Orientador : Elenice A. de Moraes Ferrari / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T07:15:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Brito_Ivana_M.pdf: 2178839 bytes, checksum: 83f4d09affdf89a62ee98be50aaf6e4a (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: O presente estudo pretendeu analisar os mecanismos neurais envolvidos na aquisição de condicionamento clássico aversivo, em pombos, através do estudo da expressão do produto do proto-oncogene zif/268, no hipocampo, após a sessão de treino. Os animais foram submetidos a três associações som (1O00-Hz, 83 dE, ls) choque (10 mA, ls), durante os 20 minutos da sessão. Os animais controles foram expostos apenas ao choque, contexto, som ou manipulação. Análises comportamentais revelaram um aumento do freezíng durante a sessão de treino dos grupos som-choque e choque. Análises imuno histoquímica foram realizadas uma hora após o treino. Essas análises revelaram uma maior expressão de zif/268 no hipocampo de ambos os grupos, experimental e choque, em comparação com os grupos controle som, contexto e manipulação. A expressão do zif/268 no hipocampo indicou uma ativação diferencial das regiões hipocampais para cada grupo: o hipocampo medial para o grupo som-choque, e o hipocampo dorsal para o grupo choque. Os dados são interpretados como evidência da participação do hipocampo no condicionamento clássico aversivo / Abstract: The present study intended to analyze the neural mechanisms underlying the acquisition of aversive c1assical conditioning in pigeons by studying the expression of the product of the immediate early gene zif/268 in the hippocampus after the training session. Pigeons were submitted to three sound (1O00-Hz, 83 dB, 1s) and shock (10 mA, 1s) associations during one 20 min session. Control pigeons were exposed only to the shock context, sound or manipulation. Behavioural analysis revealed increased freezing during the training session in the sound-shock and shock groups. The immunohistochemical analysis began one hour after training. Analysis revealed enhanced expression of zif/268 in the hippocampus both for the experimental and the shock-control groups in comparison to sound, context and manipulation-control pigeons. The expression of zif/268 in the hippocampus indicated a differential activation of hippocampal regions in each of these groups: medial hippocampus for the sound-shock group and dorsal hippocampus for the shock groups. The data are interpreted as evidences of the hippocampal participation in the c1assical aversive conditioning / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-01-30. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:33Z : No. of bitstreams: 1 Publico-Ferreira%20a.pdf: 1529637 bytes, checksum: 0c1275be36a91115271098d27675280a (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:33Z : No. of bitstreams: 2 Publico-Ferreira%20a.pdf: 1529637 bytes, checksum: 0c1275be36a91115271098d27675280a (MD5) Publico-Ferreira%20b.pdf: 1159891 bytes, checksum: 34e1a53a8822f61cc395edb0b1e25f38 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:33Z : No. of bitstreams: 3 Publico-Ferreira%20a.pdf: 1529637 bytes, checksum: 0c1275be36a91115271098d27675280a (MD5) Publico-Ferreira%20b.pdf: 1159891 bytes, checksum: 34e1a53a8822f61cc395edb0b1e25f38 (MD5) Publico-Ferreira%20c.pdf: 1074107 bytes, checksum: ba421a04eed572fea3b3250c3254343b (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:34Z : No. of bitstreams: 4 Publico-Ferreira%20a.pdf: 1529637 bytes, checksum: 0c1275be36a91115271098d27675280a (MD5) Publico-Ferreira%20b.pdf: 1159891 bytes, checksum: 34e1a53a8822f61cc395edb0b1e25f38 (MD5) Publico-Ferreira%20c.pdf: 1074107 bytes, checksum: ba421a04eed572fea3b3250c3254343b (MD5) Publico-Ferreira%20d.pdf: 688165 bytes, checksum: 873a3a2c68e5abe7ae2554d42d64cf31 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / O núcleo central da amígdala (CeA) – uma estrutura crítica na memória emocional – projeta para a substância negra compacta e para o núcleo retrorubral, ambos os quais fornecem inervação dopaminérgica ao estriado dorsal. O estriado dorsal está envolvido em vários processos de aprendizagem e memória, tais como memória de procedimento, aprendizagem de hábitos, associação com recompensa e memória emocional. A proposta do presente estudo foi verificar os efeitos de lesões do estriado dorsal e das conexões indiretas entre o CeA e o estriado dorsal nas tarefas de condicionamento clássico de medo ao som e ao contexto. Na Etapa 1, ratos Wistar receberam, antes da sessão de treino, lesões bilaterais do CeA e do estriado dorsal, e lesões assimétricas de CeA-estriado dorsal (desconexão funcional) - que consistia em uma lesão eletrolítica do CeA em um hemisfério cerebral combinada com uma lesão do estriado dorsal no hemisfério contralateral - e foram submetidos às tarefas de condicionamento de medo ao som e ao contexto. A lesão pré-treino do CeA prejudicou o desempenho dos animais em ambas as tarefas. Por outro lado, a lesão bilateral do estriado dorsal e a lesão assimétrica contralateral do CeA-estriado dorsal prejudicaram o desempenho dos animais apenas na tarefa de condicionamento de medo ao som. Esses resultados sugerem que tanto o estriado dorsal como as conexões entre o CeA e o estriado são importantes na mediação do condicionamento de medo ao som. Na Etapa 2, foram realizadas lesões bilaterais do estriado dorsal e lesões assimétricas do CeA-estriado dorsal antes do teste (após o treino) dos animais na tarefa comportamental. Os resultados mostraram que os animais com lesões bilaterais do estriado dorsal, pré-teste, apresentaram prejuízo na tarefa de condicionamento de medo ao som, mas não na de condicionamento de medo ao contexto. As concentrações plasmáticas de ACTH avaliadas após os testes das tarefas comportamentais não foram diferentes entre os animais lesados e os animais controles. A lesão assimétrica contralateral CeA-estriado dorsal realizada antes do teste não prejudicou o desempenho dos animais na tarefa de condicionamento de medo ao som. Os resultados desta etapa sugerem que o estriado dorsal também está envolvido na expressão da resposta condicionada de medo ao som, sendo este envolvimento seletivo às respostas que apresentam um componente somatomotor, como a resposta de congelamento. Entretanto, a interação entre o CeA e o estriado dorsal não é importante no momento da expressão desta mesma resposta. Os principais achados xix do presente trabalho foram confirmados após a inativação temporária pré-treino de estriado dorsal e das conexões indiretas entre o CeA-estriado dorsal na tarefa de condicionamento de medo ao som (Etapa 3). No último experimento da Etapa 3 observou-se ainda que a lesão de CeA combinada com a inativação temporária de estriado dorsal imediatamente após o treino do animal, não prejudicou o desempenho da tarefa de condicionamento de medo ao som. Estes resultados indicam que as conexões entre o CeA e o estriado dorsal são importantes para a aquisição do condicionamento de medo ao som, mas não para a consolidação desta tarefa. O estriado dorsal, por sua vez, é importante para a aquisição/consolidação e expressão do condicionamento de medo ao som. Os resultados do presente estudo sugerem, pela primeira vez, que a via indireta CeA-estriado dorsal está envolvida na aquisição da tarefa de condicionamento de medo ao som, indicando que uma estrutura prosencefálica – o estriado dorsal - medeia a resposta somatomotora condicionada a um estímulo discreto. Esses resultados, também estão de acordo com outros estudos que mostram que os condicionamentos de medo ao som e ao contexto são mediados por diferentes vias anatômicas. / The central nucleus of the amygdala (CeA) - a critical structure in emotional memory - projects to the substantia nigra pars compacta and retrorubral nucleus, both of which provide dopaminergic innervation to the dorsal striatum. Dorsal striatum is involved in several learning and memory processes, such as procedural memory, habit learning, reward-association and emotional memory. The purpose of the present study was to verify the effects of lesions in the dorsal striatum and in the indirect pathway between the CeA and dorsal striatum on tone and contextual fear conditioning tasks. In Phase 1, Wistar rats received pre-training bilateral lesions of the CeA and dorsal striatum, and pre-training asymmetrical CeA-dorsal striatum lesions that consist of an electrolytic lesion of the CeA in one cerebral hemisphere combined with a dorsal striatum lesion in the contralateral hemisphere, and were submitted to tone and contextual fear conditioning tasks. Pre-training CeA lesion impaired the performance of animals on both tasks. However, bilateral dorsal striatum lesion and the asymmetrical contralateral CeA-dorsal striatum lesion only disrupted the performance in the tone fear conditioning task. These results suggest that both the dorsal striatum and the indirect CeA-dorsal striatum pathways are important in mediating tone fear conditioning. In Phase 2, bilateral dorsal striatum lesions and asymmetrical CeA-dorsal striatum lesions were performed before the test (after training) of animals in the behavioral tasks. The results showed that animals with bilateral pre-test dorsal striatum lesions showed impairment in tone, but not in contextual fear conditioning tasks. ACTH plasma levels, measured after the behavioral tests, did not differ between lesioned and control animals. Asymmetrical contralateral CeA-dorsal striatum lesion carried out before the test did not impair the performance of animals in the tone fear conditioning task. The results observed in Phase 2 suggest that dorsal striatum is also involved in the expression of the conditioned fear response to tone, and that this involvement is selective to responses that present a somatomotor component, such as freezing response. However, the interaction between CeA and dorsal striatum is not important for the expression of this response. The main findings of the present work were confirmed by pre-training temporal inactivation of the dorsal striatum and the indirect CeA-dorsal striatum pathway in tone fear conditioning (Phase 3). The last experiment of this phase showed that the temporal inactivation of CeA-dorsal striatum, immediately after training, did not impair the behavioral performance of animals in the tone fear xxi conditioning task. These results indicate that the CeA-dorsal striatum pathway is important for the acquisition, but not for the consolidation of this task. On the other hand, the dorsal striatum is involved in the acquisition/consolidation and expression of tone fear conditioning. The present results suggest, for the first time, that an indirect CeA-dorsal striatum pathway is involved in the acquisition of tone fear conditioning, implying that a forebrain structure – the dorsal striatum - mediates a somatomotor conditioned response to an explicit stimulus. Moreover, these results corroborate previous studies showing that tone and contextual fear conditioning are mediated by distinct anatomical pathway. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Orientador: Elenice A. de Moraes Ferrari, Fred W. Turek / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-24T19:35:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Valentinuzzi_VeronicaSandra_D.pdf: 5420911 bytes, checksum: eb1122f72f5542ede9865daad07f1eee (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Estudos da variação temporal de processos de aprendizagem e memória são relativamente escassos e inconsistentes, fundamentalmente, devido à falta de uma padronização dos métodos utilizados e especificação dos tipos de controles necessários, que permitam isolar componentes temporais endógenos da aprendizagem propriamente dita. Assim, no presente trabalho discutimos as dificuldades deste tipo de estudo e sugerimos estratégias que poderiam ajudar a controlar alguns dos fatores mascaradores. Foram realizados três estudos tentando aplicar algumas destas estratégias. No primeiro, analisamos o efeito da hora do dia na habituação a um contexto novo em camundongos, quantificando o comportamento ambulatório por meio de observação direta. Em condições de claroescuro um ritmo diurno foi detectado, porém nenhum efeito temporal foi observado em animais submetidos a um fotoperíodo esqueleto, situação em que se evita os efeitos mascaradores de um ciclo claro-escuro. Estes resultados demonstram que o ciclo de iluminação pode alterar significativamente a resposta a um contexto, reafirmando a necessidade de um controle preciso desta condição externa. Em estudos de ritmicidade de aprendizagem, devido à elevada freqüência de amostragem necessária e à necessidade de testes em horários pouco convenientes, a automatização da medida comportamental resulta indispensável. Assim, no segundo estudo foi validado um equipamento computadorizado para a medida do comportamento de imobilização em situações de condicionamento aversivo. As medidas comportamentais obtidas por este método automático mostraram uma elevada correlação com as medidas obtidas por observação direta. Conseqüentemente, este sistema foi utilizado no terceiro estudo onde se analisou o condicionamento aversivo durante as fases de atividade e de inatividade de camundongos submetidos a um fotoperíodo esqueleto. Uma diferença significativa entre os testes matutinos e os testes vespertinos foi detectada na expressão e extinção do condicionamento aversivo a um contexto, enquanto que nenhum efeito temporal foi observado no condicionamento aversivo a um som. O fato de que estes dois tipos de aprendizagens envolvem estruturas neurais diferentes sugere que o relógio biológico estaria tendo um efeito modulatório nas vias responsáveis pelo condicionamento a um contexto / Abstract: Studies that analyze a temporal variation in learning and memory processes are relatively scattered and inconsistent, mainly due to the lack of systematic methods and specifications of the necessary controls that would allow the dissection of a temporal component in the learning process per se. Here we analyze the difficulties of this kind of study and suggest a few strategies that could help control some of the masking factors. Three studies were performed applying some of these strategies. In the first study we analyzed habituation to a novel environment in mice by quantifying ambulation in an open field through direct observation. Mice submitted to a light-dark cycle showed a diurnal rhythm in learning however, no temporal effect was observed in animals submitted to a skeleton photoperiod (tw015-minute bright light pulses separated by 12 h of green dim light). Under these conditions the masking effects of a light-dark cyc1e are avoided. These results demonstrate that the response to a novel environment is strongly affected by the illumination cycle, thus reinforcing the need for precise control and specification of this condition. When analyzing learning at different times of the day automation of behavioral sCO1:ing becomes essential due to the need for high frequency in data collection and testing which occurs around the clock. Therefore, a second study was performed where a computer-assisted system for scoring freezing behavior in mice during fear conditioning situations was validated. The computer measures obtained during fear conditioning tests showed high correlations with hand-scored freezing. Consequently, this data collection system was used in a third study where fear conditioning was analyzed during the active and inactive phases of mice submitted to a skeleton photoperiod. A significant difference in the expression and extinction rate of context-dependent fear conditioning was observed between mice trained and tested in the morning versus the evening. In contrast, no diurnal rhythm was detected for tone-cued fear conditioning. The biological clock may have a modulating effect on the hippocampal-dependent pathway which underlies context fear conditioning and no effect on the hippocampal-independent pathway underlying tone-fear conditioning / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Ciências Biológicas

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:45:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012 / A ayahuasca e uma palavra da lingua nativa americana Quechua comumente traduzida como cipo das almas. E uma decoccao alucinogena preparada com plantas psicoativas. O cha contem N, N-dimetiltriptamina (DMT), um potente agente psicodelico proveniente da Psychotria viridis e tambem contem os alcaloides β-carbolinicos contidos na Banisteriopsis caapi. Estas carbolinas β- carbolinas inibem a enzima monoaminaoxidase e, desta maneira as β-carbolinas protegem DMT de ser degradada. Assim, DMT e capaz de atravessar a barreira hematoencefalica, se liga a receptores 5-HT2, exercendo o seu efeito. Estudos mostram que os voluntarios relataram um estado altamente emocional e, correspondentemente, a inGestão da ayahuasca causou uma elevada atividade cerebral na amigdala e giro parahipocampal, estruturas envolvidas na aprendizagem emocional e memoria. Utilizando os modelos de condicionamento de medo ao contexto e ao som, nos verificamos se a administracao oral de ayahuasca antes, imediatamente apos a o treino, e a manipulacao farmacologica pre-teste poderia interferir com os processos mnemonicos. Os nossos resultados mostraram que as administracoes das doses 250, 500 ou 750 mg/kg nao afetaram a aquisicao das tarefas de CMC e CMS. Diferentes doses de ayahuasca (50 ou 500 mg/kg) administradas imediatamente apos o treino nao afetaram a consolidacao do CMC. Alem disso, as doses 50 e 500 mg/kg nao alteraram a consolidacao do CMS. A administracao pre-teste de ayahuasca (50 e 500 mg/kg) nao alterou o teste de evocacao 1 em ambas as tarefas (CMC/CMS), e nem o teste de evocacao 2 para o CMS. No entanto, a administracao pre-teste de ayahuasca 500 mg/kg causou um decrescimo significativo no comportamento de congelamento dos ratos do teste de evocacao 1 para o teste 2, na tarefa de condicionamento de medo ao contexto. Estes resultados sugerem que a ayahuasca pode facilitar a extincao da memoria aversiva dependente principalmente do hipocampo e possivelmente da amigdala / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2017-12-20T10:31:42Z No. of bitstreams: 1 Tese-15850.pdf: 1452320 bytes, checksum: 5fdc2d87485efb0b40058c462ae81ca6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-20T10:31:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese-15850.pdf: 1452320 bytes, checksum: 5fdc2d87485efb0b40058c462ae81ca6 (MD5) Previous issue date: 2013 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / Diversos estudos sugerem a existência de múltiplos sistemas de memória, que interagem entre si, de forma competitiva ou comparativa. Existem evidências de que os processos de aprendizagem e memória dependem da integridade do hipocampo, estriado e córtex pré-frontal. Já foi demonstrado que essas três estruturas estão envolvidas com o condicionamento de medo, uma tarefa comportamental que avalia a memória. Durante o treino da tarefa de condicionamento de medo, utiliza-se um choque nas patas que pode ser pareado com o ambiente (contexto foreground; CMC) ou com um estímulo discreto, como um som (nesse caso, o condicionamento do contexto fica em segundo plano, chamado de contexto background; CMS). Outra maneira de se estudar a memória é por meio da biologia molecular, estudando genes relacionados a plasticidade neural, como os genes de expressão imediata. No entanto, o papel do estriado no condicionamento de medo ao som (CMS) ainda não totalmente esclarecido. Nosso objetivos foi avaliar a expressão dos genes de expressão imediata após uma tarefa de memória no estriado. No presente estudo, o hipocampo foi inativado com AP-5 a fim de se verificar a possível interação entre estruturas cerebrais, através da análise dos genes de expressão imediata (IEGs) c-fos, Egr-1 e Arc no hipocampo, estriado e córtex pré-frontal após o treino da tarefa de CMS. Na primeira etapa do estudo, foi possível observar que o AP-5 causou um prejuízo no CMC, mas não no CMS. Na segunda etapa do estudo, verificamos a expressão gênica (por meio da técnica de PCR em tempo real) e protéica (por meio da técnica de westen blot) dos IEGS 30 e 90 minutos após o treino do CMS. Quando o CMS fosse realizado e o hipocampo estivesse inativado com AP-5, era de se esperar que a participação contextual fosse menor; assim, a participação do estriado nesse tipo de condicionamento poderia ser melhor estudada. No entanto, os nossos dados sugerem que a administração de AP-5 no hipocampo não interfere com a expressão proteica de c-fos, egr1 e arc no estriado, já que os grupos de animais que receberam AP-5 são iguais aos seus grupos controles que receberam salina. Além disso, a administração de AP-5 diretamente no hipocampo aumentou a expressão gênica dos IEGs 30 minutos depois da tarefa. Por fim, os dados mostram que os grupos que receberam o pareamento e o grupo só exposto ao ambiente apresentam uma menor expressão protéica relativa de EGR1 quando comparado aos animais que só receberam a administração de droga. Uma menor expressão dos IEGs pode estar relacionada com o funcionamento da via neuroanatômica do estriado, relacionado com o padrão de ativação dos neurônios dopaminérgicos, que modificaria a plasticidade sináptica no estriado. O presente estudo mostra como as estruturas relacionadas à memória e à aprendizagem, como o estriado e córtex pré-frontal estão envolvidas na tarefa do condicionamento de medo ao som. / Several studies suggest the existence of multiple memory systems that interact in a competitive or comparative way. There are evidences that the processes of learning and memory depend on the integrity of the regions of the hippocampus, striatum and prefrontal cortex. It has been shown that these three structures are involved in fear conditioning, a task that evaluates emotional memory. During the training of fear conditioning task, a footshock can be paired with the environment (context foreground; CFC) or a cued stimulus such as a sound (in this case, the conditioning of the context is secondary, called contextual background; TFC). This memory can also be evaluated by techniques of molecular biology, studying genes involved in neural plasticity, such as the expression of immediate early genes (IEGs). Our hypothesis was to evaluate the expression of IEGs after an aversive memory task. In the present study, the hippocampus was inactivated with administration of AP-5, a glutamate antagonist, in order to verify the possible interaction between these brain structures by analyzing the IEGs c-fos, Egr1 and Arc in the hippocampus, prefrontal cortex and striatum after TFC training task. In the first part of the study, it was observed that the AP-5 impairs CFC, but not TFC. In the second part of the study, we evaluated gene expression (by real-time PCR) and protein expression (by Western blot) of IEGs 30 and 90 minutes after TFC training. When TFC was performed and the hippocampus was inactivated with AP-5, it was expected a lesser contextual participation, so the participation of the striatum in this type of conditioning could be better studied. However, our data suggests that administration of AP-5 in the hippocampus do not interfere with the expression of c-fos, Egr1 and Arc in striatum, hippocampus and prefrontal cortex, since groups of animals that received AP-5 have similar expression when compared to control groups that received saline. Furthermore, administration of AP-5 directly in the hippocampus increased gene expression of IEGs in this structure 30 minutes after TFC training. Finally, the data shows that paired group and context and sound-exposed group have a lower relative EGR1 protein expression when compared to animals that were not subjected to any Several studies suggest the existence of multiple memory systems that interact in a competitive or comparative way. There are evidences that the processes of learning and memory depend on the integrity of the regions of the hippocampus, striatum and prefrontal cortex. It has been shown that these three structures are involved in fear conditioning, a task that evaluates emotional memory. During the training of fear conditioning task, a footshock can be paired with the environment (context foreground; CFC) or a cued stimulus such as a sound (in this case, the conditioning of the context is secondary, called contextual background; TFC). This memory can also be evaluated by techniques of molecular biology, studying genes involved in neural plasticity, such as the expression of immediate early genes (IEGs). Our hypothesis was to evaluate the expression of IEGs after an aversive memory task. In the present study, the hippocampus was inactivated with administration of AP-5, a glutamate antagonist, in order to verify the possible interaction between these brain structures by analyzing the IEGs c-fos, Egr1 and Arc in the hippocampus, prefrontal cortex and striatum after TFC training task. In the first part of the study, it was observed that the AP-5 impairs CFC, but not TFC. In the second part of the study, we evaluated gene expression (by real-time PCR) and protein expression (by Western blot) of IEGs 30 and 90 minutes after TFC training. When TFC was performed and the hippocampus was inactivated with AP-5, it was expected a lesser contextual participation, so the participation of the striatum in this type of conditioning could be better studied. However, our data suggests that administration of AP-5 in the hippocampus do not interfere with the expression of c-fos, Egr1 and Arc in striatum, hippocampus and prefrontal cortex, since groups of animals that received AP-5 have similar expression when compared to control groups that received saline. Furthermore, administration of AP-5 directly in the hippocampus increased gene expression of IEGs in this structure 30 minutes after TFC training. Finally, the data shows that paired group and context and sound-exposed group have a lower relative EGR1 protein expression when compared to animals that were not subjected to any / FAPESP: 2008/04305-2

Orientador: Elenice Aparecida de Moraes Ferrari / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T20:47:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Siqueira_LuisOtavio_D.pdf: 1043861 bytes, checksum: 39ebfc094cde948f0af9f82213528298 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O comportamento exploratório garante a inspeção, a localização, a identificação e a avaliação precisa de eventos ambientais. A exploração também é abordada como sendo relacionada com a curiosidade do animal direcionada a novos estímulos. Os comportamentos reflexos que precedem as reações exploratórias, caracterizando-se, portanto, como comportamentos pré-exploratórios e também têm importante função adaptativa. Poucos estudos analisaram a influência da hora do dia sobre respostas incondicionadas e condicionadas ao som. Dessa forma, o presente estudo investigou a variação circadiana da amplitude da resposta aversiva ao som em pombos. Experimento I usou um equipamento de registro automatizado da amplitude da resposta acústica, formado por uma câmara experimental, com uma célula de carga acoplada ao piso e interface dos sinais a um microcomputador utilizado para controle, armazenamento e análise dos dados. O Experimento II analisou a sensibilização da resposta em diferentes horários do dia usando: (a) linha de base com apresentação de 5 estímulos acústicos com intervalo entre sons de 3Os; (b) treino, iniciado 5 min após o último som, com dois choques elétricos, intervalo entre choques de 5 min e (c) teste, iniciado 10 min após o último choque, com 40 estímulos acústicos. Os animais dos grupos controles permaneceram na caixa experimental sem estimulação. O Experimento 111 usou intervalos (a) entre o término da linha de base e o início do treino, (b) entre os dois choques e (c) entre o último choque e o teste foram de 1 mino O Experimento IV investigou o condicionamento clássico de traço, utilizando grupos: Experimental, com três associações som-choque; Randômico, com 3 choques e 3 sons casualizados e Controle, expostos à caixa experimental.Em todos os experimentos usou-se fotoperíodo esqueleto com pulsos de luz (15 min) às 6h (ZTOO) e às 18h (ZT12) e sub-grupos em cada horário de teste: ZT02, ZT06, ZT10, ZT14, ZT18 e ZT22. De um modo geral, os dados mostraram que tanto a sensibilização quanto o condicionamento clássico aversivo resultaram em alterações da amplitude da resposta ao som que variaram em função do horário de teste, com amplitudes máximas na transição dia-noite e mínimas na transição noite-dia. O conjunto desses dados indica a modulação do aprendizado aversivo pelo sistema temporizador circadiano / Abstract: Exploratory behavior allows the inspection, localization, identification and the correct evaluation of the environmental events. The exploration also is related with curiosity related to new stimuli. The reflex behaviors that preceed the exploratory reactions are characterized as pre- exploratory and also have an important adaptative function. There are few studies that analyse the influence of time of the day on this response. Thus, the present study investigated the circadian variation of response to aversive sounds in pigeons. Experiment I, used a new equipment especially designed for automatic recording of response of acoustic response amplitude. The system is composed by an experimental chamber, with a load cell under the floor and a computer interface for contrai, storage and data analysis. Experiment 11 analyzed the sensitization of sound response in different times of the day. The experimental protocol used: (a) baseline with 5 acoustic stimulus presentation with inter-stimulus-interval between sounds of the 30s; (b) training, starting 5 min afier the last sound, with apresentation of two electric shocks with interval between electric shocks of the 5 min and (c) test, starting 10 min afier the last shock, with 40 acoustic stimuli. The Control Group animais received no stimulation. Experiment 11I, used 1 min time intervals between (a) the end of the baseline and the trainning, (b) the two electric shocks and (c) the last electric shock and test. Experiment IV investigated the trace fear conditioning, using 2 groups: Experimental, with 3 sound shock associations; Random, with 3 shocks and 3 sounds in the random arder and Contrai, only exposed to experimental chamber. Ali the experiments used a skeleton photoperiod with 2 light pulses (15 min) to 6h (ZTOO) and 18h (ZT12) and sub-groups for each time of test: ZT02, ZT06, ZT10, ZT14, ZT18 and ZT22. In a general, the data showed that both sensitization and classical fear conditioning resulted in increases of the amplitude of sound responses with variations depending on the time of the test. Taken together, the data indicated a modulation of aversive leaming by the circadian pacemaker / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Elenice Aparecida de Moraes Ferrari / Disertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T18:30:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dias_ElayneVieira_M.pdf: 1520883 bytes, checksum: 05673dcedfdc35b300eb07144edbd5bb (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O condicionamento clássico aversivo é utilizado para investigar os mecanismos celulares e moleculares na formação da memória em diferentes espécies de animais. Estes envolvem processos sinápticos que desencadeiam mecanismos de sinalização intracelular com ativação de diferentes quinases em momentos específicos. A ativação da PKC é um dos mecanismos moleculares da plasticidade sináptica subjacente à formação de memória. O presente trabalho investigou o envolvimento da PKCá/âIl no condicionamento clássico aversivo em pombos. No Experimento 1, o inibidor da PKC, calfostina C foi administrado i.c.v. em um grupo de pombos (GCdCa, n=6; 5ml de solução 60mg/ml, DMSO 2%), 1h antes do condicionamento. Outro grupo recebeu veículo (GCdVe, n=5; DMSO 2% em salina). A sessão de condicionamento teve 20 min de duração e 3 pareamentos som-choque (treino). O teste ao contexto ocorreu 24h após o treino. O Experimento 2 usou grupos de pombos expostos ao contexto experimental (GCC), som e choque não pareados (GCR) ou som-choque pareados (GCd) para investigar a ativação da PKCá/âII no hipocampo 2h após o treino, por meio de Western blot. No Experimento 3, grupos de pombos não treinados (GC, n=6) ou sacrificados em diferentes tempos após o treino - G1min (n=6), G1h (n=6), G2h (n=6) e G24h (n=6) - foram utilizados para investigar o curso temporal da ativação da PKCá/âII e da fosforilação do substrato da PKC, GAP-43, no hipocampo. Todas as sessões foram gravadas em vídeo para posterior análise dos dados comportamentais. No Experimento 1 o GCdCa teve menor expressão da resposta condicionada de congelamento (freezing) ao contexto em comparação ao GCdVe (p<0,05), indicando que a administração da calfostina C prejudicou a memória aversiva contextual. Não ocorreram diferenças significativas na ativação da PKC á/âII entre os diferentes grupos (Experimentos 2 e 3;p>0,05), mas houve maior imuno-marcação da GAP-43 fosforilada no G1min quando comparado ao GC (Experimento 3; p<0,05). Esses dados indicam o envolvimento da PKC em mecanismos de aprendizagem e memória aversiva em pombos, e sugerem que outras isoformas além da PKCá/âII podem participar desses processos. / Abstract: The classical aversive conditioning is used to investigate cellular and molecular mechanisms of memory formation in different animal species. Those mechanisms involve synaptic processes that trigger intracellular signaling with activation of different kinases at specific time points. The PKC activation is one of the molecular mechanisms of synaptic plasticity underlying memory. This study investigated the involvement of PKCá/âIl in classical aversive conditioning in pigeons. In Experiment 1, the PKC inhibitor, calphostin C was administered i.c.v. in one group of pigeons (GCdCa, n=6; 5ml solution 60mg/ml, DMSO 2%), 1h before the conditioning. Another group received vehicle (GCdVe, n=5; DMSO 2% in saline). The session of conditioning had 20 min duration and 3 tone-shock pairings (training). The test to the context occurred 24h after training. Experiment 2 investigated with Western blot analysis the PKCá/âII activation in the hippocampus 2h after the training in groups of pigeons that were exposed to unpaired (GCR) or paired (GCd) tone-shock presentations or to the experimental context only (GCC). In Experiment 3, groups of pigeons naive (GC, n=6) or sacrificed at different times after the training - G1min (n=6), G1h (n=6), G2h (n=6) and G24h (n=6) - were used to investigate the time course of the PKCá/âII activation and phosphorylation of PKC substrate, GAP-43, in the hippocampus. All sessions were video recorded for analysis of behavioral data. In Experiment 1 GcdCa had lower expression of conditioned freezing response to the context in comparison to GCdVe (p<0.05), indicating that calphostin C administration impaired contextual aversive memory. No significant differences in the PKCá/âII activation were observed among the groups (Experiments 2 and 3; p>0.05) but the immunolabeling of phosphorylated GAP-43 in G1min was higher as compared to GC (Experiment 3; p<0.05). These data indicate the involvement of PKC in mechanisms of aversive learning and memory in pigeons and suggest that other isoforms besides PKCá/âII may play a role in those processes. / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

A participação de estímulos e respostas em contingências não depende de sua origem interna ou externa. O ponto relevante é que a natureza funcional dos termos da contingência baseie-se em leis comportamentais. Nesse sentido, eventos neurais são também comportamentais, e assim podem permitir a observação de mecanismos básicos da aprendizagem. No presente trabalho, fez-se o exame desses mecanismos com vistas a verificar se a base neural dos paradigmas de condicionamento respondente e operante compartilha o princípio de que o reforço seleciona relações entre estímulos antecedentes e respostas. Tais relações ocorreriam devido ao fortalecimento de conexões sinápticas que vinculam os eventos de contingências. Aqui o estímulo antecedente tem importância crítica, pois a entrada sináptica para a evocação da resposta supostamente depende do sinal por ele gerado. O estímulo antecedente é sempre o evento presente no momento em que o organismo comporta-se, seja eliciando respostas reflexas, seja gerando a ocasião para a emissão de respostas operantes. Foram agrupados dados da literatura científica que propiciaram a comparação dos condicionamentos, com foco na função do estímulo antecedente. O resultado desta pesquisa abrangeu os seguintes aspectos: vias e mecanismos centrais de reforço, antecedentes neurais de resposta motora, antecedentes neurais em processos de discriminação comportamental, e plasticidade neural na aprendizagem. A literatura de bases neurais do comportamento forneceu vasto material para a análise de processos celulares e circuitos neurais envolvidos na aprendizagem, e indicou que a atividade do neurotransmissor dopamina modula o condicionamento em moluscos e mamíferos; a dopamina também atua como um sinal de discrepância comportamental nas vias neurais do reforço positivo que se dirigem a uma estrutura básica do reforço, o núcleo accumbens; neurônios corticais estão envolvidos no controle de estímulos, liberando preferencialmente glutamato pela via do estímulo antecedente, seja CS ou SD; o condicionamento respondente depende de alteração de eficácia sináptica no cerebelo de mamíferos, e não se conhece ainda se o mesmo ocorre no operante; em preparações in vivo e in vitro, verificou-se que os efeitos de ambos os condicionamentos convergem para um mesmo neurônio motor de molusco, embora tenham diferido as propriedades de plasticidade desse neurônio; eventos neurais podem participar de contingência operante como quaisquer de seus termos, e respostas neurais operantes e discriminativas podem de modo confiável preceder respostas motoras, o que sugere um indício de atividade cognitiva de mesma natureza que a atividade neural correlacionada com relações simbólicas. O presente trabalho mostrou vários casos de relações entre estímulos antecedentes e respostas no nível neural, nos quais foram verificados pontos de convergência e de divergência entre os paradigmas de condicionamento, que permitiram avançar no conhecimento do reforço. No sentido desse avanço, ainda foram propostas pesquisas julgadas pertinentes. / Stimuli and responses take part in reinforcement contingencies regardless of their internal or external locus of origin. The relevant point is that the functional nature of the contingency terms be based on behavioral laws. In that sense, neural events are also behavioral events, and as such they may allow for the observation of basic mechanisms of learning. In the present study, these mechanisms were examined in order to verify whether the neural basis of respondent and operant conditioning share the principle that reinforcement selects relationships between antecedent stimuli and responses. Such relationships presumably occur due to the strengthening of synaptic connections linking the contingency events. The antecedent stimulus is critical in this strengthening effect, since the synaptic input evoking a response is supposed to depend on that signal. The antecedent stimulus is the current event at the moment the organism is behaving, its function being either eliciting reflex responses or setting the occasion for operant responses. Scientific data that favored a comparison between the two conditioning processes were grouped together, with a focus on the antecedent stimulus function. The resulting analysis comprehended the following aspects: central pathways and mechanisms of reinforcement, neural antecedents of motor responses, neural antecedents in behavioral discrimination processes, and cellular plasticity in learning. The literature on the neural basis of behavior provided extensive material for the analysis of cellular processes and neural circuits involved in learning, indicating that the activity of the neurotransmitter dopamine modulates conditioning in molluscs and mammals; dopamine also acts as a behavioral discrepancy signal in the neural pathways of positive reinforcement, which lead to the nucleus accumbens, a basic structure in reinforcement; cortical neurons are involved in stimulus control, as they preferentially deliver glutamate through the CS or SD antecedent stimulus pathway; respondent conditioning depends on changes in synaptic efficacy in the cerebellum of mammals, and it is not known yet if the same occurs in operant processes; in vivo and in vitro mollusc preparations showed that the effects of both conditionings converge on the same motor neuron, although producing different plastic properties; neural events may enter an operant contingency as any of its terms, and operant and discriminative neural responses can reliably precede motor responses, suggesting a trace of cognitive activity of the same nature as the neural activity correlated with symbolic relations. The present study disclosed several instances of relationships between antecedent stimuli and responses at the neural level of analysis, pointing to convergent and divergent spots between the two conditioning paradigms that led to progress in the knowledge of reinforcement. In line with this progress, research proposals were advanced.

Orientadora: Profª Drª Raquel Vecchio Fornari / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Neurociência e Cognição, 2015. / O cortex insular (CI), ou insula, conquistou nos ultimos anos um lugar de destaque na area cientifica por seu suposto envolvimento em processos emocionais e cognitivos. No rato, como nos seres humanos, o CI pode ser dividido em duas sub-regioes funcionalmente heterogeneas. Embora a maioria dos estudos realizados em animais tenha mostrado um envolvimento da regiao mais rostral (CI anterior) na memoria gustativa, outros sugerem um papel mais amplo, abrangendo desde o reconhecimento de objetos ate o processamento de memorias espaciais e aversivas. A regiao mais caudal (CI posterior), por sua vez, recebe aferencias multissensoriais e supoe-se que esteja envolvida em processamento multissensorial e nociceptivo. Entretanto, pouquissimos trabalhos avaliaram a participacao dessa sub-regiao posterior em tarefas de memoria, com resultados inconclusivos. Nao havia, ate o momento, nenhum trabalho que tivesse investigado isoladamente o papel de ambas as sub-regioes do CI na consolidacao da memoria emocional. Portanto, o objetivo deste estudo foi investigar os efeitos da inativacao temporaria do CI anterior e posterior sobre a consolidacao da memoria de medo de tarefas de condicionamento de medo ao contexto e ao som. Ratos Wistar de 3 meses de idade passaram por cirurgia estereotaxica para implante de canulas-guia bilaterais no CI anterior ou posterior. Os animais tiveram pelo menos 7 dias de recuperacao e foram manipulados por 3 dias antes do inicio do procedimento comportamental. Para o treino de condicionamento de medo ao contexto e ao som, os ratos foram colocados individualmente em um caixa de condicionamento. Apos 120 segundos de livre exploracao, um som (90 decibeis, 2 kHz) foi emitido por 30 segundos, co-terminando com um choque nas patas (0,7 mA, 1s). Imediatamente apos, cada rato recebeu uma microinfusao bilateral de muscimol (agonista gabaergico, 0,5¿Êg/0,5¿ÊL por hemisferio) ou salina (grupo controle). O teste de condicionamento de medo ao contexto (CMC) ocorreu 48 horas apos o treino e consistiu na re-exposicao a caixa de condicionamento por 5 minutos, sem apresentacao de som ou choque. 24 horas depois, os mesmos animais foram submetidos ao teste de condicionamento de medo ao som (CMS), o qual ocorreu em uma caixa modificada, com duracao de 5 minutos. Ao final do segundo e terceiro minutos, o mesmo estimulo sonoro apresentado no treino foi emitido por 30 segundos. O tempo de congelamento e o comportamento motor foram utilizados como medidas de condicionamento. No CMS, os ratos que receberam a microinfusao de muscimol no CI anterior e posterior apresentaram uma media de tempo de congelamento menor durante o periodo pos-som. Entretanto, no CMC nao houve diferencas entre grupos para ambas as subregioes do CI. Portanto, os resultados deste estudo indicam que a inativacao pos-treino do CI como um todo prejudica exclusivamente o CMS. Entretanto, o prejuizo deste tipo de memoria, provocado pela inativacao do CI posterior, foi maior, evidenciando, portanto, que esta subregiao esta mais importantemente envolvida na circuitaria neural responsavel pela consolidacao do medo condicionado a um estimulo sonoro discreto. / The insular cortex (IC), or insula, has achieved over the last years an eminent position in the scientific literature due to its involvement in emotional and cognitive processes. In the rat, as in humans, the IC can be divided into two functionally heterogeneous sub-regions. Although most animal studies have shown an involvement of the rostral subregion (anterior IC) in gustatory memory, others suggest a broader role in memory, ranging from object recognition to the processing of spatial and aversive memories. In addition, even though the most caudal area (posterior IC) seems to be involved in multisensory and nociceptive processing, very few studies have evaluated its role in mnemonic processes and the results so far are unclear. Nevertheless, no work, to the best of our knowledge, had investigated the specific role of both sub-regions of the IC on consolidation of fear conditioning tasks. Thus, the aim of the present study was to investigate the effects of temporary inactivation of the anterior and posterior IC on memory consolidation of contextual and tone fear conditioning tasks. 3-month-old male Wistar rats underwent stereotaxic surgery for implantation of bilateral guide cannulae aimed directly above the anterior or posterior IC. The animals were allowed at least 7 days of recovery and were handled once a day for 3 days prior to behavioral sessions. For the contextual and tone fear conditioning training session, the rats were individually placed in the conditioning box. After 120 seconds of free exploration, a tone (90 decibels, 2 kHz) was delivered for 30 seconds, coterminating with a footshock (0.7 mA, 1 s). Immediately after, each rat received a bilateral microinjection of muscimol (GABAergic agonist, 0.5 ìg/0.5ìL by hemisphere) or saline (control group) into the intended IC subregion. The contextual fear conditioning test (CFC) was performed 48 hours after training and consisted in the re-exposure to the conditioning box for 5 minutes, without delivery of tone and shock. After 24 hours, the same animals were submitted to tone fear conditioning test (TFC), which occurred in a modified chamber, for 5 minutes. At the end of the second and third minutes, the same tone stimulus presented in the training session was delivered for 30 seconds. Freezing time and motion behavior were used as measures of conditioning. In TFC, the rats that had received muscimol microinfusion into the anterior and posterior IC displayed a lower freezing time during the post-tone period. However, for both IC subregions, there were no differences between groups in the CFC. Thus, our findings indicate that the posttraining inactivation of both IC subregions impaired the TFC. However, the impairment in this kind of memory, caused by the the inactivation of the posterior IC, was higher, thus, highlighting that this subregion is more importantly involved in the neural circuitry related to the consolidation of the discrete tone conditioned fear.

Orientador: Elenice Aparecida de Moraes Ferrari / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-18T00:49:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Machado_AlineVilardaSilva_M.pdf: 2487506 bytes, checksum: ec15fc1b78bef814d6d459499276cdf5 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A ritmicidade circadiana, expressa na alteração do comportamento e em aspectos morfofisiológicos e moleculares ao longo das 24 horas do dia, é uma das funções básicas dos organismos vivos. Os processos comportamentais e os mecanismos moleculares no hipocampo, que estão envolvidos na aprendizagem e memória, demonstram oscilação circadiana. Vários estudos sugeriram que o condicionamento clássico aversivo é afetado pelo sistema de temporização circadiana e que a oscilação circadiana de vias moleculares específicas é requerida para a consolidação da memória aversiva. O presente trabalho investigou a oscilação circadiana da expressão da nNOS e da atividade da proteína NOS no hipocampo de pombos e as suas relações com a modulação temporal do condicionamento contextual aversivo. Na Parte I, caracterizou-se o padrão temporal da expressão da nNOS, que foi detectada por Western Blotting e o padrão temporal da atividade enzimática da NOS, determinada pela quantidade de L-citrulina produzida por minuto e por micrograma de proteína na reação. Na Parte II, nos horários de mínima e máxima atividade enzimática da proteína, pombos foram treinados e testados em condicionamento aversivo ao contexto. As sessões foram gravadas para posterior análise comportamental. Após o teste foi realizada a imunoistoquímica para marcação da nNOS em neurônios do hipocampo. Foi evidenciada ritmicidade circadiana significativa (p < 0,05) na expressão protéica da nNOS e na atividade enzimática da NOS, segundo os valores fornecidos pelo método Cosinor para caracterização do padrão temporal. As médias da densitometria óptica dos grupos com horários mais próximos da acrofase - ZT04 (10hs; 0,944 ± 0,12) e a batifase - ZT16-(22hs; 0,572 ± 0,16) foram significativamente diferentes (F5,18 p < 0,0001). Os grupos condicionados, em ambos os horários, mostraram maior duração e maior ocorrência do comportamento de congelamento do que os controles (p < 0,05). Houve uma variação dia-noite para o comportamento de congelamento nos grupos controles (p < 0,05). A marcação de células nNOS-positivas foi maior no hipocampo dos grupos condicionados sendo que o total de células nNOS-positivas na área dorsal do grupo experimental testado à noite foi maior do que aquele observado nos grupos controles e no experimental da manhã (p < 0,05). Os dados mostraram que a expressão protéica da nNOS e da atividade enzimática da NOS no hipocampo de pombos mostram uma oscilação que caracteriza um padrão temporal circadiano. Tanto no horário de máxima como no de mínima atividade da nNOS, o condicionamento contextual aversivo resultou em medo condicionado ao contexto e em expressão de células nNOS-positivas no hipocampo que foi maior nos pombos condicionados do que nos controles. Contudo, no hipocampo do grupo testado à noite houve um maior número de células nNOS-positivas. Esse dado estimula questionamento sobre se ocorreria a ativação de mecanismos compensatórios para o aumento da expressão da proteína nNOS, quanto essa é requisitada em situações de baixa disponibilidade / Abstract: The circadian rhythm, expressed in changing behavior and the morphophysiologic and molecular aspects over 24 hours of the day is one of the basic functions of living organisms. The behavioral processes and molecular mechanisms in the hippocampus, which are involved in learning and memory, show circadian oscillation. Several studies have suggested that classical fear conditioning is affected by the circadian timing system and the circadian oscillation of specific molecular pathways is required for the consolidation of aversive memory. This study investigated the circadian oscillation of nNOS expression and activity of NOS protein in the hippocampus of pigeons and their relationship with the temporal modulation of aversive contextual conditioning. In Part I, we have characterized the temporal pattern of nNOS expression, which was detected by Western blotting and temporal pattern of NOS enzyme activity, determined by the amount of L-citrulline produced per minute and per microgram of protein in the reaction. In Part II, at the times of minimum and maximum activity of the protein, pigeons were trained and tested in aversive conditioning to context. The sessions were taped for later behavioral analysis. After the test was performed immunohistochemical for labeling of nNOS in neurons in the hippocampus. Circadian rhythm was evident (p <0.05) in nNOS protein expression and enzyme activity of NOS, according to figures provided by Cosinor method to characterize the temporal pattern. The mean optical density of groups with times closer to the acrophase - ZT04 (10hrs; 0.944 ± 0.12) and nadir - ZT16-(22hs; 0.572 ± 0.16) were significantly different (F5, 18 p <0.0001 ). The groups conditioned in both schedules, showed more frequent and longer duration of freezing behavior than controls (p <0.05). There was a day-night variation for freezing behavior in control groups (p <0.05). Labeling of nNOS-positive cells was higher in the hippocampus of the groups conditioned with total nNOS-positive cells in the dorsal area of the experimental group tested at night was higher than that observed in control groups and experimental group in the morning (p <0.05). The data showed that nNOS protein expression and enzymatic activity of NOS in the hippocampus of pigeons show an oscillation that characterizes a circadian temporal pattern. Both at the time of maximum as the low activity of nNOS, the aversive contextual conditioning resulted in fear conditioning to context and expression of nNOS-positive cells in the hippocampus was higher in pigeons conditioned than in controls. However, in the hippocampus of the group tested in the evening there was a greater number of nNOS-positive cells. This fact encourages questioning of whether there would be activation of compensatory mechanisms for the increased expression of nNOS protein, as this is required in situations of low availability / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular