Orientador : Prof. Dr. Rafael Felipe da Costa Vieira / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa: Curitiba, 21/10/2016 / Inclui referências : f. 20-23;34-36;47-51 / Área de concentração : Ciências Veterinárias / Resumo: Micoplasmas hemotropicos (hemoplasmas) sao bacterias Gram-negativas, pleomorficas e que se aderem a membrana de eritrocitos de uma grande variedade de especies animais. Estao distribuidos mundialmente e diferentes especies destas bacterias ja foram descritas em animais domesticos, silvestres e seres humanos. Entretanto, estudos envolvendo a deteccao de hemoplasmas em caprinos sao escassos e ainda nao haviam sido realizados no Brasil. Assim, objetivou-se determinar a prevalencia e os fatores associados a infeccao por Mycoplasma sp. em caprinos do estado da Paraiba, Nordeste do Brasil. Um total de 158/402 (39,3%) animais foram positivos para o gene 16S rRNA de Mycoplasma sp. pela PCR. O sequenciamento genetico de 10% das amostras positivas demonstrou .99% de identidade com varias sequencias de Mycoplasma ovis depositadas no GenBank. Caprinos leiteiros (OR = 2.15; 95% IC: 1.40-3.32%; p = 0.0004) e anemicos (OR = 2.39; 95% IC: 1.54-3.71%; p = 0.00007) apresentaram maior chance de estarem infectados por M. ovis do que caprinos de corte nao anemicos. Amblyomma parvum (49/52, 94.23%) e Rhipicephalus (Boophilus) microplus (3/52, 5.77%) foram as especies de carrapatos encontradas nos animais. Este e o primeiro relato de deteccao molecular de M. ovis em caprinos na America do Sul. Palavras-chave: Hemoplasmas; Micoplasmose hemotropica; pequenos ruminantes; PCR / Abstract: Hemotropic mycoplasmas (haemoplasmas) are gram-negative pleomorphic bacterias that infect the erythrocites membrane of a wide range of animal hosts. This pathogen is worldwide distributed and different species were described infecting domestic and wild animals and also humans. However, studies involving the diagnosis of haemoplasmas in goats are scarce and had not yet been conducted in Brazil. Thus, the present work aimed to detect the prevalence and risk factors associated with the infection of Mycoplasma sp. in goats from Paraíba State, Northeastern Brazil. A total of 158/402 (39.3%) animals were positive for the 16S rRNA gene from Mycoplasma sp. by PCR. The sequencing of 10% of positive samples demonstrated a ?99% of similarity with multiple Mycoplasma ovis sequences deposited on GenBank. Dairy (OR = 2.15; 95% IC: 1.40-3.32%; p = 0.0004) and anemic goats (OR = 2.39; 95% IC: 1.54-3.71%; p = 0.00007) showed higher chances to be infected by M. ovis than non-anemic beef goats. Amblyomma parvum (49/52, 94.23%) and Rhipicephalus (Boophilus) microplus (3/52, 5.77%) were the tick species found in these animals. This is the first report of molecular detection of M. ovis in goats from South America. Keywords: Hemoplasmas; Hemotropic mycoplasmosis; small ruminants; PCR.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-10-06T12:24:38Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2332592 bytes, checksum: ea191ac1bd1c0ec54857a55aff6e21f9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-06T12:24:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2332592 bytes, checksum: ea191ac1bd1c0ec54857a55aff6e21f9 (MD5) Previous issue date: 2016-05-23 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Foram utilizados 5.796 registros de perfis parasitológico (ovos por grama de fezes - OPG) e histológico (contagem de eosinófilos sanguíneos – EOSI; e volume globular - VG), para obtenção da resposta à resistência ao parasitismo Haemonchus contortus ao longo do tempo, oriundos de 138 caprinos da raça Crioula com idades variando de 173 a 307 dias, pertencentes a empresa francesa INRA (Institut National de Recherche Agronomique) na Unité de Recherches Zootechniques (URZ) localizada em Guadalupe (Antilhas Francesa), coletados no período de 2009 a 2013. A primeira análise destes dados foi contrastar diferentes modelos estatísticos (repetibilidade - REP; e regressão aleatória - MRA) para uma avaliação genética relacionada à resistência de caprinos Crioulos infectados artificialmente com 10.000 larvas L3 de Haemonchus contortus, em 2 etapas (Desafio 1 - correspondente à imunização do animal ao parasita; e Desafio 2 - correspondente à resposta da imunização adquirida pelo animal após a primeira infecção artificial) e observados durante 56 dias. Para o MRA o ajuste ocorreu por meio de funções polinomiais de Legendre para a curva fixa (kf), efeito genético aditivo (ka) e de ambiente permanente (kp) considerando as ordens dois (função linear) e três (função quadrática) para descrever as estruturas de (co)variâncias em função do tempo. Por meio do software WOMBAT, os modelos (REP e MRA) foram comparados pelos critérios de informação de Akaike (AIC) e Bayesiano de Schwarz (BIC). Estes avaliadores de qualidade destacou no Desafio 1, os seguintes MRA com as ordens: 3,2,3 para OPG; 3,3,2 para EOSI e 2,2,3 para VG como sendo os mais plausíveis para descrever geneticamente a curva de resistência de caprinos Crioulos inoculados com Haemonchus contortus. Já para o Desafio 2, os MRA com as ordens: 3,2,3; 3,2,2 e 3,3, respectivamente para as características OPG, EOSI e VG foram ressaltado para a mesma finalidade. Na segunda análise destes dados para ambos os Desafios (1 e 2) foi realizada a identificação de genes associados aos mecanismos de resistência em caprinos Crioulos ao Haemonchus contortus, por meio um Estudo de Associação Genômica Ampla (Genome-Wide Association Study - GWAS) para contagem de ovos por grama de fezes (OPG). Todos os animais avaliados neste estudo foram genotipados utilizando o chip Illumina goat SNP50 BeadChip (Illumina Inc. San Diego, CA) contendo 53.347 SNPs (Single Nucleotide Polymorphism ou polimorfismo de nucleotídeos de base única). E após o controle de qualidade, os genótipos de todos os indivíduos passaram a ter 46.643 SNPs, onde foram incluídos no GWAS. As associações que mostraram significativas foram identificadas através de modelos lineares mistos e ajustados separadamente para cada Desafios (1 e 2) utilizando a função GWAS do pacote rrBLUP do software R. No Desafio 1 foram encontrados sete SNPs (no cromossomo 4, 6, 11 e 17) e no Desafio 2 foram reportados cinco SNPs (nos cromossomos 3, 8, 9 e 24). A anotação dos genes candidatos foi realizada nas posições destes marcadores significativos, onde o principal cromossomo em termos de número de genes anotados foi o seis (Desafio 1) e o oito (Desafio 2) para a característica de interesse OPG. Uma vez que a infecção de Haemonchus contortus provoca danos graves no intestino em animais infectados, resultando num processo de inflamação e também a perda de sangue (ou anemia), o uso destes genes anotados é grande importância, pois os mesmos podem ser analisados sob um ponto de vista para uma resposta imunológica integrada. / A total of 5.796 records of parasitological (fecal eggs count - FEC) and histological (counting blood eosinophils - EOSI, and packed cell volume - PCV) profiles were used to study the genetic resistance to Haemonchus contortus parasitism in Creole goats belonging to French company INRA (Institut National de Recherche Agronomique) in Unité de Recherches Zootechniques (URZ) located in Guadeloupe (French West Indies). The datasets were collected in the period between 2009 to 2013. The first analysis consisted in comparing statistical models (repeatability - REP, and random regression - MRA) for genetic evaluation related to the resistance of Creole goats artificially infected with 10.000 larvae L3 of Haemonchus contortus. The infection occurred in 2 steps (Challenge 1 - corresponding to the immunization of the animal to the parasite; and Challenge 2 - corresponding to the immunization response acquired by the animal after the first artificial infection). The MRA were fitted by Legendre polynomials assumed to the fixed curve (kf), additive genetic effect (ka) and permanent environmental (kp) considering the two orders (linear function) and three (quadratic function) to describe the structures of (co) variance as a function of time. The analyses were performed by using WOMBAT software, being the models compared through Akaike Information (AIC) and Bayesian Schwarz (BIC) Criteria. For Challenge 1, the following MRA with orders: 3,2,3 for FEC; 3,3,2 for EOSI e 2,2,3 for PCV were the most plausible to describe genetic variation in goats in relation to the resistance to Haemonchus contortus. For Challenge 2, the MRA with orders: 3,2,3; 3,2,2 e 3,3, respectively for the characteristics FEC, EOSI e PCV, presented the best fitting. The second analysis was performed to identify genes associated with resistance mechanisms in the Creole goats to Haemonchus contortus through Genome-Wide Association Study (GWAS) for fecal eggs count (FEC). All animals in this study were genotyped using the chip Illumina goat SNP50 BeadChip (Illumina Inc. San Diego, CA) containing 53,347 SNPs (Single Nucleotide Polymorphism). Significant associations were identified by linear mixed models fitted separately for each Challenges (1 and 2) using the function rrBLUP of R software. At Challenge 1 were found seven significant SNPs (on chromosome 4, 6, 11 and 17); and at Challenge 2 were reported five significant SNPs (on chromosomes 3, 8, 9 and 24). Candidate gene annotation study was performed in the positions of these significant markers. Chromosome 6 was the most relevant in terms of the number of annotated genes, since a total of six (Challenge 1) and eight (2 Challenge) genes were associated to FEC. These genes are related to inflammation process and loss of blood (or anemia), which are symptoms of Haemonchus contortus infection. These identified genes can be submitted to future studies aiming to elucidate the integrated immune response to this parasitism.