com variações mínimas, mas dentro dos padrões estabelecidos pela legislação... / Bulk tank somatic cell count (SCC), milk tanks expansion is related to the indices of mastitis in the herd, while the total bacterial count (CBT) demonstrates the hygiene of milking and the environment in which animals are housed, in addition to procedures for cleaning of the equipment of milking. From this premise, we characterized the cellular, microbiological and physical-chemical quality properties of milk coming from individual bulk tanks in the period 2008 to 2010. The results showed that for the year 2007, the 850 samples analyzed, the CCS ranged from 526x10³ cels.mL-1 (May) to 1,065x10³ cels.mL-1 (November) and CBT varied from 517x10³ UFC.mL-1 (April) to 1,643x10³ UFC.mL-1. The results showed that for the year 2008, of 892 samples analyzed, SCC ranged from 696x10³ cells.mL-1 (April) to 1,102x10³ cells.mL-1 (october), and for TBC varied from 896x10³ CUF.mL-1 (June) to 1,781x10³ CUF.mL-1 (april). In 2009 the SCC ranged from 667x10³ cells.mL-1 (march) the 1,026x10³ cells.mL-1 (February) and for TBC ranging from 377x10³ CUF/ mL (april) to 1,746x10³ CUF.mL-1 (january). For the year 2010, the SCC ranged from 561x10³ cells.mL-1 (september) to 883x10³ cells.mL-1 (november) and TBC, ranged from 503x10³ UFC.mL-1 (august) 1,395x10³ CUF.mL-1 (february). In the year 2011, the variations were 5.1 x105 cels.mL-1 (August) the 8.7x105 cels.mL-1 (January) to SCC and for TBC these variations were 4.6x105 CFU.ml-1 (may) the 1.2x106 CFU.ml-1 (February). The SCC and TBC varied in historical series, with a tendency toward reduction; the rainy period influenced the incidence of SCC and TBC outside of the patterns of IN 51, and rain and dry period did not interfere with physical and chemical parameters in all the years surveyed, with minimal changes, but within the standards established by current legislation. The individual results... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Antonio Nader Filho / Coorientador: Iucif Abrão Nascif Júnior / Banca: Luciano Menezes Ferreira / Banca: Naiá Carla Marchi de Rezende Lago / Banca: Luiz Augusto do Amaral / Banca: Luiz Francisco Zafalon / Resumo: A contagem de células somáticas (CCS) do leite de tanques de expansão está relacionada com os índices de mastite no rebanho, enquanto a contagem bacteriana total (CBT) demonstra a higiene de ordenha e do ambiente em que os animais são alojados, além dos procedimentos de limpeza dos equipamentos de ordenha. Partindo dessa premissa, foram caracterizadas as qualidades celulares, microbiológicas, físicas e químicas de leites procedentes de tanques de expansão individuais no período de 2007 a 2011. Os resultados mostraram que para o ano de 2007, das 850 amostras analisadas, as CCS variaram de 5,3x105 céls.mL-1 (maio) a 1,1x106 céls.mL-1 (novembro) e para CBT variaram de 5,2x105 UFC.mL-1 (abril) a 1.,6x106 UFC.mL-1. Para 2008, das 892 amostras analisadas, as CCS variaram de 7,0x105 céls.mL-1 (abril) a 1,1x106 céls.mL-1 (outubro) e, para CBT variaram de 9,0x105 UFC.mL-1 (junho) a 1,8x106 UFC.mL-1 (abril). No ano de 2009 as CCS variaram de 6,7x105 céls.mL-1 (março) a 1,0x106 céls.mL-1 (fevereiro) e, para CBT variaram de 3,8x105 UFC.mL-1 (abril) a 1,7x106 UFC.mL-1 (janeiro). Para o ano de 2010, as CCS variaram de 5,6x105 céls.mL-1 (setembro) a 8,8x105 céls.mL-1 (novembro) e para CBT, variaram de 5,0x105 UFC.mL-1 (agosto) a 1,4x106 UFC.mL-1 (fevereiro). No ano de 2011, as variações foram de 5,1x105 céls.mL-1 (agosto) a 8,7x105 céls.mL-1 (janeiro) para CCS e para CBT essas variações foram de 4,6x105 UFC.mL-1 (maio) a 1,2x106 UFC.mL-1 (fevereiro). As CCS e CBT variaram na série histórica, com tendência à redução; o período de chuvas influenciou a incidência de CCS e CBT fora dos padrões da IN 51 e o período de chuvas e seca não interferiu nos parâmetros físicos e químicos em todos os anos pesquisados, com variações mínimas, mas dentro dos padrões estabelecidos pela legislação... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Bulk tank somatic cell count (SCC), milk tanks expansion is related to the indices of mastitis in the herd, while the total bacterial count (CBT) demonstrates the hygiene of milking and the environment in which animals are housed, in addition to procedures for cleaning of the equipment of milking. From this premise, we characterized the cellular, microbiological and physical-chemical quality properties of milk coming from individual bulk tanks in the period 2008 to 2010. The results showed that for the year 2007, the 850 samples analyzed, the CCS ranged from 526x10³ cels.mL-1 (May) to 1,065x10³ cels.mL-1 (November) and CBT varied from 517x10³ UFC.mL-1 (April) to 1,643x10³ UFC.mL-1. The results showed that for the year 2008, of 892 samples analyzed, SCC ranged from 696x10³ cells.mL-1 (April) to 1,102x10³ cells.mL-1 (october), and for TBC varied from 896x10³ CUF.mL-1 (June) to 1,781x10³ CUF.mL-1 (april). In 2009 the SCC ranged from 667x10³ cells.mL-1 (march) the 1,026x10³ cells.mL-1 (February) and for TBC ranging from 377x10³ CUF/ mL (april) to 1,746x10³ CUF.mL-1 (january). For the year 2010, the SCC ranged from 561x10³ cells.mL-1 (september) to 883x10³ cells.mL-1 (november) and TBC, ranged from 503x10³ UFC.mL-1 (august) 1,395x10³ CUF.mL-1 (february). In the year 2011, the variations were 5.1 x105 cels.mL-1 (August) the 8.7x105 cels.mL-1 (January) to SCC and for TBC these variations were 4.6x105 CFU.ml-1 (may) the 1.2x106 CFU.ml-1 (February). The SCC and TBC varied in historical series, with a tendency toward reduction; the rainy period influenced the incidence of SCC and TBC outside of the patterns of IN 51, and rain and dry period did not interfere with physical and chemical parameters in all the years surveyed, with minimal changes, but within the standards established by current legislation. The individual results... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O objetivo geral deste trabalho foi avaliar a influência dos leucócitos do colostro bovino na imunidade inata, desenvolvimento da microbiota intestinal e ocorrência de diarreias em bezerras Holandesas recém-nascidas. Para isso, 20 bezerras Holandesas foram acompanhadas nos seguintes momentos: antes da mamada do colostro (D0); 1-2 (D2); 7 (D7); 14 (D14); 21 (D21) e 28 (D28) dias após nascimento e foram distribuídas em dois grupos experimentais: grupo COL+ recebeu colostro fresco (4L) proveniente de suas respectivas mães; e grupo COL- recebeu colostro congelado e acelular (4L) de vacas doadoras. Capítulo 1 O objetivo deste capítulo foi avaliar a presença e influência dos leucócitos do colostro na colonização do trato gastrintestinal. Para isso, amostras de colostro foram semeadas em TSA e MacConkey para CBT e CCT; e amostras de fezes em agar sangue, MacConkey e Salmonella-Shiguella. Bezerras apresentaram maior frequência de diarreia no D14 (COL+=78%; COL-=60%). O grupo COL- apresentou maior CBT e CCT/mL (3,93x106 ufc/mL e 3,01x105 ufc/mL) em relação ao COL+ (0,94x106 ufc/mL e 0,78x105ufc/mL). Sobre as espécies bacterianas isoladas, as que foram mais frequentes no COL+ foram Proteus mirabilis (29,91%), Escherichia coli (28,04%), Citrobacter freundii (5,61%) e Staphylococcus spp (5,61%), no COL- foram Escherichia coli (28,70%), Proteus mirabilis (27,78%), Klebsiella pneumoniae (11,32%) e Morganella morganii (5,66%). O momento com maior isolamento em ambos os grupos foi o D2 (COL+ = 26 cepas; COL- = 27 cepas), período em que iniciou a diarreia nas bezerras. Não foi possível detectar diferenças entre as frequências de microrganismos entre os grupos COL+ e COL-. A administração de colostro COL+ e COL- não influenciou na proporção de bactérias aeróbias presentes nas fezes e na ocorrência de diarreia das bezerras durante o período neonatal. Capítulo 2 O objetivo deste capítulo foi avaliar a influência dos leucócitos do colostro na resposta imune inata em bezerras Holandesas. Os animais foram submetidos ao exame clínico, seguido da colheita das amostras sanguíneas para realização das provas laboratoriais. As concentrações de cortisol sérico e haptoglobina não apresentaram diferenças estatísticas, enquanto a concentração de ferro foi diferente entre os grupos no D7. No leucograma não foi detectada diferença para os leucócitos totais e neutrófilos absolutos, mas houve tendência entre os grupos no D7 para os valores de neutrófilos relativos. O marcador CH138+CD62L+ não apresentou diferença entre os grupos, apesar da maior expressão ter sido detectada no COL-. A expressão de CH138+CD62L- foi maior no COL+ no D14. A fagocitose e produção de H2O2 pelos neutrófilos sanguíneos apresentou perfil semelhante em relação ao S. aureus e E. coli entre os grupos, apesar do COL- apresentar maior intensidade de fagocitose do D7 ao D14. Houve tendência para o aumento da proporção de granulócitos liberando H2O2 basal no D14 para o COL-, entretanto o COL + apresentou tendência para maior intensidade da fagocitose no D21. A proporção de granulócitos (%), estimulados com S. aureus, liberando H2O2 foi maior no COL+ em D7, enquanto o estímulo com a E. coli não resultou em diferenças entre os grupos. A intensidade de fluorescência foi maior e gradual no COL+ quando as células foram estimuladas, porém não foram encontradas diferenças estatísticas. As células do colostro influenciaram no perfil sanitário apresentado pelas bezerras, observando-se maior intensidade de diarreias, menores teores de ferro sérico e anemias no grupo que recebeu colostro congelado. A migração dos granulócitos sanguíneos foi mais rápida e intensa no COL+ em relação ao COL-, após exposição natural aos patógenos causadores de diarreia. O índice de fagocitose (%) dos granulócitos apresentou semelhança entre os grupos, entretanto a intensidade da fluorescência foi mais intensa no COL-. Em contrapartida, o COL+ demonstrou maior habilidade em produzir H2O2 / The aim of this study was to evaluate the influence of bovine colostrum leukocytes in innate immunity, in the development of the intestinal microbiota and the occurrence of diarrhea in newborn Holstein calves. For this, 20 Holstein calves were followed in the following moments: before colostrum intake (D0); 1-2 (D2); 7 (D7); 14 (D14); 21 (D21) and 28 (D28) days after birth. They were divided into two experimental groups: COL+ group, which received fresh colostrum (4L) from their mothers; and COL-group which received frozen and acellular colostrum (4L) of donor cows. Chapter 1 -The aim of this chapter was to evaluate the presence and influence of colostrum leukocytes in the colonization of the gastrointestinal tract. For this, colostrum samples were seeded in TSA and MacConkey for TPC and TCC; and stool samples on blood agar, MacConkey and Salmonella-Shiguella. Calves presented higher frequency of diarrhea in D14 (COL+ = 78%; COL- = 60%). The COL- group showed higher TPC and TCC/mL (3,93x106 cfu/mL and 3,01x105 cfu/mL) compared to COL+ (0,94x106 cfu/mL and 0,78x105 cfu/mL). Regarding the isolated bacterial species, those that were more frequent in the COL+ were Proteus mirabilis (29.91%), Escherichia coli (28.04%), Citrobacter freundii (5.61%) and Staphylococcus spp (5.61%); in the COL-were Escherichia coli (28.70%), Proteus mirabilis (27.78%), Klebsiella pneumoniae (11.32%) and Morganella morganii (5.66%). The moment with more insolation in both groups was the D2 (COL+ = 26 strains; COL- = 27 strains), period in which started the diarrhea in calves. It was not possible to detect differences between the frequencies of microorganisms between the COL+ and COL- groups. The COL+ and COL- colostrum management did not influence the proportion of aerobic bacteria present in feces and the occurrence of diarrhea in calves during the neonatal period. Chapter 2 The aim of this chapter was to evaluate the influence of colostrum leukocytes in the innate immune response in Holstein calves. The animals were submitted to clinical examination, followed by blood samples collection to perform laboratory tests. The serum cortisol and haptoglobin concentrations did not show statistical differences while the iron concentration was different between groups at D7. The leukogram did not show difference to total leukocytes and absolute neutrophils, but there was a trend between groups at D7 for relative values of neutrophils. The CH138+CD62L+ marker showed no difference between groups, despite an increased expression was detected in COL-. The expression of CH138+CD62L- was greater in COL+ at D14. The phagocytosis and production of H2O2 by blood neutrophils showed similar profile in relation to S. aureus and E. coli between groups, although COL- presented greater phagocytosis intensity from D7 to D14. There was a trend for the increase of granulocyte proportion, releasing basal H2O2 at D14 for COL-, however COL+ presented trend to a higher intensity of phagocytosis at D21. The proportion of granulocytes (%) stimulated with S. aureus releasing H2O2 was greater in COL+ at D7, while stimulation with E. coli resulted in no differences between the groups. The fluorescence intensity was higher and gradual in COL+ when cells were stimulated; however, it was not detected statistical differences. The colostrum cells influenced in the health profile presented by the calves, with a higher intensity of diarrhea, lower levels of serum iron and anemia in the group that received frozen colostrum. The migration of blood granulocytes was faster and more intense in COL+ in relation to COL- after natural exposure to pathogens that cause diarrhea. The phagocytosis rate (%) of granulocytes showed similarity between groups, although the fluorescence intensity of COL- was more intense. In contrast, the COL+ demonstrated greater ability in producing H2O2

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA14MA148.pdf: 771365 bytes, checksum: 450534199d87b080ea5e2e5d1603a877 (MD5) Previous issue date: 2014-07-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Water quality is essential for appropriate processing of food. In dairy farms it is very important, for milk in as well as for the cleaning of the milking parlors, equipments and utensils. The Brazilian official regulations stipulate that the water used for the production and preparation of food, such as milking and sanitizing milking equipment, must be chlorinated and attend potability standards. Because of this, this research aimed to evaluate the influence of the use of chlorine tablets for the sanitization of the water used in milking parlors on the microbiological quality of water and milk. The experiment was conducted in 20 dairy farms region Serrana of Santa Catarina State - Brazil, between May and October 2013. It was installed an equipment to chlorinate the water through the chlorine tablet on the water box of the farms, being chlorine used for a period of two weeks. The concentration of chlorine in the water was 0.25 to 1.0 ppm, being monitored every 7 days. In each farm milk and water samples were collected in two periods without the use of chlorine, and two periods with the use of chlorine, being the first day (no chlorine: control) at 7° and 14° (with chlorine) and day 21 after uninstalling the chlorinators (no chlorine: control). Water samples were collected aseptically from the water outlet in the milking parlor and milk samples from bulk tank. In water and milk were investigated E. coli, Coliforms at 35ºC, mesophilic aerobes and psychrotrophic bacteria. In water pH, total hardness and organic matter were also analyzed and in milk levels of fat, protein and lactose and somatic cell count (SCC). The use of chlorine tablets in water improved (P <0.0001) the microbiological quality of the water, but did not affect the microbiological quality of milk (P> 0.05). The organic matter content was related to the counts of microorganisms in water, which are higher in samples with higher organic matter content. The farm technicization were related to the microbiological quality of the milk, but it does not affect CCS. It is conclude that chlorination improves the microbiological quality of the water, but without effect on the milk quality / A qualidade da água é essencial para o adequado processamento de alimentos, sendo que nos estabelecimentos leiteiros assume grande importância, visto ser fundamental para a ordenha, assim como para a higienização das instalações, equipamento e utensílios. Os regulamentos oficiais brasileiros estabelecem que a água utilizada para produção e elaboração de alimentos, tais como os procedimentos de ordenha e sanificação de equipamentos, deve ser clorada e atender aos padrões de potabilidade. Em função disto, objetivou-se avaliar a influência da utilização de pastilhas de cloro na sanificação da água utilizada em salas de ordenha sobre a qualidade microbiológica da água e do leite. O experimento foi realizado em 20 propriedades da região Serrana do Estado de Santa Catarina, no período de maio a outubro de 2013, nas quais foi instalado um equipamento para cloração da água por meio de pastilha de cloro, na caixa de água da propriedade, sendo o cloro utilizado por um período de duas semanas. A concentração de cloro na água foi de 0,25 a 1,0 ppm, sendo monitorado a cada sete dias. Em cada propriedade foram coletadas amostras de água e leite em dois períodos sem a utilização do cloro, e outros dois períodos com utilização do cloro, sendo no primeiro dia (sem cloro: controle), no 7° e 14° (com cloro) e 21° dia após a desinstalação dos cloradores (sem cloro: controle). As amostras de água foram coletadas assepticamente da saída de água, na sala de ordenha, e as amostras de leite do tanque de expansão. Foram pesquisados na água e no leite E.coli, coliformes a 35ºC, aeróbios mesófilos e bactérias psicrotróficas, na água pH, dureza total e matéria orgânica e no leite percentuais de gordura, proteína e lactose e, CCS. O uso de pastilhas de cloro na água melhorou (P<0,0001) a qualidade microbiológica da água, porém não afetou a qualidade microbiológica do leite (P>0,05). O teor de matéria orgânica teve relação com as contagens de microrganismos na água, sendo estas mais elevadas em amostras com maior teor de matéria orgânica. O grau de tecnificação das propriedades apresentou relação com a qualidade microbiológica do leite, porém não afetou a CCS. Conclui-se que a cloração da água melhora a qualidade microbiológica da água das propriedades leiteiras, porém sem interferir diretamente na qualidade do leite

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-05-16T13:38:51Z No. of bitstreams: 1 Raquel Bezerra Jatoba.pdf: 430201 bytes, checksum: 05418e8e49b33104bb10aa85e7a2044a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-16T13:38:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Raquel Bezerra Jatoba.pdf: 430201 bytes, checksum: 05418e8e49b33104bb10aa85e7a2044a (MD5) Previous issue date: 2009-02-18 / The experiment was conducted at PROGENE laboratory in the Rural Federal University of Pernambuco. The aim of this paper was to develop a calibration curve for the Bactocount IBC equipment. This equipment perform the individual counting of bacteria in milk, but it is necessary to express the results of this counting in colonies formed per unit (CFU). The CFU is one of the most important parameters indicating the quality of the raw milk because milk may carry a variety of microrganisms that can infect humans. 169 samples were collected from bulk milk from four states of Northeast region of Brazil and stored in a sterile device at 4ºC and brought to the laboratory. After the analysis in Bactocount equipment, the analysis by the CFU method was performed by using the standard count in Petri dish. A calibration curve was constructed with data from Bactocount equipment compared to the CFU method. It was applied a correlation analysis and a linear regression. The correlation between Bactocoun and CFU was 0,98 and equation generated was log(CFU) = - 0,6324 + 1,102 * log(IBC). / O experimento foi conduzido no Laboratório de Qualidade do Leite, Programa de Gerenciamento de Rebanhos Leiteiros do Nordeste ¿ PROGENE, situado no Departamento de Zootecnia da Universidade Federal Rural de Pernambuco. Objetivou-se estabelecer uma curva de calibração para o equipamento Bactocount IBC, que realiza contagem individual de bactérias (CIB) no leite, o qual deverá expressar os resultados em unidade formadora de colônia (UFC), preconizado pela IN 51 (MAPA, 2002). A UFC é um dos parâmetros de monitoramento da qualidade do leite cru refrigerado de maior importância, uma vez que, a microbiota existente pode servir como veículo para doenças transmissíveis ao homem. Foram coletadas 169 amostras de leite de tanques de expansão e de latões de quatro Estados da região Nordeste e, em seguida, acondicionadas em recipientes estéreis com capacidade para 50 mL e conservadas a 4ºC (± 1) até a realização das análises, que não ultrapassou 48 horas. Após a análise no equipamento Bactocount IBC, as amostras foram encaminhadas para determinação de UFC utilizando-se o método de referência com placas Petrifilm® AC (AOAC, 2002;BRASIL, 2003). A curva de calibração foi construída com dados obtidos do contador individual de bactérias (CIB) comparando-os com os resultados do método de referência em UFC. Foi aplicada uma análise de correlação e posteriormente de regressão linear simples. A correlação entre CIB e UFC observada foi de 0,98 e a equação obtida foi a seguinte: logUFC = - 0,6324 + 1,102 * logIBC

O objetivo geral deste trabalho foi avaliar a influência dos leucócitos do colostro bovino na imunidade inata, desenvolvimento da microbiota intestinal e ocorrência de diarreias em bezerras Holandesas recém-nascidas. Para isso, 20 bezerras Holandesas foram acompanhadas nos seguintes momentos: antes da mamada do colostro (D0); 1-2 (D2); 7 (D7); 14 (D14); 21 (D21) e 28 (D28) dias após nascimento e foram distribuídas em dois grupos experimentais: grupo COL+ recebeu colostro fresco (4L) proveniente de suas respectivas mães; e grupo COL- recebeu colostro congelado e acelular (4L) de vacas doadoras. Capítulo 1 O objetivo deste capítulo foi avaliar a presença e influência dos leucócitos do colostro na colonização do trato gastrintestinal. Para isso, amostras de colostro foram semeadas em TSA e MacConkey para CBT e CCT; e amostras de fezes em agar sangue, MacConkey e Salmonella-Shiguella. Bezerras apresentaram maior frequência de diarreia no D14 (COL+=78%; COL-=60%). O grupo COL- apresentou maior CBT e CCT/mL (3,93x106 ufc/mL e 3,01x105 ufc/mL) em relação ao COL+ (0,94x106 ufc/mL e 0,78x105ufc/mL). Sobre as espécies bacterianas isoladas, as que foram mais frequentes no COL+ foram Proteus mirabilis (29,91%), Escherichia coli (28,04%), Citrobacter freundii (5,61%) e Staphylococcus spp (5,61%), no COL- foram Escherichia coli (28,70%), Proteus mirabilis (27,78%), Klebsiella pneumoniae (11,32%) e Morganella morganii (5,66%). O momento com maior isolamento em ambos os grupos foi o D2 (COL+ = 26 cepas; COL- = 27 cepas), período em que iniciou a diarreia nas bezerras. Não foi possível detectar diferenças entre as frequências de microrganismos entre os grupos COL+ e COL-. A administração de colostro COL+ e COL- não influenciou na proporção de bactérias aeróbias presentes nas fezes e na ocorrência de diarreia das bezerras durante o período neonatal. Capítulo 2 O objetivo deste capítulo foi avaliar a influência dos leucócitos do colostro na resposta imune inata em bezerras Holandesas. Os animais foram submetidos ao exame clínico, seguido da colheita das amostras sanguíneas para realização das provas laboratoriais. As concentrações de cortisol sérico e haptoglobina não apresentaram diferenças estatísticas, enquanto a concentração de ferro foi diferente entre os grupos no D7. No leucograma não foi detectada diferença para os leucócitos totais e neutrófilos absolutos, mas houve tendência entre os grupos no D7 para os valores de neutrófilos relativos. O marcador CH138+CD62L+ não apresentou diferença entre os grupos, apesar da maior expressão ter sido detectada no COL-. A expressão de CH138+CD62L- foi maior no COL+ no D14. A fagocitose e produção de H2O2 pelos neutrófilos sanguíneos apresentou perfil semelhante em relação ao S. aureus e E. coli entre os grupos, apesar do COL- apresentar maior intensidade de fagocitose do D7 ao D14. Houve tendência para o aumento da proporção de granulócitos liberando H2O2 basal no D14 para o COL-, entretanto o COL + apresentou tendência para maior intensidade da fagocitose no D21. A proporção de granulócitos (%), estimulados com S. aureus, liberando H2O2 foi maior no COL+ em D7, enquanto o estímulo com a E. coli não resultou em diferenças entre os grupos. A intensidade de fluorescência foi maior e gradual no COL+ quando as células foram estimuladas, porém não foram encontradas diferenças estatísticas. As células do colostro influenciaram no perfil sanitário apresentado pelas bezerras, observando-se maior intensidade de diarreias, menores teores de ferro sérico e anemias no grupo que recebeu colostro congelado. A migração dos granulócitos sanguíneos foi mais rápida e intensa no COL+ em relação ao COL-, após exposição natural aos patógenos causadores de diarreia. O índice de fagocitose (%) dos granulócitos apresentou semelhança entre os grupos, entretanto a intensidade da fluorescência foi mais intensa no COL-. Em contrapartida, o COL+ demonstrou maior habilidade em produzir H2O2 / The aim of this study was to evaluate the influence of bovine colostrum leukocytes in innate immunity, in the development of the intestinal microbiota and the occurrence of diarrhea in newborn Holstein calves. For this, 20 Holstein calves were followed in the following moments: before colostrum intake (D0); 1-2 (D2); 7 (D7); 14 (D14); 21 (D21) and 28 (D28) days after birth. They were divided into two experimental groups: COL+ group, which received fresh colostrum (4L) from their mothers; and COL-group which received frozen and acellular colostrum (4L) of donor cows. Chapter 1 -The aim of this chapter was to evaluate the presence and influence of colostrum leukocytes in the colonization of the gastrointestinal tract. For this, colostrum samples were seeded in TSA and MacConkey for TPC and TCC; and stool samples on blood agar, MacConkey and Salmonella-Shiguella. Calves presented higher frequency of diarrhea in D14 (COL+ = 78%; COL- = 60%). The COL- group showed higher TPC and TCC/mL (3,93x106 cfu/mL and 3,01x105 cfu/mL) compared to COL+ (0,94x106 cfu/mL and 0,78x105 cfu/mL). Regarding the isolated bacterial species, those that were more frequent in the COL+ were Proteus mirabilis (29.91%), Escherichia coli (28.04%), Citrobacter freundii (5.61%) and Staphylococcus spp (5.61%); in the COL-were Escherichia coli (28.70%), Proteus mirabilis (27.78%), Klebsiella pneumoniae (11.32%) and Morganella morganii (5.66%). The moment with more insolation in both groups was the D2 (COL+ = 26 strains; COL- = 27 strains), period in which started the diarrhea in calves. It was not possible to detect differences between the frequencies of microorganisms between the COL+ and COL- groups. The COL+ and COL- colostrum management did not influence the proportion of aerobic bacteria present in feces and the occurrence of diarrhea in calves during the neonatal period. Chapter 2 The aim of this chapter was to evaluate the influence of colostrum leukocytes in the innate immune response in Holstein calves. The animals were submitted to clinical examination, followed by blood samples collection to perform laboratory tests. The serum cortisol and haptoglobin concentrations did not show statistical differences while the iron concentration was different between groups at D7. The leukogram did not show difference to total leukocytes and absolute neutrophils, but there was a trend between groups at D7 for relative values of neutrophils. The CH138+CD62L+ marker showed no difference between groups, despite an increased expression was detected in COL-. The expression of CH138+CD62L- was greater in COL+ at D14. The phagocytosis and production of H2O2 by blood neutrophils showed similar profile in relation to S. aureus and E. coli between groups, although COL- presented greater phagocytosis intensity from D7 to D14. There was a trend for the increase of granulocyte proportion, releasing basal H2O2 at D14 for COL-, however COL+ presented trend to a higher intensity of phagocytosis at D21. The proportion of granulocytes (%) stimulated with S. aureus releasing H2O2 was greater in COL+ at D7, while stimulation with E. coli resulted in no differences between the groups. The fluorescence intensity was higher and gradual in COL+ when cells were stimulated; however, it was not detected statistical differences. The colostrum cells influenced in the health profile presented by the calves, with a higher intensity of diarrhea, lower levels of serum iron and anemia in the group that received frozen colostrum. The migration of blood granulocytes was faster and more intense in COL+ in relation to COL- after natural exposure to pathogens that cause diarrhea. The phagocytosis rate (%) of granulocytes showed similarity between groups, although the fluorescence intensity of COL- was more intense. In contrast, the COL+ demonstrated greater ability in producing H2O2

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:48:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andreia Garcia Wentz.pdf: 1194628 bytes, checksum: ab1fd705836544ee5b8b69c7a5a49595 (MD5) Previous issue date: 2016-03-07 / The present study aimed to compare three methods of conservation (no added preservative, azidiol and bronopol), conservation of raw milk for total bacteria count analysis (TBC) for the standard counting method plating, chemical composition (fat, protein, lactose, total solids and fat solids), pH and freezing of milk. The research also aimed to study the influence of the storage period (days), temperature (cooled and uncooled) and the initial microbiological quality of raw milk samples. It was used a randomized block design with factorial arrangement of 3 (methods) x 2 (temperature) x 5 (times). The TBC was influenced by the preservative, since after seven days of storage the sample without preservative had greater TBC. In the unrefrigerated samples with bronopol there was a gradual reduction of TBC. It was observed that the samples preserved with azidiol, regardless of storage temperature, TBC reduced over time. The temperature affected the fat content (P <0.001). The protein, lactose, solids and milk medium density were influenced by the type of preservative and storage days (P <0.001). The pH was influenced by the type of preservative and the storage days (P <0.001). For TBC analysis, the use of azidiol, independent of refrigeration or storage, is the most appropriate method to maintain the original characteristics of the product. From the first day of storage of the samples, there was an increase of the average levels of protein, lactose and degreased solids in relation to the quantified on the collection day. On the other hand, the TBC was changed isolated by the initial TBC, storage temperature and storage days (P <0.001). There was an increase of TBC according to the days of storage, since until the first day of storage values increased already from the second day of storage TBC started to reduce. In fat content, there was only initial TBC effect and storage temperature (P <0.001). In the protein percentage there was the effect of days of storage, the protein increased until the first day of storage, where it stabilized until 7 days of storage. Lactose was amended by initial TBC and the storage days (P <0.001), lactose increased until the first day of storage, which stabilized until the seventh day. The total solids (TS) content was amended by initial TBC, temperature and storage days (P <0.001), samples with high TBC showed higher initial TS levels. The SD content was changed only by the initial TBC and the storage days (P <0.001). The pH was amended by initial TBC, temperature and days of storage. For TBC analysis, using azidiol preservative is dependent on the use of refrigeration during storage to maintain more stable microbiological characteristics over seven days of storage. For analysis of physical and chemical composition, from the first day of sample storage, there was an increase of protein, lactose and fat solids of milk, compared to levels observed when quantified in the same day of collection of milk / O presente estudo foi realizado objetivando comparar três métodos de conservação (sem adição de conservante, azidiol e bronopol), na conservação de leite cru destinado a análise de contagem bactéria total (CBT) pelo método de contagem padrão em placas, composição centesimal (gordura, proteína, lactose, sólidos totais e sólidos desengordurados), pH e do ponto de congelamento do leite. O trabalho também objetivou estudar a influência do período de armazenamento (dias), temperatura (refrigerado e não refrigerado) e a qualidade microbiológica inicial de amostras de leite cru. Foi utilizado delineamento em blocos casualizados com arranjo fatorial de 3 (métodos) x 2 (temperaturas) x 5 (tempos). A CBT foi influenciada pelo conservante, pois aos sete dias de armazenamento a amostra sem conservante apresentou maior CBT. Nas amostras com bronopol sem refrigeração houve redução gradual de CBT. Observou-se que as amostras conservadas com azidiol, independente da temperatura de armazenagem, reduziram a CBT ao longo do tempo. A temperatura influenciou o teor de gordura (P<0,001. Os teores de proteína, lactose, sólidos desengordurados e densidade média do leite foram influenciados pelo tipo de conservante e dias de armazenamento (P<0,001). O pH foi influenciado pelo tipo de conservante e pelos dias de armazenamento (P<0,001). Para análises de CBT, o uso de azidiol, independente de refrigeração ou armazenagem, é o método mais adequado para manter as características originais do produto. A partir do primeiro dia de armazenamento das amostras ocorre aumento dos teores médios de proteína, lactose e sólidos desengordurados em relação aos quantificados no dia da coleta. Por outro lado, a CBT foi alterada de forma isolada pela CBT inicial, temperatura de armazenamento e dias de armazenagem (P<0,001). Houve aumento da CBT de acordo com os dias de armazenamento, uma vez que até o primeiro dia de armazenamento os valores aumentaram, já a partir do segundo dia de armazenamento a CBT começou a reduzir. Nos teores de gordura, houve apenas efeito de CBT inicial e temperatura de armazenamento (P<0,001). Nos percentuais de proteína houve efeito de dias de armazenamento, a proteína aumentou até o primeiro dia de armazenamento, onde estabilizou até 7 dias de armazenamento. Lactose foi alterada pela CBT inicial e pelos dias de armazenamento (P<0,001), teor de lactose aumentou até o primeiro dia de armazenamento, onde estabilizou até o sétimo dia. O teor de ST foi alterado pela CBT inicial, temperatura e dias de armazenamento (P<0,001), amostras com alta CBT inicial apresentaram maiores teores de ST. O teor de SD foi alterado apenas pela CBT inicial e pelos dias de armazenamento (P<0,001). O pH foi alterado pela CBT inicial, temperatura e dias de armazenamento. Para análise de CBT, o uso de azidiol como conservante é dependente do uso de refrigeração durante a armazenagem para manter as características microbiológicas mais estáveis ao longo de sete dias de armazenamento. Para análises de composição físico-química, a partir do primeiro dia de armazenamento das amostras, ocorreu aumento dos teores de proteína, lactose e sólidos desengordurados do leite, em relação aos teores observados quando quantificados no mesmo dia da coleta do leite

O objetivo do trabalho foi avaliar a utilização da metodologia de citometria de fluxo na determinação da contagem bacteriana total (CBT) do leite cru. No primeiro estudo foi avaliado o efeito da temperatura de armazenamento, da idade da amostra e do tipo conservante sobre a CBT. Também foi estudada a possibilidade de se utilizar uma única amostra de leite para a realização das análises previstas na Instrução Normativa 51 (IN-51). Foram testadas, três temperaturas de armazenamento (0oC - congelado, 7oC - resfriamento e 24 oC - ambiente), três conservantes (bronopol, azidiol e sem conservante) e quatro tempos entre a coleta e a análise (idade da amostra) (um (D1), três (D3), cinco (D5) e sete (D7) dias). Foi considerado tratamento controle para análise de CBT, amostras refrigeradas, com azidiol e com um dia de idade. Para as análises de composição e CCS, o tratamento controle foram amostras refrigeradas, com bronopol e com um dia de idade. Os resultados indicaram que será necessária a coleta de duas amostras, uma destinada à determinação de CCS e composição, contendo bronopol e, outra, para CBT, contendo azidiol. A amostra para CBT poderá ser analisada em até sete dias após a coleta, desde que mantida sob refrigeração à 7ºC. Deve-se evitar o aquecimento ou o congelamento da amostra para CBT, bem como garantir a adição do azidiol. O segundo estudo teve como objetivo estabelecer a correlação entre os métodos de referência e de citometria de fluxo na determinação da CBT. Amostras coletadas nos meses de junho à setembro (n=155) foram agrupadas considerando-se estação da seca e as coletadas nos meses de novembro e dezembro (n=68), estação das águas. Foram realizadas análises simultâneas pelos métodos de referência (contagem padrão em placas) e de citometria de fluxo (equipamento Bactocount), sendo os resultados expressos em unidades formadoras de colônia (UFC) e contagem individual de bactérias (CIB), respectivamente. As equações lineares de correlação entre a CIB e UFC foram semelhantes nas estações, indicando que uma única equação pode ser utilizada ao longo do ano para transformar os resultados de CIB para UFC. A equação linear obtida foi: log(UFC) = log(CIB) x 0,7224 + 1,4617 com coeficiente de correlação de 0,8125. A acurácia do equipamento Bactocount na estimativa do valor de referência, expressa pelo erro padrão (s(y,x)), foi de 0,309 log UFC/mL. Os resultados mostraram que o equipamento Bactocount pode ser calibrado para expressar os resultados em UFC e com isso ser utilizado no monitoramento da qualidade do leite. / The objective of this study was to evaluate the utilization of electronic flow cytometry to determine total bacterial count (TBC) of raw milk. In the first experiment, the effect of storage temperature, sample age and milk preservative type on TBC were evaluated. Additionally, the use of a single milk sample to performance regulatory milk analysis under the Normative Instruction 51 (NI-51) was tested. Effects were standardized as: three storage temperatures (0ºC - freezer, 7ºC - refrigerator and 24ºC - room temperature), four sample ages (1 (D1), 3 (D3), 5 (D5) and 7 (D7) days) and three milk preservatives (bronopol, azidiol and no preservative). Control treatment for TBC analysis was defined as refrigerated milk samples containing azidiol with 1 day of storage. For determination of milk components and somatic cell count (SCC), control treatment was defined as refrigerated milk samples containing bronopol with 1 day of storage. Results of the first experiment showed that two milk samples are necessary to performance regulatory milk analysis under the NI-51; one containing bronopol should be used for determination of milk components and SCC, and other containing azidiol for TBC. Milk samples used for TBC can be tested until 7 days after sampling when they are kept at 7ºC. Freezing or heating milk samples for TBC analysis should be avoided and addition of azidiol is always necessary. The second experiment was designed to determine a correlation between two methods of TBC, electronic flow cytometry and standard plate count. Milk samples collected from June to September (n = 155) were named as dry season samples and milk samples collected in November and December (n = 68) were named as rainy season samples. Each milk sample was used to run both methods of TBC. Results were expressed as individual bacterial count (IBC) and colony forming unit (CFU) for electronic flow cytometry (Bactocount) and standard plate count, respectively. The linear equations of correlation between IBC and CFU had similar patterns in both seasons, dry and rainy, indicating that a single equation can be used to transform IBC results in CFU along the year. The linear equation was defined as log(CFU) = 0.7224 x log(IBC) + 1.4617 with coefficient of correlation of 0.8125. The accuracy of Bactocount in estimating reference values, denoted by the standard error (s(y,x)), was 0.309 log CFU/mL. The results showed that Bactocount can be calibrated to express TBC readings in CFU and, consequently, be used to monitor milk quality.

Objetivou-se utilizar o controle estatístico de processo (CEP) como ferramenta de melhoria da qualidade do leite. O objetivo do primeiro estudo foi avaliar o CEP como ferramenta de identificação de variações não naturais, na qualidade do leite, passíveis de serem manipuladas. Para este estudo, foram utilizados dados de produção de leite, de contagem de células somáticas (CSS) e de contagem bacteriana total (CBT) de 384 fazendas, obtidos do banco de dados da Clínica do Leite - ESALQ/ USP no ano de 2009. Avaliou-se os efeitos naturais (época do ano e produção de leite) sobre a variação de CCS e CBT, e adicionalmente, foram gerados gráficos de controle para escore de células somáticas (ECS) e contagem bacteriana total transformada (tCBT), com a finalidade de identificar fontes de variação não naturais em um grupo de quatro fazendas. A variabilidade das informações foi avaliada pelo estimador do desvio padrão (sigma), calculado com base na amplitude móvel. Verificou-se que a época do ano influenciou significativamente o ECS e a tCBT. Os gráficos de controle, dentro de cada época, indicaram a presença de variações não naturais no ECS e na tCBT no grupo de fazendas avaliadas. Além disso, os gráficos de controle também caracterizaram fazendas em controle estatístico de processos. No segundo estudo objetivou-se utilizar o CEP como ferramenta de identificação e classificação de fazendas com maiores probabilidades de violarem os padrões de qualidade utilizados pela indústria. Foram utilizados dados de CCS e CBT de 452 fazendas, no período de janeiro de 2009 a março de 2010. Calcularam-se as proporções de violação nos padrões de qualidade, considerando os limites de CCS = 400.000 céls./ mL e CBT = 100.000 UFC/ mL. Foram calculados os índices de capacidade (Cpk) e classificaram-se as fazendas segundo quatro categorias de médias e de índices Cpk. As fazendas que apresentaram maiores médias e desvios obtiveram maiores frequências de violação. As fazendas com médias inferiores aos limites propostos para CCS e CBT representaram, respectivamente, 25,05 % e 97,78 % das fazendas. Entretanto, a proporção de fazendas que forneceram leite consistentemente dentro dos padrões de qualidade avaliados (Cpk 1) representou 4,65 % e 35,17 % das propriedades para CCS e CBT respectivamente. Portanto, a aplicação do CEP dentro das fazendas é uma ferramenta adicional para monitorar a qualidade do leite produzido, o índice Cpk pode ser utilizado em conjunto com os atuais modelos de caracterização da qualidade do leite de fazendas pelas indústrias, uma vez que identifica rebanhos mais consistentes em produzir leite dentro de um padrão de qualidade. / This study aimed to employ statistical process control (SPC) as a tool to improve milk quality. The first objective of the study was to evaluate SPC as tool to identify non-natural variation of milk quality that are possible to be manipulated. In this study, data on milk production, somatic cell count (SCC), and total bacterial count (TBC) of 384 farms were used, provided by database of Clínica do Leite ESALQ/ USP in 2009. Natural effects (time of year and milk production) trough SCC and TBC variation were evaluated, and additionally, control charts for score cell somatic (SCS) and total bacterial count transformed (TBCt) were built aiming to identify sources of non-natural variations in a group of four farms. The variability of information was evaluated trough standard deviation estimator (sigma), calculated with basis of moving range. It was observed that time of year influenced significantly SCS and TBCt. The control charts, in each period, indicated signs of non-natural variation in SCS and TBCt in the group of herds evaluated. Furthermore, the control charts characterized the farms in statistical process control. The second study aimed to use SPC as a tool for identification and rating farms with larger probabilities of infraction on quality standard used by industry. Data of SCC and TBC from 452 farms, from January 2009 to March 2010, were used. The proportion of violation in quality standard, regarding the limits of SCC = 4000,000 cells/ mL and TBC = 100,000 CFU/ mL was calculated. Capability indices (Cpk) were calculated and farms were categorized into four classes of Cpk means and indices. Farms that presented larger means and deviation shoed superior frequencies of violation. Herds with means below the proposed limits of SCC and TBC represented, respectively, 25.05 % and 97.78 % of farms. However, proportion of farms that delivered milk consistently within the standards of quality evaluated (Cpk 1) represented 4.65 % and 35.17 % of farms for SCC and TBC, respectively. Therefore, application of SPC on farms is an additional tool for monitoring milk quality produced, the index Cpk can be used, by industries, associated with the current models to characterize milk quality from farms, since it identifies herds more consistent in producing quality-standard milk.

Orientador: Luiz Francisco Prata / Banca: Gener Tadeu Pereira / Banca: Anna Monteiro Correia Lima Ribeiro / Resumo: Este trabalho teve por finalidade avaliar o resultado dos controles ambientais e operacionais, rotineiros e derivados do plano APPCC - Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle, aplicados ao abate de bovinos, e da pesquisa de microrganismos potencialmente patogênicos (Escherichia coli O157:H7, Salmonella enterica e Listeria monocytogenes). Com duração de um ano, a pesquisa foi desenvolvida em abatedouro-frigorífico habilitado à exportação localizado no Estado de São Paulo, Brasil. Foram analisadas 411 amostras ambientais para pesquisa de Listeria spp., 1.192 amostras de superfície de contato para a Contagem Bacteriana Total (CBT), 200, 100, 775, 264 e 100 amostras de superfície de carcaça para CBT, Coliformes totais, E. coli, Salmonella spp. e E. coli O157:H7, respectivamente, além de 256 amostras de recortes cárneos para a pesquisa de E. coli O157:H7. Os resultados evidenciaram condição higiênica aceitável para 51,1% das amostras ambientais de CBT, com 62,9% de amostras não aceitáveis no setor de abate. Um valor elevado de amostras (15,1%) foi positivo para Listeria spp. e para Listeria monocytogenes (4,6%). Observou-se que 89,6%, 2,8% e 7,6% das amostras de carcaça foram satisfatórias, aceitáveis e insatisfatórias para E. coli, respectivamente. Para a amostragem comparativa, 88,5% das amostras apresentaram-se satisfatórias para CBT, 84% para Coliformes Totais e 83,6% para E. coli. Nenhuma das amostras de carcaça analisadas foi positiva para Salmonella spp. ou para E. coli O157:H7. A frequência da ocorrência de E. coli O157:H7 em amostras de recortes cárneos (carne industrial) foi de 0,31%, com apenas uma amostra positiva / Abstract: This study aimed to evaluate the result of the environmental and operational controls which are routine or derived from HACCP Plan - Hazard Analysis and Critical Control Points, applied to slaughter cattle, and potentially pathogenic microorganisms research (Escherichia coli O157:H7, Salmonella enterica and Listeria monocytogenes). During one year, the research was developed in a slaughterhouse, enabled to export, located in the state of São Paulo, Brazil. We analyzed 411 environmental samples for Listeria spp. research, 1.192 samples of surface contact for Total Bacterial Count (TBC), 200, 100, 775, 264 and 100 samples of carcass surface for TBC, Total Coliform, E. coli, Salmonella spp. and E. coli O157:H7, respectively, besides 256 samples of meat cuts for E. coli O157:H7 research. The results showed that 51,1% of the environmental samples of TBC were in acceptable hygienic condition and 62,9% of samples were not acceptable in the slaughter industry. A high value of samples (15,1%) was positive for Listeria spp. and Listeria monocytogenes (4,6%). It was observed that 89,6%, 2,8% and 7,6% of the samples of carcass were satisfactory, acceptable and unsatisfactory for E. coli, respectively. For comparative sampling, 88,5% of the samples were satisfactory for TBC, 84% for Total Coliform and 83, 6% for E. coli. None of the samples of carcass tested was positive for Salmonella spp. or E. coli O157:H7. The frequency of the occurrence of E. coli O157:H7 in samples of meat cuts (meat industry) was 0,31%, with only one positive sample / Mestre