Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_sergio_jorge.pdf: 980348 bytes, checksum: 9e56cf9be902454868ace419c988ca33 (MD5) Previous issue date: 2009-07-20 / Leptospirosis is a zoonotic disease that occurs all over the world, particularly in developing countries, caused by bacteria of the genus Leptospira. Several marsupial species are considered susceptible to infection caused by a wide variety of Leptospira serovars, acting as reservoirs. In this work were collected serum and urine samples of 33 White-eared opossum, trapped within distinct locations of Capão do Leão and Pelotas cities, in the South of Brazil, aiming to detect antibodies and to isolate leptospires. Serum samples were screened against a panel of 58 Leptospira spp and Leptonema illini serovars using the microscopic agglutination test (MAT). To attempt isolation, urine samples from all animals were inoculated in culture medium.EMJH enriched with 10% of supplement Difco® One pathogenic serovar was isolated after two months of inoculation, and is first isolate the country for this animal species and was characterized by PCR using primers for 16S and Lipl32 genes. The technique of partial sequencing of the rpoB gene was used to identify the genomic specie. The isolated strain belongs to the specie L. borgpetersenii, which along with L .interrogans are the main cause disease in humans. The isolate, was tested on MAT using dog, cattle and human sera. Cut off titer of 50 was used for domestic animal sera and 25 for human and opossum sera. Both human and animal sera presented agglutination on MAT to isolated strain corresponding to 3.3% (2/60), 28.33% (17/60) and 1.67% (1/60) in human, dog and cattle sera, respectively. The opossum sera presented 36.36% (12/33) of reaction. These findings suggest a probable white-eared opossum role in the maintenance of pathogenic Leptospira on the environment since low titer sera and urine elimination were observed. These animals could be important reservoirs of Leptospira serovars for human and domestic animals. / A Leptospirose é uma antropozoonose de ocorrência mundial, particularmente nos países em desenvolvimento, causada por bactérias do gênero Leptospira. Várias espécies de marsupiais e didelfídeos são consideradas suscetíveis a infecção causada por uma grande variedade de sorovares patogênicos de Leptospira spp. tendo sido considerados possíveis hospedeiros deste agente. Neste trabalho foram coletadas amostras de soro e urina de 33 gambás-de-orelha-branca (Didelphis albiventris), capturados em diferentes regiões dos municípios do Capão do Leão e Pelotas, no sul do Brasil, com o objetivo de detectar anticorpos e isolar leptospiras. As amostras de soro foram testadas por aglutinação microscópica (MAT), utilizando 58 sorovares de Leptospira spp. e 1 de Leptonema. Para o isolamento, amostras de urina foram inoculadas em meio de cultura EMJH enriquecido com 10% de suplemento Difco®. Um sorovar patogênico foi obtido da urina, sendo o primeiro isolado do país para esta espécie, e foi caracterizado quanto ao gênero e patogenicidade por PCR utilizando primers para os genes 16S rDNA e Lipl32. A técnica de seqüenciamento parcial do gene rpoB foi utilizada para identificar a espécie genômica. A cepa isolada pertence à espécie L. borgpertersenii,, que juntamente com L. interrogans são as principais causadoras de doença em humanos. Anticorpos anti isolado de gambá foram avaliados em amostras sorológicas de 60 cães, 60 bovinos, 60 humanos e dos 33 gambás capturados através da MAT. Os soros humanos apresentaram reação de 3,3% (2/60), 28,33% (17/60) em soros caninos, 1,67% (1/60) em soros bovinos e 36,36% (12/33) em soros dos gambás capturados no estudo. Esses dados sugerem o envolvimento do gambá-de-orelha-branca na manutenção de leptospiras no ambiente, uma vez que estando infectados por sorovares patogênicos podem eliminar o agente pela urina e infectar direta ou indiretamente animais domésticos e conseqüentemente o homem.

A Leishmaniose visceral é um problema que cresce no Estado de São Paulo afetando o homem e o cão. Os exoantígenos da membrana das leishmanias são liberados no meio de cultura. Os exoantígenos são importantes na indução da imunidade mediada pelas células T e B estimulando a produção elevada de anticorpos. Realizamos uma avaliação comparativa por ELISA e Immunoblotting de exoantígenos e antígenos totais de L. (L.) amazonensis, L. (V.) braziliensis e L. (L.) chagasi, no diagnóstico da leishmaniose visceral humana e canina. Obteve-se por ELISA sensibilidade de 100% para ambos os preparados antigênicos independente da espécie de Leishmania. A melhor especificidade em humanos e cães foi com os exoantígenos. O exoantígeno da L. (L.) chagasi teve a melhor especificidade e média de absorbâncias comparadas aos das outras espécies (p<0.005). Para o hospedeiro humano o ELISA com exoantígenos, não discriminou pacientes com leishmaniose cutânea e ou mucocutânea. O Immublotting dos exoantígenos de L. (L.) chagasi (IBleish) apresentou 100% de sensibilidade e especificidade para os cães. Os dados do IBleish-L. (L.) chagasi demonstraram a possibilidade de sua utilização como método confiável para a confirmação do diagnóstico da leishmaniose canina. / The visceral leishmaniasis is a new problem that grows in the State of São Paulo, affecting men and dogs. The exoantigens from the membrane of the Leishmania, are released out of culture medium. The exoantigens are important in the induction of immunity mediated by T and B cells, stimulating the production of antibodies. This work was carried out an evaluation of ELISA and Immunoblotting using comparatively exoantigens and total antigens of L. (L.) amazonensis, L. (V.) braziliensis and L. (L.) chagasi for the diagnosis of canine and human visceral leishmaniasis. ELISA sensitivity was 100% for all different antigens, independent of the species of Leishmania employed. The best specificity for both human and dogs were obtained with exoantigens. Exoantigen from L. (L.) chagasi was what showed the best specificity and mean absorbance compared to those of other species (p<0.05). The ELISA with exoantigens for the human host not discriminate individuals with leishmaniasis cutaneous or mucocutaneous. The Immunoblotting that used the exoantigens of L. (L.) chagasi (IBleish) showed 100% sensitivity and specificity for the dogs. The IBleish-L. (L.) chagasi showed the possibility of its use as a reliable method to confirm the diagnosis of canine leishmaniasis.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aline Lyra Pereira.pdf: 1742611 bytes, checksum: fac56687c54e0ab6545343dd5ab0a212 (MD5) Previous issue date: 2012-03-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis. Está entre as infecções fúngicas mais frequentes da América Latina, sendo o Brasil o país de maior endemicidade, com maior prevalência na região Sudeste. O diagnóstico considerado por muitos autores padrão-ouro para a PCM é o encontro de células fúngicas sugestivas de Paracoccidioides brasiliensis no Exame Microscópico Direto (EMD) de escarro ou outros espécimes clínicos, como raspado de lesão, aspirado de linfonodos, biopsia, etc. As provas sorológicas têm grande importância, complementando ou substituindo o exame micológico no diagnóstico/prognóstico da doença. O objetivo do presente estudo foi comparar dois desses testes sorológicos para PCM: a imunodifusão dupla (IDD) e o ensaio imunoenzimático ELISA. A metodologia foi estabelecida comparando-se títulos de anticorpos obtidos de três grupos de pacientes: 145 amostras de soros de 83 pacientes com PCM (Grupo I), 49 doadores saudáveis (Grupo II) e 13 pacientes com IDD positiva para outras micoses pulmonares: 11 com histoplasmose e 2 com aspergilose (Grupo III). Nossos resultados mostraram que 8 (9,6%) e 5 (6,0%) dos pacientes com PCM foram falso-negativos ao teste de IDD e ELISA, respectivamente. Dentro do grupo de pacientes saudáveis, não houve casos de falso positivo na IDD, porém, 5 (10,2%) amostras foram positivas com títulos baixos no ELISA. Entre os 13 pacientes com outras micoses, o ELISA mostrou que 10 (77,0%) foram positivos enquanto a IDD não apresentou qualquer caso de reação cruzada. A sensibilidade do ELISA (93,9%) foi um pouco superior ao da IDD (90,3%). A especificidade do ELISA calculada como base o controle saudável e os pacientes com outras micoses foi 89,7% e 23,1%, respectivamente. A IDD mostrou uma especificidade de 100% para ambos os casos. Os valores preditivos positivos e negativos foram de 100% e 83,8% para IDD e de 88,5% e 90,3% para ELISA, respectivamente. A acurácia dos testes também foi calculada: a IDD teve 94,4% e o ELISA 86,2% de acurácia. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis. It is among the most common fungal infections in Latin America, with Brazil being the country of highest endemicity, mainly in the Southeast part. The diagnosis considered by many authors as gold standard for the PCM is the finding of suggestive yeast cells of Paracoccidioides brasiliensis in the Direct Microscopic Examination of sputum or other clinical specimens, such as scraping the lesion, lymph node aspirate, biopsy, etc. The serological tests are of great importance, since they complement or replace the mycological examination in the diagnosis / prognosis of the disease. The aim of this study was to compare two serological tests for PCM: a double immunodiffusion (IDD) and Enzyme-Linked Immunoabsorbent Assay (ELISA). The methodology was established by comparing antibody titers obtained from three groups of patients: 145 serum samples from 83 patients with PCM (Group I), 49 healthy blood donors (Group II) and 13 patients with IDD positive for other pulmonary mycoses: 11 with histoplasmosis and 2 with aspergillosis (Group III). Our results showed that eight (9.6%) and 5 (6.0%) of patients with PCM were false negative to the IDD and ELISA tests, respectively. In the group of healthy patients, no cases of false positive in IDD were observed; however, 5 (10.2%) of samples were positive with low titers in ELISA. Among the 13 patients with other mycoses, the ELISA showed that 10 (77.0%) were positive while the IDD tests did not show any case of cross-reaction. The sensitivity of the ELISA (93.9%) was slightly higher than the IDD (90.3%). The specificity of the ELISA calculated basing on the healthy control and patients with other mycoses was 89.7% and 23.1%, respectively. IDD showed 100% of specificity for both cases. The positive predictive and negative predictive values were 100% and 83.8% for IDD and 88.5% and 90.3% for ELISA, respectively. The accuracy of the tests was also calculated: the IDD was 94.4% while ELISA was 86.2%.

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Recombinant proteins from Toxoplasma gondii have been used in several experimental models, as well as for serodiagnosis of human toxoplasmosis, particularly to differentiate acute from chronic phases of the infection. In the present study, we evaluated the kinetics of IgM, IgA, and IgG isotypes, in addition to IgG1 and IgG3 subclasses, by testing sequential serum samples from patients with acute toxoplasmosis. It was carried out immunoassays by using SAG2A recombinant antigen and soluble antigen of Toxoplasma (STAg). The avidity of IgG1 antibody was assessed using slot blot assay. Additionally, a ratio between IgG1 and IgG3 subclasses (IgG3:IgG1) was determined and evaluated its degree of association with levels of IgM and IgA specific for STAg and the avidity index of IgG1 specific for SAG2A. The results showed a decreasing kinetic profile for SAG2A and STAg for IgM and IgA. The kinetic profile for the IgG antibody was increasing for both antigens. Compared to the avidity for IgG1, it was observed that sera from an early stage showed a low average avidity of IgG1 for SAG2A while the same samples showed intermediate mean avidity of IgG1 when STAg was used as antigen. In a later phase, the average avidity observed was high for STAg and intermediate for SAG2A in the same tested sera suggesting that SAG2A may be a promising tool for the detection of avidity. Associations between IgG3/IgG1 and specific IgM and IgA levels for STAg and the avidity index of specific IgG1 for SAG2A were found, and together these parameters could be used as valuable tools in the diagnosis of human toxoplasmosis, especially in situations when the determination of different phases is critical. / Proteínas recombinantes de Toxoplasma gondii têm sido utilizadas em diversos modelos experimentais, assim como para o diagnóstico sorológico da infecção humana por este parasito, principalmente com o intuito de diferenciar as fases aguda e crônica da toxoplasmose. Neste estudo, foi avaliada a cinética dos anticorpos IgM, IgA ,IgG e subclasses (IgG1 e IgG3) através de imunoensaios realizados em amostras seqüenciais de soros humanos, provenientes de pacientes com toxoplasmose aguda. Estas amostras foram testadas frennte ao antígeno recombinante SAG2A, utilizando-se como paradigma de comparação o antígeno solúvel total de Toxoplasma (STAg). A avidez do anticorpo IgG1 foi avaliada utilizando a metodologia slot-blot. Adicionalmente, a razão entre as subclasses IgG3 e IgG1 (IgG3:IgG1) foi determinada e avaliada quanto ao grau de associação com os níveis de IgM e IgA específicos para STAg e aos índices avidez de IgG1 específicos para SAG2A. Os resultados demonstraram a presença de níveis decrescentes de IgM e IgA para ambos os antígenos utilizados, enquanto que para o isotipo IgG o perfil cinético demonstrou níveis crescentes para ambas preparações antígênicas. Em relação aos índices de avidez para IgG1, foi observado que amostras de soros de uma fase inicial apresentaram baixa avidez média de anticorpos IgG1 dirigidos para SAG2A, enquanto que as mesmas amostras demonstraram avidez média intermediária de IgG1 quando STAg foi utilizado como antígeno. Já em uma fase mais tardia, a avidez média observada foi alta para STAg e intermediária com SAG2A. A razão entre IgG3:IgG1 obtida no primeiro bimestre foi significantemente maior para SAG2A em comparação com STAg. Tomados em conjunto, os resultados obtidos no presente estudo indicam que a proteína recombinantes SAG2A pode se constituir em uma ferramenta efetiva na diferenciação das fases da infecção humana por T. gondii. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas