Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-05-10T16:41:13Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 698102 bytes, checksum: ad7f11d01304cd78c757e0ec400a1be2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-10T16:41:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 698102 bytes, checksum: ad7f11d01304cd78c757e0ec400a1be2 (MD5) Previous issue date: 2003-07-07 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Este trabalho teve como objetivos avaliar as alterações fisiológicas e bioquímicas em sementes do algodoeiro durante o envelhecimento natural e artificial, verificar se as avaliações bioquímicas podem se constituir em alternativa eficiente para avaliação do vigor e avaliar o potencial de armazenamento destas sementes. Para tanto, sementes de duas variedades (IAC-20 RR e Fabrika) foram armazenadas no Setor de Armazenamento da Unidade de Beneficiamento de Sementes do DFT/UFV durante 12 meses, a partir de maio/2001, em condições de ambiente e em câmara fria. Para provocar o envelhecimento artificial, as sementes foram submetidas a 42oC e 100% UR por períodos de 0, 24, 48, 72, 96 e 120 horas. A qualidade fisiológica (teste de germinação, envelhecimento acelerado, germinação a baixa temperatura) e as avaliações bioquímicas (atividade das enzimas lipoxigenase e fosfatase ácida, inibidor de tripsina, teor de lipídios e ácidos graxos) foram feitas aos 0, 2, 4, 6, 8, 10, e 12 meses de armazenamento e após cada período de envelhecimento artificial. As sementes armazenadas em ambiente e em câmara fria foram ainda avaliadas pelos testes de condutividade elétrica e emergência das plântulas em leito de areia. Observou-se que os envelhecimentos natural e artificial acarretaram decréscimos na viabilidade, no vigor, nas atividades de lipoxigenase, fosfatase ácida e inibidor de tripsina e nos teores de lipídios das sementes. No entanto, não foi possível determinar associação entre as alterações fisiológicas e bioquímicas ocorridas nas sementes em ambos os processos de envelhecimento. Para as sementes armazenadas em ambiente, maior similaridade entre os resultados de envelhecimento acelerado e natural ocorreu quando se avaliou a germinação a baixa temperatura e a atividade de fosfatase ácida. Os testes de envelhecimento acelerado e de germinação a baixa temperatura, realizados antes do armazenamento, estimaram a viabilidade das sementes, respectivamente, após oito e dez meses de armazenamento em ambiente. As determinações bioquímicas realizadas antes do armazenamento não permitiram prever o potencial de conservação das sementes do algodoeiro; no entanto, estas determinações foram eficientes para monitorar o processo de deterioração durante o armazenamento. / This study was done to evaluate the physiological and biochemical changes during natural and artificial aging of cotton seed and to determine if the biochemical evaluations can act as efficient alternative vigor and the storage potential evaluation. The cotton seeds of two cultivars (IAC-20 RR and Fabrika) were stored from May 2001, for 12 months, under ambient conditions and in a cold room at the storage facility of the seed processing Unit of DFT/UFV. The artificial aging was induced by storing the seeds for 0, 24, 48, 72, 96 and 120 hours at 42oC and 100% relative humidity. The changes in the physiological quality (germination, accelerated aging and cool germination tests) and the biochemical parameters (lipoxygenase and acid phosphatase activity, trypsin inhibitor, lipid and fatty acid content) were determined after each artificial aging period and at two month interval in stored seeds. Electrical conductivity and seedling emergence in sand was also determined for stored seeds. The viability, vigor, lipoxygenase and acid phosphatase activity, trypsin inhibitor, and lipid content of the cotton seed decreased by natural or artificial aging. However, there was no association between these alterations and the accelerated or natural aging processes. For seeds stored under ambient conditions, maximum similarity with accelerated aging occurred for cool germination and activity acid phosphatase. The accelerated aging and cool germination tests before storage estimated seed viability of eight and ten months, respectively, storage under ambient conditions. The pre-storage biochemical parameters storage did not predict storage potential of cotton seed, but these evaluations can efficiently monitor the deterioration process during storage.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:54:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SIDNEI JULIANI.pdf: 1930649 bytes, checksum: b2dfc9fb97117b01bdba43a40e44ccb6 (MD5) Previous issue date: 2012-03-14 / Obesity is classified as a chronic non transmissible disease, the same as cardiovascular diseases, diabetes and neoplasms. Due to precocious atherosclerosis lesions, the obese child has a higher probability of developing cardiovascular, metabolic or neoplastic diseases when adult. Besides all physical problems, obesity stigmatization, which leads to social, psychological and behavioral problems. This study drew the nutritional profile and determined the life habits of obese students from a sample of 125 children, ages 7 to 12 years, from a public elementary school in the town of Pontal do Araguaia, state of Mato Grosso , Brazil. Possible biochemical alterations that lead to metabolic alteration were sought, as well as their relationship with gender. Alterations were analyzed in: total cholesterol, triglycerides, HDL cholesterol, glucose, uric acid and insulin. In addition, the quality of life of the selected group of obese children with that of an eutrophic group selected from the same sample of 125 children, using the AUQEI (Autoquestionnaire Qualité de Vie Enfant Imagé) scale. The results showed that 18% of the children were obese, 12% were overweight, 64.5% had normal weight and 5,5% were underweight. Unhealthy habits may have contributed to the obesity, e.g., having an overweight person in the family (75%), eating candies between the main meals (60%) and having the main meals in the living room, watching TV (60%). Biochemical alterations were identified in at least two analyzed parameters for 40% of the obese. The most altered metabolite was total cholesterol, which was elevated in 50% of the obese. Several metabolites were more compromised in boys than in girls, with significant a difference at p<0.05. The fact that alterations were verified in most children suggests a tendency to express metabolic syndrome. The eutrophic children had a better quality of life, with an average score of 52.55, while the obese group presented an average score of 47.50 (p<0.05). Furthermore, the quality of life of the obese children was below the cutoff point of 48. We conclude that the metabolism and the quality of life are impaired in the obese group. The prevalence of child obesity in the sample is similar to that found in other regions of the country. The presence of non-healthy habits can influence the susceptibility to obesity. We suggest that national efforts need to be made to prevent and treat child obesity by implementing public health and educational programs, aiming to reduce the negative impacts that obesity has on the child, which impair their physical and emotional health. / A obesidade é classificada como doença crônica não transmissível, assim como as doenças cardiovasculares, diabetes e neoplasias, e devido às lesões precoces de aterosclerose a criança obesa tem maior possibilidade de desenvolver doenças cardiovasculares, metabólicas ou neoplásicas, quando adulto. Além de todos os problemas relacionados à parte física, a obesidade pode prejudicar a qualidade de vida da criança, em razão das discriminações e estigmatizações sociais que a criança obesa pode sofrer, levando-a a ter problemas sociais, psicológicos e comportamentais. Este trabalho teve como objetivos verificar o perfil nutricional e os hábitos de vida de escolares obesos, a partir de uma amostra 125 crianças de 7 a 12 anos de uma escola pública municipal do município de Pontal do Araguaia - MT; verificar as possíveis alterações bioquímicas, precursoras de alterações metabólicas em crianças obesas e a relação dessas alterações com o sexo, submetidas aos exames de colesterol total, triglicérides, HDL colesterol, glicemia, ácido úrico e insulina. E finalmente, analisar comparativamente a qualidade de vida do grupo de crianças classificadas como obesas, com um grupo de eutróficas selecionadas a partir da mesma amostra de 125 crianças; utilizando-se como instrumento a Escala de AUQEI (Autoquestionnaire Qualité de Vie Enfant Imagé). Os resultados mostraram que 18% estavam com obesidade, 12% com sobrepeso, 64,5% com peso normal e 5,5% com déficit de peso, também verificou-se a presença de certos hábitos não saudáveis que podem estar contribuindo com a obesidade, como por exemplo: ter alguém na família com sobrepeso (75%), comer guloseimas entre as principais refeições (60%) e fazer as principais refeições na sala, assistindo televisão (60%). Foram identificadas alterações bioquímicas em pelo menos dois parâmetros analisados em 40% dos obesos. O metabólito que mais se alterou foi o colesterol total, aumentado em 50% dos obesos, além de ser constatado que vários metabólitos estavam mais comprometidos nos meninos do que nas meninas, com diferença significativa (p<0,05). As alterações verificadas em boa parte das crianças obesas sugerem certa propensão delas em apresentar síndrome metabólica. Verificou-se que as crianças eutróficas têm melhor qualidade de vida, apresentando escore médio de 52.55, enquanto o grupo de obesos apresentou escore médio de 47,50, que é uma diferença estatisticamente significativa (p=0,024), além disso, a qualidade de vida das crianças obesas encontra-se prejudicada, pois apresentou escore abaixo da nota de corte 48. Após os vários estudos realizados, concluímos que as alterações metabólicas e a qualidade de vida estão prejudicadas no grupo de obesos, além da prevalência de obesidade infantil na amostra estudada ser semelhante ao de outras regiões do país e de ser constatada a presença de hábitos não saudáveis nas crianças obesas que podem influenciar na obesidade. Verificouse assim com esse estudo a complexidade e a gravidade da questão da obesidade infantil. Dessa forma, sugere-se que sejam feitos esforços, em nível nacional, principalmente na prevenção e também no tratamento, por meio da implantação de políticas públicas na área de saúde pública e educação, visando diminuir o impacto negativo que a obesidade provoca na criança, comprometendo sua saúde física e emocional.

Neste trabalho a determinação de elementos químicos em tecidos biológicos (sangue total, ossos e orgãos) de camundongos distróficos, usados como modelo animal da Distrofia Mucular de Duchenne (DMD), foi realizada utilizando técnica analítica nuclear. O objetivo do presente trabalho foi a determinação dos valores de referência para elementos de relevância em bioquímica clínica (Ca, Cl, K, Mg e Na) e nutricional (Br e S) em sangue total, tíbia, quadríceps anterior e coração de camundongos da linhagem distrófica Dmdmdx/J (10 machos e 10 fêmeas) e grupo controle C57BL/6J (10 machos), utilizando a técnica de Análise por Ativação com Nêutrons AAN. Para obter mais detalhes das alterações que esta disfunção pode causar nesses tecidos biológicos, foram calculadas matrizes de correlação entre as espécies Dmdmdx/J e comparadas ao grupo controle C57BL/6J. Para a realização deste estudo 119 amostras de tecidos biológicos foram irradiadas no reator nuclear IEA-R1 no IPEN (São Paulo, Brasil). Os resultados de análise, por AAN, constituem as primeiras estimativas para os valores de referência nesses tecidos biológicos dos camundongos Dmdmdx/J e C57BL/6J. Além disso, as alterações em alguns dos coeficientes de correlações entre os animais saudáveis e com disfunção indicam uma conexão entre esses elementos no sangue, tíbia, quadríceps e coração. Esses dados poderão auxiliar pesquisadores avaliar e comparar as vantagens e desvantagens dos diferentes tratamentos, realizados na distrofia muscular, quando estes modelos animais forem empregados, auxiliando os pesquisadores a avaliar a eficácia de novos procedimentos terapêuticos antes de serem empregados em paciente com DMD. / In this work the determination of chemistry elements in biological tissues (whole blood, bones and organs) of dystrophic mice, used as animal model of Duchenne Muscular Dystrophy (DMD), was performed using analytical nuclear technique. The aim of this work was to determine reference values of elements of clinical (Ca, Cl, K, Mg, Na) and nutritional (Br and S) relevance in whole blood, tibia, quadriceps and hearts from Dmdmdx/J (10 males and 10 females) dystrophic mice and C57BL/6J (10 males) control group mice, using Neutron Activation Analysis technique (NAA). To show in more details the alterations that this disease may cause in these biological tissues, correlations matrixes of the DMDmdx/J mouse strain were generated and compared with C57BL/6J control group. For this study 119 samples of biological tissue were irradiated in the IEA-R1 nuclear reactor at IPEN (São Paulo, Brazil). The concentrations of these elements in biological tissues of Dmdmdx/J and C57B/6J mice are the first indicative interval for reference values. Moreover, the alteration in some correlation coefficients data among the elements in the health status and in the diseased status indicates a connection between these elements in whole blood, tibia, quadriceps and heart. These results may help the researchers to evaluate the efficiency of new treatments and to compare the advantages of different treatment approaches before performing tests in patients with muscular dystrophy.

Neste trabalho a determinação de elementos químicos em tecidos biológicos (sangue total, ossos e orgãos) de camundongos distróficos, usados como modelo animal da Distrofia Mucular de Duchenne (DMD), foi realizada utilizando técnica analítica nuclear. O objetivo do presente trabalho foi a determinação dos valores de referência para elementos de relevância em bioquímica clínica (Ca, Cl, K, Mg e Na) e nutricional (Br e S) em sangue total, tíbia, quadríceps anterior e coração de camundongos da linhagem distrófica Dmdmdx/J (10 machos e 10 fêmeas) e grupo controle C57BL/6J (10 machos), utilizando a técnica de Análise por Ativação com Nêutrons AAN. Para obter mais detalhes das alterações que esta disfunção pode causar nesses tecidos biológicos, foram calculadas matrizes de correlação entre as espécies Dmdmdx/J e comparadas ao grupo controle C57BL/6J. Para a realização deste estudo 119 amostras de tecidos biológicos foram irradiadas no reator nuclear IEA-R1 no IPEN (São Paulo, Brasil). Os resultados de análise, por AAN, constituem as primeiras estimativas para os valores de referência nesses tecidos biológicos dos camundongos Dmdmdx/J e C57BL/6J. Além disso, as alterações em alguns dos coeficientes de correlações entre os animais saudáveis e com disfunção indicam uma conexão entre esses elementos no sangue, tíbia, quadríceps e coração. Esses dados poderão auxiliar pesquisadores avaliar e comparar as vantagens e desvantagens dos diferentes tratamentos, realizados na distrofia muscular, quando estes modelos animais forem empregados, auxiliando os pesquisadores a avaliar a eficácia de novos procedimentos terapêuticos antes de serem empregados em paciente com DMD. / In this work the determination of chemistry elements in biological tissues (whole blood, bones and organs) of dystrophic mice, used as animal model of Duchenne Muscular Dystrophy (DMD), was performed using analytical nuclear technique. The aim of this work was to determine reference values of elements of clinical (Ca, Cl, K, Mg, Na) and nutritional (Br and S) relevance in whole blood, tibia, quadriceps and hearts from Dmdmdx/J (10 males and 10 females) dystrophic mice and C57BL/6J (10 males) control group mice, using Neutron Activation Analysis technique (NAA). To show in more details the alterations that this disease may cause in these biological tissues, correlations matrixes of the DMDmdx/J mouse strain were generated and compared with C57BL/6J control group. For this study 119 samples of biological tissue were irradiated in the IEA-R1 nuclear reactor at IPEN (São Paulo, Brazil). The concentrations of these elements in biological tissues of Dmdmdx/J and C57B/6J mice are the first indicative interval for reference values. Moreover, the alteration in some correlation coefficients data among the elements in the health status and in the diseased status indicates a connection between these elements in whole blood, tibia, quadriceps and heart. These results may help the researchers to evaluate the efficiency of new treatments and to compare the advantages of different treatment approaches before performing tests in patients with muscular dystrophy.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:46:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SIDNEI JULIANI.pdf: 1930649 bytes, checksum: b2dfc9fb97117b01bdba43a40e44ccb6 (MD5) Previous issue date: 2012-03-14 / Obesity is classified as a chronic non transmissible disease, the same as cardiovascular diseases, diabetes and neoplasms. Due to precocious atherosclerosis lesions, the obese child has a higher probability of developing cardiovascular, metabolic or neoplastic diseases when adult. Besides all physical problems, obesity stigmatization, which leads to social, psychological and behavioral problems. This study drew the nutritional profile and determined the life habits of obese students from a sample of 125 children, ages 7 to 12 years, from a public elementary school in the town of Pontal do Araguaia, state of Mato Grosso , Brazil. Possible biochemical alterations that lead to metabolic alteration were sought, as well as their relationship with gender. Alterations were analyzed in: total cholesterol, triglycerides, HDL cholesterol, glucose, uric acid and insulin. In addition, the quality of life of the selected group of obese children with that of an eutrophic group selected from the same sample of 125 children, using the AUQEI (Autoquestionnaire Qualité de Vie Enfant Imagé) scale. The results showed that 18% of the children were obese, 12% were overweight, 64.5% had normal weight and 5,5% were underweight. Unhealthy habits may have contributed to the obesity, e.g., having an overweight person in the family (75%), eating candies between the main meals (60%) and having the main meals in the living room, watching TV (60%). Biochemical alterations were identified in at least two analyzed parameters for 40% of the obese. The most altered metabolite was total cholesterol, which was elevated in 50% of the obese. Several metabolites were more compromised in boys than in girls, with significant a difference at p<0.05. The fact that alterations were verified in most children suggests a tendency to express metabolic syndrome. The eutrophic children had a better quality of life, with an average score of 52.55, while the obese group presented an average score of 47.50 (p<0.05). Furthermore, the quality of life of the obese children was below the cutoff point of 48. We conclude that the metabolism and the quality of life are impaired in the obese group. The prevalence of child obesity in the sample is similar to that found in other regions of the country. The presence of non-healthy habits can influence the susceptibility to obesity. We suggest that national efforts need to be made to prevent and treat child obesity by implementing public health and educational programs, aiming to reduce the negative impacts that obesity has on the child, which impair their physical and emotional health. / RESUMO A obesidade é classificada como doença crônica não transmissível, assim como as doenças cardiovasculares, diabetes e neoplasias, e devido às lesões precoces de aterosclerose a criança obesa tem maior possibilidade de desenvolver doenças cardiovasculares, metabólicas ou neoplásicas, quando adulto. Além de todos os problemas relacionados à parte física, a obesidade pode prejudicar a qualidade de vida da criança, em razão das discriminações e estigmatizações sociais que a criança obesa pode sofrer, levando-a a ter problemas sociais, psicológicos e comportamentais. Este trabalho teve como objetivos verificar o perfil nutricional e os hábitos de vida de escolares obesos, a partir de uma amostra 125 crianças de 7 a 12 anos de uma escola pública municipal do município de Pontal do Araguaia - MT; verificar as possíveis alterações bioquímicas, precursoras de alterações metabólicas em crianças obesas e a relação dessas alterações com o sexo, submetidas aos exames de colesterol total, triglicérides, HDL colesterol, glicemia, ácido úrico e insulina. E finalmente, analisar comparativamente a qualidade de vida do grupo de crianças classificadas como obesas, com um grupo de eutróficas selecionadas a partir da mesma amostra de 125 crianças; utilizando-se como instrumento a Escala de AUQEI (Autoquestionnaire Qualité de Vie Enfant Imagé). Os resultados mostraram que 18% estavam com obesidade, 12% com sobrepeso, 64,5% com peso normal e 5,5% com déficit de peso, também verificou-se a presença de certos hábitos não saudáveis que podem estar contribuindo com a obesidade, como por exemplo: ter alguém na família com sobrepeso (75%), comer guloseimas entre as principais refeições (60%) e fazer as principais refeições na sala, assistindo televisão (60%). Foram identificadas alterações bioquímicas em pelo menos dois parâmetros analisados em 40% dos obesos. O metabólito que mais se alterou foi o colesterol total, aumentado em 50% dos obesos, além de ser constatado que vários metabólitos estavam mais comprometidos nos meninos do que nas meninas, com diferença significativa (p<0,05). As alterações verificadas em boa parte das crianças obesas sugerem certa propensão delas em apresentar síndrome metabólica. Verificou-se que as crianças eutróficas têm melhor qualidade de vida, apresentando escore médio de 52.55, enquanto o grupo de obesos apresentou escore médio de 47,50, que é uma diferença estatisticamente significativa (p=0,024), além disso, a qualidade de vida das crianças obesas encontra-se prejudicada, pois apresentou escore abaixo da nota de corte 48. Após os vários estudos realizados, concluímos que as alterações metabólicas e a qualidade de vida estão prejudicadas no grupo de obesos, além da prevalência de obesidade infantil na amostra estudada ser semelhante ao de outras regiões do país e de ser constatada a presença de hábitos não saudáveis nas crianças obesas que podem influenciar na obesidade. Verificouse assim com esse estudo a complexidade e a gravidade da questão da obesidade infantil. Dessa forma, sugere-se que sejam feitos esforços, em nível nacional, principalmente na prevenção e também no tratamento, por meio da implantação de políticas públicas na área de saúde pública e educação, visando diminuir o impacto negativo que a obesidade provoca na criança, comprometendo sua saúde física e emocional.

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-10-16T16:18:56Z No. of bitstreams: 1 ana_carolina_r_guimaraes_ioc_bcm_0008_2010.pdf: 7783704 bytes, checksum: c55aa365e04b94c51640b1937be9e63d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-16T16:18:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ana_carolina_r_guimaraes_ioc_bcm_0008_2010.pdf: 7783704 bytes, checksum: c55aa365e04b94c51640b1937be9e63d (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Genômica Funcional e Bioinformática. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O estudo da reconstrução metabólica em diversos organismos expõe a existência de compostos cruciais para a sua sobrevivência. Dentre estes compostos, estão as enzimas, responsáveis pela catálise das reações bioquímicas em vias metabólicas. Diferentemente das enzimas homólogas, as enzimas análogas (também conhecidas como enzimas isofuncionais não homólogas) são capazes de catalisar as mesmas reações, mas sem apresentar similaridade de sequência significativa no nível primário e, possivelmente, com diferentes estruturas tridimensionais. Um estudo detalhado destas enzimas pode desvendar novos mecanismos catalíticos, adicionar informações sobre a origem e evolução de vias bioquímicas e revelar alvos potenciais para o desenvolvimento de drogas. Para muitas enfermidades causadas por parasitas, as opções terapêuticas permanecem ineficientes ou inexistentes, exigindo a busca de novos alvos. Estes podem ser proteínas específicas do parasita ausentes no hospedeiro ou compostos presentes em ambos, mas com estrutura tridimensional substancialmente diferente, como as enzimas análogas. A ferramenta AnEnPi, capaz de identificar, anotar e comparar enzimas homólogas e análogas, foi desenvolvida e utilizada para reconstruir computacionalmente as vias metabólicas de alguns organismos modelo, como os tripanossomatídeos. Uma análise mais focada no metabolismo de aminoácidos de Trypanosoma cruzi identificou alvos promissores para o desenvolvimento de novas drogas. Além disso, uma revisão do metabolismo geral de T. cruzi foi realizada em outras vias metabólicas, levando em consideração esta nova abordagem de busca por potenciais alvos terapêuticos. Uma vez que a estrutura tridimensional é importante no estudo de analogia, a ferramenta MHOLline foi utilizada para a obtenção de modelos 3D a partir de homólogos, análogos e proteínas específicas de T. cruzi versus Homo sapiens. As estratégias utilizadas nesse trabalho apóiam o conceito de análise estrutural, juntamente com a análise funcional de proteínas, como uma interessante metodologia computacional para detectar potenciais alvos para o desenvolvimento de novas drogas. / The study of metabolic reconstruction in different organisms exposes the existence of crucial compounds for its survival. Examples of these compounds are the enzymes that are responsible for the catalysis of biochemical reactions in metabolic pathways. Unlike the homologous enzymes, the analogous enzymes (also known as non- homologous isofunctional enzymes) are able to catalyze the same reactions, but without significant sequence similarity at the primary level and possibly with different three-dimensional structures. A detailed study of these enzymes may exhibit new catalytic mechanisms, add information about the origin and evolution of biochemical pathways and reveal potential targets for drug development. For many diseases caused by parasites, therapeutic options remain inefficient or nonexistent, requiring the search for new drug targets. These targets may be specific proteins of the parasite (absent in the host) or compounds present in the both organisms but with different three-dimensional structure, like analogous enzymes. The tool AnEnPi approach was able to identify, annotate and compare homologous and analogous enzymes. It was developed and used to reconstruct computationally the metabolic pathways of some model organisms such as trypanosomes. A more focused analysis on the amino acids metabolism of Trypanosoma cruzi identified promising targets for the development of new drugs. Furthermore, a review of the general metabolism of T. cruzi was carried out in other metabolic pathways, taking into account this new approach in the search for potential therapeutic targets. Since the three-dimensional structure is important in the study of analogy, the tool MHOLline was used to obtain 3D models for homologous, analogous and specific proteins of T. cruzi versus Homo sapiens. The strategies used in this study support the concept that structural analysis together with protein functional analysis could be an interesting computational methodology to detect potential targets for structure-based rational drug design.

Submitted by WELLINGTON IVO EDUARDO null (wellington_ie@hotmail.com) on 2018-03-02T21:56:43Z No. of bitstreams: 1 Tese_Wellington_Ivo_Eduardo.pdf: 2274097 bytes, checksum: 93aec24e46ac9b4cc80b0d41df05e805 (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br) on 2018-03-05T18:08:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 eduardo_wi_dr_jabo.pdf: 2274097 bytes, checksum: 93aec24e46ac9b4cc80b0d41df05e805 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-05T18:08:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 eduardo_wi_dr_jabo.pdf: 2274097 bytes, checksum: 93aec24e46ac9b4cc80b0d41df05e805 (MD5) Previous issue date: 2018-02-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Existem poucos estudos a respeito da utilização de genótipos de soja resistentes no manejo de Heliothis virescens (Fabricius, 1781) (Lepidoptera: Noctuidae) e com o aumento de seu ataque nas últimas safras, eles se tornam necessários. Para isso é primordial a padronização de métodos de pesquisa para obtenção desses genótipos, assim como, estudos sobre os mecanismos de defesas e a indução de resistência dessas plantas frente ao ataque desta praga. Com isso, os objetivos deste trabalho foram avaliar metodologias de pesquisa para testes de resistência nas categorias não preferência para alimentação, não preferência para oviposição e antibiose e classificar os genótipos de soja a H. virescens em níveis de resistência; além de verificar a expressão de resistência induzida sob diferentes níveis de injúrias e tempo após as injúrias e analisar alguns possíveis mecanismos morfológicos e químicos envolvidos com a resistência constitutiva e induzida desses genótipos. Nos experimentos de metodologia de pesquisa para testes de resistência na categoria não preferência para alimentação foi possível observar que a densidade de nove lagartas recém-eclodidas e duas lagartas de seis dias de idade por genótipo e folíolos novos de plantas em estádio vegetativos foram os mais indicados para a realização dos testes de resistência com genótipos. Na categoria não preferência para oviposição, as densidades de casais liberadas por genótipo não influenciaram na diferenciação dos genótipos de soja. A quantidade de ovos por fêmea em densidades de dois casais por genótipo não diferiu das densidades de um e três casais, desta forma a densidade de dois casais foi a selecionada para os testes de resistência na categoria de oviposição com os genótipos; em relação a escolha da estrutura vegetal mais apropriada para avaliação, também não houve diferenciação entre os genótipos resistentes e suscetíveis, optando-se assim, em contar os ovos de todas as estruturas vegetais da planta nos testes posteriores desta categoria; ainda na categoria não preferência para oviposição, o estádio fenológico em que se utilizou a planta também não interferiu na diferenciação dos genótipos, adotando-se assim, utilizar para os testes posteriores plantas em estádio vegetativo pela a rapidez na obtenção e facilidade no manejo das plantas. Nos testes de metodologia de pesquisa na categoria antibiose, determinou-se a utilização da densidade de uma lagarta em recipientes de 150 ml por proporcionar maior diferenciação entre o genótipo resistente do suscetível principalmente na viabilidade de lagartas aos 12 dias e viabilidade larval total; nos testes para determinação da estrutura vegetal, determinou-se utilizar somente os folíolos por diferenciar melhor o genótipo resistente do suscetível nos parâmetros peso de lagartas aos 12 dias, viabilidade larval e peso de pupas. Com base nesses resultados foram realizados os testes de resistência constitutiva de genótipos de soja a H. virescens nas categorias não preferência para alimentação, não preferência para oviposição e antibiose, utilizando densidades de lagartas e casais, tamanho de recipiente, estrutura vegetal e plantas em estádio fenológico determinados anteriormente pelos testes de metodologia de pesquisa. Nos testes na categoria não preferência para alimentação, dentre os 26 materiais avaliados, os genótipos IAC-100, Dowling, UFUS Impacta, UFUS Capim Branco e UFUS Milionária se destacaram como vi resistentes, enquanto os genótipos BR-16, CD-208, UFUS Xavante e M8230RR foram classificados como suscetíveis a H. virescens. Esses genótipos classificados como resistentes e suscetíveis foram submetidos aos testes de resistência constitutiva na categoria não preferência para oviposição e o genótipo UFUS Impacta se destacou por expressar resistência. Na categoria antibiose, os genótipos UFUS Xavante e IAC-100 expressaram resistência a H. virescens e o genótipo CD-208 foi classificado como altamente suscetível. Nos testes indução de resistência para determinar o nível de injúria necessária para que plantas de soja fossem induzidas a expressar resistência contra H. virescens observou que todos os níveis de injúria foram suficientes para essas plantas expressarem resistência a esta praga. Determinou-se ainda que no período de 72 a 144 horas após as plantas serem injuriadas por H. virescens ocorreu a maior expressão de resistência. Para elucidar esses resultados foram realizadas análises morfológicas e químicas nas plantas, sendo possível relacionar a densidade de tricomas com a menor oviposição de H. virescens; as concentrações de fibras e lignina, assim como dos flavonoides rutina e hesperidina com a resistência constitutiva de plantas de soja; além de verificar um aumento dos compostos fenólicos com o passar do tempo após as plantas serem injuriadas. Conclui-se assim que, as densidades de lagartas de H. virescens que melhor diferenciam o genótipo de soja resistente do suscetível são nove e duas, para lagartas recém-eclodidas e de seis dias de idade, respectivamente; os folíolos novos de plantas em estádio vegetativo discriminam melhor o genótipo resistente do suscetível; nos testes de não preferência para oviposição não há diferenciação dos materiais resistentes e suscetíveis nas diferentes densidades de casais, estruturas vegetais e estádios fenológicos; a densidade de uma lagarta de H. virescens e o recipiente de plástico com volume de 150 ml assim como as folhas são melhor discrimina os genótipos de soja resistente do suscetível em teste de resistência da categoria antibiose; os genótipos IAC-100 e UFUS Milionária são altamente resistentes e os genótipos Dowling, UFUS Capim Branco, UFUS Impacta são moderadamente resistentes a H. virescens na categoria não preferência para alimentação; o genótipo UFUS Impacta é resistente a H. virescens na categoria não preferência para oviposição; o genótipo UFUS Xavante é altamente resistente e o genótipo IAC-100 é moderadamente resistente a H. virescens na categoria antibiose; plantas de soja do genótipo 84 Davis expressam resistência induzida a H. virescens depois de sofrerem injúrias de 25, 50 e 75% no trifólio mais velho por essa praga; plantas de soja do genótipo 84 Davis expressam resistência induzida a H. virescens a partir de 36h do ataque desta praga, aumentando a resistência até 200h após do ataque, diminuindo após este período; os tricomas são um dos possíveis mecanismos de defesa relacionados com a oviposição das mariposas e não alimentação em vagens de lagartas jovens; o baixo teor de taninos e compostos fenólicos totais estão relacionados com a preferência das lagartas por grãos em desenvolvimento ao invés de folhas; lagartas recém-eclodidas e com seis dias de idade de H. virescens preferem se alimentar de folhas com menores concentrações de fibras e ligninas; os flavonoides rutina e hesperidina estão relacionados com a resistência da categoria não preferência para alimentação em genótipos IAC-100, Dowling, UFUS Capim Branco, UFUS Impacta e UFUS Milionária por H. virescens. / There are few studies on the use of resistant soybean genotypes in the management of Heliothis virescens (Fabricius, 1781) (Lepidoptera: Noctuidae) and with the increase of their attack in the last few seasons, these study become necessary, being important a standardization of the research methods to obtain these genotypes, as well as, studies on the defense mechanisms and the resistance induction of these plants against the attack of this pest. Thus, the aims of this work were to evaluate research methodologies for resistance tests in the categories, non-preference for feeding, non-preference for oviposition and antibiosis, and to classify the soybean genotypes in resistance levels against H. virescens in these categories; besides verifying the expression of induced resistance under injuries levels and time after the injuries caused by H. virescens, and to analyze some possible morphological and chemical mechanisms involved with the constitutive and induced resistance of these genotypes. In the research methodology experiments for resistance tests in the non-preference for feeding category was possible to observe that the density of nine caterpillars neonates and two caterpillars with six-day old per genotype; new leaf of plants in vegetative stage plants were the most indicated for the performance of resistance tests with genotypes soybean. In the non-preference for oviposition category, the couples densities released per genotype did not influence in the distition of the soybean genotypes; in parallel, the amount of lay eggs per female at densities of two couples per genotype did not differ from the densities of one and three couples, in this way the density of two couples was selected for the resistance tests in the non-preference for oviposition category with the genotypes soybean against H. virescens; in relation to the choice of the most appropriate plant structure for evaluation of the resistance tests, there was also no differentiation between the resistant and susceptible genotypes, thus choosing to count the eggs of all structures of the plant in the later resistance tests of this category; the phenological stage in which the plant was used also did not interfere in the differentiation of the genotypes, using, at the later resistance tests, plants at the vegetative stage by the speed in obtaining and ease in the management of the plants. In turn, in the research methodology tests in the antibiosis category, it was determined the use of the density of a caterpillar per containers of 150 ml, for providing greater differentiation between the resistant genotype of the susceptible, mainly in the larval viability at 12 days and larval viability; in the tests to determine the plant structure more suitable for resistance tests, the leaves alone were choose because in these structures there was a greater differentiation of the resistant genotype than susceptible genotype in the parameters larval weight at 12 days, larval viability and pupal weight. Based on these results, constitutive resistance tests of soybean genotypes to H. virescens were performed in the categories non-preference for feeding, no preference for oviposition and antibiosis, using larvae and couples densities, container size, plant structure and plants in phenological stage determined previously by the research methodology tests. In the tests of the non-preference for feeding category, among the 26 genotypes evaluated, the genotypes IAC-100, Dowling, UFUS Impacta, UFUS Capim Branco and UFUS viii Millionaria were the genotypes most resistant, while genotypes BR-16, CD-208, UFUS Xavante and M8230RR were classified as susceptible to H. virescens. These genotypes classified as resistant and susceptible were submitted to constitutive resistance tests in the non-preference for oviposition category and the UFUS genotype. Impacta was noted for expressing resistance to this pest. In the antibiosis category the UFUS Xavante and IAC-100 genotypes expressed resistance to H. virescens, while the CD-208 genotype was classified as highly susceptible. In the induced resistance tests to determine the level of injury required for soybean plants to be induced to express resistance against H. virescens was observed that all injury levels tested were sufficient for these plants to express resistance to this pest We also determined that in the period of 72 to 144 hours after the plants were be injured by H. virescens was respnsable by greatest expression of resistance against this pest occurred among the times tested. In the attempt to elucidate these results, morphological and chemical analyzes of the plants were carried out, being possible to relate the trichomes density with the lowest oviposition of H. virescens; the concentrations of fiber and lignin, as well as the flavonoids rutin and hesperidin with the constitutive resistance of soybean plants to this pest; in addition, we noticed that there was an increase of the phenolic compounds with the increase of the time after the injuries in plants. It is concluded that the densities of H. virescens caterpillars that best differentiate susceptible and resistant soybean genotype are nine and two neonates and six-day old caterpillars, respectively; new folioles of plants in vegetative stage better discriminate the susceptible and resistant genotype; in the non-preference for oviposition tests there is no differentiation of the resistant and susceptible materials for the different densities of couples, plant structures and phenological stages; the density of a H. virescens caterpillar and the plastic container with a volume of 150 ml as well as the leaves are best discriminated against susceptible soybean genotypes susceptible in antibiosis resistance test; in the non-preference category for feeding the IAC-100 and UFUS Millionaria genotypes are highly resistant and the Dowling, UFUS Capim Branco and UFUS Impacta genotypes are moderately resistant to H. virescens; in the non-preference category for oviposition the genotype UFUS Impacta is resistant to H. virescens; in the antibiosis category the UFUS Xavante genotype is highly resistant and the IAC-100 genotype is moderately resistant to H. virescens; soybean plants of the Davis 84 genotype express induced resistance to H. virescens after suffering 25, 50 and 75% injuries in the older trefoil by this pest; soybean plants of the Davis 84 genotype express induced resistance to H. virescens from 36 hours of the attack of this pest, increasing resistance up to 200 h after the attack, decreasing after this period; trichomes are one of the possible defense mechanisms related to oviposition of moths and not feeding on young caterpillar pods; the low content of tannins and total phenolic compounds are related to the preference of caterpillars for developing grains rather than leaves; Neonates and six-day-old caterpillars of H. virescens prefer to feed on leaves with lower fiber and lignin concentrations; the flavonoids rutin and hesperidin are related to resistance of the non-preference category for feeding in genotypes IAC-100, Dowling, UFUS Capim Branco, UFUS Impacta and UFUS Millionaire by H. virescens. / 2014/08373-3

Orientador: Marines Nobre dos Santos Uchoa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-13T08:04:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Steiner-Oliveira_Carolina_D.pdf: 11802864 bytes, checksum: 338ee3278fb157bb1cb37edb2e6d1a5d (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Os efeitos causados pelas modificações promovidas pela irradiação com laser de CO2 podem inibir a desmineralização dos tecidos dentários e podem ser potencializados quando associados ao fluoreto. Apesar de amplo uso do fluoreto e da redução da prevalência de cárie, essa doença ainda acomete grupos de alto risco. Por outro lado, tem sido observado um aumento da prevalência da erosão dentária. Os objetivos dessa tese, composta por 4 manuscritos, foram: (1) descrever as características do laser de CO2 e seus mecanismos de ação na inibição da desmineralização do esmalte; (2) desenvolver um modelo microbiológico, in vitro, de produção de lesão de cárie em dentina e testar duas hipóteses: (a) de que não há diferença na produção de cárie artificial em dentina utilizando um modelo microbiológico com regimes de 3 e 6 imersões ao dia em sacarose, avaliados por contagem bacteriana da dentina (UFC), análise microrradiográfica (AM) e análise de polissacarídeo insolúvel (API); (b) de que não há diferença no pH do biofilme antes e após sua imersão em sacarose; (3) avaliar, in vitro, a efetividade do laser de CO2 (? = 10,6 µm) pulsado, associado ou não ao fluoreto, na redução da desmineralização da dentina radicular usando um modelo microbiológico, avaliado por AM; (4) avaliar, in vitro, o efeito do mesmo laser, associado ou não ao fluoreto, na redução da desmineralização do esmalte e da dentina submetidos a um desafio erosivo, pela mensuração da perda de superfície e análise da concentração de cálcio, fósforo e fluoreto das soluções desmineralizadoras. Os dados foram analisados quanto à normalidade e testes apropriados foram realizados com nível de significância de 5%. No estudo 1, os efeitos do laser no esmalte, seu mecanismo de ação na redução da desmineralização, combinados ou não ao fluoreto, foram discutidos. No estudo 2, o pH do biofilme diminuiu imediatamente após a imersão em sacarose, mas aumentou novamente 5 min depois. Lesões em dentina foram produzidas com sucesso e a adição de sacarose mostrou as maiores perdas minerais, no entanto não diferiu entre os dois regimes de sacarose. A UFC não mostrou nenhuma diferença e a API dos tratamentos foram maiores que a do grupo controle. No estudo 3, os espécimes radiculares foram tratados ou não com laser de CO2 e com ou sem fluoreto antes ou após a irradiação com laser. O modelo microbiológico utilizado foi efetivo em produzir lesões dentinárias e as terapias combinadas mostraram as lesões dentinárias mais rasas. No estudo 4, espécimes de esmalte e dentina foram tratados com fluoreto, laser e fluoreto/laser e submetidos a um desafio erosivo. Os resultados de desgaste indicaram que o tratamento combinado interferiu com as perdas minerais do esmalte e da dentina, mesmo sem mostrar efeito sinérgico. Houve uma tendência de retenção de fluoreto no esmalte pelo tratamento combinado e também de liberação de menores quantidades de cálcio, fósforo e fluoreto para as soluções desmineralizadoras. Em conclusão, o mecanismo de ação do laser de CO2 na inibição da desmineralização do esmalte ainda não está completamente esclarecido e seu efeito pode ser aumentado quando associado ao fluoreto. O modelo microbiológico foi efetivo em produzir lesões de cárie dentinária. A irradiação da dentina radicular com laser inibiu a desmineralização dessa superfície apenas quando associado com o fluoreto; no entanto, não foi observado efeito sinérgico. O tratamento isolado com laser não foi capaz de prevenir a perda de superfície do esmalte e da dentina devido à erosão. Sua combinação com fluoreto mostrou alguma proteção, mas principalmente devido ao efeito do fluoreto. Não foi observada interação sinérgica significativa ou proteção duradoura com a terapia de laser. / Abstract: The effects caused by the modifications promoted by the CO2 laser irradiation can inhibit the dental tissues demineralization and may be enhanced when associated with fluoride. Despite the widespread use of the fluoride and the reduction of the caries prevalence, this disease still occurs in the high risk groups. On the other hand, an increase of the dental erosion prevalence was observed. This thesis, comprised by 4 manuscripts, aimed: (1) to describe the CO2 laser characteristics and its action mechanisms in the enamel demineralization inhibition; (2) to develop an in vitro microbial model to produce dentin caries lesions and test two hypotheses - (a) that there is no difference in the artificial caries production in dentin using a microbial model with 3 and 6 sucrose bath immersions, as assessed by bacterial counts on the dentin (CFU), microradiographic analysis (TMR) and extracellular polysaccharide analysis (EPS); (b) that there is no difference in the biofilm pH before and after each sucrose bath; (3) to assess, in vitro, the effectiveness of a pulsed CO2 laser (? = 10.6 µm) associated or not with fluoride, in reducing the root demineralization using a microbial model, as assessed by TMR; (4) to assess, in vitro, the effect of the same laser, associated or not with fluoride, on the prevention of the enamel and dentin erosions by means of surface loss measurement and analysis of the calcium, phosphorus and fluoride concentrations in the demineralizing solutions. The data were checked for normality and appropriated tests were performed with a significance level of 5%. In study 1, the laser effects on the enamel and its action mechanisms in the demineralization reduction, combined or not with fluoride, were discussed. In study 2, the biofilm pH decreased immediately after the sucrose bath but increased again after 5 min. Dentin lesions were successfully produced, and the sucrose addition showed the highest mineral losses, even though there was no difference between the sucrose regimens. The CFU did not show any difference and the EPS from the treatment groups were higher than for the control. In study 3, root specimens were treated with/without CO2 laser and with/without fluoride prior or after the laser irradiation. The microbial model utilized was effective in developing dentin lesions and the combined therapies showed the shallowest dentin lesions. In study 4, specimens of enamel and root dentin were treated with fluoride, laser and fluoride/laser and submitted to an erosive challenge. The wear results indicated that the combined treatment interfered with the enamel or dentin surface losses, although no synergistic effect was observed. There was a trend for the combined treatment to retain more fluoride in enamel and release lower amounts of calcium and phosphorus into the demineralizing solutions. In conclusion, the CO2 mechanism action on the enamel demineralization reduction is still not elucidated and its effects can be increased when associated with fluoride. The microbial model was effective in producing dentin caries lesions. However, it did not reproduce the remineralizing phase of the caries process. Irradiation of the root dentin with laser inhibited the root surface demineralization only when associated with fluoride; however, no synergic effect was observed. The laser treatment alone was not able to prevent enamel or dentin surface losses due to erosion. Its combination with fluoride showed some protection, but mostly due to the fluoride effect. No significant synergistic interaction or lasting protection could be observed for the laser therapy. / Doutorado / Odontopediatria / Doutor em Odontologia

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernando Medeiros Bastos.pdf: 1326982 bytes, checksum: fa537bd70ed08e84642f9fc192266e56 (MD5) Previous issue date: 2008-05-30 / Endoxylanases are the main group of enzymes involved in the hydrolysis of xylan. This enzymes have application in industrial proposes, like as drink, food, feed, clothes industries and for bleaching cellulose paper pulps. In bread making the xylanases have been used to improve processing and product quality of loaf, leading soft dough and loaf with larger volume as well as an improved crumb structure. The xylanolitic enzymes produced by filamentous fungi constitute an enzymatic pool with distinct activities which make their use in industrial process more difficult, the obtainment of recombinant microorganisms constitutes a strategy to achieve suitable enzymes to industrial process. The thermophilic fungus Humicola grisea var. thermoidea has proved to be a good source of xylanolitic enzymes. The gene Hxyn2 from H. grisea codes a xylanase with 23 kDa that belongs to G/11 family of glycosil-hydrolases. Its cDNA was cloned in the vector pHILD2 and expressed in yeast Pichia pastoris under the control of the promoter AOX1. The transformants were chosen trough genetic stability and capacity to produce and secrete the enzyme HXYN2r into culture medium. The purified HXYN2r showed a high xylanolitic activity with an optimum temperature of 60 ºC and an optimum pH value of 6.5. The aim of this project was the production, purification and application of HXYN2r enzyme in bread making tests. The production in the optimized medium obtained 100 mg of active xylanase per liter of medium BMMY-U. This quantify of enzyme presented 40% of the total proteins in culture supernatants. The proteins of culture supernatants was concentrated by liofylization and fractionated by into a chromatographic column of gel filtration Sephacryl S-100. The purified xylanase presented specific activity of 2250 U/mg and the purification profit was 6.4%. The 23 kDa protein was confirmed by the activity on Zymogram assay. The pure xylanase was added at the rate of 45 and 90 U/Kg of wheat flour in the bread making tests. In this rates it was not observed any effect of xylanase in specific volume either in crumb structure. The HXYN2r enzyme was partially purified by a heat treatment (45 min at 60 °C) and was concentrated by liofylization and a yield of 17.9% was obtained. The partially purified HXYN2r was added at the rates of 500, 1500, 3000, 4500 and 6000 U/kg of wheat flour. The added xylanase improved the specific volume and the crumb structure, but any effect was observed in the moisture content of the loaf. The best result was the rise of 16.0 % in loaf specific volume with the dose of 3000 U/kg of wheat flour. This effect was similar to the obtained with a commercial xylanase added to the dough in equal dose. The results presented suggest that the xylanase from H. grisea can be used in bread making to improve specific volume. / As endoxilanases formam o principal grupo de enzimas hidrolíticas envolvidas na degradação da xilana. Estas enzimas têm vasta aplicação no setor industrial, como nas indústrias de bebidas, alimentícia, têxtil, de rações e de celulose (biobranqueamento). As xilanases têm sido empregadas na panificação para melhorar o processamento e a qualidade do pão, levando a obtenção de uma massa mais macia, pães com maior volume e com melhor estrutura de miolo. As enzimas xilanolíticas produzidas por fungos constituem um conjunto enzimático com atividades distintas, dificultando a sua utilização direta nos processos industriais. Uma estratégia utilizada atualmente se baseia na obtenção de microrganismos recombinantes que produzam enzimas com atividades específicas e adequadas aos diferentes processos industriais. O fungo termofílico Humicola grisea var. thermoidea tem sido uma boa fonte de enzimas xilanolíticas. O gene Hxyn2 deste fungo codifica uma endoxilanase de 23 kDa pertencente a família G/11 das glicosil hidrolases. Para a produção da enzima recombinante HXYN2r, o cDNA correspondente ao gene Hxyn2 (cDNA-xyn2) foi clonado no vetor pHILD2 e expresso na levedura P. pastoris sob o controle do promotor AOX1. Os transformantes foram selecionados quanto à estabilidade genética e capacidade de produzir e secretar a enzima HXYN2r ativa para o meio de cultura. A enzima HXYN2r purificada apresentou temperatura ótima a 60°C e pH ótimo de 6,5. O presente trabalho teve como objetivo a produção, purificação e aplicação da enzima HXYN2r em testes de panificação. A produção da enzima foi realizada em condições ótimas, obtendo 100 mg de proteína/L de meio BMMY-U (Meio de cultura complexo contendo metanol e uréia), sendo que a quantidade de enzima no meio de cultura representou 40% do total das proteínas secretadas. Para a purificação de HXYN2r, as proteínas do sobrenadante de cultura foram concentradas por liofilização e fracionadas por cromatografia de gel filtração S-100. A enzima purificada apresentou uma atividade específica de 2250 U/mg, com um rendimento de purificação de 6,4%. A proteína de aproximadamente 23 kDa foi confirmada pela presença de uma banda de xilanase no gel de zimograma. A enzima pura foi adicionada à massa para testes de panificação nas concentrações de 45 e 90 U /kg de farinha, nestas concentrações não foi observado alteração no volume específico dos pães e nem na estrutura do miolo. A enzima HXYN2r também foi parcialmente purificada por tratamento térmico (60 °C por 45 min) e concentrada por liofilização, obtendo um rendimento de 17,9 %. A enzima HXYN2r parcialmente purificada foi testada na panificação nas concentrações de 500, 1500, 3000, 4500 e 6000 U/Kg de farinha. A suplementação da xilanase aumentou o volume específico dos pães, melhorou a estrutura do miolo e não foi observada nenhuma alteração no conteúdo de umidade dos pães em relação ao pão controle. O melhor resultado apresentado foi o aumento de 16,0 % no volume específico dos pães suplementados com 3000 U de HXYN2r por quilo de farinha, resultado semelhante ao obtido com a adição de uma preparação enzimática comercial contendo xilanase nas mesmas concentrações. Os resultados apresentados sugerem que a xilanase do H. grisea pode ser usada na panificação para a melhoria do volume específico dos pães.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:22:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lilian C M Lopes - Dissertacao.pdf: 480404 bytes, checksum: edbfe2459d6604d32a4980d5fd7dcdca (MD5) Previous issue date: 2010-04-30 / The common bean (Phaseolus vulgaris L.) assumes great importance in human nutrition. It holds essential components to the diet such as proteins, carbohydrates and minerals. The bean cotyledon is a byproduct of the bean industry; however, its nutritional value is kept. An alternative to the exploitation of bean cotyledon is the use of extrusion in the development of food products. In this context, the objective of this research was to produce extruded flours from the common bean cotyledon (Phaseolus vulgaris L.), the Carioca type, in different conditions of temperature and humidity in order to achieve technological and biochemical parameters for their use as instant food ingredient. The grains were crushed to a granulometry between 0.75 and 0.85 mm. The extrusion was carried out in full line of extrusion using extruder model MI - 130 plus, screw rotation speed 414 rpm, single screw and long with 02 compression rates and helical shirt. A model 22 was applied to evaluate the conditions of extrusion. The variables studied were temperature (150, 154, 164, 174 and 178° C) and humidity (12.3, 14, 18, 22 and 23.7%). After extrusion, the products milled to obtain flour were evaluated for chemical composition, rate of water absorption, water solubility, ability to gel formation, viscoamylographic properties, trypsin inhibitor activity, in vitro digestibility of protein and starch and microbiological quality. The results showed no significant difference between treatments related to the composition of the flours, except for the humidity. Regarding technological properties analyzed, there was a decrease of water solubility of 33% in raw flour to 15 to 23% in the extrudates. There was an increase in water absorption (9.1 to 23.9%) and improvement in ability to form gels (9% versus 11% of raw flour). Regarding the parameters of viscosity of extruded flours, the initial viscosity increased with the decrease in humidity and temperature and was observed no peak viscosity. The high values of breakdown viscosity were found in median temperatures and high humidity values. On the other hand, the final viscosity and retrogradation of extruded flours were higher when median temperatures and low humidity were used. The process resulted in complete elimination of the activity of trypsin inhibitors and increase in protein (between 11.7 and 26.6%) and starch (between 14.4 and 38.07%) digestibility. The microbiological analysis showed that all samples of extruded bean flours and instant bean soup prepared were presented in accordance with standards established by the Legislature. These results indicate that it is possible to produce instant bean flour, as an appropriate ingredient of soups preparations, baby food and other foods, with better nutritional value and good technological and biochemical properties. / O feijão comum (Phaseolus vulgaris L.) assume enorme importância na alimentação humana. Ele possui componentes essenciais à dieta, como proteínas, carboidratos e minerais. A bandinha de feijão consiste em um subproduto da indústria de feijão, porém, os seus aspectos nutricionais são mantidos. Uma alternativa para o aproveitamento de bandinha de feijão é a utilização da extrusão no desenvolvimento de produtos alimentícios. Diante deste quadro, o objetivo desta pesquisa foi produzir farinhas extrusadas da bandinha de feijão comum (Phaseolus vulgaris L.) da variedade Carioca, em diferentes condições de temperatura e umidade, a fim de atingir parâmetros tecnológicos e bioquímicos para sua utilização como ingrediente para alimentos instantâneos. Os grãos foram triturados a uma granulometria, entre 0,75 e 0,85 mm. A extrusão foi realizada em linha completa de extrusão utilizando extrusora modelo MI 130 plus, velocidade de rotação da rosca 414 rpm, rosca simples e longa com 02 taxas de compressão e camisa helicoidal. Um modelo 22 foi aplicado para avaliar as condições de extrusão. As variáveis estudadas foram temperatura (150; 154; 164; 174 e 178ºC) e umidade (12,3; 14; 18; 22 e 23,7%). Após a extrusão, os produtos moídos para obtenção de farinhas, foram avaliados quanto à composição centesimal, ao índice de absorção de água, solubilidade em água, capacidade de formação de gel, propriedades viscoamilográficas, inibidor de tripsina, digestibilidade in vitro de proteína e amido e qualidade microbiológica. Os resultados indicaram que não houve diferença significativa entre os tratamentos, quanto à composição centesimal das farinhas, à exceção da umidade. Em relação às propriedades tecnológicas analisadas, houve diminuição da solubilidade em água de 33% na farinha crua para 15 a 23% nos extrusados. Houve aumento na absorção de água (9,1 a 23,9%) e melhora na capacidade de formação de gel (9% contra 11% da farinha crua). Quanto aos parâmetros de viscosidade das farinhas extrusadas, a viscosidade inicial aumentou com a diminuição da umidade e temperatura e foi observado ausência de pico de viscosidade. Os altos valores de quebra de viscosidade foram encontrados em temperaturas medianas e altos valores de umidade. Já a viscosidade final e tendência à retrogradação das farinhas extrusadas foi elevada quando foram usadas temperaturas medianas e baixas umidades. O processo provocou eliminação completa da atividade de inibidores de tripsina e aumento nas digestibilidades protéica (entre 11,7 a 26,6%) e de amido (entre 14,4 e 38,07%). Os resultados das análises microbiológicas indicaram que todas as amostras de farinhas de feijão extrusadas e o caldo de feijão instantâneo elaborado apresentaram-se de acordo com os padrões estabelecidos pela legislação. Estes resultados indicam que é possível produzir farinha de feijão instantânea, com características de ingrediente no preparo de sopas, caldos, papinhas, entre outros alimentos, com melhor valor nutricional e boas propriedades tecnológicas e bioquímicas.