Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito de níveis crescentes de uréia na dieta de vacas em lactação sobre a produtividade, características físico-químicas e de composição do leite, bem como composição da proteína do leite. Foram utilizadas nove vacas Holandesas em lactação, em delineamento experimental tipo quadrado latino 3X3, com 3 tratamentos, 3 períodos e 3 quadrados. O experimento teve duração total de 63 dias divididos em 3 períodos de 21 dias. Os tratamentos foram: tratamento A (controle) com dieta formulada para suprir 100% das exigências do NRC (2001) em termos de PB, proteína degradável no rúmen (PDR), proteína não degradável no rúmen (PNDR), utilizando farelo de soja como principal fonte protéica e cana-de-açúcar como volumoso; tratamento B, dieta com a inclusão de 0,75% de uréia, em substituição parcial ao farelo de soja, e tratamento C, dieta com inclusão de 1,5% de uréia, em substituição parcial ao farelo de soja. Todas as dietas foram isoenergéticas (1,53 Mcal/kg de energia líquida de lactação) e isoprotéicas (16% de proteína bruta). Não foram observadas diferenças entre os tratamentos, quando os resultados foram analisados por regressão polinomial simples, quanto a: consumo de matéria seca, produção de leite, produção de leite corrigida para 3,5%, produção de proteína, produção de gordura, produção de lactose e produção de sólidos totais e Log CCS. Também não houve influência dos tratamentos sobre pH, crioscopia, densidade e prova de resistência ao álcool. No entanto, a acidez, sofreu efeito linear decrescente (p = 0,017) em função dos níveis de uréia na dieta. Quanto à composição do leite, os teores de proteína, gordura, lactose, uréia, extrato seco total e extrato seco desengordurado não foram influenciados pelos tratamentos. A composição da proteína também não foi alterada pela inclusão de até 1,5% de uréia na dieta, não sendo observada diferença entre os tratamentos para a proteína bruta, proteína verdadeira, caseína, proteína do soro, nitrogênio não caseinoso, nitrogênio não protéico, uréia, bem como as relações proteína verdadeira: proteína bruta e caseína: proteína verdadeira. Estes resultados sugerem que o uso de até 1,5% de uréia na matéria seca da dieta não altera a capacidade de produção, as características físico-químicas e de composição do leite, bem como a composição da proteína do leite. / The aim of this study was to evaluate the effects of three different dietary levels of urea on milk yield and composition, and milk protein composition. Nine lactating Holstein cows were used in a 3X3 latin square arrangement, with 3 treatments, 3 periods of 21 days each and 3 squares. The treatments were: A) NRC-based (NRC, 2001) diet to provide 100% of crude protein (CP), as well as, rumen undegradable protein (RUP) and rumen degradable protein (RDP) requirements, by using soybean meal and sugar cane; B) 0,75% urea inclusion; partially substituting soya meal from diet C) 1,5% urea inclusion, partially substituting soya meal from diet. Energy and protein levels of treatment diets comply with NRC (2001), and were isoenergetic and isoproteic. No statistical differences were observed among treatments, when results were analyzed by simple polynomial regression in relation to dry-matter intake, milk yield, 3,5% FCM, protein and fat yield, and somatic cell count (Log SCC). Cryoscopy, pH, milk density and alcohol stability, fat, lactose, urea, total solids and solids with no fat were not influenced by treatments. The protein composition, crude protein, true protein, casein, whey protein, non-casein nitrogen, milk urea nitrogen, as well as, true protein:crude protein and casein:true protein ratios were not influenced by the substitution of soybean meal by urea in ration. Results indicate that the use of urea up to 1,5% in DM does not alter milk yield and its composition.

O presente estudo teve como objetivo avaliar a associação entre o polimorfismo da β-lactoglobulina e as características físico-químicas (pH, acidez e crioscopia), de composição (gordura, sólidos totais, uréia, proteína bruta, proteína verdadeira, nitrogênio não-protéico e caseína), e de estabilidade do leite. Para tanto, 11 rebanhos leiteiros foram selecionados, 5 da raça Holandesa e 6 da raça Girolanda, dos quais foram coletadas 4 amostras de leite de 164 vacas da raça Holandesa e 74 da raça Girolanda, sendo duas coletas realizadas na estação das secas e 2 na estação das chuvas. Cada amostra foi submetida à análise de composição e de características físico-químicas. Para a identificação do genótipo para β-lactoglobulina, foram coletadas amostras de sangue de cada vaca, as quais foram submetidas à reação de polimerase em cadeia (PCR), determinando-se as freqüências alélicas e genotípicas dos animais. A estabilidade do leite foi avaliada pelo teste de estabilidade ao etanol, nas seguintes concentrações alcoólicas: 70, 76, 80 e 84ºGL. As freqüências genotípicas foram 0,28, 0,30 e 0,41 para os genótipos AA, AB e BB, respectivamente. A freqüência do alelo B foi maior que do alelo A, 0,52 e 0,47, para a raça Holandesa, e 0,58 e 0,41, para a raça Girolanda, respectivamente. Não houve efeito do polimorfismo da β-lactoglobulina (AA, AB e BB), entre os animais das raças, avaliadas sobre as propriedades físico-químicas e a composição do leite. Observou-se efeito de raça (Holandesa e Girolanda, respectivamente) sobre a acidez titulável (16,16 e 17,07°D) e pH (6,78 e 6,75), e de composição do leite quanto as variáveis gordura (3,31 e 3,20%), NUL (16,62 e 14,45mg/dL) e PB (3,13 e 3,04%). Houve efeito da estação (chuvosa e seca, respectivamente) sobre as características físico-químicas de acidez titulável (16,62 e 16,34°D), pH (6,76 e 6,79) e crioscopia (-0,5411 e -0,5376°H), e de composição do leite quanto as variáveis lactose (4,34 e 4,50%), sólidos totais (11,65 e 11,90%), LogCCS (2,44 e 2,34), PB (3,08 e 3,14%), PV (2,84 e 2,91%), caseína (2,01 e 2,13%) e relação caseína:proteína verdadeira (0,70 e 0,72). Verificou-se também efeito da raça e estação do ano sobre a estabilidade do leite, sendo que o leite foi mais instável para raça Girolanda e durante a estação seca, mas não se observou efeito do polimorfismo da β-lactoglobulina sobre esta característica. / The objective of this study was to evaluate the association between beta-lactogobulin polymorphism and physico-chemical characteristics, composition (fat, total solids, urea, crude protein, true protein, non protein nitrogen and casein), and stability of milk. For this aim, 11 dairy herds were selected, six of them composed of crossbred Holstein-Zebu (H-Z) cows and five from Holstein cows. Milk samples were taken four times (twice in dry season and twice in rainy season), from 278 Holstein and 156 crossbred Holstein-Zebu cows. Individual milk samples were analyzed for milk composition and physico-chemical properties. For β-lactoglobulin polymorphism analysis, 10 mL of blood samples were ollected from each cow and then submitted to polymerase chain reaction (PCR). Following β-lactoglobulin protein variants detection, genotype and allele frequencies for the 11 herds were analyzed. Heat stability of milk was determined by the alcohol-induced precipitation test, using the following ethanol concentrations 70, 76, 80 and 84ºGL. The genotype frequencies were 0.28, 0.30 and 0.41 for AA, AB and BB, respectively. Allele B frequency was higher than A, 0.52 and 0.47, for Holstein cows, 0.58 and 0.41, for Holstein-Zebu, respectively. Genetic variants of β-lactoglobulin (AA, AB and BB) had no effect on physico-chemical (acidity, pH and crioscopy), and compositional characteristics (fat, total solids, urea, crude protein, non-protein nitrogen, true protein and casein percentages), either among milk from Holstein cows, or from crossbred Holstein-Zebu. Breed effect for Holstein and H-Z on titrable acidity (16,16 and 17,07°D, respectively), pH (6,78 and 6,75, respectively), fat (3,31e 3,20%, respectively), milk urea nitrogen (16,62 e 14,45mg/dL, respectively) and crude protein (3,13 e 3,04%, respectively) could be observed. Effect of seasonality between rainy and dry seasons was also observed on physico-chemical variables of titrable acidity (16,62 and 16,34°D, respectively), pH (6,76 and 6,79, respectively) and freezing point (-0,5411and -0,5376°H, respectively), and on composition characteristics of lactose (4,34 and 4,50%, respectively), total solids (11,65 and 11,90%, respectively), LogCCS (2,44 and 2,34, respectively), crude protein (3,08 and 3,14%, respectively), true protein (2,84 and 2,91%, respectively), casein content (2,01 and 2,13%, respectively) and casein:true protein ratio (0,70 and 0,72, respectively). Effect of breed and seasonality on milk ethanol stability test was observed. Holstein-Zebu milk was ethanol-unstable on dry season. No effect of β-lactoglobulin on milk stability was observed.

Entre os anos de 2007 e 2009, no nordeste do Rio Grande do Sul, foi conduzido um estudo para avaliar a ocorrência de leite instável não ácido, fatores que afetam a estabilidade do leite bovino e a relação entre o teste do álcool e o teste de tempo de coagulação do leite. Fez-se um questionário para a tipificação das propriedades, um levantamento mensal do leite de 50 propriedades, e se analisou a acidez, coagulação na fervura e no álcool e tempo de coagulação no tanque, além da composição química, células somáticas e contagem bacteriana. Posteriormente, foi realizado um experimento avaliando dietas com três proporções de concentrado (35, 45 e 55%), por 56 dias, avaliando o número de dias em lactação, produção leiteira, peso, condição corporal, características físico-química do leite, pH ruminal e da urina e composição química do sangue. Complementarmente foram realizados quatro protocolos experimentais para avaliar o efeito da temperatura sobre o teste do álcool, o efeito do citrato sobre a estabilidade do leite, o efeito do uso de capilares de diferentes tamanhos sobre o resultado de tempo de coagulação e o uso de diferentes metodologias analíticas para determinação de lactose no leite. A análise estatística dos dados foi efetuada com o programa SAS (2001), avaliando a frequência de ocorrência de fatores (Proc FREQ), correlação (Proc CORR), variância (Proc GLM) e regressão (Proc REG), sendo que no experimento com animais as médias foram ajustadas utilizando dias em lactação, e os valores iniciais de cada atributo como co-variáveis. Foram observados elevada incidência de LINA, CCS e CBT, pouca interferência da dieta na ocorrência de LINA e na alteração da composição do leite e baixa correlação entre o teste do álcool e o tempo de coagulação no tanque. Não houve relação entre o teste da fervura e os testes do álcool e do tempo de coagulação. O citrato melhorou a estabilidade do leite medida no teste do álcool e no tempo de coagulação. A temperatura do leite (4 x 20°C) não interferiu no resultado do teste do álcool. As dimensões dos capilares de teste do tempo de coagulação modificam os valores obtidos, podendo prejudicar a comparação entre diferentes laboratórios. Entre os fatores testados, os que atuaram sobre a estabilidade do leite no teste do álcool foram: a concentração inicial de álcool capaz de induzir a coagulação, a concentração de cátions divalentes em relação aos monovalentes e o teor de sódio do leite. Em relação ao teste do tempo de coagulação, apenas o seu valor inicial foi significativo. Conclui-se que a ocorrência da instabilidade do leite é elevada, a composição mineral do leite foi a que exerceu maior influência sobre os resultados no teste do álcool, não foram detectados fatores que influenciaram o teste do tempo de coagulação nem o da fervura. Não se pode ainda recomendar outro teste para substituir o teste do álcool. / Between 2007 and 2009 in the Northeastern Rio Grande do Sul, a study was conducted aiming to evaluate the occurrence of unstable non-acid milk, the factors affecting the stability of bovine milk and the degree of relationship between test results and alcohol test coagulation time of milk. Was carried out initially, a questionnaire for the characterization of the properties, then a monthly survey of milk from 50 properties, and examined the acidity (acidity and pH), coagulation test and the boiling alcohol and clotting time in tank, and chemical composition, somatic cell and bacterial count. Later we performed an experiment on animals, which were fed with three different proportions of concentrate (35, 45 and 55%) for 56 days and were evaluated the number of days in milk, milk production, weight, body condition, features physical chemistry of milk, pH and composition of urine and blood chemistry. In addition were performed four experimental protocols to evaluate the effect of temperature on the alcohol test, the effect of citrate on the stability of milk, the effect of using capillaries of different sizes on the results of clotting time and the use of different analytical methodologies for determination of lactose in milk. The statistical analysis was performed with SAS software (2001), evaluating the occurrence of factors (Proc FREQ), correlation (CORR), variance (Proc GLM) and regression (Proc REG), and the experiment animals the means were adjusted using days in milk, and the initial values of each attribute as covariates. We observed high levels of incidence of LINA, CCS and CBT, little interference from the diet in the occurrence of LINA and change the composition of milk and low correlation between the alcohol and the clotting time in the tank. There was no relationship between the boiling test and tests for alcohol and clotting time. Citrate exerted positive action on the stability of milk as the test of alcohol and the clotting time. The temperature of milk during the test (4 x 20 ° C) had no effect on the test result of alcohol. The dimensions of the capillary test of clotting time modify the values and may undermine the comparison between different laboratories. Among the factors tested, acted on the stability of milk alcohol test were: the initial concentration of alcohol to induce coagulation, the concentration of divalent cations compared to monovalent and sodium content of milk. For the test of clotting time, only the initial value was significant. It is concluded that the occurrence of instability of the milk is high, the factors measured, the mineral composition of milk that was the greatest influence on the results in the alcohol, but not detected factors influencing the test of clotting time or to the boil. You can not even recommend another test to replace the alcohol test.

Objetivou-se avaliar diferentes níveis de utilização de monensina sódica na ração de vacas em lactação e seus efeitos sobre o consumo e digestibilidade aparente total da matéria seca e dos nutrientes, produção e composição do leite, fermentação ruminal, síntese de proteína microbiana, parâmetros sanguineos e resíduos de monensina no leite. Foram utilizadas 12 vacas da raça Holandesa, distribuídas em quatro quadrados latinos 3x3 balanceados, alimentadas com as seguintes rações: 1) Controle (C), composto por ração basal sem adição de monensina, 2) Monensina 24 (M24), adição de 24 mg/kg MS de monensina na ração, adicionada ao concentrado, e 3) Monensina 48 (M48), adição de 48 mg/kg MS de monensina, adicionada ao concentrado. Diariamente foram realizadas pesagens das quantidades dos volumosos e concentrados fornecidos e das sobras de cada animal, para estimativa do consumo. Nas amostras de sobras e alimentos fornecidos foram determinados os teores dos principais nutrientes para posterior cálculo do consumo. Na determinação da digestibilidade aparente total dos nutrientes a quantidade total de matéria seca fecal excretada foi estimada pela concentração de fibra em detergente ácido indigestível (FDAi). As fezes foram coletadas no 13º e 16º dias de cada período experimental, sempre antes das ordenhas da manhã e da tarde, e armazenadas em sacos plásticos em freezer à -20°C, e posteriormente submetidas a análises químico-bromatológicas. As amostras utilizadas para análise da composição do leite foram coletadas de dois dias alternados, sendo provenientes das duas ordenhas diárias. As amostras de líquido ruminal foram coletadas com a utilização de sonda esofágica em dois tempos, antes (tempo zero) e três horas (tempo três) após a alimentação matinal. Foram determinados no líquido ruminal o pH, as concentrações de nitrogênio amoniacal e as concentrações dos ácidos graxos de cadeia curta. As amostras utilizadas para análise de alantoína no leite foram coletadas de dois dias alternados, sendo provenientes das duas ordenhas diárias. As amostras spot de urina foram obtidas de todas as vacas no 16º dia de cada período experimental, quatro horas após a alimentação matinal, durante micção estimulada por massagem na vulva. As amostras de sangue foram coletadas em tubos vacuolizados (vacutainer) por punção da veia e/ou artéria coccígea, sendo posteriormente obtidos o soro ou plasma para as análises laboratoriais. A monensina nas rações resultou em redução (P<0,05) do consumo de matéria seca (kg/dia e %PV) e de nutrientes, especialmente para a ração M48. Não houve efeito (P>0,05) dos níveis de monensina sódica utilizados sobre os coeficientes de digestibilidade aparente total da matéria seca e dos nutrientes analisados. Com a utilização de monensina sódica nas rações houve aumento da produção de leite (P<0,05), sem e com correção, e aumento da eficiência produtiva (P<0,05). Não houve diferença (P>0,05) entre a rações avaliadas para os teores de gordura, proteína, lactose e extrato seco desengordurado, havendo, no entanto, aumento da produção de gordura e lactose no nível intermediário de utilização de monensina. As rações avaliadas não influenciaram (P>0,05) o peso e o escore de condição corporal. Não houve efeito (P>0,05) das rações utilizadas nos valores de pH e nitrogênio amoniacal nos tempos avaliados, no entanto, houve efeito linear (P<0,05) com redução da porcentagem e concentração molar dos ácidos acético e butírico nos tempos avaliados, e na relação acetato/propionato. Em relação à porcentagem e a concentração molar do ácido propiônico, foi observado desvio da linearidade (P<0,05), sendo as maiores concentrações encontradas para a ração M24, comportamento semelhante para a concentração total de ácidos graxos de cadeia curta. Não houve efeito (P>0,05) das rações utilizadas nas excreções diárias totais de urina, e dos teores de alantoína e de acido úrico na urina, de alantoína no leite, e de derivados de purinas totais. Não houve diferença (P>0,05) na porcentagem de alantoína nos derivados de purina, das purinas absorvidas e do nitrogênio microbiano para as rações experimentais. Houve efeito linear (P<0,05) para eficiência microbiana para as rações contendo monensina sódica. Não houve efeito (P>0,05) das rações experimentais sobre as concentrações dos parâmetros sanguíneos analisados. As rações experimentais influenciaram (P>0,05) a eficiência de uso da energia líquida de lactação. Também foi observado efeito linear (P<0,05) das rações experimentais sobre ao consumo de energia bruta, digestível, metabolizável e líquida, e da produção de energia líquida de ganho. Foi observado desvio da linearidade (P<0,05) para a produção de energia líquida de lactação e para o balanço energético. Observou-se efeito das rações (P<0,05) para o consumo de nitrogênio total, para a excreção de nitrogênio nas fezes (g/dia) e a eficiência da utilização do nitrogênio. Em relação à excreção de nitrogênio no leite (g/dia), observou-se desvio da linearidade (P<0,05), com maiores valores para a ração M24. No entanto, não foi observado efeito das rações experimentais (P>0,05) sobre o balanço de nitrogênio, em g/dia ou em porcentagem do nitrogênio total. Os resíduos de monensina sódica detectados no leite estão dentro do limite máximo estabelecido pela FAO/WHO. A utilização de monensina sódica nas rações de vacas leiteiras no terço médio de lactação, tendo como volumoso a silagem de milho, melhorou consideravelmente o desempenho produtivo dos animais e não deixou resíduos no leite capazes de prejudicar a saúde humana. / The objective of this study was to evaluate the use of sodic monensin in ration for dairy cows on nutrients intake, total apparent digestibility of dry matter and nutrients, milk yield and composition, ruminal fermentation parameters, microbial protein synthesis, blood parameters and milk monensin residues. Twelve Holstein cows were allocated in four balanced Latin squares 3x3, and fed with the following rations: 1) control (C), basal diet without sodic monensin addition, 2) monensin 24 (M24), addition of 24 mg/kg DM of monensin in the ration, added to concentrate, and 3) monensin 48 (M48), addition of 48 mg/kg DM of monensin in the ration, added to concentrate. Daily weights of the amounts of corn silage and concentrated supplied, and the orts refused of each animal, were recorded for estimate the nutrient intake. Samples of orts and feedstuffs were analyzed for composition and subsequent nutrient intake calculation. For determination of total apparent digestibility of nutrients, the total amount of fecal dry matter excreted was estimate by indigestible detergent acid fiber (ADFi). The feces were collected in the 13th and 16th days of each experimental period, always before milking at morning and at afternoon, and frozen in freezer at -20°C , and in the end of the collection period it was made composed sample by animal with base in the dry matter, and analyzed. The milk yield and dry matter intake were measured daily during the experimental period. The samples used for analysis of milk composition were collected from two alternated days, and from the two daily milkings. Samples of ruminal fluid were collected with use of esophageal probe into two times, before (zero time) and three hours after morning fed (three time). Were determining pH, ammonia nitrogen and short chain fatty acids in ruminal fluid. The samples used for analysis of allantoin in milk were collected from two alternate days, and from the two daily milkings. The spot samples of urine were obtained from all cows in the 16th day of each experimental period, four hours after the morning feeding during urination stimulated by massage on the vulva. The samples of blood were collected in tubes vacuolizade (vacutainer) for puncture of the vein and/or artery coccygeal. The monensin use in the rations resulted in decrease (P<0.05) of dry matter and nutrients intake, especially for the M48 ration. There were not effect (P>0.05) of the experimental rations on the coefficients of total apparent digestibility of the dry matter and nutrients. The sodic monensin in the rations were reduced (P<0.05) the dry matter intake (kg/day and %BW), increased milk yield (P<0.05), corrected or not for fat percent, and increased production efficiency (P<0.05). Not difference (P>0.05) were observed between rations for milk fat, protein, lactose, total dry and non fat extract composition, and body weight and body condition score (P>0.05). The pH and concentrations of ruminal ammonia nitrogen were not different (P>0.05) for different levels of sodic monensin used in rations, in both times of collection. However, there was effect (P<0.05) of experimental rations on percentage and molar concentration of acetic and butyric acids in the both times, as well as for the acetate/propionate relation. The percentage and molar concentration of propionic acid was observed different between experimental rations (P<0.05), with the major concentrations found for ration M24. Similar results were obtained for total concentration of short chain fatty acids. There was no effect (P>0.05) in total daily excretion of urine, allantoin and uric acid in urine, allantoin in milk, and total purine derivatives. Not was observed effect (P>0.05) of experimental rations on the percentage of allantoin on total purines, purines absorbed, and in microbial nitrogen. It was observed effect (P<0.05) of microbial efficiency for the experimental rations that content sodic monensin. The experimental rations had no effect (P>0.05) in the blood parameters. It was observed effect (P<0.05) of sodic monensina rations on the efficiency of use of lactation net energy, and also were observed effect (P<0.05) in the intake of crude, digestible, metabolizable and liquid energy, as well as for production of net energy of gain. Was observed effect (P<0.05) of experimental rations on production of net lactation energy and for the energy balance. It was observed effect (P<0. 05) of experimental rations on total nitrogen intake, excretion of nitrogen in feces (g/day) and nitrogen efficiency. In relation to the excretion of nitrogen in milk (g/day), were observed effect (P<0.05) of monensina, with greater values for M24 ration. However, not were observed effect (P>0.05) of experimental rations for nitrogen balance, in g/day or in percentage of total nitrogen. The detected residues of sodic monensin in milk was smaller that the maximum limit established for FAO/WHO. The utilization of sodic monensin in midlactaion dairy cow, feed corn silage, improves de productive performance and do not result in residues in milk that prejudiced the human health.

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Staphylococcus coagulase negativa formam o grupo de agentes mais isolados de vacas com mastite em diversos países. No entanto, a grande variedade de espécies e a ausência de métodos de identificação simples e rápidos são fatores que limitam a avaliação do efeito da mastite causada por SCN sobre a produção e composição do leite. Portanto, os objetivos gerais deste estudo foram: 1) avaliar o efeito da infecção intramamária (IIM) subclínica causada por SCN sobre a composição e a produção de leite de quartos mamários; 2) determinar o efeito da IIM causada por SCN sobre a composição do leite e contagem de células somáticas (CCS); 3) avaliar a técnica de espectrometria de massas por ionização e dessorção a laser assistida por matriz tempo de voo (MALDI-TOF MS) para a identificação das espécies de SCN isoladas de vacas com mastite; 4) avaliar a frequência de espécies de SCN isoladas de vacas com mastite subclínica. Amostras compostas de leite foram coletadas de 1.242 vacas pertencentes a 21 rebanhos leiteiros. As coletas foram realizadas em duas etapas: na primeira, realizou-se coleta asséptica de amostras compostas para identificação dos agentes causadores de mastite; e na segunda, para as vacas com isolamento de SCN, a produção de leite foi mensurada e amostras de leite foram coletadas por quarto mamário para confirmação do diagnóstico microbiológico (SCN) e avaliação da composição e CCS. Os isolados de SCN foram diferenciados genotipicamente pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR), associado com o polimorfismo de fragmentos de DNA obtidos por enzimas de restrição (RFLP) e por MALDI-TOF MS. Treze cepas de referência de espécies de SCN normalmente isoladas da mastite foram utilizadas como controle positivo para as duas metodologias de identificação. Um total de 108 quartos mamários foram identificados em nível de espécie pela técnica de PCR-RFLP. Destes, foram selecionados 41 pares de quartos mamários contralaterais com e sem IIM causada por SCN para avaliação do efeito de SCN sobre a produção e composição do leite. Quartos mamários com IIM causada por SCN apresentaram maior CCS (496,99 x 103 células/mL) que os quartos mamários contralaterais sadios (160,79 x 103 células/mL). A IIM causada por SCN não afetou a produção de leite e as concentrações de gordura, proteína, caseína, lactose, sólidos totais e extrato seco desengordurado. Do total de amostras identificadas em nível de espécie pela técnica de PCRRFLP (n=108), 103 (95,37%) foram identificadas pela MALDI-TOF MS em nível de espécie. Cinco isolados de SCN apresentaram identificação em nível de gênero (Staphylococcus spp.) pela MALDI-TOF MS. Todas as cepas de referência foram corretamente identificadas por ambas as metodologias de identificação. Staphylococcus chromogenes foi a espécie mais prevalente (n=80; 74,07%) em vacas com mastite, seguida de S. saprophyticus (n=6; 5,55%) e S. haemolyticus (n=5; 4,63%). Em conclusão, a IIM subclínica causada por SCN aumenta a CCS, porém não altera a produção e composição do leite. A técnica de MALDI-TOF MS é um método sensível (95,37%) e que pode ser utilizado na identificação de espécies de SCN causadoras de mastite. Staphylococcus chromogenes é a espécie mais prevalente em vacas com mastite subclínica causada por SCN. / Coagulase negative staphylococci (CNS) are the most isolated group of mastitis pathogens in many countries. However, the diversity of species and the absence of a simple and fast identification method are limiting factors for the evaluation of the effect of CNS mastitis effect on milk yield and composition of dairy cows. Therefore, the main objectives of this study were: 1) to evaluate the effect of subclinical intramammary infection (IMI) caused by CNS on milk yield and composition at mammary quarter level; 2) to determine the effect of IMI caused by CNS on the milk composition and somatic cell count (SCC); 3) to evaluate the technique of matrix-assisted laser desorption ionization - time-of-flight - mass spectrometry (MALDI/TOF-MS) for species identification of CNS isolated from mammary glands; 4) to evaluate the frequency of CNS species isolated from cows with subclinical mastitis. Milk samples were collected from 1,242 cows distributed in 21 dairy herds. Milk samples were collected in two visits to the farm: first, composite milk samples were aseptically collected for identification of mastitis causative pathogens; and the second, the milk yield was measured and milk samples were collected at mammary quarter level for cows with isolation of CNS to confirm the diagnosis and for analysis of milk composition and SCC. Isolates of CNS were genotypically differentiated by polymerase chain reaction (PCR) associated with restriction fragment length polymorphism assays and by MALDI-TOF MS. Thirteen CNS reference strains commonly isolated from mastitis were used as positive controls for the two identification methods. A total of 108 mammary quarters were genotipically identified by PCR-RFLP. Of these, 41 pairs of contralateral mammary quarters both with and without IIM caused by SCN were evaluated. Mammary quarters infected with CNS presented higher SCC (496.99 x 103 cells / mL) than contralateral healthy mammary quarters (160.79 x 103 cells / mL). Intramammary infection caused by CNS did not affect the milk yield and the concentrations of fat, protein, casein, lactose, total solids and solids not fat. Of the 108 samples identified by PCR-RFLP, 103 (95.37%) were also identified by MALDI-TOF MS with to the species level. Five CNS had reliable identification at genus level (Staphylococcus spp.). All the reference strains were correctly identified by both identification methods. The most prevalent species isolated from samples collected from cows with mastitis were Staphylococcus chromogenes (n = 80, 74.07%), followed by S. saprophyticus (n = 6, 5.55%) and S. haemolyticus (n = 5, 4.63%). In conclusion, subclinical mastitis caused by CNS increases the SCC, but do not affect the milk yield and composition. The MALDI-TOF MS is a sensitive method (95.37%) that can be used for the identification of CNS species causing mastitis. Staphylococcus chromogenes is the most prevalent CNS species isolated in the samples collected from cows with subclinical mastitis.

O presente estudo foi conduzido com o objetivo de avaliar os efeitos de diferentes níveis de inclusão de grão de soja cru e integral na alimentação de vacas leiteiras no final de lactação, e seus efeitos sobre o consumo e digestibilidade da matéria seca e nutrientes, fermentação ruminal, síntese de proteína microbiana, produção e composição do leite, perfil de ácidos graxos da gordura do leite, concentrações de parâmetros sanguíneos, balanço de energia e nitrogênio, excreção e composição do grão de soja presente nas fezes. Foram utilizadas 16 vacas da raça Holandesa, agrupadas em quatro quadrados latinos balanceados e contemporâneos 4x4, alimentadas com as seguintes rações: 1) Controle (C), composto por ração sem a inclusão de grão de soja; 2) Grão de soja integral 9% (G9), 3) Grão de soja integral 18% (G18), e 4) Grão de soja integral 27% (G27), com a utilização respectivamente, de 9,0, 18,0 e 27% de grão de soja cru e integral na ração, na matéria seca. A produção de leite e o consumo de matéria seca foram mensurados diariamente durante todo o período experimental. As amostras utilizadas para análise da composição do leite foram coletadas no 16o dia de cada período experimental, sendo provenientes das duas ordenhas diárias. As amostras de sangue foram coletadas em tubos vacuolizados por punção da veia e/ou artéria coccígea. As amostras de líquido ruminal foram coletadas com a utilização de sonda esofágica três horas após a alimentação matinal. A digestibilidade foi determinada por meio de indicador interno FDAi. Houve redução no consumo de matéria seca e de carboidratos não fibrosos nas vacas suplementadas com a ração G27 em relação às demais rações, que não diferiram entre si. Foi observado efeito linear crescente no consumo de extrato etéreo, onde os animais submetidos à dieta G27 apresentaram maiores valores. Houve diferença na digestibilidade aparente total dos nutrientes entre as rações experimentais, sendo que a dieta G18 e G27 apresentaram diminuição da digestibilidade dos carboidratos totais, em relação às dietas C e G9. Não houve efeito das rações utilizadas nos valores de pH ruminal. A concentração de nitrogênio amoniacal ruminal foi maior para as vacas que receberam a dieta controle em relação às dietas com grão de soja. Entre as rações utilizadas, a ração G27 resultou em redução da produção de leite e de proteína em kg/dia e aumentou os teores de gordura no leite. No perfil de ácidos graxos do leite houve um aumento da quantidade de ácidos graxos insaturados e no total de C18:0 saturado com aumento da inclusão de grão de soja. As concentrações de colesterol total e HDL foram maiores para as vacas alimentadas com rações contendo grão de soja em relação à ração controle. As rações utilizadas não influenciaram a síntese de proteína microbiana. O balanço de energia foi influenciado pelas dietas experimentais. Com relação à composição das fezes a dieta G27 apresentou porcentagens maiores de proteína e extrato etéreo, e a excreção de grão de soja nas fezes mostrou efeito linear crescente mesmo que a quantidade kg/dia foi baixa, assim à medida que aumentava os níveis de inclusão aumentava a excreção do grão nas fezes. A utilização de até 27% de grão de soja nas rações apresentou alterações sutis no desempenho produtivo e metabolismo de vacas em lactação, sendo o resultado dependente do nível de grão de soja cru e integral adicionado as rações. / This study was carried to evaluate the effects of different levels of crude soybean in feeding of dairy cows in late lactation on intake and nutrients digestibility, ruminal fermentation, microbial protein synthesis, productive performance, fatty acids profile of milk fat, concentrations of blood parameters, balance of energy and nitrogen and excretion and composition of soybean present in faeces. Sixteen Holstein cows, allocated in four latin squares balanced 4x4, fed with the following diets: 1) Control (C), composed of feed without the inclusion of soybean, 2) Soybean 9% (G9), 3) Soybean 18% (G18), and 4) Soybean 27% (G27), using respectively 9.0, 18.0 and 27% of whole soybean in dry matter. Were evaluated daily milk yield and dry matter intake during throughout the experimental period. The samples used for milk composition analysis were collected on the 16th day of each period, from total milking. Blood samples were collected with vacuolized tubes from coccygeal vein and/or artery. The samples of ruminal fluid were collected with use of esophageal probe three hours after the morning feeding. The digestibility was determined use of an internal indicator (ADFi). There was observed a decrease in dry matter intake and non-fibrous carbohydrates in cows fed the G27 ration compared to other diets. The extract ether intake has increased linear effect, where the animals submitted to G27 diet presented higher levels. Not was observing difference in apparent total digestibility of the nutrients, although the digestibility of nonfibrous carbohydrates has a decrease in the animals submitted to G27. No were observed effects of diets used in ruminal pH. The ruminal ammonia concentration was higher for cows that received the control diet compared to diets with soybean. Among the ration G24 resulted in decreased of milk yield and protein (kg/day). The levels of fat were affected by fat sources added to the diet, showing that the soybean as a source of fat does not depress the concentration of fat. Were observe a change of profile the fatty acid of milk fat, the proportion of unsaturated fatty acids and C18:0 was higher as they increased the inclusion of soybean on diets. The concentrations of total cholesterol and HDL were higher for cows fed diets containing soybean in relation to the control diet. Also, not were observe effects of diets in microbial protein synthesis. The balance of energy was influenced by experimental diets. The balance of nitrogen not influenced by experimental diets. There excretion of fecal nitrogen was higher for G27 diet. The composition of faeces G27 diet showed larger percentages of protein and fat, and excretion of soybean in the feces showed an increasing linear effect, as well as the increased levels of inclusion of grain increased excretion in the faeces. The use of 27% of soybean in the diet has a subtle alter the productive performance and metabolism in dairy cows.

Os objetivos deste trabalho foram determinar a sensibilidade e especificidade do limiar de contagem de células somáticas (CCS) de vacas Gir para o diagnóstico de mastite subclínica causada por patógenos primários e secundários e avaliar os efeitos de rebanho, vaca, mês de coleta, quarto mamário, presença de infecção intramamária, tipo de microrganismo e suas interações sobre o logCCS e composição do leite. Avaliou-se a hipótese que o limiar da CCS para detecção de mastite subclínica é igual entre vacas Gir e Holandesas. Foram utilizadas 221 vacas Gir em lactação, provenientes de três fazendas comerciais. Foram coletadas amostras de leite individuais por quarto mamário e compostas uma vez por mês, durante um ano. Foram realizadas análises de CCS, composição do leite e cultura microbiológica. O quarto mamário e a vaca foram considerados unidades experimentais. Para determinar a sensibilidade, especificidade e odds ratio (OR) dos limiares da CCS para identificação de quartos infectados, foram utilizados quatro valores de CCS: 100, 200, 300 e 400 (x 103 células/mL), assim como a correlação entre a CCS e composição do leite. Não houve efeito do rebanho sobre o logCCS para amostras individuais de quartos mamários e compostas, mas vaca dentro de rebanho foi o principal fator responsável pela variação do logCCS. Houve efeito do rebanho sobre a composição do leite, assim como o mês de coleta apresentou efeito tanto sobre o logCCS quanto para a composição do leite, considerando as duas unidades experimentais. A presença de infecção intramamária afetou negativamente a composição do leite, exceto sobre o teor de gordura; sendo que os maiores teores de lactose, proteína e ESD foram encontrados em amostras sem isolamento bacteriano. Os maiores logCCS foram obtidos em amostras infectadas. O limiar da CCS de 100 x 103 células/mL apresentou, em ambas as unidades experimentais, maiores valores de sensibilidade e valor preditivo negativo. O limiar de 200 x 103 células/mL apresentou maior chance da ocorrência de mastite do que o limiar de 100 x 103 células/mL. Foi observada correlação negativa entre CCS com lactose e extrato seco desengordurado (ESD), mas a correlação foi positiva entre CCS com gordura e proteína, tanto em nível de quarto mamário quanto de vaca. Portanto, a composição do leite foi influenciada pela CCS, os teores de lactose e ESD diminuíram em altas CCS, enquanto que as concentrações de gordura e proteína aumentaram. / The aim of this study was to determine the sensibility and specificity of somatic cell count (SCC) threshold in Gyr cows to diagnosis the subclinical mastitis caused by primary and secondary pathogens, and to evaluate the effect of herd, cows, month, mammary quarter, intramammary infection, type of microorganism and their interactions on logSCC and milk composition. The hypothesis to be tested was that the SCC threshold to detection of subclinical mastitis is the same for Holstein and Gir cows. A total of 221 lactation Gir cows from three commercial dairy farms was selected. Composed and quarter individual milk samples were collected once a month, during one year for SCC, milk composition and bacteriological analysis. The mammary quarter and the cow were considered experimental units. To determine the sensibility, specificity and odds ratio (OR) from SCC threshold to identify the infected quarters four values of SCC: 100, 200, 300 and 400 (x 103 cells/mL) were used. It was also evaluated the correlation between SCC and milk composition. There was no effect of herd on logSCC in individuals and composed samples, but cow nested within herd was major factor responsible for the logSCC variation. The month of sampling presented significant effect on logSCC and milk composition in both experimental units. The intramammary infection presence affected negatively the milk composition, except of fat concentration. Higher lactose, protein and non-fat solids (NFS) percentages were found in negative samples and higher logSCC were observed in infected samples. The SCC threshold of 100 x 103 cells/mL presented the major sensibility and negative predictive value for subclinical mastitis detection. The threshold of 200 x 103 cells/mL had higher chance to have mastitis than the threshold of 100 x 103 cells/mL. It was observed a negative correlation between SCC with lactose and NFS; but the correlation was positive between SCC with fat and protein in mammary quarters and cow level. Milk composition was influenced by SCC, once the lactose and NFS percentages decreased in samples with high SCC and the protein and fat concentration increased.

Entre os anos de 2007 e 2009, no nordeste do Rio Grande do Sul, foi conduzido um estudo para avaliar a ocorrência de leite instável não ácido, fatores que afetam a estabilidade do leite bovino e a relação entre o teste do álcool e o teste de tempo de coagulação do leite. Fez-se um questionário para a tipificação das propriedades, um levantamento mensal do leite de 50 propriedades, e se analisou a acidez, coagulação na fervura e no álcool e tempo de coagulação no tanque, além da composição química, células somáticas e contagem bacteriana. Posteriormente, foi realizado um experimento avaliando dietas com três proporções de concentrado (35, 45 e 55%), por 56 dias, avaliando o número de dias em lactação, produção leiteira, peso, condição corporal, características físico-química do leite, pH ruminal e da urina e composição química do sangue. Complementarmente foram realizados quatro protocolos experimentais para avaliar o efeito da temperatura sobre o teste do álcool, o efeito do citrato sobre a estabilidade do leite, o efeito do uso de capilares de diferentes tamanhos sobre o resultado de tempo de coagulação e o uso de diferentes metodologias analíticas para determinação de lactose no leite. A análise estatística dos dados foi efetuada com o programa SAS (2001), avaliando a frequência de ocorrência de fatores (Proc FREQ), correlação (Proc CORR), variância (Proc GLM) e regressão (Proc REG), sendo que no experimento com animais as médias foram ajustadas utilizando dias em lactação, e os valores iniciais de cada atributo como co-variáveis. Foram observados elevada incidência de LINA, CCS e CBT, pouca interferência da dieta na ocorrência de LINA e na alteração da composição do leite e baixa correlação entre o teste do álcool e o tempo de coagulação no tanque. Não houve relação entre o teste da fervura e os testes do álcool e do tempo de coagulação. O citrato melhorou a estabilidade do leite medida no teste do álcool e no tempo de coagulação. A temperatura do leite (4 x 20°C) não interferiu no resultado do teste do álcool. As dimensões dos capilares de teste do tempo de coagulação modificam os valores obtidos, podendo prejudicar a comparação entre diferentes laboratórios. Entre os fatores testados, os que atuaram sobre a estabilidade do leite no teste do álcool foram: a concentração inicial de álcool capaz de induzir a coagulação, a concentração de cátions divalentes em relação aos monovalentes e o teor de sódio do leite. Em relação ao teste do tempo de coagulação, apenas o seu valor inicial foi significativo. Conclui-se que a ocorrência da instabilidade do leite é elevada, a composição mineral do leite foi a que exerceu maior influência sobre os resultados no teste do álcool, não foram detectados fatores que influenciaram o teste do tempo de coagulação nem o da fervura. Não se pode ainda recomendar outro teste para substituir o teste do álcool. / Between 2007 and 2009 in the Northeastern Rio Grande do Sul, a study was conducted aiming to evaluate the occurrence of unstable non-acid milk, the factors affecting the stability of bovine milk and the degree of relationship between test results and alcohol test coagulation time of milk. Was carried out initially, a questionnaire for the characterization of the properties, then a monthly survey of milk from 50 properties, and examined the acidity (acidity and pH), coagulation test and the boiling alcohol and clotting time in tank, and chemical composition, somatic cell and bacterial count. Later we performed an experiment on animals, which were fed with three different proportions of concentrate (35, 45 and 55%) for 56 days and were evaluated the number of days in milk, milk production, weight, body condition, features physical chemistry of milk, pH and composition of urine and blood chemistry. In addition were performed four experimental protocols to evaluate the effect of temperature on the alcohol test, the effect of citrate on the stability of milk, the effect of using capillaries of different sizes on the results of clotting time and the use of different analytical methodologies for determination of lactose in milk. The statistical analysis was performed with SAS software (2001), evaluating the occurrence of factors (Proc FREQ), correlation (CORR), variance (Proc GLM) and regression (Proc REG), and the experiment animals the means were adjusted using days in milk, and the initial values of each attribute as covariates. We observed high levels of incidence of LINA, CCS and CBT, little interference from the diet in the occurrence of LINA and change the composition of milk and low correlation between the alcohol and the clotting time in the tank. There was no relationship between the boiling test and tests for alcohol and clotting time. Citrate exerted positive action on the stability of milk as the test of alcohol and the clotting time. The temperature of milk during the test (4 x 20 ° C) had no effect on the test result of alcohol. The dimensions of the capillary test of clotting time modify the values and may undermine the comparison between different laboratories. Among the factors tested, acted on the stability of milk alcohol test were: the initial concentration of alcohol to induce coagulation, the concentration of divalent cations compared to monovalent and sodium content of milk. For the test of clotting time, only the initial value was significant. It is concluded that the occurrence of instability of the milk is high, the factors measured, the mineral composition of milk that was the greatest influence on the results in the alcohol, but not detected factors influencing the test of clotting time or to the boil. You can not even recommend another test to replace the alcohol test.

O Rio Grande de Sul é o estado brasileiro que tem apresentado o maior crescimento na produtividade leiteira do país. Este aumento pode, em parte, ser explicado pelas oportunidades que a produção de leite tem proporcionado em aumentar a renda por hectare melhorando as condições socioeconômicas dos envolvidos na atividade. Porém, a produção ainda se mantém aquém do esperado para o potencial genético do seu rebanho em termos de produtividade e qualidade. O presente trabalho tem como objetivo estudar fatores ambientais e metabólicos que podem estar afetando a quantidade e a qualidade do leite, mediante um estudo retrospectivo que utiliza o banco de dados do controle leiteiro do SARLE-UPF, e um estudo metabólico prospectivo com vacas pertencentes a rebanhos do Planalto Médio do Rio Grande do Sul. No primeiro estudo foram analisados 115 rebanhos que totalizaram 187.796 informações individuais de vacas da raça Holandesa em um período de seis anos (2008-2013), onde se avaliou as influências que as estações do ano, dias em lactação e número de partos acarretaram na composição e produção de leite, enquanto o segundo estudo foram analisadas 119 vacas da raça Holandesa durante o período de transição onde se avaliou os transtornos clínicos e subclínicos e seus efeitos sobre a produção e a composição do leite. O estudo retrospectivo apresenta o efeito da sazonalidade, onde no inverno obtiveram-se as maiores produções de leite e de sólidos totais. Vacas no início da lactação (6 a 60 DEL) e aquelas com dois e três partos foram as mais produtivas. O maior desafio a ser vencido é a diminuição da contagem de células somáticas que se correlacionaram negativamente com a produção e o percentual de lactose. No estudo prospectivo foram encontrados 26,9% de transtornos clínicos e 53,8% de transtornos subclínicos, sendo a hipocalcemia subclínica aquela com maior ocorrência. A produção de leite foi afetada por alguns transtornos clínicos e subclínicos e esteve associada com balanço energético negativo. A gordura láctea e o cociente G:P apresentaram-se aumentadas concomitantemente quando ocorreu aumento dos AGNE, BHB e perda acentuada de ECC. / Rio Grande de Sul is the Brazilian state with the largest increase in milk yield. This increase may be partly explained by the opportunities that dairy production has opened up for raises in income per hectare, thus improving dairy farmers’ socioeconomic conditions. However, milk yield is below expectations for the dairy herd’s genetic potential as far as productivity and quality are concerned. The aim of the present thesis is to investigate environmental and metabolic factors that may affect the quantity and quality of milk. A retrospective study based on the milk recording data obtained by the Division of Dairy Herd Analyses of Universidade de Passo Fundo (SARLE-UPF) and a metabolic prospective study in cows from the Plateau Region of Rio Grande do Sul were conducted. The first study assessed 115 herds, totaling 187,796 individual data on Holstein cows within a six-year period (2008-2013), analyzing the effects of seasons of the year, days in milk, and parity on milk composition and yield. The second study included 119 Holstein cows during the transition period, and assessed clinical and subclinical disorders and their effects on milk yield and composition. The retrospective study demonstrated the effect of seasonality, revealing that the largest productions of milk and total solids occurred in winter. Cows in early lactation (6 to 60 DIM) and those in second and third lactations were the most productive ones. The biggest challenge to be overcome rests with the reduction of somatic cell count, which is negatively correlated with yield and with lactose concentration. The prospective study detected 26.9% of clinical disorders and 53.8% of subclinical disorders, among which the highest incidence was that of subclinical hypocalcemia. Milk yield was affected by some clinical and subclinical disorders and was associated with a negative energy balance. Milk fat and the F:P ratio increased concomitantly when high levels of NEFA and BHB and remarkable loss of BCS were observed.