El presente trabajo de investigación es un proyecto de inversión para la creación de una planta piloto para la producción de aceite esencial a partir de la maracuyá (Passiflora Edulis) en el distrito de Motupe para la exportación a Los Ángeles (EEUU). Para la recolección de datos se utilizó una entrevista a profundidad utilizando preguntas claves al Ing. Hugo Pérez Cajo, el cual nos permitió conocer más a profundidad sobre este rubro. Así mismo hemos logrado cumplir con los objetivos planteados como: El análisis estratégico del entorno, estudiar la viabilidad del mercado, técnica, organizacional y por último el análisis económico financiero. Después de un minucioso estudio podemos afirmar que si existe la viabilidad económica y financiera del proyecto, utilizando indicadores como el Van, Tir, análisis de sensibilidad, punto de equilibrio y estados financieros. El estudio de factibilidad se desarrolló en base a diferentes variables de la presente investigación, las mismas que tienen como objetivo principal buscar la viabilidad del presente proyecto, en donde se han desarrollado en base al planteamiento del problema, definición del proyecto, estudios de mercado, estudios técnicos operacionales, estudios demedio ambientales y para finiquitar estudios económicos y financieros en donde se puede determinar mediante el VAN económico de S/. y un TIR de; concluyendo que la creación de la planta piloto es viable en los diferentes escenarios a los cuales hemos sometido a la presente. / Tesis

Orientador: Pedro Roberto Furlani / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T17:24:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zambrosi_FernandoCesarBachiega_D.pdf: 1814584 bytes, checksum: 7fb7915ab0ca3954ebb3e13c634f3fdf (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A restrição ao desenvolvimento das mais variadas culturas agrícolas, devido à deficiência por fósforo (P), é uma condição comum na agricultura brasileira, incluindo a atividade citrícola. Estudos detalhados da nutrição fosfatada podem contribuir para auxiliar no manejo dessas plantas em solos com baixa disponibilidade do nutriente. Desta maneira, foram desenvolvidos quatro experimentos em condições de casa-de-vegetação, utilizando-se como ferramentas: a avaliação da atividade da fosfatase ácida, o fracionamento de P nas folhas, o emprego do radioisótopo 32P para estimativas de absorção e remobilização, medidas de crescimento e eficácia de uso de P, além da avaliação de forma da forma reduzida de P (fosfito, Phi) como fonte do nutriente. Para estes estudos, porta-enxertos cítricos (PE) (limão 'Cravo', citrumelo 'Swingle', tangerinas 'Cleópatra' e 'Sunki', citrange 'Carrizo' e 'Smooth Flat Seville') e combinações copa/porta-enxerto (laranja 'Pêra' sobre tangerina 'Cleópatra' ou limão 'Cravo') foram combinados com variado suprimento e/ou fonte de P. Houve diferenças de crescimento e estado nutricional por P entre os PE, mas todos eles responderam positivamente ao suprimento do nutriente. O limão 'Cravo' foi o PE mais eficiente para a absorção e utilização de P. A atividade da fosfatase ácida nas folhas (AFAF) e nas raízes (AFAR) dos PE foi negativamente correlacionada com os teores de P nesses órgãos. AFAF confirmou a deficiência por P nestas plantas, enquanto que AFAR contribui provavelmente para diferenças na eficiência de absorção de P. As faixas de teores máximos das frações de P nas folhas correspondem à: 1,25-1,32; 0,29-0,50; 0,68-0,83 e 2,5-3,2 g kg-1, para Pi, P-éster, P-ácido nucléico e P-total, respectivamente. A distribuição mais homogênea do fertilizante fosfatado no solo deficiente apresentou potencial para maximizar a absorção do nutriente e respostas de crescimento da laranjeira 'Pêra' enxertada sobre tangerina 'Cleópatra' ou limão 'Cravo'. A planta 'Pêra'/'Cravo' apresentou maior crescimento vegetativo, incluindo o sistema radicular, além de ter sido mais eficiente para absorção e acúmulo de P do que a combinação 'Pêra'/'Cleópatra'. Por outro lado, esta última combinação apresentou maiores taxas de remobilização do nutriente, sendo mais dependente das reservas internas de P para atender a demanda dos novos fluxos de crescimento. Esta constatação esteve de acordo com a maior AFAF das plantas 'Pêra'/'Cleópatra'. As plantas deficientes por P apresentaram maiores taxas e eficiência de absorção do nutriente após o ressuprimento. Houve alta participação do P remobilizado (média de 92%) nos novos fluxos de crescimento, mesmo com o suprimento adequado do nutriente na solução nutritiva. Embora os teores foliares de P-total dos PE citrange 'Carrizo' e 'Smooth Flat Seville' tenham sido incrementados com o uso de fosfito, isto não resultou em ganhos de biomassa vegetal. Desta maneira, o Phi demonstrou não ser uma fonte de P para plantas cítricas, comprometendo o crescimento, nutrição, eficiência e utilização de nutrientes e a assimilação de CO2 / Abstract: The low phosphorus (P) availability is often a growth-limiting to a number of crops growing in Brazil, including citrus plants. Therefore, we expected that studies about P citrus nutrition could be useful to improve the management of these plants at low-P soils. Therefore, four experiments were carried out under greenhouse conditions. As strategy, acid phosphatase activity, P fractions in the leaves, the rate of P uptake and remobilization using 32P isotopic technique, growth parameters and P use efficiency as well as phosphite (a reduced form of P, Phi) as source of P were evaluated. For these studies, citrus rookstocks varieties (CRV, 'Cleopatra' mandarin, 'Rangpur' lime, 'Sunki' mandarin, 'Swingle' citrumelo, 'Carrizo' citrange and 'Smooth Flat Seville') and scion/rootstocks combinations ('Pêra' sweet Orange on 'Cleopatra' mandarin or 'Rangpur' lime) were seleted and combined with P supply and/or source. There were differences on plant growth and P nutrition of citrus rootstocks. But all of them responded positively to phosphorus supply. The 'Rangpur' lime rootstock showed the highest phosphorus uptake and utilization efficiency. Acid phosphate activity in the leaves was negatively related with P concentration and it comproved severe P deficiency of CRV. Differences in APA in the roots might contribute to variation on phosphorus uptake efficiency among CRV. The maximum values of P fractions in the leaves of CRV corresponded to: 1,25-1,32; 0,29-0,50; 0,68-0,83 and 2,5-3,2 g kg-1, for Pi, Péster, P-acid nucleic and P-total, respectively. More homogenous P fertilizer placement in the soil favored nutrient uptake and growth responses of 'Pêra' on 'Cleopatra' and 'Rangpur'. 'Pêra'/'Rangpur' plants growth more (including root system) and were more efficient in P uptake and meeting P requirements than 'Pêra'/'Cleopatra'. This latter scion/rootstock combination showed higher P remobilization and dependence of stored P pools to meet plant's demand. This result is in agreement with the higher APA in the mature leaves of 'Pêra'/'Cleopatra' than in 'Pêra'/'Rangpur'. The rate and phosphorus uptake efficiency were stimulated by P deficiency, while relative remobilization was reduced after P ressuply. Regardless of P avaibility in the nutrient solution, there was elevated contribution of remobilized P (average 92%) in the new shoot growth. Although the total P foliar concentration of 'Carrizo' citrange and 'Smooth Flat Seville' was increased by phosphite, this did not translate into plant growth. Phosphite use was harmful to plant growth, nutrient utilization efficiency and net gás Exchange. So, the use of phosphite did not meet the P requirements by citrus / Doutorado / Biologia Vegetal / Doutor em Biologia Vegetal

Orientador: Paulo Mazzafera / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T23:52:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Purcino_RubiaPadilha_D.pdf: 1224493 bytes, checksum: 875e464b9ac37fd8cf61d27335a57537 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Xylella fastidiosa (Xf) é uma bactéria fitopatogênica que se desenvolve exclusivamente no xilema de uma grande variedade de plantas cultivadas. Na cultura do citros essa bactéria é conhecida como o agente causal da clorose variega do citros (CVC), doença responsável por prejuízos econômicos consideráveis, desde a década de 80. Embora muitos trabalhos tenham sido realizados com essa bactéria, pouco se conhece sobre o mecanismo de infecção, a composição do meio em que ela se desenvolve, o xilema e o desenvolvimento dos sintomas. Grande parte dos estudos sobre a nutrição da bactéria são realizados in vitro, o que pode não caracterizar a interação entre a bactéria e xilema. Este trabalho é resultado de um subprojeto do genoma funcional, cujo principal objetivo é a caracterização da constituição da seiva do xilema, na tentativa de melhor compreender a nutrição da bactéria e o desenvolvimento da doença. Ao longo da realização dos experimentos e análises dos resultados foram surgindo questões que levaram a necessidade do melhor entendimento do metabolismo do nitrogênio em plantas com CVC. Por isso os resultados gerados foram agrupados em dois capítulos, onde no primeiro são encontrados resultados da caracterização qualitativa e quantitativa das principais substâncias nitrogenadas presentes na seiva do xilema de plantas de citros com CVC, bem como atividade das principais enzimas envolvidas no metabolismo do nitrogênio. A atividade da Redutase do nitrato (RN) nas folhas não sofreu alteração em plantas doentes (PD), porém a atividade da Glutamina Sintetase (GS) foi significativamente maior nos extratos das folhas dessas plantas. Embora a concentração de aminoácidos tenha sido suavemente maior na seiva do xilema de PD, caiu drasticamente no extrato de folhas dessas plantas. O teor de proteínas solúveis também foi menor na seiva do xilema e no extrato de folhas de PD. PD e Planta Sadia (PS) apresentaram o mesmo perfil de aminoácidos em HPLC, contudo em proporções bem diferentes, principalmente dos aminoácidos ASN, GLN e ARG. A poliamina putrescina foi identificada em grande concentração somente em PD. Estes resultados demonstram que PD apresentam alterações no metabolismo de compostos nitrogenados provavelmente em resposta a mudanças na interação dos processos de absorção, assimilação e redistribuirão do nitrogênio. No segundo capítulo são agrupados os dados das análises do metabolismo de açúcares, ácidos orgânicos e investigação das alterações no metabolismo da parede celular. A seiva de PD apresenta menor concentração de glicose, acompanhada de frutose e glicose. Grande quantidade de ácido cítrico também foi determinada nessas plantas. Baseados nesses resultados cultivamos a bactéria em meios com diferentes fontes de carbono e verificamos que o meios que permitiram maior crescimento foram aqueles que a fonte de carbono utilizada foi glicose (I glL), sacarose combinada com citrato nas concentrações de 3g/L de cada fonte de cardono, e citrato na concentração de 3 g/L, o que demonstra que a composição química da seiva do xilema é importante tanto para o processo de agregação como para a formação do biofilme. A infecção com Xi também promoveu modificações nas paredes celulares dos pecíolos. Verificamos por imunocitoquímica em microscópio confocal utilizando os anticorpos 11M 5 e JIM 7, diferenças entre PD e PS nos padrões de esterificação da fração pectina, assim como encontramos no fracionamento da parede celular alterações na composição dos principais carboidratos que constituem a fração hemicelulose / Abstract: Xylellafastidiosa (Xj) is a fastidious bacterium which grows exclusively in the xylem of several plants. In citrus the disease caused by Xf is known as "clorose variegada do citros" (CVC), being responsible for marked loss of productivity since the 80s. Although a meaningful number of reports have been published in the literature about Xf, little is know about the mechanisms controlling infection, the biochemical composition of the xylem fluid where the bacteria develops and how the disease symptoms develop. Most of the studies on the nutritional requirements by the bacteria were carried out with artificial media in vitro, what may not be the exact situation in the xylem. The aim of this thesis was to characterize the xylem sap composition of citrus plants in order to better understand nutritional aspects of the bacteria and this can influence the disease development. During the experiments new questions arose and focus was given to the nitrogen metabolism of citrus plants infected with Cvc. Therefore, the thesis has two chapters. The first chapter contains results on the qualitative and quantitative characterization of the xylem sap of health and diseased plants as well as the activity of enzymes ofthe nitrogen metabolism in plants. The activity ofNitrate reductase (NR) in leaves did not change in diseased plant (PD), however, the activity of Glutamine synthethase (GS) was significantly higher in these leaves. Although amino acids concentration was slightly higher in the sap of diseased plants the leveI dropped drastically in the leaves. The protein contents were lower in the sap and in leaves of diseased plants. Diseased and health plants showed the same amino acid profile in HPLC, but different proportions were observed among amino acids, mainly for the amino acids ASN, GLN and ARG. The polyamine putrescine was found in high concentrations only in diseased plants. These results showed that significant changes take place in the nitrogen metabolism of diseased plants, probably as a response to the alterations in the absorption, assimilation and distribution of nitrogen in the plant. In the second chapter the data on carbohydrates, organic acids and cell wall are presented. The xylem sap of diseased plants showed lower concentration of glucose than health plants. High amounts of citric acid were also found in diseased plants. This information was used to design artificial media to grow the bacteria and study its nutritional need. Best growth was observed with media containing glucose (l g/L), sucrose plus citrate both at 3g/L, and citrate alone at 3 g/L, indicating that the composition of the sap might play a role both in the bacterial agregation as well as in the biofilm formation. Infection with XI also promoted changes in the cell wall of leaf peduncle of infected plants. Immunocytochemical analysis with confocal microscopy, using the antibodies 11M 5 and 11M 7, showed marked differences between diseased and health plants regarding the pectin esterification. Additionally the hemicelullose fraction was also affected. / Doutorado / Biologia Vegetal / Doutor em Biologia Vegetal

Orientador: Ademar Ribeiro Romeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Economia / Made available in DSpace on 2018-08-07T10:30:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Campos_Richard_M.pdf: 733542 bytes, checksum: 96974fe7875516d9218f09874355ef1a (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A Rede ONSA foi constituída tendo entre seus objetivos a geração de conhecimento novo, complexo e multidisciplinar. Para alcançar tais objetivos, a FAPESP optou por um setor que, por um lado, tem grande relevância econômica para o país e que, por outro lado, enfrentava um problema técnico-científico essencial, qual seja, a clorose variegada dos citros (CVC). Neste trabalho, procura-se evidenciar que o governo de São Paulo propiciou, por meio daquela agência financiadora, uma retomada mais agressiva da conexão que deve existir entre o sistema de P&D e o setor produtivo. Ao valer-se de uma estrutura de pesquisa ¿em rede¿ e da abordagem de um problema técnico-científico bem definido, a agência permite particularmente o desenvolvimento da área da Biologia Molecular, um dos pilares da moderna biotecnologia / Mestrado / Desenvolvimento Economico, Espaço e Meio Ambiente / Mestre em Desenvolvimento Econômico

Orientadores: Marcos Antonio Machado, Raquel Luciana Boscariol-Camargo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-12T20:37:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Simoes_ThiagoSena_M.pdf: 6491430 bytes, checksum: 1dd8f0cde7283c457f3dfd61e7ff367d (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Huanglongbing (HLB), também conhecido como greening é uma das mais importantes doenças dos citros no mundo e é causada pela bactéria Candidatus Liberibacter spp. Esta doença é originária da China e da África, onde estão presentes as variantes Ca. L. asiaticus e Ca. L. africanus, respectivamente. Em 2004, a doença foi encontrada no Brasil onde foi identificada a forma asiática e também uma nova variante denominada Ca. L. americanus. A bactéria Ca.Liberibacter vive e se desenvolve no floema da planta hospedeira, causando amarelecimento do ramo infectado, deformação e queda do fruto. Até o momento não foi possível o cultivo em meio de cultura de Ca. Liberibacter e muito pouco é conhecido sobre sua biologia. Outra doença importante para a cultura, o cancro cítrico, também é originária do continente asiático, e causa grandes perdas de produção devido à desfolha da planta e a queda precoce de frutos. Seu agente causal, a bactériaXanthomonas axonopodis pv. citri provoca lesões necróticas em folhas, ramos e frutos. Não existem variedades resistentes ao HLB ou ao cancro cítrico, o que torna necessários estudos buscando fontes alternativas de resistência às doenças. Uma das possibilidades para se obter resistência é o uso de plantas geneticamente modificadas com genes que expressam peptídeos antimicrobianos ou que atuem no mecanismo de ativação da resposta das plantas às doenças. Os genes atacinaA e Xa21 já foram empregados em construções genéticas para variedades de laranjas doces, sendo que ambos apresentaram resistência a patógenos bacterianos em outras culturas, e diminuição no número de lesões causadas pelo patógeno X axonopodis em: I plantas transgênicas de laranja doce. Outro gene interessante, o Nprl, é um regulador que atua 0(1, indução de respostas de defesa da planta contra patógenos. Em outras culturas, a superexpressão de Npr 1 culturas promoveu aumento da resistência a fungos e bactérias. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a resposta de plantas de laranjas geneticamente modificadas com estes três genes, quando infectadas com Ca. Liberibacter, e a resposta das plantas contendo o gene AtNpr 1 quando inoculadas com X axonopodis. O monitoramento da resposta à inoculação com Ca. Liberibacter foi realizado através da avaliação da presença de sintomas de HLB, e pela quantificação da bactéria nos tecidos do floema por meio de qPCR, utilizando-se a região ribossomal 16S bacteriana, previamente caracterizada. Já as plantas inoculadas com a bactéria causadora do cancro cítrico foram analisadas através da expressão de PR-proteínas, da quantificação do desenvolvimento da população bacteriana por meio de curva de crescimento, e pela análise visual de sintomas. A bactéria Ca. Liberibacter foi capaz de se multiplicar em todos os eventos de transformação analisados, porém quatro deles (transformados com o gene AtNprl) não manifestaram sintoma da doença. Duas plantas desta construção também apresentaram redução no número e tamanho das lesões causadas por X axonopodis, indicando uma possível tolerância desta planta à bactéria. / Abstract: Huanglongbing (HLB), also known as greening, is the world most important citrus disease and it is caused by the bacterium Candidatus Liberibacter spp. This disease was originated from China and Africa, where were discovered the variants Ca. L. asiaticus and Ca. L. africanus, respectively. In 2004, the disease was detected in Brazil, where the variants asiaticus and a new one called americanus were identified. The Ca. Liberibacter bacteria inhabit phloem vessels of host plants, causing yellowing of infected branches, and fruits abscission. At the moment, it was not possible to cultivate Ca. Liberibacter, and very little is known about its biology. Another important disease of citrus, the citrus canker, is also originated from Asian continent and causes huge damages to citrus production because of leaf drop and prematurely falI of fruits. Its causal agent, the bacterium Xanthomonas axonopodis pv. citri, causes necrotic lesions in leaves, branches and fruits. There is no varietal resistance to HLB ar citrus canker, and it is necessary to develop studies in order to achieve altemative resistance sources to these diseases. One possibility to obtain resistance is the use of genetically modified plants expressing antimicrobial peptides genes, or expressing genes that act in theplant defense response machinery. The genes attacinA and Xa21 were used in genetic constructions for sweet orange varieties, and both showed resistarice to bacterial pathogens in other crops, with small number of lesions caused by X axonopodis in transgenic sweet orange plants. Another interesting gene, the Nprl, is a regulator that acts in the induction of plant defense response against pathogens. 1n other crops, the Npr 1 super-expression caused high leveI of resistance to bacterial and fungal pathogens. The goal ofthe present study was to evaluate the response of genetically modified sweet orange plants with these three genes, after infection of Ca. Liberibacter, and the response of plants containing the AtNprl gene, after X axonopodis inoculation. The response to Ca. Liberibacter infection was analyzed by the evaluation of HLB symptoms and by the quantification of phloem-associated bacteria by qPCR based on a previously characterized Ca. Liberibacter 168 ribosomal region. PIants inoculated with the causal agent of citrus canker were analyzed by RT-PCR to detect the expression of PR-proteins. The quantification of bacterial population was deveIoped using a growth curve and by visual analysis of symptoms. The bacterium Ca. Liberibacter grown in alI the transformation events analyzed, however four of them (transformed with the AtNprl gene) did not develop disease symptoms. Also, two. plants of this construction showed reduction in the number and size of lesions caused by X axonopodis, indicating a possible induction of plant tolerance to citrus canker. / Mestrado / Genetica Vegetal e Melhoramento / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Marcelo Carnier Dornelas / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T06:53:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Araujo_Pedro_M.pdf: 2104641 bytes, checksum: 7acaf538c544b73058eb3bbaf4bf0ee5 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Na planta modelo Arabidopsis thaliana o desenvolvimento do fruto foi amplamente estudado e uma série de genes foram relacionados com a ontogênese e o amadurecimento. A identidade dos tecidos dos frutos secos de Arabidopsis é determinada principalmente pelos genes FRUITIFULL (FUL) e SHATTERPROOF (SHP), pertencentes à família multigênica MADS-box. Homólogos a estes genes foram encontrados em frutos carnosos, no entanto a expressão destes homólogos e o papel biológico dos mesmos durante o desenvolvimento dos frutos carnosos são desconhecidos. No banco de dados de genes expressos em Citrus (CitEST), sequências homólogas a FUL e SHP foram encontradas. Uma vez que os frutos de Citrus são carnosos e não apresentam as mesmas estruturas dos frutos de Arabidopsis, decidiu-se caracterizar detalhadamente o desenvolvimento dos frutos em Citrus sinensis e Citrus reticulata e estudar as possíveis funções dos homólogos de FUL e SHP durante o desenvolvimento dos frutos em C. sinensis. Técnicas de microscopia óptica e eletrônica de varredura foram utilizadas para caracterização do desenvolvimento dos frutos. Resultados de RT-PCR mostraram a expressão diferencial dos homólogos de Citrus de FUL e SHP em frutos maduros. Os resultados de hibridização in situ mostraram que o homólogo de FUL expressou-se diferencialmente durante o desenvolvimento do fruto, principalmente nas células secretoras das cavidades oleíferas e das vesículas de suco, nos tecidos do epicarpo, mesocarpo e endocarpo. O homólogo de SHP também se expressou no epicarpo, mesocarpo, endocarpo e nas vesículas de suco. Os resultados obtidos poderão auxiliar num melhor entendimento do desenvolvimento do fruto em Citrus. / Abstract: Fruit development is extensively studied in the model plant Arabidopsis thaliana and a number of genes is being related to the control of fruit ontogenesis and ripening. The FRUITFULL (FUL) and SHATTERPROOF (SHP) genes, which belong to the MADS-box multigenic family are, in large part, responsible for determining the identity of the Arabidopsis dry fruit tissues. Homologs to these genes have been described for species harbouring fleshy fruits, but the expression patterns and biological functions for these genes during fruit development are unknown. Sequences showing similarity to FUL and SHP were found at the database of the CitEST Project (expressed sequence tags in Citrus). Since Citrus fruits are fleshy and do not have the same structures of the Arabidopsis fruits, we decided to characterize in detail the development of fruits in Citrus sinensis and Citrus reticulata and to study the possible functions of FUL and SHP homologues during the development of C. sinensis fruits. These sequences were characterized by bioinformatic's tools and phylogenetic analysis. The use of light and scanning electron microscopy (SEM) techniques allowed the morpho-anatomical characterization of Citrus fruit development. The RT-PCR results showed a preferential expression of FUL and SHP in developing fruits. The in situ hybridization results showed that the C. sinensis homolog of the FUL gene is differentially expressed in the secretory cells of the oil cavity as well as in the juice vesicles, epicarp, mesocarp and endocarp tissues. The homolog of the SHP gene also expressed in epicarp, mesocarp, endocarp and juice vesicles. All the results taken together might contribute to a better understanding of the processes involved in Citrus fruit development. / Mestrado / Mestre em Biologia Vegetal

Orientador: Gabriela Alves Macedo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-25T19:00:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MadeiraJunior_JoseValdo_D.pdf: 997594 bytes, checksum: 9fe380b24aeba39fd18427a9159f14e1 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A tanase, também conhecida como tanino acil hidrolase (EC 3.1.1.20), catalisa principalmente a hidrólise de ligações ésteres de taninos hidrolisáveis, liberando ácido gálico e glicose. Esta enzima tem grande potencial nas indústrias, química, farmacêutica e alimentícia. Para a produção da tanase, a fermentação em estado sólido apresenta vantagens sob a submersa, como maior produção enzimática de forma extracelular, maior produtividade, maior estabilidade de pH e temperatura, e menor custo do produto. Este menor custo se dá, entre outros motivos, pelo uso de resíduos agroindustriais e menor quantidade de água no meio. O grupo de pesquisa do laboratório de Bioquímica de Alimentos (DCA ¿ FEA ¿ UNICAMP) iniciou um estudou da produção da tanase em resíduo de Citrus. Os resultados obtidos mostraram grande potencial da produção enzimática, e simultâneo aumento do potencial antioxidante no resíduo fermentado, que por seguintes trabalhos foram constatados que este potencial se dava pelo aumento da concentração de compostos fenólicos bioativos. Os compostos fenólicos têm sido foco em pesquisas pela sua ação no metabolismo humano, agindo na prevenção de doenças crônicas, sendo portanto, importantes antioxidantes na indústria de alimentos. Com tudo, os processos de obtenção são por síntese química ou extração a partir de fontes vegetais, nos quais são usados ácidos, bases e solventes orgânicos. Estes processos geram grande quantidade de resíduos, degradam os compostos de interesse e diminuem o rendimento. Uma alternativa para minimizar estes problemas são os processos ambientalmente amigáveis, que podem ser por fermentação ou extração enzimática. Este projeto teve como principal objetivo a produção da tanase e compostos fenólicos pelo fungo Paecilomyces variotii, utilizando como substrato resíduo de frutas cítricas. Primeiramente foi realizada a produção da tanase em diferentes condições do processo de fermentação em estado sólido, como granulometria do substrato, hidratação do substrato, adição de indutores, fonte de nitrogênio, temperatura de incubação, entre outros. Em seguida, esta enzima foi semi-purificada e caracterizada bioquimicamente. Após esta etapa, foram realizados dois processos de obtenção de compostos fenólicos, via fermentativa e enzimática: para o primeiro processo foram avaliadas as condições da temperatura de incubação, hidratação do substrato e granulometria do resíduo; para o segundo, as condições testadas foram as atividades enzimáticas da pectinase, celulase e tanase (produzida neste trabalho). Após os processos de biotransformação, os extratos de compostos fenólicos bioativos obtidos foram avaliados quanto sua atividade antioxidante e anti-proliferação celular tumoral do tipo cólon-retal (células HT29) / Abstract: Tannase, also known as tannin acyl hydrolase (EC 3.1.1.20) catalyzes the hydrolysis of ester bonds of hydrolysable tannins, releasing gallic acid and glucose. This enzyme has great potential in chemical, pharmaceutical and food industries. For tannase production, the solid-state fermentation has advantages over submerged, such as great production in extracellular enzyme form, higher productivity, greater stability of pH and temperature, and lower product cost. This low cost occurs, among other reasons, by the use of agro-industrial residues and low water added in the medium. The research group of Laboratory of Food Biochemistry (DCA - FEA - UNICAMP) initiated a studied of tannase production in Citrus residues. The results showed great potential of enzyme production, and simultaneous increased the antioxidant potential in fermented Citrus residue, which others works published that potential was occurred by increasing the concentration of bioactive phenolic compounds. Phenolic compounds have been the focus in research for its action in human metabolism, acting in the prevention of chronic diseases, and therefore, important antioxidants in the food industry. However, the processes of obtaintion are by chemical synthesis or extraction from plant sources, which acids, bases and organic solvents are used. These processes generate large amounts of waste, degrade the compounds of interest and reduce the yield. An alternative to minimize these problems, environmentally friendly processes may be realized, such as by fermentation or enzymatic extraction. This project aimed to the production of tannase and phenolic compounds by the fungus Paecilomyces variotii, using as substrate Citrus residues. Firstly, the tannase production was carried out under different conditions of the solid-state fermentation process, such as particle substrate size, moisture of substrate, inductor compounds, nitrogen source, temperature of incubation, others. After that, the enzyme produced was semi-purified and biochemically characterized. The second part, two biotransformation processes for phenolic compounds obtainment were carried out, by fermentation and enzymatic reaction: for fermentation process, temperature of incubation, moisture of substrate and substrate particle size were evaluated; for enzymatic process, the conditions tested were the enzymatic activity of the pectinase, cellulase and tannase (produced in this work). After the biotransformation processes, the extracts of Citrus residues biotransformed were evaluated for antioxidant activity and tumor cell anti-proliferation type colorectal (HT29 cells) / Doutorado / Ciência de Alimentos / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientadores: Roberto Testezlaf, Edson Eiji Matsura / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Agrícola / Made available in DSpace on 2018-08-23T17:09:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferrarezi_RhuanitoSoranz_D.pdf: 5899539 bytes, checksum: e34ae1ed734a1ae34008af248708220d (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A subirrigação tem potencial para reduzir as perdas de água e nutrientes em sistemas de produção de mudas cítricas por permitir a recirculação e o reuso da solução nutritiva (SN), promover economia de fertilizantes e reduzir o seu descarte inadequado no meio ambiente. O objetivo desse experimento foi estabelecer o manejo hídrico e nutricional para produção de porta-enxertos (PE) de limão Cravo em tubetes, na fase de sementeira, usando mesas de subirrigação automatizadas por sensores capacitivos para monitoramento da umidade e controle da irrigação. Os tratamentos testados foram quatro conteúdos volumétricos de água (CVA) do substrato para acionamento da irrigação (0,12; 0,24; 0,36 e 0,48 m3 m-3), três concentrações de nutrientes na SN (25%, 50% e 75% da recomendação de adubação para PE em tubetes) e um tratamento adicional (sistema de produção do viveirista, com irrigação manual por chuveiro), arranjados no delineamento experimental inteiramente casualizado em esquema fatorial 4×3+1, com três repetições. A automação foi realizada conectando-se sensores capacitivos a um sistema de controle computacional formado por data logger, multiplexador e controladores de saídas, que acionavam bombas submersas de irrigação de acordo com valores de CVA estabelecidos como tratamentos. Ao longo do período experimental, houve monitoramento do CVA e do número de acionamentos da irrigação. Semanalmente, realizou-se a reposição e medição do volume total de SN aplicado, determinação de pH e condutividade elétrica (CE) dos substratos, avaliação da presença de pragas e doenças e do índice de área foliar (IAF). Aos 0, 30, 60 e 90 dias após o início do experimento, realizaram-se amostragens para análises de macro e micronutrientes nas plantas, substratos e SN, e determinação da altura das plantas, diâmetro de caule, massa seca de parte aérea e das raízes e área foliar total (AFT). Ao final do experimento, realizou-se análise fitopatológica para detecção de Phytophthora spp. no substrato e na SN, avaliação da diagnose nutricional visual e das perdas na produção, aparecimento de algas, determinação nas folhas das plantas da concentração intracelular de CO2 (Ci), transpiração (E), condutância estomática (gs), fotossíntese líquida (A) e da eficiência do uso da água (E.U.A.). Os resultados indicaram que os sensores foram eficientes no monitoramento da umidade e controle da subirrigação, sendo que os tratamentos com maior valor de CVA apresentaram maior umidade e número de acionamentos da irrigação (p < 0,0001). Houve aumento de aproximadamente 100% no volume total de SN aplicada à medida que se elevaram os valores de CVA a cada 0,12 m3 m-3 (p < 0,0001), decréscimo do pH e aumento da CE no substrato dos tratamentos com maior concentração de SN e maior CVA para acionamento da irrigação (p < 0,0001). As plantas apresentaram aumentos significativos do IAF, altura, diâmetro de caule, massa seca de parte aérea e das raízes e área foliar total (AFT) (p < 0,0001) à medida que os níveis de SN e CVA aumentaram. Houve resposta significativa aos diferentes tratamentos de SN e CVA de acionamento para concentração de nutrientes no substrato e na SN dos reservatórios de 121 L e para o teor de nutrientes na parte aérea e sistema radicular. Os tratamentos com CVA de 0,12 m3 m-3 promoveram a morte de diversas plantas por estresse hídrico. Os valores de Ci, E, gs, A e E.U.A. foram significativamente maiores nas plantas com maiores concentrações de SN e valores de CVA (p < 0,001). O tratamento com a concentração de SN 50% e CVA de 0,48 m3 m-3 promoveu maior crescimento em altura, diâmetro, massa seca e área foliar total dos PE de Limão Cravo. A subirrigação permitiu a antecipação no período de transplantio para realização da enxertia, possibilitando um ciclo de cultivo extra no viveiro por ano. O período de retorno da substituição do sistema convencional de irrigação manual por chuveiros obtido somente com o valor economizado pela redução do uso de mão de obra, redução da concentração de SN para 50% e eliminação do descarte de fertilizantes foi de 5,6 anos / Abstract: Subirrigation has the potential to reduce water and nutrients losses in citrus seedlings production systems due to the nutrient solution (NS) recirculation and reuse, promoting fertilizer savings and the reduction of its improper disposal into the environment. The objective of this study was to establish the water and nutritional management for Rangpur lime rootstock production in cone-tainers at the sowing stage, using subirrigation benches automated by capacitance sensors to monitor moisture and control irrigation. The applied treatments were four substrate volumetric water content (VWC) to trigger irrigation (0.12, 0.24, 0.36 and 0.48 m3 m-3), three nutrient concentrations of the NS (25%, 50% and 75% of the fertilizer recommendation for citrus rootstocks production) and an additional treatment (nursery production system with manual irrigation using a shower), in a completely randomized experimental design with three replications in a 4×3+1 factorial. Automation was accomplished by a capacitance sensor connected to a data logger, a multiplexer and relay drivers, which were plugged to submersible pumps. The irrigation was performed according to the VWC thresholds. Throughout the experiment, we monitored VWC and the number of irrigations. Weekly, we replenished the tanks and measured the total volume of NS applied, and determined the substrate pH and electric conductivity (EC), the presence of pests and diseases and the leaf area index (LAI). At 0, 30, 60 and 90 days after the experiment starting, we sampled plants, substrates and NS for macro and micronutrients analyzes, and determined plant height, stem diameter, shoots and roots dry mass and total leaf area (LA). At the end of the experiment, we performed phytopathological analysis to detect Phytophthora spp. in the substrate and NS, diagnosed visual symptoms of nutritional deficit, assessed the production losses, counted the number of benches contaminated with algae, and determined the leaf intracellular concentration of CO2 (Ci), transpiration (E), stomatal conductance (gs), net photosynthesis (A) and water use efficiency (WUE). The results indicated that the sensors were effective to monitoring the substrate moisture and controlling subirrigation, and the treatments with highest VWC had higher moisture and number of irrigations over time (p < 0.0001). There was an increase of approximately 100% in the total volume of water applied as VWC values increased 0.12 m3 m-3 (p < 0.0001), a decrease in substrate pH and an increase in the substrate EC in treatments with higher substrate concentration of NS and higher VWC to trigger irrigation (p < 0.0001). The plants showed significant increases of LAI, height, stem diameter, shoots and roots dry mass and LA as the levels of NS and VWC increased (p < 0.0001). There were significant responses to different treatments of NS and VWC to trigger irrigation in the concentration of nutrients in the substrate and in the NS of 121 L tanks, and in the nutrient content in shoots and roots. Treatments with VWC of 0.12 m3 m-3 promoted the death of several plants by drought. The values of Ci, E, gs, A and WUE were significantly higher in plants with higher concentrations of NS and VWC thresholds (p < 0.001). Treatment with NS concentration of 50% and VWC of 0.48 m3 m-3 promoted higher plant height, stem diameter, dry mass, and total leaf area of Rangpur lime rootstocks. Subirrigation permitted the anticipation of transplant for grafting, allowing another cultivation cycle in the nursery during the year. The payback period for the replacement of the manual overhead system by subirrigation only with the savings obtained for the labor elimination to perform irrigation, the reduction in the NS concentration of 50%, and the elimination of the fertilizer disposal was 5.6 years / Doutorado / Agua e Solo / Doutor em Engenharia Agrícola

Orientadores: Marcos Antonio Machado, Marcio Alves Ferreira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T12:49:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mafra_ValeriaSiqueira_D.pdf: 24593212 bytes, checksum: 99883266609f22224577609d713195c0 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O desenvolvimento floral envolve uma rede complexa de genes que agem no meristema apical para especificar a identidade do meristema floral e, mais adiante, a identidade de órgãos florais. Outros genes controlando a simetria e polaridade dos órgãos, assim como a influência de giberelinas e auxinas, desempenham um papel importante no estabelecimento do tamanho final e arquitetura da flor. Este trabalho propôs avaliar as alterações no transcriptoma do meristema durante a indução e diferenciação floral e em diferentes fases do desenvolvimento do botão floral em laranja doce. Para isto, foi construído um chip de microarranjo de citros contendo cerca de 32 mil unigenes de laranja doce, presentes no banco de dados CitEST. Para se avaliar o perfil global de expresssão, foram coletadas gemas em dois estágios de desenvolvimento, quatro estágios de desenvolvimento do botão floral e flores abertas. As análises estatísticas foram feitas por meio da comparação 2x2, considerando um dado estágio em relação ao estágio anterior. Foram encontrados 3.590 unigenes nãoredundantes com diferença de expressão em pelo menos uma das comparações e a análise de enriquecimento de ontologias (GSEA) definiu os processos biológicos mais representativos. Foram identificados vários unigenes de citros envolvidos com a sinalização do florescimento, regulação e morfogênese de órgãos florais. A validação por PCR em tempo real (RT-qPCR) foi feita com 29 genes candidatos e o perfil de expressão mostrou a mesma tendência do microarranjo. Para normalizar o nível de expressão dos genes alvo no RT-qPCR, foram usados os normalizadores GAPC2 e SAND. Esses genes foram selecionados como bons genes de referência em uma avaliação sistemática comparando a estabilidade de expressão de 15 genes em diferentes condições experimentais . As discussões sobre o possível papel dos genes e vias na regulação do desenvolvimento floral em citros são apresentadas. Uma vez que vários reguladores chave do florescimento são proteínas da família MADS-box, foi proposto identificar os genes MADS-box nos genomas de laranja doce e Clementina e avaliar o relacionamento filogenético entre o MADS-box de citros e Arabidopsis. As análises dos genomas de laranja doce e Clementina revelaram 83 e 92 genes MADS-box, respectivamente. Os MADS-box tipo II de citros foram distribuídos dentre as sub-famílias de MIKCc e MIKC*, enquanto que os genes do tipo I em geral não agruparam com os MADS-box de Arabidopsis. Este estudo espera obter uma maior compreensão sobre os eventos moleculares relacionados com o florescimento de citros e fornecer as bases para análises funcionais para descobrir o papel desses genes / Abstract: Flower development involves a complex gene network that acts in the shoot apical meristem to specify the floral meristem identity and, later, to determine the floral organ identity. Other genes controlling symmetry and polarity of floral organs, as well as the influence of gibberellins and auxins, play important roles in establishing the final size and architecture of the flower. This work aimed to evaluate changes in the meristem's transcriptome during floral induction and differentiation, and in different stages of flower bud development in sweet orange. For this purpose, we built a citrus microarray chip containing about 32,000 unique assemblies (unigenes) of sweet orange, present in the CitEST database. To assess the global expression profile, we collected buds at two developmental stages, bud flowers at four stages and open flowers. Statistical analyses were performed in a 2x2 comparison, taking into account a given developmental stage compared to the stage before. It was found 3,590 nonredundant unigenes that were differentially expressed at least one comparison and a Gene Set Enrichment Analysis defined the most representative biological processess. Several citrus unigenes differentially modulated involved with flowering signaling, regulation and floral organs morphogenesis were identified. Validation by real time PCR (RT-qPCR) was performed to 29 candidate genes and the expression profile showed the same tendency of microarray. To normalize the expression level of the target genes, we used GAPC2 and SAND reference genes. These genes were selected as good reference genes in a systematic evaluation comparing the expression stability of 15 genes in different experimental conditions. Discussions about the possible role of the genes and pathways in the regulation of citrus flower development are presented. Since several key regulators of flowering are proteins belonging the MADS-box family, we proposed to identify MADS-box genes in the sweet orange and Clementine genomes and to evaluate the phylogenetic relationship between citrus and Arabidopsis MADS-box genes. Analysis of the sweet orange and mandarin genomes revealed 76 and 91 MADS-box genes, respectively. Type II MADS-box genes of citrus were grouped into MIKCc and MIKC* sub-families whereas tipo I MADS-box genes of citrus and Arabidopsis were grouped in separated clades. This work will help in the understanding of the genetic events related to citrus flowering and provide the basis for functional analyses to uncover the role of these genes / Doutorado / Genetica Vegetal e Melhoramento / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Memoria para optar al título profesional de Ingeniero Agrónomo Mención: Sanidad Vegetal / Tylenchulus semipenetrans es uno de los factores que más incide en la disminución de la producción de los cítricos. El presente estudio tuvo como objetivo general evaluar el efecto de Quitosano y de la proteína Harpin en el control del nematodo de los cítricos, Tylenchulus semipenetrans. El ensayo se realizó en la localidad de Panquehue, ubicada en la V Región, en un huerto de limoneros de 12 años de edad, variedad Eureka, injertado sobre Citrus macrophylla. Los tratamientos consistieron en distintas dosis y parcializaciones de Quitosano y de la proteína Harpin además de la aplicación de estos junto con el nematicida tradicional Fenamiphos. En total se realizaron 9 tratamientos dentro de los cuales se incluyó un tratamiento de control (Fenamiphos) y un testigo absoluto. El diseño experimental correspondió a bloques completos al azar con 5 repeticiones para cada tratamiento. Se evaluaron las fluctuaciones poblacionales del segundo estado juvenil de Tylenchulus semipenetrans a los 30, 60 y 90 días desde el inicio del ensayo. Además se evaluaron algunos parámetros de la parte aérea de las plantas. Los resultados obtenidos fueron analizados mediante ANDEVA y las medias fueron posteriormente separadas con el Test de Tukey (p≤0,05). Se detectaron diferencias estadísticamente significativas en el parámetro de nivel poblacional para los tratamientos con Fenamiphos y su mezcla con los elicitores. Con respecto a los parámetros de vigor evaluados, no se registraron diferencias estadísticas para ninguno de los tratamientos, así como tampoco, sobre la población de nematodos no fitoparásitos. / Tylenchulus semipenetrans is one of the elements affecting the growth of citrus production. The aim of this study was to evaluate the effect of Chitosan and the Harpin protein on the control of the citrus nematode, Tylenchulus semipenetrans. The study was carried out in the locality of Panquehue, region V, in an orchard of 12 years old lemon trees, variety Eureka, grafted on Citrus macrophylla. The treatments consisted of different rates of Chitosan and the Harpin protein along with mixtures with Fenamiphos. The treatments included a chemical control (Fenamiphos) and one absolute control. The experiment was a randomized blocks design with 9 treatments and 5 replications. The population of second stage juveniles of the nematode was determined at 30, 60 and 90 days since the start of the trial. Besides it was evaluated some parameters of growth of the plants. The evaluations were compared through of ANDEVA and subsequently they were separated with the Tukey test (p≤0,05). Statistically significant differences in the parameters of population for the treatments existed only with Fenamiphos and their combination with the elicitors, which alone did not produced any effect in decrease populations. With regard to the parameters of growth of plants, they did not present significant differences.