Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 432438.pdf: 2038170 bytes, checksum: 505895940d1e38c8e3925441d22f197d (MD5) Previous issue date: 2011-03-29 / Vermes do g?nero Angiostrongylus s?o parasitos intra-arteriais em roedores. A. costaricensis vive no sistema mesent?rico, enquanto A. cantonensis habita as art?rias pulmonares de ratos. No homem, hospedeiro acidental destas parasitoses, elas causam a gastroenterite eosinof?lica e meningite devido ? migra??o de adultos jovens de A. cantonensis nos tecidos do sistema nervoso central. O exame parasitol?gico de fezes n?o pode ser utilizado para diagn?stico humano das angiostrongil?ases porque n?o s?o encontradas larvas nas fezes, o que torna importante o desenvolvimento de t?cnicas moleculares. Os m?todos de imunodiagn?stico empregando ant?genos brutos apresentam reatividade cruzada com outras parasitoses e tamb?m resultados falso-negativos. Com o objetivo de aprimorar o diagn?stico molecular das angiostrongil?ases, direcionamos os esfor?os na tentativa de reduzir a complexidade dos extratos de ant?genos a fim de encontrar prote?nas mais espec?ficas e sens?veis para o diagn?stico. Primeiramente foi testado o uso de ant?genos de A. cantonensis para o diagn?stico de A. costaricensis pela t?cnica de ELISA. A partir disso, ant?genos de tubo reprodutor (TR) de f?meas de A. cantonensis foram fracionados por diversas t?cnicas e sua reatividade a soros controle foi testada por Western blot (WB). Colunas de prote?na A foram incubadas com soro de pacientes infectados, por?m este fracionamento n?o teve sucesso. Foi realizado o fracionamento subcelular dos extratos TR e com a fra??o de ant?genos de membrana celular (F2) foi realizado o fracionamento por ponto isoel?trico. As fra??es de pH apresentaram reatividade espec?fica aos soros controle positivos quando submetidas ao WB, sugerindo que as prote?nas encontradas possam ser importantes alvos para o diagn?stico das angiostrongil?ases. A possibilidade de clonar as prote?nas de interesse para produ??o em grande escala, poder? constituir fonte permanente de ant?genos com redu??o do volume de trabalho e do emprego de animais no laborat?rio

Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2016-08-05T14:19:01Z No. of bitstreams: 1 2010 - Raquel Saucier Gomes.pdf: 7033294 bytes, checksum: d1538edd22d0ad5fcbf8c9c1e86f330e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-05T14:19:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010 - Raquel Saucier Gomes.pdf: 7033294 bytes, checksum: d1538edd22d0ad5fcbf8c9c1e86f330e (MD5) Previous issue date: 2010-02-09 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico, CNPq. / This study aimed to diagnose and characterize genetically the species and genotypes of Cryptosporidium in stool samples from poultry and exotic birds marketed in Rio de Janeiro involving possible risk factors for infection. We analyzed 180 poultry sold in local markets and 103 exotic birds from breeding and pet shops. For analysis, the DNA extracted from fecal sample suspension was used to amplify the 18S rDNA sequences by nested-PCR technique. The amplicons generated were subjected to RFLP using the enzymes SspI and VspI, and sequencing and phylogenetic analysis, to confirm the species. Different species of Cryptosporidium were indentified in faecal samples of poultry and exotic birds. In the analysis of sites of enzymatic cutting products of nested-PCR gene 18SR DNA, the species C. bailey was the only one that displayed a characteristic cut-off, but other samples were. The following species were diagnosed: C. baileyi (GU082387) infecting ducks (Anas platyrhynchus domesticus), C. parvum in quails (Coturnix japonica) (GU082384 and GU082386), chicks (Gallus gallus domesticus) (GU082390 and GU082391), duck (GU082388) and Manon (Lonchura striata domestica) (GU074390). The Avian genotype III was identified in caulker (Lonchura padda oryzivora) (GUO74384) and cockatiel (Nymphicus hollandicus) (GU074385, GU074386 and GU074387). The sequences of canaries (Serinus canarius) received access numbers GU074388 and GU074389, but it was not possible to identify the species of Cryptosporidium, because of the large genetic distance between them and those already deposited in GenBank, suggesting a new genotype or a new specie. Although C. baileyi and Avian genotype III are common in birds, the diagnosis of C. parvum is a worrying finding, since this species are more associated with mammals. Birds can be considered as reservoirs and disseminators of environmental infective form of the parasite, allowing the infection to a large number of species of hosts, including in the man in the epidemiological chain. / O presente trabalho teve por objetivo diagnosticar e caracterizar geneticamente esp?cies e/ou gen?tipos de Cryptosporidium em amostras fecais de aves dom?sticas e ex?ticas comercializadas no Estado do Rio de Janeiro, associando poss?veis fatores de risco da infec??o. Foram analisadas 180 aves dom?sticas comercializadas em mercados locais e 103 aves ex?ticas de criadouros e petshops. Para as an?lises, o DNA extra?do de suspens?o de amostra fecal foi utilizado na amplifica??o das seq??ncias do 18S rDNA atrav?s da t?cnica Nested-PCR. Os amplicons gerados foram submetidos ? RFLP, utilizando as enzimas SspI e VspI, e ao seq??nciamento, para a confirma??o das esp?cies. Foram identificadas esp?cies de Cryptosporidium em amostras fecais de aves dom?sticas e ex?ticas. Durante as an?lises dos s?tios de corte enzim?tico dos produtos da Nested-PCR do gene 18Sr DNA, a esp?cie C. baileyi foi a ?nica que apresentou padr?o de corte caracter?stico, por?m nas demais amostras foi necess?ria a confirma??o atrav?s do sequenciamento e estudo filogen?tico. Foi diagnosticado C. baileyi (GU082387) infectando patos (Anas platyrhynchus domesticus); C. parvum em codornas (Coturnix coturnix japonica) (GU082384 e GU082386), pintos (Gallus gallus domesticus) (GU082390 e GU082391), pato (GU082388) e manon (Lonchura striata domestica) (GU074390). O gen?tipo avi?rio III foi identificado pela primeira vez em calafate (Lonchura padda oryzivora) (GUO74384) e em calopsita (Nymphicus hollandicus) (GU074385, GU074386 e GU074387). As seq??ncias de can?rios (Serinus canarius) receberam os n?meros de acesso GU074388 e GU074389, por?m n?o foi poss?vel a identifica??o da esp?cie de Cryptosporidium, devido ? grande dist?ncia gen?tica entre elas e aquelas j? depositadas no GenBank, sugerindo novo gen?tipo ou uma nova esp?cie . Embora C. baileyi e o gen?tipo Avi?rio III sejam comuns em aves, o diagn?stico de C. parvum ? um achado preocupante, j? que esta esp?cie est? mais associada com mam?feros. Aves podem ser consideradas como reservat?rios e disseminadoras ambientais da forma infectante do protozo?rio, possibilitando a infec??o para um amplo n?mero de esp?cie de hospedeiros incluindo, nesta cadeia epidemiol?gica, o ser humano.

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2017-05-03T21:15:13Z No. of bitstreams: 1 2016 - Daniel Guimar?es Ubiali.pdf: 7253233 bytes, checksum: ce10a8e3d4ef67ad93a0034844382ed3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-03T21:15:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016 - Daniel Guimar?es Ubiali.pdf: 7253233 bytes, checksum: ce10a8e3d4ef67ad93a0034844382ed3 (MD5) Previous issue date: 2016-10-26 / CAPES / For investigation of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis infection 34 buffaloes properties or ranches in Northeastern Brazil were visited for paratuberculosis diagnosis. Investigations included herd evaluations, inspection of facilities and pastures, obtainment of flock history, clinical examination of suspicious animals and collecting samples for diagnosis. Samples were obtained from 26 farms or ranches, including two slaughterhouses and a quarantine area in six states. Approximately 15,600 buffalos, including males and females of the Murrah, Mediterranean and Jafarabadi breeds as well as their crossbreeds, were evaluated for meat, dairy and mixed properties with semi-intensive or extensive regimes. For diagnostic purposes, necropsies, histopathological and immunohistochemical exams and Ziehl-Neelsen tests of fecal smears and scraped intestinal mucosa were performed. Polymerase chain reaction (PCR) methods were applied to samples of feces, milk, mesenteric nodes and intestines. This exams allowed us to identify eigth new Johne?s disease outbreaks, which, together with those previously identified by our staff, allow us to infer that the disease is being dispersed in the Brazilian Northeast, similar to what is occurring with bovine herds in other areas of the country. The increase in the number of positive farms is a consequence of the ignorance of farmers, inadequate health management, free trade of ruminants and lack of a official control program in the country. This study alerts for risk of commercialization of dairy products for human consumption, reinforces the importance of research on paratuberculosis in Brazil and contributes to the understanding of the factors that work together to increase the number of paratuberculosis cases in the Brazilian Northeast. / Com o objetivo de identificar focos e estudar a epidemiologia e o diagn?stico da paratuberculose em b?falos na regi?o Nordeste do Brasil foram realizadas visitas e ou examinados material provenientes de 34 propriedades com suspeita cl?nica da doen?a. Obtivemos material biol?gico de sete estados da regi?o Nordeste do Brasil (Maranh?o, Cear?, Para?ba, Pernambuco, Alagoas e Bahia). Dos rebanhos foi obtido o hist?rico, realizou-se avalia??o cl?nica e inspe??o das instala??es e pastagens. Para a confirma??o do diagn?stico foi coletado material para exames laboratoriais em 26 propriedades ou cria??es de b?falos, entre estes, dois matadouros e um quarenten?rio. Foram rebanhos cujo somat?rios de b?falos era de aproximadamente 15.600 b?falos, das ra?as Murrah, Mediterr?neo, Jafarabadi e seus mesti?os, com aptid?o para corte, leite ou mista, em propriedades com regimes semi-intensivo, extensivo ou extrativista. Foram realizadas 22 necropsias e coleta de material para exames histopatol?gicos e imuno-histoqu?micos, al?m de colora??o de Ziehl-Neelsen em esfrega?os de fezes, raspados de mucosa intestinal e fragmentos de linfonodo mesent?rico e de intestino que apresentavam les?es sugestivas da doen?a. Para a realiza??o da rea??o em cadeia da polimerase (PCR) foram utilizadas amostras de fezes, leite, linfonodos mesent?ricos e intestinos. Estes exames permitiram identificar oito focos de paratuberculose, o que nos permite inferir que a doen?a est? se dispersando na regi?o Nordeste do Brasil a exemplo do que est? acontecendo em outras regi?es do pa?s com o rebanho bovino. O desconhecimento da doen?a, o manejo inadequado, o com?rcio n?o regulamentado de b?falos e a falta de um programa de controle voltado para a realidade da regi?o facilitam a dispers?o do agente e s?o fatores que contribuem para o aumento do n?mero de focos no pa?s. Os resultados desta pesquisa contribuem com a epidemiologia e o diagn?stico da doen?a em b?falos e auxilia na compreens?o dos fatores que colaboram para a ocorr?ncia crescente do n?mero de casos desta doen?a.

Submitted by Celso Magalhaes (celsomagalhaes@ufrrj.br) on 2017-10-19T13:49:16Z No. of bitstreams: 1 2016 - Claudia Bezerra da Silva.pdf: 8032175 bytes, checksum: ef71dd2a0e7801e9000e116c822a3a00 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-19T13:49:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016 - Claudia Bezerra da Silva.pdf: 8032175 bytes, checksum: ef71dd2a0e7801e9000e116c822a3a00 (MD5) Previous issue date: 2016-03-11 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / and investigate the circulation of this agent in dogs in the Itaguai microregion, Rio de Janeiro, Brazil, and dogs and ticks in two provinces of the island of Cuba, analyzing epidemiological aspects associated with infections caused by this bacterium in dogs. A new real-time polymerase chain reaction method (qPCR) was patterned to target the citrate synthase gene (gltA) for the identification of A. platys in naturally infected dogs. The primers and probe were designed to amplify a fragment of 84 base pairs based on gltA gene sequences of A. platys available in GenBank. 186 blood samples of dogs from Itaguai microregion, Rio de Janeiro, Brazil, were tested by qPCR. The same samples were tested by cytology and nested polymerase chain reaction (nPCR, 16S rDNA) to determine the performance of qPCR front of these techniques. 17.20% of the samples tested positive by qPCR were significantly more than that detected by nPCR (13.98%). The qPCR technique was more specific than cytology, due to false-positive results obtained by optical microscopy. The prevalence of A. platys in dogs from Itaguai microregion was 14.4%. Dogs less than six months, infested by ticks, that spend the most of the time restrict to domestic environment and without shelter are factors associated with infection by this hemoparasite in dogs in the study area. During research, A. platys held in Cuba, 100 blood samples were collected from residents dogs in four cities located in the provinces of Havana and Mayabeque. When inspecting the animals, found ticks were collected, identified and carefully grouped, forming a total of 49 pools. DNA extracted from blood samples from dogs and ticks were subjected nPCR (16S rDNA). Positive samples in nPCR were also subjected to conventional PCR (gltA gene), and the products were sequenced. Only the species Rhipicephalus sanguineus sensu lato was found in Cuban dogs and 10.2% (n=5/49) of these ticks added to 16.0% (n=16/100) dogs were considered positive for A. platys. All sequences analyzed of the gltA and 16S rDNA genes, respectively, showed a 99-100% identity with sequences from A. platys reported in other countries. Phylogenetic analysis showed two clusters defined for the 16S rDNA gene and three clusters defined for the gltA gene. Based on the gltA gene, the deduced amino acid sequence showed two points of non-synonymous mutations at positions 88 and 168 compared to the reference sequence DQ525687. A preliminary study on the epidemiological aspects associated with infection with A. platys showed no statistical association with the variables studied (p> 0.05). This study also to report the first evidence of A. platys in both dogs and ticks in Cuba also presents for the first time the development of a new qPCR method that contributes to the advancement of research involving A. platys. The epidemiological study in Brazil allowed us to identify significant factors in the occurrence of canine anaplasmosis, while in Cuba, it can be concluded that more research is needed to assess what the deciding factors in the transmission and spread of A. platys in that country. / platys, e investigar a circula??o deste agente em c?es na microrregi?o de Itagua?, Rio de Janeiro, Brasil, e c?es e carrapatos em duas prov?ncias da ilha de Cuba, analisando aspectos epidemiol?gicos associados ? infec??o causada por esta bact?ria em c?es. Um novo m?todo de rea??o em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) foi padronizado com alvo no gene citrato sintase (gltA) para a identifica??o de A. platys em c?es naturalmente infectados. Os oligoiniciadores e a sonda foram desenhados para amplificar um fragmento de 84 pares de base baseado em sequ?ncias do gene gltA de A. platys dispon?veis no GenBank. 186 amostras de sangue de c?es da microrregi?o de Itagua?, Rio de Janeiro, Brasil, foram testados pela qPCR. As mesmas amostras foram testadas pela citologia e rea??o em cadeia da polimerase nested (nPCR, 16S rDNA) para determinar o desempenho da qPCR frente ? essas t?cnicas. 17,20% das amostras testadas pela qPCR foram positivas, significativamente mais do que detectado pela nPCR (13,98%). A t?cnica de qPCR foi mais espec?fica que a citologia, em virtude dos resultados falsopositivos obtidos pela microscopia ?ptica. A preval?ncia de A. platys em c?es da microrregi?o de Itagua? foi de 14,4%. C?es com menos de seis meses, infestados por carrapatos, que possam maior tempo restrito ao ambiente dom?stico e sem abrigo s?o fatores associados a infec??o por este hemoparasito em c?es na regi?o do estudo. Durante investiga??o de A. platys realizada em Cuba, 100 amostras de sangue foram coletadas de c?es residentes em quatro cidades localizadas nas prov?ncias de Habana e Mayabeque. Ao inspecionar os animais, carrapatos encontrados foram coletados, identificados e criteriosamente agrupados, formando um total de 49 pools. Amostras de DNA extra?das do sangue dos c?es e de carrapatos foram submetidas a nPCR (16S rDNA). Amostras positivas na nPCR foram tamb?m submetidas a PCR convencional (gene gltA), e os produtos foram sequenciados. Somente a esp?cie Rhipicephalus sanguineus sensu lato foi encontrada em c?es cubanos, e 10,2% (n=5/49) desses carrapatos somado aos 16,0% (n=16/100) de c?es foram considerados positivos para A. platys. Todas as sequ?ncias analisadas dos genes gltA e 16S rDNA, respectivamente, mostraram uma identidade de 99-100% com sequ?ncias de A. platys reportadas em outros pa?ses. A an?lise filogen?tica mostrou dois clusters definidos para o gene 16S rDNA e tr?s clusters definidos para o gene gltA. Com base no gene gltA, a sequ?ncia de amino?cidos deduzidos demonstrou dois pontos de muta??es n?o-sin?nimas nas posi??es 88 e 168 comparados com sequ?ncia de refer?ncia DQ525687. Um estudo preliminar sobre os aspectos epidemiol?gicos associados com a infec??o por A. platys demonstrou nenhuma associa??o estat?stica com as vari?veis avaliadas (p > 0,05). O presente estudo al?m de relatar a primeira evid?ncia de A. platys em ambos c?es e carrapatos em Cuba, tamb?m apresenta pela primeira vez o desenvolvimento de um novo m?todo de qPCR que contribui para o avan?o da pesquisa envolvendo A. platys. O estudo epidemiol?gico realizado no Brasil permitiu identificar fatores importantes na ocorr?ncia da anaplasmose canina, enquanto em Cuba, pode-se concluir que mais investiga??es s?o necess?rias para avaliar quais os fatores decisivos na transmiss?o e dispers?o de A. platys nesse pa?s.