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CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A doenÃa de Parkinson (DP) à uma desordem neurodegenerativa caracterizada pela destruiÃÃo dos neurÃnios nigroestriatais dopaminÃrgicos. O tratamento atual à apenas sintomÃtico e, atà o presente momento, nÃo existem drogas capazes de inibir a degeneraÃÃo neuronal. Assim à grande a procura por agentes neuroprotetores que possam impedir ou retardar a progressÃo desta doenÃa. A Camellia sinensis à uma espÃcie da famÃlia Theaceae, popularmente conhecida como chÃ-verde (CV). VÃrios estudos tÃm demonstrado os efeitos benÃficos desta planta e de seus princÃpios bioativos contra doenÃas neurodegenerativas. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito neuroprotetor do extrato padronizado do chÃ-verde e de suas catequinas, epicatequina (EC) e epigalocatequina 3-galato (EGCG), no modelo de DP induzida por 6-OHDA em ratos, bem como estudar o efeito do CV em modelos de inflamaÃÃo e nocicepÃÃo. Os animais (ratos Wistar machos, 180-250 g) foram tratados por via oral com CV (25 ou 50 mg/kg), catequinas (EC ou EGCG, na dose de 10 mg/kg), a associaÃÃo de CV (25 mg/kg) + L-DOPA (25 mg/kg) e com L-DOPA sozinha (nas doses de 25 ou 50 mg/kg) durante 14 dias consecutivos; os tratamentos foram iniciados 1h antes da lesÃo estriatal unilateral por 6-OHDA (24 Âg/2ÂL). Nos testes comportamentais, os resultados mostraram que houve um aumento significativo do nÃmero de rotaÃÃes induzidas por apomorfina, diminuiÃÃo da atividade locomotora no teste do campo aberto, aumento do tempo de imobilidade no teste no nado forÃado, aumento do tempo de encontro da plataforma no teste do labirinto aquÃtico e aumento do nÃmero de quedas no teste do rota rod nos animais lesionados com 6-OHDA, em comparaÃÃo com os animais falso-operados. Essas modificaÃÃes foram, em parte ou totalmente, revertidas apÃs os tratamentos com CV, CV + L-DOPA, EC, EGCG e L-DOPA sozinha. A 6-OHDA provocou morte neuronal, evidenciada pela reduÃÃo dos nÃveis de dopamina e metabolitos (DOPAC e HVA) no estriado direito lesionado quando comparado com o estriado esquerdo nÃo-lesionado (contralateral). Essa depleÃÃo foi significativamente atenuada nos animais lesionados e tratados com CV, L-DOPA, EC, EGCG e associaÃÃo CV 25 + L-DOPA 25; estas mesmas drogas diminuÃram os nÃveis de TBARS (indicador de peroxidaÃÃo lipÃdica) e nitrito/nitrato (indicador de estresse oxidativo) no estriado de ratos submetidos a lesÃo estriatal por 6-OHDA. Experimentos in vitro demonstraram que o CV (0,1-100 Âg/Âl) apresentou um forte efeito antioxidante, ao reduzir a produÃÃo de substÃncias oxidantes em neutrÃfilos humanos estimulados por PMA. Na coloraÃÃo de Nissl, observou-se que nos animais lesionados e tratados com CV, EGCG e CV + L-DOPA houve uma preservaÃÃo dos neurÃnios hipocampais. Os tratamentos com CV e CV+L-DOPA aumentaram a imunorreatividade para TH e diminuÃram a imunomarcaÃÃo para COX-2 no estriado, bem como o CV e EGCG atenuaram a marcaÃÃo para iNOS no hipocampo dos animais tratados, em relaÃÃo ao grupo controle. Observou-se que o CV potencializou os efeitos da L-DOPA, evidenciando um possÃvel efeito sinÃrgico entre essas drogas. Em outra etapa do estudo, avaliou-se a atividade anti-inflamatÃria/antinociceptiva do CV. Assim, no modelo de edema de pata, induzido por carragenina ou dextrano, verificou-se uma diminuiÃÃo do volume do edema da pata dos ratos, apÃs tratamento com CV, em relaÃÃo aos do grupo controle (tratado apenas com Ãgua destilada). O CV produziu efeito antinociceptivo, nos testes da formalina e das contorÃÃes abdominais, induzidas por Ãcido acÃtico, como tambÃm nos testes da placa quente e de Hargreaves, possivelmente atravÃs da ativaÃÃo de receptores opioides e da reduÃÃo do processo inflamatÃrio. Nestes testes de nocicepÃÃo e inflamaÃÃo, o CV potencializou os efeitos da morfina, indometacina e dexametasona. Portanto, nossos resultados evidenciaram os efeitos neuroprotetores do CV e de seus princÃpios bioativos, EC e EGCG, possivelmente decorrentes de suas propriedades anti-inflamatÃrias e antioxidantes, tornando-as opÃÃes terapÃuticas futuras para a prevenÃÃo ou tratamento de doenÃas neurodegenerativas, como a doenÃa de Parkinson.

Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T06:30:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Figueiredo_CamilaAlexandrinaVianade_D.pdf: 9514972 bytes, checksum: 602b147a415d93d261e4b82f68a9f117 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Esse trabalho investiga o efeito protetor do tratamento com diferentes doses (50, 100 e 250 mg/Kg) do extrato padronizado de Chá Verde (GTE) em camundongos infectados com Listeria monocytogenes (LM). A eficácia terapêutica foi avaliada para uma dose letal de LM por sete dias consecutivos com diferentes doses de GTE. A proteção significativa do extrato foi verificada durante a fase aguda da infecção e um mecanismo de ação foi proposto a partir da análise dos efeitos do GTE sobre o crescimento e a diferenciação de progenitores hematopoéticos para granulócitos e macrófagos (CFU-GM) da medula óssea e do baço, sobre a atividade estimuladora de colônias (CSA) do soro, sobre a atividade lítica de células NK, sobre a proliferação de linfócitos e sobre a produção de citocinas de padrão Thl (IFN-y) / Th2 (IL-10) em animais normais e infectados com LM. Os resultados demonstraram que a resistência dos animais infectados com uma dose letal de LM tratados com GTE está relacionada com a modulação da mielossupressão e diminuição da hematopoese extramedular produzidas pela infecção. Também foi verificado um aumento da atividade lítica de células NK, da capacidade proliferativa de linfócitos e da polarização da resposta imunológica para Thl. O GTE não apresentou toxicidade sobre o estroma medular e estimulou a geração de progenitores para granulócitos-macrófagos em sistema de cultura líquida de longa duração (LTBMC). O mecanismo de ação da atividade imunomoduladora do GTE ainda não está completamente definido. No entanto, os mecanismos de ação apresentados neste trabalho são de fundamental importância para a atividade antibacteriana in vivo do GTE / Abstract: In the present study we investigated the protective effects of the oral administration of Green tea (GTE) (50, 100 and 250mg/Kg) in mice infected with Listeria monocytogenes (LM). We demonstrated that GTE protects mice from a lethal dose of LM when administered prophylactically for seven consecutive days. To determine the mechanism of action of GTE, we examined the effect of GTE on the number of granulocyte and macrophage colony-forming units (CFU-GM) from bone marrow and spleen, on the colony-stimulating activity (CSA) of serum, on natural killer (NK) cell activity, on lymphocyte proliferation and on Thl/Th2-based cytokine production in normal and LM infected mice. Myelosuppression and extramedular hematopoiesis/splenomegaly were the major features of LM infection, in association with NK cell activation and alteration of lymphocyte proliferation. The resistance of mice infected with a lethal dose of LM but treated prophylactically with 100 and 250mg/Kg of GTE could be related to the modulation of myelosuppression and extramedular hematopoesis induced by the infection, and to an increase in NK cell activity, lymphocyte proliferation and polarization of the Thl-based immune response. The GTE extract was not toxic to either the stromal cell layer or to GM progenitors generated from long-term bone marrow culture (LTBMC). In this way, the mechanism of action through GTE exerts its pharmacological effect is not completely elucidated, although the parameters mentioned here are essential for its antibacterial effect in vivo / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Theanine is a free, non-protein amino acid found in Camellia sinensis (tea) leaves. It is the main amino acid component in tea and contributes 1 to 2% of the dry weight of tea leaves. The content of amino acids is a key green tea quality parameter. High grade teas contain high amounts of theanine. It is responsible for the sweet, brothy umami taste of green tea. To date there is no international standard method for the analysis of theanine in tea samples. Several methods with different advantages and disadvantages have been reported but most of them are unsuitable for routine quality control analysis in commercial tea samples. In this study, a high performance liquid chromatography (HPLC) method with evaporative light scattering detection for the determination of theanine in tea samples has been developed. Chromatographic separation of theanine was achieved by reverse phase HPLC using a phenyl-hexyl column and isocratic water elution within 8 minutes. The method requires no sample derivatization and includes simple sample clean-up. Applying the same chromatographic conditions to a widely available C18 column, separation of theanine was achieved within 10 minutes. The successful application of the C18 column renders this method widely applicable. The method is linear over several orders of magnitude and the LOD are 11.53 and 10.83 μg/ml and the LOQ are 39.44 and 35.10 μg/ml for the phenyl-hexyl and C18 column, respectively. Simple but effective sample preparation and polyvinylpolypyrrolidone pre-treatment, along with the short analysis time facilitates high sample throughput (~40 samples can be prepared in an 8 hour day with overnight analysis by HPLCELSD). The method is selective, precise, accurate and practical for the quantification of theanine in tea extracts and was successfully used to determine theanine content in a variety of tea samples. The sensitivity and simplicity of this method renders it suitable for use in routine theanine analysis in quality control laboratories. Green tea, a simple refreshing beverage, has been believed to have therapeutic uses for centuries. Scientists have recognized that the wide range of physiological functions of green tea is due to the presence of catechins. An increasing body of evidence is showing that methylated forms of catechins have potent inhibitory activities to allergies. In addition to the methylated catechins, another relative novel group of catechins exists, namely digallated catechins. The medicinal value of these compounds is not yet known, but it is reasonable to speculate that the antioxidant capacity of digallated catechins will be superior to that of epigallocatechin gallate due to the 3 additional hydroxyl groups provided by the second gallic acid moiety. In this study reverse phase UPLC/ESI-MS/MS was effectively applied to investigate the presence of digallated and methylated catechins in crude tea extract. Low abundance catechins (-)-epigallocatechin-(O-3”-methyl) gallate ([M + H]+, m/z 473) and (-)-epicatechin-3-(O-3”-methyl) gallate ([M + H]+, m/z 457) were successfully detected at 31.9 and 37.5 minutes, respectively. The 2 digallated catechins investigated could not be detected, possibly due to being present at concentrations below the limit of detection. Compared to conventional HPLC/ESI-MS/MS, increased resolution and sensitivity, 80% less use of solvent and significantly reduced analysis times were observed. / Dissertation (MSc)--University of Pretoria, 2009. / Biochemistry / unrestricted

O chá obtido por infusão de Camellia sinensis (L.) O. Kuntze (Theaceae) contém polifenóis, principalmente catequinas e flavonóis que apresentam atividade antioxidante, atuando como sequestradores de íons metálicos ou pelo sequestro de espécies reativas de oxigênio ou de nitrogênio. A erva-mate utilizada para o preparo da bebida chimarrão é feita a partir das folhas da arvore Ilex paraguariensis (Aquifoliaceae). A bebida da erva-mate é reconhecida como uma rica fonte de substâncias antioxidante, como os ácidos fenólicos que são responsáveis pelo efeito antioxidante in vitro e in vivo da bebida. Neste trabalho foi determinada a atividade antirradicalar de infusões obtidas de diferentes chás comerciais, o chá verde orgânico (CVorg) e um composto comercial de erva mate com chá verde (M+V). Os principais constituintes químicos dos chás foram identificados por Cromatografia de Alta Eficiência (CLAE) e alguns dos constituintes foram quantificados. Dessa forma foi possível identificar em ambos os chás ao todo cinco flavonoides glicosilados, cinco ácidos clorogênicos, cinco catequinas e um alcaloide. As infusões e algumas das substâncias identificadas foram avaliadas em relação à atividade antirradicalar utilizando diferentes métodos, um colorimétrico com os radicais 2,2-difenil-1-picrilhidrazila (DPPH·) e ácido 2,2\'-azino-bis(3-etilbenzotiazolina-6-sulfônico) (ABTS·+) e um método baseado na quimiluminescência do luminol. A infusão do CVorg mostra capacidade antirradicalar elevada quando o método com o radical ABTS·+ é utilizado, com valores similares aos obtidos com o padrão trolox®. Quando dois derivados catequinas foram submetidas ao mesmo ensaio com os dois radicais, observou-se que estes apresentaram uma capacidade antirradicalar maior frente ao radical ABTS·+, sugerindo que a elevada atividade antirradicalar da infusão CVorg pode ser atribuída à presença das catequinas analisadas. No método quimiluminescente a infusão do M+V apresentou uma capacidade antirradicalar mais alta que a infusão do CVorg. O ácido 5-cafeoilquinico, um derivado do ácido clorogênico, testado no mesmo ensaio, apresentou um potencial antirradicalar maior que as catequinas. Este resultado pode sugerir que a maior capacidade antirradicalar da infusão M+V comparado com a de CVorg, quando determinada com o ensaio luminol, pode ser atribuída à presença dos derivados do ácido clorogênico, tendo em vista que esta classe de compostos não foi identificada na infusão CVorg. / Tea obtained by infusion of Camellia sinensis (L.) O. Kuntze (Theaceae) contains polyphenols, especially catechins and flavonols which exhibit antioxidant activity, acting as scavengers of metal ions or by sequestering reactive oxygen and nitrogen species. The mate herb used for brewing the mate beverage \'erva-mate\' is made from the leaves of the tree Ilex paraguariensis (Aquifoliaceae). The beverage \'erva-mate\' is known as a rich source of antioxidant substances, such as phenolic acids that are responsible for the in vitro and in vivo antioxidant effect of the beverage. In this work the antiradical activity of infusions obtained from different commercial teas, organic green tea (CVorg) and a commercial mixture of mate herb and green tea (M + V) was determined. The main chemical constituents of the teas were identified by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and some of the constituents quantified. Thus it was possible to identify in both teas a total number of five glycosylated flavonoids, five chlorogenic acids derivatives, five catechins and one alkaloid. The infusions and some of the identified constituents were evaluated for its antiradical activity using different methods, a colorimetric one with the stable radicals 2,2-diphenyl-1-picrylhidrazyl (DPPH·) and 2,2\'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonico acid (ABTS·+) and an alternative method based on luminol chemiluminescence. The infusion of CVorg shows high antiradical capacity when evaluated by the method with the radical ABTS·+, with values similar to that of the standard trolox®. When two catechins derivatives were subjected to the same test with both radical, it was observed that these showed higher antiradical capacity with the radical ABTS·+, as compared to DPPH·, suggesting that the high antiradical capacity of the CVorg infusion can be attributed to the presence of analyzed catechins. With the chemiluminescence method the M+V infusion showed a higher antiradical capacity that the CVorg infusion. 5-Cafeoilquinic acid, a chlorogenic acid derivative, tested in this assay showed a higher antiradical capacity than catechins. This result might suggest that the higher antiradical capacity of the M+V infusion as compared to the CVorg, when measured with the luminol method, can be attributed to the presence of chlorogenic acid derivatives, since this class of compounds was not identified in the CVorg infusion.

O chá obtido por infusão de Camellia sinensis (L.) O. Kuntze (Theaceae) contém polifenóis, principalmente catequinas e flavonóis que apresentam atividade antioxidante, atuando como sequestradores de íons metálicos ou pelo sequestro de espécies reativas de oxigênio ou de nitrogênio. A erva-mate utilizada para o preparo da bebida chimarrão é feita a partir das folhas da arvore Ilex paraguariensis (Aquifoliaceae). A bebida da erva-mate é reconhecida como uma rica fonte de substâncias antioxidante, como os ácidos fenólicos que são responsáveis pelo efeito antioxidante in vitro e in vivo da bebida. Neste trabalho foi determinada a atividade antirradicalar de infusões obtidas de diferentes chás comerciais, o chá verde orgânico (CVorg) e um composto comercial de erva mate com chá verde (M+V). Os principais constituintes químicos dos chás foram identificados por Cromatografia de Alta Eficiência (CLAE) e alguns dos constituintes foram quantificados. Dessa forma foi possível identificar em ambos os chás ao todo cinco flavonoides glicosilados, cinco ácidos clorogênicos, cinco catequinas e um alcaloide. As infusões e algumas das substâncias identificadas foram avaliadas em relação à atividade antirradicalar utilizando diferentes métodos, um colorimétrico com os radicais 2,2-difenil-1-picrilhidrazila (DPPH·) e ácido 2,2\'-azino-bis(3-etilbenzotiazolina-6-sulfônico) (ABTS·+) e um método baseado na quimiluminescência do luminol. A infusão do CVorg mostra capacidade antirradicalar elevada quando o método com o radical ABTS·+ é utilizado, com valores similares aos obtidos com o padrão trolox®. Quando dois derivados catequinas foram submetidas ao mesmo ensaio com os dois radicais, observou-se que estes apresentaram uma capacidade antirradicalar maior frente ao radical ABTS·+, sugerindo que a elevada atividade antirradicalar da infusão CVorg pode ser atribuída à presença das catequinas analisadas. No método quimiluminescente a infusão do M+V apresentou uma capacidade antirradicalar mais alta que a infusão do CVorg. O ácido 5-cafeoilquinico, um derivado do ácido clorogênico, testado no mesmo ensaio, apresentou um potencial antirradicalar maior que as catequinas. Este resultado pode sugerir que a maior capacidade antirradicalar da infusão M+V comparado com a de CVorg, quando determinada com o ensaio luminol, pode ser atribuída à presença dos derivados do ácido clorogênico, tendo em vista que esta classe de compostos não foi identificada na infusão CVorg. / Tea obtained by infusion of Camellia sinensis (L.) O. Kuntze (Theaceae) contains polyphenols, especially catechins and flavonols which exhibit antioxidant activity, acting as scavengers of metal ions or by sequestering reactive oxygen and nitrogen species. The mate herb used for brewing the mate beverage \'erva-mate\' is made from the leaves of the tree Ilex paraguariensis (Aquifoliaceae). The beverage \'erva-mate\' is known as a rich source of antioxidant substances, such as phenolic acids that are responsible for the in vitro and in vivo antioxidant effect of the beverage. In this work the antiradical activity of infusions obtained from different commercial teas, organic green tea (CVorg) and a commercial mixture of mate herb and green tea (M + V) was determined. The main chemical constituents of the teas were identified by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and some of the constituents quantified. Thus it was possible to identify in both teas a total number of five glycosylated flavonoids, five chlorogenic acids derivatives, five catechins and one alkaloid. The infusions and some of the identified constituents were evaluated for its antiradical activity using different methods, a colorimetric one with the stable radicals 2,2-diphenyl-1-picrylhidrazyl (DPPH·) and 2,2\'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonico acid (ABTS·+) and an alternative method based on luminol chemiluminescence. The infusion of CVorg shows high antiradical capacity when evaluated by the method with the radical ABTS·+, with values similar to that of the standard trolox®. When two catechins derivatives were subjected to the same test with both radical, it was observed that these showed higher antiradical capacity with the radical ABTS·+, as compared to DPPH·, suggesting that the high antiradical capacity of the CVorg infusion can be attributed to the presence of analyzed catechins. With the chemiluminescence method the M+V infusion showed a higher antiradical capacity that the CVorg infusion. 5-Cafeoilquinic acid, a chlorogenic acid derivative, tested in this assay showed a higher antiradical capacity than catechins. This result might suggest that the higher antiradical capacity of the M+V infusion as compared to the CVorg, when measured with the luminol method, can be attributed to the presence of chlorogenic acid derivatives, since this class of compounds was not identified in the CVorg infusion.

As doenças periodontais (DPs) são alterações inflamatórias crônicas que acometem os tecidos de sustentação do órgão dental. A presença do diabetes é refletida em maior severidade e prevalência das DPs tanto em humanos quanto em modelos experimentais. Contudo, os mecanismos biológicos envolvidos no aumento da prevalência e da severidade permanecem pouco conhecidos. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar o número de células marcadas por imunohistoquímica para TNF-&#x3B1;, RANKL, OPG, IL-10 e para o fator de transcrição RUNX-2, na doença periodontal experimental decorrente da indução do diabetes em ratos. Além disso, avaliamos os possíveis efeitos do tratamento com chá verde sobre o periodonto dos animais. Inicialmente, os ratos (n=80) foram submetidos à indução do diabetes por administração intraperitoneal de estreptozotocina (50mg/kg) e, juntamente com o grupo controle (n=40), foram subdivididos em animais tratados com chá verde ou com água, acompanhados durante o período de 15, 30, 60 ou 90 dias. Após o sacrifício dentro do tempo determinado para cada grupo, as hemimaxilas coletadas passaram pelos procedimentos de imunohistoquímica. Os resultados revelaram que a presença do diabetes causou perda óssea alveolar, compatível com o desenvolvimento da doença periodontal e resultou em alterações significativas no número de células imunomarcadas para diferentes mediadores do processo inflamatório. Entretanto, o chá verde apresentou efeitos benéficos para o periodonto, alterando a marcação das citocinas envolvidas. Nos animais diabéticos, independente do tratamento, foi observado aumento estatisticamente significativo (p<0,05 ANOVA) no número de células imunomarcadas para TNF-&#x3B1; e RANKL. Inversamente, houve menor marcação para OPG (60 e 90 dias), RUNX-2 (30, 60 e 90 dias) e para IL-10 (30, 60 e 90 dias) nos animais que ingeriram água. Porém, os diabéticos tratados com chá não demonstraram diferenças significativas em relação ao seu respectivo controle. Assim, quando comparados os grupos diabéticos tratados com água e chá, os animais que receberam o chá demonstraram significativamente (p<0,05 ANOVA) menor quantidade de células munomarcadas para TNF-&#x3B1; e RANKL em relação aqueles diabéticos tratados com água, enquanto que a marcação para OPG, RUNX-2 e IL-10 foi maior. Portanto, a desregulação na expressão de citocinas e do fator de transcrição osteoblástico parece ser um dos mecanismos biológicos envolvidos no aumento da prevalência e da severidade das doenças periodontais decorrentes do diabetes. Entretanto, o chá verde modulou a inflamação no periodonto dos animais diabéticos, apresentando-se, possivelmente, como uma alternativa terapêutica e coadjuvante ao tratamento das doenças periodontais correlacionadas ao diabetes. / Periodontal diseases (PD) are chronic inflammatory diseases leading the destruction of connective tissue and alveolar bone supporting the teeth. The establishment of diabetes increases PD prevalence and severity in humans and experimental model. However, biological mechanisms regarding to increase of prevalence and severity remains poorly known. The aim of this study was to evaluate the number of immuno-staining cells to TNF-&#x3B1;, RANKL, OPG, IL-10 and transcription factor RUNX-2 in experimental periodontal disease in diabetic rats. Furthermore, the possible green tea efects were evaluated in periodontiumof the rats. Diabetes was induced in Wistar rats (n=120) by intraperitoneal administration of 50 mg/kg ofstreptozotocin and together with control animals (n=80), the rats were subdivided in water or green tea treated group, that were analyzed at 15, 30, 60 and 90 days after diabetes induction. The animals were sacrificed and the hemimaxillae were removed and submitted to immunohistochemistry procedures. Our data demonstrated that diabetes induction and progression resulted in significant bone loss and alterations in number of immuno-staining cells to different mediators of inflammatory process. However, the green tea showed positive effects in periodontium through inflammation modulation. In diabetic rats, regardless of treatment, we observed an increased number of immuno-staining cells to TNF-&#x3B1;, IL-1b and RANKL (p<0,05 ANOVA). On the other hand, in water treated diabetic rats, there were a decreased number of immuno-staining cells to OPG (60 e 90 days), RUNX-2 (30, 60 e 90 days) and IL-10 (30, 60 e 90 days). However, the green tea treated rats did not showed statistical differences between control and experimental groups in those staining. When we compared both diabetic groups, green tea and water treated, the animals that drank the green tea showed decreased number of immuno-staining cells to TNF-&#x3B1; and RANKL(p<0,05 ANOVA) whereas the number of immuno-staining cells to OPG, RUNX-2 e IL-10 were increased. Taken together, desregulation of inflammatory cytokines and osteoblastic transcripition factor seem to be one of biological mechanisms involved in the increase of periodontal disease prevalence and severity associated with diabetes. However the green tea was able to modulate inflammation in diabetic rats periodontium and it seems to be a possible terapeutic agent to periodontal disease treatment associated with diabetes.

A Camellia sinensis, vem sendo amplamente estudada, em função das suas propriedades medicinais, devido aos polifenóis com funções antioxidantes, tendo seu uso propostos como terapêutica para algumas doenças metabólicas como o Diabetes mellitus. A ingestão diária de antioxidantes, principalmente com compostos fenólicos pode retardar o aparecimento destas doenças. O atual trabalho o avaliou possível efeito terapêutico do chá verde (Camellia Sinensis) em ratos diabéticos induzido pela estreptozotocina, parâmetros clínicos (peso, ingestão hídrica) e laboratoriais (glicemia de jejum, colesterol total, triglicérides, proteínas totais, albumina e uréia) esse efeito na glândula submandibular pelo método morfométrico. Cento e sessenta ratos machos com 2 meses de idade foram distribuídos inicialmente em controle (n = 80) e diabéticos (n = 80). Os animais do grupo controle água (CA) e diabético água (DA) consumiram água como dieta líquida e os animais dos grupos controle chá (CC) e diabético chá (DC) receberam apenas dieta líquida de chá verde. Os parâmetros bioquímicos e morfométricos foram avaliados nos períodos experimentais de 15, 30, 60 e 90 dias (n = 5), após a indução. Os resultados mostraram que: a) a ingestão hídrica dos animais dos grupos DA e DC foram em média 6 vezes maior em relação aos controles; b) aos 15 dias, todos os animais dos grupos CA, CC e DA apresentaram aumento nos índices glicêmicos final de, respectivamente, 45 mg/dL, 65 mg/dL e 88mg/dL em relação ao período inicial, enquanto que todos os animais do grupo DC tiveram seus índices glicêmicos reduzidos em média de 119 mg/dL; c) nos ratos diabéticos o perfil bioquímico das proteínas totais e albumina foram menores em relação aos controles e o da uréia maior, enquanto que, o colesterol total, triglicérides não apresentaram diferenças; d) os ácinos das glândulas submandibulares dos animais dos grupos DA e DC exibiram aumento da eosinofilia citoplasmática e ausência da bosofilia basal, indicativos de alteração no conteúdo protéico e na síntese protéica, além de núcleos picnóticos, indicativos de morte celular por apoptose. Morfometricamente, o volume individual das células acinosas aumentou, enquanto que, o número total de células diminuiu, mantendo o volume total dos ácinos constante durante todo período experimental; e) os ductos granulosos, no grupo CA apresentaram aumento de 125% no seu volume total entre 15 e 90 dias, decorrente do desenvolvimento desta estrutura, aumentando o número e o volume celular. Já, nos DA e DC, o número e o volume individual das células mantiveram-se constante durante todo período experimental. Com base nos resultados obtidos, podemos inferir que a glândula submandibular é um órgão afetado pelo diabetes e a terapêutica utilizada neste experimento (Camellia sinensis) não foi efetiva para o tratamento do diabetes crônica. / The Camellia sinensis, has been widely studied because of their medicinal properties due to the polyphenols with antioxidant functions, and proposed its use as treatment for various metabolic disorders such as diabetes mellitus. The daily intake of antioxidants, mainly phenolic compounds may prevent or delay onset of these diseases. In this study, the possible therapeutic action of green tea (Camellia Sinensis) in diabetic rat induced chemically by streptozotocin was evaluated by clinical (weight, water intake) and laboratory parameters (fasting glucose, total cholesterol, triglycerides, total protein, albumin and urea) and its effect in the submandibular glands by morphometric methods. One hundred and sixty male rats with 2 months of age were distributed initially in control (n = 80) and diabetic (n = 80). The animals of the water control (WC) and water diabetic (WD) groups received only regular drinking water and green tea control (GTC) and green tea diabetic (GTD) groups received green tea solution ad libitum. Morphometric and biochemical parameters were evaluated after 15, 30, 60 and 90 days (n = 5) after induction. The results showed that: a) the water intake of animals from group WD and GTD were six times higher on average than control groups; b) at 15 days, all animals of the WC, WD and GTC groups showed an increase of the glycemic index of, respectively, 45 mg/dL, 65 mg/dL and 88 mg/dL compared to the initial period, while that all animals in CTD group, showed a decrease of 119mg/dL; c) in the diabetic rats of WD and GTD groups the total protein and albumin levels were lower than control groups and urea level higher, whereas, the total cholesterol and triglyceride did not show significant differences, d) the acini of submandibular glands of animals in groups WD and GTD showed increase of the cytoplasmic eosinophilia and absence of the basal basophilia, which may be indicative of changes in protein content and/or structure, and pyknotic nuclei indicative of cell death. Morphometrically, the volume of acinar cells increased, whereas the cell number decreased, maintaining the total volume of acini constant throughout the experimental period, e)the granular convoluted tubules in development showed an increase of 125% between 15 and 90 days in the WC group, due to increase in the number and volume of its cells. In DA and DC groups, the number and volume of cells remained constant throughout the experimental period. Based on the results, we infer that the submandibular gland is an organ affected by diabetes and that the green tea (Camellia sinensis) therapy used in this experiment is not effective for the treatment of chronic diabetes.

Submitted by Sandro Camargo (sandro.camargo@unipampa.edu.br) on 2015-03-08T23:12:00Z No. of bitstreams: 1 126110006.pdf: 1402473 bytes, checksum: aed1fe94c57f7ab83538a36308f58174 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-08T23:12:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 126110006.pdf: 1402473 bytes, checksum: aed1fe94c57f7ab83538a36308f58174 (MD5) Previous issue date: 2014-02-22 / A δ-Aminolevulinato desidratase (δ-ALA-D) é uma enzima tiólica que catalisa uma das reações iniciais da biossíntese do heme. Essa enzima é considerada um marcador proteico de intoxicação com metais. O cádmio é um dos poluentes tóxicos, amplamente distribuído no meio ambiente, sendo que a exposição humana resulta principalmente da fumaça do cigarro, da poluição do ar e do consumo de alimentos e água contaminados pelo metal. O cádmio apresenta uma baixa taxa de excreção no organismo e um elevado tempo de meia- vida biológico e por esta razão, se acumula no sangue, rins e fígado, bem como nos órgãos reprodutivos, incluindo o ovário. A patogênese do dano ovariano e a redução da viabilidade folicular após exposição ao cádmio tem sido associada a danos oxidativos. Assim, compostos antioxidantes poderiam ser uma terapia alternativa frente a toxicidade do cádmio. O presente estudo avalia o efeito protetor da Camellia sinensis (chás verde, branco e vermelho) sobre a inibição da atividade da δ-ALA-D ovariana induzida pelo cádmio in vitro (ovário bovino) e ex vivo (ovário de camundonga). O efeito do cloreto de cádmio (IC 50 , 20μM), das infusões de chás (0,07 – 10 mg/mL) e das catequinas isoladamente –epicatequina (EC), epigalocatequina (EGC), epicatequina galato (ECG), epigalocatequina galato (EGCG) - foram avaliadas sobre a atividade da δ-ALA-D de ovário bovino (in vitro). Além disso, a composição das infusões de chá foi avaliada por HPLC (Cromatografia Líquida de Alta Eficiência) em um ensaio quantitativo de catequinas, alcalóides purina e ácido gálico, bem como o conteúdo de polifenóis totais. Os chás verde e branco nas maiores concentrações estudadas restauraram a atividade da δ-ALA-D inibida pelo cádmio enquanto o chá vermelho não apresentou efeito in vitro. O chá verde apresenta maior quantidadede conteúdo fenólico (757,24 μg EAG/mL) bem como de catequinas (EGCG = 205,64 μg/mL, EC = 84,59 μg/mL, EGC = 75,53 μg/mL, ECG = 64,73 μg/mL) comparado com o chá branco (499,37 μg EAG/mL) (EGCG = 105,57 μg/mL, EC = 54,73 μg/mL, EGC = 81,96 μg/mL, ECG = 34,25 μg/mL) e com o chá vermelho (272,39 μg EAG/mL) (só foi detectado ECG= 1,36 μg/mL). Nenhuma das catequinas testadas isoladamente foi eficaz em restaurar a atividade da enzima inibida pelo cádmio. Para os experimentos ex vivo, camundongas receberam uma única administração nas doses de 2,5 mg/kg e 5 mg/kg de CdCl 2 por via intraperitoneal e chá verde (250 mg/kg) administrado via oral. Verificou-se que a exposição aguda ao cádmio nas doses de 2,5 e 5 mg/Kg inibiu (cerca de 26% e 33%, respectivamente) a atividade da enzima δ-ALA-D de ovário de camundongas e o chá verde foi capaz de restaurar essa inibição. O maior efeito do chá verde observado in vitro, bem como o papel protetor apresentado no estudo ex vivo, poderia ser atribuído ao maior teor de fenóis, mas não de catequinas. Na verdade, as catequinas não foram capazes de restaurar a atividade da enzima inibida por cádmio, demonstrando que estes compostos não são os principais componentes responsáveis pelo efeito benéfico do chá verde observada neste estudo. Esse estudo demonstrou a eficácia do chá verde em restaurar a atividade da δ-ALA-D inibida pelo cádmio em tecido ovariano. / δ-aminolevulinate dehydratase (δ-ALA-D) is a thiol enzyme that catalyzes one of the initial reactions of heme biosynthesis. This enzyme is considered a marker protein for metal poisoning. Cadmium is a toxic pollutant, widely distributed in the environment, and human exposure results mainly from cigarette smoke, air pollution and consumption of food and water contaminated by the metal. Cadmium has a low excretion rate of the organism and high biological ha lf- life and for this reason it accumulates in the blood, kidney and liver as well as on reproductive organs including the ovaries. The pathogenesis of ovarian follicular damage and reduction of viability after exposure to cadmium has been associated with o xidative damage. Thus, antioxidant compounds may be an alternative therapy against cadmium toxicity. The present study evaluates the protective effect of Camellia sinensis (green, white and red teas) on the inhibition of ovarian δ-ALA-D activity induced by cadmium in vitro and ex vivo. The effect of cadmium chloride (IC 50 20μM), tea infusions (0.07 to 10 mg/ml) and individual catechins – epicatechin (EC), epigallocatechin (EGC), epicatechin gallate (ECG), epigallocatechin gallate (EGCG) - were evaluated on bovine ovaries δ-ALA-D activity (in vitro). Furthermore, the composition of tea infusions was measured on a HPLC quantitative assay of catechins, gallic acid and purine alkaloids, and the content of total polyphenols was measured by Folin–Ciocalteu method. The green and white teas, at the highest concentrations studied, restored the δ-ALA-D activity inhibited by cadmium while red tea had no effect in vitro. Green tea has higher amount of phenolic content ( 757.24 mg GAE/mL ) and catechins (EGCG = 205.64 μg/mL; EC = 84.59 μg/mL; EGC = 75.53 μg/mL; ECG = 64.73 μg/mL) compared with white tea ( 499.37 mg GAE/mL ) (EGCG = 105.57 μg/mL; EC = 54.73 μg/mL; EGC = 81.96 μg/mL; ECG = 34.25 μg/mL) and red tea (272.39 mg GAE/mL) ( only detected ECG = 1.36 μg/mL). None of the tested catechins alone was effective in restoring the enzyme activity inhibited by cadmium. For the ex vivo experiments, mice received a single administration of CdCl 2 , at doses of 2.5 mg/kg and 5 mg/kg intraperitoneally, and green tea (250 mg/kg) administered orally. We found that acute exposure to cadmium at doses of 2.5 and 5 mg/kg inhibited (about 26% and 33%, respectively) δ-ALA-D activity of mice ovaries, and green tea was able to restore this inhibition. The greater effect observed in vitro by green tea as well as the protective role presented at the ex vivo study, could be attributed to the higher phenols content, but not catechins. In fact, the catechins were not able to restore the enzyme activity inhibited by cadmium, demonstrating that these compounds are not the key components responsible for the beneficial effect of green tea observed in this study. This study demonstrated the effectiveness of green tea in restoring the δ-ALA-D activity inhibited by cadmium in ovarian tissue.

Orientador: Paula Schmidt Azevedo Gaiolla / Coorientador: Leonardo Antonio Mamede Zornoff / Banca: Bertha Furlan Polegato / Banca: Daniella de Rezende Duarte Maksymczuk / Resumo: Um dos mecanismos que explica como o infarto agudo do miocárdio (IAM) evolui para insuficiência cardíaca é denominado de remodelação ventricular. Dentre as inúmeras alterações bioquímicas associadas ao processo destaca-se o estresse oxidativo. O consumo habitual do chá verde (CV) é associado a benefícios à saúde, devido às suas propriedades, antioxidante, antiiflamatória, antiapoptótica, antiproliferativa, antimutagênica. Estas são atribuídas às catequinas, seu composto bioativo. Portanto, é possível que o extrato de chá verde atenue alguns parâmetros envolvidos na remodelação cardíaca. O objetivo do trabalho foi avaliar se o extrato de chá verde atenua a remodelação cardíaca após o infarto agudo do miocárdio. Para tanto foram utilizados ratos Wistar machos divididos em quatro grupos: controle padrão (CP) (28-sham); extrato do CV (CV) (32-sham e extrato de chá verde); infarto padrão (IP) (25-animais infartados controles); infarto e extrato do CV (ICV) (26- animais infartados e extrato do CV). Ecocardiografia inicial foi realizada após cinco dias ao IAM. A partir de uma divisão homogênea dos animais, considerando o tamanho do infarto maior a 35%, iniciou-se o tratamento. Ao final de três meses estes animais foram estudados por meio de ecocardiografia, morfometria, dosagens bioquímicas de enzimas do estresse oxidativo, metabolismo energético, perfil lipídico sérico, inibidor tecidual de metaloprotease (TIMP-1) e zimografia para atividade das metaloproteases (MMP-2 e MMP-9). Nos resultados, observou-se aumento do diâmetro diastólico do ventrículo esquerdo pelo peso corporal, diâmetro sistólico do ventrículo esquerdo pelo peso corporal e diâmetro do átrio esquerdo pelo peso corporal nos grupos com IAM, mas houve atenuação nos ICV. O tempo de desaceleração da onda E foi reduzido no IP, o que não foi observado no ICV, tendo valor similar ao CV. O extrato de CV também normalizou as atividades ... / Abstract: One mechanism that explains how acute myocardial infarction develops into heart failure is called ventricular remodeling. Among the many biochemical changes associated with the process stands oxidative stress. The regular consumption of green tea (GT) is associated with health benefits due to its properties such as antioxidant, anti-inflammatory, antiapoptotic, antiproliferative, antimutagenic. These are attributed to catechins, its bioactive compound. Therefore, it is possible that GT extract mitigate some parameters involved in cardiac remodeling. The objective of this study was to assess whether the green tea extract attenuates cardiac remodeling after acute myocardial infarction. For both, male Wistar rats were allocated in 4 groups: control (C-28 sham); green tea extract (GT-32 sham and GT); infarction group (MI-25 infarcted animals controls); infarction and green tea extract (IGT-26 infarcted animals and GT). To start the treatment an initial echocardiography was performed five days after the myocardial infarction, from a homogeneous division of the animals, considering the size of the infarction greater than 35%. At the end of three months these animals were studied by echocardiography, morphometry, biochemical enzyme of the oxidative stress, energy metabolism, lipid profile, tissue inhibitor of metalloproteinase (TIMP-1) and zymography for activity of metalloproteinases (MMP-2 and MMP-9). The results showed an increase in left ventricular diastolic diameter by body weight, left ventricular systolic diameter by body weight and left atrial diameter by body weight in groups with MI, but there was attenuation in IGT. The deceleration time of the E wave was reduced in MI, which was not observed in IGT, with a value similar to GT group. GT extract also normalized the activities of antioxidant enzymes superoxide dismutase and catalase in the IGT group, when compared to MI. Regarding energy metabolism, the IGT group showed increased ... / Mestre