Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-05Bitstream added on 2014-06-13T19:34:22Z : No. of bitstreams: 1 silva_ffv_me_arafcf.pdf: 1434218 bytes, checksum: c2eed4d16abcdbca0cdfe9be4e5fa0ee (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A esporotricose é uma infecção micótica provocada pelo fungo dimórfico Sporothrix schenckii. Apresenta em geral lesões cutâneas nodulares e/ou ulcerativas, da qual o fungo dissemina por via linfática, provocando em alguns casos, infecção sistêmica. As células dendríticas (CDs) são células apresentadoras de antígenos profissionais, capazes de traduzir a informação associada ao fungo e promover uma resposta celular tanto in vitro quanto in vivo. Entretanto, os mecanismos envolvidos na interação entre CDs e o fungo S. schenckii ainda não foram esclarecidos. O presente estudo investigou as mudanças fenotípicas e funcionais em células dendríticas derivadas da medula óssea de camundongos, in vitro, promovidas pelos diferentes estímulos fúngicos e sua capacidade em iniciar uma resposta imune celular. Os antígenos estudados foram o exoantígeno, RNA total de levedura ou hifa, e levedura viva do fungo S. schenckii. Os resultados demonstraram que todos os estímulos foram capazes de ativar as CDs em termos de geração de uma resposta imune celular. Enquanto o grupo Levedura promoveu uma produção mais acentuada de IFN-g do que IL-17, o grupo Exo100 gerou uma produção similar entre essas citocinas. Esse resultado sugere que o exoantígeno pode ser capaz de desviar a resposta imune celular de um perfil Th1 efetor para Th17 inflamatório. O RNA obtido do fungo S. schenckii em sua forma leveduriforme foi capaz de ativar CDs, promovendo uma resposta Th1 enquanto o RNA obtido a partir da hifa promoveu resposta Th17 em 48 horas de ensaio de co-cultura. Nesse contexto, a citocina IL-12 foi essencial para a ativação de células T produtoras de IFN-g, enquanto as citocinas TGF-β e IL-6 foram necessárias para ativação de células T produtoras de IL-17. Nossos dados demonstram a plasticidade das CDs em traduzir diferentes estímulos derivados do fungo S. schenckii em uma resposta... / Sporotrichosis is a disease caused by the dimorphic fungus Sporothrix schenckii. The mains clinical manifestations occur on the skin, however the number of systemic and visceral cases has increased, especially in immunocompromised patients. Dendritic cells (DC) are highly capable of recognizing the fungus associated data and translate it into differential T cells responses both in vitro and in vivo. Although, the mechanisms involved in the interaction between DCs and S. schenckii are not fully elucidated. The study aimed to investigate the phenotypic and functional changes in bone marrow dendritic cells stimulated in vitro with the yeast form, or exoantigen, or total RNA from yeast or hyphal forms, of the fungus S. schenckii and its ability to trigger a cellular immune response. Our results demonstrated that live yeast-form from S. schenckii and exoantigen, on its higher dose, were able to activate BMDC and made them fully capable of triggering T cell responses in vitro. Whereas the Yeast group promoted a more enunciated IFN-γ production than IL-17, the Exo100 group generated a similar production of both cytokines. The exoantigen stimulus suggest an ability in deviating the immune response from an effector Th1 to inflammatory Th17 response, although we do not know the effects of an increase on Th17 cells in sporotrichosis. Similarly, RNA antigens were equally capable of immunomodulation, with yeast RNA promoting a Th1 whereas hyphal RNA promoted Th17 responses at 48 hours co-culture assay. In this context, the IL-12 cytokine was shown essencial to the activation of IFN-g producing T cells, whilst TGF-β and IL-6 cytokines were shown needed for IL-17 producing T cells activation. Our data demonstrated the plasticity of DC on translating the data associated with the fungus S. schenckii and ExoAg and total RNA into differential T cells response in vitro. Further we assessed the ability of these cells on ...

Adenocarcinoma pancreático é um tumor maligno com mau prognóstico, e por isso há necessidade de aperfeiçoamento ou criação de novas estratégias terapêuticas. A vacinação baseada em DCs é uma das abordagens mais promissoras, uma vez que as DCs são as células apresentadoras de antígenos (APCs) mais potentes e centrais para a indução e manutenção de uma resposta imune. Entretanto, em pacientes com câncer, a geração e a função de DCs podem ser deficientes, impondo um obstáculo para o sucesso de seu uso. Neste trabalho, nós descrevemos a geração in vitro de DCs a partir de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) obtidas de pacientes ictéricos com câncer de pâncreas e, também, o efeito do plasma ictérico (PI) sobre as culturas de DCs de doadores saudáveis. PBMCs foram separadas do sangue obtido de 22 pacientes e 22 doadores saudáveis. Células aderentes foram cultivadas com GM-CSF e IL-4 (50ng/mL) por 7 dias. No 5o dia, TNF-<font face=\"symbol\">a (50ng/mL) foi adicionado para a maturação das DCs. Culturas foram realizadas em 10% PI ou plasma normal (PN). Células não aderentes foram coletadas no 7o dia, marcadas com anticorpos monoclonais anti-CD86, CD11c, CD14 e HLA-DR e analisados por citometria de fluxo. Células de pacientes, cultivadas em 10% de PI, quando comparadas com células de doadores saudáveis, cultivadas em 10% PN, apresentaram expressão reduzida (p<0,05) de CD86 e HLADR. É interessante observar que células geradas de PBMCs de pacientes não expressaram CD11c, diferente das células derivadas de doadores saudáveis. A presença de PI nas culturas dos doadores saudáveis causou uma significante diminuição na porcentagem de expressão de células HLA-DR+, CD11c+, CD86. Finalmente, quando PBMCs de pacientes foram cultivadas em PN, houve um aumento na expressão de HLA-DR e CD86 (p<0,05). Os ensaios de proliferação demonstraram também que as células de pacientes ictéricos tiveram capacidade aloestimuladora de linfócitos reduzida, quando comparada a de células de doadores saudáveis. Estes dados indicam uma alteração importante na capacidade das células de pacientes se diferenciarem em DCs in vitro, um fenômeno que parece depender tanto de fatores solúveis presentes no plasma e sobre as próprias células. / Pancreatic adenocarcinoma (PAdc) is an aggressive malignancy with poor prognosis, urging for improved or new therapeutic strategies. DC-based vaccination is one of such promising approaches. DC are the most potent antigen-presenting cells and central to the induction and maintenance of an immune response. However, in cancer patients DC generation and function may be deficient, imposing an obstacle to the success of their use. Here, we describe the in vitro generation of DC from peripheral blood mononuclear cells (PBMC) obtained from jaundiced patients with PAdc and, also, the effect of jaundiced plasma (JP) in the phenomenon. PBMC were separated from blood obtained from 10 patients and 10 healthy controls over a density gradient. Adherent cells were cultured with GM-CSF and IL-4 (50ng/mL) for 7 days. On the 5th day, TNF-<font face=\"symbol\">a (50ng/mL) was added for DC activation. Cultures were performed in 10% JP or normal plasma (NP). Non-adherent cells were harvested at day 7, labeled with FITC- or PE-conjugated monoclonal antibodies against CD86, CD11c, CD14, HLA-DR and analyzed by flow cytometry. Patients\' cells, cultured in 10% JP, compared to healthy donors\' cells, cultured in 10% NP, had a significantly (p<0.05) lower expression of CD86 and HLA-DR. It is noteworthy that cells generated from patients\' PBMC did not express CD11c, while from those derived from healthy donors\' cells did so. The presence of JP in healthy donors\' cells cultures caused a significant decrease in the percentage of HLA-DR+, CD11c+ and CD86+ cells. Finally, when patients\' PBMC were cultured in NP, a significant increase in HLA-DR and in CD86 expression occurred. MLR assays also demonstrated that cells from jaundice patients had decreased capacity to stimulate alloestimulation of lymphocytes when compared to healthy donors. These data indicate a significant alteration in the patients\' PBMC ability to differentiate into DC in vitro, a phenomenon that seems to depend both on soluble factors present in plasma and on the cells, themselves.

Submitted by RODRIGO YOKOYAMA XAVIER null (rodyok@hotmail.com) on 2017-02-16T01:10:07Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Mestrado - Rodrigo Yokoyama Xavier.pdf: 6767206 bytes, checksum: 36a0ac2db721a2114f623ea26fe9f582 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-02-22T17:27:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 xavier_ry_me_guara.pdf: 6767206 bytes, checksum: 36a0ac2db721a2114f623ea26fe9f582 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-22T17:27:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 xavier_ry_me_guara.pdf: 6767206 bytes, checksum: 36a0ac2db721a2114f623ea26fe9f582 (MD5) Previous issue date: 2017-01-30 / O nível de qualidade de peças produzidas a partir de grandes lingotes está intimamente relacionado à qualidade dos lingotes em si. Dentre os diversos defeitos inerentes ao processo de solidificação, destacam-se as microssegregações de elementos de liga, que causam uma deterioração nas propriedades do produto final. Uma maneira de reduzir o dano causado pela microssegregação é através do Tratamento Térmico de Homogeneização, este por sua vez demanda elevados tempos de processo, elevando custos e tempos de fabricação. Uma das formas de reduzir os tempos de homogeneização, uma vez que este apresenta caráter difusional, é através da redução do espaçamento interdendrítico. Neste trabalho foi analisada a influência da deformação plástica como forma de reduzir o espaçamento entre dendritas no tratamento térmico de homogeneização. Para tal fim, utilizou-se um lingote fundido em aço ferramenta de composição química similar ao AISI A2. As amostras foram retiradas do núcleo do lingote no estado bruto de solidificação e sofreram deformações de 0,6 e 1,3 através do processo de laminação a quente, sendo temperadas em água na sequência. Após laminadas as amostras passaram por um tratamento térmico de homogeneização na temperatura de 1200°C por 8h ou 16h e foram novamente temperadas em água. As análises foram feitas através de Microscopia Óptica, Dureza Vickers, Difratometria de Raios-X e Microscopia Eletrônica de Varredura. Foi observado em todas as amostras a presença de microrechupes, e uma microestrutura composta predominantemente por dendritas oriundas da solidificação, identificadas pela fase martensítica, envoltas por uma matriz formada de austenita retida, contendo carbonetos e sulfetos. Com a deformação plástica foi possível quebrar a estrutura dendrítica a aproximar as regiões segregadas das não segregadas. O tratamento térmico por um tempo de 8h não foi suficiente para homogeneizar a microestrutura e reduzir as microssegregações, independentemente do estado de deformação das amostras. O tratamento térmico por 16h apresentou os melhores resultados em relação à homogeneidade química, sendo tanto melhor o resultado quanto maior a deformação imposta às amostras. / The quality of pieces produced from large ingots is closely related to the quality of ingots itself. Among the various defects inherent to the solidification process, there is the microsegregation of alloying elements, causing a deterioration in the properties of the final product. One way to reduce the damage caused by microsegregation is through the homogenization heat treatment, this in turn demands long time of process, increasing costs and lead-times for manufacture. One way to reduce the homogenization time, since it has a diffusive character, is by reducing the interdendritic spacing. In this study was analyzed the influence of plastic deformation as a mean to reduce the spacing between dendrites in the homogenization heat treatment. For this purpose it was used a cast ingot of chemical composition similar to the AISI A2 tool steel. Samples were cut from the ingot center in the as-cast state and suffered deformations of 0.6 and 1.3 through the hot rolling process and quenched in water in the sequence. After rolling the samples passed through a homogenization heat treatment at a temperature of 1200°C for 8h and 16h and again were quenched in water. Analyses were performed by Optical Microscopy, Vickers Hardness, X-Ray Diffractometry and Scanning Electron Microscopy. It was observed in all samples the presence of microcavities, and a microstructure consisting predominantly by solidifications dendrites identified by a martensitic phase, involved by a retained austenite matrix containing carbides and sulfides. The plastic deformation broke the dendritic structure, and approached the segregated regions to the non-segregated regions. The heat treatment for 8h was not sufficient to homogenize the microstructure and reduce the microsegregation, independently of the deformation state of the samples. The heat treatment for 16h presented the best results in relation to the chemical homogeneity, and the better the result as the greater the deformation imposed on the samples.

Actualmente, el trasplante hepático (TxH) es el tratamiento de numerosas enfermedades que abocan a una insuficiencia hepática aguda fulminante o, más frecuentemente, a una fase final de de una hepatopatía crónica irreversible. Los efectos secundarios asociados al empleo indiscriminado de drogas inmnunosupresoras y el hecho de que un 20% de los pacientes sometidos a TxH desarrollen tolerancia al injerto tras una retirada total de la inmunosupresión (tolerancia operacional) promueve una investigación orientada a la búsqueda de técnicas de laboratorio con carácter predictivo de evolución clínica.El objetivo de este estudio fue doble. Por una parte identificar, mediante un modelo de respuesta celular antígeno específico, aquellos pacientes candidatos a una retirada parcial o total de la inmunosupresión. Por otra parte estudiar el efecto del Tacrolimus (FK) sobre la capacidad madurativa de células dendríticas (DCs), como células presentadoras de antígeno. El estudio se realizó sobre un total de 10 pacientes (6 pacientes VHC+ y 4 pacientes VHC-) y en tres fases bien diferenciadas: a) fase previa al TxH (PreTx), b) durante el segundo mes del TxH (2M) y, c) durante el sexto mes del TxH (6M). Los resultados obtenidos en el modelo celular de respuesta linfoproliferativa sugieren que la pauta inmunosupresora administrada in vivo afecta a la respuesta celular in vitro. Este dato permitió obtener una variable (Índice de Estimulación; I.E.) con valor predictivo de evolución clínica. Además, la pauta inmunosupresora reduce los niveles de citocinas Th1, siendo los niveles de Th2 (IL-10) una variable con un posible valor predictivo de evolución clínica.En el grupo de pacientes VHC, los niveles de Th1 descendieron durante el tratamiento inmunosupresor en comparación con los niveles de Th1 obtenidos en el PreTx. El patrón de Th2 (IL-10) fue diferencial según los individuos presentaban o no recidiva viral; en el 100% de los pacientes con recidiva viral los niveles de IL-10 aumentaron durante el segundo y sexto mes en comparación con los niveles de IL-10 obtenidos durante el PreTx. Por el contrario, en el grupo de pacientes sin recidiva viral los niveles de IL-10 disminuyeron en un 66,6% de los casos. Estos resultados sugieren que una disminución de citocinas Th1 juntamente con un aumento de los niveles de IL-10 podría ser un mecanismo favorecedor de la progresión viral al quedar disminuida la presión ejercida por parte del sistema inmune del huésped frente al virus. Esta hipótesis se refuerza con los resultados obtenidos tras analizar el inmunofenotipo de las DCs; en el grupo de pacientes con recidiva viral se observa una disminuida expresión de las moléculas involucradas en la presentación antigénica (moléculas de adhesión y coestimulación).Los resultados obtenidos tras la estimulación de DCs con proteína no estructural (NS3) del VHC indicaron que ésta incrementó la expresión de moléculas de coestimulación y de adhesión (CD80, CD83, CD86 y CD54). Sin embargo, cuando las DCs se incubaban, previamente, con FK, éste reducía (p<0,05) la expresión de marcadores de maduración celular (CD1a, CD80, CD83) y los niveles de IL-12p70; un proceso que tiene lugar a través de la inhibición de la translocación del factor nuclear NF-K&#946;.Podemos concluir, por lo tanto, que el modelo celular ha permitido, mediante el empleo de técnicas no invasivas, identificar unos parámetros (I.E., probabilidad de rechazo, niveles de citocinas proinflamatoria y tolergénicas e inmunofenotipo de DCs) identificativos de un perfil de respuesta inmunológica del paciente trasplantado. La concordancia entre los resultados experimentales y la evolución clínica de cada uno de los pacientes sugiere que los parámetros indicados podrían ser una herramienta de considerable interés clínico en el momento de identificar aquellos pacientes candidatos a una retirada parcial o total de la pauta inmunosupresora. / Currently, liver transplantation (LT) is the treatment of many diseases which lead to acute fulminant liver failure or, more commonly, to a final phase of irreversible chronic liver disease. Side effects associated with indiscriminate use of immunosuppressant drugs and the fact that 20% of patients develop tolerance to the transplanted graft after a complete withdrawal of immunosuppressant (operational tolerance) promotes research aimed at finding laboratory techniques with predictive of clinical outcome.The aim of this study was to identify, through a model of antigen-specific cellular response, which patients can be considered candidates for partial or total withdrawal of immunosuppressant and to study the effect of tacrolimus (FK) on the maturational capacity of dendritic cells (DCs) as antigen presenting cells.A total of 10 patients (6 HCV+ patients) were included in the study. Three sample-isolates were obtained from each patient: a) previously to LT (PreTx), b) during the second month of LT (2M) and c) during the sixth month of LT (6M). The lymphoproliferative response study suggests that the immunosuppressive regimen administered in vivo affects the in vitro cellular response. A variable (Stimulation Index, SI) was obtained that we suggest it can be used as a predictive value of clinical status. Moreover, the immunosuppressive regimen reduced the levels of Th1 cytokines suggesting that IL-10 can be used as a Th2 cytokine with a predictive value of clinical evolution. In the HCV patients group, Th1 levels decreased during immunosuppressive treatment compared with Th1 levels obtained in the PreTx. The pattern of Th2 (IL-10) depended on the severity of HCV liver disease. Levels of IL-10 increased during the second and sixth month compared with the levels of IL -10 obtained during PreTx in patients with HCV fast progression. By contrast, in the group of patients with lower HCV progression the levels of IL-10 decreased in 66.6% of cases. These results suggest that a decrease on the levels of Th1 cytokines together with an increase of IL-10 might be a mechanism that promotes the viral progression, probably caused by a reduction on the immune response pressure of the guest against the HCV. This hypothesis is reinforced by the results obtained after analysing the immunophenotype of DCs since, in the group of patients with viral progression, DCs showed a decrease in the expression of adhesion and costimulatory molecules.The stimulation of DCs with HCV nonstructural protein 3 (NS3) originated an increase in the expression of costimulatory and adhesion molecules (CD80, CD83, CD86 and CD54). However, when DCs were previously incubated with FK, this drug reduced (p <0.05) the expression of cell maturation markers (CD1a, CD80, CD83) and also the levels of IL-12p70 through inhibition of NF-k&#946; translocation to the nucleus. In conclusion, using a non-invasive cell model we have identified several parameters (ie, probability of rejection, proinflammatory cytokine levels and immunophenotype of DCs) that can be used to define the immune response profile of a LT patients. The agreement between our experimental results and the clinical outcome of each patient suggests that the parameters listed below may be used as a clinical tool to identify those candidate patients for a partial or total withdrawal of the immunosuppressive regimen.

Las células dendríticas (Dendritic Cells, DCs) tienen como misión principal la captura, el procesamiento y la presentación de antígenos a los linfocitos T. Constituyen una población celular heterogénea de la que en sangre periférica se distinguen dos subtipos mayoritarios: células dendríticas convencionales (cDCs) y células dendríticas plasmacitoides (pDCs). Ambos subtipos celulares están implicados en el inicio de las respuestas inmunitarias innata y adaptativa.El papel que los distintos subtipos de células dendríticas juegan en la respuesta a los aloantígenos, como modelo de respuesta inmune, no está bien definido. Experimentos in vitro han demostrado repetidamente que las cDCs son capaces de inducir una potente respuesta proliferativa en los linfocitos T. Sin embargo, las pDCs sólo muestran una gran capacidad estimuladora tras su activación. Nuestra hipótesis inicial de trabajo considera que en la generación de una respuesta inmune fisiológica intervienen los dos subtipos mayoritarios de células dendríticas (cDC y pDC): la cDC lleva a cabo la captura y presentación de antígenos, mientras que la pDC puede colaborar en la generación de la respuesta inmune. Utilizando como modelo in vitro la respuesta alogénica, los resultados obtenidos sugieren que la cooperación de cDCs y pDCs juega un papel determinante en la magnitud y el fenotipo de la respuesta T generando una respuesta del tipo Th1 con una mayor producción de IFN-&#947; (si se compara a las cDCs como únicas células presentadoras de antígeno) (Antigen Presenting Cells, APCs). Hemos comprobado también que la supervivencia y la maduración inducidas en las pDCs son relevantes para la obtención de la respuesta T generada. En este sentido, los factores claves implicados sobre la biología de las pDCs serían, principalmente, la interleuquina 3 (IL-3) y el CD40L. También hemos descrito, por primera vez, que la IL-2 influye directamente sobre distintos aspectos celulares de las pDCs como son la viabilidad, el fenotipo y la secreción de citocinas. Finalmente, hemos determinado el efecto del tacrolimus o FK506 (agente inmunosupresor), ampliamente utilizado tanto para trasplante como para diversas situaciones patológicas, sobre las pDCs.

Adenocarcinoma pancreático é um tumor maligno com mau prognóstico, e por isso há necessidade de aperfeiçoamento ou criação de novas estratégias terapêuticas. A vacinação baseada em DCs é uma das abordagens mais promissoras, uma vez que as DCs são as células apresentadoras de antígenos (APCs) mais potentes e centrais para a indução e manutenção de uma resposta imune. Entretanto, em pacientes com câncer, a geração e a função de DCs podem ser deficientes, impondo um obstáculo para o sucesso de seu uso. Neste trabalho, nós descrevemos a geração in vitro de DCs a partir de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) obtidas de pacientes ictéricos com câncer de pâncreas e, também, o efeito do plasma ictérico (PI) sobre as culturas de DCs de doadores saudáveis. PBMCs foram separadas do sangue obtido de 22 pacientes e 22 doadores saudáveis. Células aderentes foram cultivadas com GM-CSF e IL-4 (50ng/mL) por 7 dias. No 5o dia, TNF-<font face=\"symbol\">a (50ng/mL) foi adicionado para a maturação das DCs. Culturas foram realizadas em 10% PI ou plasma normal (PN). Células não aderentes foram coletadas no 7o dia, marcadas com anticorpos monoclonais anti-CD86, CD11c, CD14 e HLA-DR e analisados por citometria de fluxo. Células de pacientes, cultivadas em 10% de PI, quando comparadas com células de doadores saudáveis, cultivadas em 10% PN, apresentaram expressão reduzida (p<0,05) de CD86 e HLADR. É interessante observar que células geradas de PBMCs de pacientes não expressaram CD11c, diferente das células derivadas de doadores saudáveis. A presença de PI nas culturas dos doadores saudáveis causou uma significante diminuição na porcentagem de expressão de células HLA-DR+, CD11c+, CD86. Finalmente, quando PBMCs de pacientes foram cultivadas em PN, houve um aumento na expressão de HLA-DR e CD86 (p<0,05). Os ensaios de proliferação demonstraram também que as células de pacientes ictéricos tiveram capacidade aloestimuladora de linfócitos reduzida, quando comparada a de células de doadores saudáveis. Estes dados indicam uma alteração importante na capacidade das células de pacientes se diferenciarem em DCs in vitro, um fenômeno que parece depender tanto de fatores solúveis presentes no plasma e sobre as próprias células. / Pancreatic adenocarcinoma (PAdc) is an aggressive malignancy with poor prognosis, urging for improved or new therapeutic strategies. DC-based vaccination is one of such promising approaches. DC are the most potent antigen-presenting cells and central to the induction and maintenance of an immune response. However, in cancer patients DC generation and function may be deficient, imposing an obstacle to the success of their use. Here, we describe the in vitro generation of DC from peripheral blood mononuclear cells (PBMC) obtained from jaundiced patients with PAdc and, also, the effect of jaundiced plasma (JP) in the phenomenon. PBMC were separated from blood obtained from 10 patients and 10 healthy controls over a density gradient. Adherent cells were cultured with GM-CSF and IL-4 (50ng/mL) for 7 days. On the 5th day, TNF-<font face=\"symbol\">a (50ng/mL) was added for DC activation. Cultures were performed in 10% JP or normal plasma (NP). Non-adherent cells were harvested at day 7, labeled with FITC- or PE-conjugated monoclonal antibodies against CD86, CD11c, CD14, HLA-DR and analyzed by flow cytometry. Patients\' cells, cultured in 10% JP, compared to healthy donors\' cells, cultured in 10% NP, had a significantly (p<0.05) lower expression of CD86 and HLA-DR. It is noteworthy that cells generated from patients\' PBMC did not express CD11c, while from those derived from healthy donors\' cells did so. The presence of JP in healthy donors\' cells cultures caused a significant decrease in the percentage of HLA-DR+, CD11c+ and CD86+ cells. Finally, when patients\' PBMC were cultured in NP, a significant increase in HLA-DR and in CD86 expression occurred. MLR assays also demonstrated that cells from jaundice patients had decreased capacity to stimulate alloestimulation of lymphocytes when compared to healthy donors. These data indicate a significant alteration in the patients\' PBMC ability to differentiate into DC in vitro, a phenomenon that seems to depend both on soluble factors present in plasma and on the cells, themselves.

Entender como o cérebro processa informação é um dos problemas mais fascinantes da ciência de nossos dias. Para resolvê-lo, é fundamental estudarmos os mecanismos de representação e transmissão de informação de um único neurônio, a unidade fundamental de processamento do cérebro. Grande parte dos neurônios representa a informação por seqüências de pulsos elétricos, ou potenciais de ação. Nós usamos a mosca como modelo para estudar como a arborização dendrítica do neurônio influencia a quantidade de informação transmitida pela estrutura temporal da seqüência de pulsos. O mapeamento retinotópico da informação no sistema visual da mosca permite que as arborizações dendríticas de certos neurônios sejam estimuladas localmente através da região que corresponde a essa localização no campo visual. Nós apresentamos imagens em movimento em várias regiões do campo visual da mosca e medimos a resposta do neurônio H1, sensível a movimentos horizontais. Usando a teoria da informação, calculamos a quantidade de informação transmitida para cada uma dessas regiões do campo visual e a relacionamos com outras propriedades do neurônio, como por exemplo a sensibilidade espacial e eficiência. Nossos resultados sugerem que a arborização dendrítica influencia a codificação temporal de maneira significativa, indicando que o neurônio pode usar a estrutura temporal da sequência de pulsos para codificar outros parâmetros do estímulo, ou para aumentar a confiabilidade da codificação dependendo da região excitada / Understanding how the brain processes information about the outside world is one of the most fascinating problems of modern science. This involves the analysis of information representation and transmission in the fundamental processing element of the brain - the neuron. In the cortex neurons represent information by sequences of electrical pulses, or spikes. We use the fly as a model to study how the amount of information transmitted by the temporal structure of the spike trains depends on the neuron\'s dendritic arborization. The retinotopic mapping of information in the fly\'s visual system allows the stimulation of specific regions of the neuron\'s dendritic tree through the visual stimulation of the respective region in the visual field of the fly. We show an image moving in the preferred direction of the motion-sensitive neuron H1 in specific regions of the fly\'s visual field and measure the electrical response of the neuron. Using information theory, we calculate the amount of information transmitted for each of these regions and compare it with other properties of the neuron, for example, the spatial sensitivity. Our results suggest that the dendritic arborization influentes the temporal coding in a significant way, indicating that the neuron could use the temporal structure of the spike train to codify other parameters of the stimulus, or to increase the reliability of the code depending on the excited region

A biodiversidade dos rios brasileiros encontra-se sob severa ameaça, em razão da fragmentação e perda de hábitat que os barramentos representam. Até o presente, os aproveitamentos hidrelétricos têm seu licenciamento ambiental condicionado a análises de impacto locais, sem avaliação dos impactos cumulativos de múltiplas barragens em uma bacia hidrográfica, com relação à conservação da diversidade da ictiofauna. Estudos anteriores para subsídio de licenciamento de múltiplas barragens na bacia Taquari-Antas (RS) propuseram cenários alternativos de conservação (número e posição de barragens), quando ainda não havia métricas de conectividade dendrítica desenvolvidas. Entre os problemas identificados naqueles estudos figuram a quantificação dos efeitos cumulativos das barreiras sobre a conectividade da bacia, o estabelecimento de áreas prioritárias para conservação e a influência do número e da posição das barreiras na conservação da biodiversidade aquática em uma bacia. Avaliamos a aplicação de conectividade para mensuração de impactos cumulativos de fragmentação de bacias hidrográficas através de índices de conectividade dendrítica recentemente propostos. Propomos um método genérico e replicável para analisar quantitativamente os efeitos de sucessivos barramentos em relação à conectividade dos hábitats aquáticos em processos de migração e dispersão de peixes em bacias hidrográficas. Utilizamos simulações de cenários de múltiplos barramentos para a avaliação. Propomos também uma sistematização para a simulação de múltiplos barramentos. Além disso, hierarquizamos áreas para conservação por conectividade, aplicamos as novas métricas de conectividade a estudos anteriores e demonstramos casos de cenários de alta conectividade com outras implicações na conservação. Discutimos o amadurecimento do método para aplicação em licenciamento ambiental e planejamento de conservação, bem como limitações atuais e perspectivas para trabalhos futuros. / Biodiversity of Brazilian rivers is nowadays seriously threatened due to fragmentation and habitat loss that impoundments represent. Up to now, hydroelectric power plants have their environmental licensing processes conditioned to local impact analysis, with no evaluation of cumulative impacts of multiple dams in a watershed landscape on the conservation of the integrity of ichthyofauna. Former studies for supporting environmental licensing processes of multiple hydroelectric dams in the Taquaria-Antas basin (RS, Brasil) proposed alternative conservation scenarios (number and position of barriers), in a time when there were no dendritic connectivity metrics developed. Among the problems identified at that time, we point quantification of cumulative effects of multiple barriers on the drainage connectivity, detecting prioritary areas for conservation and detecting the influence of the number and position of the barriers in the catchment for best conservation of aquatic biodiversity. We evaluated the application of connectivity for quantifying the impacts of fragmentation in hydrographic basins through recently proposed indexes. We proposed a replicable and generic method for quantifying the effects of successive impoundments in relation to aquatic habitat connectivity in ecological processes of migration and dispersal of fishes in hydrographic basins. We used multiple barriers scenarios simulation in order to perform the assessments. We also propose a way of systematizing multiple barriers simulations. Moreover, we rank areas for conservation by connectivity, apply the new connectivity metrics on former studies and demonstrate cases of high connectivity scenarios with other implications on conservation. We discuss maturing the method for application on environmental licensing and conservation planning as well as current limitations and perspectives for future studies.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2014-02-07T18:54:08Z No. of bitstreams: 1 Micely D`el-Rei Hermida... Transporte de Leishmania do sitio.pdf: 12642864 bytes, checksum: 1f1b3fd2c8676340857d3b59f352212d (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-07T18:54:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Micely D`el-Rei Hermida... Transporte de Leishmania do sitio.pdf: 12642864 bytes, checksum: 1f1b3fd2c8676340857d3b59f352212d (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina. Salvador, BA, Brasil / A infecção por Leishmania modula a função de integrinas em fagócitos inflamatórios, afetando a migração celular e disseminação do parasito. O conhecimento sobre as populações de fagócitos capazes de transportar Leishmania ou fragmentos de parasitos mortos, e os mecanismos de disseminação da Leishmania do sítio de infecção para os diferentes tecidos ainda está incompleto. Nesse trabalho, nós adaptamos um modelo de migração de células in vivo para estudar o efeito da infecção parasitária na capacidade das diferentes populações de fagócitos mononucleares de migrar do sítio inflamatório para o linfonodo drenante e para estudar a cinética de disseminação da Leishmania através do sistema linfático. Inicialmente, nós usamos um modelo de peritonite crônica induzida por tioglicolato para identificar populações de fagócitos inflamatórios susceptíveis a infecção por Leishmania e suas possíveis alterações na migração após a infecção. Células peritoneais estimuladas por tioglicolato coletadas de animais Ly5.1+, não infectadas ou infectadas por Leishmania, foram injetadas na cavidade peritoneal de animais Ly5.1- e as diferentes populações de fagócitos foram rastreadas no linfonodo drenante. Células migrantes corresponderam no linfonodo 1% dos leucócitos injetados. Em animais injetados com células peritoneais cultivadas somente com meio, 28-90% das células migrantes eram células dendríticas mielóides e 30-74% eram macrófagos. No grupo de animais injetados com células do exsudato peritoneal co-cultivadas com Leishmania, 9-65% das células migrantes eram células dendríticas mielóides e 20-69% eram macrófagos. Somente a migração da célula dendríticas foi consistentemente diminuída após a co-incubação Leishmania. Em seguida, nós determinamos a cinética de disseminação do parasito do sítio inflamatório para o linfonodo drenante e sistemicamente. Promastigotas de L. amazonensis foram injetadas na cavidade peritoneal de camundongos e depois de 15min e 30min; 1h, 2h, 4h, 6h, 12h e 24h amostras de fagócitos peritoneais, linfonodo, baço e pulmão foram cultivados para isolamento de Leishmania. Culturas de fagócitos peritoneais e células do linfonodo ficaram positivas após 15min a 6h da infecção. Parasitos foram detectados em culturas de células esplênicas de 15min a 1h após a infecção. Cultura de células do pulmão foram positivas 1h após a infecção ou, menos consistentemente, 15min e 30min após a inoculação. Parasitos na forma promastigota foram identificados no linfonodo drenante. Nossos dados mostraram que: (1) Uma variedade de fagócitos são capazes de migrar do sítio inflamatório para o linfonodo drenante. (2) Populações de células dendríticas infectadas por Leishmania parecem estar retidas no sítio inflamatório. (3) Os mecanismos de disseminação da Leishmania da cavidade peritoneal para o linfonodo ocorre em menos de 15 minutos após a injeção. (4) O trânsito para a corrente sanguínea ocorre nas primeiras horas após a infecção. Nossos dados também sugerem que mesmo antes do tempo requerido para alterações nas populações de células inflamatórias ocorra no sítio inflamatório, parasitos de Leishmania e seus antígenos podem chegar ao linfonodo drenante. / Leishmania infection modulates integrin function in inflammatory phagocytes, affecting cell migration and parasite dissemination. The knowledge on the phagocyte populations capable of transporting Leishmania or fragments of dead parasites, and the mechanisms of Leishmania dissemination from the infection site to the different tissues is still incomplete. In this work, we adapted a model of cell migration in vivo to study the effect of parasite infection upon the ability of different mononuclear phagocyte populations to migrate from the inflammatory site to the draining lymph node and to study the kinetics of Leishmania dissemination through the lymphatic system. First, we used a model of chronic peritonitis induced by thioglycollate to identify inflammatory phagocytes populations susceptible to Leishmania infection and the potential changes in their migratory patterns after infection. Uninfected and Leishmania-infected, thioglycollate-elicited peritoneal exudate cells from Ly5.1+ mice were injected into the peritoneal cavity of Ly5.1- mice, and the different phagocyte populations were tracked to the draining lymph node. Migrating cells corresponded 1% of the injected leukocytes. In the animals injected with peritoneal cells cultivated with medium alone, 28-90% of the migrating cells were myeloid dendritic cells and 30-74% were macrophages. In the group of animals injected with peritoneal exudate cells co-cultivated with Leishmania, 9-65% of the migrating cells were myeloid dendritic cells and 20-69% were macrophages. Only dendritic cell migration was consistently decreased after co-incubation with Leishmania. Afterwards, we determined the kinetic of parasite dissemination from the inflammatory site to the draining lymph node and systemically. L. amazonensis promastigotes were injected into BALB/c mice peritoneal cavity and after 15min and 30min; 1h, 2h, 4h, 6h, 12h and 24h samples of peritoneal phagocytes, lymph nodes, spleen and lungs were cultivated for Leishmania isolation. Peritoneal phagocytes and lymph nodes were positive after 15min to 6h of infection. Parasites were detected in splenic cells cultures 15min to 1h after infection. Lungs cultures were positive after 1h of infection or, less consistently, 15min and 30min after inoculation. Labeled parasites were identified in the draining lymph nodes. Our data show that: (1) A variety of phagocytes are able to migrate from the inflammatory site to the draining lymph node. (2) Populations of Leishmania-infected dendritic cells appear to be retained in the inflammatory site. (3) The mechanisms of Leishmania dissemination from peritoneal cavity to the lymph node occur in less than 15 minutes after injection. (4) The transit to bloodstream occurs in the first hour of infection. Our data also suggest that even before the time required for deep changes in inflammatory cell population takes place in the inflammatory site, Leishmania parasites and their antigens can reach the draining lymph node.

A biodiversidade dos rios brasileiros encontra-se sob severa ameaça, em razão da fragmentação e perda de hábitat que os barramentos representam. Até o presente, os aproveitamentos hidrelétricos têm seu licenciamento ambiental condicionado a análises de impacto locais, sem avaliação dos impactos cumulativos de múltiplas barragens em uma bacia hidrográfica, com relação à conservação da diversidade da ictiofauna. Estudos anteriores para subsídio de licenciamento de múltiplas barragens na bacia Taquari-Antas (RS) propuseram cenários alternativos de conservação (número e posição de barragens), quando ainda não havia métricas de conectividade dendrítica desenvolvidas. Entre os problemas identificados naqueles estudos figuram a quantificação dos efeitos cumulativos das barreiras sobre a conectividade da bacia, o estabelecimento de áreas prioritárias para conservação e a influência do número e da posição das barreiras na conservação da biodiversidade aquática em uma bacia. Avaliamos a aplicação de conectividade para mensuração de impactos cumulativos de fragmentação de bacias hidrográficas através de índices de conectividade dendrítica recentemente propostos. Propomos um método genérico e replicável para analisar quantitativamente os efeitos de sucessivos barramentos em relação à conectividade dos hábitats aquáticos em processos de migração e dispersão de peixes em bacias hidrográficas. Utilizamos simulações de cenários de múltiplos barramentos para a avaliação. Propomos também uma sistematização para a simulação de múltiplos barramentos. Além disso, hierarquizamos áreas para conservação por conectividade, aplicamos as novas métricas de conectividade a estudos anteriores e demonstramos casos de cenários de alta conectividade com outras implicações na conservação. Discutimos o amadurecimento do método para aplicação em licenciamento ambiental e planejamento de conservação, bem como limitações atuais e perspectivas para trabalhos futuros. / Biodiversity of Brazilian rivers is nowadays seriously threatened due to fragmentation and habitat loss that impoundments represent. Up to now, hydroelectric power plants have their environmental licensing processes conditioned to local impact analysis, with no evaluation of cumulative impacts of multiple dams in a watershed landscape on the conservation of the integrity of ichthyofauna. Former studies for supporting environmental licensing processes of multiple hydroelectric dams in the Taquaria-Antas basin (RS, Brasil) proposed alternative conservation scenarios (number and position of barriers), in a time when there were no dendritic connectivity metrics developed. Among the problems identified at that time, we point quantification of cumulative effects of multiple barriers on the drainage connectivity, detecting prioritary areas for conservation and detecting the influence of the number and position of the barriers in the catchment for best conservation of aquatic biodiversity. We evaluated the application of connectivity for quantifying the impacts of fragmentation in hydrographic basins through recently proposed indexes. We proposed a replicable and generic method for quantifying the effects of successive impoundments in relation to aquatic habitat connectivity in ecological processes of migration and dispersal of fishes in hydrographic basins. We used multiple barriers scenarios simulation in order to perform the assessments. We also propose a way of systematizing multiple barriers simulations. Moreover, we rank areas for conservation by connectivity, apply the new connectivity metrics on former studies and demonstrate cases of high connectivity scenarios with other implications on conservation. We discuss maturing the method for application on environmental licensing and conservation planning as well as current limitations and perspectives for future studies.