Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-30Bitstream added on 2015-04-09T12:47:45Z : No. of bitstreams: 1 000817133_20160730.pdf: 68740 bytes, checksum: ee6dfc1a38a4409cdffa8e1a8e0577ff (MD5) Bitstreams deleted on 2016-08-01T11:29:58Z: 000817133_20160730.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-01T11:30:55Z : No. of bitstreams: 1 000817133.pdf: 364091 bytes, checksum: 520831e02a55b8316a3d4a841d22c7e5 (MD5) / Staphylococcus aureus é o microrganismo que mais prevalece em casos de mastite em rebanhos bovinos leiteiros e isto ocorre devido a produção de vários fatores de virulência, inclusive aqueles relacionados a sua capacidade de se instalar no parênquima mamário. Sendo assim, as condições microbiológicas do leite cru que é fornecido às indústrias pode refletir no seu produto final, determinando riscos à saúde do consumidor. Diante do exposto, objetivou-se realizar o isolamento e identificação das estirpes de S. aureus de amostras de leite bubalino da raça Murrah, dos insufladores, água das mangueiras da sala de ordenha e mãos dos ordenhadores em uma propriedade rural em Analândia – SP nos meses de abril, junho, outubro e novembro. Foi avaliada, a capacidade produtora de biofilme in vitro” pelo método de aderência em microplacas e pelo cultivo em Agar Vermelho Congo (CRA), o perfil de sensibilidade dos S. aureus frente a antimicrobianos pelo método da difusão em disco além de identificar os genes que participam na formação de biofilme por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Das 147 estirpes de Staphylococcus spp isoladas, 32 foram identificadas como S. aureus. Dos isolados, 28,1% foram positivas para o gene icaA, 21,8% para o gene icaD, 28,1% para clfA, 50% clfB, 53,1% sarA e 50% para o gene hla. Todas os isolados demonstraram habilidade de produção de slime em Agar Vermelho Congo (CRA) e formação de biofilme em microplaca. Embora a frequência de isolamento de S. aureus foi baixa, essas estirpes podem ser consideradas potenciais patógenos zoonóticos / Staphylococcus aureus is the most common cause of mastitis in dairy herds due to its production of several virulence factors, including those related to its ability to colonize the teat parenchyma. The microbiological status of raw milk supplied to manufacturers may reflect on the final product and the associated risks to consumer health. Accordingly, the aim of this study was to isolate and characterize S. aureus strains from samples of Murrah buffalo milk, milking machines, water hoses from milking room and from the hands of milkers on a dairy farm located in Analândia – SP during the months of April, July, October, and November. Biofilm-producing capacity was evaluated in vitro” using a microtiter method and cultivation on Congo Red Agar (CRA). Antibiotic sensitivity testing was performed by the disk diffusion method and the identification of the genes involved in biofilm formation by Polymerase Chain Reaction (PCR). One hundred and forty-seven Staphylococcus spp. were isolated and 32 were identified as S. aureus. Of those isolates, 28.1% were positive for the icaA gene, 21.8% for the icaD gene, 28.1% for the clfA, 50.0% for the clfB, 53.1% for sarA and 50.0% for hla. All isolates produced slime on Congo Red Agar (CRA) and formed biofilms in a microtiter assay. Although the frequency of S. aureus was low, the stains isolated can be considered as potential zoonotic agents

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:33:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-15. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:48:04Z : No. of bitstreams: 1 000827368.pdf: 472014 bytes, checksum: 9454895a0e77c23b547713df1dc6e3fc (MD5) / Este estudo se propôs a avaliar a atividade antimicrobiana do princípio ativo Timol e de um enxaguatório bucal (LISTERINE® ZEROTM) sobre Candida albicans, Staphylococcus aureus e Streptococcus mutans e também sua citotoxicidade e genotoxicidade em culturas de macrófagos (RAW 264.7). Após determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e da Concentração Microbicida Mínima (CMM) pelo método de microdiluição em caldo do extrato foi avaliada a ação antimicrobiana do Timol e do LISTERINE® ZEROTM em biofilme. A citotoxicidade do Timol e do LISTERINE® ZEROTM foi avaliada sobre as células pelo método MTT e também pela quantificação de TNF-α pelo método imunoenzimático ELISA. Ainda, a genotoxicidade foi determinada pela formação de micronúcleos nas células após 24 h de exposição ao Timol e 1min ao LISTERINE® ZEROTM e ao etilmetano sulfanato (controle positivo). Os dados foram avaliados pelos testes estatísticos ANOVA e complementado pelo teste de Tukey e Kruskal Wallis (nível de significância de 5%). Obtivemos resultados favoráveis quanto a ação antimicrobiana do princípio ativo para os micro-organismos testados sendo a CMM de 160 μg mL-1 eficaz para S. mutans e S. aureus e de 80 μg mL-1 para C. albicans, para LISTERINE® ZEROTM foi eficaz na concentração de 0, 3125 μg mL-1, em biofilme apresentou média de 1,85 ± 0,14 para Timol em S. mutans, 1,90 ± 0,07 para S. aureus e 6,66 ± 0,17 para C. albicans. A citotoxicidade do Timol foi observada acima de 5 μg mL-1, e o LISTERINE® ZEROTM foi tóxico para as células; quanto a genotoxicidade não foi observado dano ao nível de DNA. Desta forma concluímos que o princípio ativo Timol, possui ação antimicrobiana em concentrações mais elevadas, no entanto que nestas concentrações possui alta toxicidade celular, e o LISTERINE® ZEROTM possui ação antimicrobiana na menor concentração testada e é citotóxico / This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of the active ingredient thymol and a mouthwash (LISTERINE® ZEROTM) on Candida albicans, Staphylococcus aureus and Streptococcus mutans and also their cytotoxicity and genotoxicity in macrophage cultures (RAW 264.7). After determining the minimum inhibitory concentration (MIC) and Minimum Concentration Microbicide (CMM) by microdilution broth method extract was evaluated the antimicrobial action of thymol and LISTERINE® ZEROTM n biofilm. The cytotoxicity of thymol and LISTERINE® ZEROTM on the cells was evaluated by MTT method and also by quantifying TNF-α by ELISA immunoenzymatic method. Further, genotoxicity is determined by the formation of micronuclei in cells after 24 h of exposure to thymol and the LISTERINE® ZEROTM 1min and ethylmethane sulfonate (positive control). Data were analyzed by ANOVA and Tukey complemented by test and Kruskal Wallis (5% significance level). We obtained favorable results regarding the antimicrobial action of the active ingredient for the microorganisms tested with the CMM 160 mg L-1 effective for S. mutans and S. aureus and 80 mg L-1 for C. albicans to LISTERINE® ZEROTM was effective at levels of 0, 3125 mg L-1, biofilm had a mean of 1.85 ± 0.14 for thymol in S. mutans, 1.90 ± 0.07 to 6.66 ± S. aureus and 0, 17 for C. albicans. The cytotoxicity of thymol was observed above 5 mg L-1, and LISTERINE® ZEROTM was toxic to cells; as genotoxic damage was not observed at the level of DNA. Thus we conclude that the active ingredient thymol, has antimicrobial action in higher concentrations, however that these concentrations has high cellular toxicity, and the LISTERINE® ZEROTM has antimicrobial action in the smallest concentration tested and is cytotoxic

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-26Bitstream added on 2014-12-02T11:21:11Z : No. of bitstreams: 1 000798443_20150226.pdf: 399987 bytes, checksum: 543d4cc46e39f73299988030facaa4b7 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-02-27T13:20:33Z: 000798443_20150226.pdf,Bitstream added on 2015-02-27T13:21:09Z : No. of bitstreams: 1 000798443.pdf: 3592822 bytes, checksum: 340bdbff7002bc9a19186e1b6b64a169 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O surgimento de biofilmes de Candida albicans como uma forma de resistência microbiana em superfícies sólidas é um problema de saúde pública crescente, uma vez que as opções terapêuticas eficientes para a redução e eliminação deste são escassas, sobretudo devido à sua alta resistência a antifúngicos. As enzimas produzidas por micro-organismos despertam um grande interesse por representarem uma opção biotecnológica aos enxaguatórios e antifúngicos disponíveis no mercado. O objetivo deste estudo foi produzir, determinar a atividade, fracionar três diferentes enzimas fúngicas (protease, amilase e lipase) e estabelecer a efetividade destas na redução de biofilme de C. albicans, além de avaliar os possíveis mecanismos de ação destas enzimas sobre o biofilme. A produção enzimática foi realizada por diferentes linhagens fúngicas a partir de fermentação submersa em biorreator, acompanhada de estudo dos parâmetros bioquímicos de cada enzima. A avaliação da efetividade frente ao biofilme de C. albicans foi realizada por diferentes métodos: redução de biofilme de C. albicans em microplaca de 96 orifícios por XTT; redução do número de unidades formadoras de colônia de biofilme por contagem em ágar Sabouraud dextrose com cloranfenicol (SDA); redução de biofilme em corpos de prova de resina acrílica por XTT e redução do número de unidades formadoras de colônia dos corpos de prova por contagem em ágar SDA. Ainda, foi analisada também a influência destas enzimas sobre fatores de virulência, ergosterol de parede e sobre o desenvolvimento e arquitetura do biofilme com a análise por microscopia eletrônica de varredura. As três enzimas foram eficientes nos ensaios de redução de biofilme, sobretudo frente a biofilmes maduros, de 48 horas, reduzindo cerca de 80-90% deste tanto em microplacas como em corpos de prova. Nos ensaios em microplacas, a amilase foi mais ativa dentre as três, em contato de 30 ... / The emergence of Candida albicans biofilms as a form of microbial resistance on solid surfaces is a increasing public health problem, since the effective therapeutic options for the few reduction and elimination, mainly due to its high resistance to antifungals. The enzymes produced by microorganisms attract great interest because they represent an option to biotechnology and antifungal mouthwashes available in the market. The aim of this study was to produce, determine the activity, fractionate three different microbial enzymes (protease, amylase and lipase), and to evaluate the effectiveness in reducing biofilm of C. albicans besides the possible mechanisms of action of these enzymes on the biofilm. For enzyme production were used fungal strains submitted the liquid fermentation in bioreactor, accompanied by study of biochemical parameters of each enzyme. The assessment of effectiveness against biofilms of C. albicans was performed by different methods: Evaluation of the ability to reduce biofilm of C. albicans in microplate 96 wells by XTT; Evaluation of the reduction in the number of colony forming units of biofilm by counting in Sabouraud dextrose agar with chloramphenicol; Evaluation of biofilm reduction capacity of C. albicans in specimens of acrylic resin by XTT and reduction capacity of the number of colony forming units per count Sabouraud dextrose agar with chloramphenicol. In addition, it is also analyzed the influence of these enzymes on virulence factors and the development of biofilm architecture and by analysis in scanning electron microscopy. The three enzymes were effective in reducing assays well microplate as specimens, especially against mature biofilms, 48 hours. The assays in microplates, amylase was the most active enzyme of the three, in contact of 30 minutes, while the protease was more effective in contact of 60 minutes and the lipase was less active in both periods analyzed. However, in specimens, the enzymes ...

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-09-02Bitstream added on 2015-03-03T12:06:29Z : No. of bitstreams: 1 000807859.pdf: 889536 bytes, checksum: 75dcb268ecfd71c353fa79034285d48d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A zeína é uma proteína do glúten do milho muito utilizada na produção de filmes plásticos flexíveis e transparentes. O desenvolvimento de embalagens biodegradáveis à base de zeína tem um grande potencial para a melhoria da qualidade e aumento da vida de prateleira de alimentos, além de permitir a adição de compostos ativos, agregando assim, maior valor tecnológico aos biofilmes de zeína, tornando-os capazes de melhorar a qualidade dos alimentos e sua conservação. Este trabalho propôs o uso de nanocarbonato no desenvolvimento de filmes biodegradáveis à base de zeína para identificar a estrutura básica e as propriedades dos biomateriais. Os filmes foram elaborados pela técnica casting tendo como formulação base zeína, glicerol, ácido oléico, etanol e água, e incorporados com três concentrações de nanocarbonato (1, 2 e 3 g / 100 g de proteína) a fim de estudar sua estrutura. Os filmes foram avaliados quanto as suas propriedades mecânicas (resistência máxima à tração e porcentagem de elongação na ruptura), fisico-químicas (umidade, solubilidade, atividade de água e espessura), microestutrutra (Microscopia eletrônica de varredura (MEV) e Microscopia óptica (MO)), permeabilidade ao vapor de água, opacidade e cor. Os filmes apresentaram-se homogêneos, livre de partículas insolúveis, flexíveis e espessura uniforme. A adição do nanocarbonato resultou em materiais mais elásticos e flexíveis, com maior estabilidade e manutenção da cor e também mais claros, no entanto, apresentaram-se mais hidrofílicos quando comparados ao filme padrão. Na análise da estrutura verificou-se uma dispersão aleatória das nanopartículas na matriz polimérica indicando que não houve intercalação destas com a matriz. Verificou-se também um aumento no tamanho de agregados de lipídeos quando aumentou-se a concentração de nanocarbonato / Zein is a corn gluten protein that is widely used in the production of flexible and transparent plastic films. The development of biodegradable packaging based on Zein has great potential to improve the quality and increase the shelf-life of a fruit product, as well as permit the addition of active compounds, this will add greater value to Zein-based biofilms, making them able to improve food quality and conservation. The purpose of this work is to produce Zein biofilms added with nanocarbonate (1%, 2% e 3%) to identify the basic structure and properties of the biomaterials. These films, made by employing a technique known as casting, consist of a basic formulation of Zein, glycerol, oleic acid, ethanol and water, combined with three concentrations of nanocarbonate (1, 2 e 3 g / 100 g of protein) to study their structure. These materials were assessed according to their mechanical properties (tensile strength at break and elongation at break percentage), physical and chemical properties (humidity, solubility, water activity and thickness), microstructure (Scanning Electron Microscopy (SEM) and Optical Microscopy (MO)), water vapor permeability, opacity and color change. The films were homogenous, free of insoluble particles, flexible and uniform thickness. The addition of nanocarbonate resulted in more elastic and flexible material, more stability and maintenance of color and also lighter, however, were more hydrophilic compared with the standard film. The analysis of the structure there is a random dispersion of nanoparticles in the polymer matrix indicating no collation with the matrix. There was also an increase in size of the lipid when the concentration of nanocarbonate increased

Lactobacilos são um grupo de bactérias relacionadas com cárie dental. Há falta de estudos sobre a biologia populacional dos lactobacilos na cárie dental. O objetivo do estudo foi avaliar o efeito das modificações ambientais na composição, diversidade genética dos lactobacilos e Identificar a filogenia dos Lactobacillus paracasei isolados do biofilme. Lactobacilos foram isolados em um modelo de formação de biofilme in situ antes e depois de 28 dias de exposição à solução de sacarose 20%. As colônias foram randomicamente selecionadas do meio Rogosa Ágar e subcultivadas (n=222, 31 antes e 191 após período de exposição à sacarose). Os isolados foram identificados usando o seqüenciamento parcial dos genes pheS ou rpoA. As espécies de lactobacilos predominantes encontradas foram L. paracasei, L. fermentum e L. rhamnosus. A diferença na composição e na diversidade genética de lactobacilos associada às modificações ambientais no biofilme foi analisada através de PCR utilizando palíndromes repetitivos extragênicos (REP-PCR). Após a fase com sacarose, um maior número de lactobacilos pode ser encontrado no biofilme (p=0,001). A prevalência de L.fermentum foi similar na fase sem sacarose (6/11 indivíduos colonizados) e na fase com sacarose (8/11 indivíduos colonizados) (p=0,721). A prevalência de L. rhamnosus e L. paracasei aumentou no biofilme de 2/11 para 8/11 indivíduos (p= 0,028) e de 2/11 para 7/11 indivíduos colonizados (p=0,012) após exposição a sacarose, respectivamente. A prevalência de L. gasseri foi baixa e em ambas as fases (p=1,00). As espécies de Lactobacilos apresentaram maior diversidade na fase com sacarose (2 a 3 espécies por indivíduo) do que na fase sem sacarose (0 a 2 espécies por indivíduo) (p=0,045). Na maioria dos casos, diferentes genótipos estavam presentes na fase sem sacarose em comparação à fase com sacarose (p=0,01). Aqueles lactobacilos identificados como L. paracasei foram também submetidos à tipificação através do seqüenciamento de múltiplos loci (MLST). No MLST, foi obtida a sequência parcial de 7 genes de referência: fusA, ileS, lepA, leuS, pyrG, recA, e recG. Sete indivíduos apresentavam L. paracasei (n=75) e 14 seqüências de tipificação (ST) foram encontradas. Verificou-se que indivíduos não relacionados podem apresentar uma mesma ST e que múltiplas STs estão presentes por indivíduo. Três indivíduos apresentavam STs previamente isoladas de produtos alimentícios lácteos. Resultados conflitantes na comparação entre REP-PCR e MLST foram observados na genotipagem de L. paracasei. Diferentes números de padrões foram obtidos para os L. paracasei de acordo com o método molecular utilizado (14 com MLST versus 25 com REP-PCR). Para algumas cepas, REP-PCR foi mais discriminatório do que MLST. Em outros casos, cepas pertencentes a diferentes STs foram agrupadas pelo REP-PCR, mostrando que o MLST foi mais discriminatório do que o REP-PCR. Em poucos casos, MLST e REP-PCR apresentaram o mesmo poder discriminatório. Em geral, REP-PCR mostrou um maior poder discriminatório em comparação ao MLST, mas pouca concordância foi apresentada entre os dois métodos. Assim, MLST pode contribuir na identificação da diversidade genética obtida pelo REP-PCR em alguns casos. Os dados obtidos permitiram concluir que após exposição a sacarose observa-se (a) aumento no número de lactobacilos e de superfícies colonizadas; e (b) aumento na diversidade genética e de espécies. Além disso, observou-se que (c) alguns lactobacilos orais podem apresentar origem exógena, e que (d) a combinação dos métodos MLST e REP-PCR aumenta o poder discriminatório quanto à diversidade genética de L. paracasei. / Lactobacilli are a group of bactéria related to dental caries. There is a lack of studies on the population biology of this organisms in dental caries. The aim of the study was to evaluate the effect of the environmental changes in the composition, genetic diversity and identify the filogeny of Lactobacillus paracasei isolated from biofilm. Lactobacilli were isolated from a biofilm model, formed in situ prior to and during a 28-day period of exposure to 20% sucrose solution. The lactobacillus colonies were randomly selected from Rogosa Agar medium and subcultured (n=222, 31 prior to and 191 following a sucrose exposure period). The isolates were identified using pheS or rpoA gene sequence analysis. The predominant lactobacilli were L. paracasei, L. fermentum and L. rhamnosus. The difference in composition and genetic diversity of lactobacilli related to environmental changes in biofilm was analysed by repetitive extragenic palindromic PCR (REP-PCR). After the sucrose phase, a higher number of lactobacilli could be found in dental biofilm (p=0.001). The prevalence of L. fermentum was similar in the non-sucrose (6/11 subjects) compared to the sucrose phase (8/11 subjects) (p=0.721). Prevalence of L. rhamnosus and L. paracasei increased in biofilm from 2/11 to 8/11 subjects (p= 0.028) and from 2/11 to 7/11 subjects (p=0.012) after sucrose exposure, respectively. L. gasseri prevalence was low in both phases (p=1.00). Lactobacilli exhibited greater species diversity (2 or 3 species per subject) in the sucrose phase, than those isolated from the non-sucrose phase (0-2 species per subject) (p=0.045). In most of the cases different genotypes were present in the non-sucrose phase in comparison to the sucrose phase. Those lactobacilli identified as L. paracasei were subjected to multilocus sequencing typing (MLST). In MLST, partial sequences of seven housekeeping genes fusA, ileS, lepA, leuS, pyrG, recA, and recG was obtained. Seven subjects harboured L. paracasei (n=75) and these represented 14 sequence types (ST). Comparison of the STs showed that unrelated subjects may harbour the same ST and that individuals harbour multiple STs. Three subjects harboured STs previously isolated from dairy products. There were mixed results among REP-PCR patterns compared with the MLST in the L. paracasei genotyping. Different numbers of patterns were obtained for L. paracasei according to the molecular technique used (14 MLST versus 25 REP-PCR patterns). For some strains, REP-PCR was more discriminatory than MLST. In other cases, strains belonging to different ST were grouped together by REP-PCR, showing that MLST was more discriminatory than REP-PCR. In few cases MLST and REP-PCR presented the same discriminatory power. REP-PCR showed a greater discriminatory power in comparison to MLST, but little agreement was observed between this two methods. Therefore, MLST could enhance the genetic diversity obtained by REP-PCR. The present data support that after sucrose exposure there is (a) an increase in the number of lactobacilli and colonized surfaces; and (b) increase in lactobacilli species and genetic diversity. Also it was found that (c) some oral lactobacilli may be of exogenous origin; and (d) the combination of MLST and REP-PCR increased the discriminatory power in genotyping L. paracasei.

Orientador: Cristiane Yumi Koga Ito / Coorientador: Prof. Konstatin Georgiev Kostov / Banca: Ivanildes Vasconcelos Rodrigues / Banca: Fernanda Lourenção Brighenti / Banca: Janete Dias Almeida / Banca: Mônica Fernandes Gomes / Resumo: As doenças fúngicas representam grande desafio para a área médica e odontológica devido à crescente prevalência e aumento da resistência aos antifúngicos. O plasma frio sob pressão atmosférica (PFPA) é uma mistura gasosa contendo partículas carregadas, radicais livres e radiação. Sua potencial aplicação em doenças infecciosas foi relatada, contudo a literatura carece de estudo sistemático sobre o efeito antifúngico, mecanismos de ação e potencial citotóxico. Neste trabalho foi avaliado o efeito antifúngico do PFPA sobre Candida albicans através de ensaios em células planctônicas e biofilmes, efeitos sobre a integridade de parede celular e membrana plasmática, morfogênese, produção de exoenzimas, aderência às células epiteliais e efeito no tratamento in vivo de lesões de candidose oral induzida em modelo murino. Ainda, avaliou-se o efeito do PFPA sobre culturas de Trichophyton rubrum, além de efeitos sobre capacidade de adesão de conídios. Ainda, o potencial citotóxico foi investigado usando células epiteliais. PFPA em modo de tensão contínuo (MC) foi capaz de reduzir a aderência de C. albicans às células epiteliais, modular a transição levedura-hifa na cepa SC 5314 e comprometer a viabilidade de biofilmes. PFPA-MC se mostrou citotóxico em parâmetros efetivos frente a biofilmes de C. albicans. Porém, não foi observado efeito citotóxico quando o PFPA foi utilizado em modo de tensão pulsada (MP). A exposição ao PFPA-MP reduziu a invasão de C. albicans no epitélio in vivo. O PFPA... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / ABSTRACT Fungal diseases represent a great challenge to the medical and dental areas, due to the increasing prevalence and antifungal resistance. Atmospheric pressure plasma jet (APPJ) is a gaseous mixture containing charged particles, free radicals and radiation. Its potential application in infectious disease has been reported, however there is still a lack of a systematic study on the antifungal effect, mechanism of action and citotoxicc potential. The general aim of this project was to evaluate the antifungal effect of APPJ on Candida albicans in planktonic and biofilm cultures, effects on cell wall and cell membrane integrity, morphogenesis, exoenzymes production, adherence to epithelial cells and in vivo effect in the treatment of oral candidosis in murine model will be performed. The effect of APPJ on Trichophyton rubrum cultures and on adherence capability were also evaluated. The cytotoxic potential was evaluated in vitro. APPJ in continuous tension mode (CM) was able to reduce the adherence and yeast-hyphae transition in C. albicans SC 5314 and to decrease biofilm viability. APPJ-CM showed cytotoxic effect in the parameters effective to C. albicans biofilm. Conversely, no cytotoxic effect on epithelial cells were observed when pulsed (PM) plasma jet was used. In vivo tests showed that APPJ-PM was able to prevent C. albicans invasion to the epithelium. T. rubrum cultures were affectd by APPJ-PM after 15 minutes of exposure and conidia adherence was impaired by 10 minutes exposure. In conclusion, APPJ showed antifungal effect against C. albicans and T. rubrum and can also impair virulence factors in both microorganisms / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-21Bitstream added on 2014-06-13T19:14:33Z : No. of bitstreams: 1 melo_pc_me_jabo.pdf: 445369 bytes, checksum: 73e845ad471abdc7d2224e3473891474 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Estudou-se 94 estirpes de Staphylococcus aureus obtidas do leite de vacas com mastite subclínica em duas propriedades rurais no estado de São Paulo. Essas estirpes foram caracterizadas fenotipicamente quanto a produção de biofilmes pelos testes do agar vermelho congo e pelo teste de aderência em microplacas e também foram genotipicamente identificadas pela presença dos genes icaA e icaD responsáveis pela produção do polissacarídeo de adesão intercelular. Além disso, todas as estirpes foram também submetidas ao teste de sensibilidade aos antimicrobianos. Os resultados obtidos revelaram que 85% das estirpes produziram biofilmes “in vitro” para o teste do agar vermelho congo. No teste de aderência em placas foi verificado que 98,9% das estirpes produziram biofilme, devido a forte aderência nas placas de polietileno. A presença dos genes icaA e icaD foi encontrada em 95,7% das estirpes de S. aureus. No antibiograma foi observado que sete estirpes foram resistentes aos seguintes antimicrobianos: cloranfenicol, clindamicina, eritromicina, gentamicina, oxacilina e penicilinaG, sendo que as maiores resistências ocorreram frente a gentamicina (2,2%) e a penicilina G (6,6%). Na avaliação dos testes fenotípicos com os genotípicos o teste de aderência em microplacas foi o mais sensível (100%), sendo indicado para identificar estirpes produtoras de biofilmes. Todos os testes, com exceção do antibiograma, foram estatisticamente significativos (p<0,05). / 94 Staphylococcus aureus strains obtained from milk samples of cows suffering from subclinical mastitis in dairy herd, in two properties, in the state of São Paulo were evaluated. These strains were characterized by the in vitro slime production on the Congo red agar, biofilm formation and by the presence of icaA and icaD genes which are responsible for the intercellular adhesion. All strains were too subjected to in vitro susceptibility to 12 different antibiotics. The results revealed that 85% of isolates tested produced slime on the Congo red agar and 98,9% of the isolates produced biofilm in vitro by the adherence in sterile 96-well “U” bottom polystyrene tissue culture plates. 95,7% of isolates possessed the icaA and icaD genes. The results of in vitro antibiotic susceptibility assay to 12 different antibiotics revealed that seven isolates were resistance to follow antibiotics: clorphenicol, clindamicin, erythromycin, gentamicin, oxacillin and penicillin, the higher resistance occurred to penicillin (6,6%) and gentamicin (2,2%). In the study of phenotypic tests compared with genotypic test, the 96-well polystyrene tissue culture plates assay was the most sensitivity (100%) and is recommended with genotypic test for the investigation biofilm formation in S. aureus. All the tests, exception of antibiotic susceptibility assay were statistically significant (p<005).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-02Bitstream added on 2014-06-13T20:29:37Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_dcv_me_botib.pdf: 990055 bytes, checksum: 07196c8f0c321ad972ef51db39060685 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Bactérias do gênero Salmonella estão entre as principais causas de enfermidades transmitidas por alimentos (ETA), sendo que os de origem animal são os maiores responsáveis pela veiculação desse micro-organismo, principalmente frangos que são portadores assintomáticos de alguns sorotipos patogênicos para o homem. A Instrução Normativa n° 70 (2003), do Programa de Redução de Patógenos do Ministério da Agricultura e Abastecimento confere um controle minucioso sobre o processo de abate, garantindo a higiene correta dos alimentos e sua segurança em todos os estágios da produção. Porém, a presença de micro-organismos formadores de biofilmes nas indústrias de alimentos, como a Salmonella, é motivo de preocupação pelas falhas que podem ocorrer no processo de higienização. As propriedades físico-químicas de uma superfície podem exercer influência sobre a adesão dos micro-organismos, os quais aderem mais facilmente às superfícies hidrofóbicas (PVCs) do que às hidrofílicas (vidro ou metais como aço inox). Assim como outras bactérias patogênicas, as salmonelas possuem fímbrias e produzem celulose, que vão influenciar na sua adesão às superfícies e estão entre os principais componentes da matriz em biofilmes. Os genes agf (agregative fímbrias) estão envolvidos na biossíntese de fímbrias, enquanto o segundo componente, a celulose, é produzida pelos genes bcsA, bcsB, bcsZ e bcsC (síntese de celulose bacteriana). A produção de fímbrias, co-regulada pelo regulador tipo LuxR, o agfD, vai regular indiretamente a produção de celulose atuando no gene adrA. A expressão dos dois componentes leva à formação dessa matriz. Sendo assim, o presente trabalho teve por objetivo a pesquisa da presença desses genes nas cepas de Salmonella sp., isoladas de frango e o comportamento dessas cepas quanto à produção... / Bacteria of the genus Salmonella are among the leading causes of foodborne disease (FBD), being, those from animals, the most responsibles for placement this microorganism, especially poultry that are asymptomatic carriers of some serotypes pathogenic to humans. Normative Instruction No. 70 (2003), of the Pathogen Reduction Program of the Ministry of Agriculture and Supply gives rigorous control over the slaughter process, ensuring proper food hygiene and safety in all stages of production. However, the presence of microorganisms forming biofilms in the food, such as Salmonella, is a cause of concern due to the failures that may occur in the process of cleaning. The physicochemical properties of a surface can influence the adhesion of microorganisms, which adhere more readily to hydrophobic surfaces (PVCs) than to hydrophilic (glass or metals such as stainless steel). Like other pathogenic bacteria, Salmonella possess fimbriae and produces cellulose, which will affect their adherence to surfaces and are among the main components of the matrix in biofilms. Genes agf (agregative fimbriae) are involved in the biosynthesis of fimbriae, while the second component, cellulose, is produced by genes bcsA, bcsB, bcsZ and bcsC (bacterial cellulose synthesis). The production of fimbriae, co-regulated by LuxR type regulator, the agfD, will regulate the production of cellulose indirectly acting on the gene adrA. The expression of these two components leads to the formation of this matrix. Therefore, this study aimed to research the presence of these genes in strains of Salmonella isolated from poultry and the behavior of these strains for the production of biofilm at different temperatures (16º, 20º, 28º and 35ºC) and materials (glass, PVC and stainless steel) as well as the analysis of the characteristic morphology expressed at 28°C, optimum temperature for the production of biofilm

Made available in DSpace on 2016-06-07T17:12:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-11-30. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-07T17:17:14Z : No. of bitstreams: 1 000865632.pdf: 903176 bytes, checksum: 3e51870d6b17dcc44625fae1468b3e9d (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade da molécula de quorum sensing farnesol na formação de biofilmes simples e misto de Candida albicans ATCC 10231 e Streptococcus mutans ATCC 25175. Inicialmente o farnesol foi diluído em metanol e posteriormente em saliva artificial (SA). Os testes de concentração inibitória mínima (CIM) do farnesol contra as células de Candida albicans ATCC 10231 e Streptococcus mutans ATCC 25175 em suspensão foram baseados no método da microdiluição. O farnesol diluído nas concentrações de 1,56, 3,125, 6,25, 12,5, 25, 50, 70, 150 e 300 mM foi aplicado sobre os biofilmes de Candida albicans e Streptococcus mutans (formação) e após 48 horas de contato sua atividade antibiofilme foi determinada por meio da quantificação da biomassa total (coloração com violeta cristal (CV)), enumeração das unidades formadoras de colônias (UFCs) e atividade metabólica (XTT). Foi ainda realizada uma curva de tempo de morte celular para os dois microrganismos estudados. Após o tratamento com o farnesol, a matriz dos biofilmes foi extraída e analisada em termos de concentração de proteínas e carboidratos, além do teste de pH para S. mutans e verificação das atividades enzimáticas de proteinase, fosfolipase e hemolítica para Candida albicans, ainda a estrutura dos biofilmes foi analisada por meio da microscopia eletrônica de varredura. Os resultados de CIM foram de 150 mM para C. albicans e de 6.25 mM para S. mutans. O farnesol diminuiu a formação de biofilmes simples e mistos, com reduções significativas de 37-90% e 64-96%, respectivamente para a biomassa total e atividade metabólica. Para os biofilmes simples, concentrações de farnesol iguais ou maiores que 3,125 mM promoveram reduções significativas (1,3-4,2 log10; p < 0,05) nas UFCs, enquanto que para os biofilmes mistos reduções... / The aim of this study was to evaluate the activity of a quorum sensing molecule, farnesol, in biofilm formation of Candida albicans ATCC 10231 and Streptococcus mutans ATCC 25175. Initially farnesol was diluted in methanol and then in artificial saliva (AS). Minimum inhibitory concentration tests (MIC) of farnesol against Candida albicans ATCC 10231 cells and Streptococcus mutans ATCC 25175 suspension were based on the microdilution method. Farnesol was prepared at concentrations of 1.56, 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 70, 150 and 300 mM, and placed in contact with biofilms in formation of Candida albicans and Streptococcus mutans for 48 hours. Its antibiofilm activity was determined by quantifying the total biomass (stained with crystal violet (CV)), enumeration of colony forming units (CFUs) and metabolic activity (XTT). It was further carried out a cell death time curve for both microorganisms studied. After the treatment with farnesol, the matrix of the biofilm was extracted and analyzed in terms of protein and carbohydrates, in addition to the pH test for S. mutans and examination of enzymatic activities of proteinase, fosfolipase and hemolytic for Candida albicans. The structure of biofilms was analyzed by scanning electron microscopy. The MIC values were 150 mM for C. albicans and 6.25 mM for S. mutans. Farnesol decreased the formation of single and mixed biofilms, with significant reductions of 37-90% and 64-96% respectively for the total biomass and metabolic activity. For single biofilms, farnesol concentrations equal to or higher than 3.125 mM promoted significant reductions (1,3-4,2log10; p <0.05) in the CFU for single biofilms, while in mixed biofilms the reductions (0,67-5,32log10; p <0.05) were noted at concentrations of 1.56 mM. For cell death curve after an hour in contact with those microorganisms, farnesol reduced 1 log10... / FAPESP: 13/23592-0

Submitted by Vanessa Rafaela de Carvalho null (vanessa@fca.unesp.br) on 2016-08-17T15:38:02Z No. of bitstreams: 1 VANESSA RAFAELA DE CARVALHO.pdf: 1265274 bytes, checksum: b22dd09c9d7e691c86790c85e9d494d1 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-08-19T17:25:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 carvalho_vr_me_bot.pdf: 1265274 bytes, checksum: b22dd09c9d7e691c86790c85e9d494d1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-19T17:25:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 carvalho_vr_me_bot.pdf: 1265274 bytes, checksum: b22dd09c9d7e691c86790c85e9d494d1 (MD5) Previous issue date: 2016-08-09 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Desequilíbrio na composição de espécies bacterianas (disbiose) do intestino é uma característica da doença de Crohn (DC), a mais grave das doenças inflamatórias intestinais (DII). Na disbiose da DII, há um aumento de certos grupos de bactérias, tais como as Proteobacteria, em alguns pacientes. Acredita-se que o aumento destas bactérias deve contribuir para as reações inflamatórias responsáveis pelas lesões observadas no intestino de portadores de DC e retocolite ulcerativa, ao estimular a produção de citocinas por células locais do sistema imune. Proteobacteria, um dos filos predominantes da microbiota intestinal compreende bacilos gram-negativos, dos quais Escherichia coli (E. coli) é o mais conhecido. Dada a importância de Proteobacteria como patógeno ou membro da microbiota intestinal residente humana, este trabalho teve dois objetivos: 1) Investigar a ocorrência de variação numérica na população de Proteobacteria na DC e 2) Caracterizar amostras de E. coli encontradas nesta população, em relação a propriedades de virulência. Visando o primeiro objetivo, DNA de culturas em caldo MacConkey de diferentes materiais clínicos (fezes e biópsias intestinais) de 8 controles e 9 pacientes com DC foram amplificados com primers para as regiões V6-V8 do gene que codifica a fração 16S do rRNA (16S V6-V8 rDNA) e, em seguida, sequências específicas (representando táxons bacterianos particulares) contidas nos amplicons foram separadas por temperature gradient gel electrophoresis (TGGE), definindo perfis de banda que refletem a diversidade bacteriana. O segundo objetivo compreendeu a tipagem dos isolados de E. coli destas culturas através da classificação em filogrupos (A, B1, B2 e D) da coleção de referência de E. coli (EcoR), a pesquisa de sorogrupos O25 e O83, determinação das propriedades de aderência e capacidade de produzir biofilme. Análise de 32 culturas de 9 portadores de DC e 24 culturas de 8 controles mostrou uma clara diferença no número de bandas nos perfis de TGGE dos amplicons de 16S V6-V8 rDNA. Amplicons de 8 culturas de 9 portadores de DC tinham no máximo 2 bandas, ao passo que o número de bandas em amplicons de controles tinham pelo menos 3 bandas. Uma das bandas dos casos em que havia duas bandas ou a banda única dos perfis de cultura de casos teve a mesma mobilidade do amplicon de E. coli, colocado no gel como referência da corrida. PCR para detecção de genes de O25 e O83 demonstraram que estes sorogrupos foram dominantes tanto na população de E. coli de portadores de DC como de controles (apenas um paciente controle deu resultado negativo na PCR para ambos sorogrupos). Também, a maioria das cepas de E. coli, tanto de casos como de controles pertenceu ao filogrupo B2. Resultados parciais de testes de adesão em células Hep-2 revelaram que todos os pacientes (controles ou não) apresentaram E. coli aderentes, expressando o padrão agregativo. Testes para avaliar a capacidade de formação de biofilme indicaram que isolados de E. coli das regiões proximais encontrados em controles produzem biofilme de forma mais intensa do que isolados equivalentes de portadores de DC. Como conclusão, os dados apresentados sugerem que a população intestinal de Proteobacteria em portadores de CD apresenta disbiose, associada com um aumento do número de E. coli, uma propriedade que foi determinada por TGGE e confirmada com seqüenciamento de amplicons da região V6, pela técnica Ion Torrent. Por fim, com base nos resultados de tipagem e caracterização bacteriana foi possível observar que amostras tanto de caso como de controles, não houve uma prevalência dos sorogrupos e com base nesse resultado podemos associar que ambos os grupos de estudos freqüentam de forma rotineira o mesmo ambiente hospitalar, podendo indicar um favorecimento na aquisição desses tipos bacterianos. Resultados semelhantes ocorreram com as análises dos sorogrupos, onde apenas o filogrupo D teve prevalência significativa em indivíduos controle. Em relação à produção de biofilme, as amostras encontradas na região proximal do intestino de pacientes controles produzem mais biofilmes do que amostras de portadores de DC da mesma região intestinal, indicando que a parede da mucosa intestinal serve como substrato pode influenciar na formação do biofilme. / Imbalance in intestinal bacterial composition (dysbiosis) is a hallmark of Crohn’s disease (CD), the most severe of inflammatory bowel diseases (IBD). A characteristic of IBD dysbiosis is the elevation of certain groups of bacteria such as Proteobacteria in some patients. It is believed that the augmented bacteria may contribute for the inflammatory reactions underlying the typical lesions observed in the gut of CD and ulcerative colitis patients, by stimulating the production of cytokines by local cells of the immune system. Proteobacteria, one the most prevalent bacterial phyla of the gut microbiota are Gram negative rods of which Escherichia coli (E. coli) is the most well-known member. Given the significance of Proteobacteria as pathogens or member of resident gut microbiota, this work had two purposes: 1) to investigate the occurrence of numerical variation in the population of these bacteria in CD and 2) Characterizing E. coli isolates found in this population, in search for some virulence associated properties. For the first purpose, DNA from MacConkey broth cultures of distinct clinical materials (stools and gut mucosal biopsies) of 9 CD and 8 control patients were amplified with primers for the V6 and V8 regions of the 16S ribosomal RNA gene (16S V6-V8 rDNA) and distinct gene sequences (representing particular bacterial taxa) within the amplicons were resolved by temperature gradient gel electrophoresis (TGGE), defining band profiles, which reflect the bacterial diversity. The second objective consisted in phylotyping (determining A, B1, B2 and D phylogroups), serotyping (search for O25 and O83 genes), analyzing the E. coli isolates of the cultures for adherence properties and competence to produce biofilm. Analysis of 32 cultures from the 9 CD patients and 24 cultures from 8 control subjects showed a clear case-control difference in the number of bands in the TGGE profiles of the 16S V6-V8 rDNA amplicons. Cultures from 8 of 9 CD patients had at most 2 bands, while the number of bands in the cultures from 7 of the 8 controls subjects had at least 3 bands. One of the two bands found in the cultures from CD patients had the same mobility as E. coli, put in the gelas reference for the run. PCR screening for O25 and O83 demonstrated that these serogroups were dominant among the E. coli population from both controls and CD patients (only one control subject was negative for each of these O groups). Also, most of E. coli isolates from both control and CD patients belonged to the B2 phylogroup. Partial results of bacterial adherence to Hep-2 cells revealed that all patients (controls and CD) had aggregative adherent E. coli isolates. Tests to determine the ability to produce biofilm indicated that isolates from the proximal, but not from distal region of the gut or the stools, found in controls were stronger biofilm formers than isolates from equivalent sites of CD patients. In conclusion, the data presented here reveal that intestinal population of Proteobacteria of CD patients show dysbiosis associated with the elevation of Escherichia coli and that this variation can be assessed by TGGE and confirmed by sequencing of amplicons V6 region, the technique Ion Torrent. Finally, on the basis of the bacterial typing and characterization results, was observed that samples of both the case and controls, there was a prevalence of serogroups, based on this result we can associate both study groups frequent routinely the same hospital environment and may indicate a favoring the acquisition of these bacterial types. Similar results occurred with the analysis of serogroups, where only the filogrupo D had a significant prevalence in control subjects. For biofilm production, the samples found in the proximal region of the control patients intestine produce more biofilm than DC bearing samples of the same intestinal region, indicating that the intestinal mucosa serves as a substrate may influence the formation of biofilms. / FAPESP: 2013/04475-3