En los vertebrados, las gonadotrofinas (FSH y LH) son hormonas esenciales en el control de la gametogénesis y esteroidogénesis gonadal. Sus acciones están mediadas por la activación de sus respectivos receptores. A pesar de su importancia en la función reproductora, en teleósteos se dispone de muy poca información relativa a estos receptores. En este trabajo se investigaron las características moleculares, estructurales y funcionales de los receptores de gonadotrofinas (FSHR y LHR) de un teleósteo marino, la lubina (Dicentrarchus labrax). Además, se evaluó la especificidad de unión al ligando de estos receptores. Usando un método de RT-PCR cuantitativo, se midieron los perfiles de expresión de los receptores de gonadotrofinas durante la primera maduración gonadal de machos y hembras de lubina. Asimismo, se investigaron posibles relaciones entre estos perfiles, los de la proteína responsable de la respuesta aguda de la esteroidogénesis (StAR) y los perfiles plasmáticos de esteroides sexuales. Estudios recientes realizados en diversas especies de peces sugieren que el receptor de TSH (TSHR), que comparte características estructurales con los receptores de gonadotrofinas, podría estar directamente implicado en la fisiología gonadal. Por ese motivo, en este trabajo se investigó una posible participación del TSHR en la función reproductora de la lubina. Los resultados obtenidos contribuyen a entender en que momento del ciclo reproductor las células germinales en crecimiento son sensibles a las señales procedentes de la hipófisis (gonadotrofinas). Además, se ha demostrado que, a diferencia de otros peces, las interacciones entre los receptores de gonadotrofinas de lubina y sus respectivos ligandos son específicas. Asimismo, podemos decir que en la lubina, los receptores de gonadotrofinas se expresan en momentos diferentes del ciclo reproductor. Esto apoya la idea de que la FSH y la LH poseen diferentes acciones en el control de la función gonadal. Desde de un punto de vista aplicado, estos conocimientos podrían ser de gran importancia en la manipulación del ciclo reproductor de esta especie de gran valor económico. Por lo tanto, estos estudios son relevantes tanto por su componente de investigación básica como por las posibles aplicaciones que pueden derivarse. / In vertebrates, the pituitary gonadotropins, follicle-stimulating hormone (FSH) and luteinizing hormone (LH), are the main regulators of gametogenesis and gonadal hormone production. To exert their biological actions, gonadotropins must bind to, and activate specific cell-surface receptors. The primary aim of the studies underlying this thesis was to investigate the role of gonadotropins in the sea bass (Dicentrarchus labrax) reproductive function by studying their cognate receptors. Two cDNAs encoding a FSH receptor (sbsFSHR) and a LH receptor (sbsLHR) were cloned and characterized. Their gene structure, expression, and functional activity were evaluated. Sea bass FSHR and LHR mature proteins display typical features of the glycoprotein hormone receptor family members, but the sbsFSHR also contains some remarkable differences when compared with other fish or mammalian FSHRs. Among them, a distinct extracellular N-terminal cysteine domain as regards to its length and cysteine number, and the presence of an extra leucine-rich repeat. sbsLHR is more conserved than sbsFSHR when comparing their genomic primary structures with other vertebrate gonadotropin receptors, particularly in the extracellular domain. Furthermore, two alternately spliced variants of the sbsFSHR were amplified. Both correspond to transcripts originated by removal of exons from the extracellular domain. Expression analysis revealed that the sbsFSHR is exclusively expressed in gonads, specifically in the wall of previtelogenic and early-vitelogenic follicles. On the contrary, sbsLHR mRNA was found to be widely distributed in somatic tissues. Recombinant sbsFSHR was specifically stimulated by bovine FSH, while sbsLHR was activated by both bovine LH and FSH. Nevertheless, specific stimulation of both sea bass FSHR and LHR was observed when recombinant sea bass gonadotropins were used advancing specific interactions. This behaviour differs from studies in other teleost where promiscuous activation was reported. The expression profiles of sea bass gonadotropin receptors were investigated in the gonads of both sexes during a complete reproductive cycle, in parallel with the expression of steroidogenic acute regulatory protein (StAR) gene and reproductive hormones. While in male sea bass, both gonadotropin receptors show different expression patterns, in females their expression patterns were somehow similar. Expression of the sbsFSHR was connected with early stages of gonadal development, but also with the spermiation period in males and the maturation-ovulation period in female. The expression profile of the sbsLHR, in both sexes, supports the already suggested involvement of LH in the regulation of the final stages of fish gamete maturation and ovulation/spermiation. sbsStAR expression was strongly correlated with sbsLHR expression. In addition, the expression profile obtained for sbsStAR suggests that this protein mediates the rapid delivery of sterol substrate for the synthesis of gonadal maturation inducing steroids. No strong relationship between gonadotropin receptor expression and plasma levels of the analysed sex steroids was seen. Further studies will be needed to understand how gonadotropins and sex steroids interact to regulate sea bass reproduction.Recent studies reported abundant expression of TSHR transcripts in both the ovary and testis of some fish species. To help elucidate the physiological role that TSHR may have in the gonadal function of sea bass, a cDNA encoding a TSHR was isolated from the gonads of this fish species. The mature protein displays typical features of the members of the glycoprotein hormone receptor family. By RT-PCR analysis we demonstrate the extra-thyroidal expression of sbsTSHR in numerous tissues of the sea bass. Seasonal changes in sbsTSHR mRNA levels in female and male sea bass during puberty suggest that in females the TSHR could participate in active vitellogenesis and in the regulation of gamete maturation and ovulation, whereas in males, the TSHR would be involved in the regulation of early stages of the gonadal development and also of gamete maturation and spermiation.

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Una de las estrategias más satisafactorias empleadas en la lucha contra el cáncer es la utilización de la terapia génica para actuar en la inmunomodulación, es decir la actuación sobre el propio sistema inmunitario del paciente para que sea éste quien reconozca al tumor como algo foráneo, que no escape a la inmunovigilancia y lograr destruirlo. En esta tesis doctoral hemos explorado bajo este concepto las vacunas por terapia génica no viral, tanto preventivas como terapéuticas, trabajando bien con antígenos aislados y genes como con células y genes. Los experimentos en modelo de melanoma murino, se han divido en tres grandes bloques. 1) En las vacunas preventivas con antígenos, se obtuvieron diferentes tasas de reducción de volumen tumoral, acompañadas de producción de inmunnoglobulinas G específicas frente al tumor tratado. Se obtuvieron los mejores resultados en modelos de vacunación con acondicionamiento tisular en los que inicialmente se acondicionaba al animal con los antígenos purificados, transfectando posteriormente con plásmidos desnudos productores del gen de mGM-CSF. 2) En las vacunas preventivas celulares, transfectando células B16 con plásmidos portadores de los genes de mGM-CSF, mIL-12, mB7.2 y combinaciones entre ellos, se obtuvo la protección total frente al tumor en los animales vacunados con 3 dosis de 2x105 células transfectdas, irradiadas, no seleccionadas. Además se demostró que la vacunación había generado memoria inmunológica, al repetir la exposición al tumor en los mismos animales un año después y volver a lograr la protección total. Adicionalmente se realizaron experimentos de vacunación exclusivamente con las células transfectadas, seleccionadas y purificadas mediante bolas magnéticas. 3) Por último, se realizaron experimentos de vacunación terapéutica, en animales portadores de tumor, siguiendo el modelo de células transfectadas. Se probaron diferentes dosis celulares y el tratamiento previo con ciclofosfamida. Los mejores resultados de inhibición tumoral y prolongación de la supervivencia se obtuvieron en las vacunas con 2 millones de células/dosis. Finalmente se realizó una primera aproximación al estudio del bloqueo del éxito de la vacunación terapéutica, analizando la población de células T reguladoras en los animales tratados. / One of the most satisfactory strategies against cancer is the use of gene therapy for immunemodulation, that is acting over the patient's immune system in order to make it recognize the tumor and fight properly against it. In this thesis, we have explored the nonviral gene therpy vaccines under this concept, working with preventive as well as therapeutic models, with purified antigens and genes and also with whole cells and genes. The experiments have been performed with a murine melanoma model and been divided in three sets. 1) In preventive antigen vaccines, different rates of tumor growth inhibition were obtained, acompained by specific antitumor immunoglobulin G production. The best results were obtained with tissue conditioning, where the animals were firstly conditioned with purified tumor antigens and later the tissues were transfected in vivo with naked plasmids producing mGM-CSF. 2) In preventive cell vaccines, transfecting B16 cells with plasmids bearing mGM-CSF, mIL-12, mB7.2 genes alone or combined, total tumor protection was obtained vaccinating with 3 doses of 2x105 transfected, irradiated, non selected cells. This vaccine also showed immunological memory since a second challenge to the tumor in the same animals one year later also reached total protection. In addition, experiments vaccinating only with the selected population of transfected cells, by means of magnetic beads, were performed. 3) Finally, therapeutic vaccines were evaluated, continuing with transfected cells. Different cell doses and pretreatment with cyclophosphamide were tested. The best results of tumor growth inhibition and survival were obtained with 2 million transfected cells/dose. A first approach to the study of the blockade in therapeutic model success was performed analysing the regulatory T cell population in the treated animals.

El género Saccharomyces incluye tanto especies naturales como especies de levaduras que se utilizan en fermentaciones industriales y tradicionales. Algunas bebidas fermentadas, como son el Pulque y la Chicha, se obtienen mediante un proceso tradicional desarrollado durante el Neolítico americano en las civilizaciones precolombinas mesoamericanas y andinas. Por ello, las levaduras que participan en estos procesos de fermentación han estado aisladas de las poblaciones vínicas del resto del mundo, hasta la llegada de los europeos en 1942, con la introducción de nuevos procesos fermentativos, como son la producción de vino y los destilados. El objetivo del presente estudio fue determinar la variación genética de las cepas del género Saccharomyces, tanto presentes en fermentaciones tradicionales como las de procesos fermentativos industriales, para deducir el origen y la historia evolutiva de Saccharomyces cerevisiae. Con técnicas moleculares se detectó a S. cerevisiae y S. paradoxus en bebidas tradicionales de Latinoamérica, y mediante estudios fisiológicos se demostró que S. cerevisiae presenta propiedades tecnológicas adecuadas para una fermentación vínica. Con el análisis filogenético de cuatro regiones nucleares y una mitocondrial se detectó que S. cerevisiae esta compuesta por dos poblaciones, una de ambientes vínicos y la otra de ambientes no vínicos, muy diferentes entre ellas. Las poblaciones vínicas se caracterizan por ser un grupo muy homogéneo, con baja tasa de recombinación, alta frecuencia de homocigosis, con menos diversidad genotípica y menos divergencia nucleotídica. Esto indica una reciente domesticación, con reproducción clonal y sucesos de autodiploidización. En cambio, las poblaciones no vínicas están formadas por un grupo muy heterogéneo, con reproducción clonal pero la reproducción sexual más frecuente por anfimixis. La detección de alelos vínicos y no vínicos entre las cepas de las poblaciones latinoamericanas indica que existe flujo genético entre ambas poblaciones. Por otro lado, se detectó que los alelos vínicos de S. cerevisiae no provienen de S. paradoxus sino de los alelos no vínicos de S. cerevisiae. En base a los resultados obtenidos se proponen dos posibles escenarios no incompatibles para el origen de S. cerevisiae. En un primer escenario, las cepas no vínicas forman una población muy heterogénea con alelos muy diversos, lo que dio lugar a la aparición de las cepas vínicas por domesticación, y se vio reducida la diversidad genética cuando se fijaron los alelos vínicos. En el segundo caso, las cepas vínicas y no vínicas, son poblaciones con alelos muy diferentes, pero con flujo genético se intercambiaron alelos vínicos en no vínicos, pero muy raro en el otro sentido. Finalmente se proponen que al menos tres eventos de hibridación dieron origen a las cepas híbridas aisladas de vinos, y probablemente a partir de uno solo para las cepas híbridas cerveceras. Sin embargo, los fenómenos de recombinación y de introgresión detectados entre diferentes especies de Saccharomyces permiten suponer que la hibridación puede ocurrir con mayor frecuencia. / Traditional fermented beverages and foods from Latin America are poorly studied. The yeast microbiota involved in these ancient processes has been isolated from "Old World" yeast populations until the introduction of winemaking and distillation. The aim of this work was to study the genetic variation of Saccharomyces strains from traditional and industrial fermentations and to deduce the origin and evolution of S. cerevisiae. S. cerevisiae and S. paradoxus were isolated from traditional Latin American fermentations. Some of the investigated S. cerevisiae strains showed good physiological properties that are important in the wine production. A genetic analysis was performed based on sequencing of four nuclear and one mitochondrial gene of strains isolated from Latin-American traditional and industrial (mainly European) fermentative processes. Genetic variability from S. cerevisiae strains shows two populations, one from wine and the second from non-wine fermentations. Wine population represent a very homogeneous group, with low recombination rate, high frequency of homozygous strains, low genotypic diversity and low nucleotide divergence. These finding indicate a recent domestication event by clonal reproduction and some events of haplo-selfing. Non-wine populations represent a heterogeneous group, with clonal reproduction and rare sexual reproduction by anfimixis. Wine and non-wine alleles detected in Latin-American populations indicated genetic flow. Phylogenetic analysis shows that wine alleles of S. cerevisiae are originated from non-wine alleles of S. cerevisiae, but not from S. paradoxus. Two theories are proposed for the origin of wine S. cerevisiae strains: 1) wine yeast represent a population with low genetic diversity because "wine" alleles were fixed and emerged after domestication event from an ancestral and heterogeneous population of non-wine yeast; 2) wine and non-wine strains represent populations with different alleles, but genetic flow is frequent from wine to non-wine, and rare in opposite direction. Recombination and introgresion events detected in Saccharomyces species indicated that hybridizations occur more frequently then expected. According to the phylogenetic results wine hybrids S. cerevisiae x S. kudriavzevii were originated from three hybridizations events, and brewery hybrids from one.

El riesgo de desarrollar una enfermedad cardiovascular en pacientes con hipertensión (HTA) se incrementa en más de 3 veces con respecto a otras enfermedades de elevado riesgo cardiovascular (diabetes, hipercolesterolemias, etc.), siendo además la HTA la mayor causa de mortalidad y morbilidad cardiovascular. La HTA se representa como una patología compleja que a menudo se asocia a otras alteraciones como microalbuminuria, disfunción endotelial, etc. Bajo estas condiciones fisiopatológicas se ha demostrado que se produce un aumento en la generación de especies oxidantes en el organismo, superando la capacidad de protección de los sistemas celulares de defensas antioxidantes, lo que provoca estrés oxidativo (EO).En la presente tesis doctoral se ha caracterizado el EO a nivel bioquímico y genético, mediante el análisis de los productos finales de EO, niveles de ARN mensajero y polimorfismos de genes implicados en la producción y defensa de EO y que pudieran afectar a la presión arterial y el daño orgánico.En este estudio se han analizado parámetros de EO como los glutatión reducido y oxidado, malondialdehido y 8-hidroxi 2-desoxiguanosina tanto en células mononucleares circulantes como en plasma de pacientes hipertensos (con y sin tratamientos) y en normotensos.Además, se han cuantificado los niveles de ARNm de los principales genes de estos sistemas, en linfocitos de hipertensos y controles (NADPHoxidasa, catalasa, superóxidos dismutasas y enzimas del sistema glutatión y tiorredoxina).Por otra parte, se ha realizado el estudio de variantes genéticas de genes de los sistemas implicados en EO, localizados en regiones que podrían afectar en la homeostasis oxidativa, lo que da lugar a alterarse la función de las proteínas y promotor región polimorfismos que alteran los niveles de EO como consecuencia de la regulación de genes. Esta parte del estudio se ha llevado a cabo en una población de hipertensos, controles y una población general.Los resultados obtenidos nos muestran que en la HTA esencial:1. Exite un aumento en los niveles de estrés oxidativo tanto en plasma como en células monolinfocitarias y a su vez este aumento se ve correlacionado con los niveles de presión arterial (PA) de los sujetos. Además, el EO se relaciona con el aumento los niveles de excreción urinaria de albúmina (EUA) independientemente de los valores de PA.2. Se produce un aumento de los niveles de ARNm de genes que codifican las distintas subunidades de NAD(P)H oxidasa y una disminución de los niveles de ARNm de las enzimas antioxidantes en monolinfocitos. Además, estos cambios se relacionan con el estado crónico de EO presente en la HTA, a pesar de la activación del sistema tiorredoxina y la enzima Manganeso Superóxido Dismutasa. Por tanto, los pacientes hipertensos tanto en presencia o en ausencia de microalbuminuria se encuentran peor protegidos frente a EO que los sujetos control.3. Independientemente del tratamiento antihipertensivo utilizado, los niveles de los marcadores bioquímicos de EO se reducen, y también los niveles de ARNm de todas las enzimas implicadas.4. Los análisis de asociación han mostrado que ciertas variantes, y sus haplotipos, se encuentran asociadas a niveles de EO, PA, EUA y riesgo de microalbuminuria en sujetos hipertensos. Hay que destacar que estos datos se han replicado en otra población de hipertensos y en la población general, donde se han mantenido dos de estas asociaciones.5. En el análisis de asociación entre los polimorfismos de distintos genes observamos la interacción entre el gen de la XDH y GPX1 en la población hipertensa. Estas interacciones nos confirman la naturaleza compleja de esta patología y de la necesidad de enfocar las nuevas investigaciones hacia el estudio de las interacciones entre distintos genes y estos con los factores ambientales. / Hypertension is a complex disease that is often associated with other disorders such as microalbuminuria, endothelial dysfunction, etc. Under this pathophysiological condition has been shown that there is an increase in the generation of oxidizing species in the body, without being able to avoid the protection capacity of cellular antioxidant defense systems, leading to oxidative stress (OS).In this thesis OS status has been characterized by biochemical and genetic level of OS byproducts, messenger RNA levels and polymorphisms of oxidant and antioxidant system genes.The results have shown increased levels of oxidative stress in blood and peripheral mononuclear cells and this increase is correlated with levels of blood pressure (BP) in essential hypertension.Furthermore OS seems to be a determinant of urinary albumin excretion (UAE) independent of BP levels even in hypertensive subjects.The increase in mRNA levels of genes encoding different subunits of NAD(P)H oxidase complex and decreased mRNA levels of antioxidant enzymes in peripheral mononuclear cells, has been related to the chronic state of OS in the hypertension, despite the action of thioredoxin system and manganese superoxide dismutase enzyme. Thus, hypertensive patients in presence or absence of microalbuminuria are less protected from OS compared to control subjects. Furthermore, any type of antihypertensive treatment reduced the levels of OS, and therefore also the mRNA levels of all enzymes involved.The association analysis have confirmed that certain genetic variants, their haplotypes and their interactions, are associated with levels of OS, BP, UAE and microalbuminuria risk in hypertensive subjects. It should be noted that these results have been replicated in another hypertensive population and in spanish general population some associations have remained.

La ataxia de Friedreich (FA) es una enfermedad neurodegenerativa autosómica recesiva con una prevalencia en la población de 1- 4 casos cada 100.000 habitantes. La mutación más común que provoca la ataxia de Friedreich es la expansión de la repetición del microsatélite GAA situado en medio de una secuencia Alu-Sx en el primer intrón del gen FXN. Las repeticiones asociadas a la enfermedad se encuentran en el intervalo desde 70 a más de 1000 repeticiones del triplete. El gen produce una proteína llamada frataxina cuya síntesis se ve comprometida en los pacientes ya que las expansiones del triplete GAA interfieren en la transcripción del gen. La función de la proteína no está del todo clara aunque se conoce que desempeña dicha función en la mitocondria. Así, se barajan varias hipótesis, (1) la frataxina sería una proteína que participaría en el sistema de almacenaje del hierro en la mitocondria; (2) otra posible función que podría desempeñar la frataxina es que actuase como transportador de hierro; (3) como tercera posible función, la frataxina estimularía la actividad de la cadena de transporte de electrones activando la formación de ATP; (4) además se ha descrito que la frataxina actuaría como antioxidante mitocondrial, cuya función sería eliminar los productos oxidativos como son las especies reactivas del oxigeno (ROS); o por último (5) la frataxina actuaría como una proteína chaperona para la formación de los centros Fe-S de proteínas mitocondriales. En este trabajo se ha abordado el estudio de la función del gen fh en Drosophila melanogaster empleando la técnica del ARN de interferencia, así como la confirmación de la localización mitocondrial de la frataxina. El sistema de la ARN de interferencia fue complementado con el uso del sistema UAS-GAL4 que permite la interferencia del gen fh en un patrón concreto. En este caso se han realizado estudios a nivel bioquímico de individuos que interfieren el gen fh de forma ubicua. Además estos estudios se realizaron modificando las condiciones de estrés oxidativo. Los resultados obtenidos apoyan el hecho de que, al menos en nuestro modelo, este factor sería importante en el desarrollo de la enfermedad así como que, en estas condiciones de alto estrés oxidativo y con reducción de la proteína frataxina, la aconitasa sería la enzima más sensible. Por otra parte, se ha comparado el patrón de desarrollo embrionario de individuos que sobreexpresaban el gen fh y que expresan el gen humano FXN. Los tejidos que se han comparado son los más afectados en los pacientes con ataxia de Friedreich, y son el sistema nervioso periférico (SNP), el sistema muscular en el cual se incluye el corazón, así como también el sistema nervioso central (SNC). En este estudio hemos observado que se produce una falta de fusión entre algunos músculos del embrión de Drosophila melanogaster,. Además, se ha observado una gran desestructuración de las fibras nerviosas que forman SNP. Por otra parte, no se ha observado ningún defecto ni en el SNC, que concuerda con los resultados obtenidos con la sobreexpresión del propio gen fh, ni en el corazón, el cual sí se veía afectado en el desarrollo de los individuos que sobreexpresaban el gen fh. A nivel bioquímico, tanto la sobreexpresión del gen fh como la sobreexpresión del gen FXN tienen como resultado la reducción de la actividad de la enzima aconitasa. Estos resultados nos permiten afirmar que las funciones de la frataxina humana y la de Drosophila melanogaster están conservadas, apoyando el uso de este organismo como modelo tanto para el estudio de la función de la frataxina. / Friedreich ataxia (FA), the most common form of hereditary ataxia, is caused by a deficit in the mitochondrial protein frataxin. While several hypotheses have been suggested, frataxin function is not well understood. Oxidative stress has been suggested to play a role in the pathophysiology of FA, but this view has been recently questioned, and its link to frataxin is unclear. We report the use of RNA interference (RNAi) to suppress the Drosophila frataxin gene (fh) expression. This model system parallels the situation in FA patients, namely a moderate systemic reduction of frataxin levels compatible with normal embryonic development. Under these conditions, fh-RNAi flies showed a shortened life span, reduced climbing abilities, and enhanced sensitivity to oxidative stress. Under hyperoxia, fh-RNAi flies also showed a dramatic reduction of aconitase activity that seriously impairs the mitochondrial respiration while the activities of SDH, respiratory complex I and II, and indirectly complex III and IV are normal. Remarkably, frataxin overexpression also induced the oxidative-mediated inactivation of mitochondrial aconitase. This work demonstrates, the essential function of frataxin in protecting aconitase from oxidative stress-dependent inactivation in a multicellular organism. Moreover our data support an important role of oxidative stress in the progression of FA and suggest a tissue-dependent sensitivity to frataxin imbalance. We propose that in FA, the oxidative mediated inactivation of aconitase, which occurs normally during the aging process, is enhanced due to the lack of frataxin. Moreover we carried out studies comparing the development between flies overexpressing fh and flies overexpressing the frataxin human gene FXN. We have seen structural abnormalities in the muscular and nervous systems in flies interfering and overexpressing fh in an ubiquitous way or in a tissue-specific patterns (PNS and heart). Flies expressing human frataxin showed the same abnormalities in the PNS although these defects were stronger than those observed for fly frataxin overxpression. However the heart developed normally in the transgenic flies carrying the FXN gene. Concerning the biochemical studies, we have seen significant reduction of the aconitase activity being similar in all scenarios. Moreover, in all cases flies showed reduction of lifespan and defects in behaviour as climbing.

La esquizofrenia es un desorden mental severo, con una incidencia del 1% y una elevada heredabilidad (alrededor del 80%). Por ello, hay un enorme interés en conocer los factores genéticos implicados en la vulnerabilidad a padecer esquizofrenia. Sin embargo, esta enfermedad presenta una herencia poligénica y además un importante número de factores ambientales parecen influir en su aparición. Asimismo, la heterogeneidad clínica también es elevada y esto dificulta el tener un fenotipo bien definido para el estudio genético. Por ello, el estudio de fenotipos más recortados y mejor definidos puede ser de gran utilidad. En el presente trabajo, se han seleccionado nueve genes de interés. Nuestra hipótesis principal es que variaciones en estos genes modulan la vulnerabilidad a padecer esquizofrenia o alguno de sus rasgos característicos, particularmente las alucinaciones auditivas, el deterioro cognitivo y la disfunción emocional. Como objetivo, nos planteamos el estudio de polimorfismos genéticos en varias muestras caso-control y familiares de España, Alemania y Estados Unidos. Se realizaron análisis de asociación caso-control, basados en familias y estudios de asociación con diferentes escalas clínicas. Asimismo, se estudió el impacto de ciertos polimorfismos sobre fenotipos de neuroimagen estructural y funcional. Los resultados más interesantes fueron los siguientes: por una parte, diferentes genes del sistema serotoninérgico (principalmente los genes SLC6A4 y HTR2A) parecían influir en el estado emocional del paciente, así como en la respuesta emocional del paciente a las alucinaciones auditivas. Además, el gen ASPM se asoció con el riesgo de psicosis y con diferentes parámetros cognitivos y de neuroimagen. Otros genes como NOS1, STMN1, PDE4D y PLEKHB1 parecían influir sobre el riesgo de psicosis, así como sobre las puntuaciones obtenidas en diferentes escalas psicopatológicas, si bien en estos casos la significación fue menor. Todos estos resultados permiten proponer un modelo de vulnerabilidad, según el cual ciertos genes tendrían un mayor efecto sobre la vulnerabilidad a sufrir esquizofrenia, mientras que otros genes influirían sobre la severidad de ciertos síntomas. Además, nuestros resultados apoyan la existencia de una vulnerabilidad genética a respuestas emocionales aberrantes, que podría estar modulada por la variación en ciertos genes, tales como el transportador de serotonina. / Schizophrenia is a severe psychotic mental disorder, with a prevalence of around 1% in general population. It is well known that this disease presents a high heritability (around 80%). For this reason, there is a great interest in discovering the genetic factors affecting the risk for schizophrenia. However, due to the polygenic inheritance of this disorder, it is particularly hard to discover schizophrenia-related genes. Moreover, it has been hypothesized that an important number of environmental factors of different nature may affect the vulnerability to schizophrenia. Furthermore, schizophrenia is a clinically heterogeneous disorder and it can be particularly difficult to have a well-defined phenotype for genetic studies. For all these reasons, we consider that it is important to study the neurobiology of schizophrenia as a global entity, but also to complement these studies with other approaches, for example through the use of other alternative phenotypes, such as cognitive impairment, electrophysiological responses or auditory hallucinations, for example. In the present study, different candidate genes were selected. Our main hypothesis is that variations in these nine genes modulate the vulnerability to schizophrenia and some of their most characteristic and important features, particularly auditory hallucinations, cognitive impairment and, finally, the emotional dysfunction associated to schizophrenia. To test this hypothesis, we focused the study on the analysis of genetic polymorphisms (mainly single nucleotide polymorphisms) in three case-control samples from Spain, Germany and United States and a family sample from the United States. All samples were of Caucasian origin. Different analysis were performed, namely case-control association analysis, family-based association analysis (in some cases) and association analysis with clinical measures that corresponded to different psychopathological scales (BPRS, KGV, PANSS and PSYRATS for auditory hallucinations and delusions). Moreover, we also assessed the impact of certain genetic polymorphisms on functional and structural neuroimaging phenotypes, which evaluated both cognitive and emotional aspects. The most interesting results were the following: first, several polymorphisms from serotonergic system genes (mainly SLC6A4 and HTR2A genes, but also TPH2 gene to a lesser extent) appeared to modulate the patient's emotional state, including the emotional response to auditory hallucinations, assessed with clinical scales and neuroimaging techniques. Moreover, the positive selection gene ASPM, involved in neurodevelopmental processes, was associated with the risk for psychosis and with different cognitive and neuroimaging measures in both the Spanish and the American sample. Other genes such as NOS1, STMN1, PDE4D and PLEKHB1 also appeared to influence the risk for psychosis and the scores in some psychopathological scales, although in these cases significance was weaker.All these findings allow us to propose a vulnerability model. According to this model, some genes would have a major effect on the vulnerability to schizophrenia, while other genes would have an effect on the severity to certain symptoms. Regarding the vulnerability to auditory hallucinations, our results also support the existence of a genetic vulnerability to aberrant emotional responses, which could be modulated by the variation in different genes, such as the serotonin transporter gene, among others.

En los materiales carbonáticos marinos del Triásico de la Península Ibérica se han muestreado 23 secciones, que de Norte a Sur son: en la Cordillera Pirenaica, Usseu, Sant Sebastià, Hostalets-Cadí y Alós de Balaguer; en la Cordillera Costero-Catalana, L'Ametlla, Olessa, Rasquera- Benifallet y Tivissa; en la Cordillera Ibérica, Calanda, Tramacastilla Libros, Henarejos, Moya, Bugarra y Montserrat; en la Cordillera Bética, Espejeras, Calasparra, Canara, Arroyo Hurtado, Valdepeñas de Jaén, Salmerón, Boyar y Cabo Cope.En conjunto para los materiales del Triásico de la Península Ibérica se han identificado doce especies. En el Anisiense: Neogondolella basisymetrica Budurov & Stefanov, Neogondolella constricta (Mosher & Clark), Neogondolella cornuta Budurov & Stefanov, Neogondolella excentrica Budurov & Stefanov, Neogondolella longa Budurov & Stefanov, Paragondolella bifurcata Budurov & Stefanov, Paragondolella bulgarica Budurov & Stefanov y Paragondolella hanbulogi Sudar & Budurov. De edad Ladiniense se registran los taxones Sephardiella truempyi (Hirsch), Sephardiella mungoensis (Diebel) y Pseudofurnishius murcianus van den Boogaard. Finalmente, de edad Carniense, Sephardiella cf. mostleri (Kozur).En el Ladiniense de la Península Ibérica, la especie más abundante es Pseudofurnishius murcianus. De esta especie se propone su desarrollo ontogénico y se puede reconstruir su aparato conodontal, que es de tipo septimembrado. El estudio de su variabilidad morfológica nos ha llevado a considerar que P. huddlei van den Boogaard & Simon debe de ser incluida dentro de esa variabilidad y a rechazar las diferentes subespecies de P. murcianus. De Sephardiella mungoensis se ha propuesto un modelo de su desarrollo ontogénico y se ha reconstruido también su aparato conodontal.Ha sido propuesto un mecanismo funcional para diferentes elementos P1. Así, para Neogondolella-Paragondolella se interpreta que realizaban una función de corte, para Pseudofurnishius una función principal de machacamiento del alimento y para Sephardiella se propone una función de corte-desgarramiento y también machacador del alimento.En cuanto a los aspectos tafonómicos, se ha comprobado que existe una preservación diferencial claramente favorable a los elementos P1 frente al resto de multielementos, siendo el elemento P2 el más raro en el registro. El estudio del estado de preservación del material ha permitido observar cinco tipos de alteración tafonómica.Mediante la revisión de cerca de 500 artículos relacionados con conodontos del Pérmico Superior al Triásico Superior se han desarrollado varias bases de datos, que se han utilizado para diferentes discusiones: primero, tras una revisión crítica se han aceptado 184 especies de conodontos como válidas. Segundo, se ha considerado la distribución paleogeográfica de las especies de conodontos en cada piso del Triásico, figurando los principales taxones en distintos paleomapas. Tercero, se han calculado las tasas de especiación, extinción e incremento neto para los distintos pisos del Triásico. El grupo muestra una rápida recuperación en el Triásico Inferior, seguido por una estabilización durante el Triásico Medio. Durante el inicio del Triásico Superior se observa una reducción en la biodiversidad, seguida por una liguera recuperación durante el Noriense. La diversidad del Rhaetiense se reduce rápidamente, extinguiéndose el grupo justo antes del fin del Triásico. / In the Iberian Peninsula Triassic marine strata, twenty-three sections have been studied. Usseu, Sant Sebastià, Hostalets-Cadí and Alós de Balaguer (Pyrenees); L'Ametlla, Olessa, Rasquera- Benifallet and Tivissa (Costero-Catalonian Ranges); Calanda, Tramacastilla Libros, Henarejos, Moya, Bugarra and Montserrat (Iberian Range); Espejeras, Calasparra, Canara, Arroyo Hurtado, Valdepeñas de Jaén, Salmerón, Boyar and Cabo Cope (Betic Range).Twelve species have been identified: Neogondolella basisymmetrica Budurov & Stefanov, Neogondolella constricta (Mosher & Clark), Neogondolella cornuta Budurov & Stefanov, Neogondolella excentrica Budurov & Stefanov, Neogondolella longa Budurov & Stefanov, Paragondolella bifurcata Budurov & Stefanov, Paragondolella bulgarica Budurov & Stefanov, Paragondolella hanbulogi Sudar & Budurov, Sephardiella truempyi (Hirsch), Sephardiella mungoensis (Diebel), Pseudofurnishius murcianus van den Boogaard and Sephardiella cf. mostleri (Kozur).The most common species is Pseudofurnishius murcianus, and we propose a model of its ontogenetic development and reconstruct its septimembrate apparatus. The morphological variability study points out that P. huddlei must be included into its variability and leads to reject the different subspecies of P. murcianus. A model of the ontogenetic development and apparatus recnstruction of Sephardiella mungoensis is also proposed.A functional mechanism is proposed for the P1 element of Neogondolella-Paragondolella (cutting function), Pseudofurnishius (crushing function) and Sephardiella (cut-tearing and crushing function).From a taphonomical point of view a differential preservation of P1 element has been observed, with P2 element being the rarest in the conodont fossil record. Five types of taphonomic alterations have been observed.With the revision of circa 500 Upper Permian to Upper Triassic papers, several databases have been developed and used for discussions. First, after a critical review we have accepted 184 conodont species as valid. Second, the paleogeographical distribution of Triassic conodont species has been summarized, with the main ones represented in different paleomaps. Finally, we have calculated the speciation, extinction and net rates for the Triassic stages. The group show a quick recovery during Early Triassic followed by stabilization during the Middle Triassic. A richness reduction is observed during early Upper Triassic followed by a light Norian recovery. The Rhaetian diversity is quickly reduced and its extinction happened just before the Triassic end.

El presente trabajo aborda la ecología de los productores primarios en varios lagos someros mediterráneos, a través de dos estudios experimentales en mesocosmos in situ con enriquecimiento de nutrientes y distintas densidades de peces planctívoros, junto a un estudio de la ecología del lago de la Albufera de Valencia. Los resultados muestran que: 1) La ecología de los lagos someros estudiados se asemeja más a la ecología de los lagos tropicales y subtropicales que a la descrita para los lagos someros del norte y centro de Europa. 2) El desvío de nutrientes en el lago de la Albufera fue insuficiente para conseguir un cambio de estado trófico, pero condujo a la reducción de la biomasa del fitoplancton y a la aparición de varias fases claras. 3) En los estudios experimentales con mesocosmos, las concentraciones de nutrientes influyeron más que la densidad de peces planctívoros sobre la biomasa del fitoplancton, epifiton y macrófitos sumergidos. 4) El crecimiento del epifiton fue exponencial y máximo entre concentraciones de 0,1-0,35 mg L-1 de fósforo, mientras que el fitoplancton tuvo un incremento lineal y dominó por encima de 0,35 mg L-1 de fósforo y la biomasa de las carófitas fue mayor con valores por debajo de 0,05 mg L-1. 5) La ausencia de los macrófitos sumergidos favoreció la liberación de nutrientes desde el sedimento perpetuando biomasas algales elevadas y un estado de turbidez. 6) Las cianobacterias dominaron bajo un amplio rango de concentraciones de nutrientes. La densidad de peces planctívoros y la depredación debida al zooplancton tuvieron un papel selectivo de su tamaño. 7) Los modelos de dominancia de cianobacterias propuestos por Gragnani et al. (1999) y Scheffer et al. (1997), no se cumplen para los lagos someros estudiados. 8) Se propone un modelo alternativo que explica la alternancia observada de dominancia entre cianobacterias croococales y oscilatoriales, en base a sus requerimientos de nutrientes, luz, sensibilidad a la depredación por el zooplancton y condiciones de estabilidad de la columna de agua. 9) Las comunidades del fitoplancton y epifiton estuvieron estrechamente vinculadas y su composición tendió a homogeneizarse al aumentar la concentración de nutrientes. 10) El reclutamiento de las algas desde el sedimento fue mayor que desde el perifiton y se incrementó con las concentraciones de nutrientes. 11) El reclutamiento de las cianobacterias fue un factor importante que retroalimentó y estabilizó sus poblaciones y dominancia en el fitoplancton. 12) La visión de un espacio continuo y heterogéneo (multihábitats) entre el bentos y plancton en los lagos someros, puede ayudar a mejorar el conocimiento del ticoplancton que caracteriza a estos sistemas. 13) La diversidad de las comunidades del epifiton y del fitoplancton se redujo frente a un incremento de las concentraciones de nutrientes y peces planctívoros, especialmente en ausencia de plantas sumergidas. 14) Los grupos funcionales propuestos para el fitoplancton por Reynolds et al. (2002), ofrecen una valiosa y complementaria información para entender la ecología del fitoplancton en los lagos someros de la zona mediterránea, aunque se sugieren algunas modificaciones de algunos de los grupos funcionales originalmente descritos. 15) La recuperación y conservación de los lagos someros mediterráneos implica una reducción importante de la carga externa de nutrientes y la adopción de medidas complementarias que potencien un control interno de la carga de nutrientes dentro de la red trófica para recuperar su calidad ecológica y biodiversidad. / The present work studies the ecology of primary producers in some Spanish shallow Mediterranean lakes. The results from two in situ mesocosms experiments with additions of different nutrient concentrations and planktivorous fish densities, together with those on the ecology of the Albufera Lake, concluded that: 1) Nutrient diversion in the Albufera Lake did not shift the present turbid state, but reduced its phytoplankton biomass and produced some short-term clear water phases. 2) The in situ mesocosm experiments showed that nutrient concentrations influenced more than densities of planktivorous fish, biomasses of phytoplankton, epiphyton and submerged macrophytes. 3) Epiphyton had an exponential and maximum growth at phosphorus levels between 0.1 and 0.35 mg L-1, while phytoplankton increased linearly and dominated with values over 0.35 mg L-1, and characean biomass was higher at levels lower than 0.05 mg L-1. 4) Absence of submerged macrophytes favoured nutrient release from the sediment stabilizing a high phytoplankton biomass and the turbid state. 5) Cyanobacteria dominated in a wide range of nutrient levels, while planktivorous fish and zooplankton affected size selection of the species. 6) An alternative model, from those proposed by Gragnani et al. (1999) and Scheffer et al. (1997), is shown to explain the dominance of cyanobacteria and the observed replacement between chroococcal and oscillatorial species. 7) Phytoplankton and epiphyton communities were closely related and their species composition became more similar at increasing nutrient levels. 8) Algae recruitment from the sediment into the phytoplankton was higher than that from the periphyton and increased with nutrient levels. Cyanobacteria were significantly recruited. 9) Diversity of epiphyton and phytoplankton was reduced at increasing nutrient levels and planktivorous fish densities, especially in absence of submerged plants. 10) Several changes are suggested to define some of the functional groups of the phytoplankton originally proposed by Reynolds et al. (2002). 11) The restoration and conservation of shallow Mediterranean lakes implies a severe reduction of the external nutrient loading and the use of complementary measures that may enhance the internal nutrient control within the food web, for recovering their ecological quality and biodiversity.

El género Aeromonas con una amplia distribución en medios acuáticos, principalmente dulciacuícolas, incluye bacilos Gram negativos, oxidasa-positivos, heterótrofos y anaerobios facultativos. Su identificación durante las últimas décadas ha sido muy controvertida entre otros por la aparente incoherencia que se ha apreciado entre genotipo y genotipo que ha originado que los términos fenospecie y genospecie se usen como categorías independientes en la clasificación de la cepas de Aeromonas móviles. Este trabajo estudia extensamente las especies móviles y mesófilas, descritas en el género Aeromonas, utilizando la caracterización fenotìpica y el análisis numérico de los perfiles fenotípicos presentes en las cepas, además del estudio genotípico mediante hibridación DNA-DNA. Hemos obtenido que la taxonomía fenotípica es una buena herramienta para delimitar e identificar las especies de Aeromonas móviles, por la excelente correlación entre los grupos definidos según nuestra metodología y los datos genotípicos y filogenéticos disponibles para dichas cepas como es el caso de A. jandaei, A. sobria, A. ichthiosmia, A. allosaccharophila, A. trota, A. hydrophila, A.caviae, A. encheleia, A. eucrenophila, A. media, A. schubertii y A. salmonicida. Proponemos una tabla de diagnóstico para la diferenciación de la mayoría de las especies de Aeromonas descritas, basada en 35 pruebas bioquímicas, entre las que destacan por su valor resolutivo, las siguientes: producción de H2S a partir de cisteína, oxidación de gluconato, ácido de celobiosa y glicerol, y utilización de L-serina y de L-lactato. El estudio de taxonomía numérica fenotípica realizado y los experimentos de hibridación DNA-DNA efectuados utilizando como referencia, entre otras, la cepa tipo de la especie A. jandaei han confirmado la existencia en este taxón de cepas de origen ambiental y de ámbito veterinario, las cuales presentan la capacidad de producir ácido a partir de sacarosa, aspectos todos ellos novedosos en cuanto a la descripción original de la especie A. jandaei. Se propone la enmienda de la descripción original de la especie A. jandaei efectuada por Carnahan y col. en el año 1992, para así incluir estas cepas sacarosa-positivas en dicha especie. En la descripción enmendada destacan, por ser recogidos por primera vez, la composición en bases guanina-citosina del DNA de la especie A. jandaei la cual oscila entre 58,1-61,1mol%. / The genus Aeromonas comprises Gram-negative, oxidase- and catalase-positive, heterotrophic, non-halophilic and facultative anaerobic bacilli which are widely distributed in natural waters. There is strong evidence for the role of Aeromonas as aetiological agents of a variety of systemic and localized diseases in poiquilothermic animals for the species A. salmonicida, A. hydrophila and A. jandaei. Moreover, during the last 15 years Aeromonas has been increasingly recognized as a primary, opportunist disease agent in humans, and at least six new Aeromonas species were originally isolated from clinical samples.This study was undertaken to cluster and identify a large collection of Aeromonas strains. Numerical taxonomy was used to analyze phenotypic data obtained on 54 new isolates from different sources 99 type and reference strains. Each was tested for 121 characters but only the data for 71 were analyzed using the "SSM" and "SJ" coefficients, and the UPGMA clustering algorithm. At SJ values of ≥ 81.6% the strains clustered into 22 phenons which were identified as A. jandaei, A. veronii biogroup veronii, A. sobria, A. ichthiosmia, A. allosaccharophila, A. trota, A. hydrophila, A.caviae, A. encheleia, A. eucrenophila, A. media, A. schubertii y A. salmonicida. A good correlation was generally observed among this phenotypic clustering and previous genomic and phylogenetic data. Three new phenotypic groups were found which may correspond to new Aeromonas species or biotypes. DNA relatedness between strains grouped in the A. jandaei cluster and A. jandaei CECT 4228T ranged from 70 to 100 %, but was below 50 % when DNAs from A. veronii biogroup sobria CECT 4835, A. veronii biogroup veronii CECT 4257T and A. ichthiosmia CECT 4486T were used. In addition, DNA relatedness between peripheral A. veronii biogroup sobria strains and the species A. jandaei (CECT 4228T), A. veronii (CECT 4257T, CECT 4835) and A. ichthiosmia (CECT 4486T) was always below 54 %, as it was between the species A. ichthiosmia (CECT 4486T) and A. veronii (CECT 4257T, CECT 4835). Emendation of A. jandaei is proposed; this taxon now includes sucrose-positive clinical and environmental strains as well as environmental isolates that are pathogenic for fish and humans. The DNA G+C content of A. jandaei is also reported for the first time; it ranges from 58·1 to 61·1 mol%. The DNA relatedness data support the classification of peripheral reference strains of A. veronii biogroup sobria outside this taxon, indicating that biogroup sobria requires further revision.