Orientadora : Profª. Drª. Aline de Marco Viott / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor Palotina, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. Defesa: Palotina, 06/08/2014 / Inclui referências / Área de concentração : Patologia animal / Resumo: A salmonelose tem sido o principal problema enfrentado na atividade avícola. Recentemente, tem sido observado a campo um aumento do isolamento da Salmonella enterica sorotipo Heidelberg. Esse trabalho testou o uso de uma vacina viva deletada para Salmonella Heidelberg e um probiótico contendo Bacillus subtilis, objetivando a diminuição da contaminação em aves, instalações e carcaças de frango de corte. As aves foram desafiadas experimentalmente com um inoculo contendo 6x107 UFC/ml de uma cepa selvagem de Salmonella Heidelberg e divididas em quatro tratamentos: controle (S); tratado com Bacillus subtillis (SP), tratado com vacina viva deletada (SV) e tratado com vacina e probiótico (SVP). A quantificação foi realizada através de suabe de arrasto da cama e pool de suabe de cloaca, ambos realizados aos 7,14,21,28,35,42 dias. Após o abate fragmentos de pele e peito foram coletados para avaliação qualitativa e quantitativa de Salmonella. O baço, fígado e coração foram coletados e submetidos a contagem e identificação de Salmonella. Fragmentos de jejuno foram processados para imunoistoquimica (IHQ) para contagem de linfócitos T na mucosa. Analise histológica foi realizada em amostras de fígado, baço, coração e intestino e as lesões quando presentes foram classificadas como ausentes, leve, moderada e acentuada. Cortes de jejuno foram submetidos a coloração de PAS para evidenciação e contagem das células caliciformes, e mensuração de criptas e vilosidades intestinais. A análise estatística foi feita através do teste de regressão das médias, que demonstrou variações significativas (P<0,05) no isolamento de Salmonella da cloaca, revelando uma redução linear da concentração bacteriana ao longo do experimento nos grupos SP, e SVP. Os grupos S e SV apresentaram um comportamento quadrático com inicio da redução da contagem na cloaca a partir dos dias 32,3 e 17,75 respectivamente. A contagem de colônias de Salmonella na maravalha nos grupos SV e SVP apresentou decréscimo significativo (P<0,05) ao longo do experimento. Os grupos S e SP apresentaram um comportamento quadrático com inicio da redução nos dias 20,9 e 18,4 respectivamente. Todos os tratamentos apresentaram redução significativa na contagem bacteriana na carcaça quando comparados ao grupo controle, mas não diferiram entre si estatisticamente. Nas amostras de vísceras não houve crescimento bacteriano. As vilosidades que tiveram as maiores mensurações foram as do grupo S e SP e o grupo SVP apresentou o pior resultado para altura de vilosidade. O grupo S apresentou a maior profundidade de cripta e o tratamento SV estatisticamente a pior, porem a relação vilo cripta foi maior nesse grupo. Na IHQ todos os tratamentos tiveram resultados superiores em relação ao grupo S na contagem de linfócitos T. Não foram observadas lesões microscópicas nas amostras de jejuno, ceco e vísceras analisadas. Os tratamentos utilizados promoveram uma redução na contagem de Salmonella nas amostras, e aumento na contagem de linfócitos T, indicando que essas ferramentas podem ser um importante aliado no controle da enfermidade. Em relação à integridade intestinal a vacina obteve o melhor resultado em relação vilo/cripta. Palavras chave: Controle, Heildelberg, imunoistoquimica, isolamento, morfometria, quantificação bacteriana, Salmonella / Salmonellosis is the main problem in the poultry activity. Recently an increase of Salmonella enterica serovar Heidelberg isolation in the field has been observed. This study tested the use of deleted live vaccine for Salmonella Heidelberg and a probiotic containing Bacillus subtilis in order to decrease the contamination in chickens, avian installations and carcasses of broiler chickens. The birds were experimentally challenged with an inoculum containing 6x107 CFU / mL of a wild strain of Salmonella Heidelberg and divided into four treatments: control (S); treated with Bacillus subtilis (SP), treated with deleted live vaccine (SV) and treated with vaccine and probiotic (SVP). Quantification was performed by drag swabs and cloacal swab pool, both performed at 7,14,21,28,35,42 days. After slaughter fragments of breast skin were collected for qualitative and quantitative analysis of Salmonella. Parts of spleen, liver and heart were collected and subjected to Salmonella isolation and counting. Fragments of jejunum were processed for immunohistochemistry (IHC) for counting T lymphocytes in the mucosa. Histological analyzes were performed on samples of liver, spleen, heart and intestine and lesions when present were classified as absent, mild, moderate and severe. Sections of jejunum were stain with PAS for goblet cell count, and measurement of intestinal villi and crypts. Statistical analysis was performed using the regression toward the means, which showed significant variations (P <0.05) in the isolation of Salmonella from the cloaca. There were a linear reduction in bacterial concentration throughout the experiment in groups SP and SVP test. The S and SV groups showed a quadratic behavior with reduction in the cloaca counting at experimental days 32.3 and 17.75, respectively. The colony count of Salmonella on poultry manure in SV and SVP groups showed significant decrease (P <0.05) throughout the experiment. The S and SP groups showed a quadratic behavior with early reduction in days 20.9 and 18.4 respectively. Statistical analyzes were performed using regression of which showed significant variations (P <0.05) in the isolation of Salmonella from cloaca, revealing a decrease in bacterial concentration throughout the experiment in groups SP, SV and SVP. The colony count of Salmonella in shavings in all groups showed significant decrease (P <0.05) throughout the experiment. All treatments showed significant reduction in bacterial counts in the carcass compared to the control group but didn’t differ statistically. There wasn’t bacterial growth in viscera samples. The villi that had the highest measurements were those of S and SP group and SVP group showed the worst result for villus height. The S group showed larger crypt depth and treatment SV statistically the worst; however, villous crypt ratio was higher in this group. At IHC all treatments had superior results compared to the S group in the count of T lymphocytes. No microscopic lesions were observed in samples of jejunum, cecum and viscera analyzed. The treatments promoted a reduction in the count of Salmonella in samples, and increased number of T lymphocytes. These results indicate that these tools can be important controlling the disease. In the evaluations of intestinal integrity, vaccine achieved the best results in villus / crypt ratio. Key Word: Control, Heildelberg, immunohistochemistry, isolation, morphometry, bacterial quantification, Salmonella

Platynosomum fastosum (sin. P. illiciens, P. concinnum) is a digenean trematode of the family Dicrocoeliidae, that inhabits biliary tract of domestic and wild cats, whose infection goes from assymptomatic to letal. The prevalence of this trematode varies from 15 to 85% in tropical countries. In Brazil, available data is limited to case reports and few local epidemiological surveys. In CearÃ, it was never performed an epidemiological survey, but a case report was recently published. The objective of this study was to calculate the prevalence of the P. fastosum infection, characterizing the main lesions associated to its pathogenesis, in free roaming cats in the municipality of MaracanaÃ, CearÃ. It was performed an epidemiological pathological analitical cross-sectional survey about the P. fastosum infection in a sample of cats, received or captured by the Zoonosis Control Office of MaracanaÃ, between May/2014 and May/2015. This study was approved by the Animal Ethics ComitÃe of UFC (#40/2014). In a probabilist sample, 141 screened cats were euthanized by approved injection (CFMV, 2012) and submitted to necropsy. Livers and gallbladders were collected to recover trematodes and perform histopathology. Observed prevalence was 42,5% (60/141, IC95%=34,2 â 50,9). Fluke burden varied from 1 to 219. It was observed no difference in prevalence between males and females (p>0,05), but the adults were more frequently infected than the young ones (p<0,00001). Risk of cholangitis was at least three fold greater in infected ones (RP=3,23; IC95%=2,01-5,07; p<0,00001). Mononuclear infiltrates were the most frequent and significant findings, and the choledoco was the most affected site. Fibrosis, inflammation, glandular and mucosae hyperplasias were significantly different in choledocos of infected ones (p<0,01). Microscopic lesions considered precursors of cholangiocarcinoma were detected but no tumor was diagnosed. In summary, P. fastosum is present in the municipality of MaracanaÃ, CearÃ, in moderated prevalence, in free roaming cats. Control propositions should be designed by multidisciplinar teams, evaluating sanitary and ecological aspects. / A espÃcie Platynosomum fastosum (sin. P. illiciens, P. concinnum), digenÃtico da famÃlia Dicrocoeliidae, à um trematÃdeo do trato biliar de gatos domÃsticos e silvestres, cuja infecÃÃo varia de assintomÃtica à letal. A prevalÃncia da infecÃÃo pelo trematÃdeo varia entre 15 e 85% em paÃses tropicais. No Brasil, os dados se limitam a relatos de caso e a alguns inquÃritos epidemiolÃgicos locais. No CearÃ, nÃo existem estudos de prevalÃncia sobre esse trematÃdeo, mas recentemente um relato de caso foi publicado. O objetivo deste trabalho foi conhecer a prevalÃncia da infecÃÃo de P. fastosum, caracterizando as principais lesÃes associadas à sua patogÃnese, em gatos nÃo domiciliados do municÃpio de MaracanaÃ, CearÃ. Foi realizado um estudo epidemio-patolÃgico, transversal e analÃtico, sobre a infecÃÃo de P. fastosum em uma amostra de gatos (Felis catus) capturados pelo Centro de Controle de Zoonoses da cidade de MaracanaÃ, durante o perÃodo de Maio/2014 a Maio/2015. Este estudo foi aprovado pelo Comità de Ãtica em Pesquisa Animal da UFC, sob o n 40/2014. Conforme cÃlculo amostral e apÃs triagem, 141 gatos foram submetidos à eutanÃsia por mÃtodos Ãticos (CFMV, 2012) e submetidos à necrÃpsia. Foram colhidos o fÃgado e a vesÃcula biliar para recuperaÃÃo de trematÃdeos e anÃlise histopatolÃgica. A prevalÃncia observada foi de 42,5% (60/141, IC95% = 34,2 â 50,9). A carga parasitÃria recuperada variou de 1 a 219. NÃo houve diferenÃa de prevalÃncia entre machos e fÃmeas (p>0,05), mas os adultos foram mais infectados do que os jovens (p<0,00001). O risco de colangites foi trÃs vezes maior nos infectados (RP=3,23; IC95%=2,01-5,07; p<0,00001). Os infiltrados mononucleares foram os achados mais frequentes e significativos, e o colÃdoco foi o ÃrgÃo mais afetado. Foram detectadas 43,1% (25/58) de colangites crÃnicas nos infectados. Fibrose, inflamaÃÃo, hiperplasias glandular e mucosa tiveram diferenÃa significativa no colÃdoco de animais infectados (p<0,01). LesÃes microscÃpicas consideradas precursoras de colangiocarcinoma foram detectadas, mas nenhum tumor foi diagnosticado. Desta forma, observou-se que P. fastosum ocorre em prevalÃncia moderada em gatos nÃo domiciliados de MaracanaÃ, CearÃ. Plano de controle da infecÃÃo deve ser estruturado por equipe multidisciplinar, avaliando aspectos sanitÃrios e ecolÃgicos.

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2016-10-26T18:07:29Z No. of bitstreams: 1 2015 - Ileana Costa Miranda.pdf: 4377950 bytes, checksum: 0fd81889ff042fdd5ef81568986b1e7a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-26T18:07:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015 - Ileana Costa Miranda.pdf: 4377950 bytes, checksum: 0fd81889ff042fdd5ef81568986b1e7a (MD5) Previous issue date: 2015-12-15 / CAPES / Animals grazing Brachiaria spp commonly present foamy macrophages isolated or grouped in the liver, and crystals within biliary ducts. The pathogenesis of formation and the nature of the material stored on these cells, however, are not completely known. Through lectin histochemistry evaluation, steroidal saponins (secondary glycosylated metabolites) have been identified in the crystals and within the cytoplasm of the foam cells, which are probably liable for damage the liver leading to accumulation of phylloerythrin. This study aims to standardize the use of lectin histochemistry to detect glycosylated metabolites in tissues of buffaloes kept in different Brachiaria spp pastures in Brazil. Fragments of liver and mesenteric lymph node from 40 animals were analyzed: 10 buffaloes that were kept in predominant pasture of B. decumbens for 12 months; 10 buffaloes that were kept in pasture with a predominance of B. brizantha for 18 months; 10 buffaloes that were kept in pasture of B. brizantha for approximately four years; and, as a negative control, 10 buffaloes that were maintained in native pasture without Brachiaria spp since birth. Fourteen lectins were tested (Con-A, SBA, WGA, DBA, UEA, RCA, PNA, GSL-I, PSA, LCA, PHA-E, PHA-L, SJA and SWGA), in a total of 1120 evaluated fragments. Previous studies demonstrated that PNA showed great binding reactivity for foamy macrophages in bovine and ovine. In the present study, SWGA presented high specificity and marked binding reactivity for foamy macrophages; WGA, GSL, PHA-E and PHA-L showed moderate to marked reactivity but low specificity for foamy macrophages; the other lectins didn't show significant reactivity or specificity. It remains unclear why there is this difference in lectins binding reactivity to foamy macrophages; it is suggested that divergences may occur depending on the species of Brachiaria ingested, the plant growth stage, the type and proportion of saponins stored in the plant due to seasonality, the differences in the metabolism of animal species, the presence of photosensitivity, the clinical course of the disease and the plant intake time. Moreover, there was no significant reactivity difference between the collected fragments of animals that grazed in B. decumbens for 12 months and B. brizantha for 18 months. However, the decreased presence of foamy macrophages and its lectin histochemical binding in animals that fed on B. brizantha for a longer time indicates that the animals can pass through an adaptation process according to the the plant intake time. Lectin histochemistry analysis can be used to characterize the material stored in foamy macrophages present in liver and mesenteric lymph node of buffaloes that graze in Brachiaria spp pastures and helps to clarify the pathogenesis of these cells. / Animais que se alimentam em pastos de Brachiaria spp comumente apresentam macr?fagos espumosos isolados ou agrupados no f?gado, al?m de cristais no interior de ductos biliares. A patog?nese da forma??o e a natureza do material armazenado nestas c?lulas, contudo, ainda n?o s?o completamente conhecidas. Atrav?s da avalia??o lectino-histoqu?mica, saponinas esteroidais (metab?litos glicosilados secund?rios) t?m sido identificadas nos cristais e no citoplasma das c?lulas espumosas, que provavelmente s?o respons?veis por danificar o f?gado e levar ao ac?mulo de filoeritrina. Por meio deste trabalho, objetivou-se padronizar e caracterizar a utiliza??o da lectino-histoqu?mica na detec??o de metab?litos glicosilados nos tecidos de b?falos mantidos em diferentes pastos de Brachiaria spp no Brasil. Fragmentos de f?gado e linfonodo mesent?rico de 40 animais foram analisados: 10 b?falos mantidos em pastagem predominante de B. decumbens por aproximadamente 12 meses; 10 b?falos mantidos em pastagem predominante de B. brizantha por aproximadamente 18 meses; 10 b?falos mantidos em pastagem de B. brizantha por aproximadamente quatro anos; e, como controle negativo, 10 b?falos mantidos em pastagem livre de Brachiaria spp desde o nascimento. Quatorze lectinas foram testadas (Con-A, SBA, WGA, DBA, UEA, RCA, PNA, GSL-I, PSA, LCA, PHA-E, PHA-L, SJA e SWGA), em um total de 1120 fragmentos avaliados. Estudos anteriores demonstraram que a lectina PNA possui marcada reatividade para macr?fagos espumosos de bovinos e ovinos. No presente estudo, a lectina SWGA apresentou acentuada reatividade e alta especificidade para macr?fagos espumosos; WGA, GSL, PHA-E e PHA-L mostraram moderada a acentuada reatividade, mas baixa especificidade aos macr?fagos espumosos; as outras lectinas n?o apresentaram reatividade ou especificidade significativas. Ainda n?o se sabe exatamente a que atribuir a diferen?a de reatividade aos macr?fagos espumosos. Sugere-se que diverg?ncias ocorram em fun??o da esp?cie de Brachiaria ingerida, da fase de crescimento da planta, do tipo e propor??o dos glicoconjugados armazenados na planta em decorr?ncia da ?poca do ano, das diferen?as no metabolismo da esp?cie do animal em quest?o, da presen?a de fotossensibiliza??o, da evolu??o cl?nica da doen?a e do tempo de ingest?o da planta. N?o houve diferen?a de marca??o significativa entre os fragmentos coletados de animais que se alimentaram de B. decumbens por 12 meses e B. brizantha por 18 meses. Por?m, a diminui??o da presen?a e marca??o lectino-histoqu?mica dos macr?fagos espumosos nos tecidos dos b?falos que ingeriram B. brizantha durante mais tempo indica que os animais podem passar por um processo de adapta??o de acordo com o tempo de ingest?o da planta. A avalia??o lectino-histoqu?mica pode ser utilizada para caracterizar o material armazenado em macr?fagos espumosos presentes no f?gado e linfonodo mesent?rico de b?falos que se alimentam em pastagens de Brachiaria spp e ajuda na compreens?o da patog?nese de forma??o destas c?lulas.

A Sida carpinifolia tem como substância ativa tóxica o alcalóide indolizidínico 1,2,8-triol, também chamado de swainsonina. Este alcalóide age inibindo por competição a enzima α-manosidase do lisossomo e a enzima α-manosidase II do aparelho de Golgi. Essa inibição resulta em uma degradação deficiente dos oligossacarídeos, causando seu acúmulo no interior da célula que leva a vacuolização e morte. Para este estudo foram utilizados sete ovinos que receberam Sida carpinifolia secada à sombra e moída. Um animal morreu sem apresentar sinais clínicos, aos 18 dias do início do experimento, e foi necropsiado. Outros cinco animais foram eutanasiados e necropsiados aos 30, 45, 53, 75 e 100 dias. A fim de se verificarem as regressões dos sinais clínicos e lesões microscópicas, um ovino teve a Sida carpinifolia retirada da sua dieta ao 80º dia do experimento e foi eutanasiado e necropsiado aos 150 dias após o início do experimento. A quantidade mínima consumida voluntariamente da planta seca foi de 11,19 g/kg/dia e a quantidade máxima foi de 30,31 g/kg/dia. O quadro clínico e evolução da doença foi semelhante em todos os casos, observando-se diarréia em torno dos 20 dias do experimento. A partir dos 25 dias os ovinos apresentaram sinais clínicos neurológicos caracterizados por ataxia com hipermetria e dismetria, tremores da cabeça, reações posturais atípicas, quedas freqüentes, lentidão dos movimentos, dificuldade em apreender e deglutir os alimentos. Esses sinais clínicos se acentuavam quando os animais eram manuseados. Em quatro animais foi observada emaciação progressiva. Na necropsia foi observado apenas aumento de volume dos linfonodos mesentéricos. Na microscopia foram observadas alterações mais significativas no sistema nervoso central, caracterizando-se por distensão e vacuolização citoplasmática múltipla e acentuada, afetando principalmente as células de Purkinje do cerebelo, os neurônios do córtex cerebral, do tálamo, do mesencéfalo e dos cornos ventrais da medula espinhal. Também foram observados esferóides axonais no encéfalo e mais freqüentes na camada granular do cerebelo. A vacuolização citoplasmática característica foi observada também no epitélio dos ácinos pancreáticos e dos túbulos renais e, ainda, nas células foliculares da tireóide, nos hepatócitos e macrófagos de órgãos linfóides. As lesões ultra-estruturais observadas foram vacuolizações citoplasmáticas algumas envoltas por membranas em neurônios de Purkinje do cerebelo e nas células foliculares da tireóide. O ovino que permaneceu 70 dias sem consumir Sida carpinifolia não apresentou alterações significativas. Na microscopia eletrônica apresentava apenas dilatação do retículo endoplasmático rugoso das células de Purkinje do cerebelo. Na histoquímica das lectinas, os vacúolos nas células de Purkinje do cerebelo reagiram fortemente com a Concanavalia ensiformis, Triticum vulgaris e Triticum vulgaris succinilado. O padrão obtido neste estudo é similar ao encontrado em ovinos naturalmente intoxicados por Sida carpinifolia.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-12-15T13:55:31Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2791905 bytes, checksum: 2d2f70d34d0c7441ea3eddfe80eafd1b (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-15T13:55:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2791905 bytes, checksum: 2d2f70d34d0c7441ea3eddfe80eafd1b (MD5) Previous issue date: 2009-02-18 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A proteína do capsídeo do circovirus suíno 2 (PCV2), codificada pela ORF2, é uma proteína estrutural, sendo altamente imunogênica. Anti-soro produzido a partir dessa proteína recombinante purificada, em coelhos, poderá apresentar as mesmas propriedades daquele produzido a partir de partículas virais purificadas e ser de relevância como ferramenta diagnóstica. O objeto do presente estudo foi padronizar uma técnica de imunoistoquímica, a partir da produção de um soro hiperimune anti-PCV2 em coelhos, utilizando como antígeno a proteína recombinante purificada do capsídeo do PCV2 (Cap PCV2). A proteína foi expressada em Escherichia coli BL21 e purificada por cromatografia de afinidade. Inoculações desta proteína foram realizadas em coelhos e os soros foram colhidos para avaliações por Western blotting, ELISA, imunocitoquímica e imunoistoquímica. Obteve-se sucesso na purificação da proteína recombinante e na produção do soro hiperimune em coelhos. A afinidade de ligação do anticorpo produzido ao antígeno (proteína recombinante) foi demonstrada pela técnica de Western blotting e ELISA e foi considerada eficiente e sensível. As técnicas de imunocitoquímica e imunoistoquímica apresentaram resultados considerados satisfatórios. O anticorpo produzido contra a proteína codificada pela ORF2 mostrou ter boa afinidade de ligação, podendo ser empregado como ferramenta diagnóstica. / The porcine circovirus 2 (PCV2) capsid protein, encoded by ORF2, is a structural protein and highly immunogenic. An antiserum produced from the purified recombinant protein in rabbits, may present the same properties as that produced from purified viral particles and may be of relevance as a diagnostic tool. The aim of this study was the immunohistochemistry technique standardartization from the production of an anti-PCV2 hyperimmune serum in rabbits using as antigen the purified recombinant protein from the capsidal of PCV2 (Cap PCV2). The protein was expressed in BL21 Escherichia coli and purified by affinity chromatography. Inoculations of this protein were performed in rabbits and the sera were collected for evaluation by Western blotting, ELISA, immunocytochemistry and immunohistochemistry. The recombinant protein purification and hyperimmune serum production in rabbits was achieved successfully. The antibody-binding affinity to the antigen (recombinant protein) was demonstrated by Western blotting and ELISA techniques and were considered efficient and sensitive. The immunocytochemistry and immunohistochemistry techniques results were considered satisfactory. The antibody produced against the protein encoded by ORF2 showed can be used as a diagnostic tool.

A Sida carpinifolia tem como substância ativa tóxica o alcalóide indolizidínico 1,2,8-triol, também chamado de swainsonina. Este alcalóide age inibindo por competição a enzima α-manosidase do lisossomo e a enzima α-manosidase II do aparelho de Golgi. Essa inibição resulta em uma degradação deficiente dos oligossacarídeos, causando seu acúmulo no interior da célula que leva a vacuolização e morte. Para este estudo foram utilizados sete ovinos que receberam Sida carpinifolia secada à sombra e moída. Um animal morreu sem apresentar sinais clínicos, aos 18 dias do início do experimento, e foi necropsiado. Outros cinco animais foram eutanasiados e necropsiados aos 30, 45, 53, 75 e 100 dias. A fim de se verificarem as regressões dos sinais clínicos e lesões microscópicas, um ovino teve a Sida carpinifolia retirada da sua dieta ao 80º dia do experimento e foi eutanasiado e necropsiado aos 150 dias após o início do experimento. A quantidade mínima consumida voluntariamente da planta seca foi de 11,19 g/kg/dia e a quantidade máxima foi de 30,31 g/kg/dia. O quadro clínico e evolução da doença foi semelhante em todos os casos, observando-se diarréia em torno dos 20 dias do experimento. A partir dos 25 dias os ovinos apresentaram sinais clínicos neurológicos caracterizados por ataxia com hipermetria e dismetria, tremores da cabeça, reações posturais atípicas, quedas freqüentes, lentidão dos movimentos, dificuldade em apreender e deglutir os alimentos. Esses sinais clínicos se acentuavam quando os animais eram manuseados. Em quatro animais foi observada emaciação progressiva. Na necropsia foi observado apenas aumento de volume dos linfonodos mesentéricos. Na microscopia foram observadas alterações mais significativas no sistema nervoso central, caracterizando-se por distensão e vacuolização citoplasmática múltipla e acentuada, afetando principalmente as células de Purkinje do cerebelo, os neurônios do córtex cerebral, do tálamo, do mesencéfalo e dos cornos ventrais da medula espinhal. Também foram observados esferóides axonais no encéfalo e mais freqüentes na camada granular do cerebelo. A vacuolização citoplasmática característica foi observada também no epitélio dos ácinos pancreáticos e dos túbulos renais e, ainda, nas células foliculares da tireóide, nos hepatócitos e macrófagos de órgãos linfóides. As lesões ultra-estruturais observadas foram vacuolizações citoplasmáticas algumas envoltas por membranas em neurônios de Purkinje do cerebelo e nas células foliculares da tireóide. O ovino que permaneceu 70 dias sem consumir Sida carpinifolia não apresentou alterações significativas. Na microscopia eletrônica apresentava apenas dilatação do retículo endoplasmático rugoso das células de Purkinje do cerebelo. Na histoquímica das lectinas, os vacúolos nas células de Purkinje do cerebelo reagiram fortemente com a Concanavalia ensiformis, Triticum vulgaris e Triticum vulgaris succinilado. O padrão obtido neste estudo é similar ao encontrado em ovinos naturalmente intoxicados por Sida carpinifolia.

A Sida carpinifolia tem como substância ativa tóxica o alcalóide indolizidínico 1,2,8-triol, também chamado de swainsonina. Este alcalóide age inibindo por competição a enzima α-manosidase do lisossomo e a enzima α-manosidase II do aparelho de Golgi. Essa inibição resulta em uma degradação deficiente dos oligossacarídeos, causando seu acúmulo no interior da célula que leva a vacuolização e morte. Para este estudo foram utilizados sete ovinos que receberam Sida carpinifolia secada à sombra e moída. Um animal morreu sem apresentar sinais clínicos, aos 18 dias do início do experimento, e foi necropsiado. Outros cinco animais foram eutanasiados e necropsiados aos 30, 45, 53, 75 e 100 dias. A fim de se verificarem as regressões dos sinais clínicos e lesões microscópicas, um ovino teve a Sida carpinifolia retirada da sua dieta ao 80º dia do experimento e foi eutanasiado e necropsiado aos 150 dias após o início do experimento. A quantidade mínima consumida voluntariamente da planta seca foi de 11,19 g/kg/dia e a quantidade máxima foi de 30,31 g/kg/dia. O quadro clínico e evolução da doença foi semelhante em todos os casos, observando-se diarréia em torno dos 20 dias do experimento. A partir dos 25 dias os ovinos apresentaram sinais clínicos neurológicos caracterizados por ataxia com hipermetria e dismetria, tremores da cabeça, reações posturais atípicas, quedas freqüentes, lentidão dos movimentos, dificuldade em apreender e deglutir os alimentos. Esses sinais clínicos se acentuavam quando os animais eram manuseados. Em quatro animais foi observada emaciação progressiva. Na necropsia foi observado apenas aumento de volume dos linfonodos mesentéricos. Na microscopia foram observadas alterações mais significativas no sistema nervoso central, caracterizando-se por distensão e vacuolização citoplasmática múltipla e acentuada, afetando principalmente as células de Purkinje do cerebelo, os neurônios do córtex cerebral, do tálamo, do mesencéfalo e dos cornos ventrais da medula espinhal. Também foram observados esferóides axonais no encéfalo e mais freqüentes na camada granular do cerebelo. A vacuolização citoplasmática característica foi observada também no epitélio dos ácinos pancreáticos e dos túbulos renais e, ainda, nas células foliculares da tireóide, nos hepatócitos e macrófagos de órgãos linfóides. As lesões ultra-estruturais observadas foram vacuolizações citoplasmáticas algumas envoltas por membranas em neurônios de Purkinje do cerebelo e nas células foliculares da tireóide. O ovino que permaneceu 70 dias sem consumir Sida carpinifolia não apresentou alterações significativas. Na microscopia eletrônica apresentava apenas dilatação do retículo endoplasmático rugoso das células de Purkinje do cerebelo. Na histoquímica das lectinas, os vacúolos nas células de Purkinje do cerebelo reagiram fortemente com a Concanavalia ensiformis, Triticum vulgaris e Triticum vulgaris succinilado. O padrão obtido neste estudo é similar ao encontrado em ovinos naturalmente intoxicados por Sida carpinifolia.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-11-17T15:31:33Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1790744 bytes, checksum: f9ee2408e0dc25bc8460ac7a1ac69566 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-17T15:31:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1790744 bytes, checksum: f9ee2408e0dc25bc8460ac7a1ac69566 (MD5) Previous issue date: 2015-02-20 / O carcinoma de células escamosas (CCE) é uma neoplasia epitelial maligna que acomete cães e diversas outras espécies, incluindo a humana. O CCE afeta vários sítios anatômicos e pode desenvolver metástase. Este trabalho teve como objetivo proporcionar informações sobre fatores de risco, manifestação clínica, diagnóstico, tratamento e prognóstico, assim como a caracterização das fibras colágenas tipo I e III no estroma de CCE cutâneo em cães. Este estudo utilizou 44 amostras de pele incluídas em parafina, provenientes de dois serviços de diagnóstico em patologia veterinária, com prévio diagnóstico de CCE cutâneo. As amostras foram avaliadas histologicamente utilizando coloração de hematoxilina e eosina para classificação segundo o grau de diferenciação tumoral e, por Picrosirius Red sob luz polarizada para quantificação da expressão de colágenos tipos I e III. O colágeno tipo III mostrou maior expressão nos CCE cutâneos bem diferenciados, porém, isto só foi evidente quando as amostras foram classificadas em apenas dois graus de diferenciação: bem diferenciadas ou pouco diferenciadas. Considerando a distribuição dos tipos de colágeno segundo a região do corpo, o colágeno tipo I não apresentou diferença estatística entre cabeça, tronco e membros. Entretanto, para o colágeno do tipo III, a análise revelou que a quantidade expressa no tronco é significativamente maior que no membro. O papel do colágeno do tipo III nas neoplasias não está bem esclarecido e outros fatores além do grau de diferenciação celular podem estar envolvidos em sua expressão e determinar sua importância na biologia tumoral. / Squamous cell carcinoma (SCC) is a malignant epithelial tumor that affects dogs and several other species, including human. The SCC occurs in various anatomical sites and can develop metastasis. This study aimed to provide information about risk factors, clinical presentation, diagnosis, treatment and prognosis, as well as the characterization of collagen type I and III in SCC stroma in dogs. This study used 44 canine skin biopsies paraffin-embedded previously diagnosed with cutaneous SCC from two veterinary pathology diagnostic services. The samples were evaluated histologically with hematoxylin and eosin staining to evaluate the degree of cell differentiation, and with Sirius Red staining under polarized light to quantify the expression of collagen types I and III. Type III collagen expression was higher in well-differentiated SCC, however, it was only evident when samples were classified into only two degrees of differentiation: well differentiated or poorly differentiated. Considering the distribution of collagen types according to body region, type I collagen showed no statistical difference between head, trunk and limbs. However, for type III collagen, the analysis showed that the quantity expressed in the trunk is significantly larger than the member. The role of type III collagen in cancer is not very clear and factors other than cell differentiation degree may be involved in its expression and determine its importance in tumor biology.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1442239 bytes, checksum: 5f0041bc266aa2b219384708dc4dd876 (MD5) Previous issue date: 2012-11-20 / In response to an infection, blood cells such as neutrophils produce defensins within minutes to two hours to aid pathogens lysis and stimulate chemotaxis, reaching peak levels in the body in 24 hours. These peptides can also be produced without any stimulus by epithelial cells of the integumentary system. The aim of this work was to study the expression of &#946;-defensins (cBD102 and cBD103) of canine skin diagnosed with canine visceral leishmaniasis (CVL). There were selected 43 skin samples from dogs positive to CVL and healthy, they were included in paraffin blocks and divided into three groups: I desquamative dermatitis (DD) with 16 blocks, II ulcerative dermatitis (UD) 21 blocks and the control group (6 blocks without canine skin problems). It was used the indirect immunoperoxidase technique (IIP) to confirm the LVC diagnosis and the identification of &#946;-defensins, using human primary antibodies (hBD-2 and hBD-3, SIGMA®). The experimental delineation was completely casualized, with a confidence level of 0.95. Note that there was difference (p = 0.03) in the immunostaining intensity between groups, showing higher marcation intensity with cBD102 and cBD103 in the epidermis of the control group compared with DD and DU groups. In the dermis there was difference (p = 0.001) of the two &#946;-defensins studied, being the cBD103 expression higher than the cBD102. This study is the first one relating to the immunological interaction of the extension and intensity expression between the &#946;-defensin cBD102 and cBD103 and canine visceral leishmaniasis in the DD and DU dermatological standards, assessed by immunohistochemistry. / Em resposta a uma infeção as defensinas são produzidas em questão de minutos ou até 2 horas por células sanguíneas como neutrófilos, para auxiliar a lise de patógenos e estimular a quimiotaxia, alcançando níveis máximos no organismo em 24 horas. Também estes peptídeos podem ser produzidos sem estimulo algum pelas células epiteliais do sistema tegumentário. Com base no exposto anteriormente, o objetivo deste trabalho foi estudar a expressão de &#946;-defensinas (cBD102 e cBD103) de pele de cães diagnosticados com leishmaniose visceral canina (LVC). Para tal, foram selecionados 43 amostras de pele entre cães acometidos por LVC e sadios incluídas em blocos de parafina, distribuídos em 3 grupos: I com dermatite descamativa (DD) por 16 blocos, II dermatite ulcerativa (DU) 21 blocos e o grupo controle (6 blocos de cães sem problemas dermatológicos). Foi empregada a técnica de imunoperoxidase indireta (IPI) para a confirmação do diagnóstico de LVC e identificação de &#946;-defensinas, usando os anticorpos primários humanos (hBD102 e hBD103, SIGMA®). O delineamento foi inteiramente casualizado, adotando 0,05% de probabilidade para o erro Tipo I. Nota-se que houve diferença (p=0,003) na intensidade da imunomarcação entre os grupos, observando-se maior intensidade de marcação da cBD102 e cBD103 no grupo controle quando comparados com os grupos DD e DU. Na derme houve diferença (p=0,001) entre a expressão das duas &#946;-defensinas estudadas, sendo a expressão de cBD103 superior a de cBD102. O presente estudo é o primeiro referente à interação imunológica da expressão de extensão e intensidade entre a &#946;-defensina cBD102 e cBD103 e a leishmaniose visceral canina, nos padrões dermatológicos DD e DU, avaliados pela técnica de imunoistoquímica.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1204854 bytes, checksum: 3444b450baa838c9ffdcfffb1cfd08bd (MD5) Previous issue date: 2013-07-05 / Some drugs, such as doxorubicin, among other mechanisms act by triggering apoptosis, which not only affects the tumor but also normal cells in the body. Therefore, the study of the side effects of chemotherapy, seeking a less aggressive treatment for cancer patients, justifies this work. The objective was to investigate the hematological and gastrointestinal effects of doxorubicin and tamoxifen when used alone or in combination in male mice with or without the Ehrlich ascites tumor, with or without hormone therapy with estradiol cypionate. A total of 40 Balb / C male mice were divided into groups of 5 animals each, making 8 groups. At the end of 21 days, blood samples were collected for CBC (Complete Blood Count), aiming at evaluating parameters such as RBC count and hematocrit, hemoglobin, white blood cells count and platelets count. Samples of the stomach and intestines of the animals treated with hydrochloride doxorubicin, were also collected for histopathologic analysis, evaluating when present, the degree of damage to the epithelium and the degree of necrosis and apoptosis glands. The evaluation of the number of erythrocytes and the hematocrit value was significantly decreased (p <0.05) in groups I and VIII when compared to the other groups. Hemoglobin showed a significant decrease in group I in relation to groups II, III, IV and V. Counting the number of leukocytes showed a significant increase (p <0.05) when comparing groups I and VI with the other groups. The main histopathological changes evidenced in the stomach and small intestine were necrosis and apoptosis and loss of glands lining epithelium, and the group VII showed a slight decrease in the degree of lesions in group V. / Alguns medicamentos, como o cloridrato de doxorrubicina, atuam dentre outros mecanismos, desencadeando as vias da apoptose, que atingem não só o tumor, mas também as células normais do organismo. Por isso, o estudo dos efeitos colaterais dos quimioterápicos, buscando um tratamento menos agressivo para o paciente oncológico, justifica a realização deste trabalho. O objetivo foi verificar possíveis efeitos hematológicos e gastrointestinais das drogas doxorrubicina e tamoxifeno quando utilizadas em terapia ou em conjunto, em camundongos machos portadores ou não do tumor ascítico de Ehrlich, com e sem terapia hormonal com cipionato de estradiol. Foram utilizados 40 camundongos Balb/C machos, divididos em grupos de 5 animais cada, totalizando-se 8 grupos. Ao final de 21 dias, foi coletado sangue para a realização de hemograma, avaliando-se parâmetros como contagem de hemácias e hematócrito, dosagem de hemoglobina, contagem de leucócitos totais e contagem de plaquetas e amostras do estômago e intestino dos animais tratados com cloridrato de doxorrubicina, foram coletadas para análise histopatológica, avaliando-se quando presente, o grau das lesões no epitélio e o grau de necrose e apoptose das glândulas. A avaliação do número de hemácias e do valor do hematócrito apresentou diminuição significativa (p<0,05) nos grupos I e VIII quando comparado aos demais grupos. A dosagem de hemoglobina demonstrou diminuição significativa no grupo I em relação aos grupos II, III, IV e V. A contagem do numero de leucócitos demonstrou aumento significativo (p<0,05) quando se compararam os grupos I e VI com os demais grupos. As principais alterações histopatológicas evidenciadas no estomago e intestino delgado foram necrose e apoptose de glândulas e perda de epitélio de revestimento, sendo que o grupo VII demonstrou leve diminuição no grau das lesões em relação ao grupo V.