Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ieda Schleger.pdf: 2652464 bytes, checksum: d6b5e5be7baa4e50ef5c5874a9a4189d (MD5) Previous issue date: 2016-02-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The family Characidae (Characiformes) is the most diverse in number of species among Neotropical fish. Many genera of this family, for no to present evidence of monophyly, are considered Incertae Sedis, such as Astyanax. This genus of fish groups popularly known as lambari, comprises 155 valid species. Astyanax serratus is considered endemic of the Iguaçu River, where is largely distributed. Astyanax laticeps occurs in coastal basins of the coastal region of Uruguay, south and southeast Brazil. These species are morphologically similar and are included in the complex A. scabripinnis. The purpose of this study was to determine A. serratus and A. laticeps are the same species in synonymy, or form distinct evolutionary units, but cryptic. Therefore, was used morphometric analysis, including measurements of body proportions relative to length of the body and of the head, counting number of teeth, cusps and fins. Cytogenetic analysis consisted in chromosome preparations conventional Giemsa staining, localization of constitutive heterochromatin by C-banding method, detection of nucleolar organizer regions (NORs) by impregnation with silver nitrate (Ag-NORs) and fluorescent in situ hybridization using DNA probes ribosomal (rDNA) 5S and 18S. The sequences used as DNA barcode, were obtained by partial amplification of cytochrome c oxidase I (COI) gene and the genetic distance calculated by the method of Kimura 2-parameters (K2P). The results of morphometric analysis revealed pre-jaw with two series of teeth, presence of hooks on anal and pelvic fins of males, elongated body with a humeral spot with narrow anteroventral extension in both species. Cytogenetic showed the same diploid number of 50 chromosomes, including the first pair of large metacentric chromosomes in relation to the others complements, the same karyotype formula (4m + 24sm + 6st + 16a) and even fundamental number (84). The markings of 5S rDNA coincide in the centromeric region of chromosome 19 pair and were evidenced multiple sites of 18S rDNA, located in the telomeric regions of the chromosomes in both species analyzed. The Ag-NORs showed to be coincident with 18S sites in most cases. The distribution of constitutive heterochromatin blocks occurred preferentially in the centromeric and terminals regions of chromosomes, coincident with the location of ribosomal sites and Ag-NORs in telomeric regions. The analysis of DNA barcode through the COI gene revealed an interspecific genetic divergence to 0.2%, a rate below the threshold considered for the separation of fish species (2%). These different levels of analysis suggest that A. serratus and A. laticeps are synonymous species, increasing the occurrence of A. laticeps for the Iguaçu River basin and enhancing the hypothesis of fauna sharing, caused by tectonic activities of crystalline shield. The interspecifc variations found in the mapping of constitutive heterochromatin, Ag-NORs and 18S rDNA are common in Astyanax and derived of events no robertsonian, while the differences may reflect the vicariant process, with geographic isolation of watersheds and gene flow restriction among the population of the Iguaçu River and coastal populations. / A Família Characidae (Characiformes) é a mais diversa em número de espécies entre os peixes neotropicais. Muitos gêneros dessa Família, por não apresentarem evidências de monofiletismo, são considerados como Incertae Sedis, como é o caso de Astyanax. Este gênero agrupa peixes popularmente conhecidos como lambaris, sendo composto por 155 espécies válidas. Astyanax serratus é considerada endêmica do Rio Iguaçu, onde está amplamente distribuída. Astyanax laticeps ocorre nas bacias costeiras da região litorânea do Uruguai, sul e sudeste brasileiro. Estas espécies são morfologicamente semelhantes e estão incluídas no complexo Astyanax scabripinnis. O objetivo do presente estudo foi verificar se A. serratus e A. laticeps constituem uma mesma espécie, em sinonímia, ou formam unidades evolutivas distintas, mas crípticas. Assim, foi empregada análise morfométrica, incluindo medições das proporções corporais em relação ao comprimento do corpo e da cabeça, contagem do número de dentes, cúspides e de raios nas nadadeiras. A análise citogenética consistiu em preparações cromossômicas com coloração convencional por Giemsa, localização de heterocromatina constitutiva pelo método de bandamento C, detecção das regiões organizadoras de nucléolos por impregnação com nitrato de prata (Ag-RONs) e hibridação in situ fluorescente com sondas de DNA ribossomal (rDNA) 5S e 18S. As sequências utilizadas como DNA barcode foram obtidas através da amplificação parcial do gene citocromo c oxidase I e a distância genética calculada pelo método Kimura 2 Parâmetros (K2P). Os resultados da análise morfométrica revelaram pré-maxilar com duas séries de dentes, presença de ganchos nas nadadeiras anal e pélvicas de machos, corpo alongado, com uma mancha umeral com prolongamento anteroventral estreito em ambas as espécies. A citogenética evidenciou mesmo número diplóide, de 50 cromossomos, incluindo o primeiro par de cromossomos metacêntricos de grande porte em relação aos demais do complemento, mesma fórmula cariotípica (4m + 24sm + 6st + 16a) e mesmo número fundamental (84). As marcações de rDNA 5S coincidiram na região centromérica do par cromossômico 19 e foram evidenciados sítios múltiplos de rDNA 18S, localizados nas regiões teloméricas dos cromossomos em ambas as espécies analisadas. As Ag-RONs mostraram-se coincidentes com os sítios de 18S na maioria dos casos. A distribuição dos blocos de heterocromatina constitutiva ocorreu preferencialmente nas regiões centroméricas e terminais dos cromossomos, coincidentes com a maioria dos sítios ribossomais e das Ag-RONs nas regiões teloméricas. A análise do DNA barcode através do gene COI revelou uma divergência genética interespecífica de 0,2%, índice abaixo do considerado limiar para a separação de espécies de peixes (2%). Estes diferentes níveis de análise sugerem que A. serratus e A. laticeps são espécies sinônimas, ampliando a ocorrência de A. laticeps para a bacia do Rio Iguaçu e reforçando a hipótese de compartilhamento de fauna, provocado pelas atividades tectônicas do escudo cristalino. As variações interespecíficas encontradas no mapeamento de heterocromatina constitutiva, Ag-RONs e rDNA 18S são comuns em Astyanax e derivam de eventos não robertsonianos, mas também podem refletir um processo de vicariância, com o isolamento geográfico das bacias hidrográficas e restrição de fluxo gênico entre a população do rio Iguaçu e populações litorâneas.

Made available in DSpace on 2017-07-10T14:17:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao PPRN Mariane_ Gavazzoni 2016.pdf: 1443094 bytes, checksum: 5fe99142fa5f6e62c58e029f07ceeebb (MD5) Previous issue date: 2016-02-22 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Astyanax is a polyphyletic taxon with richness of species and wide geographic distribution. Astyanax comprises species that are morphologically very similar with poorly detailed taxonomic delimitations, which makes it difficult to identify and to establish phylogenetic relationships. In order to provide data to contribute to cytogenetic, taxonomy and systematics of Astyanax, cytogenetics analyzes were carried out on ten Astyanax species from three river basins. Astyanax altiparanae and A. aff. fasciatus were collected on the Upper Paraná River basin; A. abramis and A. asuncionensis were collected on the Middle-low Paraná River basin; and A. cf. aramburui, A. eigenmanniorum, A. aff. fasciatus, A. jacuhiensis, A. aff. laticeps, A. cf. paris and Astyanax sp. were collected on the Upper-Middle Uruguai River basin. The results show interespecific variation in diploid number, 2n=46 chromosomes for A. cf. aramburui and A. aff. fasciatus, 2n=48 chromosomes for A. eigenmanniorum, and 2n=50 chromosomes for the remaining species. NORs (Ag-staining and 18S rDNA-FISH) showed species bearing single sites and species bearing multiple sites (up to 10 cistrons in Astyanax sp.), confirming the high variability reported for the genus. The species from A. bimaculatus complex (A. abramis, A. altiparanae, A. jacuhiensis e A. asuncionensis) showed single NORs, a plesiomorphic condition for the complex. FISH with 5S rDNA probes revealed a more conserved condition, with centromeric sites in at least one metacentric chromosome pair and one subtelocentric/acrocentric chromosome pair, however with interspecific variation, which proves it to be an important marker in the characterization and differentiation of these species. Heterochromatin distribution pattern was distinct for all species, except for A. cf. aramburui and A. aff. fasciatus (Ijuí River). This demonstrates that cytogenetic similarities may indicate closer relationship between each other than among to the other analyzed species; on the other hand, 5S rDNA genes showed to be important in differentiation of these cryptic species. The results reported the first cytogenetic data for A. cf. paris and reinforce their cytogenetic similarity with other congenus species, and we also report the occurrence of a Astyanax species that has not been taxonomically described yet. Thus, the results of this study provide data that assist taxonomy and systematic of Astyanax clade and Astyanax paris clade , reinforcing the need for extensive revisions, especially in A. bimaculatus and A. fasciatus complex, including markers such as 5S rRNA and heterochromatin distribution pattern, forthe better understanding of the phylogenetic relationships in Astyanax. / Astyanax é um taxon polifilético com grande riqueza de espécies e ampla distribuição geográfica. Compreende espécies com formas bastante semelhantes e delimitações taxonômicas pouco detalhadas que dificultam a identificação e o estabelecimento das relações filogenéticas. Com o objetivo de fornecer dados que contribuam com a citogenética, taxonomia e sistemática de Astyanax, foram realizadas análises citogenéticas em dez espécies de Astyanax de três bacias hidrográficas. Foram coletados exemplares de Astyanax altiparanae e A. aff. fasciatus na bacia do Alto rio Paraná; A. abramis e A. asuncionensis na bacia do Médio-Baixo rio Paraná; e A. cf. aramburui, A. eigenmanniorum, A. aff. fasciatus, A. jacuhiensis, A. aff. laticeps, A. cf. paris e Astyanax sp. na bacia do Alto-Médio rio Uruguai. Os resultados mostraram variação interespecífica no número diplóide, de 2n=46 cromossomos em A. cf. aramburui e A. aff. fasciatus, 2n=48 cromossomos em A. eigenmanniorum, e 2n=50 cromossomos nas demais espécies. As AgRONs, confirmadas pela 18S rDNA-FISH, evidenciaram espécies portando sítios simples e espécies portando sítios múltiplos (até 10 cístrons em Astyanax sp.), confirmando a alta variabilidade encontrada no gênero. Nas espécies do complexo A. bimaculatus (A. abramis, A. altiparanae, A. jacuhiensis e A. asuncionensis), foram evidenciadas RONs simples, característica plesiomórfica para o complexo. FISH com sonda de 5S rDNA evidenciou uma condição mais conservada, com cístrons centroméricos em pelo menos um par de cromossomos metacêntricos e em um par de cromossomos subtelocêntricos/acrocêntricos, porém com variação interespecífica, demostrando ser um importante marcador na caracterização e diferenciação destas espécies. O padrão de distribuição da heterocromatina mostrou-se distinto para as espécies, com exceção de A. cf. aramburui e A. aff. fasciatus (rio Ijuí), onde foi verificado semelhanças citogenéticas que podem indicar maior proximidade entre estas espécies quando comparadas com as demais analisadas, sendo que a distribuição dos genes 5S rDNA se mostrou importante na diferenciação destas espécies crípticas. Os resultados relatam os primeiros dados citogenéticos para A. cf. paris e reforçam sua semelhança citogenética com outras espécies congêneres, além de relatar a ocorrência de uma espécie de Astyanax ainda não descrita taxonomicamente. Em suma, os resultados do presente estudo fornecem dados que auxiliam na taxonomia e sistemática do clado Astyanax e clado Astyanax paris , reforçando a necessidade de revisões amplas, principalmente nos complexos A. bimaculatus e A. fasciatus que incluam marcadores como 5S rDNA e padrão de distribuição da heterocromatina, para melhor compreensão das relações filogenéticas em Astyanax.