Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T13:05:22Z No. of bitstreams: 1 Tese FINAL - JES-JR.pdf: 11026421 bytes, checksum: 44858784d660b994db2117a2bcfb8820 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T13:05:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese FINAL - JES-JR.pdf: 11026421 bytes, checksum: 44858784d660b994db2117a2bcfb8820 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T13:05:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese FINAL - JES-JR.pdf: 11026421 bytes, checksum: 44858784d660b994db2117a2bcfb8820 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-15T13:05:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese FINAL - JES-JR.pdf: 11026421 bytes, checksum: 44858784d660b994db2117a2bcfb8820 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil. / O triatomíneo Panstrongylus megistus pode ser encontrado ao longo do Brasil em um diversificado número de hábitats, tanto silvestres como artificiais. Este trabalho teve como objetivo estudar a dinâmica populacional de P. megistus nos ciclos de transmissão do Trypanosoma cruzi em áreas de Cerrado e Mata Atlântica no Estado de Minas Gerais/ Brasil. Os municípios estudados foram Bambuí (Cerrado) e Piracema (Mata Atlântica). Foram realizadas coletas nos ambientes natural e artificial, com objetivo de identificar a dinâmica populacional, as fontes alimentares (FA) e os ecótopos naturais utilizados por P. megistus, bem como caracterizar a interrelação dos ciclos de transmissão do T. cruzi a partir dos reservatórios e vetores associados. As amostragens de campo foram realizadas em locais de maior presença do barbeiro e proximidade de áreas naturais. A partir dos dados avaliados foi observado o sucesso das atividades de controle vetorial, alcançadas em momentos diferentes em cada município. Através da análise por morfometria geométrica, foi possível identificar uma semelhança entre as populações doméstica e silvestre de P. megistus, sugerindo o ambiente natural como principal foco de infestação triatomínica nos municípios. As análises de FA revelaram uma grande mobilidade da espécie no ambiente domiciliar, destacando as aves (49%) e os cães (22%) como principais recursos utilizados. A investigação do ambiente natural levou ao encontro do primeiro foco silvestre de P. megistus em Bambuí, após 69 anos de pesquisas, demonstrando a baixa densidade da espécie no meio silvestre. Foram identificados os gambás (Didelphis sp.) e os cães domésticos como principais reservatórios de T. cruzi nos ambientes natural e artificial, respectivamente. Os dados mostram que as infestações domiciliares por P. megistus, embora reduzidas, se mantêm permanentes na última década avaliada, mesmo com poucos focos silvestres, como detectado em Bambuí. Ficou evidenciado também a ocorrência de um progressivo declínio das densidades triatomínico-tripanossômicas nas áreas estudadas, o que se deve provavelmente à fatores relacionados com a permanente vigilância epidemiológica, à redução da população rural, a melhoria das habitações rurais e redução das áreas naturais associada à expansão agropecuária / The triatomine Panstrongylus megistus can be found throughout the country in a diverse number of habitats, both silvatic and artificial. This work aimed to study the dynamics of P. megistus in the Trypanosoma cruzi transmission cycles in areas of Cerrado and Atlantic Forest in Minas Gerais, Brazil. The municipalities studied were Bambuí (Cerrado) and Piracema (Atlantic Forest). Colects were conduced in natural and artificial environments, in order to identify the population dynamics, food sources and the natural ecotope used by P. megistus, and to characterize the interrelationship of T. cruzi transmission cycles from the reservoirs and vectors involved. The field surveys were conducted in sites with high presence of the triatomine and proximity to natural areas. From the data evaluated was observed the success of vector control activities reached at different times, in each municipality. A geometric morphometric analysis showed no difference between domestic and silvatic populations, suggesting the natural environment as the main focus of infestation triatomine rates in the municipalities. The food sources analysis revealed a highly mobility of the specie in the domiciliar environment highlighting the birds (49%) and dogs (22%) as the main resources used. The investigation of the natural environment led to the meeting of the first focus of silvatic P. megistus in Bambuí, after 69 years of research, demonstrating the low density of the specie in the silvatic environment. It was identified the opossums (Didelphis sp.) and dogs as the main reservoirs of T. cruzi in natural and artificial environments, respectively. The data shows that household infestation by P. megistus, although reduced, remain persistent in the last decade evaluated, even with a few silvatic foci, as detected in Bambuí. It also demonstrates the occurrence of a progressive decline of T.cruzi/Triatomine-density in the studied areas, which is probably due to factors related to the permanent epidemiological surveillance, reduction of rural population, the improvement of rural housing and reduction of natural areas associated with the expansion of agriculture and livestock.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-14T14:24:52Z No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_MariaRaquelFelletBelinato.pdf: 5060346 bytes, checksum: e8bef8e25cdc2e123cfed86f1bc3fac5 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-14T14:25:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_MariaRaquelFelletBelinato.pdf: 5060346 bytes, checksum: e8bef8e25cdc2e123cfed86f1bc3fac5 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-14T14:25:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_MariaRaquelFelletBelinato.pdf: 5060346 bytes, checksum: e8bef8e25cdc2e123cfed86f1bc3fac5 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-14T14:25:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_MariaRaquelFelletBelinato.pdf: 5060346 bytes, checksum: e8bef8e25cdc2e123cfed86f1bc3fac5 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Os triatomíneos são insetos hematófagos capazes de transmitir Trypanosoma cruzi, agente causador da doença de Chagas. Existem poucos estudos sobre a virulência do parasito ao inseto vetor e, com isso, o parasito tem sido considerado por diversos autores como não-patogênico nesse sentido. Trypanosoma rangeli, outro protozoário transmitido por triatomíneos, não é patogênico ao homem, mas apesar de vários efeitos negativos ao vetor serem conhecidos, seu papel sobre o comportamento e a biologia reprodutiva do inseto ainda não foi investigado. Essa tese avaliou o efeito da infecção por T. cruzi (em duas temperaturas de criação: 25-25ºC - os insetos foram mantidos em 25ºC durante as fases ninfal e adulta e 30-25ºC - os insetos foram mantidos a 30ºC durante a fase ninfal e transferidos para 25ºC após a muda imaginal) e por T. rangeli - somente em 25-25ºC, em aspectos reprodutivos e no comportamento de cópula e voo de R. prolixus. Inicialmente, foi demonstrado que tanto T. cruzi 30-25ºC quanto T. rangeli causaram uma diminuição na fecundidade e fertilidade dos triatomíneos, sendo os efeitos decorrentes da infecção por T. rangeli mais evidentes. Além disso, foi observado para os mesmos grupos que a presença dos parasitos diminuiu o tamanho, o peso e o conteúdo proteico de ovos postos por pares infectados. O comportamento sexual dos insetos também foi afetado pelas infecções por T. rangeli e T. cruzi (30-25ºC). A frequência e duração da cópula em ensaios sem escolha de parceiro somente foram alteradas na infecção por T. rangeli. Interessantemente, quando foi permitido a insetos não infectados escolherem entre um parceiro infectado e um não infectado, um número significativamente maior escolheu parceiros não infectados, em infecções por T. cruzi e T. rangeli. O comportamento de início de voo também foi alterado em decorrência das infecções. Ambos os parasitos diminuíram a frequência de início de voo dos insetos. Adicionalmente, um maior número de fracassos nas tentativas de início de voo foi visto nos insetos infectados em comparação aos sem infecção. De maneira geral, as infecções por T. cruzi e T. rangeli produziram efeitos negativos no fitness de R. prolixus. No caso de T. cruzi a temperatura de criação dos insetos parece ser relevante para a ocorrência dos efeitos. Será importante investigar ainda se os insetos são capazes de controlar comportamentalmente as populações de parasitos, escolhendo, por exemplo, temperaturas ambientais adequadas ou se os tripanosomas podem manipular ativamente o comportamento dos triatomíneos para seu próprio benefício. / Triatomine bugs are bloodsucking insects capable of transmitting Trypanosoma cruzi, the causative agent of Chagas disease. There are few studies on the virulence of this parasite to its vector and thereby, T. cruzi has been considered by several authors as non-pathogenic in this sense. Trypanosoma rangeli, another protozoan transmitted by triatomine bugs, is not pathogenic to humans, but despite several negative effects to the vector being known, their role on the behavior and reproductive biology of this insect has not been investigated yet. This thesis evaluated the effect of T. cruzi (at two rearing temperatures: 25-25ºC – the insects were kept at 25ºC both during ninfal and adult phases and 30-25ºC - the insects were kept at 30°C and transferred to 25°C after the imaginal molt) and T. rangeli (25-25ºC) infections on reproductive, mating and flight behavior of R. prolixus. First we have shown that both T. cruzi 30-25ºC and T. rangeli caused a decrease in fecundity and fertility of triatomines and these effects were more evident on T. rangeli infection. Furthermore, it was observed for the same groups that the presence of parasites decreased size, weight and protein content of eggs laid by infected pairs. The sexual behavior of insects was also affected by both T. rangeli and T. cruzi (30-25ºC) infection. The frequency and duration of matings in assays without mating choice were only altered by T. rangeli infection. Interestingly, when uninfected insects were allowed to choose between uninfected and infected partners, significantly more individuals chose uninfected partners in both T. cruzi and T. rangeli infections. The behavior of flight initiation was also altered as a result of infections. Both parasites decreased the frequency of flight initiation of insects. Additionally, an increased number of failures on flight initiation was observed in infected insects when compared to uninfected ones. Generally, infection by T. cruzi and T. rangeli resulted in negative effects on fitness of R. prolixus. In the case of T. cruzi, the rearing temperature of insects seems to be important for the occurrence of effects. It will be important to further investigate whether triatomines present behavioral responses that may control trypanosome growth through actively choosing, for example, appropriate environmental temperatures or whether trypanosomes actively manipulate the insect behavior to their own benefit.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-06-18T14:14:24Z No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_ChristianeSantosMatos (1).pdf: 3868787 bytes, checksum: aad780570d3b10f7014187a01c3cc982 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-06-18T14:14:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_ChristianeSantosMatos (1).pdf: 3868787 bytes, checksum: aad780570d3b10f7014187a01c3cc982 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-06-18T14:14:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_ChristianeSantosMatos (1).pdf: 3868787 bytes, checksum: aad780570d3b10f7014187a01c3cc982 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-18T14:14:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_ChristianeSantosMatos (1).pdf: 3868787 bytes, checksum: aad780570d3b10f7014187a01c3cc982 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou / Cenário de importantes atividades no controle da doença de Chagas (DCh), Bambuí foi o primeiro município brasileiro a alcançar a vigilância epidemiológica em 1974. O presente trabalho buscou caracterizar a atual situação epidemiológica da doença de Chagas no município de Bambuí, identificando principais grupos afetados, formas clínicas predominantes e grupos do parasito circulantes nos pacientes. Foram amostrados 1.782 indivíduos, dos quais 138 (7,7%) foram sororeagentes para T. cruzi. Para ambos os gêneros predominaram soros positivos acima dos 60 anos de idade, sendo detectadas duas mulheres mais jovens (32 e 40 anos) infectadas. Nos pacientes clinicamente avaliados, foi possível diagnosticar as formas clínicas digestiva (7/101), indeterminada (14/101), cardíaca (30/101) e cardiodigestiva (50/101), bem como a presença do grupo DTU TcII, excetuando apenas dois casos de infecção mista (DTU TcI e TcII). Dos 5.429 óbitos ocorridos em Bambuí ao longo de 31 anos, 638 (11,8%) foram devido à DCh, sendo 54,5% (348/638) referente ao sexo masculino, 45,1% (288/638) ao sexo feminino e 0,3% (2/638) tiveram registro de sexo ignorado. A faixa etária na qual se registrou o maior número de óbitos no município foi de 60 a 69 anos. Com relação à morbidade, observou-se um total 22 registros de internações em Bambuí pelo Sistema Único de Saúde no período de 1984 a 2007, sendo 7 (31,82%) referentes à homens e 15 (38,69%) à mulheres. Este trabalho pode servir como um alerta ao cuidado dos pacientes crônicos que ainda requerem atenção médica especializada e reforça a necessidade de constantes medidas de vigilância epidemiológica à endemia chagásica no município de Bambuí. / Recognising the importance of Chagas disease (Chd) in Brazil, Bambuí set up epidemiological surveillance in 1974 and was the first municipality to do so. This study aimed to characterize the current epidemiological situation of Chd in Bambuí, identifying main groups affected, the predominant clinical forms and the parasite groups circulating in patients. We sampled 1.782 individuals, of which 138 (7.7%) were tested positive for Trypanosoma cruzi. Both genders above 60 years of age were seropositive for Chagas disease, also being detected in two younger women (32 and 40 years of age). In patients clinically evaluated it was possible to diagnose digestive (7/101), undetermined (14/101), cardiac (30/101) and cardiodigestive clinic forms (50/101), as well as the presence of DTU TCII groups, except in only two cases of mixed infection (DTU TcI and TCII). Out of the 5.429 deaths occurring in Bambuí over 31 years, 638 (11.8%) were due to Chd, being 54.5% (348/638) for males, 45.1% (288/638) for females and 0.3% (2/638) had unknown sex registry. The age range at which the highest number of deaths in the municipality were registered was 60 to 69 years. With respect to morbidity, there was a total of 22 records of hospitalizations in Bambuí by the Brazilian Unified Health System during the period of 1984-2007, with 7 (31.82%) related to men and 15 (38.69%) to women. This study can be useful as a warning for the care of chronic patients who still require specialized medical attention and reinforces the need for constant surveillance measures for Chd in Bambuí.

Made available in DSpace on 2015-11-11T12:04:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 6.pdf: 1774343 bytes, checksum: 2af613e618af068cb427e382660be093 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / A doença de Chagas (DC) é uma infecção causada pelo Trypanosoma cruzi, é considerada endêmica na América Latina, afetando cerca de 15 milhões de indivíduos. Estima-se que cerca de 30 por cento das pessoas infectadas desenvolvem cardiomiopatia chagásica crônica, entre 5 à 30 anos após a infecção aguda. Com o objetivo de diferenciar portadores de DC com a evolução potencial para formas clínicas crônicas graves, pesquisadores tentam estabelecer marcadores biológicos de prognóstico da evolução da doença por meio de marcadores imunológicos. Lectina de Ligação a Manose (MBL) é uma molécula de reconhecimento de que a imunidade inata que desempenha um papel fundamental na defesa do hospedeiro, mediando a fagocitose e a destruição dos agentes patogénicos mediada pelo complemento. Existem vários estudos que enfatizam a relevância da MBL em diferentes doenças infecciosas, inflamatórias e auto-imunes. A deficiência de MBL pode implicar na susceptibilidade bacteriana, fúngica, por protozoários e infecções virais. Nosso objetivo foi investigar a associação dos níveis séricos e atividade de ligação da MBL com cardiomiopatia chagásica crônica, através da formação de um índice, que inferiu as moléculas ligantes. Para isso, foi feita uma avaliação, através de ELISA, dos níveis séricos e da capacidade de ligação da MBL, para formação desse índice de relação (Mbi), em pacientes crônicos assintomáticos e cardíacos da doença de Chagas. O estudo incluiu 77 pacientes portadores DC indeterminados (n = 19), cardíaco grave (n = 29) e cardíaco leve (n = 29). Não foi observada diferença significativa nos níveis séricos de MBL entre os grupos de pacientes estudados. No entanto, em relação a atividade de ligação da MBL, houve diferença estatística entre indeterminados e cardíacos leves (p=0,02) e indeterminados e cardíacos graves (p=0,03). Com a formação do Mbi a comparação entre todos os grupos tiveram diferença estatística significante: indeterminados versus cardíacos leves p=0,02; cardíacos leves versus cardíacos graves p=0,01 e indeterminados versus cardíacos grave p < 0,0001. Com base nesses resultados concluímos que, a MBL é um possível marcador para a gravidade da cardiomiopatia chagásica crônica, visto que, o índice (Mbi) criado nesse estudo foi correlacionado com as diferentes formas estudadas. Novos estudos são necessários para confirmar da MBL como indicador da evolução/progressão para as formas mais graves da doença, para assim contribuir com a melhora na qualidade de vida dos pacientes com doença de Chagas crônica (AU)

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-20T16:44:55Z No. of bitstreams: 1 Tunes.pdf: 27891545 bytes, checksum: 4feb76814de1de7da1d4a476de6f2134 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-20T16:45:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tunes.pdf: 27891545 bytes, checksum: 4feb76814de1de7da1d4a476de6f2134 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-20T16:45:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tunes.pdf: 27891545 bytes, checksum: 4feb76814de1de7da1d4a476de6f2134 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Rene Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / No Brasil, a doença de Chagas e as leishmanioses têm importante impacto na saúde pública. Os fármacos usados no tratamento dessas enfermidades apresentam limitações que tornam necessária a busca por novas alternativas terapêuticas. Nesse sentido, no presente estudo foram selecionados sete produtos naturais bioativos (PNB) e um derivado de produto natural (dPNB) e suas atividades tripanocida e leishmanicida foram determinadas e/ou confirmadas. A eleuterine, a tiofenonaftoquinona (TNQ) e a aurentiacina foram descritas como leishmanicidas pela primeira vez, sendo suas atividades antiamastigota de 99, 99 e 98 %, respectivamente. O lapachol, a chalcona 1 e a chalcona 2 tiveram o efeito leishmanicida confirmado com atividade de 85, 99 e 99 %, respectivavente. Nenhuma substância foi considerada ativa no modelo de T. cruzi utilizado. Devido às quantidades de substâncias disponíveis, apenas o lapachol e a TNQ tiveram seus mecanismos de ação leishmanicida estudados. As concentrações inibitórias de 50% (CI50) da TNQ foram inferiores àquelas do lapachol em promastigotas (2 e 25 μM), amastigotas recuperadas de lesão (22 e 224 μM) e amastigotas intracelulares (7,4 e 84 μM). A razão entre a CI50 em amastigotas intracelulares e macrófagos foi utilizada para o cálculo do índice de seletividade, sendo este 3,8 para o lapachol e 7,7 para a TNQ. Os PNB e dPNB leishmanicida foram avaliados quanto à atividade inibitória da enzima tripanotiona redutase (TR), sendo que nenhum foi capaz de inibir a enzima. Os efeitos induzidos por TNQ e lapachol sobre a atividade mitocondrial de promastigotas foram avaliados por citometria de fluxo e respirometria. O tratamento com lapachol induziu perda do potencial de membrana mitocondrial e reduziu o consumo de oxigênio pelos parasitos. Por sua vez, a TNQ não alterou esses parâmetros. Análises de microscopia eletrônica de transmissão mostraram que o tratamento com lapachol ou TNQ induziu danos no complexo de Golgi e na bolsa flagelar, formação de vesículas e perfil de autofagia. O lapachol, mas não a TNQ, também induziu alterações ultraestruturais nas mitocôndrias das promastigotas. Em conjunto, os resultados permitem propor que a mitocôndria seja um importante alvo celular para o lapachol. Uma vez que a TNQ não causou alterações na mitocôndria dos parasitos, mas induziu danos em outras organelas, pode-se propor que seu mecanismo de ação esteja relacionado à indução de estresse oxidativo. Este trabalho reforça a importância dos PNB na descoberta de novas substâncias bioativas, as quais podem ser objeto de estudos de mecanismos de ação, a fim de se expandir o conhecimento disponível para o processo de desenvolvimento de novos fármacos usados para o tratamento de endemias que afligem milhões de pessoas como as leishmanioses e a doença de Chagas. / In Brazil, Chagas disease and leishmaniasis cause great impact on public health. The drugs currently used to treat these diseases have limitations that make necessary the search for new therapeutic alternatives. In this context, seven bioactive natural products (BNP) and one derivative (BNPd) were selected for investigations. Their trypanocidal and leishmanicidal activities were detected or confirmed. Eleutherine, naphthothiophenquinone (TNQ) and aurentiacin had their leishmanicidal activity described for the first time in this study, reducing almost 100% of the parasites growth. Lapachol, chalcone 1 and chalcone 2 had their leishmanicidal activity confirmed. None were active on T. cruzi intracellular amastigote and trypomastigote model. Because of the available amounts of compounds, only lapachol and TNQ had their leishmanicidal mechanism of action studied. The inhibitory concentrations of 50% of the parasite growth (IC50) induced by TNQ were inferior of that of lapachol in promastigotes (2 μM and 25 μM), lesion derived amastigotes (22 μM and 224 μM) and intracellular amastigotes (7.4 μM and 84 μM). The ratio between the IC50 on macrophages and intracellular amastigotes was used to calculate the selectivity index, lapachol’s was 3.8 and TNQ’s was 7.7. The leishmanicidal BNP and BNPd were evaluated as to their ability to inhibit trypanothione reductase (TR) and none of the compounds were able to inhibit the enzyme. The effects induced by the compounds on promastigotes mitochondrial activity were assessed using flow citometry and respirometry. Treatment using lapachol induced loss of mitochondrial membrane potential and reduced oxygen consumption by the parasites. On the other hand, TNQ did not alter those parameters. Transmission electron microscopy showed that lapachol and TNQ induced damage to the Golgi complex, flagellar pocket, formation of vesicles and autophagy profile. Lapachol, but not TNQ, induced ultrastrucutral alterations on promastigotes mitochondria. These results suggest that mitochondria are an important target for lapachol. As TNQ did not alter the parasites mitochondrial function or structure, but induced important ultrastructural alterations in other organelles, we can assume that its mechanism of action could be related to induction of oxidative stress. The present work reinforces the importance of BNP in the discovery of new active compounds that can be used for mechanism of action studies, contributing to the knowledge required for drug development to treat diseases that afflict millions of people worldwide such as leishmaniasis and Chagas diseases

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-23T12:39:35Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_DIP_NewmarPintoMarliere.pdf: 955219 bytes, checksum: 062701a2ea1b04c3ce8ef829141cb40f (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-23T12:39:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_DIP_NewmarPintoMarliere.pdf: 955219 bytes, checksum: 062701a2ea1b04c3ce8ef829141cb40f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-23T12:39:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_DIP_NewmarPintoMarliere.pdf: 955219 bytes, checksum: 062701a2ea1b04c3ce8ef829141cb40f (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Rene Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Rhodnius prolixus é um inseto hematófago considerado principal transmissor do Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, na Colômbia e Venezuela. Além do T. cruzi, ele pode transmitir o Trypanosoma rangeli a várias espécies de mamíferos, incluindo o homem. Durante o dia, estes insetos são encontrados no interior de abrigos, agregados com seus co-específicos em um estado de imobilidade denominado acinese. Durante a noite, estes insetos apresentam um perfil de atividade locomotora com dois picos característicos: um na primeira metade da escotofase, relacionado com a procura por hospedeiros e parceiros sexuais, e outro, na interfase entre o fim da fase escura e a fotofase, direcionado à procura de refúgios. Como seus hospedeiros são comumente vertebrados predadores de insetos, os triatomíneos podem ser mortos durante sua busca e o subsequente processo de alimentação. Desta maneira, o presente estudo avaliou se a infecção pelos tripanosomas acima citados altera o nível de atividade locomotora, os padrões de uso de abrigos e as taxas de predação sofridas por ninfas de R. prolixus. Além disso, avaliou-se a possibilidade de camundongos se infectarem ao ingerir ninfas infectadas com T. rangeli. Inicialmente, demonstrou-se que insetos infectados com T. cruzi apresentam uma diminuição nos níveis de atividade locomotora durante as primeiras horas da escotofase. Em contraste, a infecção por T. rangeli induziu a um aumento no nível de atividade locomotora durante praticamente todo o ciclo diário. Os padrões de uso de abrigos por ninfas infectadas com T. cruzi praticamente não foram alterados, porém esses insetos foram significativamente mais predados que insetos sadios. Trypanosoma rangeli modificou todos os parâmetros avaliados relacionados com o uso de abrigo. A infecção por este parasito aumentou a porcentagem de insetos que permaneceram fora dos abrigos, a exposição ao hospedeiro e consequentemente suas taxas de predação. Por fim, demonstrou-se que camundongos não se infectam com T. rangeli pela via oral. As alterações observadas, principalmente aquelas das taxas de predação, podem ter importantes implicações na transmissão de ambos os tripanosomatídeos na natureza, e são discutidas no presente trabalho. / The hematophagous insect Rhodnius prolixus is considered the main vector of Trypanosoma cruzi, the etiological agent of Chagas disease, in Colombia and Venezuela. In addition to T. cruzi, these insects can transmit Trypanosoma rangeli to different mammals, including humans. During daylight hours, triatomines remain hidden in shelters, aggregated with co-specifics in an immobility state called akinesis. During night time, these insects become active, presenting two locomotory peaks: cone during the first half of the scotophase, related to host and sexual partner search, and another at the scotophase/photophase transition, when they return to their refuges. Triatomines can be eaten during host seeking and feeding because triatomine hosts are frequently insect predators. In this study, we evaluated whether infection by T. cruzi or T. rangeli influences the locomotor activity, the use of shelters and the predation rates suffered by R. prolixus nymphs. In addition, we evaluated whether mice can become infected with T. rangeli by ingestion of infected R. prolixus nymphs. T. cruzi infected insects exhibited a decreased locomotor activity level during the first hours of the scotophase. In contrast, T. rangeli infected insects showed increased locomotor activity during most daylight hours. T. cruzi infected nymphs did not show alterations in their patterns of shelter use. However, they suffered a significantly higher predation rate than healthy bugs. On the other hand, T. rangeli infected insects presented an altered pattern of shelter use. Specifically, these insects tended to remain out of their shelters, being exposed to their hosts and suffering higher predation rates. Finally, mice did not become infected by predating on T. rangeli infected insects. These behavioral changes, and especially the higher predation rates observed for infected insects, may have important implications for the transmission of both trypanosomatids in nature.

Made available in DSpace on 2015-12-29T16:20:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 victor_gomes_ini_mest_2013.pdf: 834411 bytes, checksum: 6fd39b4f752fd7cb7f1a00c4e1e9e9ff (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-11-23 / Fundamento: Apesar dos avanços no controle da transmissão da doença de Chagas, estima-se que ainda existam cerca de 2,5 milhões de portadores crônicos no Brasil. A forma crônica cardíaca desta doença apresenta alta morbimortalidade e estratégias que possam reconhecer o dano ao miocárdio de forma precoce podem ter grande utilidade. A análise da deformação do miocárdio quantifica a contratilidade miocárdica regional e global e recentemente foram desenvolvidos programas que permitem que essa análise possa ser feita pelo ecocardiograma. Objetivos: Determinar se pacientes com doença de Chagas crônica com fração de ejeção do ventrículo esquerdo (VE) normal possuem alterações da função sistólica do VE identificadas pela análise da deformação miocárdica bidimensional (\201Cstrain\201D ou \03B5). Metodologia: Pacientes com doença de Chagas crônica sem lesão cardíaca aparente (SLC) ou no estágio A da forma cardíaca (eletrocardiograma alterado com função sistólica global e segmentar normais no ecocardiograma) foram examinados usando-se ecocardiógrafo Vivid 7 (GE Medical Systems). A análise do \03B5 global e segmentar (direções longitudinal, circunferencial e radial) foi realizada através do programa Echopac (GE Medical Systems). Voluntários saudáveis (exame físico, eletrocardiograma e ecocardiograma normais e sorologia para doença de Chagas negativa) constituíram o grupo controle (C). Os grupos foram comparados por análise de variância (ANOVA). Os pacientes tinham idade entre 18 e 60 anos Resultados: Foram avaliados 52 pacientes SLC, 29 no estágio A e 25 controles que não diferiram entre si nas variáveis de idade, diâmetros cavitários e fração de ejeção de VE. O \03B5 global longitudinal (C: -19 ± 3%; SLC: -19 ± 2%; A: -20 ± 2%), o circunferencial (C: -20 ± 3%; SLC: -20 ± 3%; A: -19 ± 3%) e o radial (C: 43 ± 9%; SLC: 44 ± 13%; A:42 ± 14%) não diferiram entre os grupos. A análise segmentar revelou que o \03B5 x circunferencial do segmento ínfero-lateral medial era menor em pacientes SLC e no estágio A que em controles (C: -19 ± 8%; SLC: -15 ± 7%; A: -14 ± 6%; p=0,04). O \03B5 circunferencial do segmento ântero-lateral medial também foi menor em pacientes no estágio A que em controles (C: -17 ± 5%; SLC: -14 ± 6%; A: -13 ± 7%; p=0,04). Conclusões: Pacientes com doença de Chagas crônica com fração de ejeção do VE normal apresentam strain global longitudinal, circunferencial e radial similar a de controles, porém apresentaram redução do \03B5 circunferencial segmentar em relação aos controles. Novos estudos são importantes para elucidar o valor prognóstico de tais achados / Background: Despite advances in the control of Chagas disease transmission, 2.5 millions of Brazilians are estimated to be chronic infected by Trypanosoma cruzi . The cardiac form of the chronic Chagas dise ase present high morbimortality and any strategy able to detect early myocardial da mage is welcome. Myo cardial contractility can be noninvasively quantified by speckle tracking analysis yiel ding values of global and segmental two-dimensional deformation or strain. Objectives: We sought to determine if patients w ith chronic Chagas disease and normal left ventricular (LV) ejection fraction pres ent abnormalities in myocardial contractility identified by two-dimensional strain ( ε ) analysis. Methods: Echocardiograms of patients at the chr onic phase of the Ch agas disease with unapparent cardiac damage (ICD) or with the stage A of the cardiac form (changes in electrocardiogram but with normal global an d segmental LV systolic function at the echocardiogram) were performed using Vivi d 7 (GE Medical Systems) machine. Two- dimensional global and segmental LV longitudinal, circumferential and radial ε were determined by off-line analysis using Echop ac software (GE medical System). Healthy volunteers with normal physical examinati on, electrocardiograms and echocardiograms and negative serology for Chagas disease composed the control group (C). Data between groups were compared using one-way ANOVA followed by Student-Newman- Keuls post-hoc analysis. Patients ag ed between 18 and 60 years old. Results: A total of 52 ICD and 29 stage A patient s and 25 controls were evaluated. There were no significant diffe rences regarding age, cavity dimensions and LV ejection fraction among the group s. Global longitudinal ε (C: -19 ± 3%; ICD: -19 ± 2%; A: -20 ± 2%), circumferential ε (C: -20 ± 3%; ICD: -20 ± 3% ; A: -19 ± 3%) and radial ε (C: 43 ± 9%; ICD: 44 ± 13%; A: 42 ± 14%) were also similar among the studied groups. Segmental LV ε analysis revealed that circumferential ε of the medial inferolateral wall was lower in both ICD and stage A groups than in controls (C: -19 ± 8%; ICD: -15 ± 7%; A: -14 ± 6%; p=0.04). Circumferential ε of the medial anterolateral wall was also lower in the stage A group than in controls (C: -17 ± 5%; SLC: -14 ± 6%; A: -13 ± 7%; p=0.04). Conclusions: Patients with chronic Chagas disease and normal LV ejection fraction show global longitudinal, circumferential e radial ε similar to controls, but present reduced segmental circumferential ε against controls. Further studies should be done to evaluate the potential prognos tic value of these findings.

Made available in DSpace on 2016-02-26T13:34:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 marianne_silva_ioc_mest_2015.pdf: 2399331 bytes, checksum: 4ca5147a85916a54e8f78b5504ea6ba3 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / A doença de Chagas (DC), causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, é uma doença negligenciada endêmica em diferentes regiões empobrecidas da América Latina. O tratamento, baseado em dois nitroderivados, Nifurtimox e Benzonidazol (Bz), é insatisfatório, demandando a busca de novos fármacos com ação tripanocida que sejam mais seletivos e eficazes. Nesse âmbito, o presente trabalho busca a identificação de novos agentes antiparasitários para a DC, explorando a avaliação fenotípica de novas amidinas aromáticas sintéticas in vitro incluindo ensaios de combinação entre estes compostos. Dez novas amidinas foram testadas sobre tripomastigotas sanguíneos e amastigotas de diferentes cepas do T. cruzi (Y e Tulahuen) e também sobre células de mamífero hospedeiras (linhagem L929 e células cardíacas) para determinar seu perfil eficácia e de toxicidade, respectivamente. Dentre as moléculas testadas (apresentando um ou dois grupamentos catiônicos terminais), cinco foram mais ativas sobre tripomastigotas sanguíneos que o fármaco de referência (Bz), sendo uma delas, a DB2267 (molécula dicatiônica) a mais eficaz, exibindo EC50 de 0,23 \03BCM e um índice de seletividade (IS) de 417. Esta diamidina foi 28 vezes mais ativa e cerca de três vezes mais seletiva que Bz Para determinar se a combinação de duas amidinas teria um efeito tripanocida superior ao seu uso em monoterapia, tripomastigotas sanguíneos foram incubados com DB2267 e DB2236 em proporções fixas e os resultados mostraram apenas um efeito aditivo com \01A9FIC<4. Interessantemente, quando formas intracelulares foram expostas à DB2267, sua atividade foi relacionada à cepa do parasito, sendo eficaz (EC50 = 0.87 ± 0.05 \03BCM) contra DTU II (cepa Y), mas não contra um representante da DTU VI (Tulahuen), mesmo quando utilizamos veículo diferente do DMSO (\03B2-ciclodextrina). Esta divergência pode estar relacionada a diferenças inerentes aos alvos e/ou rotas metabólicas das cepas do parasito e que merecem ser mais investigadas visando conhecer melhor a relação entre as características estruturais e ação universal das moléculas sobre DTUs e formas do T. cruzi para o desenho de compostos mais promissores. Devido à fluorescência intrínseca apresentada pelas amidinas, a captação de duas delas foi avaliada. Os dados obtidos com a amidina não ativa (DB2236) e com a outra ativa (DB2267) sobre amastigotas da cepa Y revelaram que ambas foram localizadas intracelularmente, mas em compartimentos distintos: DB2236 no citoplasma, enquanto DB2267 no núcleo. Nossos dados são encorajadores a respeito da atividade antiparasitária das amidinas aromáticas, no tocante a futuras investigações de novos agentes promissores para o tratamento da DC / Chagas disease (CD), caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, is a neglected disease endemic in different poor areas of Latin America. The treatment, based on two nitroderivatives, Nifurtimox and Benznidazole (Bz), is unsatisfactory, demanding the screening of new potential trypanocidal drugs more selective and potent. In this scope, the present work deals with the identification of new anti - parasitic agents for CD, exploring the phenotypic screening of novel synthetic aromatic amidines in vitro and also combination assays between these compounds. The novel ten amidines were tested against bloodstream trypomastigotes (BT) and amastigote forms of different T.cruzi strains (Y and Tulahuen) and were also evaluated on mammalian host cells (L929 cells and cardiac cells) to check their toxicity profile. Among these molecules, five were more active against BT than the reference drug (Bz), being one of them, the DB2267 (a dicationic molecule) the most potent, exhibiting an EC 50 value of 0.23 μM and a se lectivity index (SI) of 417. This diamidine was 28 - fold more active and about 3 times more selective than Bz. To ascertain if the combination of two amidines could improve their trypanocidal activity, BT were incubated with DB2267 and DB2236 in fixed - ratio proportions and the data showed only an additive effect with ƩFIC<4. Interest ingly, when intracellular forms were exposed to DB2267, its activity was related to the parasite strain, being effective (EC 50 = 0.87 ± 0.05 μM) against DTU II (Y strain) but not against one representative of DTU VI (Tulahuen) even using different vehicles (β - cyclodextrins and DMSO). This discrepancy might be related to differences concerning the targets and/or metabolic pathways of the parasite that deserve to be more investigated aiming to better understand the relationship between the structural characte ristics and universal action of the molecules against DTUs and forms of the T.cruzi for the design of more promising compounds . Due to the intrinsic fluorescence presented by the amidines, the uptake of two of them was assessed. The data obtained with the non - active amidine (DB2236) and the other active one (DB2267) against amastigotes of the Y strain showed that both were localized intracellular ly , but in distinct compartments : DB2236 in the cytoplasm , while DB2267 in the nucleus . Our results are encouragi ng regarding the antiparasitic activity of the a romatic amidines , referring to future investigations of new promising agents for the treatment of CD / Chagas disease (CD), caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, is a neglected disease endemic in different poor areas of Latin America. The treatment, based on two nitroderivatives, Nifurtimox and Benznidazole (Bz), is unsatisfactory, demanding the screening of new potential trypanocidal drugs more selective and potent. In this scope, the present work deals with the identification of new anti - parasitic agents for CD, exploring the phenotypic screening of novel synthetic aromatic amidines in vitro and also combination assays between these compounds. The novel ten amidines were tested against bloodstream trypomastigotes (BT) and amastigote forms of different T.cruzi strains (Y and Tulahuen) and were also evaluated on mammalian host cells (L929 cells and cardiac cells) to check their toxicity profile. Among these molecules, five were more active against BT than the reference drug (Bz), being one of them, the DB2267 (a dicationic molecule) the most potent, exhibiting an EC 50 value of 0.23 μM and a se lectivity index (SI) of 417. This diamidine was 28 - fold more active and about 3 times more selective than Bz. To ascertain if the combination of two amidines could improve their trypanocidal activity, BT were incubated with DB2267 and DB2236 in fixed - ratio proportions and the data showed only an additive effect with ƩFIC<4. Interest ingly, when intracellular forms were exposed to DB2267, its activity was related to the parasite strain, being effective (EC 50 = 0.87 ± 0.05 μM) against DTU II (Y strain) but not against one representative of DTU VI (Tulahuen) even using different vehicles (β - cyclodextrins and DMSO). This discrepancy might be related to differences concerning the targets and/or metabolic pathways of the parasite that deserve to be more investigated aiming to better understand the relationship between the structural characte ristics and universal action of the molecules against DTUs and forms of the T.cruzi for the design of more promising compounds . Due to the intrinsic fluorescence presented by the amidines, the uptake of two of them was assessed. The data obtained with the non - active amidine (DB2236) and the other active one (DB2267) against amastigotes of the Y strain showed that both were localized intracellular ly , but in distinct compartments : DB2236 in the cytoplasm , while DB2267 in the nucleus . Our results are encouragi ng regarding the antiparasitic activity of the a romatic amidines , referring to future investigations of new promising agents for the treatment of CD

Made available in DSpace on 2016-03-18T12:14:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 luiz_berbert_ioc_dout_2015.pdf: 3077511 bytes, checksum: cc9325d5c412703493bb6bb6d148b70c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / A doença de Chagas permanece sendo um grave problema de saúde pública nas Américas. Na fisiopatologia da doença, é observada uma intensa resposta imune, com alta produção de citocinas inflamatórias e quimiocinas que contribuem para o tráfego de células ativadas para tecidos alvo. Este evento de migração celular pode estar relacionado à formação de cardiopatia chagásica nos indivíduos infectados. Um desequilíbrio na produção hormonal do eixo Hipotálamo-Pituitária-Adrenal (HPA) foi observado em pacientes chagásicos, e, esse processo pode influenciar o sistema imune e possivelmente a gênese da cardiopatia. Nesse estudo, foi avaliada a resposta migratória de células T de pacientes chagásicos com diferentes formas de cardiopatia, correlacionando esses eventos com a produção de cortisol e DHEA ocorrida na fase crônica da doença. Primeiramente foi observado que TNF, IL-6, IFN-\03B3, IL-17, IL-10 e TGF-\03B2 são mais expressas de acordo com a gravidade da cardiopatia Em paralelo a esse aumento de citocinas foi observado um desequilíbrio hormonal no eixo HPA com diminuição do hormônio DHEA sérico e aumento da razão Cortisol/DHEA circulantes. Além disso, foi observado um aumento da resposta migratória de células T, com fenótipo ativado (HLADR+/VLA-4+) sobre fibronectina, CXCL12 e TNF-\03B1, e também combinados a um pré tratamento de DHEA e Cortisol destas células. Estes resultados indicam que distúrbios neuroendócrinos, correlacionados a um perfil inflamatório sistêmico, podem contribuir para aumentar o potencial migratório de células T aos sítios inflamatórios, incluindo tecido cardíaco, estando envolvidos na cardiopatia relatada na doença / Chagas disease remains a serious public health problem in the Americas. In the pathophysiology of disease, it is observed an intense immune response with high expression of inflammatory cytokines and chemokines that contribute to activated T cells traffic, that target the inflamed tissue. These cell migration events may be related to the formation of Chagas heart disease in infected individuals. An imbalance in hor mone production of the Hypothalamus - Pituitary - Adrenal axis (HPA) was observed in patients with Chagas disease, and this process could influence the immune system, including, cardiopathy formation . In this study, T cells migratory response from chagasic patients with different forms of cardiopathy was performed to correlate these events with cortiso l and DHEA production in the chronic phase of the disease. Fir stly, it was observed that inflammatory cytokines , such as TNF, IL - 6, IFN - γ , IL - 17, IL - 10 e TGF - β were express ed in terms of disease severity. I n parallel with cytokine enhancement, it was observed a hormonal imbalance in the HPA axis, where a decrease in hormone DHEA resulted in increased cortisol ratio / circulating DHEA. In addition, there was an increase in migratory response of T cells with an activate d phenotype ( HLADR + /VLA - 4 + ) over fibronectin, CXCL12 and TNF - α, and also a combined pre treatment of DHEA and cortisol. These results indicate that neuroendocrine disorders correlated to a systemic inflammatory profile, can increase migration potential of T cells to inflammatory sites, including heart tissue and thus being involved in heart disease

Made available in DSpace on 2016-03-28T12:39:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 laura_coelho_ioc_mest_2015.pdf: 3578991 bytes, checksum: 9179d8e8f9cbb8e060f9f7033b71f08c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / A fibrose cardíaca é uma importante manifestação da cardiomiopatia chagásica. O papel dos fibroblastos cardíacos (FCs) nesse processo é pouco estudado. Nesse trabalho investigamos o efeito da infecção pelo Trypanosoma cruzi (cepa Y) e do fator de necrose tumoral (TNF) sobre a ativação de FCs in vitro, visando compreender o papel de FCs ativados no processo de gênese da fibrose cardíaca na infecção chagásica. Os FCs foram obtidos a partir de culturas primárias de células cardíacas de fetos de camundongos Swiss Webster, e sua ativação avaliada através da análise da proliferação, diferenciação destas células em miofibroblastos e a expressão de proteínas de matriz extracelular (ECM) através de imunofluorescência (IF) e Western blotting (WB). A caracterização das culturas foi feita através de análise morfológica e funcional e pela análise da expressão dos marcadores tropomiosina sarcomérica (TS) e receptor de domínio de discoidina 2 (DDR2). No nosso sistema de cultivo, 40% dos FCs foram infectados pelo T. cruzi quando utilizamos uma multiplicidade de infecção (MOI) de 10 e 24h de interação As análises da expressão de alfa actina de músculo liso (\03B1-SMA) por WB, revelaram aumento desta proteína nas culturas infectadas sugerindo diferenciação para miofibroblasto nos tempos de 6h e 24h pós-infecção. As análises de proteínas de ECM revelaram aumento na expressão de fibronectina (FN) após 6h, 24h e 48h de infecção e de laminina (LN) após 6h e 24h, quando comparadas as culturas não infectadas. O tratamento com TNF não estimulou a produção de TNF e NO pelos FCs. TNF também não induziu a diferenciação e a síntese de ECM, porém influenciou o processo de proliferação destas células, revelado pelo aumento de células ki-67+ por IF. Ainda, a citocina reduziu as taxa de infecção dos FCs pelo parasita. Assim, nossos resultados demonstram um efeito da infecção pelo T. cruzi e do TNF sobre a ativação de fibroblastos cardíacos, seja através da indução de diferenciação celular e expressão de proteínas de ECM, ou ainda pela indução de proliferação dos FCs, processos estes que podem contribuir para a gênese da fibrose cardíaca observada na doença de Chagas / Cardiac fibrosis is an important manifestation of Chagas cardiomyopathy . The involvement of cardiac fibroblasts (CFs) in this process is understudied. Here we investigated the effect of Trypanosoma cruzi infection (Y strain) and tumor necrosis factor (TNF) on CFs in vitro , aiming to understand the role of activated CFs in the process of genesis of cardiac fibrosis in chagasic infection. The CFs were obtained from primary cardiac cell cultures from Swiss Webster mice fetuses, and CFs activation analyzed by proliferation, myofibroblast differentiation and extracellular matrix (E CM) proteins expression, through immunofluorescence (IF) and Western blotting (WB). The characterization of cultures was made through morphological and functional analysis and through analysis of expression of the markers sarcomeric tropomyosin (TS) and di scoidin domain receptor 2 (DDR2). In our culture system, 40% of CFs were infected by T. cruzi using a multiplicity of infection (MOI) of 10 e 24h of interaction. WB analysis of alpha sm ooth muscle actin (α - SMA) expression revealed increased expression of this protein in T. cruzi - infected CFs suggesting cell differentiation into myofibroblasts at 6h and 24h post infection. ECM proteins analyses revealed increased expression of fibronectin (FN) at 6h, 24h e 48h pos infection and laminin (LN) at 6h and 24h in T. cruzi - infected cultures compared with non - infected ones. TNF treatment did not stimulate TNF and NO production by CFs. TNF also did not induce differentiation and ECM production by C Fs, but influenced the proliferation process of these cells, revealed by increase of ki - 67+ cells, through IF. Furthermore, the cytokine decrease the infection rate of CFs by T. cruzi . Therefore, our results demonstrate an effect of T. cruzi infection and TNF on cardiac fibroblasts activation, either through induction of cell differentiation and expression of ECM proteins, or by induction of CFs proliferation, processes which may contribute to the genesis of cardiac fibrosis in Chagas disease.