Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao - Gisele Mendanha Nascimento.pdf: 238558 bytes, checksum: 50568ce756460f6c8824f193341cd280 (MD5) Previous issue date: 2010-08-16 / The objective of this study was to evaluate the supplementation of L-glutamine in the diet of chickens on the floor and fed diets without anticoccidial agents and promoters of growth. Were used 500 chicks, males, Cobb distributed in randomized blocks design with five treatments and four replicates with 25 birds each. The treatments consisted of increasing levels of glutamine in the diets (0.0, 0.5, 1.0, 1.5 or 2.0%) throughout the rearing period, 42 days old. Were evaluated performance, digestibility (18-21 days), carcass yield and Histomorphometry of small intestine (18 and 42 days old). Data were submitted to polynomial regression analysis and means compared by Scott Knott (0,05) test. There was an effect of glutamine supplementation only during pre-starter feed, and the best level of feed addition of 1%. The results for performance up to 42 days of age, carcass yield and nutrient digestibility of the diet showed no difference (P> 0.05) between the levels of glutamine in the diet. histomorphometry at 18 days of age difference was observed for crypt depth in the small intestine (duodenum, jejunum and ileum) (P <0.05), being the duodenum and ileum the best level of glutamine was 2% and jejunum 1%. For the results of histomorphometry at 42 days old, significant effect of glutamine to crypt depth in duodenum, jejunum and ileum, with the highest levels found in 1, 0.5 and 2% respectively. It is recommended the addition of 1% L-glutamine in the pre-started the improvement of feed conversion rate at 1-7 days of age and better development of the small intestine. / Objetivou-se com este estudo avaliar a suplementação da L-glutamina na ração de frangos criados no chão e alimentados com rações sem agentes anticoccidianos e promotores de crescimento sobre desempenho, rendimento de carcaça, digestibilidade e desenvolvimento intestinal. Foram utilizados 500 pintos, machos, da linhagem Cobb distruibuídos em delineamento em blocos ao acaso com cinco tratamentos e quatro repetições com 25 aves cada. Os tratamentos estudados foram níveis crescentes de glutamina nas rações (0,0; 0,5; 1,0; 1,5 ou 2,0%) durante todo o período de criação, 42 dias de idade. Foram avaliados desempenho, digestibilidade (18 a 21 dias), rendimento de carcaça e histomorfometria da mucosa intestinal (18 e 42 dias de idade). Os resultados foram submetidos a análise de regressão polinomial e as médias comparadas pelo teste Scott Knott (0,05). Houve efeito da suplementação de glutamina somente no período pré-inicial para a conversão alimentar, sendo o melhor nível de adição na ração de 1%. Os resultados para o desempenho até 42 dias de idade, rendimento de carcaça e digestibilidade dos nutrientes da ração indicaram que não houve diferença (P>0,05) entre os níveis de glutamina nas rações. Na histomorfometria aos 18 dias de idade foi observada diferença para profundidade de cripta na mucosa intestinal (duodeno, jejuno e íleo) (P<0,05), sendo que para duodeno e íleo o melhor nível de inclusão de glutamina foi 2% e para jejuno 1%. Para os resultados de histomorfometria aos 42 dias de idade, houve efeito dos níveis de glutamina para profundidade de cripta no duodeno, jejuno e íleo, sendo os melhores níveis encontrados de 1, de 0,5 e 2 % respectivamente. Recomenda-se a adição de 1% de L-glutamina na ração pré-inicial considerando a melhora na conversão alimentar no período de 1 a 7 dias de idade e no melhor desenvolvimento da mucosa intestinal.

Foram conduzidos três experimentos com os objetivos de avaliar a influência da glutamina e nucleotídeos nas dietas de frangos de corte, considerando o desempenho, desenvolvimento e atividade enzimática da mucosa intestinal. No 1º experimento, foi determinado os melhores níveis de suplementação das fontes de glutamina, isolado (L-Gln) ou associado com ácido glutâmico (Aminogut®), e de acordo com resultados obtidos para as características de desempenho e atividades enzimáticas (mucosa intestinal e pâncreas), observou-se melhor desempenho para aves suplementadas com 1,5% de L-Gln e 3,0% de Aminogut®. No 2º experimento, foi determinado o melhor período (1 a 7, 1 a 14 ou 1 a 21 dias de idade) de suplementação dos níveis ótimos das fontes de glutamina observados no experimento 1. Segundo dados de desempenho, atividades enzimáticas e morfometria do intestino delgado (duodeno, jejuno e íleo), determinou-se que as fontes de glutamina podem ser suplementadas durante os primeiros sete dias de vida das aves, proporcionando aumento nas atividades das enzimas digestivas e pancreáticas nos frangos. No 3º experimento, foram avaliados os efeitos de três fontes de ação trófica (L-Gln, Aminogut® e nucleotídeos) associadas à vacinação contra a coccidiose, sobre o desenvolvimento do intestino delgado e algumas respostas imunológicas das aves. Pode ser observado efeito negativo da vacinação sobre o desempenho e morfometria da mucosa intestinal, entretanto, ao final do período experimental, as fontes de glutamina mostraram-se eficiente em recuperar perdas epiteliais da mucosa intestinal das aves desafiadas contra a coccidiose. Portanto, a suplementação destas fontes de ação trófica pode ser uma estratégia para o bom desenvolvimento dos frangos quando submetidos à estresse vacinal, considerando ainda a viabilidade econômica pelo segmento produtivo. / Three experiments were carried out to evaluate the influence of glutamine and nucleotides in diets of broiler chickens, on performance, development and enzymatic activity of the intestinal mucosa. In the first experiment, was estimated the best levels of glutamine sources supplementation, isolated (L-Gln) or associated with glutamic acid (Aminogut®). According to results for performance characteristics and enzymatics activities (intestinal mucosa and pancreas), was observed best performance for birds supplemented with 1.5% of L-Gln and 3.0% of Aminogut®. In the second experiment, was determined the best supplementation period (1 to 7; 1 to 14 or 1 to 21 days of age) of levels of glutamine sources observed in the first experiment. The results of performance, enzymatics activities and small intestine morphometry (duodenum, jejunum and ileum), suggested that glutamine sources evaluated can be supplemented during the first seven days of age, providing an increase in the enzymatics digestives and pancreatic activities at the broiler chickens. In the third experiment, were evaluated the effects of three sources with action trophic (L-Gln, Aminogut® and nucleotides) associated with vaccination against coccidiosis on development of small intestine and immune responses of the broilers. It was observed negative effect of vaccination on performance and morphometry of intestinal mucosa, however, at the end of experimental period, the glutamine sources showed efficiency to recovery epithelial losses of intestinal mucosa of birds, which were challenged against coccidiosis. Therefore, the supplementation of the trophic sources can be a strategy for optimum development of broilers when submitted to vaccination stress, considering the economic viability by the productive segment.

Neospora caninum é um parasita Apicomplexa que causa doença neuromuscular em cães e abortamento em bovinos. Cães e coiotes são as únicas espécies reconhecidas como hospedeiros definitivos, nas quais ocorre a fase sexuada do ciclo evolutivo do N. caninum, com eliminação de oocistos através das fezes, os quais esporulam no ambiente e tornam-se infectantes. Apesar da importância dos oocistos como fonte de infecção para várias espécies de hospedeiros, a viabilidade e resistência desses oocistos a tratamentos físicos e químicos ainda são desconhecidas. Este estudo teve por objetivo avaliar a viabilidade de oocistos esporulados de N. caninum após tratamentos com diferentes desinfetantes, temperaturas e tempos de exposição. Três cães foram alimentados com tecido cerebral de búfalos soropositivos para anticorpos anti-N.caninum pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI 100) para a obtenção de oocistos. Desses, somente um cão eliminou oocistos tipo Neospora-Hammondia sendo confirmado serem de N. caninum por bioensaio em gerbilos e por métodos moleculares (PCR-RFLP). Os oocistos esporulados foram purificados e 11 alíquotas contendo aproximadamente 3000 oocistos por alíquota constituíram cada um dos tratamentos, sendo estes: Formol 10% por 1h; Amônia 10% por 1h; Álcool 70% por 1h; Álcool absoluto por 1h; Iodo 2% por 1h; Hipoclorito de sódio 10% por 1h; Temperatura ambiente, controle; -20ºC por 6h; 4ºC por 6h; 60ºC por 1m e 100ºC por 1m. Os tratamentos químicos foram todos realizados à temperatura ambiente. Após tratamento os oocistos foram divididos em alíquotas com 1000 oocistos cada e estas foram administradas, via oral, a gerbilos (1000 oocistos por gerbilo) sendo cada grupo experimental constituídos por três animais. Depois de 63 dias os gerbilos foram sacrificados e colheu-se sangue para a pesquisa de anticorpos anti-N. caninum (RIFI e western blotting) e tecidos para a pesquisa de cistos em esfregaço direto de cérebro e DNA do parasito (PCR em tempo real), além de pesquisa do agente por técnicas histopatológicas e imuno-histoquímica. Considerou-se eficaz o tratamento que confirmou a inviabilidade dos oocistos por resultados negativos em todas as cinco provas realizadas. Dos tratamentos realizados mostrou-se eficaz o uso de calor a 100ºC por 1 minuto e do hipoclorito de sódio a 10% por 1 hora, podendo ser estes indicados para o controle dessas formas no ambiente. / Neospora caninum is an Apicomplexan parasite that causes neuromuscular disorders in dogs and abortion in cattle. Dogs and coyotes are the only species identified as definitive hosts. The sexual phase of the N. caninum life cycle occurs within the host, and results in the shedding of oocysts in the feces that will sporulate in the environment and become infective. Despite their relevance as a source of infection for a number of different hosts, the resistance and viability of such oocysts to physical and chemical treatments are yet to be known. The purpose of this study was to assess the viability of N. caninum sporulated oocysts after exposure to treatments using different disinfectants, temperatures and periods of time. For acquisition of the oocysts, three dogs were fed brain tissue from buffaloes positive for antibodies to N. caninum by an indirect fluorescent antibody test (IFAT 100). Only one of the dogs excreted Neospora-Hammondia type oocysts. Such oocysts were confirmed to be N. caninum by bioassay in gerbils and molecular methods (PCR-RFLP). The sporulated oocysts were purified and 11 doses with approximately 3,000 oocysts each were treated as follows: 10% formaldehyde (formol) for 1 h; 10% ammonia for 1 h; 70% alcohol for 1 h; absolute alcohol for 1 h; 2% iodine for 1 h; 10% sodium hypochlorite for 1 h; Room temperature, control; -20ºC for 6 h; 4ºC for 6 h; 60ºC for 1 min, and 100ºC for 1 min. All chemical treatments were performed at room temperature. After treatment, the oocysts were divided into doses of 1,000 oocysts each and administered into three gerbils (Meriones unguiculatus) orally (1,000 oocysts per gerbil) per treatment. The gerbils were euthanized after 63 days. Blood samples were taken to be tested for the presence of N. caninum antibodies (IFAT and Western blotting analysis), and tissues samples to be tested for the presence of cysts by brain smear technique and detection of the parasite DNA (real-time PCR), and the identification of the parasite by immunohistochemical and histopathological examinations. In order to be considered an effective treatment, negative results should be observed in the gerbils of all five evaluations conducted. Out of the treatments carried out in this study, exposures to a temperature of 100ºC for 1 min and to a 10% sodium hypochlorite solution for 1 h were effective.

Eimeria tenella é umas das principais espécies que causam a coccidiose aviária. Para se estudar o perfil de expressão gênico quantitativo em estágios infectantes bibliotecas de LongSAGE foram geradas a partir de merozoítos e esporozoítos. Mais de 35.000 tags foram obtidas, das quais, 9.516 eram únicas. Para a identificação e anotação de genes diferencialmente expressos, as tags foram extraídas, contadas e analisadas estatisticamente por um pacote desenvolvido pelo nosso grupo, SAGE Analysis. Um total de 197 seqüências foram reconstruídas e anotadas automaticamente. Foi observado uma expressão estágio-específica e perfil transcricional distinto entre os estágios. Em merozoítos, foram encontradas proteínas envolvidas na tradução e manutenção da conformação protéica e em esporozoítos, os resultados positivos foram relacionados à cromatina, transporte e atividade catalítica. Para validação da técnica, a expressão diferencial de um pequeno conjunto de genes foi quantificada por RT-qPCR. Os resultados demonstraram uma boa correlação entre estas duas plataformas. / Eimeria tenella is one of the most important causing agents of poultry coccidiosis. To study the quantitative gene expression profile in zoite stages of LongSage libraries were generated from merozoites and sporozoites. More than 35.000 tags were obtained, whose 9.516 were unique. For identification and annotation of differential expressed genes, tags were extracted, counted and submitted to statistical analysis by Sage Analysis, software developed by our group. A total of 197 tags were reconstructed and automatic annotated. Stage-specific expression genes and distinct transcriptional profile were observed between these stages. In merozoites the results were related to protein translation and folding, and in sporozoites the proteins were involved to chromatin structure, transport and catalytic activity. To LongSAGE validation, differential expression was quantified using RT-qPCR to a small group of genes. Good correlation was observed between these platforms.

Este estudo teve por objetivos avaliar diferentes níveis de suplementação de ?-ácidos do lúpulo como aditivos de rações para frangos de corte sobre o desempenho e a manutenção do equilíbrio da microbiota intestinal após desafio com Eimeria. No experimento 1, foram alojados 1440 pintos de corte da linhagem Cobb 500, no período de 1 a 42 dias de idade, com 6 tratamentos e 6 repetições. Os tratamentos utilizados foram: controle negativo, ração sem antimicrobiano; controle positivo, ração com 30 mg/kg de bacitracina de zinco e rações com 30, 60, 120 ou 240 mg/kg de ?-ácidos do lúpulo, compondo 4 tratamentos adicionais. Os ?-ácidos foram microencapsulados com 30%de extrato. As rações foram formuladas à base de milho e farelo de soja, com inclusão de 5% de farelo de trigo e 5% de farinha de penas e vísceras. Aos 7 dias de idade todas as aves foram vacinadas contra coccidiose. As aves e as rações foram pesadas semanalmente para cálculo de desempenho. No experimento 2, foram alojados 1440 pintos de corte da linhagem Ross 308, no período de 1 a 42 dias de idade, com 6 tratamentos e 6 repetições. Os tratamentos foram: controle negativo, dieta basal; controle positivo, ração com 30 mg/kg de bacitracina de zinco; controle negativo mais desafio; controle positivo mais desafio; controle negativo suplementado com 30 mg/kg de ?-ácidos mais desafio; controle negativo suplementado com 240 mg/kg de ?-ácidos mais desafio. As rações foram formuladas à base de milho e farelo de soja com inclusão de 5% de farinha de penas e vísceras. Aos 14 dias de idade, as aves dos tratamentos 3, 4, 5 e 6 foram desafiadas, via oral, com 2x105 e 5x104 oocistos de Eimeria acervulina e E. tenella, respectivamente. As aves e as rações foram pesadas semanalmente para obtenção dos dados de desempenho. Aos 21 e 35 dias de idade das aves, coletou-se o conteúdo do intestino delgado e cecos das aves para análise da microbiota intestinal, com auxílio de técnicas moleculares. No experimento 1, aos 21 dias de idade as aves os tratamentos com 30 ou 60 mg/kg de ?-ácidos apresentaram desempenho semelhante às do controle positivo. Aos 42 dias houve melhora na conversão alimentar das aves recebendo 30 e 240 mg/kg de ?-ácidos ou antimicrobiano. No segundo experimento, a coccidiose causou significativa redução no desempenho das aves e nenhum dos aditivos utilizados foi capaz de reverter esta situação. Houve aumento de bactérias do gênero Clostridium no intestino delgado aos 21 dias, em consequência do desafio, entretanto, o maior nível de ?-ácidos reduziu esta população. Aos 35 dias de idade a infecção de coccidiose não alterou a comunidade bacteriana do intestino delgado, mas nos cecos houve aumento do gênero Bacteroides.Os ?-ácidos possuem potencial para serem utilizados nas dietas de frangos de corte em situações de baixo desafio, e podem auxiliar no controle da proliferação de Clostridium, embora ineficazes contra a Eimeria. / The objective was to evaluate increasing level of hops ?-acids in the feed on performance of broiler chickens. A pen trial using 1440 one-day old chickens, from 1 to 42 days, with 6 treatments and 6 replicates was conducted (Experiment 1). The experimental treatments were: negative control, basal diet; positive control, basal diet supplemented with zinc bacitracin, 30 mg/kg; and basal diet supplemented with 30, 60, 120 or 240 mg/kg of hops ?-acids, for 4 additional treatments. The corn soybean meal basal diet was formulated with inclusion of 5% poultry by-product meal and 5% wheat bran. At 7 days of age all birds were vaccinated against coccidiosis. The chickens and the feed were weighted weekly to calculate the performance. In the second experiment, the objective was to evaluate the supplementation of hops ?-acids on performance and the balance of intestinal microbiota of broilers, following challenge with Eimeria acervulina and E. tenella. A pen trial using 1440 one-day-old chickens, from 1 to 42 days, with 6 treatments and 6 replicates was conducted. The experimental treatments were: negative control, basal diet; positive control, basal diet supplemented witn zinc bacitracin, 30 mg/kg; negative controle + challenge; Positive control + challenge; negative control supplemented with 30 mg/kg of hops ?-acids + challenge; negative control supplemented with 240 mg/kg of hops ?-acids + challenge. The corn soybean meal basal diet was formulated with inclusion of 5% poultry byproduct meal. At 14 days of age, the birds in treatments 3, 4, 5 and 6 were challenged with 2x105 and 5x104 oocists of Eimeria acervulina and E. tenella, respectively. The chickens and the feed were weighted weekly to calculate the performance. At 21 and 35 days of age, the small intestine and ceca content was collected to analyze the intestinal microbiota, using molecular techniques. In the first experiment, at 21 days of age the treatment with 30 or 60 mg/kg of ?-acids had the same performance of chickens in positive control. At 42 days, the treatments containing 30 or 240 mg/kg of ?-acids and positive control had improved feed conversion. In the second experiment, there was worse performance in broilers chickens challenged with coccidiosis and the additives were not able to oppose this situation. There was increase in the Clostridium population in the small intestine at 21 days, due to challenge, however, the highest level of ?-acids decreasead this genus. At 35 days, the coccidiosis did not alter the bacterial community in the small intestine, although the ceca had higher level of Bacteroides. The hops ?-acids have the potential to be used in the diets of broiler chickens, under low level of challenge, and to proliferation of Clostridium, although ineffective against Eimeria.

Coccidiosis is a disease caused by protozoa of the genus Eimeria ssp. These protozoa are intracellular parasites of enterocytes that rupture the host cell, causing damage to the intestinal mucosa. The lesions caused by Eimeria reduce nutrient uptake by broilers, affecting their productivity gain, and also represent a portal of entry for other enteropathogens. The aim of this study was to assess the correlation between lesions caused by Eimeria and the prevalence of coccidiosis and other gastrointestinal disorders among broilers reared in Brazil from 2012 to 2014. Intestinal health was evaluated at 82 poultry houses in Brazil, totaling 5,528 birds aged 12 to 40 days. The rearing period was divided into two phases: phase 1 (12 to 21 days) and phase 2 (22 to 40 days). The broilers, at least three per shed, were collected from three different sites. The following gastrointestinal aspects were analyzed in the present study: presence of cell desquamation, excess fluid, excess mucus, ingestion of contaminated litter, thickened intestinal walls, thin intestinal walls, movement of food bolus, abnormal intestinal tonus, Turkish towel appearance, verminosis, and necrotic enteritis. The classification of the scores for gross lesions caused by Eimeria acervulina, Eimeria maxima, and Eimeria tenella followed the method proposed by Johnson & Reid, [8] and the oocyst count of E. maxima (E. maxima micro) in the mucosa was performed under a light microscope at 100X magnification. The statistical analysis of the Pearson correlation coefficient was carried out by the SAS 9.3 software program [16], using a 95% confidence interval. The results of this study revealed that E. acervulina was the most prevalent (mean of 13.5%) species in both rearing stages. Also, there was a positive correlation with thin intestinal walls and abnormal intestinal tonus in phases 1 and 2, as well as a positive correlation with ingestion of contaminated litter in phase 2. The second highest prevalence was that of E. maxima (mean of 6.75%), with a positive correlation with excess mucus, thickened and thin intestinal walls in phase 1, and a positive correlation with cell desquamation, excess fluid, and Turkish towel appearance in phase 2. E. tenella yielded the lowest prevalence rates (mean of 4.35) among the analyzed Eimeria species, showing a positive correlation with excess fluid in phases 1 and 2 and with thickened intestinal walls and lesions caused by E. maxima in phase 2. The microscopic analysis demonstrated that E. maxima was found in 18% of mucosal scrapings in phase 1, which accounts for a subclinical coccidiosis rate of 282.98% compared with clinical coccidiosis. A positive correlation was observed for E. maxima micro between thickened intestinal walls and lesions caused by E. maxima. E. maxima was detected in mucosal scrapings of 29.6% of the broilers in phase 2, accounting for a subclinical coccidiosis rate of 236.37% compared with clinical coccidiosis. E. maxima micro revealed a positive correlation with excess fluid, necrotic enteritis, E. acervulina, E. maxima, and E. tenella in phase 2. The comparison between the rearing periods showed that subclinical coccidiosis affected 64.45% more broilers in phase 2 than in phase 1. In the gross analysis, E. acervulina was the most prevalent species in both rearing periods. A lesion score equal to 1 was the most frequent among all Eimeria species. Subclinical coccidiosis affected a significant number of broilers in the analyzed Brazilian flocks, and was correlated with several factors that reduce intestinal health. It may be concluded that monitoring is of utmost importance to find out the status of intestinal health of poultry. The microscopic detection of E. maxima (mean of 23.8%) is correlated with factors that negatively affect intestinal health. / A coccidiose é uma enfermidade causada por protozoários do gênero Eimeria ssp. Esses são parasitas intracelulares de enterócitos que rompem a célula hospedeira causando lesões na mucosa intestinal. As lesões causadas pelas Eimerias resultam em redução na capacidade de absorção de nutrientes, afetando o ganho produtivo dos frangos de corte, e representam uma porta de entrada para outros enteropatógenos. Sendo assim, o objetivo desse estudo foi analisar a correlação entre as lesões causadas pelas Eimerias, e a prevalência de coccidiose e de demais alterações encontradas no trato gastrointestinal de frangos de corte produzidos, no Brasil, no período de 2012 a 2014. As avaliações da saúde intestinal foram realizadas em 82 integrações de frangos de corte, no Brasil, totalizando 5.528 aves analisadas com idades entre 12 e 40 dias. O período de produção analisado foi dividido em duas fases: 1ª fase (12 aos 21 dias) e 2ª fase (22 aos 40 dias). Os frangos necropsiados foram coletados em três diferentes pontos e no mínimo três aves por galpão. No presente estudo foram analisadas as seguintes alterações do trato gastrintestinal: presença de descamação celular, excesso de fluido, excesso de muco, ingestão de cama, intestino espesso, intestino fino, passagem de alimento, tônus alterado, toalha turca, verminose e enterite necrótica. A definição dos escores macroscópicos de lesão causados pelas Eimeria acervulina, Eimeria maxima, Eimeria tenella seguiram a metodologia de Johnson & Reid [8], e a contagem de oocistos na mucosa para E. maxima (E. maxima micro) foi realizada com auxílio de microscópio óptico com aumento de 100 X. A análise estatística do coeficiente de correlação de Pearson foi feita com o programa SAS 9.3., com intervalo de confiança de 95%. Os resultados desse estudo demonstraram que a espécie E. acervulina foi a que apresentou maior prevalência (média de 13,5%) em ambas as fases de produção avaliadas. Ainda, referente à E. acervulina, observou-se correlação positiva com intestino fino e tônus intestinal alterado na 1ª e 2ª fase, bem como correlação positiva com ingestão de cama apenas na 2ª fase. A segunda maior prevalência foi da espécie E. maxima (média de 6,75%), obteu-se correlação positiva com excesso de muco, intestino espesso e fino na 1a fase e correlação positiva com descamação celular, excesso de fluído e toalha turca na 2a fase avaliada. A E. tenella representou a menor prevalência (média de 4,35) entre as espécies de Eimerias analisadas, apresentando uma correlação positiva na 1ª e 2ª fase com o excesso de fluído e na 2ª fase com o intestino espesso e com lesões de E. maxima. Na avaliação microscópica, a E. maxima esteve presente em 18% dos raspados de mucosa realizados na 1ª fase, o que representa uma coccidiose subclínica de 282,98% com relação a coccidiose clínica. Para a E. maxima micro foi detectada correlação positiva entre os achados com o intestino espesso e com as lesões de E. maxima. Na 2ª fase, E. maxima foi encontrada nos raspados de mucosa de 29,6% das aves, representando uma coccidiose subclínica de 236,37% com relação à coccidiose clínica. A E. maxima micro apresentou na 2ª fase uma correlação positiva com o excesso de fluido, enterite necrótica, E. acervulina, E. maxima e E. tenella. Na análise comparativa entre os períodos, a coccidiose subclínica acometeu 64,45% mais frangos de corte na 2ª fase em relação a 1ª fase. Na avaliação macroscópia de lesões relacionadas à coccidiose, a E. acervulina foi a espécie de maior prevalência em ambas fases de produção. O escore de lesão mais frequente para todas as espécies de Eimerias foi o de grau 1. A coccidiose subclínica acometeu um número expressivo de frangos de corte do plantel brasileiro e foi correlacionada com diversos fatores de diminuição de saúde intestinal. Concluiu-se que o monitoramento é de suma importância para conhecer o status de saúde intestinal dos lotes avícolas. Pois, a E. maxima microscópica está presente (média de 23,8%) com correlação aos fatores que reduzem a saúde intestinal.

Poucos estudos quantificam o risco relativo da saúde humana na transmissão spillover de doenças zoonóticas de populações de animais silvestres, estudos cruciais na compreensão da história natural das zoonoses. Coccídios, em particular os da família Sarcocystidae, são importantes agentes transmissíveis na interface homens - animais domésticos e silvestres. O diagnóstico da coccidiose é prejudicado pela limitada disponibilidade de amostras resultantes de populações animais de espécies em risco de extinção. O objetivo deste estudo foi detectar através da amplificação do locus ITS-1, protozoários das subfamílias Sarcocystinae e Toxoplasmatinae em amostras teciduais de Puma yagouaroundi, Leopardus geoffroyi, L. tigrinus, L. wiedii, L. colocolo e L. pardalis, depositados em coleções biológicas do Rio Grande do Sul, Brasil. Um objetivo adicional foi a obtenção de informações que permitissem avaliar o papel epidemiológico dos protozoários no ciclo silvestre dos parasitas e seu possível impacto sobre as populações de animais silvestres e na saúde pública. Noventa pequenos felídeos neotropicais de vida livre, representando seis espécies, foram amostrados. Destes, 31 felídeos (34,4%), de todas as seis espécies, foram positivos para Toxoplasma gondii e DNA foi detectado em 63 das 433 (14,6%) amostras de tecidos primários coletados a partir de língua (28,6%), cérebro (18,6%), músculo esquelético (17,1%), musculatura ocular (13,6%), globo ocular (13,6%), coração (11,1%), diafragma (5,4%) e humor vítreo (4,5%). Doze amostras primárias positivas ao T. gondii foram genotipadas com os marcadores moleculares SAG1, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22- 8, c29-2, L358, PK1, Apico e CS3 e a técnica multilocus PCR-RFLP, a amostra Py#36m foi totalmente caracterizada como do tipo I com alelo II no BTUB e um novo genótipo atípico Py#21M, ambos isolados de Puma yagouaroundi e nunca descrito no Brasil. Nove outras amostras tiveram caracterização parcial. Treze dos 90 felídeos foram positivos para Sarcocystis spp. (14,4%) e outros 18 felídeos, representando cinco espécies albergaram S. felis-like [Py (#75m, #83m, #35m, #20li, #55li), Lg (#80m, #70m, #88m, #71li, #67mOi), Lt (#19m, #48m, #89m, #84m), Lw (#12, #73d) e Lc (#82m, #76m)]. Um único felino de L. pardalis foi negativo. DNA do parasita foi detectado em 11,8% dos tecidos examinados (51/433): musculatura esquelética (26,5%), língua (23,2%), musculatura ocular (13,6%), diafragma (10,7%), cérebro (2,3%), coração (1,6%) e globo ocular (4,5%), nenhuma das 44 amostras de humor vítreo foi positiva. Esta é a primeira detecção e caracterização genética de T. gondii e de S. felislike em felídeos silvestres brasileiros de vida livre, demonstrando a presença destes agentes no ciclo silvestre e, a potencial transmissibilidade ao homem e a outros animais domésticos e silvestres. O uso de amostras de tecidos de animais silvestres depositados em coleções biológicas para estudos epidemiológicos de doenças monstraram serem de grande utilidade. / Few studies have quantified the relative risk of human health from spillover of zoonotic diseases from populations of wild animals; these studies are crucial for understanding the natural history of zoonoses. Coccidia, particularly from the family Sarcocystidae, are important transmissible agents at the interface of man and domestic and wild animals. The diagnosis of Coccidiosis is hampered by the limited availability of samples resulting from protection of natural populations of the species at risk of extinction. The aim of this study was to detected, by amplification of ITS-1 locus, protozoa from the subfamilies Sarcocystinae and Toxoplasmatinae in tissue samples from Puma yagouaroundi, Leopardus geoffroyi, L. tigrinus, L. wiedii, L. colocolo and L. pardalis, deposited in biological collections of the State of Rio Grande do Sul, Brazil. An additional aim was to obtain information that would enable assessment of the epidemiological role of the protozoa in the sylvatic cycle of the parasite, and its possible impact on wildlife populations and public health. Ninety free-living small wild felines, representing 6 species, were sampled. Of these, 31 felids (34.4%) of all six species were positive for T. gondii and DNA was detected in 63 of 433 (14.6%) primary tissue samples collected from the tongue (28.6%), brain (18.6%), skeletal muscle (17.1%), ocular muscles (13.6%), eye (13.6%), heart (11.1%), diaphragm (5.4%) and vitreous humor (4.5%). Twelve primary samples positive for T. gondii were genotyped with molecular markers SAG1, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, and apical CS3. Using the multilocus PCR-RFLP technique, sample Py#36m was fully genotyped as Type I with allele II in locus BTUB, and a new atypical Py#21M, both isolates from Puma yagouaroundi and never described in Brazil. Nine other samples had a partial characterization. Thirteen of the 90 felids were positive for Sarcocystis spp. (14.4%) and another 18 felids, representing 5 species, harbored S. felis-like organisms [Py (#75m, #83m, #35m, #20li, #55li), Lg (#80m, #70m, #88m, #71li, #67mOi), Lt (#19m, #48m, #89m, #84m), Lw (#12, #73d) and Lc (#82m, #76m)]. A single felid of L. pardalis was negative. Parasite DNA was detected in 11.8% (51/433) of the tissues examined: muscle skeletal (26.5%), tongue (23.2%), ocular muscles (13.6%), diaphragm (10.7 %), brain (2.3%), heart (1.6%) and eye (4.5%); none of the 44 samples of vitreous humor was positive. This is the first description of the detection and genetic characterization of T. gondii and S. felis-like in free-living Brazilians wild felids, demonstrating the presence of these agents in the sylvatic cycle, and the potential transmition to humans and other domestic and wild animals. The use of tissue samples from wild animals deposited in biological collections for epidemiological studies of diseases demonstrated to be of great utility.

Eimeria tenella est un parasite apicomplexe responsable de la coccidiose aviaire. Il s’agit de l’une des plus importantes maladies parasitaires en élevage avicole. Le génome d’E. tenella code pour 28 protéines appartenant à la famille des ROP kinases. Chez T. gondii, les ROP sont des facteurs de virulence majeurs. Elles sont secrétées dans la cellule hôte et interviennent dans le développement du parasite en détournant les fonctions cellulaires au profit du parasite et en modulant la réponse immune de l’hôte. Parmi les ROP kinases, EtROP17 est l’une des kinases identifiées en protéomique chez le sporozoïte. L'objectif de ma thèse était d'étudier les fonctions de la EtROP17 dans la pathogénicité d’E. tenella. EtROP17 est une kinase active, capable d’autophosphorylation. Son extension N-ter (NTE) est nécessaire à son activité catalytique. En outre, EtROP17 induit un arrêt du cycle cellulaire en phase G1 et bloque l'apoptose en ciblant directement la p53 de la cellule hôte. EtROP17 immunoprécipite de nombreuses protéines des filaments intermédiaires notamment la vimentine et les cytokératines, suggérant ainsi que la kinase agit sur le cytosquelette de la cellule. L’ensemble de ces résultats confirment que EtROP17 est un effecteur de la modulation de la réponse de la cellule hôte au cours de l'infection par E. tenella. / Eimeria tenella is an apicomplexan parasite. It is responsible for cecal coccidiosis which causes severe economic losses in the poultry industry. The kinome of E. tenella comprises 28 putative members of ROP kinase family which is specific to the coccidian clade. In T. gondii, ROP kinases are key virulence factors. They hijack and modulate many cellular functions and pathways, allowing the parasite’s survival and development. EtROP17 is one of the two ROP kinases, EtROP17 and EtROP25, identified in sporozoïte proteomic. The aim of my thesis was to study the functions of EtROP17 in the interaction between the parasite and the host cell. EtROP17 is an active kinase and uses a non-canonical mechanism to phosphorylate its substrate. The N-terminal extension (NTE) is essential for catalytic activity. Moreover, EtROP17 induces cell cycle arrest in G1 phase and blocks apoptosis and cell mortality by directly targeting the host cell’s p53. EtROP17 immunoprecipitates many proteins of the intermediate filaments including vimentine and cytokeratins suggesting that the kinase acts on the cell cytoskeleton. Taken together, these results support that EtROP17 is a bona fide effector for the modulation of the host cell’s response during E. tenella infection.

Poucos estudos quantificam o risco relativo da saúde humana na transmissão spillover de doenças zoonóticas de populações de animais silvestres, estudos cruciais na compreensão da história natural das zoonoses. Coccídios, em particular os da família Sarcocystidae, são importantes agentes transmissíveis na interface homens - animais domésticos e silvestres. O diagnóstico da coccidiose é prejudicado pela limitada disponibilidade de amostras resultantes de populações animais de espécies em risco de extinção. O objetivo deste estudo foi detectar através da amplificação do locus ITS-1, protozoários das subfamílias Sarcocystinae e Toxoplasmatinae em amostras teciduais de Puma yagouaroundi, Leopardus geoffroyi, L. tigrinus, L. wiedii, L. colocolo e L. pardalis, depositados em coleções biológicas do Rio Grande do Sul, Brasil. Um objetivo adicional foi a obtenção de informações que permitissem avaliar o papel epidemiológico dos protozoários no ciclo silvestre dos parasitas e seu possível impacto sobre as populações de animais silvestres e na saúde pública. Noventa pequenos felídeos neotropicais de vida livre, representando seis espécies, foram amostrados. Destes, 31 felídeos (34,4%), de todas as seis espécies, foram positivos para Toxoplasma gondii e DNA foi detectado em 63 das 433 (14,6%) amostras de tecidos primários coletados a partir de língua (28,6%), cérebro (18,6%), músculo esquelético (17,1%), musculatura ocular (13,6%), globo ocular (13,6%), coração (11,1%), diafragma (5,4%) e humor vítreo (4,5%). Doze amostras primárias positivas ao T. gondii foram genotipadas com os marcadores moleculares SAG1, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22- 8, c29-2, L358, PK1, Apico e CS3 e a técnica multilocus PCR-RFLP, a amostra Py#36m foi totalmente caracterizada como do tipo I com alelo II no BTUB e um novo genótipo atípico Py#21M, ambos isolados de Puma yagouaroundi e nunca descrito no Brasil. Nove outras amostras tiveram caracterização parcial. Treze dos 90 felídeos foram positivos para Sarcocystis spp. (14,4%) e outros 18 felídeos, representando cinco espécies albergaram S. felis-like [Py (#75m, #83m, #35m, #20li, #55li), Lg (#80m, #70m, #88m, #71li, #67mOi), Lt (#19m, #48m, #89m, #84m), Lw (#12, #73d) e Lc (#82m, #76m)]. Um único felino de L. pardalis foi negativo. DNA do parasita foi detectado em 11,8% dos tecidos examinados (51/433): musculatura esquelética (26,5%), língua (23,2%), musculatura ocular (13,6%), diafragma (10,7%), cérebro (2,3%), coração (1,6%) e globo ocular (4,5%), nenhuma das 44 amostras de humor vítreo foi positiva. Esta é a primeira detecção e caracterização genética de T. gondii e de S. felislike em felídeos silvestres brasileiros de vida livre, demonstrando a presença destes agentes no ciclo silvestre e, a potencial transmissibilidade ao homem e a outros animais domésticos e silvestres. O uso de amostras de tecidos de animais silvestres depositados em coleções biológicas para estudos epidemiológicos de doenças monstraram serem de grande utilidade. / Few studies have quantified the relative risk of human health from spillover of zoonotic diseases from populations of wild animals; these studies are crucial for understanding the natural history of zoonoses. Coccidia, particularly from the family Sarcocystidae, are important transmissible agents at the interface of man and domestic and wild animals. The diagnosis of Coccidiosis is hampered by the limited availability of samples resulting from protection of natural populations of the species at risk of extinction. The aim of this study was to detected, by amplification of ITS-1 locus, protozoa from the subfamilies Sarcocystinae and Toxoplasmatinae in tissue samples from Puma yagouaroundi, Leopardus geoffroyi, L. tigrinus, L. wiedii, L. colocolo and L. pardalis, deposited in biological collections of the State of Rio Grande do Sul, Brazil. An additional aim was to obtain information that would enable assessment of the epidemiological role of the protozoa in the sylvatic cycle of the parasite, and its possible impact on wildlife populations and public health. Ninety free-living small wild felines, representing 6 species, were sampled. Of these, 31 felids (34.4%) of all six species were positive for T. gondii and DNA was detected in 63 of 433 (14.6%) primary tissue samples collected from the tongue (28.6%), brain (18.6%), skeletal muscle (17.1%), ocular muscles (13.6%), eye (13.6%), heart (11.1%), diaphragm (5.4%) and vitreous humor (4.5%). Twelve primary samples positive for T. gondii were genotyped with molecular markers SAG1, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, and apical CS3. Using the multilocus PCR-RFLP technique, sample Py#36m was fully genotyped as Type I with allele II in locus BTUB, and a new atypical Py#21M, both isolates from Puma yagouaroundi and never described in Brazil. Nine other samples had a partial characterization. Thirteen of the 90 felids were positive for Sarcocystis spp. (14.4%) and another 18 felids, representing 5 species, harbored S. felis-like organisms [Py (#75m, #83m, #35m, #20li, #55li), Lg (#80m, #70m, #88m, #71li, #67mOi), Lt (#19m, #48m, #89m, #84m), Lw (#12, #73d) and Lc (#82m, #76m)]. A single felid of L. pardalis was negative. Parasite DNA was detected in 11.8% (51/433) of the tissues examined: muscle skeletal (26.5%), tongue (23.2%), ocular muscles (13.6%), diaphragm (10.7 %), brain (2.3%), heart (1.6%) and eye (4.5%); none of the 44 samples of vitreous humor was positive. This is the first description of the detection and genetic characterization of T. gondii and S. felis-like in free-living Brazilians wild felids, demonstrating the presence of these agents in the sylvatic cycle, and the potential transmition to humans and other domestic and wild animals. The use of tissue samples from wild animals deposited in biological collections for epidemiological studies of diseases demonstrated to be of great utility.

Poucos estudos quantificam o risco relativo da saúde humana na transmissão spillover de doenças zoonóticas de populações de animais silvestres, estudos cruciais na compreensão da história natural das zoonoses. Coccídios, em particular os da família Sarcocystidae, são importantes agentes transmissíveis na interface homens - animais domésticos e silvestres. O diagnóstico da coccidiose é prejudicado pela limitada disponibilidade de amostras resultantes de populações animais de espécies em risco de extinção. O objetivo deste estudo foi detectar através da amplificação do locus ITS-1, protozoários das subfamílias Sarcocystinae e Toxoplasmatinae em amostras teciduais de Puma yagouaroundi, Leopardus geoffroyi, L. tigrinus, L. wiedii, L. colocolo e L. pardalis, depositados em coleções biológicas do Rio Grande do Sul, Brasil. Um objetivo adicional foi a obtenção de informações que permitissem avaliar o papel epidemiológico dos protozoários no ciclo silvestre dos parasitas e seu possível impacto sobre as populações de animais silvestres e na saúde pública. Noventa pequenos felídeos neotropicais de vida livre, representando seis espécies, foram amostrados. Destes, 31 felídeos (34,4%), de todas as seis espécies, foram positivos para Toxoplasma gondii e DNA foi detectado em 63 das 433 (14,6%) amostras de tecidos primários coletados a partir de língua (28,6%), cérebro (18,6%), músculo esquelético (17,1%), musculatura ocular (13,6%), globo ocular (13,6%), coração (11,1%), diafragma (5,4%) e humor vítreo (4,5%). Doze amostras primárias positivas ao T. gondii foram genotipadas com os marcadores moleculares SAG1, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22- 8, c29-2, L358, PK1, Apico e CS3 e a técnica multilocus PCR-RFLP, a amostra Py#36m foi totalmente caracterizada como do tipo I com alelo II no BTUB e um novo genótipo atípico Py#21M, ambos isolados de Puma yagouaroundi e nunca descrito no Brasil. Nove outras amostras tiveram caracterização parcial. Treze dos 90 felídeos foram positivos para Sarcocystis spp. (14,4%) e outros 18 felídeos, representando cinco espécies albergaram S. felis-like [Py (#75m, #83m, #35m, #20li, #55li), Lg (#80m, #70m, #88m, #71li, #67mOi), Lt (#19m, #48m, #89m, #84m), Lw (#12, #73d) e Lc (#82m, #76m)]. Um único felino de L. pardalis foi negativo. DNA do parasita foi detectado em 11,8% dos tecidos examinados (51/433): musculatura esquelética (26,5%), língua (23,2%), musculatura ocular (13,6%), diafragma (10,7%), cérebro (2,3%), coração (1,6%) e globo ocular (4,5%), nenhuma das 44 amostras de humor vítreo foi positiva. Esta é a primeira detecção e caracterização genética de T. gondii e de S. felislike em felídeos silvestres brasileiros de vida livre, demonstrando a presença destes agentes no ciclo silvestre e, a potencial transmissibilidade ao homem e a outros animais domésticos e silvestres. O uso de amostras de tecidos de animais silvestres depositados em coleções biológicas para estudos epidemiológicos de doenças monstraram serem de grande utilidade. / Few studies have quantified the relative risk of human health from spillover of zoonotic diseases from populations of wild animals; these studies are crucial for understanding the natural history of zoonoses. Coccidia, particularly from the family Sarcocystidae, are important transmissible agents at the interface of man and domestic and wild animals. The diagnosis of Coccidiosis is hampered by the limited availability of samples resulting from protection of natural populations of the species at risk of extinction. The aim of this study was to detected, by amplification of ITS-1 locus, protozoa from the subfamilies Sarcocystinae and Toxoplasmatinae in tissue samples from Puma yagouaroundi, Leopardus geoffroyi, L. tigrinus, L. wiedii, L. colocolo and L. pardalis, deposited in biological collections of the State of Rio Grande do Sul, Brazil. An additional aim was to obtain information that would enable assessment of the epidemiological role of the protozoa in the sylvatic cycle of the parasite, and its possible impact on wildlife populations and public health. Ninety free-living small wild felines, representing 6 species, were sampled. Of these, 31 felids (34.4%) of all six species were positive for T. gondii and DNA was detected in 63 of 433 (14.6%) primary tissue samples collected from the tongue (28.6%), brain (18.6%), skeletal muscle (17.1%), ocular muscles (13.6%), eye (13.6%), heart (11.1%), diaphragm (5.4%) and vitreous humor (4.5%). Twelve primary samples positive for T. gondii were genotyped with molecular markers SAG1, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, and apical CS3. Using the multilocus PCR-RFLP technique, sample Py#36m was fully genotyped as Type I with allele II in locus BTUB, and a new atypical Py#21M, both isolates from Puma yagouaroundi and never described in Brazil. Nine other samples had a partial characterization. Thirteen of the 90 felids were positive for Sarcocystis spp. (14.4%) and another 18 felids, representing 5 species, harbored S. felis-like organisms [Py (#75m, #83m, #35m, #20li, #55li), Lg (#80m, #70m, #88m, #71li, #67mOi), Lt (#19m, #48m, #89m, #84m), Lw (#12, #73d) and Lc (#82m, #76m)]. A single felid of L. pardalis was negative. Parasite DNA was detected in 11.8% (51/433) of the tissues examined: muscle skeletal (26.5%), tongue (23.2%), ocular muscles (13.6%), diaphragm (10.7 %), brain (2.3%), heart (1.6%) and eye (4.5%); none of the 44 samples of vitreous humor was positive. This is the first description of the detection and genetic characterization of T. gondii and S. felis-like in free-living Brazilians wild felids, demonstrating the presence of these agents in the sylvatic cycle, and the potential transmition to humans and other domestic and wild animals. The use of tissue samples from wild animals deposited in biological collections for epidemiological studies of diseases demonstrated to be of great utility.