Orientador: Vera Lúcia Gil da Silva Lopes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T02:52:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sgardioli_IlariaCristina_M.pdf: 3234786 bytes, checksum: cb2f0f67f9d7df7814742dbf6ed4fb44 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A Síndrome Velocardiofacial (SVCF), uma das formas do espectro da Síndrome de deleção 22q11.2, possui incidência de 1/4.000 a 1/6.000 nascimentos. Embora a microdeleção em 22q11.2 seja a principal causa da síndrome, cerca de 10 a 20% dos pacientes com características clínicas da SVCF não a apresentam. Em alguns indivíduos com características clinicas da SVCF e sem microdeleção em 22q11.2, foram encontradas outras aberrações cromossômicas e mutações no gene TBX1. Existem evidências em modelos animais que aventam a associação de alterações no gene FGF8 ao fenótipo da SVCF em humanos. No entanto, até o momento, o gene FGF8 ainda não havia sido estudado em pacientes com SVCF sem microdeleção. Os objetivos deste trabalho foram: 1 - investigar as causas genéticas em pacientes com suspeita clínica da SVCF por meio de cariótipo e triagem de microdeleções, utilizando a técnica de MLPA e FISH; 2 - verificar a presença de alterações nas seqüências codificantes dos genes TBX1 e FGF8 em pacientes sem deleção 22q11.2. Foram incluídos 109 indivíduos com suspeita clínica de SVCF avaliados clinicamente por médico geneticista e os métodos utilizados foram: cariótipo com bandas G; MLPA, FISH; seqüenciamento direto das regiões codificantes dos genes TBX1 e FGF8 e SNP-array. Dos 101 casos em que o exame de cariótipo foi realizado, quatro apresentaram aberrações cromossômicas não relacionadas à SVCF, sendo que em duas foi possível a confirmação dos resultados por SNP-array. Realizou-se MLPA de 106 casos, sendo que 29 foram positivos para a deleção. Dos casos negativos, selecionou-se 31 indivíduos após reavaliação clínico-dismorfológica com a hipótese clínica mantida e foi realizado seqüenciamento das regiões codificantes dos genes TBX1 e FGF8. No gene TBX1 foram encontradas variações normais na seqüência e no gene FGF8 não foram detectadas alterações, com exceção dos exons 1 e 2, em que não foi possível análise por problemas técnicos. O exame de cariótipo contribuiu na investigação inicial e permitiu concluir a investigação por outras técnicas. O MLPA se mostrou eficiente para a investigação diagnóstica da deleção 22q11.2, identificando, também, outras alterações; FISH confirmou 82,1% dos resultados obtidos por MLPA. Não foram identificadas alterações patogênicas nas regiões codificantes dos genes TBX1 e em 90% das regiões codificantes do gene FGF8 / Abstract: Velocardiofacial Syndrome (SVCF), one of the forms of the 22q11.2 Microdeletion Syndrome spectrum, has an incidence of 1/4.000 to 1/6.000 births. Although the 22q11.2 microdeletion is the main cause of the syndrome, approximately 10 to 20% of the patients with clinical features of SVCF don't present it. In a few individuals with SVCF clinical features and without 22q11.2 microdeletion other chromosomal aberrations and changes in TBX1 gene were found. There is evidence in animal models that suggests the associated changes in FGF8 gene in humans. However, the FGF8 gene had not been studied in patients with SVCF without microdeletion yet. The purpose of this work was: 1 - To investigate the genetic causes in patients with clinical suspicion of SVCF through the karyotype and microdeletion screening using MLPA and FISH techniques; 2 - To check the presence of changes in coding sequences of the TBX1 gene and FGF8 gene in patients without 22q11.2 deletion. 109 individuals with clinical suspicion of SVCF and clinically evaluated by a clinical geneticist were included, and the following methods were used: karyotype with GTG banding, MLPA, FISH, direct sequencing of coding regions of TBX1 and FGF8 gene and SNP-array. Four out of 102 cases in which the tests of karyotype were performed presented chromosomal aberrations not related to SVCF, two of them confirmed by SNP-array. The MLPA of 106 cases was performed, 29 of them positive to deletion. 31 individuals were selected among negative cases, after clinical reevaluation based on the same clinical hypothesis maintained, and direct sequencing of coding regions of TBX1 and FGF8 gene were performed. Normal variations in sequence were found in TBX1 gene and alterations were not detected in FGF8 gene except for 1 and 2 exons because of technical problems. The karyotype test contributed in the first investigation and permitted us to conclude the investigation by means of other techniques. The MLPA proved to be effective for the diagnostic investigation of 22q11.2 deletion, identifying other alterations as well; FISH confirmed 82,1% results obtained by MLPA. Pathogenic alterations in coding regions of TBX1 gene and in 90% of the coding regions of FGF8 gene were not identified / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientadores: Vera Lúcia Gil da Silva Lopes, Milena Simioni / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-27T18:40:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Molck_MiriamCoelho_D.pdf: 5956023 bytes, checksum: 07a0d65667a7a002b0e8ad7a872c0d31 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: A Síndrome Velocardiofacial (SVCF) tem prevalência de ~1:4.000 nascimentos e apresenta espectro fenotípico variável, incluindo defeitos cardíacos congênitos (DCC). Microdeleções de ~3 Mb em 22q11.2 representam a principal causa, entretanto deleções atípicas nesta região têm sido relatadas, assim como fenótipos similares associados a variações no número de cópias do DNA (Copy number variations, CNVs) em outras regiões cromossômicas. Esta proposta objetiva mapear os pontos de quebra da região 22q11.2 e investigar CNVs em outras regiões do genoma em pacientes com a deleção 22q11.2 confirmada previamente (Grupo I) e investigar CNVs no genoma de pacientes sem a deleção 22q11.2 (Grupo II). Foram investigados 108 pacientes (30 do Grupo I e 78 do Grupo II) com suspeita clínica da SVCF e DCC por Hibridação Genômica em arrays (array Genomic Hybridization- aGH). Para o Grupo I, o tamanho da deleção 22q11.2 proximal variou de 1,8 Mb a 3,3 Mb em 28 casos, sendo que um apresentou a deleção entre as LCRs (Low Copy Repeats) A-B e os demais 27 entre as LCRs A-D (região tipicamente deletada). Dois casos apresentaram deleções atípicas em 22q11.2: 3,6 Mb entre as LCRs B-F, elvolvendo as regiões 22q11.2 proximal e distal; e 1,5 Mb entre as LCRs D-E, envolvendo a região 22q11.2 distal. Além disso, foram observadas dez CNVs ? 300 kb relevantes fora da região 22q11.2, incluindo uma deleção em 11q14.3 e duplicações em 2q24.1-q24.2, 3p22.1, 5p15.2, 5q11.1, 6p21.2, 7p11.2, 15q13.3, 16q23.3 e Xp21.1. Para o Grupo II, foi observado um total de 25 CNVs ? 300 Kb relevantes. Destas, nove CNVs já foram descritas na literatura, incluindo deleções em 4q35.1-q35.2, 5p15.1-p15.33, 8p23.1, 10q22.3-q23.2, 16p11.2, 17q12 e 22q13.33; e duplicações em 3p26.3 e 3q26.2. As variações gênicas dentro dos pontos de quebra da região deletada 22q11.2, bem como as CNVs observadas em outras regiões cromossômicas contribuem para a variabilidade fenotípica observada nesta síndrome e confirmam a sobreposição desta com diferentes condições clínicas / Abstract: The Velocardiofacial Syndrome (VCFS) has a prevalence of ~1:4.000 births and shows variable phenotypic spectrum, including congenital heart defects (CHD). Microdeletions of ~3 Mb in 22q11.2 represent the main cause, however atypical deletions in this region have been reported, as well as similar phenotypes associated with changes in the number of DNA copies (Copy number variations, CNVs) in other chromosomal regions. This work aims to map the breakpoints of the 22q11.2 region and investigate CNVs in other regions of the genome in patients with the 22q11.2 deletion previously confirmed (Group I) and investigate CNVs on the genome of patients without the 22q11.2 deletion (Group II). We investigated 108 patients (30 from Group I and 78 from Group II) with clinical suspicion of VCFS and CHD for array Genomic Hybridization (aGH). For Group I, the size of proximal 22q11.2 deletion ranged from 1.8 Mb to 3.3 Mb in 28 cases, of these, one case had the deletion between LCRs (Low Copy Repeats) A-B and the other 27 between LCRs A-D (typically deleted region). Two cases had atypical deletions at 22q11.2: 3.6 Mb between LCRs B-F, involving proximal and distal 22q11.2 regions; and 1.5 Mb between LCRs D-E, involving distal 22q11.2 region. Additionally, we observed ten relevant CNVs ? 300 kb outside of 22q11.2 region, including a deletion in 11q14.3 and duplications in 2q24.1-q24.2, 3p22.1, 5p15.2, 5q11.1, 6p21.2, 7p11.2, 15q13.3, 16q23.3 and Xp21.1. For Group II, a total of 25 relevant CNVs ? 300 Kb was observed. Of these, nine CNVs have been described in the literature, including deletions in 4q35.1-q35.2, 5p15.1-p15.33, 8p23.1, 10q22.3-q23.2, 16p11.2, 17q12 and 22q13.33; and duplications in 3p26.3 and 3q26.2. Gene variations within the break points of the 22q11.2 deleted region and CNVs observed in other chromosomal regions contribute to phenotypic variability observed in this syndrome and confirm the overlapp with different clinical conditions / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutora em Ciências Médicas

Individuals diagnosed with 22q11.2 deletion syndrome (22q) have many barriers and quality of life issues associated with the condition. Without an obvious anomaly, affected individuals may live years without a proper diagnosis. The purpose of this qualitative case study research was to explore perceptions of caregivers of individuals with 22q. Uncertainty in illness theory was used as it describes the inability to find answers with unpredictable medical issues. The central research question focused on at how challenges associated with a 22q diagnosis are addressed. Interviews were conducted with 10 caregivers. Guided by the uncertainty in illness theory, data analysis was conducted by coding through NVivo to find themes. Themes identified included, but were not limited to: (a) age and symptoms at diagnosis; (b) usage of the internet for answers; (c) future transition uncertainties; and (d) lack of provider knowledge. Five out of 10 participants had a child with a known heart condition at birth, which led to a 22q diagnosis. Five out ten individuals with 22q were diagnosed at a later age following a manifestation of other serious conditions. A greater index of suspicion could have led to a more timely diagnosis of 22q. All individuals expressed the desire for a more prompt and thorough diagnosis. The positive implications for social change include influencing physicians and policy makers through education and implemented policies that can lead to more timely diagnoses and treatment for better health outcomes. This social change can influence the target population through scholarly publications in medical journals. It may also be influenced through policy proposals influencing early detection screenings at birth. The addition of caregiver advocates may also bring about change within the 22q community.

Fragestellung: Querschnittstudien konnten bei Kindern und Jugendlichen mit Deletion 22q11.2 eine Tendenz zu mit dem Alter zunehmenden Verhaltensauffälligkeiten verbunden mit einem Anstieg der elterlichen Stressbelastung zeigen. Die aktuelle Längsschnittstudie sollte diese Ergebnisse überprüfen. Methodik: Mit Hilfe der deutschen Selbsthilfegruppe KiDS 22q11 wurden alle Hauptbezugspersonen, die bereits vier Jahre zuvor an einer Befragung zu Verhaltensauffälligkeiten und Stress teilgenommen hatten, anonymisiert um die Bearbeitung verschiedener Fragebögen gebeten. Ergebnisse: 59 von 94 Hauptbezugspersonen sandten ausgefüllte Fragebögen zurück. Dabei wurden 54% aller Kinder und Jugendlichen (29 männlich, 30 weiblich, im Alter von 5,8 bis 18,9 Jahren, Mittelwert: 10,8 Jahre) von ihren Hauptbezugspersonen als verhaltensauffällig eingestuft (Gesamtwert Child Behavior Checklist [CBCL] bzw. Fragebogen über das Verhalten junger Erwachsener [YABCL]). In nahezu allen Bereichen der Child Behavior Checklist, mit der die Erfassung der Verhaltensauffälligkeiten erfolgte, kam es im Verlauf zu einer statistisch signifikanten Zunahme. Auch stieg die Stressbelastung der Hauptbezugspersonen, erfasst mittels Fragebogen Soziale Orientierungen von Eltern behinderter Kinder, im Vergleich zur Erstbefragung signifikant an, ohne dass sich jedoch die Lebenszufriedenheit signifikant verändert hätte. Das Ausmaß der elterlichen Stressbelastung korrelierte signifikant mit dem Gesamtproblemwert der CBCL. Schlussfolgerungen: Die Ergebnisse der aktuellen Längsschnittstudie bestätigen die Befunde früherer Querschnittuntersuchungen hinsichtlich Verhaltensauffälligkeiten bei Kindern und Jugendlichen mit Deletion 22q11.2. Aufgrund der zunehmenden Verhaltensprobleme und der damit einhergehenden Stressbelastung ist mit einem erhöhten Beratungsbedarf der Hauptbezugspersonen und einer zunehmenden Behandlungsbedürftigkeit der Patienten zu rechnen. / Backround: Cross-sectional studies have shown a tendency to age increasing behaviour problems associated with an increase in parental stress in children and adolescents with 22q11.2 deletion. The current longitudinal study should review these results. Method: Using the German self-help group KiDS 22q11 all main caregivers who had four years earlier participated in a survey about behaviour problems and stress, were asked anonymously to answer again different questionnaires. Results: 59 of 94 primary caregivers sent back the completed questionnaires. 54% (29 male, 30 female, aged 5.8 to 18.9 years, mean 10.8 years) were classified clinical for behaviour problems by their primary caregivers (total problems scale of Child Behavior Checklist [CBCL] resp. Young Adult Behavior Checklist [YABCL]). In almost all areas of the Child Behavior Checklist occurred in the course a statistically significant increase. The stress of the main caregivers rose, recorded by questionnaire Social orientations of parents of disabled children, compared to the initial survey significantly, without any significantly change in life satisfaction. The extent of parental stress was significantly correlated with the total problems score of the CBCL. Conclusion: The results of this longitudinal study confirm the findings of previous cross-sectional studies on behaviour problems in children and adolescents with 22q11.2 deletion. Due to the increasing behaviour problems and the associated stress is to be expected with an increased need for counseling the main caregivers and an increasing need for treatment of patients.

(ENG) This thesis summarizes the results of a project dedicated to adaptive immune system of patients with partial DiGeorge syndrome caused by deletion of 22q11.2. The introduction sets the DiGeorge syndrome into a broader context of international pathophysio- clinical classification of primary immunodeficiencies and goes into detail describing its history, causes, clinical phenotype, therapeutic options and changes of the immune system. The attached manuscripts illustrate the premature aging of the T cell population, but also impaired development of B cells with low class-switched memory and high naïve subpopulations, along with high serum levels of BAFF, a B cell survival factor. The surprising lack of T independent marginal zone- like (MZ-like) B cells is reflected in decreased natural anti-α-Gal antibodies. The faulty B cell maturation and imperfect germinal center response is not caused by a deficit of follicular helper T cells, which are in fact increased in DiGeorge syndrome patients, and in most cases doesn't lead to hypogammaglobulinaemia. Despite the high incidence of autoimmune disease, in particular thyroiditis and thrombocytopenia, and a trend towards hypergammaglobulinaemia in adolescence and adulthood, we saw normal proportion of regulatory T cells (Tregs) and normal expression of...

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Orientador: Lucilene Arilho Ribeiro Bicudo / Resumo: A Síndrome de Microdeleção 22q11 (SD22q11), causada por uma deleção de aproximadamente 3Mb na região 22q11, apresenta uma frequencia média de 1 em 4000 a 9800 nascidos vivos sendo considera a síndrome de microdeleção mais frequente e a segunda causa mais comum de atraso no desenvolvimento e de doença congênita grave, após a síndrome de Down. De acordo com o tamanho e a localização da deleção, diferentes genes podem ser afetados e o principal gene considerado como responsável pelos sinais clássicos da síndrome é o TBX1. A SD22q11 caracteriza-se por um espectro fenotípico bastante amplo, com efeitos pleiotrópicos que resultam no acometimento de praticamente todos os órgãos e/ou sistemas, altamente variáveis com mais de 180 sinais clínicos já descritos, tanto físicos como comportamentais. Nesse trabalho aplicamos ferramentas de bioinformática com o intuito de descobrir padrões clínicos e sistêmicos da deleção 22q11, classificando casos sindrômicos em típicos e atípicos e estudando o impacto da deleção em redes de interação proteína-proteína (PPI). Para avaliação dos sinais clínicos que pudessem diferenciar pacientes sindrômicos foi aplicado uma metodologia baseada em aprendizado de máquina para classificar os casos em típico e atípico de acordo com os sinais clínicos através do algoritmo J48 (um algoritmo de árvore de decisão). As árvores de decisão selecionadas foram altamente precisas. Sinais clínicos como fissura oral, insuficiência velofaríngea, atraso no desenvolvimento de ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The 22q11 Microdeletion Syndrome (22q11DS), caused by a deletion of approximately 3Mb in the 22q11 region, has an average frequency of 1 in 4000 to 9800 live births and is considered the most frequent microdeletion syndrome and the second most common cause of developmental delay and severe congenital disease after Down syndrome. According to the size and location of the deletion, different genes may be affected and the main gene considered to be responsible for the classic signs of the syndrome is TBX1. 22q11DS is characterized by a very broad phenotypic spectrum with pleiotropic effects that result in the involvement of variable organs and/or systems with more than 180 clinical signs already described, both physical and behavioral. In this work, we applied bioinformatics tools to detect clinical and systemic patterns of 22q11 deletion, classifying typical and atypical syndromic cases, and studying the impact of deletion on protein-protein interaction (PPI) networks. To evaluate clinical signs that could differentiate syndromic patients, a machine-learning based methodology was used to classify the cases into typical and atypical according to the clinical signs through the algorithm J48 (a decision tree algorithm). The selected decision trees were highly accurate. Clinical signs such as oral fissure, velopharyngeal insufficiency, speech and language development delay, specific learning disability, behavioral abnormality and growth delay were indicative for case classification... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Entre as síndromes de deleção do cromossomo 22q.11, a Síndrome de DiGeorge foi descrita em 1967 como uma imunodeficiência primária caracterizada por: malformações cardíacas, hipoparatireoidismo e ausência de timo. A incidência estimada é de 1: 3000 nascidos vivos e apesar disto seu reconhecimento ainda apresenta dificuldades devido à grande variabilidade fenotípica e diferentes nomenclaturas. Para o diagnóstico é necessário a presença do número de células T circulantes diminuído ou normal, número de células B circulantes normais e níveis séricos de imunoglobulinas diminuídos ou normais associado com os seguintes achados: hipoparatireoidismo, malformações cardíacas conotruncais, dismorfismo facial e detecção da deleção do cromossomo 22q.11. Os pacientes com Síndrome de DiGeorge apresentam graus variados de comprometimento tímico e há a necessidade de avaliação da função tímica objetiva e eficaz para este grupo de pacientes. Recentemente, a mensuração do TREC tem sido considerada adequada para avaliar a função tímica. O objetivo deste estudo foi avaliar a função tímica em pacientes com esta síndrome através de dados clínicos e laboratoriais associados à mensuração do TREC em células mononucleares periféricas. Os objetivos secundários foram descrever as características fenotípicas, as alterações imunológicas incluindo a quantificação de subpopulações de linfócitos T e sua ativação. A quantificação do TREC foi feita através de PCR quantitativo em tempo real e as subpopulações de linfócitos T e dos marcadores de ativação CD28+ e HLA-DR+, através de citometria de fluxo. Nesta casuística foram incluídos 14 pacientes, oito masculinos, com idade entre 8m a 18a11m. Todos os pacientes preencheram os critérios diagnósticos e em dois não foi detectada a deleção do 22q11.2. O achado mais freqüente foi o acometimento cardíaco em 12 pacientes, prevalecendo a tetralogia de Fallot. O dismorfismo facial foi observado em 11 pacientes, sendo as alterações orofaciais as mais comuns. Hipocalcemia esteve presente em cinco pacientes e em um deles havia associação com hipotireoidismo neonatal. Depressão foi observada em dois pacientes e atualmente nenhum paciente apresenta quadro de infecção de repetição. À avaliação da imunidade humoral, detectou-se cinco pacientes com concentrações séricas de IgM abaixo dos valores normais para a idade e na avaliação da anticorpogênese somente três pacientes responderam com títulos protetores para a o esquema vacinal completo para hepatite B e quatro para sarampo. A quantificação do número de TREC realizada em 12 pacientes mostrou-se reduzida em relação aos controles com uma significância estatística (p = 0,002). O número de linfócitos totais estava dentro dos valores normais, mas, os valores de CD3+ estavam diminuídos em nove, CD4+ em um e CD8+ em cinco pacientes. Observou-se maior expressão de marcadores de ativação linfocitária no grupo de pacientes que nos controles (p = 0, 002). Conclusão: Este estudo revelou que os pacientes avaliados apresentaram alteração tanto da imunidade celular como humoral em especial em relação à anticorpogênese pós vacinal e redução da subpopulação de linfócitos T. A reduzida quantidade de TREC em relação aos controles pode indicar uma disfunção tímica embora tenha sido observado normalidade linfocitária nestes pacientes / Among the syndromes of 22q.11 deletion, the DiGeorge Syndrome was first described in 1967 as a primary immunodeficiency characterized by: heart defects, hypoparathyroidism and absence of thymus. The estimated incidence is 1: 3000 live births and despite this, its recognition still presents difficulties due to large variability and different nomenclatures. For the diagnosis it is necessary the presence of the decreased or normal number of circulating T cells, normal number of circulating B cells and decreased or normal levels serum of immunoglobulins associated with the following findings: hypoparathyroidism, conotruncal heart defects, facial dimorphism and detection of 22q.11 deletion. Patients with DiGeorge syndrome have varying degrees of thymic commitment and there is a necessity for an objectively and effectively evaluation of thymic function to this group of patients. Recently, the measurement of TREC has been considered adequate to evaluate the thymic function. The aim of this study was to evaluate the thymic function in patients with this syndrome through clinical and laboratory data associated with the measurement of TREC in peripheral blood mononuclear cells. The secondary objectives were to describe the phenotypic characteristics, immune disorders including quantification of subpopulations of T lymphocytes and their activation. Quantification of TREC was performed by quantitative PCR in real time and the subpopulations of T lymphocytes and activation markers CD28+ and HLA-DR+, by flow cytometry. In this case series included 14 patients, eight male, aged 8m to 18y11m. All patients met the diagnostic criteria and two did not detect the 22q11.2 deletion. The most common finding was cardiac involvement in 12 patients, with prevalence of tetralogy of Fallot. The facial dimorphism was observed in 11 patients with orofacial changes being the most common. Hypocalcaemia was present in five patients and one of them was associated with neonatal hypothyroidism. Depression was observed in two patients and now, no patient presents recurrent infections. In the humoral immunity, we have found five patients with serum IgM below normal for age and only three patients responded with protective levels of antibodies to the complete vaccine schedule for hepatitis B and four for measles. The measurement of the number of TREC was performed in 12 patients and it was reduced compared to controls with a statistical significance (p = 0, 002). The total number of lymphocytes were within the normal range, but the values of CD3+ were decreased in nine, CD4+ in one and CD8+ in five patients. It was found a higher expression of markers of lymphocyte activation in the group of patients than in controls (p = 0, 002). Conclusion: This study revealed that in the patients studied both humoral and cellular immunity was compromised, in particular in relation to vaccinal response and reduction the subpopulation of T lymphocytes. The reduced amount of TREC when compared to controls may indicate a thymic dysfunction despite the normal lymphocytes in these patients

Entre as síndromes de deleção do cromossomo 22q.11, a Síndrome de DiGeorge foi descrita em 1967 como uma imunodeficiência primária caracterizada por: malformações cardíacas, hipoparatireoidismo e ausência de timo. A incidência estimada é de 1: 3000 nascidos vivos e apesar disto seu reconhecimento ainda apresenta dificuldades devido à grande variabilidade fenotípica e diferentes nomenclaturas. Para o diagnóstico é necessário a presença do número de células T circulantes diminuído ou normal, número de células B circulantes normais e níveis séricos de imunoglobulinas diminuídos ou normais associado com os seguintes achados: hipoparatireoidismo, malformações cardíacas conotruncais, dismorfismo facial e detecção da deleção do cromossomo 22q.11. Os pacientes com Síndrome de DiGeorge apresentam graus variados de comprometimento tímico e há a necessidade de avaliação da função tímica objetiva e eficaz para este grupo de pacientes. Recentemente, a mensuração do TREC tem sido considerada adequada para avaliar a função tímica. O objetivo deste estudo foi avaliar a função tímica em pacientes com esta síndrome através de dados clínicos e laboratoriais associados à mensuração do TREC em células mononucleares periféricas. Os objetivos secundários foram descrever as características fenotípicas, as alterações imunológicas incluindo a quantificação de subpopulações de linfócitos T e sua ativação. A quantificação do TREC foi feita através de PCR quantitativo em tempo real e as subpopulações de linfócitos T e dos marcadores de ativação CD28+ e HLA-DR+, através de citometria de fluxo. Nesta casuística foram incluídos 14 pacientes, oito masculinos, com idade entre 8m a 18a11m. Todos os pacientes preencheram os critérios diagnósticos e em dois não foi detectada a deleção do 22q11.2. O achado mais freqüente foi o acometimento cardíaco em 12 pacientes, prevalecendo a tetralogia de Fallot. O dismorfismo facial foi observado em 11 pacientes, sendo as alterações orofaciais as mais comuns. Hipocalcemia esteve presente em cinco pacientes e em um deles havia associação com hipotireoidismo neonatal. Depressão foi observada em dois pacientes e atualmente nenhum paciente apresenta quadro de infecção de repetição. À avaliação da imunidade humoral, detectou-se cinco pacientes com concentrações séricas de IgM abaixo dos valores normais para a idade e na avaliação da anticorpogênese somente três pacientes responderam com títulos protetores para a o esquema vacinal completo para hepatite B e quatro para sarampo. A quantificação do número de TREC realizada em 12 pacientes mostrou-se reduzida em relação aos controles com uma significância estatística (p = 0,002). O número de linfócitos totais estava dentro dos valores normais, mas, os valores de CD3+ estavam diminuídos em nove, CD4+ em um e CD8+ em cinco pacientes. Observou-se maior expressão de marcadores de ativação linfocitária no grupo de pacientes que nos controles (p = 0, 002). Conclusão: Este estudo revelou que os pacientes avaliados apresentaram alteração tanto da imunidade celular como humoral em especial em relação à anticorpogênese pós vacinal e redução da subpopulação de linfócitos T. A reduzida quantidade de TREC em relação aos controles pode indicar uma disfunção tímica embora tenha sido observado normalidade linfocitária nestes pacientes / Among the syndromes of 22q.11 deletion, the DiGeorge Syndrome was first described in 1967 as a primary immunodeficiency characterized by: heart defects, hypoparathyroidism and absence of thymus. The estimated incidence is 1: 3000 live births and despite this, its recognition still presents difficulties due to large variability and different nomenclatures. For the diagnosis it is necessary the presence of the decreased or normal number of circulating T cells, normal number of circulating B cells and decreased or normal levels serum of immunoglobulins associated with the following findings: hypoparathyroidism, conotruncal heart defects, facial dimorphism and detection of 22q.11 deletion. Patients with DiGeorge syndrome have varying degrees of thymic commitment and there is a necessity for an objectively and effectively evaluation of thymic function to this group of patients. Recently, the measurement of TREC has been considered adequate to evaluate the thymic function. The aim of this study was to evaluate the thymic function in patients with this syndrome through clinical and laboratory data associated with the measurement of TREC in peripheral blood mononuclear cells. The secondary objectives were to describe the phenotypic characteristics, immune disorders including quantification of subpopulations of T lymphocytes and their activation. Quantification of TREC was performed by quantitative PCR in real time and the subpopulations of T lymphocytes and activation markers CD28+ and HLA-DR+, by flow cytometry. In this case series included 14 patients, eight male, aged 8m to 18y11m. All patients met the diagnostic criteria and two did not detect the 22q11.2 deletion. The most common finding was cardiac involvement in 12 patients, with prevalence of tetralogy of Fallot. The facial dimorphism was observed in 11 patients with orofacial changes being the most common. Hypocalcaemia was present in five patients and one of them was associated with neonatal hypothyroidism. Depression was observed in two patients and now, no patient presents recurrent infections. In the humoral immunity, we have found five patients with serum IgM below normal for age and only three patients responded with protective levels of antibodies to the complete vaccine schedule for hepatitis B and four for measles. The measurement of the number of TREC was performed in 12 patients and it was reduced compared to controls with a statistical significance (p = 0, 002). The total number of lymphocytes were within the normal range, but the values of CD3+ were decreased in nine, CD4+ in one and CD8+ in five patients. It was found a higher expression of markers of lymphocyte activation in the group of patients than in controls (p = 0, 002). Conclusion: This study revealed that in the patients studied both humoral and cellular immunity was compromised, in particular in relation to vaccinal response and reduction the subpopulation of T lymphocytes. The reduced amount of TREC when compared to controls may indicate a thymic dysfunction despite the normal lymphocytes in these patients

Orientador: Vera Lucia Gil da Silva Lopes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-20T04:54:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vieira_TarsisAntonioPaiva_D.pdf: 3309313 bytes, checksum: 6d4805118bd5c929446b40064e1263b2 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A aplicação de modernos conhecimentos sobre causa, efeito e métodos diagnósticos de doenças genéticas para cuidados de saúde é bastante complexa, especialmente no Brasil onde o sistema de saúde é predominantemente público. A síndrome de deleção 22q11.2 (S. Del 22q11.2) é a condição geneticamente determinada mais comum em indivíduos com anomalias palatais, com prevalência de 1/4.000 nascimentos. Considerando esta prevalência, as características do sistema de saúde e da atenção em genética no Brasil, o principal objetivo deste estudo foi realizar estudo multicêntrico para diagnóstico da S. Del 22q11.2 como modelo para otimização de estratégias diagnósticas em genética médica. Para isso, verificou-se a disponibilidade do diagnóstico laboratorial da S. Del 22q11.2 em 11 serviços de genética de diferentes regiões do país, e este foi centralizado nos Laboratórios de Citogenética Humana e Genética Molecular da FCM/UNICAMP por 30 meses. Foram estudados 100 pacientes (48M:52F) e as técnicas utilizadas foram FISH (Fluorescence in situ Hibridization) e MLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification). Disponibilidade anterior e temporária do diagnóstico laboratorial de deleção em 22q11, vinculada a projetos de pesquisa, foi informada por sete instituições, sendo detectada desigualdade regional. Microdeleção em 22q11 foi identificada em 35% dos pacientes e aberrações cromossômicas não envolvendo a região 22q11 foram detectadas em três casos, obtendo-se conclusão diagnóstica em 38% dos casos. Encontrou-se diferença estatisticamente significativa para alguns sinais clínicos apresentados entre os pacientes com e sem deleção. As técnicas de FISH e MLPA mostraram 100% de sensibilidade e especificidade. Considerando a infraestrutura necessária e a adaptação da técnica de FISH, que permitiu reduzir a quantidade de sonda utilizada, esta foi eficaz, mais econômica e mais rápida em comparação a MLPA. A investigação centralizada mostrou-se vantajosa. Aponta-se o modelo estabelecido como uma estratégia importante e factível para o Brasil. Os resultados deste estudo propiciaram reflexões que culminaram em sugestões para o incremento desta abordagem para esta e outras condições geneticamente determinadas em nosso país / Abstract: The introduction of new technologies of molecular diagnosis for health care has been a challenge in the last years, especially in Brazil, where the majority of the population is served by the public health system. The 22q11.1 deletion syndrome is the most common syndrome that has palatal anomalies as a major feature, with a prevalence of 1/4000 births. Considering this prevalence, the Brazilian health system characteristics and the current situation of medical and clinical genetic services in the country, the main aim of this study was to conduct a multicenter study for 22q11.2 deletion diagnosis as a model for the optimization of diagnostic strategies in medical genetics. We investigated the access to laboratorial diagnosis of 22q11.2 deletion at 11 genetic services and centralized this diagnosis for 100 patients with palatal abnormalities and suspicion of 22q11.2 deletion syndrome, referred from these centers during 30 months, at the Cytogenetics and Molecular biology laboratories of the FCM/UNICAMP. To detect 22q11 deletions FISH (Fluorescence in situ Hibridization) and MLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification) techniques were used. Previous and temporary availability for the diagnosis of 22q11 deletion, associated with research projects, was informed by seven centers, with remarkable geographic disparities. We detected 22q11 deletion in 35% of the patients, and chromosome abnormalities not related to 22q11 region in three patients; thus we reached diagnostic conclusion in 38% of the cases. There was significant difference between some clinical signs found in patients with or without 22q11 deletion. There was 100% of sensibility and specificity for both MLPA and FISH techniques. Considering the required infrastructure and the modifications in the FISH (allowing to reduce probe quantity), this technique was efficient, more economical and faster than MLPA. Centralizing the laboratorial diagnosis was considered advantageous, pointing to this model as an important and feasible strategy for genetic diagnosis in Brazil. These results allowed to suggestions for the improvement of laboratorial diagnosis of this and other genetic conditions in our country / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas