Orientador: Mário Tanomaru Filho / Banca: Mario Roberto Leonardo / Banca: Ana Paula Vieira Colombo / Resumo: O objetivo deste estudo foi a avaliação da microbiota dos canais radiculares de dentes de cães sem vitalidade pulpar, com e sem reação periapical crônica por meio dos métodos de cultura microbiológica e hibridação DNA-DNA checkerboard, além da análise da reparação dos tecidos apicais e periapicais após o tratamento endodôntico de dentes sem vitalidade pulpar sem ou com lesão periapical e dentes com vitalidade pulpar. Foram utilizados 60 pré-molares de 3 cães. No grupo I foram realizados os casos de biopulpectomia; no grupo II, após a abertura coronária, os canais radiculares permaneceram expostos por 30 dias, visando a contaminação dos mesmos (necropulpectomia I); e no grupo III, os canais radiculares permaneceram expostos ao meio bucal por 7 dias, sendo a seguir, selados por 60 dias, quando as lesões periapicais foram evidenciadas radiograficamente (necropulpectomia II). Anteriormente ao preparo biomecânico foi realizada a colheita de material dos canais radiculares para análise microbiológica dos dentes sem vitalidade pulpar. O tratamento endodôntico foi realizado em todos os grupos, em uma única sessão, e após 180 dias os cães foram mortos e as peças preparadas para análise histopatológica. Os resultados da análise microbiológica por meio da técnica de cultura demonstraram o predomínio de anaeróbios estritos e aeróbios em relação aos microrganismos facultativos. A técnica de checkerboard demonstrou o predomínio de anaeróbios estritos nas duas situações avaliadas. Nos dois métodos de análise microbiológica foi possível observar maior número de células bacterianas no Grupo II, onde os canais radiculares permaneceram expostos ao meio bucal por 30 dias. Os resultados histopatológicos demonstraram presença de infiltrado inflamatório severo, reabsorção apical e óssea nos grupos II e III, com aspectos semelhantes para... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: The aim of this study was to evaluate the microbiota of root canals from dog's teeth, with no pulp vitality, with or without radiographic chronic periapical lesion, using a culture microbiologic method and checkerboard DNA-DNA hybridization technique. The repair of apical and periapical tissues was evaluated after the endodontic treatment of root canals, with no pulp vitality, with or without chronic periapical lesion and with vital pulp. It were used dog's premolars from 3 animals, divided into three groups: group I, treatment of teeth with vital pulps; group II, after coronal opening the root canals were exposed to oral environment during 30 days (teeth with no pulp vitality without chronic periapical lesion); and in group III, the root canals were exposed to oral environment during 7 days, and after this, sealed during 60 days, until the radiographic observation of the presence of periapical lesion. Before the biomechanical preparation, the microbiologic samples were obtained from groups II and III. Endodontic therapy was conducted in three groups, in one-visit treatment, and after 180 days, the dogs were killed and the obtained histological sections were stained with hematoxylin-eosin for optical microscopic analysis of the apical and periapical repairing. The results of microbiologic evaluation using culture technique, showed the predominance of obligate anaerobic and aerobic bacteria in both groups, when compared to facultative species. The method checkerboard demonstrated the predominant occurrence of obligate anaerobes in the both clinical situations that were evaluated. For the two microbiological methods used it was possible to observe a greater number of cells in group II, where the root canals were kept exposed to oral environment during 30 days. The histhological results showed inflammatory... (Complete abstract, click electronic address below). / Mestre

Orientador: Fernanda Gonçalves Basso / Banca: Adriano Fonseca de Lima / Banca: Ana Paula Dias Ribeiro / Banca: Fernanda Lourenção Brighenti / Banca: Elisa Maria ASparecida Giro / Resumo: O objetivo geral da presente pesquisa foi avaliar o efeito do LED 850 nm sobre diferentes processos metabólicos de células-tronco da polpa dentária in vitro. Para todos os estudos, células originárias da polpa de dentes decíduos humanos hígidos foram caracterizadas por imunofluorescência utilizando os anticorpos STRO-1, CD44, CD146, Nanog e OCT3/4, antes da realização dos protocolos experimentais. No estudo 1, células foram cultivadas em placas de acrílico, estimuladas à diferenciação odontoblástica e irradiadas com LED (850 nm) em diferentes doses de energia (DE - 0, 2, 4, 8, 15 ou 30 J/cm2, 40 mW/cm2), n=9. Após 12 h e 72 h da irradiação, foram avaliados o metabolismo celular (MTT), a formação de nódulos mineralizados (NM - Alizarin Red) e o número de células viáveis (Trypan Blue). Os dados foram submetidos aos testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney (p<0,05). Para o estudo 2, o mesmo protocolo experimental foi realizado, porém utilizando apenas as doses de 2 e 4 J/cm2 e o tempo de avaliação de 72 h pós-irradiação. Foram avaliados a atividade de fosfatase alcalina (ALP), a produção de proteína total (PT), produção de colágeno total (Sircol), bem como a expressão gênica (qPCR) de ALP, colágeno tipo I (Col I), sialoproteína da dentina (DSPP) e proteína da matriz dentinária (DMP-1), n=8. Os mesmos testes estatísticos foram utilizados. Para o estudo 3, as células foram semeadas sobre a superfície pulpar de discos de dentina com 0,2 mm de espessura (n=72), submetidas ao mesmo protocolo de irradiação do estudo 2, aplicada sobre a superfície oclusal dos discos de dentina (n=8, ação transdentinária). Os testes incluíram viabilidade celular (MTT), atividade de ALP, produção de PT, expressão gênica de ALP, Col I, DSPP e DMP-1 e morfologia celular (MEV) e os dados foram submetidos aos mesmos testes estatísticos. Para o estudo 1, quando comparadas ao ...(Resumo completo, clique acesso eletrônico) / Abstract: The overall aim of this study was to evaluate in vitro the effect of 850 nm LED irradiation on different metabolic processes of stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHEDs). For all studies, pulp cells originated from sound deciduous teeth were characterized by immunofluorescence using STRO-1, CD44, CD146, Nanog and OCT3/4 antibodies, before experimental protocols. In the first experiment, cells were seeded in 24 well-plates, submitted to ondontoblastic differentiation and irradiated with different energy doses (ED - 0, 2, 4, 8, 15 or 30 J/cm2, 40 mW/cm2) n=9. After 12 h and 72 h post irradiation, cell viability (MTT), mineralized nodule formation (MN - Alizarin Red) and number of viable cells (Trypan Blue) were evaluated. Data were submitted to Kruskal Wallis and Mann-Whitney tests (p<0.05). In the second experiment, the same protocol was performed, however, using only 2 and 4 J/cm2, considering 72 h post irradiation as period of evaluation. Alkaline phosphatase (ALP) activity, total protein (TP) production, total collagen production (Sircol Assay), as well as gene expression (qPCR) of ALP, collagen type I (Col I), dentin sialophosphoprotein (DSPP) and dentin matrix acidic phosphoprotein 1 (DMP-1) were assessed, n=8. For the third experiment, cells were seeded on the pulp surface of 0.2 mm-thick dentin discs (n=72) and submitted to the same protocol of irradiation as experiment 2, applied on the occlusal surface of the dentin discs (n=8, transdentinal action). The assays included cell viability (MTT), ALP activity, TP production, ALP, Col I, DSPP and DMP-1 gene expression and cell morphology (SEM). Again, the same statistical tests were applied to data. In the first study, when compared with the control group, cells submitted to 2 or 4 J/cm2 showed higher cell viability after 72 h and all EDs increased the number of viable cells after 12 h. For MN formation... (Complete abstract electronic access below) / Doutor

Orientador: Silvio Issao Myaki / Banca: Silvio Issao Myaki / Banca: Rosangela Almeida Ribeiro / Banca: Sigmar de Mello Rode / Resumo: O objetivo do trabalho foi avaliar a resposta pulpar de dentes de ratos a diferentes sistemas adesivos diretamente aplicados sobre exposições pulpares. Foram realizados preparos oclusais com exposição pulpar nos primeiros e segundos molares superiores. O grupo C (controle, n=34) recebeu como material capeador o cimento de hidróxido de cálcio Dycal, no E1 (n=31) foi aplicado o sistema adesivo Single Bond e no E2 (n=30) o sistema adesivo auto-condicionante One-up Bond F. Os materiais foram aplicados conforme especificações dos fabricantes e todas as cavidades restauradas com resina composta. Os animais foram sacrificados após sete, trinta e 45 dias e as polpas dentárias foram histologicamente avaliadas. Os dados foram analisados estatisticamente utilizando-se o teste exato de Fisher. Observou-se que aos sete dias não houve diferença entre C e E2 com relação à resposta inflamatória e à organização pulpar, predominando quadros de inflamação crônica focal e perdas odontoblásticas localizadas. O E1 demonstrou diferença estatisticamente significativa em relação ao E2, exibindo maior número de casos com necrose. Aos sete dias a contaminação bacteriana da polpa foi menor no grupo tratado com One-up, porém, todas as diferenças mencionadas foram perdidas com o decorrer do tempo, equiparando-se os três grupos aos 45 dias, período em que predominou a necrose pulpar. Houve um aumento no número de barreiras dentinárias formadas e na contaminação bacteriana do tecido pulpar com o aumento do tempo experimental. Concluiu-se que o tratamento capeador direto, conforme o modelo experimental empregado, demonstrou ser histologicamente insatisfatório, independentemente do material empregado. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the pupal response to different adhesives systems directly applied on mechanically exposed pulps in rats. The oclusal surfaces of first and second molars were prepared and the pulps exposed. In C (control group-n=34) pulps were capped with a calcium hydroxide paste (Dycal); E1 (n=31) received the Single Bond adhesive system and E2 (n=30) was treated with the self-etching One-up Bond F adhesive system. The materials were applied according to the manufacture's instructions and cavities were restored with Z100 composite resin. Animals were sacrificed after seven, thirty and 45 days and histological features of the dental pulp were evaluated. The Fisher test was used as statistical analysis. At seven days C and E2 presented similar inflammatory response and pulpal organization, showing focal chronic inflammation and localized odontoblast cell lost. E1 and E2 demonstrated statistically significant difference regarding to pulpal organization and inflammatory response; the former exhibiting much more necrosis. At seven days, bacterial contamination of the dental pulp was less evident with One-up Bond F. All these differences were lost with time and after 45 days, pulpal necrosis and bacterial contamination prevailed in the three groups. The formation of the dentin barrier was greater with time in the three groups. The results presented suggest negative effects of direct pulp capping on molar teeth of rats using Dycal, One-up Bond F and Single Bond, under the experimental conditions described. / Mestre

As células-tronco provenientes da polpa de dentes decíduos esfoliados (SHED) são uma fonte promissora de células-tronco para a terapia regenerativa. Já foi demonstrado que elas podem se diferenciar em células endoteliais, mas os mecanismos envolvidos nesse processo ainda são desconhecidos. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo elucidar os mecanismos moleculares relacionados à diferenciação endotelial dessas células. Para isso, um meio de cultura para células endoteliais (EGM-2MV), suplementado por 50ng/mL rhVEGF, foi utilizado com sucesso como estímulo para as SHED se diferenciarem em células endoteliais em cultura de monocamada. Uma vez que, elas expressaram os marcadores endoteliais VEGFR-2 e CD-31. Além disso, quando as SHED foram expostas ao meio de diferenciação, a fosforilação de STAT-3 (um marcador de células-tronco) foi inibida de acordo com a concentração utilizada, enquanto a fosforilação de ERK e AKT foi estimulada. Quando um inibidor de ERK foi adicionado ao meio, a fosforilação de STAT-3 aumentou. Por outro lado, quando um inibidor de STAT-3 foi adicionado ao meio de cultura, a fosforilação de ERK aumentou. A inibição de ERK também impediu a diferenciação endotelial. Para confirmar esse resultado, shRNA MEK-1 SHED também falharam em expressar VEGFR-2 quando estimuladas. Além disso, scaffolds de fatias dentais foram semeadas com shRNA VEGFR-1 SHED ou shRNA controle e implantadas no subcutâneo de camundongos imunodeficientes. Após recuperados, um tecido muito semelhante à polpa dental foi formado no interior das fatias. No entanto, havia menos células CD-31 positivas nos vasos sanguíneos dos implantes semeados com VEGFR-1 shRNA SHED, sugerindo um papel do VEGFR-1 na formação de vasos sanguíneos. Em conclusão, o VEGFR-1 e a via de sinalização de ERK estão envolvidos no processo de diferenciação das SHED em células endoteliais. / Stem Cells from Exfoliated Deciduous Teeth (SHED) are a promising source of stem cells for regenerative therapy. It was already shown they can differentiate into endothelial cells, but the mechanisms involved in this process remain unclear. Therefore, the following study aimed to elucidate the molecular mechanisms related to endothelial differentiation of SHED. For this purpose, a culture media for endothelial cells (EGM-2MV), supplemented with 50ng/ml rhVEGF, was successfully used as stimuli for SHED to undergo endothelial differentiation in monolayer culture, as they expressed the endothelial markers VEGFR-2 and CD- 31. Moreover, when SHED were exposed to the differentiation medium, STAT-3 phosphorilation (a stemness marker) was inhibited while the ERK and AKT phosphorilation was stimulated. When an ERK inhibitor was added to the medium, the STAT-3 phosphorilation increased in a dependent concentration manner. On the other hand, when a STAT-3 inhibitor was added the ERK phosphorilation increased. The ERK inhibition also arrested endothelial differentiation. To confirm this results, shRNA MEK-1 SHED also failed to express VEGFR-2 when stimulated. Additionally, tooth slice scaffolds were seeded with shRNA VEGFR-1 SHED or shRNA control SHED and implanted, subcutaneously, into immunodeficient mice. After retrieved, a dental pulp-like tissue had been formed inside the tooth slice. However, there were fewer CD-31 positive blood vessels in the shRNA VEGFR-1 implants suggesting a role of VEGFR-1 in the formation of blood vessels by SHED. In conclusion, the VEGFR-1 and ERK pathway are involved in the process of differentiation of SHED into endothelial cells.

Embora diferentes estudos indiquem que há um aumento da resistência dos microrganismos aos agentes antimicrobianos prescritos, pouco se sabe a respeito da sua distribuição na cavidade oral. A presente dissertação está dividida em dois capítulos, representados por dois diferentes manuscritos. No manuscrito I, uma revisão sistemática foi realizada e teve como objetivo determinar quais genes de resistência a antimicrobianos foram pesquisados em saliva (S), no biofilme supragengival (SB) e canal radicular (RC). Os termos foram usados em várias combinações nas seguintes bases de dados eletrônicas (MEDLINE, EMBASE, ISI, SCOPUS e OPENGREY). Após seleção dos títulos e análise dos resumos, o texto integral de cada estudo foi obtido. Foram estabelecidos critérios de inclusão e exclusão. Dados epidemiológicos, características metodológicas e os resultados foram obtidos a partir dos estudos. Devido à falta de padronização da metodologia entre os trabalhos, não foi possível realizar uma meta-análise. Realizou-se análise descritiva dos dados. Um total de 151 títulos foram identificados para análise preliminar. Quarenta e nove resumos foram selecionados e 22 textos completos foram obtidos. Sete artigos contemplavam aos critérios de inclusão (S = 2; SB = 0 , e RC = 5). Vinte e seis diferentes genes-alvo foram avaliados. Os genes de resistência mais frequentemente descritos foram os relacionados às tetraciclinas e lactâmicos (5/7). Observa-se que poucos artigos foram selecionados pela estratégia de busca adotada para esta revisão sistemática. Este fato demonstra a falta de padronização nas metodologias dos estudos que utilizam técnicas moleculares para a detecção de genes de resistência bacteriana, tanto em condições de saúde ou doença. No manuscrito II, um estudo de observação clínica e laboratorial foi desenvolvido para detectar a presença de espécies-alvo de Prevotella e o gene cfxA/cfxA2 em amostras de saliva (S), biofilme supragengival (SB) e canais radiculares infectados (RC). Amostras pareadas de S, SB e RC foram coletadas de 42 indivíduos. Os pacientes foram divididos em três grupos: Grupo I - sem infecção aguda/crônica primária do canal radicular (n = 15), Grupo II - presença de infecção aguda primária no canal radicular (n = 12 ) e Grupo III - presença de infecção crônica no canal radicular (n = 15). Foram coletadas amostras de RC apenas para os Grupos II e III. Após o isolamento do DNA, a presença de Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae e do gene cfxA/cfxA2 foi detectada através de PCR. Comparou-se a frequência das espécies e do gene de resistência, considerando diferentes ambientes e condições clínicas. A análise estatística foi realizada. Todas as amostras de S, SB e RC foram positivos para a detecção de DNA bacteriano. As taxas de detecção para espécies de Prevotella foram: S= 53,97%; SB=47,62%, e RC=34,56%. O gene cfxA não foi detectado simultaneamente em três ambientes do mesmo paciente. A presença ou ausência de sintomas espontâneos não influenciou as taxas de detecção para as espécies-alvo e para o gene cfxA/A2 em amostras de RC (teste exato de Fisher , P> 0,05). Espécies de Prevotella e o gene cfxA/cfxA2 foram frequentemente detectados na saliva, placa dental e amostras de canais radiculares. / Although different studies indicate that there is an increased resistance of microorganisms to antimicrobial agents prescribed in Endodontics, little is known about their distribution in the oral cavity. The present dissertation was divided into two chapters, represented by two different manuscripts. In manuscript I, a systematic review was conducted and aimed to determine which antimicrobial resistance genes were investigated in saliva (S), the supragingival biofilm (SB) and root canal (RC). The terms were used in various combinations in the following electronic databases (MEDLINE, EMBASE, ISI, SCOPUS and OPENGREY). After title screening and abstract analysis, the full text of each study was obtained. The relevance of each study to the question of interest was determined through inclusion and exclusion criteria. Epidemiologic data, methodological characteristics and results were collected from the studies. Due to lack of methodology standardization among the papers, it was not possible to perform a meta-analysis. Descriptive data analysis was performed. A total of 151 titles were identified for preliminary analysis. Forty-nine abstracts were selected, and full texts of 22 studies were obtained. Seven articles matched the inclusion criteria (S=2; SB= 0; and, RC=5). Twenty-six different targeted genes have been evaluated. The most frequently investigated groups of resistance genes were related to tetracycline and lactamics (5/7). Few articles in the literature fit in the search strategy adopted by this systematic review, demonstrating the lack of standardization in the methodologies of studies using molecular techniques for the detection of bacterial resistance genes to antibiotics in oral cavity, either in health or disease conditions. In the manuscript II, an observational clinical and laboratorial study was developed to identify the presence of targeted Prevotella species and the cfxA/cfxA2 gene in samples from saliva (S), supragingival biofilm (SB) and infected root canals (RC). Paired samples of S, SB and RC were collected from 42 subjects. Patients were divided into three groups: Group I - no acute or chronic root canal infection (n = 15); Group II - presence of acute root canal infection (n = 12), and Group III - presence of chronic root canal infection (n=15). RC samples were collected for Groups II and III. After DNA isolation, the presence of Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae and the cfxA/cfxA2 gene was detected through gene-specific PCR. The frequency of the species and of the resistance was compared, considering different environments and clinical conditions. Statistical analysis was carried out. All samples from S, SB and RC were positive for the presence of bacteria. The overall detection rates for Prevotella species were: S = 53.97%; SB = 47.62%; and, RC = 34.56%. The cfxA gene was not detected simultaneously in the three environments from the same patient. The presence of absence of spontaneous symptoms had not influenced the detection rates for the targeted species and for the cfxA/A2 gene in RC samples (Fisher Exact Test, P>.05). Prevotella species and the gene cfxA/cfxA2 were frequently detected in saliva, dental plaque and root canal samples.

As células-tronco mesenquimais (CTMs) tornaram-se um grande interesse para a ciência por serem capazes de estimular a regeneração tecidual, apresentarem habilidade de se expandir e diferenciar em cultura e, consequentemente, apresentarem diversas possibilidades terapêuticas, bem como para a engenharia de tecidos. Muitos dos tecidos dentários também apresentam nichos de CTMs. O fácil acesso à polpa dos dentes decíduos, em virtude da esfoliação dental, a torna uma fonte muito atraente para a terapêutica e a engenharia de tecidos. Todos os avanços advindos das terapias baseadas em células-tronco tornam a preservação das fontes celulares, por longos períodos de tempo, um assunto de suma importância. Para que isso possa ocorrer, métodos de armazenamento devem ser adotados, tanto para as culturas celulares já estabelecidas, quanto para os tecidos inteiros. Uma das formas mais comuns de manutenção de culturas e de tecidos é a criopreservação em nitrogênio líquido. Contudo, existem poucas evidências no sentido de estabelecer um protocolo eficaz para o congelamento do dente decíduo intacto. Dessa forma, esse trabalho objetivou isolar, cultivar e caracterizar, para parâmetros apresentados para CTMs, as células pulpares após a criopreservação de dentes decíduos intactos por 7 dias. Para isso, vinte e seis dentes decíduos foram alocados em 2 grupos experimentais, sendo: grupo 1, células pulpares de dentes decíduos criopreservados intactos (grupo Crio) e grupo 2, células pulpares de dentes decíduos isoladas imediatamente após a exodontia (grupo fresco - controle). As células pulpares de ambos os grupos foram isoladas, cultivadas, analisadas por citometria de fluxo (CD14, CD29, CD34, CD45, CD73, CD90 e HLA-DR), submetidas aos protocolos de diferenciação osteogênica, adipogênica e condrogênica, e aos ensaios de proliferação celular (WST-8). A morfologia celular de ambos os grupos foi avaliada por microscopia confocal. Os resultados demonstraram uma taxa de cultivo de 30% para o grupo Crio e 61% para o grupo Fresco. Não houve diferença estatística entre os grupos para os marcadores de superfície analisados. As células de ambos os grupos foram capazes de se diferenciar em células das 3 linhagens testadas. Para o ensaio de proliferação, não houve diferença estatística entre os grupos ao longo dos tempos testados (p>0,05), embora a média de dias entre o isolamento e a quinta passagem foi menor para o grupo controle (p=0,035). As células do grupo Crio mostraram morfologia alterada. Assim, conclui-se ser possível obter células-tronco da polpa de dentes decíduos congelados pelo protocolo sugerido, sem alterações imunofenotípicas. No entanto, esse protocolo demonstrou baixas taxas de sucesso de isolamento, menor capacidade de diferenciação e de proliferação, além de alteração da morfologia celular. / Mesenchymal stem cells (MSC) became of great value for science for being capable of stimulating tissue regeneration and showing ability to proliferate and differentiate when cultured properly. Dental tissues also present MSC niches as well. Mesenchymal stem cells from the pulp of deciduous teeth are considered an easy access source during a specific period of time in the patients life, when teeth are undergoing exfoliation; therefore, very attractive for cell based therapeutics and tissue engineering. All advances seen in cell based therapies for the last years depend on cell or tissue preservation for long periods of time. Thus, storage methods must be adopted for cultures of cells and whole tissues. The most common technique to preserve cell cultures and tissues is cryopreservation with liquid nitrogen. However, fragile evidence concerns the cryopreservation of intact deciduous teeth. This research aimed to isolate, cultivate and characterize the dental pulp cells of intact cryopreserved deciduous teeth and compare to the dental pulp cells of non-cryopreserved deciduous teeth. Thirteen pairs of deciduous teeth were donated from patients in orthodontic treatment and were randomly allocated in two different groups. The first group was made of cryopreserved intact deciduous teeth (Cryo group), and in second group pulp cells were isolated from fresh teeth (Fresh group). The cells of both groups were isolated, cultivated and characterized for mesenchymal stem cell parameters, and then compared for isolation and proliferation rates, surface markers expression (CD14, CD29, CD34, CD45, CD73, CD90 and HLA-DR), differentiation ability and morphology. The culture rate was 30% for the cryopreserved group and 61% for the fresh. There were no statistical differences between the groups for the surface markers tested. Cells in both groups were capable of differentiating in the 3 mesenchymal lineages. For the proliferation assay, there was no statistical difference between groups throughout the time tested although the mean time between isolation and the fifth passage was lower for the control group (p=0,035). Cells from Cryo group showed altered morphology. The present study showed that Dental Pulp Stem Cells can be obtained from cryopreserved intact deciduous teeth without changes in the immunophenotypical profile, however low success rates for isolation, differentiation ability and morphological alterations were observed.

As evidências, até então disponíveis, revelam o sucesso de tipos diferentes de abordagem conservadora de lesões de cárie profundas e as reações do complexo dentino-pulpar, entre elas a formação de dentina reacional. O objetivo do presente estudo foi avaliar histologicamente o tecido pulpar de dentes decíduos humanos submetidos a diferentes abordagens conservadora. A amostra foi composta por 25 molares decíduos, divididos em 5 grupos, sendo os primeiros tratados com remoção total de tecido cariado sem exposição pulpar (RTTC), remoção parcial de tecido cariado em sessão única (RPTC) e tratamento expectante (TE), além dos controles positivo (molares hígidos) e negativo (molares com lesão de cárie ativa profunda em dentina sem tratamento restaurador). Foi realizada a quantificação de dentina reacional, da presença ou não de inflamação e reabsorção pulpar e uma análise descritiva da morfologia pulpar através da observação de cada lâmina ao microscópio. Não foi encontrada diferença estatisticamente significativa entre os grupos, entretanto houve maior formação de dentina reacional no grupo de RPTC, nos levando a entender que o tratamento menos invasivo pode ser uma alternativa terapêutica definitiva para o tratamento das lesões profundas de cárie em dentina de dentes decíduos. / The evidence available so far shows the success of the conservative approach of deep carious lesions and the reactions of the pulp-dentin complex, including the formation of reactionary dentin. The aim of this study was to evaluate histologically the pulp tissue of human deciduous teeth undergoing different conservative treatments. The sample was composed of 25 primary molars, divided into 5 groups, the first being treated with total caries removal without pulp exposure (TCR), partial caries removal in one session (PCR) and stepwise excavation (SW), and positive controls (sound molars) and negative (molars with active deep caries lesion without restorative treatment). Quantification of reactive dentin was performed, the presence or absence of resorption and inflammation and pulp descriptive analysis of the morphology of pulp through observation of each slide under a microscope. There was no statistically significant difference between the groups, but there was more reactionary dentin formation in PCR group, leading us to understand that the less invasive treatment may be an alternative therapy for the definitive treatment of deep caries lesions in dentin of deciduous teeth.

Objetivo: O objetivo do presente estudo foi avaliar morfologicamente os tecidos pulpar e periapical de molares de ratos com a polpa vital e expostos ao meio bucal durante o desenvolvimento radicular, além de detectar a localização do STRO-1 e do BMP4 nos mesmos. Métodos: Foram utilizados 24 ratos machos da linhagem Wistar com quatro semanas de idade. A fim de induzir a necrose, foi realizada a exposição pulpar dos primeiros molares inferiores esquerdos em condições não-assépticas e deixando a polpa exposta ao ambiente oral (grupo teste). Os molares inferiores do lado direito não sofreram intervenção e serviram como grupo controle. A eutanásia dos animais foi realizada nos tempos de 7, 10, 13 e 16 semanas de vida (o equivalente a 3, 6, 9 e 12 semanas após a intervenção). Após, as mandíbulas foram dissecadas e processadas para a análise histológica através de Hematoxilina-Eosina e Imunohistoquímica. Foram comparadas, entre os grupos, em cada um dos períodos, a reação inflamatória periapical, as características do tecido pulpar (células inflamatórias, vascularização, odontoblastos, degeneração, destruição tecidual), fechamento do forame e presença de reabsorções. Resultados: Todos os dentes do grupo teste apresentaram necrose pulpar e a interrupção do desenvolvimento radicular. Enquanto isso, os dentes do grupo controle apresentaram o desenvolvimento normal dos tecidos dentários. Quanto à imunohistoquímica, foi constatada a marcação pelo BMP-4 no tecido pulpar dos dentes do grupo controle. Não houve, no entanto, marcação nos dentes do grupo teste. Para o STRO-1, a marcação foi mais evidente na região dos vasos sanguíneos, tanto no grupo controle, quanto no grupo teste. Para nenhum dos anticorpos, foi constatada marcação na região da papila apical. Conclusão: No presente estudo, a técnica imunohistoquímica não foi suficiente para a avaliação da presença de células-tronco na região da papila de dentes com rizogênese incompleta e necrose pulpar. É possível que a presença de infecção e a reação inflamatória tenham bloqueado a expressão do STRO-1 e do BMP-4. / Objective: the aim of this study was to characterize the features of live and necrotic dental pulps of molar teeth in rats with developing roots, and to assess the expression of STRO-1 and BMP-4. Methods: twenty-four 4-month-old male Wistar rats were used. To induce necrosis, the pulps of the first lower left molars were exposed to the oral environment. The lower right molars served as the control non-operated group. Euthanasia of animals was carried out at 7, 10, 13 and 16 weeks and the jaws were dissected and processed for histological analysis by hematoxylin-eosin and immunohistochemistry. The periapical inflammatory reaction, the characteristics of the pulp tissue (inflammatory cells, vascularity, odontoblasts, degeneration, tissue destruction), closure of the foramen and presence of resorptions were described at each period. Results: all teeth from the test group presented pulp necrosis, occurring discontinuation of root development. Meanwhile, the teeth of the control group showed normal development of dental tissues. BMP-4-positive cells were detected in the pulp of teeth from the control group. However, there was no expression in teeth of the test group. For STRO-1, expression was more evident in the blood vessels, both for the control group and for the test group. Apical papilla evidenced no BMP-4 nor STRO-1 expression. Conclusion: Immunohistochemistry was not sufficient to evaluate the presence of stem cells in the apical papilla region of nonvital immature teeth. It is possible that the inflammatory process has blocked the expression of STRO-1 and BMP-4., Probably, infection has negatively modulated this expression.

A busca por um material de enxertia que se adapte às necessidades do cirurgião bucomaxilofacial e também que proporcione ao paciente retorno de sua função com menores danos possíveis, tem sido incessante. O enxerto autógeno é ainda hoje considerado padrão ouro devido suas propriedades, porém, ele apresenta algumas desvantagens, sendo que as maiorias de suas complicações estão associadas ao leito doador. Atualmente, a engenharia de biomateriais trabalha com o desenvolvimento de novos materiais e recursos principalmente na área de regeneração tecidual. Neste contexto, scaffolds de origem natural ou sintética com o propósito de promover a regeneração de tecidos tem sido amplamente estudados. O objetivo desse estudo foi avaliar in vitro o comportamento biológico quanto à viabilidade, proliferação celular, adesão e potencial de diferenciação de células tronco de polpa dentária humana cultivadas sobre amostras de scaffold composto por uma nova blenda de poli ?-caprolactona/poli (rotaxano). Células tronco de polpa dentária de molares humanos (hDPSCs) foram cultivadas a partir de amostras congeladas e re-caracterizadas. As células foram semeadas sobre amostras dos scaffolds e sob lamínulas de vidro e cultivadas em diferentes meios: clonogênico, mineralizante e condicionado pelo extrato do biomaterial por 1,3,7,14 e 21 dias. Foram avaliadas as curvas de crescimento e viabilidade celulares, a atividade de fosfatase alcalina, a formação de nódulos de mineralização. A adesão celular foi observada por microscopia eletrônica de varredura até o cultivo de 7 dias. Os scaffolds eram lisos, flexíveis e mostraram-se anfifílicos com características físicas de fibras dispostas aleatoriamente e poros interconectados com diâmetro médio de 13,5?m e abertura com área média de 87,14µm2. As hDPSCs expressaram níveis típicos de marcadores de superfície de células-tronco mesenquimais. Não houve inibição de crescimento celular na interface com o biomaterial. As curvas de crescimento e viabilidade mostraram-se mais significativas (p<0.01), especialmente em 7 dias, para as culturas sobre os scaffolds em meio clonogênico. Resultados semelhantes foram observados com o meio mineralizante (p<0.05). Houve maior formação de nódulos de mineralização nas culturas com a presença dos scaffolds, ou seja, o biomaterial estimulou a diferenciação celular. Em microscopia eletrônica de varredura as células mostraram-se aderidas até o período de 7 dias com formação de lençóis sobre os scaffolds. A blenda de poli £-caprolactona/poli (rotaxano) apresentou biocompatibilidade in vitro, revelando aspectos promissores de serem funcionalizadas por células tronco derivadas de polpa dentária humana com potencial de uso como biomaterial bioativo para bioengenharia de tecido ósseo. / The search for a graft material that provides patient with rehabilitation with little damage and also suits maxillofacial surgeon needs has been incessant. Autogenous bone is still considered the gold standard for grafting because of its properties, although it has some disadvantages and the majority of its complications are associated with the donor site. Currently, bioengineering develops new materials and resources primarily for tissue regeneration area. In this context, scaffolds of natural or synthetic origin with the purpose of promoting tissue regeneration have been widely studied. The aim of this study was to evaluate in vitro biological behavior as viability, cell proliferation, adhesion and potential of stem cell differentiation of human dental pulp grown on scaffold samples composed of a new blend of poly £-caprolactone/poly(rotaxano). Dental pulp stem cells obtained from human molars (hDPSCs) were grown from frozen samples and re-characterized. Cells were seeded onto scaffolds samples or glass coverslips and cultured in different media: clonogenic, mineralizing and conditioned by the biomaterial extract per 1,3,7,14 and 21 days. Cells growth curves and viability, alkaline phosphatase activity, formation of mineralized nodules were assessed. Cell adhesion was observed by scanning electron microscopy up to 7 days cultures. Scaffolds were flat, flexible and proved to be amphiphilic with physical characteristics of randomly arranged fibers and pores interconnected with an average diameter of 13,5?m and aperture average area of 87,14µm2. The hDPSCs expressed typical levels of mesenchymal stem cell surface markers. There was no inhibition of cell growth at the biomaterial interface. The growth rates and viability were more significant (p <0.01), especially in 7 days, to cultures over scaffolds in clonogenic medium. Similar results were observed with the mineralizing medium (p <0.05). There formation of mineralized nodules was increased in the cultures in the presence of scaffolds, in other words, the biomaterial stimulated cell differentiation. In scanning electron microscopy the cells were shown to be attached until 7-day period with formation of sheets over the scaffolds. The blend of poly ?-caprolactone/poly(rotaxano) shows biocompatibility in vitro, revealing promising aspects to be functionalized by stem cells derived from human dental pulp with potential to be used as bioactive biomaterials for bone tissue bioengineering.

Objetivo: O objetivo do presente estudo foi avaliar morfologicamente os tecidos pulpar e periapical de molares de ratos com a polpa vital e expostos ao meio bucal durante o desenvolvimento radicular, além de detectar a localização do STRO-1 e do BMP4 nos mesmos. Métodos: Foram utilizados 24 ratos machos da linhagem Wistar com quatro semanas de idade. A fim de induzir a necrose, foi realizada a exposição pulpar dos primeiros molares inferiores esquerdos em condições não-assépticas e deixando a polpa exposta ao ambiente oral (grupo teste). Os molares inferiores do lado direito não sofreram intervenção e serviram como grupo controle. A eutanásia dos animais foi realizada nos tempos de 7, 10, 13 e 16 semanas de vida (o equivalente a 3, 6, 9 e 12 semanas após a intervenção). Após, as mandíbulas foram dissecadas e processadas para a análise histológica através de Hematoxilina-Eosina e Imunohistoquímica. Foram comparadas, entre os grupos, em cada um dos períodos, a reação inflamatória periapical, as características do tecido pulpar (células inflamatórias, vascularização, odontoblastos, degeneração, destruição tecidual), fechamento do forame e presença de reabsorções. Resultados: Todos os dentes do grupo teste apresentaram necrose pulpar e a interrupção do desenvolvimento radicular. Enquanto isso, os dentes do grupo controle apresentaram o desenvolvimento normal dos tecidos dentários. Quanto à imunohistoquímica, foi constatada a marcação pelo BMP-4 no tecido pulpar dos dentes do grupo controle. Não houve, no entanto, marcação nos dentes do grupo teste. Para o STRO-1, a marcação foi mais evidente na região dos vasos sanguíneos, tanto no grupo controle, quanto no grupo teste. Para nenhum dos anticorpos, foi constatada marcação na região da papila apical. Conclusão: No presente estudo, a técnica imunohistoquímica não foi suficiente para a avaliação da presença de células-tronco na região da papila de dentes com rizogênese incompleta e necrose pulpar. É possível que a presença de infecção e a reação inflamatória tenham bloqueado a expressão do STRO-1 e do BMP-4. / Objective: the aim of this study was to characterize the features of live and necrotic dental pulps of molar teeth in rats with developing roots, and to assess the expression of STRO-1 and BMP-4. Methods: twenty-four 4-month-old male Wistar rats were used. To induce necrosis, the pulps of the first lower left molars were exposed to the oral environment. The lower right molars served as the control non-operated group. Euthanasia of animals was carried out at 7, 10, 13 and 16 weeks and the jaws were dissected and processed for histological analysis by hematoxylin-eosin and immunohistochemistry. The periapical inflammatory reaction, the characteristics of the pulp tissue (inflammatory cells, vascularity, odontoblasts, degeneration, tissue destruction), closure of the foramen and presence of resorptions were described at each period. Results: all teeth from the test group presented pulp necrosis, occurring discontinuation of root development. Meanwhile, the teeth of the control group showed normal development of dental tissues. BMP-4-positive cells were detected in the pulp of teeth from the control group. However, there was no expression in teeth of the test group. For STRO-1, expression was more evident in the blood vessels, both for the control group and for the test group. Apical papilla evidenced no BMP-4 nor STRO-1 expression. Conclusion: Immunohistochemistry was not sufficient to evaluate the presence of stem cells in the apical papilla region of nonvital immature teeth. It is possible that the inflammatory process has blocked the expression of STRO-1 and BMP-4., Probably, infection has negatively modulated this expression.