Thesis (Ph. D.)--Ohio State University, 2005. / Document formatted into pages; contains xviii, 169 p. Includes bibliographical references. Abstract available online via OhioLINK's ETD Center; full text release delayed at author's request until 2006 March 9.

Thesis (doctoral)--Lund University, 1992. / Added t.p. with thesis statement inserted.

Thesis (Ph.D.) - University of Queensland, 2002. / Includes bibliography.

Thesis (doctoral)--Lund University, 1992. / Added t.p. with thesis statement inserted.

Thesis (doctoral)--Umeå University, Sweden, 1995. / Added t.p. with thesis statement inserted. Includes bibliographical references.

Thesis (Ph. D.)--University of Texas at Austin, 2004. / Supervisors: Cheryl L. Walker and John H. Richburg. Vita. Includes bibliographical references. Also available from UMI.

Thesis (M.Phil.) - University of Queensland, 2005. / Includes bibliography.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:03:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000406273-Texto+Completo-0.pdf: 1444191 bytes, checksum: 62404b9def0461687f591d1a65885145 (MD5) Previous issue date: 2008 / To investigate the expression of p16INK4a in cervical carcinoma and its relation to the transition of carcinoma in situ to invasive carcinoma, and its role in recurrence of cervical lesions as well, a series of 90 patients with cervical carcinoma (49 with in situ lesion and 41 with invasive lesion) were selected between July 2001 and September 2002. Groups with in situ and invasive lesions were paired for a series of risk variables for cervical cancer and followed up for 60 months. The follow-up visits occurred every 6 months in the first three years and annually up to the fifth year. It was seen that 87. 9% of the patients with invasive lesion had overexpression of p16INK4a, in comparison with 37. 6% of those with in situ lesion (X2: 13. 68; 2 df; p=0. 0002; OR: 12. 08), demonstrating the overexpression of p16INK4a as a risk of invasion of the basal layer by dysplastic cells. We also observed an association between overexpression of p16INK4a and staging of cancer (X2: 18. 38; 6 df; p=0. 0003). A prospective analysis, when controlled for interaction with cervical lesion groups (by Cox regression), demonstrated a risk of recurrence of 4. 83 times attributed to overexpression of p16INK4a , albeit not statistically significant (p=0. 14). / A fim de investigar a expressão da p16INK4a no carcinoma cervical e sua relação com a transformação de carcinoma in situ em invasor, além de seu papel na recorrência das lesões cervicais, uma série de 90 pacientes com carcinoma cervical (49 com lesão in situ e 41 com lesão invasora) foi selecionada, entre julho de 2001 e setembro de 2002. Os grupos com lesão in situ e invasora foram pareados para uma série de variáveis de risco do câncer cervical e as pacientes mantidas em acompanhamento por 60 meses. As visitas de acompanhamento ocorreram a cada 6 meses nos primeiros três anos e anualmente até o quinto ano. 87,9% das pacientes com lesão invasora apresentavam super expressão da p16INK4a, em comparação com 37,6% daquelas com lesão in situ (X2:13,68; 2GL; p=0,0002; OR:12,08), demonstrando ser a super expressão da p16INK4a um risco de invasão da membrana basal por células displásicas. Também observamos associação entre super expressão da p16INK4a e estadiamento do câncer (X2:18,38; 6GL; p=0,0003). A análise prospectiva, quando controlada a interação com os grupos de lesão cervical (cálculo de regressão de Cox), demonstra risco de 4,83 atribuído à super expressão da p16INK4a para recorrência, mas sem significância estatística (p=0,14).

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:03:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000412814-Texto+Completo-0.pdf: 570341 bytes, checksum: c9e6231d0926e5ded8d0c4095b48dedd (MD5) Previous issue date: 2009 / To gain a further insight into DNA repair mechanisms for oral squamous cell carcinoma (OSCC) in younger and older patients. Our main goal was to determine if young and older patients differ in their ability to repair doublestranded breaks (DSBs) by both Homologous Recombination (HR) and Nonhomologous End-Joining (NHEJ). We have functionally assessed doublestranded breaks using UT-SCC cell lines established from young (<40 yr. ) and older ( 40 yr) patients. We have examined global DNA damage using the Comet assay after cell exposure to ionizing radiation (IR). In the Comet assay, cells are embedded in agar, cell membranes are removed by lysis, the DNA is allowed to unwind, and electrophoresis is performed using an alkaline pH buffer. Loops of DNA around strand breaks are more relaxed, and they are pulled towards the anode, appearing to have a comet “tail”. Undamaged DNA remains tightly wound in the nucleoid, or comet “head”. Tail moments were used to measure the degree of DNA fragmentation. Cells were irradiated (20 Gy), and collected at different points in time. After electrophoresis, cells were stained with ethidium bromide, and observed under a fluorescent microscope. A total of 200 cells per sample were analyzed using the Komet image analysis system. HR and NHEJ analyses were performed using a plasmid-based repair assay, in order to measure the ability of the UT-SCC cell lines undergo DNA DSB repair. In order to assess global DNA DSB repair, three independent experiments were performed for all cell lines using the Comet assay, and no differences were found between lines derived from younger and older patients when comparing irradiated vs. nonirradiated cells. We have also observed that both young and old patients’ cell lines are able to repair DNA DSBs caused by ionizing radiation in about 24 hrs.To test whether there is a deficiency or compensation from one DSB mechanism, the analysis of homologous recombination and non-homologous end-joining was employed. We have observed that both young and old patients’ UT-SCC cell lines showed deficient double-stranded break repair with both mechanisms. However homologous recombination efficiency was largely compromised in UTSCC cell lines derived from older patients. / Com a finalidade de obter maiores conhecimentos sobre mecanismos de reparo de DNA no desenvolvimento do câncer bucal, foi avaliado o reparo da quebra da dupla fita de DNA (DSBs) em células de indivíduos com menos de 40 anos e com mais de 40 anos. O objetivo foi determinar se as células de carcinomas epidermóióides de boca de indivíduos com menos de 40 anos de idade e com mais de 40 anos diferem em relação à capacidade para reparar as DSBs por meio de ambos os mecanismos de reparo por recombinação, a recombinação homóloga (HR) e a junção de extremidades não homólogas (NHEJ). Foi acessada funcionalmente a quebra da dupla fita de DNA utilizando linhagens celulares UT-SCC desenvolvidas a partir de indivíduos com menos de 40 anos e com mais de 40 anos. Foi examinado o dano global de DNA pelo ensaio do cometa utilizando radiação ionizante (RI). Um total de 200 células por amostra foi analisado utilizando o sistema de análise de imagem, Komet software. Para a análise da capacidade das linhagens celulares UT-SCC repararem o dano ao DNA por HR e NHEJ, foi utilizado um ensaio com plasmídeo, descrito por Secretan et al. , 2004. No ensaio do cometa foram realizados três experimentos independentes para cada linhagem celular, e não foi observada diferença entre as linhas celulares provenientes de indivíduos com menos de 40 anos e com mais de 40 anos em relação ao reparo das DSBs de forma global. Quando foram comparadas células irradiadas versus células não-irradiadas, observou-se que ambas as linhagens de celulares foram capazes de reparar as DSBs causadas pela radiação ionizante em um período de 24 horas.Para testar se houve deficiência ou compensação de um mecanismo de reparo sobre o outro, foi realizada uma análise de HR e NHEJ, na qual se observou que tanto nas linhagens celulares de indivíduos com menos de 40 anos quanto nas dos com mais de 40 houve uma redução em ambos os mecanismos de reparo por recombinação, quando comparados à linhagem celular de ceratinócitos normais. Com base nos resultados, concluiu-se que as linhagens celulares de indivíduos com menos de 40 anos, bem como os com mais de 40 anos, têm seus mecanismos de reparo por recombinação reduzidos. Não há diferença estatisticamente significante na eficiência de recombinação NHEJ entre as linhagens celulares UT-SCC de indivíduos jovens e com mais de 40 anos. Há uma maior redução no reparo das DSBs por HR em linhagens celulares de indivíduos com mais de 40 anos.

Orientador : Prof. Dr. Roberto Pontarolo / Co-orientador : Prof. Dr. Bonald C. Figueiredo / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 06/06/2011 / Bibliografia: fls. 101-110 / Área de concentração: Análises Clínicas / Resumo: Introdução. A incidência do tumor de córtex adrenal (TCA) é marcadamente alta no Estado do Paraná, onde mais de 95% dos pacientes herdaram a mutação germinativa R337H TP53 de um dos pais. O desconhecimento da existência da mutação impede uma ação preventiva contra o TCA avançado, assim como a falta de dados sobre o risco para outros tipos de câncer em crianças e adultos dificulta o planejamento epidemiológico e o aconselhamento genético. O presente trabalho foi proposto com o objetivo de esclarecer estes questionamentos. Métodos: Esta pesquisa foi aprovada pelo Comitê de Ética em Pesquisa em seres humanos do Hospital de Clínicas da UFPR, do Hospital Pequeno Príncipe e pela CONEP em 2005 e em 2009 (com novos objetivos). Foram coletadas amostras de sangue periférico para a identificação da mutação R337H TP53 por meio da técnica de PCRRFLP. A confirmação da mutação foi feita por meio do sequenciamento do exon 10 do gene TP53 e pelo achado da mesma mutação em outras pessoas da família. O acompanhamento ambulatorial das crianças com a mutação R337H se baseou nos exames periódicos médicos, em ecografias abdominais e concentrações plasmáticas de hormônios adrenocorticais. Os resultados preliminares de heredogramas das famílias com a mutação R337H revelaram casos de carcinoma de plexo coroide (CPC) com a mutação, o que motivou a pesquisa para esclarecer se há incidência aumentada de CPC no Paraná. Resultados: De dezembro de 2005 a março de 2010, 171.649 RN, de um total de 180.000, participaram do rastreamento da mutação R337H TP53. Foram identificados 461 RN (0,27%) com a mutação. Dezenove casos de TCA foram diagnosticados no grupo de RN (n=13) ou no grupo de parentes abaixo de 15 anos de idade (n=6) durante esta coorte. Além disso, 34 casos de TCA foram revelados (31 crianças e 3 adultos) no histórico sobre câncer das famílias avaliadas (n=343 famílias). Das crianças que participaram do protocolo de vigilância ambulatorial, oito (2,4%) desenvolveram o TCA. Das crianças restantes portadoras da mutação e que não participaram do protocolo de vigilância, nove (2,5%) desenvolveram o TCA. As crianças com diagnóstico de TCA a partir do protocolo de vigilância ambulatorial apresentaram média de tamanho de tumores estatisticamente menor (apenas no estadio I) do que as que não participaram do protocolo (7 casos nos estadios II ou III, incluindo um óbito). Em 63,3% (14/22) dos pacientes com CPC foi identificada a mutação R337H. Ao contrário, dos 100% de LOH identificado em casos de TCA, o mesmo percentual não aconteceu nos casos de CPC. Conclusões. Este estudo demonstra a viabilidade do rastreamento neonatal para a detecção da mutação R337H e tratamento precoce de crianças com TCA, o que sugere que tal procedimento deveria ser incluído no Programa de Triagem Neonatal existente nos Estados brasileiros com uma frequência da mutação semelhante à da população do Paraná (1/371). Esta mutação é responsável por mais de 60% dos casos de CPC, sugerindo uma incidência pelo menos duas vezes maior desta neoplasia no Estado do Paraná do que em outras regiões onde não ocorre a mutação R337H. / Abstract: Introduction. The incidence of adrenocortical tumor (ACT) is remarkably high in Parana State (Southern Brazil), where over 95% of patients inherited the germline R337H TP53 mutation from a parent. Lack of knowledge about the mutation prevents a preventive action against advanced ACT. Likewise, lack of data on the risk for other types of cancer in children hamper the epidemiological monitoring and genetic counsling. This study was proposed to clarify these questions. Methods. This study was approved by the Ethics Committee for Research in Humans from the Hospital de Clínicas from UFPR, from the Pequeno Príncipe Hospital, and by CONEP in 2005 and 2009 (with new goals). Peripheral blood samples were collected for DNA analysis of the R337H mutation of the TP53 gene using the PCR-RFLP assay. Confirmation of the mutation was performed by sequencing of the TP53 exon 10 and by the identification of the same mutation in other family members. Outpatient Children with the R337H mutation was based on periodic medical examination, abdominal ultrasound and plasma concentrations of adrenocortical hormones. Preliminary analysis of the pedigrees of the families revealed cases of choroid plexus carcinoma (CPC) with the mutation and encouraged further study to verify whether there is increased incidence of CPC in Paraná state. Results. From December 2005 to March 2010, 171.649 newborns from a total of 180.000 were recruited for the screening of the R337H TP53 mutation. We identified 461 infants (0.27%) with this mutation. Nineteen cases of ACT were diagnosed in the group of newborns (n = 13) or in the group of relatives under 15 years of age (n = 6) in this cohort. In addition, 34 cases of ACT (31 children and 3 adults) were identified through the family history of cancer (n=353 families). Of the newborns who have participated of the surveillance program, eight (2.4%) developed TCA. Of the remaining newborns with the mutation who were not in the surveillance program, nine (2.5%) developed ACT. Children diagnosed with ACT through the surveillance program presented tumors with average size statistically smaller (only stage I) than those who did not attend the surveillance program (7 cases in stages II or III, including one deceased child). In 63.3% (14/22) of the patients with CPC was identified the germline R337H mutation. Unlike the ACT with 100% LOH, a lower percentage of LOH was found in CPC. Conclusions. This study demonstrates the feasibility of the neonatal screening to detect and treat precociously the ACT from children with the R337H mutation, suggesting that the neonatal screening for the R337H mutation should be included in the neonatal screening program in the Brazilian states with a similar frequency of mutation found in Paraná state (1/371). This mutation is responsible for more than 60% of the CPC cases in children, suggesting an incidence at least twice higher in Paraná than in other regions without the mutation R337H.