Orientador: Denise Vaz de Macedo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:16:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zoppi_ClaudioCesar_D.pdf: 3992666 bytes, checksum: e8868a527d2a2640dbb8ec1f303e49d4 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O treinamento físico induz uma série de adaptações no organismo que leva à melhora na performance esportiva. No entanto, os atletas podem ser submetidos a cargas extremamente altas de treinamento e quando a recuperação não é suficiente este atleta pode ser acometido pelo overtraining. Alguns autores, sugerem que a causa da sua instalação seja o excesso de formação de radicais livres. Nosso objetivo neste trabalho foi analisar os efeitos de um protocolo de overreaching em biomarcadores de ataque oxidativo, enzimas antioxidantes e capacidade oxidativa. Para tanto submetemos 25 animais a um protocolo de treinamento de onze semanas nas quais as oito primeiras constituíam um protocolo de treinamento e as últimas três constituíram o protocolo de overreaching. Foram medidos como marcadores de ataque oxidativo, os níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARs) e de proteínas carboniladas (PC) dosamos ainda atividade das enzimas antioxidantes glutationa redutase (GR) e catalase (CA T) e ainda como marcador de capacidade oxidativa, dosamos a atividade da enzima citrato sintase (CS) e ainda medimos a concentração da proteína de estresse HSP72 para avaliarmos os níveis de estresse imposto às fibras nos músculos sóleo (SO), extensor digital longo (EDL) e semi tendinoso (ST) .Embora o treinamento induziu aumento no ataque oxidativo, as enzimas antioxidantes e a capacidade oxidativa avaliados aqui pela atividade das enzimas GR, CAT e CS também aumentaram em todos os músculos, o protocolo de overreaching induziu um panorama de estresse oxidativo observado pela queda da atividade das enzimas antioxidantes e aumento dos marcadores de ataque oxidativo devido ao alto nível de estresse imposto por este protocolo, avaliado pelos níveis de HSP72, que também induziu queda na atividade da CS. Nossos dados permitem concluir que o estresse oxidativo é um fator que leva à instalação do overreaching e que o monitoramento destes marcadores pode ser uma ferramenta útil na prática para se evitar a instalação deste processo / Abstract: Physical training is known to induce several adaptations. These adaptations are desired to increase athletic performance. Frequently athletes are submitted to hard training in order to push performance to its upper limits, although when loads are excessive and the regeneration is not enough the athlete is said to be overtraining. Overtraining syndrome is the result from an imbalance between training loads and regeneration processes, and induces autonomic changes that impair performance. Overreaching is known as the initial phase of overtraining and is known as a metabolic imbalance leading to a decrease in A TP synthesis and inducing short term fatigue. Free radicals are well known high reactive molecules that can oxidize intracellular structures and so impair cell function and are increased during strenuous exercise. So the aim of this work is to study the behavior of oxidative stress markers in subjects submitted to an overreaching protocol!. In this study we used 30 animais divided in training group (n=25) and a control group (n=5). The exercise protocol consisted in a 8 weeks endurance training and a 3 weeks overreaching protocol!. Thiobarbituric acid reactive substances (TBARs) and carbonylated proteins (PC) were measured as oxidative attack markers, glutathione reductase (GR), catalase (CAT) and citrate syntheses (CS) activities were measured as muscle antioxidant and oxidative markers and also stress protein HSP72 were measured to ensure stress levels in soleus (SO), extensor digitallongus (EDL) and semitendinuous (ST) muscles. Although endurance training induced increase in TBARs an PC levels, antioxidant and oxidative enzymes were also increased and at the end of training protocol the stress markers TBARs, PC and HSP72 levels were back to baseline values. On the other hand, overreaching protocol induced oxidative stress situation leading to decreases in antioxidant and oxidative enzymes and giving rise to TBARs and PC levels. HSP72 was also highly expressed suggesting a high stress imposed by the overreaching protocol. In conclusion, our data suggest that overreaching can be induced by oxidative stress and the measure of these markers could be a useful tool in sports field as markers of overreaching installation / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Vanderlei Rodrigues, Marlene Tiduko Ueta / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:22:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paula_FabianaMartinsde_D.pdf: 4232239 bytes, checksum: 7f4299766a3d13a21cf8ba1f768d36e3 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: As proteases, sobretudo os complexos enzimáticos como o proteassoma 26S, têm sido relacionadas com diferentes processos biológicos em parasitas. O presente trabalho, teve como objetivo realizar um estudo inicial do proteassoma 26S no nematódeo Strongyloides venezuelensis, por meio de ensaios bioquímicos e da caracterização de alguns componentes deste complexo multienzimático. Este nematódeo é utilizado como modelo experimental para o estudo da estrongiloidíase humana, uma helmintíase com alta prevalência em regiões tropicais e subtropicais. Para tanto, foram obtidos dois estágios de desenvolvimento de S. venezuelensis a partir de infecções experimentais em Rattus norvegicus, o estágio infectante de vida-livre (larva filarioíde, L3) e o parasitário (fêmea partenogenética, F). Para os ensaios bioquímicos foram obtidos os extratos brutos de ambos estágios, os quais foram submetidos aos ensaios de atividades (quimiotripsina e tripsina-símile), utilizando substratos sintéticos fluorogênicos, na presença e na ausência de inibidores específicos do proteassoma 26S (MG132 e PSI). Além disso, o extrato foi submetido ao SDS-PAGE, seguido pela técnica de ¿Western-blot¿ utilizando anticorpos específicos para o proteassoma 20S e para ubiquitina. Para os experimentos moleculares foram obtidos RNA de ambos os estágios, os quais foram submetidos a amplificações utilizando oligonucleotídeos iniciadores específicos para as subunidades alfa 6 e beta 6 do proteassoma 20S (¿core¿ proteolítico) e as subunidades ATPase 3 e S5a do complexo regulatório 19S do proteassoma 26S. O DNA genômico foi amplificado para todas as subunidades com exceção da S5a. Os produtos de amplificação obtidos foram submetidos à busca de homologia no banco de dados, após sequenciamento dos mesmos. Os resultados confirmaram a presença do proteassoma 26S no nematódeo S. venezuelensis, através da atividade específica de quimiotripsina e tripsina-símile e a presença de bandas protéicas características reveladas pelos anticorpos específicos, bem como pela análise molecular das subunidades. No entanto, novos estudos serão necessários para inferir a importância deste complexo multienzimático neste parasita / Abstract: Protease is an important biological process in different parasites, especially in enzymatic complex like 26S proteasome. The objective of the present work was to initiate the study of the 26S proteasome in the nematode Strongyloides venezuelensis using biochemical experiments and identifying some components of this multienzymatic complex. This nematode has been used as a model and tool for the studies on strongyloidiasis, a helminthiasis of high prevalence in tropical and subtropical regions. In this study, two development stages of S. venezuelensis, namely infective larvae (third-stage larvae) and parasitic stages, were used for experimental infections in Rattus norvegicus. In biochemical experiments the crude extracts of the both stages were submitted at proteolytic activities (chymotrypsin-like and trypsin-like) using fluorogenic peptides in presence and absence of proteasome inhibitors (MG132 and PSI). Moreover, the crude extracts were submitted at SDS-PAGE and western-blot methods using specifics antibodies. In molecular experiments, RNA of both stages were amplifed with specific oligonucleotides to alfa 6 and beta 6 subunits of the 20S proteasome (proteolytic core) and ATPase 3 and S5a of the regulatory particle (19S). The genomic DNA was amplifed to all subunits, excepting of S5a subunit. Results show the presence of the 26S proteasome in proteolytic activities from S. venezulensis of the chymotrypsin-like and trypsin-like and the presence of the labeled bands by the antibodies, as well as molecular analysis of the subunits. However, new studies will be necessary to define the importance of these multienzymatic complex on the parasite biology / Doutorado / Parasitologia / Doutor em Parasitologia

Orientador: Carlos Henrique Inacio Ramos / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:22:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Borges_JulioCesar_D.pdf: 17156188 bytes, checksum: e2f1c0a8fbb9107a01472bb1172baa8d (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A função de uma proteína depende da estrutura nativa obtida a partir de sua estrutura primária de aminoácidos por um processo denominado de enovelamento protéico. Falhas neste processo podem levar à formação de agregados protéicos que têm relação com doenças humanas; como as doenças amilóides. Durante a evolução, as células têm desenvolvido mecanismos de prevenção e controle de qualidade para evitar a agregação de proteínas. Um destes mecanismos é através da síntese das chaperones moleculares. Dentre as várias proteínas desta categoria, destaca-se o sistema Hsp70 que desempenha funções essenciais no metabolismo de proteínas, pois age como um pivô, recebendo e distribuindo proteínas desenoveladas ou substratos entre as demais chaperones moleculares. Assim, o estudo do mecanismo de ação desta maquinaria é importante para compreender o enovelamento protéico no meio intracelular. Como muitas das informações disponíveis para o sistema Hsp70 são do sistema bacteriano, este estudo pretendeu a obtenção de proteínas da família Hsp70: Hsp70-1A e suas co-chaperones Hsp40 (DjA 1 e DjB4) e GrpE (GrpE#1 e GrpE#2) de origem humana. Os cDNAs destas proteínas foram clonados e as proteínas foram expressas, purificadas e caracterizadas quanto à relação estrutura e função. Para tanto, foram utilizadas técnicas como: dicroísmo circular, fluorescência, calorimetria, ultracentrifugação analítica e espalhamento de raios X a baixos ângulos. Os resultados principais mostraram que: 1) a Hsp70-1 A sofre pequenas mudanças conformacionais induzidas pelos nucleotídeos adenosina tri-fosfato ou adenosina di-fosfato; 2) as duas representantes humanas das subfamílias A e B das Hsp40, a DjA 1 e DjB4, respectivamente, possuem atividade chaperone e estrutura quaternária distintas uma da outra; e 3) as GrpEs humanas possuem estrutura quaternária similar, porém diferem na disposição espacial de alguns domínios e em outras propriedades biofísicas, indicando funções específicas ou especializadas no interior da mitocôndria. Estes resultados podem ajudar na compreensão sobre a relação estrutura-função desta importante maquinaria celular / Abstract: The role of a protein depends on its three-dimensional structure, which is acquired from its amino acid sequence through a process called protein folding. However, mistakes on this process cause protein aggregation, which may be related to some human illness; like amyloids diseases. During the evolution, the cells have developed mechanisms to prevent and to control quality in order to avoid protein aggregation. One of these mechanisms is the molecular chaperones. Among the several proteins from this category, the Hsp70 system has essential functions in the protein metabolism, because it acts as a pivot, receiving and handing out unfolded proteins or substrates among the others molecular chaperones. Thus, the study of the action mechanism of the Hsp70 machinery is important to understand the protein folding process inside the cells. Since, there is a large amount of information available about the Hsp70 system from bacteria, this study intended the characterization of proteins from human Hsp70 system: Hsp70-1A and its co-chaperones Hsp40 (DjA1 and DjB4) and GrpE (GrpE#1 and GrpE#2). The cDNA from those proteins were cloned and the proteins were expressed, purified, and characterized concerning their structure-function relation. In such effort, several techniques were used, like: circular dichroism, fluorescence, calorimetry, analytical ultracentrifugation and small angle X-ray scattering. The main results are: 1) the Hsp70-1A underwent little conformational changes induced by the nucleotides adenosine triphosphate or adenosine di-phosphate; 2) the two representatives of human Hsp40 proteins DjA 1 and DjB4, from subfamily A and B, respectively, possess distinct chaperone activities and quaternary structures; and 3) the human GrpEs possess similar quaternary structure, but with discrete differences in the spatial disposition of some domains and with dissimilar biophysical properties, implying in specific or specialized functions inside the mitochondria. These results may help the further understanding of the structure-function relation of that important cell machinery / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Bayardo Baptista Torres / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T05:24:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tambelli_RobertoAccacio_M.pdf: 3516757 bytes, checksum: 4a00284cb6793022b42108809b2ba145 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: O presente trabalho consistiu na aplicação de uma metodologia envolvendo a divisão dos alunos em pequenos grupos, na tentativa de resolução de alguns problemas referentes ao ensino de Bioquímica na Universidade de Mogi das Cruzes. O ensino em pequenos grupos foi introduzido em cinco diferentes cursos de iniciação à Bioquímica - Farmácia, Medicina e três classes de Biomedicina - sem que houvesse qualquer experiência prévia dos alunos e professores. Para dotar os alunos de um guia de estudos adequado, os conteúdos foram completamente reescritos sob a forma de objetivos educacionais constituídos de questões e problemas. 33% das atividades dos cursos foram dedicadas a essa nova metodologia e as restantes, às aulas expositivas e às aulas práticas em laboratório. Após uma aula expositiva introdutória do assunto a ser estudado, os alunos eram separados em grupos de cinco, passando a trabalhar com os roteiros de estudo por aproximadamente três horas. A resposta dos alunos a essa nova metodologia foi avaliada por meio dos seguintes "procedimentos: 1. Questionários aplicados durante o ano letivo de 1997 e 10 semestre de 1998. 2. Observação direta dos grupos. 3. Entrevistas semi-estruturadas. Os resultados obtidos com a aplicação dos questionários indicaram que os alunos: Preferiam o estudo em grupo às aulas expositivas. Preferiam estudar em grupo a estudarem sozinhos. Consideraram que estudar em grupo toma a aprendizagem mais proveitosa. Não gostariam de retomar ao método tradicional de ensino. A enorme dificuldade dos alunos em compreender os conceitos de Bioquímica ficou evidente com a observação direta dos grupos e com as entrevistas. Estas também revelaram que as metodologias convencionais promovem um grande distanciamento entre professores e alunos bem como estabelecem um nível insatisfatório de relacionamento entre os próprios alunos. Por outro lado, o ensino em pequenos grupos mostrou-se altamente positivo na superação desses problemas / Abstract: This work consisted on applying the methodology of small groups teaching, trying to solve some problems involving the Biochemistry teaching at the Universidade de Mogi das Cruzes. The small group teaching strategy was applied in five different introductory courses of Biochemistry - Pharmacy, Medical School and three groups of Biomedicine. Teachers and students didn't have any previous experience in the methodology. To provide the students an adequate study guide, course contents were thoroughly rewritten respecting the educational objectives and presenting the students questions and problems to be solved, 33% ofthe courses activities were dedicated to this new methodology and the rest to lectures and lab classes. After an introductory lecture on the subject to be studied, the students were separated into groups of five and started working with the subject for about three hours. The students responses to this new methodology were evaluated using the following procedures. 1. Questionnaires applied during the school year of 1997 and first semester of 1998; 2. Direct observation of groups; 3. Semi-structured interviews. The results obtained from the questionnaires point out that the students would rather take part in groups than attending lectures; prefer studying in groups to work alone; ..considered that group discussions make learning more effective; wouldn't like to return to conventional methodology. The direct observation of the groups as well as the interviews showed enormous difficulty in understanding Biochemical concepts. lnterviews pointed out that, with conventional methodologies, teachers and students were very distant from each other and students didn't get along so well among themselves. Otherwise, working with small groups was extremely positive in overcoming these problems / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Bayardo Baptista Torres / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T14:56:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Galembeck_Eduardo_D.pdf: 7921586 bytes, checksum: 73d1ed1c20a2508e43ab71e1e3dabd53 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: A busca de novas metodologias de ensino tem se tornado uma preocupação crescente nos meios acadêmicos e em muitos outros setores da sociedade. O estudo das diferentes formas de abordar um problema bioquímico e apresentá-Ios na forma de um programa de computador constituiu o ponto principal deste projeto, resultando na criação de material didático que utiliza e exemplifica o uso de diferentes ferramentas da informática. Os programas são destinados ao uso nos cursos básicos de Bioquímica, utilizando-se das vantagens intrínsecas de melhor visualização e de possibilidade de interação do aluno com o objeto em estudo, através da utilização de recursos multimídia. Os temas são abordados em módulos, que podem ser utilizados individualmente pelos alunos, ou pelos professores como recurso auxiliar em suas disciplinas. Cada módulo apresenta características diferentes quanto à forma de abordagem do conteúdo e de uso e organização das interfaces gráficas. A descrição dos módulos desenvolvidos, suas avaliações e outros comentários constituem os capítulos desta tese e são os seguintes: Consumo de Oxigênio por Mitocôndrias (simulação de experimentos); Cadeia de Transporte de Elétrons e Fosforilação Oxidativa (animação interativa); Contração Muscular (tutorial acoplado a um organizador avançado de Ausubel); Cinética Enzimática (tutorial e simulador para resolução de dificuldades diagnosticadas); Glicólise (análise de vias metabólicas) / Abstract: The search after new teaching methods is an increasing concern within the academic environment and other social groups. Different ways of accosting a biochemist's problem and turning it into a software are presented in this thesis, resulting on the creation of new, contemporary teaching materiais. The topics of these computer programs are developed for the basic biochemistry courses. Thanks to their multimedia resources, they allow a better visualization and interaction of the student with the object which is being studied. The themes are treated in modules, which can be used individually by the students or by the teachers, as teaching aid, in their classes. Each module has its owns graphic and instructional characteristics, so that a number of different programming tools were learned and used, in the making of this thesis. The following softwares have been created: . Oxygen Consumption by Mitochondria (Simulation of experiments) . . Electron Transport Chain and Oxidative Phosphorilation (Interactive animation ). . Muscular Contraction (Tutorial with Ausubel advanced organizer). . Enzymatic Kinetics (Resolution of diagnostic difficulties). . Glycolysis (Analysis of the metabolic pathways) / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Ciências

Orientador: Hiroshi Aoyama / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-13T23:36:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rigobello_Marilda_M.pdf: 3253769 bytes, checksum: 79fd38f0439df0684464397ab60e93ef (MD5) Previous issue date: 1991 / Resumo: As aminoacil tRNA sintetases são enzimas que catalisam o primeiro passo da síntese de proteínas, ou seja, a formação do aminoáciI -tRNA. São usados como substratos da reação o L-aminoácido, ATP e o tRNA específico para o referido aminoácido. O íon magnésio participa como estabilizador dos fosfatos carregados negativamente. O aminoacil - tRNA é o prinncipaI produto da reação, sendo também liberada uma molécula de AMP e uma de pirofosfato inorgânico. Neste trabalho a treonil-tRNA sintetase foi purificada de germen de trigo através de centrifugações diferenciais, saturação com sulfato de amônio e cromatografias em DEAE-celulose, Fosfocelulose, Hidroxiapatita e Blue Sepharose CL 6B. Deste modo, foi obtida uma enzima purificada cerca de 180 vezes. Usando a reação de intercâmbio isotópico ATP-32PPi para determinação da atividade enzimática foram obtidas as condições ótimas de reação e os seguintes valores de KM aparente:...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Aminoacil - tRNA syntetases are enzymes that catalyse the first step of protein biosynthesis, the aminoacyl - tRNA formation. The substrates of the reaction are the L-aminoacid, ATP and tRNA, specific for this L-aminoacid. Magnesium ion parcipates as the cofactor of the reaction. The products of the reaction are aminoacyl - t.RNA, AMP and inorganic pyrophosphate. In this work, threonyl-t.RNA synthetase was purified from wheat germ through differential centrifugations, ammonium sulfate saturation and chromatographies in DEAE-cellulose. Phosphocallulose, Hydroxylapatite and Blue Sepharose CL 6B. An 180-fold purified enzyme was obtained. Using the ATP- 32PPi isotopic exchange reaction to determine the enzyme activity, it was obtained the optimal conditions of the reaction, and the apparent. KM values: ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Anibal Eugenio Vercesi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T01:29:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Parentoni_LuciaSimas_M.pdf: 3253683 bytes, checksum: e4c19ae29c90e01d8c222332a71eb074 (MD5) Previous issue date: 1991 / Resumo: O Ca++ possui um efeito altamente deletério sobre mitocôndrias em diversas situações patológicas, envolvendo um processo de alteração de permeabilidade da membrana interna desta organela. Resultados prévios de nosso laboratório indicaram que esta permeabilização causada por Ca++ e oxidantes é devida à formação de ligações cruzadas entre grupamentos tiol de proteínas da membrana, com o aparecimento de agregados protéicos de alto peso molecular (FAGIAN, M;M.; PEREIRA DA SILVA, L.; MARTINS, I.S. & VERCESI, A. E. Membranas Protein Thiol Cross Linking Association with Permeabilization of the Inner Mitochondrial Membrane by Ca++ plus Prooxidants. Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Edward R. Dockal / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-14T02:15:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Quilici_NadiaRegina_D.pdf: 19935089 bytes, checksum: 32f6e4b6eb2790b3e2aaca69a705fdf7 (MD5) Previous issue date: 1992 / Doutorado

Orientador: Maria Sumiko Arita Matsuura / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T02:12:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barros_RosaMariaFernandesde_M.pdf: 3739995 bytes, checksum: e50e1ea90b4310df3e451677d4a70368 (MD5) Previous issue date: 1992 / Resumo: Hemocianina do Gastropodo anfíbio Ampullaria canaliculata, da região do Pantanal Mato Grossense, mostrou grande similaridade com as hemocianinas de moluscos terrestres e marinhos, especialmente, com relação ao peso molecular e aos tipos de produtos de dissociação. A determinação do peso molecular da hemocianina de A. canaliculata determinado por cromatografia de exclusão molecular em coluna de Sephacryl S-400 mostrou somente um pico de eluição, tanto na hemolinfa total quanto na hemocianina em presença de Ca¿POT.2+¿ 20 mH e Mg¿POT.2+¿ 20 mH, estimado em torno de 7.5 x 10 'POT.6¿ Da. Hemocianina desionisada de A. canaliculata submetida a filtração em gel resultou na formação de três picos, que através do volume de eluição mostraram ser proteínas de unidade de peso molecular 7.5 x 10¿POT.6¿ Da, 1.0 x 10 Da e 3.2 x 10 5 Da, sugerindo ser espécies moleculares correspondentes a 1/1, 1/10 e 1/20 da proteína nativa. Com a hemolinfa total, recém coletada, foram realizadas experiências de equilíbrio com O2 diretamente, variando apenas os valores de pH, e obteve-se um valor de P50 = 3.5 mm Hg e nH = 2.3 em pH 8.2. O efeito de cátions divalentes sobre o estado de agregação de hemocianina de A. canaliculata, assim como os diferentes picos eluidos da coluna de Sephacryl S-400 são ilustradas por analises imunoeletroforeticas / Abstract: The functional properties of A. Canaliculata hemocyanins, in their ability to transpor oxygen, are very similar to several hemocyanins studie. In this snail the oxygen binding strength increases with increasing pH, exhibiting a normal Bohr shift. The oxygen binding to hemocyanins is also aífected by presence oí divalent cations. In this context, the two cations Ca¿POT.2+¿ and Mg¿POT.2+¿ act similarly with no changes in the the P and Bohr effect values. The oxygen curve using hemocyanin 50 free of divalent cations showed inconsistent data for P50 association and and nH values, suggesting the production of different dissociation behavior with pH variation. However, the hemolymph showed higher values of log P50 than the hemocyanin in presence of divalent cations. This phenomenum should be explained by the existence of dialyzable factors, not strongly associated withhemocyaninJ which does not affect cooperativity of the oxygen binding and Bohr affect. The A. canaliculata hemocyanin does not exhibit cooperative oxygen binding in the presence of EDTA since on treatment with EDTA to remove divalent cationsJ it dissociates. into several subunits as expected and shown by the immunoelectrophoretic analysis. The molecular weight of A. canaliculata hemocyanin was determined by gel filtration. The native hemolymph, as well as with hemacyanin in the presence of cations Ca¿POT.2+¿ and Mg¿POT.2+¿ showed Mw = 7.5 x 10 'POT.6¿ Da, 1.0 x 10 'POT.6¿ Da and 3.2 x 10 5 Da. However, for the preparation to the same hemocyanin dialyzed of Mw = 7.5 x 10 'POT.6¿ Da were obtained. The fractions eluted from Sephacryl S-400 column as well as effect of Ca¿POT.2+¿ and Mg¿POT.2+¿ on both the stability of hemocyanin and reversibility of products of dissociation caused by EDTA were illustrated by immunologic analysis / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Nelson Duran / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-14T02:23:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Justo_GiselleZenker_M.pdf: 5049821 bytes, checksum: 4b3c0ccec507c4f42b81faeb35c25e8e (MD5) Previous issue date: 1992 / Mestrado