Os biofilmes constituem uma nova forma de vida que oferece maior resistência aos micro-organismos, protegendo-os contra agressões físicas e químicas do meio envolvente, o que facilita a sua adaptação em condições adversas. O desenvolvimento de biofilmes patogênicos em superfícies de contato nas áreas da saúde (próteses e instrumentos cirúrgicos) e alimentícia (equipamentos e tubulações) é a principal causa do acréscimo de contaminações que podem, eventualmente, originar problemas de saúde pública e de ordem econômica. Para prevenir, controlar ou erradicar biofilmes, alternativas tecnológicas vêm sendo desenvolvidas e testadas em materiais com propriedades antimicrobianas. Dentro deste contexto, este trabalho teve por objetivo avaliar as propriedades antimicrobianas dos íons prata (Ag+) implantados no aço inoxidável austenítico AISI 304 a baixa energia (4 keV) no equipamento Ion Plating Diversified (IPD). As bactérias estudadas foram Escherichia coli (IBEc 101) e Staphyloccocus aureus (ATCC 6538). As simulações de Monte Carlo previram para uma determinada energia de polarização, o perfil de dose e profundidade de íons Ag+ implantados no aço. A análise físico-química apresentou doses de prata, na ordem de grandeza de 1016 átomos/cm2 em profundidades menores do que 10 nm. A densidade areal de átomos de prata implantados foi influenciada pela relação entre o índice de corrente de emissão e o tempo de processo. Os resultados microbiológicos obtidos apresentaram uma significativa redução na aderência bacteriana (95% de E. coli e 90% de S. aureus) em relação aos seus controles. Porém, impurezas como o oxigênio encontrado na superfície das amostras alteraram a capacidade de aderência das células bacterianas. A variação do pH do meio de cultura fez com que a repulsão eletrostática entre as células bacterianas e a superfície sólida aumentasse para valores de pH próximos da neutralidade e diminuísse para valores de pH não alcalinos, interferindo desta forma, na adesão das bactérias. Ainda que faltem dados que comprovem seu rendimento e o custo total do produto tratado, existe uma enorme perspectiva de tornar o processo IPD em escala industrial. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2014-11-24T13:14:54Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Fernando Graniero Echeverrigaray.pdf: 3217258 bytes, checksum: 0befcf5967159291ee174c210a9c79d8 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-24T13:14:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Fernando Graniero Echeverrigaray.pdf: 3217258 bytes, checksum: 0befcf5967159291ee174c210a9c79d8 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico, CNPq / The biofilms are a new form of life that offers greater resistance to microorganisms, protecting them against physical and chemical aggressions of the surroundings, which facilitate its adaptation in adverse conditions. The development of pathogenic biofilms on contact surfaces used in the health and food industries is the main cause of increased contamination that can, eventually, lead to public health problems and economic order. To prevent, control or eradicate biofilms, technological alternatives are being developed and tested in materials with antimicrobial properties. Within this context, this study aimed to evaluate the antimicrobial properties of silver ions (Ag+) implanted on the surface of austenitic stainless steel AISI 304 by the technique of ion implantation at low energy (4 keV) in an Ion Plating Diversified (IPD) equipment. The bacteria studied were Escherichia coli (IBEc 101) and Staphylococcus aureus (ATCC 6538). The simulations Monte Carlo has predicted for a given energy of polarization, the dose and depth profile of ions Ag+ implanted in steel. Physico-chemical analysis presented doses of silver, in the order of magnitude of 1016 atoms/cm2 at depths less than 10 nm. The areal density of silver atoms implanted was influenced by the relationship between the emission current index and the process time. The microbiological results obtained showed a significant reduction in bacterial adhesion (95% for E. coli and 90% for S. aureus) in relation to its controls. However, impurities such as oxygen found on the surface of samples altered the adhesion of the bacterial cells. The variation of the pH of the culture medium caused the electrostatic repulsion between bacterial cells and solid surface increases to pH values close to neutrality and to shrink to no alkaline pH values, interfering in this way, in the adhesion of bacteria. Missing data yet proving their income and the total cost of the product treated, there is a huge prospect of making the process IPD on an industrial scale.

Polímeros oriundos de fontes não renováveis são amplamente utilizados na produção de embalagens e para uso na agricultura, em confecção de estufas, sacos para produção de mudas e filmes para cobertura de solo. Estes plásticos são resistentes à degradação e após utilização passam a ser um problema ambiental, portanto, o desenvolvimento de materiais biodegradáveis é uma necessidade, visto que são produzidos de fontes renováveis e decompõem-se rapidamente, diminuindo o impacto sobre o meio ambiente. O reaproveitamento total ou parcial de resíduos perigosos, como os de couro curtido ao cromo III, também tem sido alvo de pesquisas por gerar um ganho ambiental se comparado a disposição em aterros indunstriais para resíduos perigosos. Dentro deste contexto, no presente trabalho foram produzidos filmes de gelatina comercial e filmes de gelatina extraída de resíduo de couro curtido ao cromo III, em associação a plastificante e enzima transglutaminase (TGase) como agente reticulante. A enzima TGase foi estatisticamente significativa nas propriedades de solubilidade, ângulo de contato e elongação dos filmes produzidos com gelatina comercial. Para os filmes produzidos com gelatina extraída de resíduo de couro curtido ao cromo III, a enzima TGase atuou de forma estatisticamente significativa nas propriedades de solubilidade, umidade, ângulo de contato, permeabilidade ao vapor d água e tensão de ruptura dos filmes. As análises térmicas mostraram que a reticulação enzimática aumentou a estabilidade térmica dos filmes. A análise de infravermelho evidenciou a reticluação da enzima transglutaminase nos filmes pelo deslocamento das bandas. No teste de biodegradabilidade em solo simulado, os filmes degradaram-se em 24 horas, comprovando que o polímero é biodegradável. Este estudo demonstrou a viabilidade da utilização de gelatina recuperada de um resíduo para produzir filmes biodegradáveis com melhorias na suas propriedades com adição de um agente reticulante. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2017-08-07T14:13:35Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Elizete Baggio Brandalise.pdf: 2076499 bytes, checksum: 5907508a0674b933cdbb4d6b11eb4ecc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-07T14:13:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Elizete Baggio Brandalise.pdf: 2076499 bytes, checksum: 5907508a0674b933cdbb4d6b11eb4ecc (MD5) Previous issue date: 2017-08-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES. / Polymers from non-renewable sources are widely used in the production of packaging and for use in agriculture, in the manufacture of greenhouses, bags for the production of seedlings and films for soil cover. These plastics are resistant to degradation and after use become an environmental problem, therefore, the development of biodegradable materials is a necessity, since they are produced from renewable sources and decompose rapidly, reducing the impact on the environment. The total or partial reuse of hazardous wastes, such as chrome-tanned leather III, has also been the subject of research for generating an environmental gain compared to disposal in industrial landfills for hazardous waste. In this context, commercial gelatin films and gelatin films extracted from leather residue to chromium III, in combination with plasticizer and enzyme transglutaminase (TGase) as crosslinking agent were produced in the present work. The enzyme TGase was statistically significant in the properties of solubility, contact angle and elongation of the films produced with commercial gelatin. For the films produced with gelatine extracted from chromium III tanned leather residue, the enzyme TGase was statistically significant in the properties of solubility, humidity, contact angle, water vapor permeability and rupture stress of the films. Thermal analysis showed that enzymatic crosslinking increased the thermal stability of films. Infrared analysis evidenced the reticulation of the transglutaminase enzyme in the films by the bands displacement. In the biodegradability test in simulated soil, the films degraded in 24 hours, proving that the polymer is biodegradable. This study demonstrated the feasibility of using gelatine recovered from a residue to produce biodegradable films with improvements in its properties with the addition of a crosslinking agent.

Orientador: Marcia Carneiro Valera / Resumo: O presente trabalho teve como objetivos: analisar a ação antimicrobiana de scaffolds contendo ciprofloxacina (CIP) sobre biofilme de Enterococcus faecalis (E. faecalis) (Artigo 1); Sintetizar, caracterizar e analisar a ação antimicrobiana do TAP-scaffold (Polidioxanona [PDS] + CIP, metronidazol [MET] e minociclina [MINO] ) contra biofilme de Actinomyces naeslundii (A. naeslundii) (Artigo 2); Avaliar os efeitos do TAP-scaffold contra biofilme de Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) (Artigo 3). Material e Métodos: Utilizando a técnica de electrospinning scaffolds foram desenvolvidos a partir de soluções de PDS puro e associadas a antibióticos para produzir CIP-scaffold e TAP-scaffold. (Artigos 1, 2 e 3). Espécimes de dentina foram inoculados com E. faecalis para formação de biofilme e expostos ao PDS (controle); PDS + CIP 25wt.% e PDS + CIP 5wt.%. A ação antimicrobiana foi avaliada por contagem das unidades formadoras de colônia (UFC / mL) (n = 10) e microscopia eletrônica de varredura (MEV) (n = 2) (Artigo 1). TAP-scaffolds foram caracterizados quanto a morfologia das fibras, propriedades mecânicas, e mecanismo de liberação do fármaco. Espécimes de dentina foram inoculados com A. naeslundii para formação de biofilme e foram expostos à TAP-scaffold, solução de TAP, PDS puro e espécimes de dentina infectada com biofilme (7 dias) sem medicação. A viabilidade bacteriana foi determinada por microscópio de varredura a laser confocal (CLSM) (Artigo 2). Espécimes de dentina inocul... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present study aimed to: Evaluate the antimicrobial effects of scaffolds containing ciprofloxacin (CIP) into the fibers against Enterococcus faecalis (E. faecalis) biofilm (Article 1); Synthesize, characterize, and analyse the antimicrobial action TAP-scaffold containing CIP, metronidazole (MET) and minocycline (MINO) against Actinomyces naeslundii (A. naeslundii) biofilm (Article 2); Evaluate the effects of TAP-scaffold to combat Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) biofilm (Article 3). Material e Methods: Scaffolds were developed from pure polidioxanone (PDS) solution alone or incorporated with antibiotics: MET, CIP and MINO (TAPscaffold and CIP-scaffold by electrospinning technique (Articles 1, 2, 3). E. faecalis solution was inoculated in dentin to induce biofilm formation that were exposed to PDS (control); PDS + CIP 25wt.% and PDS + CIP 5wt.%. The antimicrobial action were analysed by counting the colony units formation (CFU/mL) and through Scanning Electron Microscopy (SEM) (Article 1). Fiber morphology, mechanical properties, and drug release of TAP-scaffolds were investigated. Dentin specimens were inoculated with A. naeslundii for biofilm formation. The dentin specimens were exposed to TAP-mimic scaffolds, TAP solution (positive control), and pure PDS. Infected dentin (7-days biofilm) specimens were used for comparison. CLSM was performed to determine bacteria viability (Article 2). Dentin specimens were inoculated with P. gingivalis to allow biofilm formatio... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: José Francisco Lopes Filho / Coorientador: Carmen C. Tadini / Banca: Crislene Barbosa de Almeida / Banca: José Antônio Gomes Vieira / Resumo: A zeína é uma proteína do glúten do milho muito utilizada na produção de filmes plásticos flexíveis e transparentes. O desenvolvimento de embalagens biodegradáveis à base de zeína tem um grande potencial para a melhoria da qualidade e aumento da vida de prateleira de alimentos, além de permitir a adição de compostos ativos, agregando assim, maior valor tecnológico aos biofilmes de zeína, tornando-os capazes de melhorar a qualidade dos alimentos e sua conservação. Este trabalho propôs o uso de nanocarbonato no desenvolvimento de filmes biodegradáveis à base de zeína para identificar a estrutura básica e as propriedades dos biomateriais. Os filmes foram elaborados pela técnica casting tendo como formulação base zeína, glicerol, ácido oléico, etanol e água, e incorporados com três concentrações de nanocarbonato (1, 2 e 3 g / 100 g de proteína) a fim de estudar sua estrutura. Os filmes foram avaliados quanto as suas propriedades mecânicas (resistência máxima à tração e porcentagem de elongação na ruptura), fisico-químicas (umidade, solubilidade, atividade de água e espessura), microestutrutra (Microscopia eletrônica de varredura (MEV) e Microscopia óptica (MO)), permeabilidade ao vapor de água, opacidade e cor. Os filmes apresentaram-se homogêneos, livre de partículas insolúveis, flexíveis e espessura uniforme. A adição do nanocarbonato resultou em materiais mais elásticos e flexíveis, com maior estabilidade e manutenção da cor e também mais claros, no entanto, apresentaram-se mais hidrofílicos quando comparados ao filme padrão. Na análise da estrutura verificou-se uma dispersão aleatória das nanopartículas na matriz polimérica indicando que não houve intercalação destas com a matriz. Verificou-se também um aumento no tamanho de agregados de lipídeos quando aumentou-se a concentração de nanocarbonato / Abstract: Zein is a corn gluten protein that is widely used in the production of flexible and transparent plastic films. The development of biodegradable packaging based on Zein has great potential to improve the quality and increase the shelf-life of a fruit product, as well as permit the addition of active compounds, this will add greater value to Zein-based biofilms, making them able to improve food quality and conservation. The purpose of this work is to produce Zein biofilms added with nanocarbonate (1%, 2% e 3%) to identify the basic structure and properties of the biomaterials. These films, made by employing a technique known as casting, consist of a basic formulation of Zein, glycerol, oleic acid, ethanol and water, combined with three concentrations of nanocarbonate (1, 2 e 3 g / 100 g of protein) to study their structure. These materials were assessed according to their mechanical properties (tensile strength at break and elongation at break percentage), physical and chemical properties (humidity, solubility, water activity and thickness), microstructure (Scanning Electron Microscopy (SEM) and Optical Microscopy (MO)), water vapor permeability, opacity and color change. The films were homogenous, free of insoluble particles, flexible and uniform thickness. The addition of nanocarbonate resulted in more elastic and flexible material, more stability and maintenance of color and also lighter, however, were more hydrophilic compared with the standard film. The analysis of the structure there is a random dispersion of nanoparticles in the polymer matrix indicating no collation with the matrix. There was also an increase in size of the lipid when the concentration of nanocarbonate increased / Mestre

Orientador: João Martins Pizauro Junior / Coorientador: Oswaldo Durival Rossi Junior / Banca: Tiago Santana Balbuena / Banca: Poliana de Castro Melo / Resumo: Staphylococcus aureus é o microrganismo que mais prevalece em casos de mastite em rebanhos bovinos leiteiros e isto ocorre devido a produção de vários fatores de virulência, inclusive aqueles relacionados a sua capacidade de se instalar no parênquima mamário. Sendo assim, as condições microbiológicas do leite cru que é fornecido às indústrias pode refletir no seu produto final, determinando riscos à saúde do consumidor. Diante do exposto, objetivou-se realizar o isolamento e identificação das estirpes de S. aureus de amostras de leite bubalino da raça Murrah, dos insufladores, água das mangueiras da sala de ordenha e mãos dos ordenhadores em uma propriedade rural em Analândia - SP nos meses de abril, junho, outubro e novembro. Foi avaliada, a capacidade produtora de biofilme "in vitro" pelo método de aderência em microplacas e pelo cultivo em Agar Vermelho Congo (CRA), o perfil de sensibilidade dos S. aureus frente a antimicrobianos pelo método da difusão em disco além de identificar os genes que participam na formação de biofilme por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Das 147 estirpes de Staphylococcus spp isoladas, 32 foram identificadas como S. aureus. Dos isolados, 28,1% foram positivas para o gene icaA, 21,8% para o gene icaD, 28,1% para clfA, 50% clfB, 53,1% sarA e 50% para o gene hla. Todas os isolados demonstraram habilidade de produção de slime em Agar Vermelho Congo (CRA) e formação de biofilme em microplaca. Embora a frequência de isolamento de S. aureus foi baixa, essas estirpes podem ser consideradas potenciais patógenos zoonóticos / Abstract: Staphylococcus aureus is the most common cause of mastitis in dairy herds due to its production of several virulence factors, including those related to its ability to colonize the teat parenchyma. The microbiological status of raw milk supplied to manufacturers may reflect on the final product and the associated risks to consumer health. Accordingly, the aim of this study was to isolate and characterize S. aureus strains from samples of Murrah buffalo milk, milking machines, water hoses from milking room and from the hands of milkers on a dairy farm located in Analândia - SP during the months of April, July, October, and November. Biofilm-producing capacity was evaluated "in vitro" using a microtiter method and cultivation on Congo Red Agar (CRA). Antibiotic sensitivity testing was performed by the disk diffusion method and the identification of the genes involved in biofilm formation by Polymerase Chain Reaction (PCR). One hundred and forty-seven Staphylococcus spp. were isolated and 32 were identified as S. aureus. Of those isolates, 28.1% were positive for the icaA gene, 21.8% for the icaD gene, 28.1% for the clfA, 50.0% for the clfB, 53.1% for sarA and 50.0% for hla. All isolates produced slime on Congo Red Agar (CRA) and formed biofilms in a microtiter assay. Although the frequency of S. aureus was low, the stains isolated can be considered as potential zoonotic agents / Mestre

Orientadora: Debora de Barros Barbosa / Coorientador: Douglas Roberto Monteiro / Banca: Alessandra Marçal Agostinho / Banca: Margarete Teresa Gottardo de Almeida / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade da molécula de quorum sensing farnesol na formação de biofilmes simples e misto de Candida albicans ATCC 10231 e Streptococcus mutans ATCC 25175. Inicialmente o farnesol foi diluído em metanol e posteriormente em saliva artificial (SA). Os testes de concentração inibitória mínima (CIM) do farnesol contra as células de Candida albicans ATCC 10231 e Streptococcus mutans ATCC 25175 em suspensão foram baseados no método da microdiluição. O farnesol diluído nas concentrações de 1,56, 3,125, 6,25, 12,5, 25, 50, 70, 150 e 300 mM foi aplicado sobre os biofilmes de Candida albicans e Streptococcus mutans (formação) e após 48 horas de contato sua atividade antibiofilme foi determinada por meio da quantificação da biomassa total (coloração com violeta cristal (CV)), enumeração das unidades formadoras de colônias (UFCs) e atividade metabólica (XTT). Foi ainda realizada uma curva de tempo de morte celular para os dois microrganismos estudados. Após o tratamento com o farnesol, a matriz dos biofilmes foi extraída e analisada em termos de concentração de proteínas e carboidratos, além do teste de pH para S. mutans e verificação das atividades enzimáticas de proteinase, fosfolipase e hemolítica para Candida albicans, ainda a estrutura dos biofilmes foi analisada por meio da microscopia eletrônica de varredura. Os resultados de CIM foram de 150 mM para C. albicans e de 6.25 mM para S. mutans. O farnesol diminuiu a formação de biofilmes simples e mistos, com reduções significativas de 37-90% e 64-96%, respectivamente para a biomassa total e atividade metabólica. Para os biofilmes simples, concentrações de farnesol iguais ou maiores que 3,125 mM promoveram reduções significativas (1,3-4,2 log10; p < 0,05) nas UFCs, enquanto que para os biofilmes mistos reduções... / Abstract: The aim of this study was to evaluate the activity of a quorum sensing molecule, farnesol, in biofilm formation of Candida albicans ATCC 10231 and Streptococcus mutans ATCC 25175. Initially farnesol was diluted in methanol and then in artificial saliva (AS). Minimum inhibitory concentration tests (MIC) of farnesol against Candida albicans ATCC 10231 cells and Streptococcus mutans ATCC 25175 suspension were based on the microdilution method. Farnesol was prepared at concentrations of 1.56, 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 70, 150 and 300 mM, and placed in contact with biofilms in formation of Candida albicans and Streptococcus mutans for 48 hours. Its antibiofilm activity was determined by quantifying the total biomass (stained with crystal violet (CV)), enumeration of colony forming units (CFUs) and metabolic activity (XTT). It was further carried out a cell death time curve for both microorganisms studied. After the treatment with farnesol, the matrix of the biofilm was extracted and analyzed in terms of protein and carbohydrates, in addition to the pH test for S. mutans and examination of enzymatic activities of proteinase, fosfolipase and hemolytic for Candida albicans. The structure of biofilms was analyzed by scanning electron microscopy. The MIC values were 150 mM for C. albicans and 6.25 mM for S. mutans. Farnesol decreased the formation of single and mixed biofilms, with significant reductions of 37-90% and 64-96% respectively for the total biomass and metabolic activity. For single biofilms, farnesol concentrations equal to or higher than 3.125 mM promoted significant reductions (1,3-4,2log10; p <0.05) in the CFU for single biofilms, while in mixed biofilms the reductions (0,67-5,32log10; p <0.05) were noted at concentrations of 1.56 mM. For cell death curve after an hour in contact with those microorganisms, farnesol reduced 1 log10... / Mestre

Orientador: Josias Rodrigues / Resumo: Desequilíbrio na composição de espécies bacterianas (disbiose) do intestino é uma característica da doença de Crohn (DC), a mais grave das doenças inflamatórias intestinais (DII). Na disbiose da DII, há um aumento de certos grupos de bactérias, tais como as Proteobacteria, em alguns pacientes. Acredita-se que o aumento destas bactérias deve contribuir para as reações inflamatórias responsáveis pelas lesões observadas no intestino de portadores de DC e retocolite ulcerativa, ao estimular a produção de citocinas por células locais do sistema imune. Proteobacteria, um dos filos predominantes da microbiota intestinal compreende bacilos gram-negativos, dos quais Escherichia coli (E. coli) é o mais conhecido. Dada a importância de Proteobacteria como patógeno ou membro da microbiota intestinal residente humana, este trabalho teve dois objetivos: 1) Investigar a ocorrência de variação numérica na população de Proteobacteria na DC e 2) Caracterizar amostras de E. coli encontradas nesta população, em relação a propriedades de virulência. Visando o primeiro objetivo, DNA de culturas em caldo MacConkey de diferentes materiais clínicos (fezes e biópsias intestinais) de 8 controles e 9 pacientes com DC foram amplificados com primers para as regiões V6-V8 do gene que codifica a fração 16S do rRNA (16S V6-V8 rDNA) e, em seguida, sequências específicas (representando táxons bacterianos particulares) contidas nos amplicons foram separadas por temperature gradient gel electrophores... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Imbalance in intestinal bacterial composition (dysbiosis) is a hallmark of Crohn’s disease (CD), the most severe of inflammatory bowel diseases (IBD). A characteristic of IBD dysbiosis is the elevation of certain groups of bacteria such as Proteobacteria in some patients. It is believed that the augmented bacteria may contribute for the inflammatory reactions underlying the typical lesions observed in the gut of CD and ulcerative colitis patients, by stimulating the production of cytokines by local cells of the immune system. Proteobacteria, one the most prevalent bacterial phyla of the gut microbiota are Gram negative rods of which Escherichia coli (E. coli) is the most well-known member. Given the significance of Proteobacteria as pathogens or member of resident gut microbiota, this work had two purposes: 1) to investigate the occurrence of numerical variation in the population of these bacteria in CD and 2) Characterizing E. coli isolates found in this population, in search for some virulence associated properties. For the first purpose, DNA from MacConkey broth cultures of distinct clinical materials (stools and gut mucosal biopsies) of 9 CD and 8 control patients were amplified with primers for the V6 and V8 regions of the 16S ribosomal RNA gene (16S V6-V8 rDNA) and distinct gene sequences (representing particular bacterial taxa) within the amplicons were resolved by temperature gradient gel electrophoresis (TGGE), defining band profiles, which reflect the bact... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Samira Esteves Afonso Camargo / Co-orientador: Luciane Dias de Oliveira / Banca: Graziella Nuernberg Back Brito / Banca: Paula Elaine Cardoso / Resumo: Este estudo se propôs a avaliar a atividade antimicrobiana do princípio ativo Timol e de um enxaguatório bucal (LISTERINE® ZEROTM) sobre Candida albicans, Staphylococcus aureus e Streptococcus mutans e também sua citotoxicidade e genotoxicidade em culturas de macrófagos (RAW 264.7). Após determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e da Concentração Microbicida Mínima (CMM) pelo método de microdiluição em caldo do extrato foi avaliada a ação antimicrobiana do Timol e do LISTERINE® ZEROTM em biofilme. A citotoxicidade do Timol e do LISTERINE® ZEROTM foi avaliada sobre as células pelo método MTT e também pela quantificação de TNF-α pelo método imunoenzimático ELISA. Ainda, a genotoxicidade foi determinada pela formação de micronúcleos nas células após 24 h de exposição ao Timol e 1min ao LISTERINE® ZEROTM e ao etilmetano sulfanato (controle positivo). Os dados foram avaliados pelos testes estatísticos ANOVA e complementado pelo teste de Tukey e Kruskal Wallis (nível de significância de 5%). Obtivemos resultados favoráveis quanto a ação antimicrobiana do princípio ativo para os micro-organismos testados sendo a CMM de 160 μg mL-1 eficaz para S. mutans e S. aureus e de 80 μg mL-1 para C. albicans, para LISTERINE® ZEROTM foi eficaz na concentração de 0, 3125 μg mL-1, em biofilme apresentou média de 1,85 ± 0,14 para Timol em S. mutans, 1,90 ± 0,07 para S. aureus e 6,66 ± 0,17 para C. albicans. A citotoxicidade do Timol foi observada acima de 5 μg mL-1, e o LISTERINE® ZEROTM foi tóxico para as células; quanto a genotoxicidade não foi observado dano ao nível de DNA. Desta forma concluímos que o princípio ativo Timol, possui ação antimicrobiana em concentrações mais elevadas, no entanto que nestas concentrações possui alta toxicidade celular, e o LISTERINE® ZEROTM possui ação antimicrobiana na menor concentração testada e é citotóxico / Abstract: This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of the active ingredient thymol and a mouthwash (LISTERINE® ZEROTM) on Candida albicans, Staphylococcus aureus and Streptococcus mutans and also their cytotoxicity and genotoxicity in macrophage cultures (RAW 264.7). After determining the minimum inhibitory concentration (MIC) and Minimum Concentration Microbicide (CMM) by microdilution broth method extract was evaluated the antimicrobial action of thymol and LISTERINE® ZEROTM n biofilm. The cytotoxicity of thymol and LISTERINE® ZEROTM on the cells was evaluated by MTT method and also by quantifying TNF-α by ELISA immunoenzymatic method. Further, genotoxicity is determined by the formation of micronuclei in cells after 24 h of exposure to thymol and the LISTERINE® ZEROTM 1min and ethylmethane sulfonate (positive control). Data were analyzed by ANOVA and Tukey complemented by test and Kruskal Wallis (5% significance level). We obtained favorable results regarding the antimicrobial action of the active ingredient for the microorganisms tested with the CMM 160 mg L-1 effective for S. mutans and S. aureus and 80 mg L-1 for C. albicans to LISTERINE® ZEROTM was effective at levels of 0, 3125 mg L-1, biofilm had a mean of 1.85 ± 0.14 for thymol in S. mutans, 1.90 ± 0.07 to 6.66 ± S. aureus and 0, 17 for C. albicans. The cytotoxicity of thymol was observed above 5 mg L-1, and LISTERINE® ZEROTM was toxic to cells; as genotoxic damage was not observed at the level of DNA. Thus we conclude that the active ingredient thymol, has antimicrobial action in higher concentrations, however that these concentrations has high cellular toxicity, and the LISTERINE® ZEROTM has antimicrobial action in the smallest concentration tested and is cytotoxic / Mestre

O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito antimicrobiano da irrigação e da medicação endodôntica em dentina infectada por biofilmes orais. Na primeira parte do estudo, avaliaram-se as seguintes soluções irrigadoras: hipoclorito de sódio a 1%, clorexidina a 2%, ácido cítrico a 10% e EDTA a 17%. Na segunda parte, avaliaram-se soluções irrigadoras contendo associações (MTAD, Smear Clear, Qmix, ácido maleico a 7%, iodo-iodeto de potássio a 2% e ácido peracético a 4%), sendo essas soluções comparadas a 2 concentrações de hipoclorito de sódio. Na terceira parte, avaliou-se o efeito de dispositivos sônicos, ultrassônicos e de laser na capacidade de limpeza do hipoclorito de sódio a 6%, com uso de microscópio eletrônico de varredura. Na quarta parte, avaliaram-se os efeitos antimicrobianos de 3 pastas de hidróxido de cálcio contendo 3 radiopacificadores diferentes (óxido de zinco, sulfato de bário e iodofórmio). No último experimento, foram avaliadas as propriedades antimicrobianas da pasta triantibiótica, da clorexidina em gel e da pasta aquosa de hidróxido de cálcio. Os resultados mostraram que todas as soluções de hipoclorito de sódio testadas e o ácido peracético a 4% foram mais efetivas sobre o biofilme em comparação a todos os irrigantes testados. As soluções de hipoclorito de sódio propiciaram significativamente uma melhor limpeza da dentina. O ácido peracético foi também efetivo para dissolver células do biofilme. A ativação do hipoclorito de sódio com o ultrassom e com laser interferiu favoravelmente na limpeza da dentina infectada. A pasta triantibiótica e o hidróxido de cálcio associado ao iodofórmio foram os medicamentos mais efetivos na descontaminação da dentina infectada. Portanto, o protocolo ideal que deve ser adotado para garantir uma descontaminação efetiva da dentina contaminada por biofilmes orais inclui o uso de hipoclorito de sódio ativado por ultrassom ou laser e medicação intracanal de hidróxido de cálcio com iodofórmio. O ácido peracético e a pasta triantibiótica apresentaram resultados promissores. / The aim of this study was to evaluate the antimicrobial effect of endodontic irrigation and medication on biofilm infected dentin. In the first part, we evaluated the following irrigant solutions: 1% sodium hypochlorite, 2% chlorhexidine, 10% citric acid and 17% EDTA. In the second part, irrigant solutions containing combinations of antimicrobials such as \"MTAD,\" \"Smear Clear\", \"Qmix\", 7% maleic acid and 2% iodine-potassium iodide and 4% peracetic acid were evaluated. These solutions were compared to 2 concentrations of sodium hypochlorite. In the third part, we evaluated the effect of sonic, ultrasonic and laser irrigation on the cleaning ability of biofilm infected dentin using 6% sodium hypochlorite under scanning electron microscope. In the fourth part, we evaluated the antimicrobial effects of 3 calcium hydroxide pastes containing 3 different radiopacifiers (zinc oxide, barium sulfate and iodoform). In the last experiment, we evaluated the antimicrobial properties of the triantibiotic paste, 2% chlorhexidine gel and calcium hydroxide paste. The results showed that the sodium hypochlorite and the peracetic acid solutions were more effective to decontaminate the biofilm infected dentin in comparison to all of the tested irrigants. The sodium hypochlorite solutions allowed significantly better cleaning of the dentine. The peracetic acid was also effective to dissolve the biofilm cells. Activation of 6% sodium hypochlorite with ultrasonic and laser increased the cleaning of biofilm infected dentin. The triantibiotic paste and calcium hydroxide associated to iodoform were the most effective intracanal dressings available for the decontamination of the infected dentin. Therefore, the ideal protocol to be adopted in order to ensure an effective decontamination of biofilm infected dentin includes the use of sodium hypochlorite, specially activated by ultrasound or laser; and the use of calcium hydroxide with iodoform intracanal dressing. The peracetic acid and the triantibiotic paste also showed promising results.

Lactobacilos são um grupo de bactérias relacionadas com cárie dental. Há falta de estudos sobre a biologia populacional dos lactobacilos na cárie dental. O objetivo do estudo foi avaliar o efeito das modificações ambientais na composição, diversidade genética dos lactobacilos e Identificar a filogenia dos Lactobacillus paracasei isolados do biofilme. Lactobacilos foram isolados em um modelo de formação de biofilme in situ antes e depois de 28 dias de exposição à solução de sacarose 20%. As colônias foram randomicamente selecionadas do meio Rogosa Ágar e subcultivadas (n=222, 31 antes e 191 após período de exposição à sacarose). Os isolados foram identificados usando o seqüenciamento parcial dos genes pheS ou rpoA. As espécies de lactobacilos predominantes encontradas foram L. paracasei, L. fermentum e L. rhamnosus. A diferença na composição e na diversidade genética de lactobacilos associada às modificações ambientais no biofilme foi analisada através de PCR utilizando palíndromes repetitivos extragênicos (REP-PCR). Após a fase com sacarose, um maior número de lactobacilos pode ser encontrado no biofilme (p=0,001). A prevalência de L.fermentum foi similar na fase sem sacarose (6/11 indivíduos colonizados) e na fase com sacarose (8/11 indivíduos colonizados) (p=0,721). A prevalência de L. rhamnosus e L. paracasei aumentou no biofilme de 2/11 para 8/11 indivíduos (p= 0,028) e de 2/11 para 7/11 indivíduos colonizados (p=0,012) após exposição a sacarose, respectivamente. A prevalência de L. gasseri foi baixa e em ambas as fases (p=1,00). As espécies de Lactobacilos apresentaram maior diversidade na fase com sacarose (2 a 3 espécies por indivíduo) do que na fase sem sacarose (0 a 2 espécies por indivíduo) (p=0,045). Na maioria dos casos, diferentes genótipos estavam presentes na fase sem sacarose em comparação à fase com sacarose (p=0,01). Aqueles lactobacilos identificados como L. paracasei foram também submetidos à tipificação através do seqüenciamento de múltiplos loci (MLST). No MLST, foi obtida a sequência parcial de 7 genes de referência: fusA, ileS, lepA, leuS, pyrG, recA, e recG. Sete indivíduos apresentavam L. paracasei (n=75) e 14 seqüências de tipificação (ST) foram encontradas. Verificou-se que indivíduos não relacionados podem apresentar uma mesma ST e que múltiplas STs estão presentes por indivíduo. Três indivíduos apresentavam STs previamente isoladas de produtos alimentícios lácteos. Resultados conflitantes na comparação entre REP-PCR e MLST foram observados na genotipagem de L. paracasei. Diferentes números de padrões foram obtidos para os L. paracasei de acordo com o método molecular utilizado (14 com MLST versus 25 com REP-PCR). Para algumas cepas, REP-PCR foi mais discriminatório do que MLST. Em outros casos, cepas pertencentes a diferentes STs foram agrupadas pelo REP-PCR, mostrando que o MLST foi mais discriminatório do que o REP-PCR. Em poucos casos, MLST e REP-PCR apresentaram o mesmo poder discriminatório. Em geral, REP-PCR mostrou um maior poder discriminatório em comparação ao MLST, mas pouca concordância foi apresentada entre os dois métodos. Assim, MLST pode contribuir na identificação da diversidade genética obtida pelo REP-PCR em alguns casos. Os dados obtidos permitiram concluir que após exposição a sacarose observa-se (a) aumento no número de lactobacilos e de superfícies colonizadas; e (b) aumento na diversidade genética e de espécies. Além disso, observou-se que (c) alguns lactobacilos orais podem apresentar origem exógena, e que (d) a combinação dos métodos MLST e REP-PCR aumenta o poder discriminatório quanto à diversidade genética de L. paracasei. / Lactobacilli are a group of bactéria related to dental caries. There is a lack of studies on the population biology of this organisms in dental caries. The aim of the study was to evaluate the effect of the environmental changes in the composition, genetic diversity and identify the filogeny of Lactobacillus paracasei isolated from biofilm. Lactobacilli were isolated from a biofilm model, formed in situ prior to and during a 28-day period of exposure to 20% sucrose solution. The lactobacillus colonies were randomly selected from Rogosa Agar medium and subcultured (n=222, 31 prior to and 191 following a sucrose exposure period). The isolates were identified using pheS or rpoA gene sequence analysis. The predominant lactobacilli were L. paracasei, L. fermentum and L. rhamnosus. The difference in composition and genetic diversity of lactobacilli related to environmental changes in biofilm was analysed by repetitive extragenic palindromic PCR (REP-PCR). After the sucrose phase, a higher number of lactobacilli could be found in dental biofilm (p=0.001). The prevalence of L. fermentum was similar in the non-sucrose (6/11 subjects) compared to the sucrose phase (8/11 subjects) (p=0.721). Prevalence of L. rhamnosus and L. paracasei increased in biofilm from 2/11 to 8/11 subjects (p= 0.028) and from 2/11 to 7/11 subjects (p=0.012) after sucrose exposure, respectively. L. gasseri prevalence was low in both phases (p=1.00). Lactobacilli exhibited greater species diversity (2 or 3 species per subject) in the sucrose phase, than those isolated from the non-sucrose phase (0-2 species per subject) (p=0.045). In most of the cases different genotypes were present in the non-sucrose phase in comparison to the sucrose phase. Those lactobacilli identified as L. paracasei were subjected to multilocus sequencing typing (MLST). In MLST, partial sequences of seven housekeeping genes fusA, ileS, lepA, leuS, pyrG, recA, and recG was obtained. Seven subjects harboured L. paracasei (n=75) and these represented 14 sequence types (ST). Comparison of the STs showed that unrelated subjects may harbour the same ST and that individuals harbour multiple STs. Three subjects harboured STs previously isolated from dairy products. There were mixed results among REP-PCR patterns compared with the MLST in the L. paracasei genotyping. Different numbers of patterns were obtained for L. paracasei according to the molecular technique used (14 MLST versus 25 REP-PCR patterns). For some strains, REP-PCR was more discriminatory than MLST. In other cases, strains belonging to different ST were grouped together by REP-PCR, showing that MLST was more discriminatory than REP-PCR. In few cases MLST and REP-PCR presented the same discriminatory power. REP-PCR showed a greater discriminatory power in comparison to MLST, but little agreement was observed between this two methods. Therefore, MLST could enhance the genetic diversity obtained by REP-PCR. The present data support that after sucrose exposure there is (a) an increase in the number of lactobacilli and colonized surfaces; and (b) increase in lactobacilli species and genetic diversity. Also it was found that (c) some oral lactobacilli may be of exogenous origin; and (d) the combination of MLST and REP-PCR increased the discriminatory power in genotyping L. paracasei.