When a patient is in urgent need of treatment, for a condition like cancer, a fast method to produce diagnosable material from the laboratory is desirable. CellientTM uses alcohol-fixation and enables diagnosis the same day the sample is received, while the standard method using formaldehyde takes over 48 hours before a diagnosis can be provided. CellientTM is fast and reduces human errors, but the affect it has on immunocytochemistry is not fully established. The purpose of this work was to validate CellientTM for clinical use. The validation was to establish whether cytological specimens prepared using the CellientTM gave comparable results to specimens prepared using the standard method. Specimens were prepared using both methods before immunocytochemical staining with antibodies was performed. Validation was performed using a parallel analysis of patient specimens using the CellientTM method and the standard method and then immunocytochemically staining the material with antibodies targeting CDX2, CK5, CK7, ER, Ki67, p63, TTF-1 and WT1. Staining was then compared between the methods for each specimen. Because of an unsatisfactory number of specimens but also because of statistical differences between staining of the CellientTM material and the standard methods material the clinical use of the CellientTM could not be validated. The CellientTM provided a weaker staining in many cases. Thus further studies are needed which by optimizing the staining procedure might validate CellientTM for clinical use with ICC. An alternative would be to further utilize the already existing ThinPrep-method for ICC. It is desirable to leave methods involving hazardous formaldehyde. / Att från laboratoriets sida snabbt få fram diagnostiserbart material är önskvärt när patienten snabbt är i behov av behandling för till exempel olika typer av cancer. Med CellientTM, som använder alkoholfixering, kan diagnos erhållas samma dag som provet tas. Standardmetoden med formaldehyd tar över 48 timmar innan patienten kan få en diagnos. Preparering av prover med CellientTM går snabbt och minskar mänskliga felkällor, men hur materialet infärgas med immuncytokemi är inte helt fastställt. Syftet med arbetet var att metodvalidera Cellient TM för klinisk användning. Valideringen skulle kontrollera om cytologiskt material som prepareras med denna metod var jämförbart med material som prepareras enligt standardmetod. Detta genom att se till eventuella skillnader vid immuncytokemisk infärgning med olika antikroppar. Metodvalidering användes genom att parallellt preparera patientmaterial med Cellient-metod och standardmetod och sedan färga preparaten med antikroppar riktade mot CDX2, CK5, CK7, ER, Ki67, p63, TTF-1 och WT1. Infärgningar genererade med de båda metoderna jämfördes mellan patientfall. På grund av för litet statistiskt underlag men också på grund av för stora skillnader mellan standardmetodens infärgning och Cellient-metodens infärgning kunde inte CellientTM valideras. CellientTM genererade i de flesta fall en svagare infärgning. Arbetet visar behovet av vidare studier genom optimering av infärgningsprogram för att i framtiden kunna validera antikroppar för klinisk användning med CellientTM. Alternativet skulle vara att utveckla på arbetsplatsen redan etablerade ThinPrep-metoden för användning med immuncytokemisk infärgning. Det är önskvärt att på sikt lämna metoder som involverar den hälsofarliga formaldehyden.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karolinska institutet, 2001. / Härtill 5 uppsatser.

Två huvudsakliga metodprinciper används inom cytologi för diagnostisering av cellförändringar, nämligen konventionell och vätskebaserad metod. De kan båda appliceras på såväl gynekologiska som icke-gynekologiska prover, där den senare bland annat omfattar olika sorters exsudat. Syftet med den här studien var att utveckla metoden för den vätskebaserade metoden så att etanolfixerade exsudat kunde prepareras och även påvisa bättre resultat än då de preparerats med konventionell metod. För att göra detta har 61 unika prover kategoriserade som exsudat preparerats totalt, varav 61 med konventionell metod, 54 med vätskebaserad metod och 22 med vätskebaserad metod med tillsats av ättiksyra. De färdiga glasen bedömdes sedan i mikroskop och gavs scorevärden utifrån fyra parametrar: mängden celler exklusive inflammatoriska celler; bedömbarheten av cellmorfologin; mängden inflammatorisk komponent samt mängden bakgrundsmaterial. Resultaten visade ingen förbättring mellan de glas som preparerats med konventionell eller vätskebaserad metod. Däremot visade resultaten för de ättiksyrabehandlade proverna på förbättrade scorevärden jämfört med de andra metoderna. Som slutsats drogs att vätskebaserad metod med tillsats av ättiksyra uppnår syftet eftersom det reducerar mängden bakgrundsmaterial, förekomst av ring på objektglasen samt vidhåller en god cellmorfologi, vilket gör proverna lättare att diagnostisera för cytodiagnostikerna. / Two main principles is used within cytology in order to diagnose cytological abnormalities; conventional and liquid-based cytology. Both methods can be applied on both gynaecological and non-gynaecological samples of which the later includes samples categorized as exudate. The aim of this study was to develop the method for liquid-based cytology so that exudate fixated with ethanol could be prepared and also achieve better results compared to conventional method. In order to do so, 61 unique samples were prepared of which 61 with conventional method, 54 with liquid-based method and 22 with liquid-based method with added acetic acid. The slides was then examined in microscope and was given score values within four parameters: amount of cells; cell morphology; amount of inflammatory component and amount of background. The results indicated no difference between the slides prepared with conventional or liquid-based method. However, the slides prepared with addition of acetic acid indicated more opportunistic score values when compared. The conclusion was that liquid-based method with the addition of acetic acid did satisfy the aim of this study as it reduces the amount of background, reduces “ring formation” on the slides and preserve the cells morphology well, which makes the samples easier to diagnose.

En vanlig orsak till otillfredsställande cytologiska preparat är kontamination av blod. På Cytologilaboratoriet, Länssjukhuset Ryhov tvättas blodiga gynekologiska preparat i Cytolyt® solution och ättiksyra för att reducera kontaminationer. Syftet med studien var att studera den potentiella påverkan tvätt med Cytolyt® solution och ättiksyra har på mesotelcellers morfologi. I studien ingick 60 exsudat av pleuravätska och ascites som analyserades med konventionell cytologisk metod. Utstryk utfördes och analyserades utan tvätt (kontroller) och efter tvätt i olika tider varpå preparaten bedömdes med avseende på mesotelcellers morfologi. Av kontrollerna hade 53% en välbevarad cytoplasma men endast 5.8% av de tvättade proverna. Cirka 87% av kontrollerna och 46% av de tvättade proverna hade en välbevarad och distinkt cellkärna. Morfologiska förändringar hos mesotelceller kunde påvisas efter tvätt i Cytolyt® solution och ättiksyra men förändringarna kunde inte kopplas till eller misstolkas som patologiska förändringar. / A common reason for unsatisfactory cytological smears is contamination of blood. Blood contaminated gynaecological samples are washed with Cytolyt® solution and acetic acid at the Cytological Laboratory, County Hospital Ryhov to reduce contaminations. The objective of this study was to determine the potential effect of Cytolyt® solution and acetic acid on the morphology of mesothelial cells. In this study 60 samples of pleural effusions and ascites was analysed with conventional cytological method. Cytological smears were prepared without wash (controls) and with wash for different durations. The morphology of mesothelial cells in the samples were then examined. Out of the controls 53% had a wellpreserved cytoplasm while this distribution decreased to 5.8% amongst the washed smears. About 87% of the controls and 46% of the washed smears had a preserved and distinct nucleus. Changes in morphology could be seen in mesothelial cells after wash with Cytolyt® solution and acetic acid. However, the changes could not be associated with disease. Washing exudates with Cytolyt® solution and acetic acid can alter morphological changes in mesothelial cells although the changes seen cannot be mistaken for pathological changes.

No description available.

No description available.

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Uppsala universitet, 2007. / Härtill 5 uppsatser.

Immuncytokemi (ICC) har blivit en framgångsrik metod inom cancerdiagnostiken. ICC bygger på antikropps- och antigenreaktion då infärgning med specifika antikroppar kan lokalisera strukturer hos celler. Hos klinisk patologi i Kalmar utförs ICC med den traditionella prepareringsmetoden där materialet formalinfixeras, bäddas i paraffin och snittas enligt cell block teknik (CBT). Vid ICC med vätskebaserad cytologi (LBC, liquid-based cytology) kan infärgning utföras på en mindre mängd material samt ge ett resultat 1-2 dagar innan resultat fås med CBT. ICC med LBC saknar kontroller vilket medför att resultatet blir mindre tillförlitligt. Syftet med examensarbetet var att ta fram positivt kontrollmaterial för ICC av LBC-preparerat material. Kontrollmaterial selekterades från tidigare diagnostiserade och immunfärgade patientprover i form av exsudat och tonsillmaterial. En panel av 6 monoklonala antikroppar bestående av anti-CD20, anti-CD3, anti-CK5, anti-CK7, anti-Ki-67 och anti-WT1 användes. Kontrollmaterialet preparerades enligt ThinPrep™-metoden och sattes till objektglas med Cytospin™. När kontrollmaterialets positivitet bekräftats testades det i rutinarbete ihop med 10 patientprover. Patientproverna preparerades med ThinPrep™-metod och placerades på objektglasen med hjälp av en ThinPrep™5000 processor. Samtliga resultat jämfördes med infärgning gjord med CBT och majoriteten av resultaten var likvärdiga. Ur resultatet drogs slutsatsen att metoden verkar lovande men prepareringssteg och färgprotokoll behöver optimeras samt att större studier med fler patientprover behövs för att kunna beräkna tillförlitlig statistik. / Immunocytochemistry (ICC) has become a successful method of cancer diagnosis. ICC is based on antibody and antigen response, where staining with specific antibodies can localize structures in cells. Today at clinical pathology in Kalmar ICC is performed with the traditional method of preparation where the material is formalin fixed, embedded in paraffin and then cut into thin sections called cell block technique (CBT). ICC with liquid-based cytology (LBC) can be performed on a smaller amount of material and give results 1-2 days before results are obtained with CBT. ICC combined with LBC lacks controls so the result is not reliable. Purpose of this essay was to produce positive control material for the ICC of LBC-prepared material. Control materials were selected from previously diagnosed and immune-stained patient samples consisting of exudate and tonsillar material. A panel of 6 monoclonal antibodies, anti-CD20, anti-CD3, anti-CK5, anti-CK7, anti-Ki-67 and anti-WT1, was used. Control material was prepared according to the ThinPrep ™ method and was added to slides with Cytospin ™. After confirming the positivity of the control material, it was tested in routine work with 10 patient samples. Patient samples were prepared using the ThinPrep ™ method and added to the slides with the ThinPrep ™ 5000 processor. Results compared to staining with CBT showed correlation. Conclusion was that the method seems promising but stages of preparation and staining protocols need to be optimized and larger studies with more patient samples must be done in order to get reliable statistic data.

Vid cytologisk bedömning av celler i exsudat kan olika metoder användas vid preparering. Vid konventionell utstryksmetod stryks provet ut manuellt på objektglas medan vätskebaserad ThinPrepmetod preparerar provet i en automatiserad process. Studiens syfte var att jämföra konventionell utstryksmetod och vätskebaserad ThinPrepmetod med tillsats av ättiksyra vid preparering av etanolfixerade exsudat. I studien användes totalt 34 prover av pleuravätska och ascites. Proverna preparerades med konventionell utstryksmetod och två varianter av ThinPrepmetod, ThinPrepmetod 1 och ThinPrepmetod 2. Preparaten bedömdes av två cytodiagnostiker utifrån fem kriterier; cellförekomst, förekomst av inflammatoriska celler, cellmorfologi, bakgrundsmaterial och förekomst av atypiska eller maligna celler. Resultaten visade på att ThinPrepmetod 2 gav likvärdiga, och i vissa avseenden bättre, resultat än konventionell utstryksmetod. ThinPrepmetoden har generellt fler fördelar jämfört med konventionell utstryksmetod, framförallt innebär den en tidsbesparing för de som bedömer preparaten vilket också gynnar patienter. En mer omfattande studie rekommenderas för att konfirmera resultaten i denna studie. / Preparation of effusions for cytological evaluation can be performed with different methods. Conventional smears are performed by spreading the sample directly onto a slide while liquid-based ThinPrep method prepares the sample in an automated process. The aim of this study was to compare conventional smears with liquid-based ThinPrep preparation, with additional acetic acid, of effusions fixated with ethanol. A total of 34 samples of pleural effusions and ascites were included. The samples were prepared with conventional smears and two versions of the ThinPrep method, ThinPrep method 1 and ThinPrep method 2. The preparations were examined by two cytotechnologists based on five criteria; occurrence of cells, occurrence of inflammatory cells, cell morphology, background material and the presence of atypical or malignant cells. The results showed that ThinPrep method 2 obtained equivalent and, in some aspects, even better results compared to conventional smears. In general, the ThinPrep method has several advantages compared to the conventional smears. In particular, it is timesaving when examining the slides, which also benefits the patients. A more comprehensive study is recommended to confirm the results of this study.

Urinblåsecancer är den sjunde vanligaste cancerformen i Sverige där blåssköljvätska utgör det huvudsakliga provmaterialet vid utredning. ThinPrep® är en vanligt förkommande metod som används inom vätskebaserad cytologi vid analys av blåssköljvätska. Fixering av provmaterialet kan försvåra diagnostiken på grund av förändrad morfologi samt artefakter.  Studiens syfte var att jämföra erhållet preparatinnehåll från blåssköljvätskor som fixerats med fixeringslösning innehållande ättiksyra med CytoLyt® solution. Studien ämnade även jämföra ThinPrep® filtren ”Non-GYN” och ”UroCyte”.  Studien inkluderade 90 patientprover av blåssköljvätska som fixerades med tillsats av ättiksyra samt CytoLyt®, varvid filtren ”Non-GYN” samt ”UroCyte” användes. Preparaten bedömdes av cytodiagnostiker samt cytopatolog utifrån kriterierna: bakgrundsmaterial, cellmängd samt färgbarhet. Resultatet visade att CytoLyt® i kombination med filtret ”Non-GYN” gav ett mer representativt preparat samt lämnade en god bakgrundsbild. Användandet av CytoLyt® resulterade i fler diagnostiska fördelar jämfört med fixering av ättiksyra, vilket även gynnar patienter. / Bladder cancer is the seventh most common form of cancer in Sweden where the main source of material for investigation are bladder washings. A common method within liquid-based cytology for analysis of bladder washings is ThinPrep®. Altered morphology as well as artifacts due to fixation can complicate funkar “the diagnostics of the sample. The aim of this study was to compare the slide content obtained from bladder washings fixed with fixative containing acetic acid with CytoLyt® solution. The study also intended to compare the ThinPrep® filters "Non-GYN" and "UroCyte". A total of 90 samples of bladder washings from patients where included. The samples where fixed with the addition of acetic acid and CytoLyt®, using the "Non-GYN" and "UroCyte" filters. A cytotechnologist and a cytopathologist assessed the preparations based on the criteria background material, cell quantity and the amount of colour change. The results showed that CytoLyt® in combination with the filter "Non-GYN" gave a more representative preparation and provided a good background image. The use of CytoLyt® resulted in more diagnostic benefits compared to fixation with acetic acid, which also benefits patients.