Orientadora: Profa. Dra. Christiane Bertachini Lombello / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Biomédica, 2014. / A engenharia de tecidos envolve o desenvolvimento de novos materiais ou dispositivos capazes de interações específicas com os tecidos biológicos, buscando a utilização de materiais biocompatíveis que devem servir como arcabouço para o crescimento de células in vitro, organizando e desenvolvendo o tecido que posteriormente será implantado no paciente. Uma variedade de arcabouços como hidrogéis e polímeros, sintéticos e naturais, têm sido investigados para a expansão de condrócitos in vitro, visando o reparo da cartilagem lesionada. Uma molécula de interesse particular na regeneração de cartilagem é o ácido hialurónico (AH). Trata-se de um biopolímero atraente para a fabricação de arcabouços artificiais para engenharia de tecidos por ser biocompatível e biodegradável. A biocompatibilidade do AH deve-se ao fato de estar presente na matriz extracelular nativa, deste modo, cria-se um ambiente propício que facilita a adesão, proliferação e diferenciação celular, para além da existência de sinalização celular específica, o que contribui para a regeneração do tecido. O uso de hidrogel composto de ácido hialurónico e quitosana (QUI) também tem sido investigado em aplicações de engenharia de tecidos de cartilagem, com resultados promissores. A utilização da QUI visa a aprimorar as propriedades mecânicas do AH, para uma proposição futura de aplicação clínica na regeneração da cartilagem articular. Baseando-se nestas informações, este trabalho visa avaliar inicialmente os aspectos da interação celular com biomaterial polimérico a base de AH em blendas com QUI. A abordagem da hipótese levantada envolve a síntese e análises de intumescimento e degradação da blenda polimérica; a inoculação de células no biomaterial; análises de citotoxicidade, adesão, proliferação e morfologia celular sobre a blenda. O ensaio de intumescimento demonstrou a capacidade hidrofílica da blenda, o que resultou em um aumento de 300 % de sua massa inicial após 24 horas de imersão em solução aquosa. Os dados de degradação permitiram a previsão do comportamento das amostras de blenda em PBS em até 30 dias, mostrando que tais amostras apresentam boa estabilidade em PBS, apresentando praticamente nenhuma perda de massa (3 %) no período analisado. A avaliação da citotoxicidade mostrou que os biomateriais, incluindo o AH, a QUI e a blenda, não foram citotóxicos para células Vero. Com a análise quantitativa realizada com o MTT pode-se verificar uma viabilidade celular de 98 % para a blenda, confirmando assim a sua não citotoxicidade. Os ensaios de microscopia de luz e eletrônica das células cultivadas sobre a blenda demonstraram adesão, espalhamento e proliferação celular sobre este biomaterial, diferenciados do padrão controle das células. Com isto, pode-se inferir que a blenda produzida a partir de AH e QUI é um hidrogel promissor para aplicações em Engenharia de Tecido, objetivando futuramente o tecido cartilaginoso. / Tissue engineering involves the development of new materials or devices capable of specific interactions with biological tissues, searching the use of biocompatible materials as scaffolds for cell growth in vitro, organizing and developing tissue that is subsequently implanted into patient. A variety of scaffolds such as polymeric hydrogels, natural and synthetic, have been investigated for the expansion of chondrocytes in vitro in order to repair the damaged cartilage. An hydrogel of particular interest in cartilage regeneration is hyaluronic acid (HA). HA are attractive biopolymers for manufacturing artificial scaffolds for tissue engineering it is biocompatible and biodegradable. The biocompatibility of HA is due to the fact that it is present in native extracellular matrix, thus creates an environment, which facilitates the adhesion, proliferation and differentiation, in addition to the existence of specific cell signaling, which contribute to tissue regeneration. The use of hydrogel composed of hyaluronic acid and chitosan has also been investigated for applications in tissue engineering of soft tissues, like cartilage, with promising results. The use of chitosan aims to improve the mechanical properties of HA. Based on this information, this study aims to evaluate initial aspects of cell interaction with the polymeric biomaterials based on hyaluronic acid in blends with chitosan. The approach to hypothesis involves synthesis and analysis of swelling and degradation of the polymer blend; inoculation of cells on the biomaterial; analysis of cytotoxicity, adhesion and cell morphology on the blend. The swelling assay demonstrated hydrophilicity of the blend, resulting in an increase of 300 % of its initial weight after 24 hours of immersion in aqueous solution. The degradation data allowed the prediction of the behavior of the samples blend in PBS for up to 30 days, showing that these samples had good stability in PBS, with practically no weigth loss (3 %) in the period analyzed. The evaluation of cytotoxicity showed that the biomaterials, including hyaluronic acid, chitosan and the blends, were non cytotoxic for Vero cells. The quantitative analysis performed with the MTT can verify a cell viability of 98 % for the blend, thus confirming its not cytotoxicity. The experiments of light and electron microscopy of .cultured cells on the blend showed adhesion, spreading and proliferation on this biomaterial, distinguished from the pattern of the control cells. These results showed that the blends produced from CHI and HA hydrogels are promising for applications in tissue engineering, aiming at future cartilaginous tissue.

Orientador(a): Profª Dra. Christiane Bertachini Lombello / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Biomédica, 2016. / A realização de ensaios de citotoxicidade in vitro e essencial na caracterizacao inicial da biocompatibilidade de biomateriais que visam aplicacao clinica. Pela exposicao de uma cultura celular ao contato direto, indireto ou ao extrato de determinado material de interesse e possivel caracterizar a presenca e severidade de efeito citotoxico resultante. Porem, a sensibilidade dos diferentes ensaios e variavel e influenciada por inumeros fatores, relacionados as proprias condicoes de ensaio utilizadas e parametros celulares avaliados, bem como a natureza do biomaterial em analise. Assim, o estudo comparativo desses ensaios in vitro e de suas variacoes metodologicas contribui para o melhor entendimento dos protocolos empregados atualmente, e de maior relevancia devido as questoes eticas relativas ao uso de animais em ensaios biologicos. Esse estudo buscou, portanto, analisar comparativamente a influencia de diferentes condicoes de ensaio na sensibilidade dos testes de citotoxicidade - contato direto, indireto (difusao em agar) e por extrato - segundo norma ISO 10993:5 (2009), alem de avaliar a correlacao entre os resultados desses ensaios e dos parametros de citotoxicidade utilizados. Para tal, utilizou-se linhagem celular Vero e materiais conhecidamente nao citotoxicos (papel filtro) e citotoxicos (latex) como referenciais. Os parametros celulares de morfologia, proliferacao e viabilidade foram avaliados, qualitativa e/ou quantitativamente, apos 24 h, 48 h, 72 h e 120 h de ensaio. Todos os ensaios foram eficazes na avaliacao de citotoxicidade, quando analisados os parametros celulares resultantes da interacao. Porem, para a referencia citotoxica, o efeito sobre as celulas foi distinto entre os ensaios apos 24 h de exposicao, sendo mais pronunciado no ensaio por extrato. Alem disso, o ensaio de contato direto apresentou maior variabilidade quanto a viabilidade e proliferacao celular. Verificou-se ainda, que para maiores tempos de exposicao ha reducao na viabilidade celular, inclusive para amostras nao citotoxicas, independente do ensaio. A avaliacao de citotoxicidade de representantes das tres principais classes de biomateriais - ¿À-TCP (ceramica), aco AISI 316L (metal), e gelatina reticulada (polimero), segundo mesmos ensaios, porem restritos aos tempos de 24 h e 48 h, evidenciaram a nao citotoxicidade dos dois primeiros. Porem, o ensaio por contato direto nao foi o mais adequado na avaliacao do biomaterial ceramico, devido a movimentacao da amostra, dando preferencia nesse caso aos demais ensaios. Ja para a amostra metalica, apesar da influencia de seu peso no contato direto os resultados foram representativos da ausencia de citotoxicidade. Assim, podendo ser avaliado por qualquer dos ensaios. O ensaio por extrato foi o de maior sensibilidade na deteccao do potencial citotoxico da gelatina, esse podendo ser indicado como metodo de escolha no estudo de polimeros reticulados. Como a sensibilidade entre os ensaios pode variar para um mesmo tempo de exposicao e ser influenciada pelo tipo de material em analise, principalmente quando este apresenta algum potencial citotoxico, e necessario cautela na escolha do tipo de ensaio utilizado para avaliacoes de citotoxicidade. Dessa maneira, a integracao entre resultados provenientes da avaliacao de diferentes condicoes de ensaio e parametros celulares, qualitativos e quantitativos, bem como relacionados ao comprometimento fisico/morfologico e funcional, permite maior confiabilidade na caracterizacao previa da presenca e severidade de citotoxicidade in vitro de biomateriais. / The fulfilment of in vitro cytotoxicity assays is essential for initial characterization of biocompatibility of biomaterials that are intended for clinical application. By exposure of a cell culture to direct or indirect contact with certain material of interest, or of its extract it is possible to characterize the resulting cytotoxicity effects. However, the sensitivity of the tests is variable and influenced by many factors, related to the different test conditions used and cellular parameters evaluated, as well as the nature of the biomaterial under assessment. Thus, the comparative study of these assays and its methodological variations contribute to a better understanding of the protocols currently employed. And even more relevant, in face of the ethical issues related to animal use in biological assays. Therefore, this study seeks to comparatively analyze the influence of different test conditions on the sensitivity of the cytotoxicity tests, by direct, indirect contact (agar diffusion) and for extract, according to ISO 10993: 5 (2009) and to evaluate the correlation between the results of those assays and the parameters used to detect the cytotoxicity. To this end, the study employed the Vero cell line and known non-cytotoxic (filter paper) and cytotoxic (latex) materials as reference. The parameters evaluated were cell morphology, proliferation and viability, thru qualitative and quantitative means, after 24h, 48h, 72h and 120 hours of assay duration. All assays were effective in the evaluation of cytotoxicity, resulting from the interaction. However, for the cytotoxic reference, the effect on the cells was different between assays after 24 hours of exposure and, also more pronounced for the extract assay. Besides that, the direct contact assay showed greater variability for both the cell viability and proliferation data. It was also found that for longer exposure times there is a decrease in cell viability, for all samples, including the non-cytotoxic one, and it is not influenced by the type of assay. Cytotoxicity evaluation of representatives of the three main biomaterials classes - â-TCP (ceramic), steel AISI 316L (metal), and crosslinked-gelatin (polymer) ¿ under the same conditions, yet restricted to 24h and 48h of exposure time, showed that the first two samples mentioned are non-cytotoxic. However, the direct contact assay was not the most adequate to evaluate the ceramic biomaterial, due to sample movement, preference being given in this case to the use of the other assays. For the metal, despite the influence of their weight, while in direct contact, the results where representative of the absence of cytotoxicity. Thus, all assays can be used in its evaluation. The extract assay was the most sensitive in detecting the potential cytotoxic effect of the crosslinked-gelatin, and could possibly be indicated as the method of choice when studying crosslinked polymers. Since the sensitivity between assays may vary for the same exposure time and be influenced by the type of material under analysis, especially when it presents a potential cytotoxicity; caution is required when selecting the assay for cytotoxic evaluation. Therefore, combining the results from different assay conditions and cellular parameters, qualitative and quantitative, as well as related to the physical / morphological and functional impairments, allows for greater reliability in the initial biomaterial characterization of in vitro cytotoxicity regarding their presence and severity.

Orientadora: Profa. Dra. Juliana Kelmy Macário de Faria Daguano / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Biomédica, 2016. / Alterações associadas ao envelhecimento e algumas doenças podem afetar o controle postural influenciando de maneira negativa a qualidade de vida das pessoas. Há muitos testes que podem ser utilizados para descrever o controle postural do ser humano, entretanto, ainda não há um consenso de quais são os melhores testes a serem empregados durante a avaliação para extrair informações relevantes da condição de equilíbrio do Vitrocerâmicas do sistema Li2O.SiO2, contendo como fase majoritária o dissilicato de lítio, têm sido utilizadas clinicamente como biomateriais quase inertes na área de reparação óssea, devido à boa resistência mecânica, apesar de, por vezes, não apresentarem biocompatibilidade e biofuncionalidade completamente satisfatórias. Assim, vitrocerâmicas bioativas à base de Li2O.SiO2 surgem como uma alternativa promissora. O objetivo deste trabalho é avaliar a biocompatibilidade in vitro de um vidro base e duas vitrocerâmicas ¿ contendo metassilicato de lítio e dissilicato de lítio, visando à aplicação como reparador ósseo. Amostras dos três grupos foram caracterizadas por difração de raios X (DRX). Após análise das fases, os materiais foram submetidos aos testes in vitro de bioatividade e biodegradação, bem como ao de citotoxicidade e de adesão e proliferação em meio celular. O teste de bioatividade avaliou a formação de hidroxiapatita carbonatada (HCA) na superfície dos materiais após imersão em solução simuladora de fluído corpóreo (SBF) por períodos de até 14 dias, com o auxílio da técnica de espectroscopia no infravermelho por transformada de Fourier (FTIR), e o teste de biodegradação foi utilizado para quantificar a liberação de lítio (pela técnica de espectrometria de absorção atômica com chama - FAAS) e a perda de massa do material em solução tampão TRIS-HCl, por períodos de imersão de até 28 dias. Após os diversos períodos de imersão, as amostras foram analisadas por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). Surpreendentemente, apenas a vitrocerâmica contendo majoritariamente a fase dissilicato de lítio (índice de cristalinidade ~ 79%) se mostrou bioativa após 14 dias de imersão em SBF. Em relação à avaliação da biodegradação, houve maior perda de massa para o vidro após 28 dias, e somente este grupo apresentou a concentração de íons Li+ na solução dentro da faixa considerada tóxica, após 14 dias de imersão em TRIS-HCl. Acerca da citotoxicidade, nenhum dos grupos se mostrou citotóxico. Em relação à adesão e à proliferação celular, o dissilicato de lítio apresentou os melhores resultados, podendo se verificar a formação de matriz mineralizada após 21 dias. Os resultados mostram que dentre os materiais analisados, a vitrocerâmica à base de dissilicato de lítio apresenta grande potencial para uso como biomaterial na área de regeneração óssea. / Glass-ceramics based on Li2O.SiO2 system, containing lithium disilicate as major phase, have already been used clinically as almost inert biomaterials due to good mechanical strength, although sometimes they do not have completely satisfactory biocompatibility and biofunctionality. Therefore, bioactive Li2O.SiO2 glass-ceramics appear as a promising alternative. The aim of this study is to evaluate the in vitro biocompatibility of three experimental groups: a base glass and glass-ceramics - containing lithium metasilicate and lithium disilicate, looking for bone repair. Samples of the three experimental groups were characterized by X-Ray Diffraction (XRD). After analyze the phases, these materials were subjected to in vitro bioactivity and biodegradation tests as well as cytotoxicity and adhesion and proliferation in cellular medium tests. The bioactivity test evaluated the formation of hydroxycarbonate apatite (HCA) on the surface of the material after immersion in Simulated Body Fluid (SBF) for periods up to 14 days with the aid of Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR), and the biodegradation test was used to quantify the release of lithium (for Flame Atomic Absorption Spectrometry - FAAS) and the weight loss of the material in TRIS-HCl buffer solution, for periods up to 28 days. After several periods of immersion, the samples were analyzed by Scanning Electron Microscopy (SEM). Surprisingly, only the glass ceramic containing lithium disilicate as majoritary phase (Crystallinity Index ~ 79%) proved to be bioactive after 14 days of immersion in SBF. Regarding the evaluation of biodegradation, there was a greater weight loss for glass after 28 days and only this group showed the concentration of Li+ ions in the solution within the range considered toxic, after 14 days of immersion in TRIS ¿HCl. About the cytotoxicity, none of the groups showed to be cytotoxic. Regarding cellular adhesion and proliferation, the lithium disilicate showed the best results, being able to verify the formation of mineralized matrix after 21 days. The results showed that between the 3 experimantal groups analyzed, the lithium disilicate glass-ceramic have great potencial to be used as biomaterial for bone repair.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-27Bitstream added on 2014-06-13T19:41:00Z : No. of bitstreams: 1 garbinjunior_ea_dr_araca.pdf: 1251895 bytes, checksum: 7b31a949d6b870eb13f7eecb1fdb04a6 (MD5) / Com a finalidade de recuperar rebordos alveolares atróficos para posterior reabilitação com implantes osseointegrados, além do enxerto ósseo autógeno, o osso alógeno fresco congelado recentemente tem sido empregado. O objetivo deste estudo foi analisar comparativamente o reparo dos enxertos ósseos autógenos e alógenos congelado em bloco, através de análise histológica, histométrica e imunoistoquímica em coelhos. Material e método: vinte um animais foram anestesiados para a realização da cirurgia experimental onde, na região de ângulo de mandíbula esquerdo foi fixado um bloco ósseo autógeno de 0,8 cm de diâmetro, utilizando-se parafuso, e no lado direito foi fixado, da mesma forma, um bloco ósseo tratado pelo Banco de Tecidos Músculo-Esquelético. Cinco animais de cada grupo foram sacrificados nos períodos de 15, 45, 120 e 180 dias. Os cortes histológicos foram corados pela hematoxilina e eosina e pela técnica de imunoistoquímica para avaliar atividades de reabsorção e neoformação óssea. Resultados: a análise histométrica mostrou não haver diferença estatística entre os grupos em relação à interface óssea leito receptor/enxerto ósseo aos 15 dias, contudo, analisando o bloco enxertado, notou-se maior revascularização, reabsorção e substituição óssea no grupo osso autógeno, fato este comprovado estatisticamente pela análise imunoistoquímica. Nos períodos tardios, o osso autógeno foi substituído em todas as amostras, enquanto no grupo do osso alógeno fresco congelado foi sempre possível encontrar osso desvitalizado junto ao parafuso de fixação. Conclusão: o processo de reparo apresentou maior dinâmica para o grupo enxerto ósseo autógeno em relação ao osso alógeno fresco congelado. A substituição do enxerto autógeno foi completa enquanto... / The autogenous bone graft and the freeze allogenic bone graft have being used to reconstruct atrophic alveolar ridge to allow the use of osteointegrated implants rehabilitation. The aim of this study was to compare the healing process of autogenous and allogenic bone graft using the histological, histometrical, imunoistochemical analyses in rabts. Material and Methods: twenty one animals had surgery done to allow fixation of 0.8 cm diameter of autogenous tibia bone graft on the left mandibular angle, and allogenic tibia bone graft on the right madibular angle. Five animals from each group were sacrificed at 15, 45, 120, and 180 postoperative days. The histological cuts were stained by hematoxilin and eosin and imunohistochemical technique to evaluate the bone formation and resorption. Results: the histometric analyses of bone formation betweem the bone graft interface and mandibular bone showed no statistical difference on the 15 days, but, the graft surface evaluation showed more revascularization, resorption and bone formation on the autogenous bone graft group and it was confirmed statiscialy by the imunoistochemical analyses. On the lastest groups (120 and 180 postoperative days), the autogenous bone was totally replaced but on the allogenic group it was possible to find non vital bone next to the fixation screw. Conclusion: the bone repair showed more dynamic activity on the autogenous graft group and it was totally replaced. The allogenic graft was incorporated but, on the latest sacrificed groups, it was not totally replaced.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-11-21Bitstream added on 2014-06-13T20:42:55Z : No. of bitstreams: 1 gimenes_r_dr_araiq.pdf: 2947108 bytes, checksum: f3c4ec92aee4a4b292c3bf0d47a82b2e (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Neste trabalho, foi conduzido um estudo sistemático da síntese de compósitos poli(fluoreto de vinilideno-trifluoretileno)/titanato de bário - P(VDF-TrFE)/BT - para uso em Regeneração Tecidual Guiada (GTR). Esta técnica osteopromotiva tem sido amplamente empregada em tratamentos do periodonto. A GTR emprega uma barreira física (membrana) para promover a formação de osso pela migração de células ósseas na região isolada. Desta forma, estas células são capazes de regenerar o defeito ósseo pela exclusão da competição com células não-osteogênicas na reabsorção do coágulo. Desta forma, membranas de compósitos polímero-cerâmica piezoelétrica podem promover osteogênese por meio de potenciais elétricos produzidos e prover proteção mecânica a região isolada. Membranas deste tipo podem ser consideradas como barreiras alternativas para GTR. Nesta direção, as propriedades estruturais e elétricas dos compósitos P(VDF-TrFE)/BT foram avaliadas, bem como, sua biocompatibilidade in vitro. Os compósitos foram preparados pela mistura de pós de titanato de bário e poli(fluoreto de vinilideno-trifluoretileno) (VDF = 80mol%) em meio de dimetilformamida (DMF0). As membranas de compósitos foram obtidos utilizando os seguintes métodos: espalhamento de solução sobre substrato (SC), deposição em spincoating (SP) e precipitação em água seguido de prensagem a quente (WHP). Compósitos obtidos por precipitação em água apresentaram microestrutura heterogênea e superfícies adequadas. Compósitos com fração volumétrica de 0,55 apresentaram os melhores valores de polarização remanescente e constante dielétrica relativa (33,1mC/cm2 e 78, respectivamente). Compósitos com fração volumétrica de 0,10 e 0,50 apresentaram coeficiente piezoelétrico d33 igual a 15,5 e ~0 pC/N respectivamente. P(VDF-TrFE)/BT demonstraram melhor biocompatibilidade in vitro... / In this work, a systematic study on synthesis of poly(vinylidene fluoride-trifluoroethylene)/barium titanate - P(VDF-TrFE)/BT - composites for used in Guided Tissue Regeneration (GTR) was carried out. This osteopromotive technique has been widely employed on periodontal treatment. GTR utilizes a physical barrier (membrane) to promote bone-forming cell to migrate into secluded space. Hereby, these cells are able to regenerate the osseous defect, by the exclusion of competing non-osteogenic soft tissue cells on reabsorption. The osteogenic process also can be enhanced by application of electrical energy (direct current or pulsed electromagnetic field). Thereby, membranes of polymer-ceramic piezoelectric composites can promote the osteogenesis by means of electrics potentials produced and to provide mechanical protection to the secluded space. This kind of membrane can be considered an alternative barrier to GTR. In this way, the structural and electrical properties of P(VDF-TrFE)/BT composites were evaluated, as well as, their in vitro biocompatibility. The composites were prepared by mixing Barium Titanate powders and P(VDF-TrFE) (VDF=80mol%) on dimethylformamide medium (DMF). Composites membranes were made by following methods: solvent casting (SC), spincoating (SP), and precipitation on water followed by hot pressing (WHP). Composites obtained by WHP showed heterogeneous microstructure and adequate surfaces. The composite of ceramic fraction of 0.55 presented the best values of remanent polarization and relative dielectric constant (33.1mC/cm2 and 78, respectively). The piezoelectric coefficient d33 was 15,5 and ~0 pC/N for composites with volumetric fraction of 0.10 and 0.50 respectively. P(VDF-TrFE)/BT presented better in vitro biocompatibility when compared to commercial e-PTFE GTR barrier. Therefore, P(VDF-TrFE)/BT membrane developed could be an alternative to be used in GTR.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-27Bitstream added on 2014-06-13T19:22:10Z : No. of bitstreams: 1 abla_ms_dr_araca.pdf: 493211 bytes, checksum: 7b996be2b8e49d11e130d4903e67a50b (MD5) / O osso homógeno fresco congelado tem sido utilizado no intuito de substituir o osso autógeno. No entanto as suas propriedades de osteoindução e até mesmo osteocondução não estão bem conceituadas na literatura científica. Esse trabalho teve por objetivo avaliar amostras de tecido ósseo homógeno enxertados em humanos através das análises qualitativas histológica e imunoistoquímica. Para tal, dez pacientes previamente selecionados foram submetidos à cirurgia de reconstrução de defeitos ósseos em espessura, usando enxerto ósseo homógeno em bloco fresco congelado estabilizado e fixado por meio de parafusos bicorticais. Após período de integração de seia meses foi realizado procedimento de reabertura para instalação dos implantes osseointegráveis. Neste momento cirúrgico, amostras do enxerto ósseo foram removidas por meio de broca trefina. As amostras foram fixadas em formol 10%, levadas ao processamento para corte descalcificado em parafina e coradas por hematoxilina e eosina. Realizou-se processamento imunoistoquímico para a expressão da enzima Caspase 3. As lâminas foram levadas à microscopia óptica para realização das análises histológica e imunoistoquímica qualitativas. Os resultados mostraram tecido ósseo não vital, com poucas áreas de deposição de osso neoformado sobre a matriz amorfa, presença de infiltrado inflamatório com áreas de osteomielite e imunomarcação expressiva da enzima Caspase 3. Diante da metodologia empregada e dos resultados obtidos concluiu-se que o enxerto homógeno apresentou somente a propriedade biológica de osteocondução durante a fase de incorporação de seis meses / Allogeneic bone has been used fresh frozen in order to replace bone autograft. However, the properties of osteoinduction and osteoconduction are not even well-regarded in the scientific literature. This work aimed to evaluate samples of homogenous bone grafts in humans by qualitative histological analysis and immunohistochemistry. For this ten pre-selected patients underwent surgical reconstruction of bone defects in thick, homogenous bone graft using fresh frozen block stabilized and fixed by bicortical screws. After integration period of six months reopening procedure was performed for installation of osseointegrated implants. At this surgical time bone graft samples were removed by means of drill trephine. The samples were fixed in formalin 10%, taken to court for processing decalcified paraffin, and stained with hematoxylin and eosin. Immunohistochemistry was performed processing for the expression of the enzyme Caspase 3. The slides were brought to light microscopy to carry out the qualitative histology and immunohistochemistry. The results showed non-vital bone tissue, with few areas of deposition of new bone formation on the amorphous matrix, presence of chronic inflammatory infiltrate with areas of osteomyelitis, and immunostaining expressive of the enzyme Caspase 3. Given the methods employed and the results obtained it was concluded that the graft showed only a homogenous biological property of osteoconduction, during the incorporation of six months

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-01-25Bitstream added on 2014-06-13T19:03:55Z : No. of bitstreams: 1 costa_mmtm_dr_araca.pdf: 1110079 bytes, checksum: 91b6d45dfad96a82f57a7802c12b0cb7 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Para contornar algumas dificuldades de manipulação do agregado de trióxido mineral (MTA) convencional, um MTA fotopolimerizável vem sendo desenvolvido. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar a resposta tecidual frente ao uso deste material. Para isso, 57 tubos de polietileno preenchidos com o MTA experimental e o MTA cinza foram implantados em alvéolos de ratos. Como grupo controle, foram implantados tubos vazios. Os animais foram sacrificados após 30, 60 e 90 dias, sendo realizada a análise microscópica dos cortes obtidos e corados com Hematoxilina e Eosina. Foi possível concluir que o MTA fotopolimerizável apresentou uma resposta semelhante ao MTA cinza, caracterizada pela ausência de uma inflamação severa e pela deposição de tecido mineralizado em contato com o material. / The aim of this study was to evaluate the tissue reaction to a Light Cured MTA or MTA Ângelus® gray. It was used 57 animals, which were divided in three groups. In the Control Group, empty tubes were inserted into the rat’s sockets immediately after extraction. In the other groups, the tubes were filled with Light Cured MTA or MTA Ângelus®. After 30, 60 and 90 days after the implantation, the animals were sacrificed and the right hemi-maxilas were removed and processed in laboratory to analyses on light microscopy, with embedding in paraffin, cut with 6μm thickness and stained with HE. It was possible to conclude that Light Cured MTA presented a similar response when compared to MTA Ângelus®, being characterized by a mild inflammatory response and dystrophic calcifications areas. Despite of a favorable healing process obtained with this new experimental MTA, further studies should be conducted to elucidate these material properties and confirm the present results.

Resumo: Há grande interesse no desenvolvimento de meios para manutenção ou recomposição alveolar visando a instalação de implantes osseointegráveis. No presente estudo o processo de reparo alveolar após implante de vidro bioativo (Biogran®) foi avaliado histologicamente. Quatro macacos-prego (Cebus apella) adultos tiveram seus incisivos superiores extraídos e os alvéolos preenchidos com vidro bioativo - Biogran® (Grupo Tratado, n=6 alvéolos) ou por coágulo sangüíneo (Grupo Controle, n=4 alvéolos). Aos 100 dias pós-operatórios os animais foram sacrificados e os espécimes removidos para processamento histológico. Observou-se que os alvéolos do Grupo Controle apresentavam tecido ósseo maduro distribuído irregularmente em trabéculas esparsas com grandes espaços medulares. Já no Grupo Tratado, encontravam-se preenchidos por uma rede de tecido ósseo neoformado com configuração lamelar e ampla ocupação alveolar. Os poucos fragmentos remanescentes do material foram vistos rodeados por tecido conjuntivo ou em contato direto com o tecido ósseo. Concluiu-se que o implante intra-alveolar de vidro bioativo favoreceu a neoformação óssea, atuando como agente osteocondutor. / Abstract: Maintenance or reconstruction of alveolar process is a topic of great interest in oral rehabilitation with implants. The aim of this study was to investigate the histological features of alveolar wound healing in dental sockets grafted with bioactive glass. Four adult capuchin monkeys (Cebus apella) have their incisor teeth extracted and alveolus filled with particulate bioactive glass Biogran® (Test Group: n=6 alveolus) or blood coagulum (Control Group: n=4 alveolus). After 100 days, animals were sacrificed and specimens removed for histological processing. It was observed that Control Group presented mature neoformed bone irregularly distributed in few trabeculas with large medullar spaces. Alveolus of Test Group were filled with a net of lamellar neoformed bone. The few remaining particles of bioactive glass were surrounded by connective tissue or in close contact with bone tissue. It was concluded that intra-alveolar bioactive glass improved bone neoformation by osteoconductive action. / Orientador: Wilson Roberto Poi / Coorientador: Lizeti Toledo de Oliveira Ramalho / Banca: Robson Rodrigues Garcia / Banca: Daniela Atili Brandini / Banca: Idelmo Rangel Garcia Júnior / Doutor

Orientador: Samira Esteves Afonso Camargo / Banca: Luana Marotta Reis de Vasconcellos / Banca: Mônica Ghislaine Oliveira Alves / Banca: Cristina Pacheco Soares / Banca: Cacio de Moura Netto / Resumo: O peptídeoLL-37 (catelicidina derivada de humano), é liberado por algumas células humanas e capaz de neutralizar os tecidos com lipopolissacarídeo (LPS), além de atrair células da polpa, e induzir a angiogênese, características que o tornam um possível adjunto para a regeneração do complexo dentino-pulpar. O objetivo desse trabalho foi avaliar in vitro a biocompatibilidade do peptídeo LL-37 nas concentrações de 5 e 10 µg/mL, e sua possível atuação na diferenciação de células-tronco da polpa dentária (DPSC) para odontoblastoslike. Com esse propósito, foram avaliados: (a) a citotoxicidade, pelo teste MTT; (b) a genotoxicidade, através do ensaio do micronúcleo; (c) a produção e quantificação de óxido nítrico; (d) as fases do ciclo celular, por citometria; (e) a expressão de alguns genes associados à formação de tecido mineralizado, através do teste qRT-PCR; (f) o conteúdo de proteína total; (g) a atividade de fosfatase alcalina (ALP); e (h) a produção de sialofosfoproteína dentinária (DSPP), pelo ensaio imunoenzimático ELISA. Foi observado que as concentrações de 5 e 10 µg/mL de LL-37 não foram citotóxicas e ainda aumentaram, em geral, a viabilidade celular (p<0,05), sendo que os maiores valores de absorbância foram observados no 3° dia de contato. As concentrações testadas também não induziram genotoxicidade, após 7 dias de contato, tendo sido genotóxico apenas o grupo controle positivo (EMS) (p<0,05). Ainda, não foi observado diferença estatisticamente significativa na produção de nitrito, pelas células expostas ao LL-37 após 7 dias, em ambas as concentrações. A análise do ciclo celular, evidenciou maior porcentual de células na fase G0/G1, em todos os grupos (p<0,05). Quando estes foram comparados, foi observado maior quantidade de células na fase G0/G1 na concentração de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract : The LL 37 peptide (human derived cathelicidin) is released by some human cells and able of neutralizing the tissues that present lipopolysaccharide (LPS), as well as, attracts pulp cells and induces angiogenesis; characteristics that makes it a possible adjunct for regeneration of the dentin-pulp complex. The aim of this study was evaluate in vitro the biocompatibility of LL-37 in the concentrations of 5 and 10 µg/mL, and its possible performance in the differentiation of dental pulp stem cells (DPSC) into odontoblasts-like cells. For this purpose, it was evaluated: (a) the cytotoxicity by MTT assay; (b) the genotoxicity by the micronucleus test; (c) the production and quantification of nitric oxide; (d) the cell cycle, by flow cytometry; (e) the expression of genes associated with the mineralization by qRT-PCR; (f) the total protein content; (g) the alkaline phosphatase activity (ALP); and (h) the production of dentine sialofosfoprotein (DSPP) by indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). It was observed that the concentrations of 5 and 10 µg/ml of LL-37 were not cytotoxic, in addition to they increased, in general, the cell viability (p<0,05). Moreover, higher absorbance values were observed on 3rd day of contact. After 7 days, the tested concentrations also did not induce genotoxicity, (p<0,05); only the positive control group (EMS) was genotoxic (p<0.05). Furthermore, there was not statistical significance in the nitrite production by the cells exposed to LL-37 for 7 days, in both concentrations. The cell cycle test showed higher percentage of cells in the phase G0/G1 in all groups (p<0.05). When they were compared, it was noticied that concentration of 10 ug/ml of LL-37 arrested the cells in G0/G1 compared to the control group (p<0.05). On the other hand, the control group, exhibited higher amount of cells in G2 and mitosis...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

O objetivo do presente estudo foi avaliar a pasta à base de hidróxido de cálcio (Calen®), associada ou não ao digluconato de clorexidina a 0,4%, em cultura de macrófagos da linhagem RAW 264.7, cultura primária de células da linhagem osteoblástica e em tecido subcutâneo de camundongos. Além disso, foi avaliada a atividade antimicrobiana desses materiais. Em cultura de macrófagos RAW 264.7 foram avaliados os seguintes aspectos: a viabilidade celular (Ensaio de MTT), propriedades imunoestimuladoras (dosagem de óxido nítrico) e propriedades antiinflamatórias (dosagem de óxido nítrico, TNF-&alpha; e IL-1&alpha;). Em cultura primária de células da linhagem osteoblástica foram avaliados viabilidade celular (períodos de 3, 7 e 10 dias), conteúdo de proteína total (Método de Lowry modificado nos períodos de 7 e 10 dias), atividade da fosfatase alcalina (liberação de timolftaleína nos períodos de 7 e 10 dias e in situ pelo método do Fast red), proteínas da matriz não-colágena (marcação por Imunofluorescência Indireta e Fluorescência Direta por meio da utilização da faloidina e DAPI, nos períodos de 3, 7 e 14 dias) e formações nodulares de matriz mineralizada (marcação pelo vermelho de Alizarina nos períodos de 3, 7 e 14 dias). A atividade antimicrobiana foi avaliada por meio do teste de difusão em ágar, sobre 2 microrganismos indicadores (Enterococcus faecalis e Kocuria rhizophila). A biocompatibilidade após implantanção de tubos de polietileno contendo as pastas no tecido subcutâneo de camundongos isogênicos Balb/c. Os dados numéricos foram submetidos à análise estatística por meio do teste de Kruskal-Wallis e pós-teste de Dunn, com nível de significância de 5%. Os resultados referentes à exposição das células da linhagem RAW 264.7 de macrófagos evidenciou baixa atividade imunoestimuladora da pasta à base de hidróxido de cálcio (Calen®), associada ou não ao digluconato de clorexidina 0,4%, nas diferentes concentrações avaliadas. Por outro lado, pôde-se observar atividade antiinflamatória, com inibição na liberação de óxido nítrico e das citocinas (TNF-&alpha; e IL1-&alpha;), quando da utilização da associação hidróxido de cálcio e clorexidina na concentração de 25&micro;g/ml. Resultados semelhantes ao controle foram observados após a avaliação da pasta à base de hidróxido de cálcio (Calen®), associada ou não ao digluconato de clorexidina a 0,4% em cultura primária de células da linhagem osteoblástica uma vez que os dados numéricos do conteúdo de proteína total, da quantidade de fosfatase alcalina e das formações nodulares de matriz mineralizada não foram estatisticamente diferentes (p>0,05). Em relação à caracterização morfológica das culturas primárias os resultados obtidos foram semelhantes quando comparou-se a pasta Calen®, associada ou não à clorexidina a 0,4%. Em relação à atividade antimicrobiana, a associação hidróxido de cálcio e clorexidina promoveu a formação de maiores halos de inibição (em mm), em relação ao Enterococcus faecalis, embora sem diferença estatística significante com os demais grupos avaliados (p>0,05). No tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos, a análise microscópica demonstrou ser esta associação biocompatível, com tecido circunjacente e reacional, apresentando fibrosamento discreto e semelhante ao tecido conjuntivo fibroso normal, aos 63 dias de avaliação, sem diferença estatística com grupo controle (p>0,05). Com base nas metodologias empregadas e nos resultados obtidos pode-se concluir que a adição da clorexidina não apresentou benefícios adicionais à pasta à base de hidróxido de cálcio. / The aim of this study was to evaluate the calcium hydroxide-based paste (Calen®), associated or not to 0.4% chlorexidine digluconate, in culture of RAW 264.7 macrophages lineage, primary culture of osteoblastic lineage, and mice subcutaneous tissue. Besides we evaluated the antimicrobial activity of those materials. In RAW 264.7 macrophages culture the followed aspects were evaluated: cellular viability (MTT assay), immunestimulatory (nitric oxide detection) and anti-inflammatory (nitric oxide, TNF-&alpha; and IL-1-&alpha; detection) properties. In primary cell culture of osteoblastic lineage we evaluated the cellular viability for 3, 7 and 10 days, total protein content (Lowry modified method for 7 and 10 days), alkalinic phosphatase activity (thymolphthalein liberation for 7 and 10 days, and in situ by Fast red method), extracellular matrix noncollagen protein (stained by indirect immunofluorescence and direct fluorescence by phalloidin and DAPI for 3, 7 and 14 days), and mineralized matrix nodular formation (stained by Alizarin red for 3, 7 and 14 days). Antimicrobial activity was evaluated by agar diffusion test with Enterococcus faecalis and Kocuria rhizophila as indicators, and the biocompatibility after polyethylene tubes with the paste implanted into Balb/c mice subcutaneous tissue. The data were statistically analyzed by Kruskal-Wallis test, followed by Dunn\'s post test, considering a level of significance of 5%. The results of macrophage RAW 264.7 cells lineage exposition showed low stimullatory activity for the different concentrations evaluated of calcium hydroxide-based paste (Calen®), associated or not to 0.4% chlorexidine digluconate. On the other hand, we could observe anti-inflammatory activity with inhibition of nitric oxide and cytokines quantification (TNF--&alpha; e IL1--&alpha;), after the use of 25-&micro;g/ml calcium hydroxide associated to chlorhexidine (25-&micro;g/ml). Same results to the control were observed after evaluation of Calen® paste associated or not to 0.4% chlorexidine digluconate, in culture of RAW 264.7 macrophages lineage, primary culture of osteoblastic lineage because the data of total protein content, alkaline phosphatase, and mineralized matrix nodular formation were not statistically different (p>0.05). In relation to the morphological characterization of primary culture, the results obtained were the same after comparison of Calen® paste, associated or not to 0.4% chlorexidine digluconate. About antimicrobial activity, the association Calcium hydroxide and chlorhexidine promoted formation of largest inhibition halo (in mm) for Enterococcus faecalis, but with no statistically significant with others evaluated groups (p>0.05). The microscopic analysis in mice conjunctive subcutaneous tissue demonstrated biocompatibility of that association with the around and reactional tissue, sowing a discret fibrosis, as well as the normal conjunctive fibrous tissue after 63 days of evaluation with no statistically difference with the control group (p>0.05). Based on the methodology used, and the results obtained in this work, we could conclude that the addition of chlorexidine showed no additional benefits to the calcium hydroxide-based paste.