Submitted by Gisele Mara Hadlich (gisele@ufba.br) on 2018-06-26T15:23:07Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO MARIA LUIZA completa .pdf: 2842095 bytes, checksum: e67b43f7f132501206ce68090faf0e9b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-26T15:23:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO MARIA LUIZA completa .pdf: 2842095 bytes, checksum: e67b43f7f132501206ce68090faf0e9b (MD5) / A contaminação por metais provenientes de fontes antropogênicas representa uma ameaça tanto para as espécies aquáticas como para a população que as consomem. O Goniopsiscruentata(Latreille, 1803) popularmente conhecido como aratu, constitui um recurso pesqueiro importante no município de Canavieiras – BA, pois é a principal fonte de renda para muitas famílias ribeirinhas na região e adjacências. Os objetivos do trabalho foram determinar as concentrações de Ba, Cd, Cu, Fe, Ni, Mn, V e Zn em diferentes tecidos do crustáceo, verificar se os valores de concentração destes metais estão dentro dos limites estabelecidos pelos órgãos fiscalizadores, e além disso este trabalho procurou contextualizar aspectos socioeconômico e ambiental em que se processam as atividades de coleta do crustáceo Goniopsiscruentata.Foram aplicados questionários às marisqueiras,além de observação direta da atividade por parte do pesquisador. As coletas aconteceram em abril/2012 (período chuvoso)e out/2012 (período seco), em seis pontos de coletas do município de Canavieiras, Bahia. Por ponto, foram coletados vinte indivíduos, perfazendo um total de duzentos e quarenta indivíduos, os quais após a coletaforam submetidos à biometria, sexagem, pesagem dos indivíduos, pesagem da massa seca após a liofilização, digestão em forno de microondas e determinação dos elementos (Ba, Cd, Cu, Fe, Mn, N, V e Zn). Nas análises biométricas (peso, comprimento, largura das carapaças) foram observadas diferenças significativas com relação aos pesos dos indivíduos, onde os machos apresentaram maiores valores em relação às fêmeas. As concentrações dos metais encontrados nos crustáceos foram altas para o elemento Cobre nas brânquias, porém a legislação não estabelece limites para este tecido e sim para o tecido muscular.Tais concentrações estão relacionadas à fisiologia do animal, uma vez que as brânquias funcionam como órgão responsável por trocas gasosas, onde os elementos absorvidos por esta estrutura dependem do contato dos indivíduos com o meio externo.

Made available in DSpace on 2017-07-10T14:57:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jardel_ Nimet.pdf: 1924881 bytes, checksum: 4755b41b1458253b217679d76b6eeead (MD5) Previous issue date: 2016-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Abstract: This study evaluated the use of gill and liver of Astyanax bifasciatus as histological biomarkers for biomonitoring of streams with different uses and land occupation. The fish were collected by electric fishing technique, in six streams classified as afforested, rural and urban, in the basin of the lower Iguaçu River, west region of Paraná State, in December 2014. It was tested the hypothesis that in streams that are influenced by effluents from urban and rural areas occur greater number and histopathological severity in gill and liver of A. Bifasciatus. In this context, the objective of this study was to correlate the presence and degree of histopathology of gill and liver with the environmental variables among streams with different uses and land occupation. The environments considered afforested showed higher values of dissolved Oxygen (DO) and lower conductivity (CO) when compared to the rural and urban environments. The gills of fish from the afforested streams indicated normal functioning of the organ, while in the rural and urban streams, the histopathology in the gills suggested light to moderate damage to the organ. In relation to the liver, the histopathology indicated light to moderate damage in rural streams and moderate to severe damage in urban streams. When considering the abiotic variables and frequencies of histopathology of gill and liver, the afforested streams were separated from rural and urban areas. The histopathology in gills and livers were significantly more severe, corroborating our hypothesis. It was possible to distinguish streams with different uses and land occupation, therefore, these histopatologias showed favorable biomarkers for studies of biomonitoring / Resumo: Este estudo avaliou o uso de brânquia e fígado de Astyanax bifasciatus como biomarcadores histológicos para biomonitoramento de riachos com diferentes usos e ocupação do solo. Os peixes foram coletados por meio da técnica de pesca elétrica, em seis riachos classificados em florestados, rurais e urbanos, na bacia do baixo Rio Iguaçu, região Oeste do Estado do Paraná, em dezembro de 2014. Testou-se a hipótese de que em riachos que sofrem influências de efluentes oriundos de áreas rurais e urbanas ocorrem maior número e severidade histopatológicas em brânquia e fígado de A. bifasciatus. Nesse contexto, este estudo teve como objetivo correlacionar a presença e o grau de histopatologias de brânquia e fígado com as variáveis ambientais entre riachos com diferentes usos e ocupação do solo. Os ambientes considerados florestados apresentaram maiores valores de Oxigênio dissolvido (OD) e menores de condutividade (CO) quando comparados com os ambientes rurais e urbanos. As brânquias dos peixes dos riachos florestados indicaram funcionamento normal do órgão, enquanto que nos riachos rurais e urbanos, as histopatologias nas brânquias sugeriram danos leves para moderados ao órgão. Em relação ao fígado as histopatologias indicaram danos leves para moderados nos riachos rurais e danos moderados para severos nos riachos urbanos. Ao considerar as variáveis abióticas e as frequências das histopatologias de brânquia e fígado, os riachos florestados foram separados dos rurais e urbanos. As histopatologias nas brânquias e fígados foram significativamente mais severas, corroborando a nossa hipótese. Foi possível distinguir os riachos com diferentes usos e ocupação do solo, portanto, essas histopatologias se mostraram biomarcadores favoráveis para estudos de biomonitoramento

A (Na+,K+)-ATPase presente no tecido branquial dos crustáceos osmorreguladores é um componente essencial de seu sistema de regulação iônica e osmótica. Esta enzima também apresenta um papel relevante no processo de excreção ativa de NH4+ através do tecido branquial dos crustáceos. Uma fração microsomal rica em (Na+, K+)ATPase foi preparada por centrifugação diferencial a partir de um homogeneizado do tecido branquial de Callinectes ornatus. A centrifugação em gradiente de sacarose revelou a presença de um unico pico de proteina com atividade ATPase, mas a eletroforese em gel de poliacrilamida em condições desnaturantes revelou a presença de várias bandas protéicas. O uso do anticorpo monoclonal 5 contra a subunidade da (Na+, K+) ATPase, revelou a presença de uma única banda proteica de 110 kDa com atividade (Na+, K+)?ATPase. A (Na+, K+) ATPase hidrolisou o PNPP (V= 52,0 ± 2,0 U/mg e K0,5 = 1,1 ± 0,1 mM) através de interações sítio-sítio (nH= 1,6). A modulação da enzima pelos íons magnésio (V= 52,3 ± 1,3 U/mg e K0,5 = 1,1 ± 0,05 mM), potássio (V= 51,4 ± 1,5 U/mg e K0,5 = 2,3 ± 0,1 mM) e amônio (V= 56,7 ± 2,6 U/mg e K0,5 = 9,8 ± 0,4 mM) ocorreu através de interações sítio-sítio. Os íons sódio atuaram como inibidores da atividade K+-fosfatase da enzima (Ki= 1,7 ± 0,1 mM) e a ouabaína inibiu cerca de 80% a atividade PNPPase independentemente da presença de íons amônio. A (Na+, K+) ATPase hidrolisou o ATP de acordo com cinética de Michelis-Menten, com KM= 0,16 0,01 mM e V= 116,3 5,6 U/mg, enquanto a modulação da atividade da enzima pelos íons magnésio (V= 111,0 ± 5,4 U/mg e K0,5= 0,54 ± 0,03 mM), sódio (V= 110,6 ± 5,3 U/mg e K0,5= 6,3 ± 0,3 mM), potássio (V= 116,0 ± 5,5 U/mg e K0,5= 1,5 ± 0,1 mM) e amônio (V= 173,3 ± 5,4 U/mg e K0,5= 5,4 ± 0,3 mM) ocorreram através de interações sítio-sítio. Também foi observado que na presença de concentrações crescentes de ions amonio, a estimulação da atividade (Na+,K+)-ATPase pelo íons potássio acarretou um aumento de 50% na atividade específica da enzima. A ouabaína inibiu cerca de 86% a atividade (Na+,K+)-ATPase com Ki= 74,5 ?M, sugerindo a presença de 14% de fosfatases e/ou outras ATPase contaminantes. Este é o primeiro trabalho onde se observa uma estimulação sinergística da atividade K-fosfatase da (Na+,K+)-ATPase de crustáceo pelos íons potássio e amônio. Os resultados cinéticos obtidos para a (Na+,K+)-ATPase branquial de Callinectes ornatus, analisados em conjunto com os já descritos para outras espécies de crustáceos poderão abrir novas perspectivas em relação ao papel dessa enzima na adaptação fisiológica-bioquímica, bem como para a sobrevivência desses animais em diferentes ambientes. / (Na+, K+)-ATPase present on branchial tissue osmoregulatory crustaceans is an essential component of their osmotic and ionic regulation system. Apparently, this enzyme also have a relevant role in the active excretion de NH4+ through the branchial crustacean tissue. A (Na+, K+) ATPase-rich microsomal fraction was prepared by differential centrifugation from Callinectes ornatus homogenized branchial tissue. The sucrose gradient sucrose centrifugation showed the presence of a single protein peak with ATPase activity, and SDS-PAGE revealed the presence of several proteins bands. The use of the 5 monoclonal antibody, against the ? subunit, revealed the presence of a unique protein band of 110 kDa corresponding to the (Na+, K+) ATPase. (Na+, K+) ATPase hydrolyzed the PNPP (V= 52.0 2.0 U/mg and K0.5= 1.1 0.1 mM) through the site-site interactions (nH= 1.6). The modulation of (Na+, K+) ATPase by magnesium (V= 52.3 1.3 U/mg and K0.5= 1.1 ? 0.05 mM), potassium (V= 51.4 1.5 U/mg and K0.5= 2.3 0.1 mM) and ammonia ions (V= 56.7 2.7 U/mg and K0.5= 9.8 ? 0.4 mM) followed cooperative kinetics. However, sodium ions inhibited PNPPase activity of (Na+, K+)?ATPase with Ki= 1.7 0.1 mM. Ouabain also inhibited up to 80% the total activity PNPPase independent of the presence of ammonium ions. The hydrolysis of ATP by (Na+, K+) ATPase followed Michaelis-Menten kinetics with Km= 0.16 0.01 mM and V= 116.3 5.6 U/mg, while enzyme modulation by magnesium (V= 111.0 5.4 U/mg and K0.5= 0.54 0.03 mM), sodium (V= 110.6 5.3 U/mg and K0.5= 6.3 0.3 mM), potassium (V= 116.0 5.5 U/mg and K0.5= 1.5 ? 0.1 mM) and ammonium ions (V= 173.3 . Interestingly, the stimulation of (Na+, K+)-ATPase activity by potassium ions in the presence of increasing concentration of ammonium ions to K+ resulted in a 50% higher specific activity. Ouabain inhibited approximately 86% the activity (Na+, K+) ATPase with (Ki= 74.5 M), suggesting the presence of about 14% of phosphatases and/or other ATPases. This is the first work showing synergistic stimulation of crustacean (Na+, K+) ATPase by potassium and ammonium ions when PNPP is used a substrate. The results reported herein for Callinectes ornatus branchial (Na+, K+) ATPase might open new perspectives concerning the physiological adaption and the survival of these animals in different environmental.

A (Na+,K+)-ATPase presente no tecido branquial dos crustáceos osmorreguladores é um componente essencial de seu sistema de regulação iônica e osmótica. Esta enzima também apresenta um papel relevante no processo de excreção ativa de NH4+ através do tecido branquial dos crustáceos. Uma fração microsomal rica em (Na+, K+)ATPase foi preparada por centrifugação diferencial a partir de um homogeneizado do tecido branquial de Callinectes ornatus. A centrifugação em gradiente de sacarose revelou a presença de um unico pico de proteina com atividade ATPase, mas a eletroforese em gel de poliacrilamida em condições desnaturantes revelou a presença de várias bandas protéicas. O uso do anticorpo monoclonal 5 contra a subunidade da (Na+, K+) ATPase, revelou a presença de uma única banda proteica de 110 kDa com atividade (Na+, K+)?ATPase. A (Na+, K+) ATPase hidrolisou o PNPP (V= 52,0 ± 2,0 U/mg e K0,5 = 1,1 ± 0,1 mM) através de interações sítio-sítio (nH= 1,6). A modulação da enzima pelos íons magnésio (V= 52,3 ± 1,3 U/mg e K0,5 = 1,1 ± 0,05 mM), potássio (V= 51,4 ± 1,5 U/mg e K0,5 = 2,3 ± 0,1 mM) e amônio (V= 56,7 ± 2,6 U/mg e K0,5 = 9,8 ± 0,4 mM) ocorreu através de interações sítio-sítio. Os íons sódio atuaram como inibidores da atividade K+-fosfatase da enzima (Ki= 1,7 ± 0,1 mM) e a ouabaína inibiu cerca de 80% a atividade PNPPase independentemente da presença de íons amônio. A (Na+, K+) ATPase hidrolisou o ATP de acordo com cinética de Michelis-Menten, com KM= 0,16 0,01 mM e V= 116,3 5,6 U/mg, enquanto a modulação da atividade da enzima pelos íons magnésio (V= 111,0 ± 5,4 U/mg e K0,5= 0,54 ± 0,03 mM), sódio (V= 110,6 ± 5,3 U/mg e K0,5= 6,3 ± 0,3 mM), potássio (V= 116,0 ± 5,5 U/mg e K0,5= 1,5 ± 0,1 mM) e amônio (V= 173,3 ± 5,4 U/mg e K0,5= 5,4 ± 0,3 mM) ocorreram através de interações sítio-sítio. Também foi observado que na presença de concentrações crescentes de ions amonio, a estimulação da atividade (Na+,K+)-ATPase pelo íons potássio acarretou um aumento de 50% na atividade específica da enzima. A ouabaína inibiu cerca de 86% a atividade (Na+,K+)-ATPase com Ki= 74,5 ?M, sugerindo a presença de 14% de fosfatases e/ou outras ATPase contaminantes. Este é o primeiro trabalho onde se observa uma estimulação sinergística da atividade K-fosfatase da (Na+,K+)-ATPase de crustáceo pelos íons potássio e amônio. Os resultados cinéticos obtidos para a (Na+,K+)-ATPase branquial de Callinectes ornatus, analisados em conjunto com os já descritos para outras espécies de crustáceos poderão abrir novas perspectivas em relação ao papel dessa enzima na adaptação fisiológica-bioquímica, bem como para a sobrevivência desses animais em diferentes ambientes. / (Na+, K+)-ATPase present on branchial tissue osmoregulatory crustaceans is an essential component of their osmotic and ionic regulation system. Apparently, this enzyme also have a relevant role in the active excretion de NH4+ through the branchial crustacean tissue. A (Na+, K+) ATPase-rich microsomal fraction was prepared by differential centrifugation from Callinectes ornatus homogenized branchial tissue. The sucrose gradient sucrose centrifugation showed the presence of a single protein peak with ATPase activity, and SDS-PAGE revealed the presence of several proteins bands. The use of the 5 monoclonal antibody, against the ? subunit, revealed the presence of a unique protein band of 110 kDa corresponding to the (Na+, K+) ATPase. (Na+, K+) ATPase hydrolyzed the PNPP (V= 52.0 2.0 U/mg and K0.5= 1.1 0.1 mM) through the site-site interactions (nH= 1.6). The modulation of (Na+, K+) ATPase by magnesium (V= 52.3 1.3 U/mg and K0.5= 1.1 ? 0.05 mM), potassium (V= 51.4 1.5 U/mg and K0.5= 2.3 0.1 mM) and ammonia ions (V= 56.7 2.7 U/mg and K0.5= 9.8 ? 0.4 mM) followed cooperative kinetics. However, sodium ions inhibited PNPPase activity of (Na+, K+)?ATPase with Ki= 1.7 0.1 mM. Ouabain also inhibited up to 80% the total activity PNPPase independent of the presence of ammonium ions. The hydrolysis of ATP by (Na+, K+) ATPase followed Michaelis-Menten kinetics with Km= 0.16 0.01 mM and V= 116.3 5.6 U/mg, while enzyme modulation by magnesium (V= 111.0 5.4 U/mg and K0.5= 0.54 0.03 mM), sodium (V= 110.6 5.3 U/mg and K0.5= 6.3 0.3 mM), potassium (V= 116.0 5.5 U/mg and K0.5= 1.5 ? 0.1 mM) and ammonium ions (V= 173.3 . Interestingly, the stimulation of (Na+, K+)-ATPase activity by potassium ions in the presence of increasing concentration of ammonium ions to K+ resulted in a 50% higher specific activity. Ouabain inhibited approximately 86% the activity (Na+, K+) ATPase with (Ki= 74.5 M), suggesting the presence of about 14% of phosphatases and/or other ATPases. This is the first work showing synergistic stimulation of crustacean (Na+, K+) ATPase by potassium and ammonium ions when PNPP is used a substrate. The results reported herein for Callinectes ornatus branchial (Na+, K+) ATPase might open new perspectives concerning the physiological adaption and the survival of these animals in different environmental.

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