Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-18Bitstream added on 2014-06-13T19:35:13Z : No. of bitstreams: 1 pereira_rs_me_araca.pdf: 790587 bytes, checksum: 194f37c505d12a98d7b75720d14a4e5f (MD5) / A causa dos tumores da glândula perianal é desconhecida, entretanto eles podem ser modulados por influência de hormônios gonadais, basicamente a testosterona, uma vez que há uma alta prevalência (até 95%) de regressão da forma benigna dessa neoplasia após a castração dos machos. A proteína Ki-67 foi descrita pela primeira vez em 1983 é uma proteína nãohistona, que não é expressa em células na fase G0, mas que pode ser detectada nas fases ativas do ciclo celular, G1, S, G2 e mitose Verificou-se que o Ki-67 está associado com a proliferação celular, estando a população de células tumorais positivas ao Ki-67 correlacionada com a evolução clínica da doença. Foram estudados 42 casos de neoplasias da glândula perineal, sendo 15 adenomas, 15 epiteliomas, 12 carcinomas. Foram utilizadas 13 amostras de tecido de glândula perianal normal, como controle. De cada animal foram obtidas informações como: sexo, idade, raça, presença de outras neoplasias, se castrado ou não, se em caso de fêmea havia o uso de anticoncepcional, tempo de evolução, recidiva e tempo de sobrevida. Dos 42 casos de neoplasias de glândulas perianais, 34 (80,95%) foram provenientes de cães machos e 8 (19,05%) de fêmeas. A média de idade dos machos com a neoplasia foi de 9,8 anos, e das fêmeas 7,4 anos, sendo que para os dois sexos a idade variou de 5 a 15 anos. Em relação às raças, 11 (26,19%) eram S.R.D. (sem raça definida), 9 (21,42%) Poodle, 4 (9,52%) Cocker Spaniel e Husky Siberiano. O histórico de diagnóstico de outras neoplasias, foi constatado em 23,80% dos animais deste estudo. Em relação à castração, 32 (94,11%) dos machos não eram castrados e apenas 8 (19,05%) fêmeas eram. O tempo de evolução da neoplasia apresentou média de 1,2 anos. Histórico de recidiva da neoplasia foram relatados em 14 animais, sendo maior... / The cause of perianal gland tumors is unknown, though they may be modulated by the influence of gonadal hormones, primarily testosterone, since there is a high prevalence (up to 95%) of regression of the benign tumor after males castration. Protein Ki-67 was first described in 1983, and it is a nonhistone protein, which is not expressed in G0 phase cells, but can be detected in the active phases of the cell cycle, G1, S, G2 and mitosis. It was found that Ki-67 is associated with cell proliferation, and the population of tumor cells positive for Ki-67 correlated with clinical outcome. In this present work we studied 42 cases of perineal gland neoplasms, being 15 adenomas, 15 epitheliomas and 12 carcinomas. We used 13 tissue samples of normal perianal gland as control. From each animal we obtained information such as gender, age, race, presence of other malignancies, neutering status, whether if there were female contraceptive use, duration, recurrence and survival time. Of the 42 cases of perianal gland neoplasms, 34 (80.95%) were from males and eight dogs (19.05%) females. The males average age with cancer was 9.8 years and 7.4 years for females and for both sexes aged between 5 and 15 years. In regard to race, 11 (26.19%) were no breed, 9 (21.42%) were Poodle, and 4 (9.52%) were Siberian Husky and Cocker Spaniels. The history of diagnosis of other cancers, was found in 23.80% of the animals in this study. In relation to castration, 32 (94.11%) of males were not castrated and only 8 (19.05%) were females. The progression of the tumor showed an average of 1.2 years. History of recurrence of cancer were reported in 14 animals, and was higher (66.66%) for carcinomas. Ki-67 staining revealed that the carcinomas showed higher proliferation rate (9.87%) compared to groups of epitheliomas... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:34:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:01:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 17898.pdf: 1328862 bytes, checksum: c348bf7d018b290edc62f87767ab2d14 (MD5) / Dissertacao (Mestrado Profissionalizante em Lasers em Odontologia) / IPEN/D-MPLO / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP; Faculdade de Odontologia, Universidade de São Paulo, São Paulo

Orientadores: João Ernesto de Carvalho, Wanda Pereira Almeida / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T13:14:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kohn_LucianaKonecny_D.pdf: 3966647 bytes, checksum: 884bfab3a168fe2feddf628f0cc13684 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Os adutos de Baylis-Hillman apresentam em sua estrutura grupos funcionais passíveis de interação com biomoléculas, tornando-os potentes protótipos para o desenvolvimento de novas drogas antineoplásicas. O objetivo deste estudo é avaliar a atividade anticâncer de alguns b-hidroxiacrilatos e alguns derivados hidrogenados e protegidos. As substâncias contendo ligação dupla conjugada a carbonila foram obtidas através da reação de Baylis-Hillman, catalisada por DABCO, entre acrilato de metila e o aldeído correspondente. Os derivados hidrogenados e os protegidos foram obtidos pelo tratamento do aduto correspondente com hidrogênio (H2, Pd/C) e cloreto de trietilsilila, respectivamente. Os testes in vitro foram realizados com sete linhagens: UACC-62 (pele tipo melanoma), MCF-7 (mama), NCI-H460 (pulmão), OVCAR-3 (ovário), PC-03 (próstata), 786-0 (rim) e NCI-ADR (mama resistente) em diferentes concentrações (0,25 a 250mg/mL). Os resultados foram obtidos através do ensaio do doseamento protéico pela sulforrodamina B.Os adutos aromáticos apresentaram atividade antiproliferativa significativa, enquanto seus derivados hidrogenados não inibiram o crescimento celular. Em relação aos diferentes substituintes do anel aromático, o aduto 9 apresentou maior efeito citocida, porém sem seletividade. Já o aduto 10, com substituinte doador de elétrons, apresenta seletividade para a linhagem de carcinoma ovariano. O aduto 4 com substituinte retirador de elétrons, apresentou o melhor perfil de atividade com potência elevada, concentração-dependente e seletividade. O fato do grupo NO2 ser fortemente retirador de elétrons parece ter sido decisivo para a atividade, visto que é o único fator diferencial do aduto com substituintes doadores.O aduto 4 foi selecionado para verificação de sua toxicidade e possível(is) mecanismo(s) de ação. A dose letal 50 (DL50) em camundongos Swiss foi de 1,3g/Kg de peso corporal animal, sendo considerado de baixa toxicidade segundo Loomis em ¿Fundamentos de Toxicologia¿. As alterações morfológicas desta substância sobre a linhagem de ovário (OVCAR-3) estão em concordância com o resultado obtido no teste de atividade antiproliferativa, uma vez que manteve uma resposta concentração dependente, com um aumento da citotoxicidade em relação à dose utilizada e a morte celular pelo processo de apoptose. A possibilidade de o aduto estar inibindo a proliferação celular através de intercalação na dupla fita de DNA foi descartada através do ensaio DNA methyl green no qual o aduto 4 não apresentou atividade quando comparado a doxorrubicina, a qual apresentou intercalação concentração dependente na faixa de 32 a 82%, confirmando assim nossa hipótese que o aduto não intercalaria com a dupla fita de DNA. Quando foi avaliada a interferência do óxido nítrico (NO) na atividade antitumoral pode-se observar claramente a perda de atividade da substância quando a cultura foi pré-tratada com L-NAME para a linhagem NCI-ADR e diminuição do potencial da atividade para as demais linhagens; com o pré-tratamento com AMG só ocorreu a diminuição da atividade. A quantificação enzimática permitiu concluir que a atividade do aduto 4 tem correlação com a NOs constitutiva dependente de cálcio (nNOs e eNOs). Os resultados interessantes com os inibidores da NOs sobre a linhagem de mama (NCI-ADR) que expressa o fenótipo de resistência a múltiplas drogas (MDR) sugere a hipótese dessa substância ter alguma correlação com o processo de resistência. Dessa forma, tanto o derivado 4 como a doxorrubicina tiveram sua atividade anticâncer avaliada na presença de um bloqueador de canais de Ca+2, o verapamil. Verificou-se que a atividade da doxorrubicina aumenta significantemente na presença do verapamil sem alterações na atividade do aduto 4. Esse resultado descarta a hipótese de que esta substância tenha envolvimento com o processo de resistência.Conclui-se que os adutos de Baylis-Hilman apresentam atividade antiproliferativa ¿in vitro¿ em células tumorais humanas sendo esta dependente o sistema a-b insaturado e anel aromático presente na estrutura. O padrão toxicológico observado na análise permite dizer que a morte celular ocorre por apoptose e possui baixa atividade em fibroblastos normais. A toxicidade ¿in vivo¿ foi avaliada como ligeiramente tóxico / Abstract: Baylis-Hillman adducts present in their structures functional groups capable to interact with biomolecules. This capacity makes them good lead compounds for the design of anti-neoplastic drugs. This study is focusing on anticancer activity evaluating for some b-hydroxyacrylates and their hydrogenated or O-protected derivatives. Baylis-Hillman adducts of this study were obtained from reaction between an aldehyde and methyl acrylate in the presence of 1,4-diazabicyclo-2,2,2-octane (DABCO). Hydrogenated or O-protected BHAs-derivatives were produced from the hydrogenation (H2, Pd/C) or treatment of correspondent BHA-precursor with triethylsilil chloride and triethylamine. In vitro tests were performed against the following human tumor cell lines: UACC62 (melanoma), MCF-7 (breast), NCI-460 (lung), OVCAR-3 (ovarian), PC-03 (prostate), 786-0 (renal), NCI-ADR (multi-resistant breast). BHAs concentration were employed in the range of 0.25 - 250 mg/mL and doxorubicin (DOX, at the sameconcentration range), as positive control. Cell proliferation was determined by spectrophotometric assay using sulforhodamine B as protein-binding dye. Aromatic adducts displayed significant antiproliferative activity while their hydrogenated derivatives were not able to inhibit cell growth. Concerning to different groups attached in the aromatic ring, adduct 9 presented the highest cytotoxic activity, however with no selectivity. On the other hand, adduct 10, which possess an electron-donating group in the aromatic ring, show to be selective for OVCAR-3 (ovarian cancer cell). Electron-withdrawing group (-NO2 in adduct 4) improved both potency and selectivity of Baylis-Hillman adduct. These results showed that the presence of electron-withdrawing groups in the aromatic is very important for determining high activity of this Baylis-Hillman adduct. Based on this, adduct 4 was chosen for verifying of its toxicity on mice swiss as well as the possible mechanism of action of this molecule. Lethal dose (LD50) was shown to be 1.3 g of adduct 4/Kg of corporeal weight mouse, demonstrating that this compound has low toxicity according to Loomis (Fundamentos de Toxicologia). In addition to this, morphological modifications caused by adduct 4 on OVCAR-3 are in agreement with results obtained in the antiproliferative activity assays where it was observed a concentration-dependent effect of this compound. DNA methyl green assay demonstrated that the adduct 4 is not able to bind DNA as compared to doxorubicin a positive control. Interestingly, pre-treatment of NCIADR with Nitric Oxide Synthase (NOS) inhibitor NG-Nitro-L-arginine methyl ester (LNAME) abolished the antiproliferative activity of adduct 4. No significant loss of activity for adduct 4 was observed on the other cancer cell lines when they were pre-treated with LNAME. Only slight decrease of adduct 4 activity studied was observed on all cancer cell lines under pre-treatment with NOS-inducible inhibitor aminoguanidine (AMG) suggesting that the antiproliferative activity of adduct 4 on NCI-ADR is related to the increase of constitutive NOS activity. However, measurement of NOS activity using substrate labeled with 14C showed decreasing in the activity of constitutive NOS (nNOS and eNOS) according to the time of NCI-ADR cells exposure to adduct 4. Although these results are not conclusive, it is noteworthy the involvement of NOS enzyme in the antiproliferative activity of adduct 4 on NCI-ADR cells. Since NCI-ADR cells present multiple drugs resistance (MDR) and considering the participation of NOS enzymes it seems that the effect of adduct 4 may be related to the resistance process of these cells. Nevertheless, the antiproliferative activity of adduct 4 on NCI-ADR in the presence of the calcium channels blocking verapamil revealed that no alteration on adduct 4 activity was observed suggesting that calcium channels are not involved in the mechanism of action of this adduct. Overall, these results indicate that Baylis-Hillman adducts present in vitro antiproliferative activity against different human cancer cell lines. This activity is associated to the presence of a,b-unsaturated system and aromatic ring. Among the compounds studied, adduct 4 was the most active and selective compound. Besides this, the high cytotoxic activity of adduct 4 against cancer cells appears to be specific for tumor cells since in vivo assay demonstrated low toxicity of this compound (1.3 g/Kg) on mice as well as low in vitro activity on normal fibroblasts. Cell death caused by adduct 4 presents hallmarks of apoptotic process / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:34:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:01:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 17898.pdf: 1328862 bytes, checksum: c348bf7d018b290edc62f87767ab2d14 (MD5) / Dissertacao (Mestrado Profissionalizante em Lasers em Odontologia) / IPEN/D-MPLO / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP; Faculdade de Odontologia, Universidade de São Paulo, São Paulo

Orientador: Sebastiao Roberto Taboga / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T02:18:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Campos_SilvanaGiselePegorinde_D.pdf: 8120725 bytes, checksum: 6e1192220bc56007d359fcae3023e8d1 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Há um grande interesse em melhor compreender a biologia da próstata devido à sua alta propensão em desenvolver lesões proliferativas, estando entre as mais comuns neoplasias que acometem o homem na atualidade. Entre os fatores de risco que contribuem para o aumento destas doenças destaca-se o envelhecimento, período em que ocorrem acentuados desequilíbrios hormonais. Vários grupos de pesquisa vêm tentando desenvolver, caracterizar e validar modelos roedores para análise do câncer de próstata sob diferentes aspectos e, modelos autóctones, têm desempenhado papel relevante nesse campo. Neste trabalho foi realizada a avaliação do comportamento biológico da próstata ventral do roedor gerbilo (Meriones unguiculatus) em fases distintas de seu desenvolvimento pós-natal. Em uma primeira etapa caracterizou-se através de análises morfológicas (estruturais e ultra-estruturais) e quantitativas os componentes celulares dos compartimentos epitelial e estromal, bem como o papel funcional de suas populações celulares na glândula. Para tanto foram utilizados gerbilos jovens, adultos e velhos. Considerando a próstata de animais jovens, constatou-se que nestes a glândula encontra-se estrutural e funcionalmente imatura. Já em animais adultos e velhos a atividade sintética está bem estabelecida e permanece estável nestas duas idades. Entretanto, a morfologia prostática em animais velhos apresentou-se diferenciada. Em uma mesma glândula puderam ser constatadas regiões funcionais com epitélio secretor semelhante aos adultos e, em outras, áreas completamente alteradas, dispondo de lesões histopatológicas. O comportamento prostático nas três fases do desenvolvimento analisadas foi diretamente influenciado pelos níveis de testosterona no soro, comprovando a importância desse andrógeno para homeostase e funcionalidade glandular. E, em animais velhos, o declínio de testosterona esteve associado a alterações proliferativas na glândula. Devido a essas constatações em uma segunda etapa, avaliou-se, exclusivamente, a próstata de animais velhos com o intuito de se caracterizar os principais tipos de lesões que podem acometê-la. As alterações mais freqüentes foram de origem epitelial, como as neoplasias intra-epiteliais (PIN), carcinomas microinvasivos e adenocarcinomas. O potencial invasivo das células anômalas pôde ser comprovado ultra-estruturalmente através da ruptura da membrana basal em alguns ácinos. No estroma, hiperplasia celular, quando constatada, esteve sempre associada a sítios de epitélio anômalo. Adicionalmente, uma maior deposição de fibrilas de colágeno (gerando fibrose estromal) foi encontrada em todos gerbilos velhos analisados. Parâmetros nucleares e nucleolares somente não foram efetivos para diagnosticar o potencial de severidade das alterações. Os índices de proliferação e morte celular, porém indicaram maior turnover celular à medida que alterações histopatológicas tornaram-se invasivas. A partir destes dados constatou-se que o gerbilo é um bom modelo para análise do comportamento prostático em diferentes fases do desenvolvimento pós-natal. Adicionalmente, o animal velho tem alta propensão em desenvolver alterações prostáticas espontâneas e estas podem auxiliar na melhor compreensão da evolução biológica do câncer prostático humano propriamente / Abstract: There is a great interest in understanding the prostate biology due to its high propensity in developing proliferative lesions. At the present time, this kind of illnes is one of the most common neoplasias which may damage men. Among the risk factors that contribute to the prostate cancer increase stands out aging, period when an accentuated hormonal unbalances happens. Several research groups are trying to develop, characterize and validate rodent models for analysis of the prostate cancer and, autochthonous models have been playing a relevant role in these aspects. In the present work, the biological behavior evaluation of the ventral prostate of gerbil rodent (Meriones unguiculatus) was accomplished in three different phases of postnatal development. Initially, the cellular components of epithelial and stromal compartments, as well as, the functional activity of those cellular populations in the gland were characterized through morphologic (structural and ultrastructural) and quantitative analyses. For this, young, adult and old gerbils were employed. Considering the prostate of young animals, it was verified that the prostate gland is structural and functionally immature. In adult and old animals the synthetic activity is well established and remained stable. However, in old animals, the prostatic morphology presented alterations. In a same gland it could be observed functional areas with a secretor epithelium similar to adults and regions completely modified, exhibiting histopathologic lesions. The prostatic behavior in the three phases of development was influenced directly by the serum testosterone levels, proving the importance of this androgen for glandular homeostasis and its functionality. In the old animals the testosterone decline was associated to the proliferative alterations presented in the gland. Because of these results, in a second stage of experiments, it was evaluated only the prostate of old animals with the purpose of characterizing the main types of lesions which may be develop in these gerbils. The most frequent changes noted were those originated in the epithelium, as the prostatic intraepithelial neoplasia (PIN), microinvasive carcinomas and adenocarcinomas. Ultrastructurally, the invasive potential of anomalous cells could be confirmed by the basement membrane disrupted noted in some acini. In the stroma, the cellular hiperplasia, when verified, it was always associated to the anomalous epithelium sites. Additionally, a larger deposition of collagen fibrils, which generates stromal fibrosis, it was found in all old gerbils analyzed. Nuclear and nucleolar parameters were not effective in diagnosing the severity potential of those alterations. The cellular proliferation and death indexes, however, indicated a larger cellular turnover according as the histhopatologic lesions become invasives. Concluding, these analyses allow confirming that the rodent gerbil is a good model for prostate behavior analysis in different phases of postnatal development. The old animal revealed a high propensity in developing spontaneous prostatic alterations and these changes may help to comprehend the natural course of the neoplasia's multistep and its biological behavior, contributing to a better understanding of the human prostate cancer / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Karina Gottardello Zecchin, Edgard Graner / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-24T17:35:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ortega_RoseMara_D.pdf: 2691297 bytes, checksum: ea4bceee611c0e68c84223cc02b8fd52 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Ácido graxo sintase (FASN - fatty acid synthase, EC 2.3.1.85) é a enzima metabólica responsável pela síntese endógena do ácido graxo saturado palmitato, a partir dos precursores acetil-CoA e malonil-CoA. Diversos estudos mostram que, em contraste com a maioria das células normais, FASN é altamente expressa em vários tipos de neoplasias malignas humanas, tais como as de próstata, mama e melanoma sendo que, em alguns destes tumores, a alta expressão de FASN está associada a um pior prognóstico. A inibição da enzima FASN resulta em inibição da proliferação e induz morte celular em diversas neoplasias malignas. Recentemente demonstramos que, in vitro, a inibição específica da atividade de FASN em linhagem celular de melanoma murino, B16-F10, induz a via intrínseca da apoptose, com liberação de citocromo c e ativação de caspase-3, assim como altera a composição dos ácidos graxos livres presentes nas mitocôndrias das células B16-F10. O objetivo deste trabalho foi investigar de que maneira a inibição farmacológica de FASN reduz a proliferação de células B16-F10, in vitro e in vivo, utilizando C75 como inibidor de FASN. O tratamento de células e animais com C75 reduziu significativamente a proliferação celular e induziu apoptose. Houve significativa redução de células na fase S do ciclo celular, com acúmulo de células de G0/G1, em comparação com os controles. Western blottings feitos a partir de extratos de células em cultura e de tumores intraperitoneais mostraram aumento de p21WAF1/Cip1, p27Kip1, redução de Skp2 e cdk2, sem mudanças nos níveis de cdk4, 6 e ciclina E após tratamento com C75. A especifidade destes resultados foi confirmada pela redução da atividade enzimática de FASN após tratamento com C75 e pelo silenciamento de FASN com RNAi. Efeito anti-tumoral de C75 foi sugerido pela formação de tumores subcutâneos de menor volume quando comparados aos tumores de animais controle. Nossos achados mostram que a proliferação de células de melanoma é dependente de FASN, e que sua inibição primeiramente altera os níveis de proteínas envolvidas na transição de G1 para S, para posteriormente induzir apoptose em células de melanoma B16-F10 / Abstract: Fatty acid synthase (FASN) is the metabolic enzyme responsible for the endogenous synthesis of the saturated long-chain fatty acid palmitate, from the precursors acetyl-CoA and malonyl-CoA. In contrast to most normal cells, the overexpression of FASN in several human malignancies, such as those of prostate, breast, ovary, melanoma, and soft tissue sarcomas has been associated with poor prognosis. FASN inhibition reduces cell proliferation by blocking DNA replication during S-phase, and induces apoptosis in several malignant neoplasias. We have previously shown that the specific inhibition of FASN activity significantly reduce proliferation and promote apoptosis, as demonstrated by the cytochrome c release and caspase-9 and -3 activation, as well as induces signi?cant changes in the free fatty acids composition of B16-F10 cells mitochondria. Here we investigated the events involved in cell cycle arrest subsequent to FASN inhibition with C75. C75 treatment significantly reduced melanoma cells proliferation and induced apoptosis in vitro and in mice. Cell cycle arrest after C75 treatment was evidenced by a significant increase in G0/G1 phase, as well as decline of the S phase, in comparison with untreated cells. Western blotting analysis showed significant accumulations of the tumor suppressor proteins p21WAF1/Cip1 and p27Kip1, together with decreased amounts of Skp2, essential for the proteasomal degradation of p27Kip1, and cdk2, a Ser/Thr protein kinase necessary for the G1/S transition, in C75-treated cells or mice tumors. The levels of other proteins involved in G1/S cell cycle progression, such as cyclin E, cdk4, and cdk6 were not affected by FASN inhibition. These results were confirmed by inhibition of FASN activity after C75 treatment and by RNAi for FASN. Antitumoral effect of C75 was suggested by reduced subcutaneous tumors volume when compared to controls mice. Our results suggest that melanoma murine B16-F10 cells proliferation is dependent on FASN activity, and its inhibition first modify the levels of some proteins involved in the transition G1?S of cell cycle, to finally induce apoptosis in neoplasic cells / Doutorado / Estomatologia / Doutora em Estomatopatologia

Orientador: Pablo Agustin Vargas / Texto em português e inglês. / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-25T00:22:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Diaz_KatyaPulido_D.pdf: 16670871 bytes, checksum: b517ca4541e83574a899265d975bcafd (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Introdução: Os tumores das glândulas salivares (TGS) são lesões incomuns e correspondem a aproximadamente 3 a 10% das neoplasias que acometem a região de cabeça e pescoço. A angiogênese, proliferação celular e a expressão da enzima ácido graxo sintase (FASN) podem interferir nos mecanismos de progressão tumoral e comportamento clínico dos tumores malignos de glândulas salivares. Objetivos: Avaliar imunoistoquímicamente a angiogênese, índice de proliferação celular e expressão de FASN em tumores malignos de glândulas salivares maiores e menores e correlacionar a expressão destes biomarcadores com os dados clínicos e agressividade histopatológica além de comparar a expressão de FASN e Ki67 entre 12 casos de adenoma pleomorfo e 6 de carcinoma ex-adenoma pleomorfos. Pacientes e Métodos: Foram utilizadas 52 peças cirúrgicas de pacientes portadores de tumores malignos de glândulas salivares maiores e menores e 12 de adenomas pleomorfos como controle do marcador FASN e Ki67. As amostras de tecidos dos TGS malignos foram submetidas a reações imunoistoquímicas para os anticorpos CD31, CD34, CD105, e para ambos tipos de tumores Ki-67 e FASN. Para a quantificação microvascular e determinação da proliferação celular utilizamos os métodos quantitativos Microvessel Analysis Algorithm e Nuclear Image Analysis Algorithm com o software ImageScope (Aperio Scanscope® CS System). Foi utilizado o método semi-quantitativo convencional para a análise do marcador FASN. Resultados: O local anatômico mais acometido foi a parótida (67,3%), os pacientes apresentaram idade média de 50,2±21,9 anos e 17,6% tiveram metástases à distância. A densidade microvascular nas áreas intra e peritumorais com marcadores CD31, CD34 e CD105 não mostrou significância estatística em relação aos índices de proliferação celular ou expressão de FASN (P>0,05). Os TGS malignos de alto grau apresentaram altos índices de proliferação celular (P<0,006) maior expressão de FASN do que os TGS de baixo grau de malignidade (P<0,003) e de igual forma em 6 casos de carcinoma ex-adenoma pleomorfo do que em adenomas pleomorfos (P<0,001). Conclusões: Esses dados sugerem que os tumores malignos de glândulas salivares com altos índices de Ki-67 e FASN podem estar relacionados a maior proliferação celular em tumores de alto grau de malignidade e podem contribuir na identificação do componente maligno do carcinoma ex-adenoma pleomorfo / Abstract: Salivary gland tumors (SGT) are uncommon and account for approximately 3-10% of cancers affecting the head and neck region. Angiogenesis, cell proliferation, expression of the enzyme fatty acid synthase (FASN) may interfere with the mechanisms of tumor progression and clinical behavior of malignant SGT. Objectives: To assess the expression of biomarkers related to angiogenesis and cell proliferation, as well FASN protein in major and minor malignant SGT, correlating the results with clinical findings and histopathological agressivity. Also, to compare the expression of FASN and Ki67 between 12 pleomorphic adenomas and 6 carcinomas ex-pleomorphic adenomas. Patients and Methods: 52 surgical specimens from patients with malignant SGT were assessed. We performed immunohistochemical study for CD31, CD34, CD105, Ki67 and FASN antibodies. For quantification and determination of the microvascular density (MVD) of tumors, quantitative method was used with Microvessel Analysis Algorithm (software Aperio Scanscope® CS System) and for nuclear analysis was used Nuclear Image Analysis Algorithm, but for FASN only conventional semi-quantitative method was used. Results: The most affected anatomical site was the parotid gland (67.3 %), average age 50.2±21,9 years and 17.6% of patients had distant metastases. Microvascular analysis in intra and peritumoral areas with markers CD31, CD34 and CD105 showed no statistical significance in relation to rates of cell proliferation and expression of FASN (P >0.05). However, patients with high-grade malignant SGT showed higher rates of cell proliferation (P<0.006) and increased expression of FASN (P<0.003) at the same time to 6 cases of carcinoma ex-pleomorphic adenoma compared with 6 of pleomorphic adenoma (P<0.001). Conclusions: These data suggest that malignant salivary gland tumors with high levels of Ki-67 and FASN may be associated with high index of cellular proliferation in high-grade malignant SGT and its overexpression may be a useful marker for carcinoma ex-pleomorphic adenoma / Doutorado / Patologia / Doutora em Estomatopatologia

Orientador: José Angelo Camilli / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T08:42:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Domingues_JulianaAlmeida_M.pdf: 6712230 bytes, checksum: abfef192b69eeb8cc178a08e435692fd (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Cimentos de fosfato de cálcio (CFC) a base de ?-TCP, que originam como processo final de cura uma hidroxiapatita deficiente em cálcio (CDHA) são muito utilizados como biomateriais para osso, por possuírem similaridade estrutural e química à porção inorgânica do tecido ósseo. Porém o uso dos CFC se restringe a pequenos defeitos bucomaxilofaciais e recobrimento de próteses metálicas, em função do déficit considerável de suas propriedades mecânicas. Visando melhorar as propriedades mecânicas dos CFCs estudos têm sido direcionados à aplicação de fibras de vários materiais, como as fibras de carbono, as fibras de vidro, as de carboneto, entre outras. No entanto, muitas dessas fibras introduzidas se mostraram tóxicas às células, impedindo sua aplicação clínica. Recentemente, os "whiskers" (fibras curtas de monocristal) de biocerâmicas vêm sendo estudados como outro tipo de reforço, cujos resultados têm se mostrado promissores por melhorarem as propriedades mecânicas e biológicas dos materiais. Nesse trabalho, a resposta biológica das CDHA pura e contendo 5 e 10% de "whiskers" de wollastonita, foram estudadas através de um sistema de cultivo celular com células osteoblásticas, o qual tem sido muito utilizado para elucidar a resposta celular em biomateriais. Porém cultivar células em CDHAs não é uma tarefa fácil, pois o processo de hidrólise sofrido por esses materiais promove a liberação de íons para o meio de cultura, o que acarreta na mudança de pH e concentração iônica do meio. Essas mudanças promoveram a morte das células após 48h de cultivo. Foi possível manter as células viáveis ao longo do tempo realizando a lavagem dos discos de CDHA com DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) antes da semeadura e também com a troca diária do meio de cultura. Nossos resultados demonstraram que as CDHA contendo "whiskers" foram capazes de estimular a proliferação celular quando comparadas com a placa de poliestireno e a CDHA pura. No ensaio de MEV foi possível observar uma densa camada celular na superfície da CDHA contendo 10% de "whiskers". A atividade da fosfatase alcalina (FAC) foi significativamente maior nas CDHAs contendo "whiskers", sendo proporcional a concentração de "whiskers" wollastonita nas amostras, o ensaio de mineralização corroborou com o ensaio de FAC, no qual a CDHA contendo 10% de "whiskers" apresentou maior produção de matriz mineralizada. Tendo-se em vista os presentes resultados pode-se dizer que as CDHA contendo "whiskers" de wollastonita são biomateriais promissores para engenharia tecidual óssea, pois foram capazes de estimular a proliferação e diferenciação celular, além da resistência mecânica melhorada pela adição dos "whiskers" / Abstract: Calcium phosphate cements (CFCs) are widely used as biomaterials for bone because they have chemical and structural similarity to the inorganic portion of bone tissue. But the use of CFCs is restricted to maxillofacial small defects and coating metallic prostheses, due to the considerable deficit of its mechanical properties. In order to improve the mechanical properties of CFCs studies have focused on the application of fibers of many materials such as carbon fibers, glass fibers, carbide fibers among others. However, many of these fibers are shown toxic to the cells, preventing their clinical application. Recently, the "whiskers" (short crystal fibers) of bioceramics have been studied as another type of reinforcement and the results have shown promise for improving the mechanical and biological properties of materials. In this work the biological response of hydroxyapatites deficient in calcium (CDHA) pure and containing 5 and 10% "whiskers" of wollastonite, were studied using a cell culture system with osteoblastic cells, which has long been used to elucidate the cell behavior in biomaterials. However cultivating cells in CDHAs is not an easy task because the hydrolysis process undergone by such materials promotes the release of ions to the culture medium, which results in the change of pH and ionic concentration of the medium. These changes promoted cell death after 48 h of cultivation. Cell viability was maintained for 14 days by a simple washing of CDHA discs with DMEM before cell culture and also with daily changes of culture medium. Our results demonstrate that CDHA containing "whiskers" were able to stimulate cell proliferation when compared to the polystyrene plate and CDHA pure. In the assay by SEM was possible to see a dense cell layer on the surface of the CDHA containing 10% "whisker." The alkaline phosphatase activity (ALP) was significantly higher in CDHAs containing "whiskers" being proportional to the concentration of "whiskers" wollastonite samples. The mineralization assay corroborated with ALP assay in which the CDHA containing 10% " whisker "showed higher production of mineralized matrix. In summary the CDHAs containing "whiskers" of wollastonite are excellent biomaterials for bone tissue engineering, because they were able to stimulate cell proliferation and differentiation, as well as mechanical strength improved by the addition of "whiskers" / Mestrado / Biologia Celular / Mestra em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Oslei Paes de Almeida / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-19T00:01:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martinez_MarisolMartinez_M.pdf: 7220256 bytes, checksum: f7a9e6a4858d9247d65345dd79c7382b (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Os tumores odontogênicos (TO) são um grupo heterogêneo de lesões derivadas de tecidos dentários, que ocorrem nos ossos gnáticos e tecidos adjacentes. Os TO são raros, na grande maioria benignos, representando menos de 4% de todos os espécimes recebidos em laboratórios de patologia bucal. Os TO malignos freqüentemente apresentam dificuldades para diagnóstico e correta classificação, com vários pontos ainda não bem esclarecidos. O objetivo deste estudo foi analisar as características clínicas, histopatológicas e imunoistoquímicas em 39 casos de TO malignos. A idade média dos pacientes foi de 43,37 anos, com 16 casos acometendo pacientes do gênero feminino, 20 masculino e 3 de gênero desconhecido. Quatorze casos eram carcinoma ameloblástico (CA), 11 fibrossarcoma ameloblástico (FSA), 7 carcinoma espinocelular intra-ósseo primário (CEIP), 4 carcinoma odontogênico de células claras (COCC) e 3 carcinoma odontogênico de células fantasmas (COCF). Observou-se em alguns casos necrose, invasão perivascular, invasão perineural, infiltrado inflamatório e calcificações distróficas. A análise imunoistoquímica para citoqueratinas mostrou que a maioria dos casos foram positivos para CK5 e CK14 (69,2% e 53,8%), com expressão menor para CK7 e CK19. A imunoexpressão de Ki-67, p53 e p63 para CA foi 19,8%, 33,0% e 94,7%, respetivamente; para CEIP foi 52,9%, 55% e 91,5%; para COCC 9,0%, 4,5% e 60,8%, para COCF 17,4%, 20,9% e 95,9% e para FSA 16%, 28,0% e 10,% respectivamente. Onze casos foram negativos para CD138, e o restante dos casos mostraram variável perda da expressão focal para esse anticorpo. A expressão para E-caderina e ?-catenina foi negativa em 12 e 11 casos respectivamente, com perda de expressão focal, associada a variação da intensidade no restante dos casos. Dentre os casos positivos para ?-catenina, foram observados 5 casos com marcação nuclear / Abstract: Odontogenic tumors correspond to a heterogenous group of lesions derived from dental tissues, involving the jaws and adjacent tissues. OT are rare, te majority benign, representing less than 4% of all specimes of an oral pathology laboratory. OT frequently present difficulties for the correct diagnosis and classification, with various points yet to be clarified. The objetive of this study was to analyse the clinical, histological and the expression of immunohistochemical markers in 39 cases of malignant OT. The mean age of the patients was 43.37 years, with 16 cases occurring in women, 20 in men and in 3 the gender was not possible to obtain. Fourteen cases were ameloblastic carcinoma, 11 ameloblastic fibrosarcoma, 7 primary intraosseous squamous carcinoma, 4 clear cell odontogenic carcinoma and 3 ghost cell odontogenic carcinoma. In some cases markers of malignancies as necrosis, perivascular and perineural invasion, inflammation and dystrophic calcificications were observed. By immunohistochemistry most cases were positive for CKS 5 and 14, with lower expression for CKS 7 and 19. In AC Ki-67, p53 and p63 showed values of 19.8%, 33.0% and 94.7% respectively. Corresponding values for PISC were 52.9%, 55.0% and 91.5%, for CCOC of 9.0%, 4.5% and 60.8%; for GCOC of 17,4%, 20,9% e 95,9% and for AFS of 16%, 28,0%. Eleven cases were negative for CD138, and in all others expression was positive but variable. E-caderin and B-catenin was negative in 12 and 11 cases respectively, with variable expression in the positive cases. In 5 cases B-catenin also showed nuclear expression. / Mestrado / Patologia / Mestre em Estomatopatologia

The termina1 enzyme in the linoleoyl-CoA desaturase enzyme complex, delta-6-desaturase was implied in the control of cell proliferation in cancer cells. One of the aims of this study was to isolate the terminal enzyme. It was decided that in order to isolate this enzyme it was first necessary to isolate the entire complex and then to enzymatically solubilise the first two components of the complex i e cytochrome b5 reductase and cytochrome b5 from the complex resulting in a pure delta-6-desaturase . The first two components were isolated and purified using simplified and easily reproducible methodologies which could be utilised in the final purification of delta-6- desaturase. The entire enzyme complex, linoleoyl-CoA desaturase was also isolated in a pure form and this pure complex was used to attempt to isolate delta-6-desaturase. The terminal enzyme was isolated with some cytochrome b5 still bound to it. The methods used had proven to be successful and with some modifications should yield a pure enzyme. Zinc and GLA were known to play a role in the inhibition of cancer cell proliferation and zinc was hypothesised to inhibit cell growth by stimulating the activity of the linoleoyl-CoA desaturase enzyme complex which is involved in the regulation of cell proliferation. GLA is the product of the reaction that this enzyme complex catalyses and GLA has been shown to inhibit cancer ce ll growth. The effect of GLA on cell growth and linoleoyl-CoA desaturase activity was thus investigated. Results showed that both zinc and GLA inhibited cell growth and that the combined addition of zinc and GLA generally resulted in the inhibition of cell growth and the activation of linoleoyl-CoA desaturase activity in the BL-6 cells while having a less pronounced effect on the LLCMK cells. The results of this study support the hypothesis that zinc may be a cofactor of linoleoyl-CoA desaturase.