Processos biotecnológicos dependem significativamente das técnicas de separação e purificação utilizadas, para manter boa relação custo-benefício na produção em escala industrial de produtos biotecnológicos com fins comerciais, industriais e terapêuticos. A aplicação do sistema micelar de duas fases aquosas (SMDFA) é proposta como alternativa para purificação de biomoléculas/biopartículas, pois permite sua separação e análise, muitas vezes sem que essas percam sua atividade ou propriedades desejadas. Com essa técnica é possível realizar uma partição seletiva que possibilita altos rendimentos. Esse trabalho destinou-se a estudar o emprego dessa metodologia na extração e purificação de Adenovírus em sistema micelar de duas fases aquosas formado por Triton X-114/Suspensão viral. Os ensaios foram realizados em sistemas de 5 g seguindo um planejamento fatorial completo (23) com 4 pontos centrais. Os fatores estudados foram temperatura de extração, pH da suspensão viral e concentração do tensoativo. Sistemas contendo massas de 3g, 10g e 40g foram avaliados. Foi avaliado o efeito do processo de extração com SMDFA sobre a integridade e infectividade de Adenovírus. Alguns dos parâmetros avaliados no processo foram a recuperação da potência viral (RPv) e a recuperação da potência viral específica (RPvø). Esses dois parâmetros avaliam a inativação do Adenovirus pelo processo de extração e ambos apresentaram melhoras quando comparados com a própria suspensão viral para alguns dos sistemas estudados (i.e RPv:341 % e RPvø 1466 %). Esses resultados indicam que o SMDFA foi capaz de particionar seletivamente as partículas virais infecciosas. De acordo com os resultados do planejamento é possível aumentar ainda mais esses resultados controlando as variáveis concentração de tensoativo, pH da suspensão viral e temperatura de extração. / Biotechnological processes depend significantly on separation and purification techniques used to maintain cost-effective industrial-scale production of biotechnological products for commercial, industrial and therapeutic uses. The application of the aqueous two-phase micelar system (ATPMS) is proposed as an alternative for purification, since it allows the separation and analysis of biomolecules /bioparticles, often without loses of activity or their properties. This allows to perform a selective partition that enables high yields. This work aims to study the use of this methodology in the extraction and purification of adenovirus in micelle aqueous two-phase formed by TritonX-114/Viral suspension. All assays were performed in 5 g systems following a full factorial design (23) with four central points. The studied factors were extraction temperature, pH of the viral suspension and concentration of the surfactant. Systems containing masses of 3g, 10g and 40g were evaluated. Extraction procedure effects over integrity and infectivity of adenovirus were also evaluated. Some of the parameters evaluated in the viral recovery process were viral potency (RPv) and recovery of viral specific potency (RPvø). These two parameters measure the inactivation of Adenovirus by the extraction process and both showed improvement when compared with the viral suspension for some of the systems studied (i.e RPv: 341% and RPvø 1466%). These results show that ATPMS selectively partition the infectious viral particles. According to the results of the experimental design is possible to increase, even further, these results controlling the surfactant concentration, viral suspension pH and temperature of extraction.

Made available in DSpace on 2017-07-21T20:42:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ALEXEYOSA.pdf: 5421732 bytes, checksum: d315c8a952abc240783ef27ca2d03d74 (MD5) Previous issue date: 2011-03-30 / The ceramic materials have great potential for structural applications because of their have excellent mechanical properties, eg, high hardness, high mechanical strength and resistance to aggressive media. However their low toughness and bending resistance, limiting their range of applications and open interest for researchers for better mechanical properties. Inclusions of nanometric particles in ceramic matrix, called nanocomposites, and the control of ceramic processing, by controlling grain size and densification, can be used for produce ceramic products with higher strength and toughness. One method to control the microstructure that has been studied is the two-step sintering, which has been successfully applied for the densification of nanometric and ultra fine ceramic powders without grain growth. In this work, the two-step sintering of nanocomposite of alumina with 5% volume nanoparticles zirconia was studied. Two proposals in two-step of sintering were studied, of which one consisted to heat the nanocomposite to a high temperature and then rapid cool down to a lower temperature sintering, and on the other proposal was made a step at a temperature below the initiation of densification, followed by heating to the maximum densification rate temperature. The sintering temperature for steps were chosen from constant-heating-rate and conventional sintering. The results showed that the two proposals were efficient to control the grain growth and densification in alumina-zirconia nanocomposites, and, with the sintering in twosteps, it was possible to reduce the grain size up to 70% of the grain size of nanocomposite sintered conventionally. / Os materiais cerâmicos apresentam grande potencial para aplicações estruturais, pois possuem excelentes propriedades mecânicas como, por exemplo, alta dureza, alta resistência mecânica à compressão e inércia química. Porém, a sua baixa tenacidade à fratura e baixa resistência à flexão, limitam sua gama de aplicações e gera interesse para estudos em busca de melhores propriedades mecânicas. A inclusão de partículas nanométricas numa matriz cerâmica, que são os chamados nanocompósitos, e o controle do processamento cerâmico, através do controle do tamanho de grão e densificação, podem auxiliar na obtenção de produtos cerâmicos de maior resistência mecânica e tenacidade. Um método de controle da microestrutura que vem sendo estudado é a sinterização em duasetapas, a qual vem sendo aplicada com sucesso para a densificação de pós cerâmicos nanométricos e ultra finos sem crescimento de grãos. Nesse trabalho, foi estudada a sinterização em duas-etapas de nanocompósitos de alumina com 5% em volume de partículas de zircônia nanométrica. Duas propostas de sinterização em duas etapas foram estudadas. Uma consistiu em aquecer o nanocompósito rapidamente a uma alta temperatura e em seguida resfria-lo ao patamar de sinterização; na outra proposta foi feito um patamar de queima numa temperatura abaixo do início do processo de densificação, seguido do aquecimento do nanocompósito até a temperatura de máxima taxa de densificação. As temperaturas para as etapas de sinterização foram escolhidas a partir da sinterização a taxa de aquecimento constante e da sinterização convencional. Os resultados mostraram que a duas propostas estudadas foram eficientes para controlar o crescimento de grãos e a densificação nos nanocompósitos alumina-zircônia, sendo que, com as sinterizações em duas-etapas, foi possível reduzir o tamanho de grão em até 70% do valor do tamanho de grão do nanocompósito sinterizado convencionalmente.

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2016-03-09T17:44:12Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Adelson Cândido Mesquita - 2015.pdf: 7658590 bytes, checksum: 867da7d107246060393ecd545666f566 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-03-10T11:59:04Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Adelson Cândido Mesquita - 2015.pdf: 7658590 bytes, checksum: 867da7d107246060393ecd545666f566 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-10T11:59:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Adelson Cândido Mesquita - 2015.pdf: 7658590 bytes, checksum: 867da7d107246060393ecd545666f566 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-11-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The proposed dissertation aimed to experimental studies and computational modeling of the behavior of two pile caps, with sockets embedded, subjected to the center load. Models varying the type of conformation of the column and walls of the cup were adopted. This variable was chosen because it was found that for glasses partially embedded blocks with the choice of smooth or rough wall changes significantly the distribution of the flows of compressive stress and tensile thus modifying the strut and tie model using in the design. Thus, through the investigation of this variable, we analyzed the influence of the conformation of the walls connecting the structural behavior of the pile cap. Features such as diameters of piles, pillar dimensions, geometry of the blocks and reinforcement ratio were not considered variables, so that there were no differences in the formation of fields and stress paths. The experimental part of this dissertation was based on the characterization of the materials that make up the parts (concrete and steel), and the construction and testing three two pile caps, one reference (monolith), with rough and connection with smooth connection. Through trials, it was found that the obtained pile cap with rough connection performance equal to 66% of the monolithic pile cap, while pile cap binding obtained with smooth performance of only 36%. In the numerical step, numerical simulations were performed using the ANSYS ® (SYStem Analyser - ANSYS, INC, version 14.0) program, based on the Finite Element Method (FEM). Considered behavior no-linearity of concrete and steel, and the influence of reinforcement in structural behavior of the pile caps. Will also checked the variation of the experimental and theoretical results with the lattice model used in design, beyond the strut and tie model.The proposed dissertation aimed to experimental studies and computational modeling of the behavior of two pile caps, with sockets embedded, subjected to the center load. Models varying the type of conformation of the column and walls of the cup were adopted. This variable was chosen because it was found that for glasses partially embedded blocks with the choice of smooth or rough wall changes significantly the distribution of the flows of compressive stress and tensile thus modifying the strut and tie model using in the design. Thus, through the investigation of this variable, we analyzed the influence of the conformation of the walls connecting the structural behavior of the pile cap. Features such as diameters of piles, pillar dimensions, geometry of the blocks and reinforcement ratio were not considered variables, so that there were no differences in the formation of fields and stress paths. The experimental part of this dissertation was based on the characterization of the materials that make up the parts (concrete and steel), and the construction and testing three two pile caps, one reference (monolith), with rough and connection with smooth connection. Through trials, it was found that the obtained pile cap with rough connection performance equal to 66% of the monolithic pile cap, while pile cap binding obtained with smooth performance of only 36%. In the numerical step, numerical simulations were performed using the ANSYS ® (SYStem Analyser - ANSYS, INC, version 14.0) program, based on the Finite Element Method (FEM). Considered behavior no-linearity of concrete and steel, and the influence of reinforcement in structural behavior of the pile caps. Will also checked the variation of the experimental and theoretical results with the lattice model used in design, beyond the strut and tie model. / O trabalho proposto teve por objetivo os estudos experimental e modelagem computacional, do comportamento de blocos rígidos de concreto armado sobre duas estacas, com cálice parcialmente embutido, submetidos à ação de forças centradas. Foram adotados modelos variando-se o tipo de conformação das paredes dos pilares e do cálice. Essa variável foi escolhida, pois imagina-se que para os blocos com cálices parcialmente embutidos a escolha de parede lisa ou rugosa muda de modo significativo a distribuição dos fluxos de tensões de compressão e tração modificando desta maneira o modelo de biela e tirante empregado no dimensionamento. Sendo assim, por meio da investigação dessa variável, pretendeu-se analisar a influência do tipo de conformação das paredes da ligação provoca sobre o comportamento estrutural do bloco. Características como diâmetros de estacas, dimensões de pilar, geometria dos blocos e taxa de armadura não foram consideradas variáveis, a fim de que não houvesse diferenças na formação dos campos e trajetórias de tensões. A etapa experimental deste trabalho baseou-se pela caracterização dos materiais que compõem às peças (concreto e aço), além da construção e ensaio de 3 conjuntos pilares-blocos de concreto armado, sendo um conjunto usado como referência (bloco monolítico), um conjunto com ligação rugosa e um conjunto com ligação lisa. Através dos ensaios, verificou-se que o conjunto com ligação rugosa obteve desempenho superior a 66% do conjunto monolítico, enquanto que o conjunto com ligação lisa obteve desempenho de apenas 36%. Na etapa de análise computacional, foram realizadas simulações tridimensionais, baseadas no Método dos Elementos Finitos (MEF), utilizando-se o programa ANSYS®, (ANalyser SYStem - ANSYS, INC, versão 14.0). Foi considerado comportamento do material como não-linear, fissuração do concreto e a influência das armaduras no comportamento estrutural dos blocos. Foi verificada também, a variação dos resultados experimentais e teóricos com o modelo de treliça utilizado em projetos, além do modelo de Bielas e Tirantes.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-08-06T13:53:45Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao_Alaides_Ferreira.pdf: 363902 bytes, checksum: 97bfa5be0bee9a9b8c283a12f0c24a18 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-06T13:53:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao_Alaides_Ferreira.pdf: 363902 bytes, checksum: 97bfa5be0bee9a9b8c283a12f0c24a18 (MD5) Previous issue date: 2009 / This text is above solvability in systems of two forms additive over p-adics fields: with of degree k and variables n > 4k at lesat p > 3k4 ; with of degree an k odd integer at least n > 6k+1 variables; and with of degree 5 and p > 101 for n ≥ 31 variables, and for all p with n ≥ 36 variables, with the possible exceptions of p = 5 and p = 11. / Este texto é sobre solubilidade no corpo dos p-ádicos de sistemas de duas formas aditivas: com grau k e variáveis n > 4k apartir de p > 3k4 ; com grau k ímpar apartir de n > 6k +1 variáveis; e de grau 5 com p > 101 para n ≥ 31 variáveis, e para todo p com n ≥ 36 variáveis, com exceções de p = 5 e p = 11.

Estamos vivendo um momento que exige profundas mudanças, políticas, éticas, sociais, institucionais e educacionais. Mais do que nunca uma inquietação nos vem a mente: a importância do ato de ler! O que nos preocupa é o ato de ler não apenas aquilo que os símbolos traduzem, mas a carga cultural que há por trás deles, as entrelinhas daquilo que é decodificado em palavras, ler também o mundo que nos cerca e ter consciência da cultura em que estamos embebidos. Pensar essa leitura e os modos de chegar a ela, não é apenas um problema disciplinar de língua portuguesa, extravasando as fronteiras disciplinares e tornando-se uma preocupação de todo educador. Sob esse prisma, onde é que a física entra? Ora, não faz a física parte desta cultura? O modo com que a física olha para a natureza não nos ajudaria também a ler o mundo, a formular questões sobre nosso entorno? Acreditando honestamente que sim, somos levados a formular mais algumas questões: em que o ensino de física pode colaborar na formação de leitores mais críticos? E a leitura, pode colaborar com o ensino de física? Afinal, na ponte entre ciência e arte, em que um mundo pode colaborar com o outro? \"Ler palavras, conceitos e o mundo: o desafio de entrelaçar duas culturas em um convite à Física\" é a nossa tentativa de usar a arte como um convite à participação nas aulas de física, e a física como convite ao enriquecimento da linguagem artística. / We are living in a moment that requires profound changes, political, ethical, social, institutional and educational. More than ever a concern in coming to mind: the importance of the act of reading! What worries us is the act of reading not only what the symbols mean, but the cultural burden that\'s behind them, the lines of what is decoded into words, read also the world around us and be aware of the culture in which we are soaked. Think of this reading and ways to reach it, is not only a disciplinary problem of Portuguese, pumping, disciplinary boundaries and became a concern of every educator. In this light, where physics comes? Well, does the physical part of this culture? How the physics looks to nature doesn\'t help us also to read the world, to formulate questions on our surroundings? Honestly believing that yes, we have to formulate some more issues: the teaching of physics can collaborate in training readers more critical? And reading, you can collaborate with the teaching of physics? After all, the bridge between science and art, in that a world can collaborate with each other? \"Reading words, concepts and the world: the challenge of interlace two cultures in an invitation to physics\" is our attempt to use art as an invitation to participation in lessons in physics and physics as invitation to the enrichment of language arts.

Made available in DSpace on 2016-08-03T16:31:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Geraldo Marchiori.pdf: 2085554 bytes, checksum: 64f4cf5b53c27500df06108f0655da54 (MD5) Previous issue date: 2012-10-04 / The present study consisted of evaluating dental, skeletal and tegumentary changes promoted by fixed orthodontic treatment with two-step retraction anterior, by means of lateral cephalograms. To this end, we selected 14 patients who required extraction of four premolars, all with Class I malocclusion. The anterior retraction was performed by the retraction of canine (prior to incisors bonding) and of incisors. Twelve patients did not use any device for anchoring. Lateral cephalograms were examined at the beginning and end of canine retraction and by the end of the fixed orthodontic treatment. Cephalograms were scanned to obtain cephalometric measurements using the software Radiocef® (RadiomemoryR- Belo Horizonte, Brazil). Data were submitted to analysis of variance and Tukey s test (p<0.05). Results indicated few skeletal changes, except for a slight retraction of the point A, and increase in mandibular length, in lower-anterior and total facial height, and slight mandibularcounterclockwiserotation due to the craniofacial growth. After canine retraction, there was a lingual inclination and retrusion of upper and lower incisors, which remained stable to the upper incisors at the end of the treatment. In the same period,the lower incisors retruded with a slope similar to the initial. Besides that, no significant loss of anchoring was detected. These dental changes resulted in retrusion of upper and lower lips after canine retraction, and the lower lip continued to retract by the end of the treatment. In conclusion, the treatment using two-step retraction anterior did not lead to a significant loss of anchoring, and reduced the facial convexity. / O objetivo do presente estudo consistiu em avaliar as alterações dentoesqueléticas e tegumentares promovidas pelo tratamento ortodôntico fixo com a retração anterior em duas fases, por meio de telerradiografias em norma lateral. Foram selecionados 14 pacientes com idade média de 14,6 anos que necessitavam de extrações dos quatro primeiros pré-molares, todos apresentando má oclusão de Classe I. A retração anterior foi realizada inicialmente pela retração dos caninos (previamente à colagem dos incisivos) e subsequentemente, pelos incisivos. Doze pacientes não utilizaram qualquer dispositivo para ancoragem e dois pacientes utilizaram como ancoragem o Arco Extra-Bucal (AEB) de uso noturno. Foram avaliadas as telerradiografias em norma lateral ao início, final da retração dos caninos e final de tratamento ortodôntico fixo. As telerradiografias foram escaneadas e mensuradas por meio do programa Radiocef® (RadiomemoryR- Belo Horizonte, Brasil). Os dados foram submetidos à Análise de Variância e teste de Tukey (p<0,05). Os resultados demonstraram poucas alterações esqueléticas, exceto por uma retrusão suave do ponto A e aumento do comprimento mandibular, da altura facial ântero-inferior e total e rotação suave anti-horária mandibular devido ao crescimento craniofacial. Após a retração dos caninos, houve uma inclinação para lingual e retrusão dos incisivos superiores e inferiores, que permaneceram estáveis para os incisivos superiores no período final de tratamento. Já os incisivos inferiores neste mesmo período, retruíram mais com uma inclinação semelhante àquela inicial. Além disso, não houve perda de ancoragem de forma estatisticamente significante. Estas alterações dentárias refletiram em retrusão dos lábios superior e inferior após a retração dos caninos, sendo que o lábio inferior continuou a retrair no período final de tratamento. Conclui-se que o tratamento com a retração em duas fases não representou perda de ancoragem estatisticamente significante, além de diminuir a convexidade facial.

The advances and the development of vehicles and autobalance robots make necessary the investigation of controllers able to meet the various challenges related to the use of these systems. The focus of this work is to study the equilibrium and position control of one two-wheeled robot. The particular interest in this application comes from its structure and its rich physical dynamics. Since this is a complex and non trivial problem, there is great interest in to analyze intelligent controllers. The first part of this dissertation discusses the development of a classic PID controller. Then it is compared with two types of intelligent controllers: On-line Neural Fuzzy Control (ONFC) and Proportional-Integral-Derivative Neural-Network (PID-NN). Also it is presented the implementation of controllers in a hadware plataform using the LEGO Mindstorm kit and in a simulation plataform using the MATLAB-Simulink. Two case studies are developed. The first one investigates the control of equilibrium and position of two-wheeled robot on a flat terrain to observe the intrinsec performance in lack of external factors. The second case studies the equilibrium and position control of the robot in irregular terrains to investigate the system response under influence of hard conditions in its environment. Finally, the performance of each controller developed is discussed and competitive results in the control of two-wheeled robot are achieved. / Com o avanço no desenvolvimento e utilização de veículos e robôs autoequilibrantes, faz-se necessário a investigação de controladores capazes de atender os diversos desafios relacionados à utilização desses sistemas. Neste trabalho foi estudado o controle de equilíbrio e posição de um robô auto-equilibrante de duas rodas. O interesse particular nesta aplicação vem da sua estrutura e da riqueza de sua dinâmica física. Por ser um problema complexo e não trivial há grande interesse em avaliar os controladores inteligentes. A primeira parte da dissertação aborda o desenvolvimento de um controle clássico do tipo PID, para em seguida ser comparado com a implementação de dois tipos de controladores inteligentes: On-line Neuro Fuzzy Control (ONFC) e Proportional-Integral-Derivative Neural-Network (PIDNN). Também é apresentada a implementação dos controladores em uma plataforma de hardware, utilizando o kit LEGO Mindstorm, e numa plataforma de simulação utilizando o MATLAB-Simulink. Em seguida, dois estudos de casos são desenvolvidos visando comparar o desempenho dos controladores. O primeiro caso avalia o controle de equilíbrio e posição do robô auto-equilibrante de duas rodas sobre um terreno plano tendo como interesse observar o desempenho intrínseco do sistema sob ausência de fatores externos. O segundo caso estuda o controle de equilíbrio e posição do robô em terrenos irregulares visando investigar a resposta do sistema sob influência de condições adversas em seu ambiente. Finalmente, o desempenho de cada um dos controladores desenvolvidos é discutido, verificando-se resultados competitivos no controle do robô auto-equilibrante de duas rodas.

The advances and the development of vehicles and autobalance robots make necessary the investigation of controllers able to meet the various challenges related to the use of these systems. The focus of this work is to study the equilibrium and position control of one two-wheeled robot. The particular interest in this application comes from its structure and its rich physical dynamics. Since this is a complex and non trivial problem, there is great interest in to analyze intelligent controllers. The first part of this dissertation discusses the development of a classic PID controller. Then it is compared with two types of intelligent controllers: On-line Neural Fuzzy Control (ONFC) and Proportional-Integral-Derivative Neural-Network (PID-NN). Also it is presented the implementation of controllers in a hadware plataform using the LEGO Mindstorm kit and in a simulation plataform using the MATLAB-Simulink. Two case studies are developed. The first one investigates the control of equilibrium and position of two-wheeled robot on a flat terrain to observe the intrinsec performance in lack of external factors. The second case studies the equilibrium and position control of the robot in irregular terrains to investigate the system response under influence of hard conditions in its environment. Finally, the performance of each controller developed is discussed and competitive results in the control of two-wheeled robot are achieved. / Com o avanço no desenvolvimento e utilização de veículos e robôs autoequilibrantes, faz-se necessário a investigação de controladores capazes de atender os diversos desafios relacionados à utilização desses sistemas. Neste trabalho foi estudado o controle de equilíbrio e posição de um robô auto-equilibrante de duas rodas. O interesse particular nesta aplicação vem da sua estrutura e da riqueza de sua dinâmica física. Por ser um problema complexo e não trivial há grande interesse em avaliar os controladores inteligentes. A primeira parte da dissertação aborda o desenvolvimento de um controle clássico do tipo PID, para em seguida ser comparado com a implementação de dois tipos de controladores inteligentes: On-line Neuro Fuzzy Control (ONFC) e Proportional-Integral-Derivative Neural-Network (PIDNN). Também é apresentada a implementação dos controladores em uma plataforma de hardware, utilizando o kit LEGO Mindstorm, e numa plataforma de simulação utilizando o MATLAB-Simulink. Em seguida, dois estudos de casos são desenvolvidos visando comparar o desempenho dos controladores. O primeiro caso avalia o controle de equilíbrio e posição do robô auto-equilibrante de duas rodas sobre um terreno plano tendo como interesse observar o desempenho intrínseco do sistema sob ausência de fatores externos. O segundo caso estuda o controle de equilíbrio e posição do robô em terrenos irregulares visando investigar a resposta do sistema sob influência de condições adversas em seu ambiente. Finalmente, o desempenho de cada um dos controladores desenvolvidos é discutido, verificando-se resultados competitivos no controle do robô auto-equilibrante de duas rodas.

Processos biotecnológicos dependem significativamente das técnicas de separação e purificação utilizadas, para manter boa relação custo-benefício na produção em escala industrial de produtos biotecnológicos com fins comerciais, industriais e terapêuticos. A aplicação do sistema micelar de duas fases aquosas (SMDFA) é proposta como alternativa para purificação de biomoléculas/biopartículas, pois permite sua separação e análise, muitas vezes sem que essas percam sua atividade ou propriedades desejadas. Com essa técnica é possível realizar uma partição seletiva que possibilita altos rendimentos. Esse trabalho destinou-se a estudar o emprego dessa metodologia na extração e purificação de Adenovírus em sistema micelar de duas fases aquosas formado por Triton X-114/Suspensão viral. Os ensaios foram realizados em sistemas de 5 g seguindo um planejamento fatorial completo (23) com 4 pontos centrais. Os fatores estudados foram temperatura de extração, pH da suspensão viral e concentração do tensoativo. Sistemas contendo massas de 3g, 10g e 40g foram avaliados. Foi avaliado o efeito do processo de extração com SMDFA sobre a integridade e infectividade de Adenovírus. Alguns dos parâmetros avaliados no processo foram a recuperação da potência viral (RPv) e a recuperação da potência viral específica (RPv&#248;). Esses dois parâmetros avaliam a inativação do Adenovirus pelo processo de extração e ambos apresentaram melhoras quando comparados com a própria suspensão viral para alguns dos sistemas estudados (i.e RPv:341 % e RPv&#248; 1466 %). Esses resultados indicam que o SMDFA foi capaz de particionar seletivamente as partículas virais infecciosas. De acordo com os resultados do planejamento é possível aumentar ainda mais esses resultados controlando as variáveis concentração de tensoativo, pH da suspensão viral e temperatura de extração. / Biotechnological processes depend significantly on separation and purification techniques used to maintain cost-effective industrial-scale production of biotechnological products for commercial, industrial and therapeutic uses. The application of the aqueous two-phase micelar system (ATPMS) is proposed as an alternative for purification, since it allows the separation and analysis of biomolecules /bioparticles, often without loses of activity or their properties. This allows to perform a selective partition that enables high yields. This work aims to study the use of this methodology in the extraction and purification of adenovirus in micelle aqueous two-phase formed by TritonX-114/Viral suspension. All assays were performed in 5 g systems following a full factorial design (23) with four central points. The studied factors were extraction temperature, pH of the viral suspension and concentration of the surfactant. Systems containing masses of 3g, 10g and 40g were evaluated. Extraction procedure effects over integrity and infectivity of adenovirus were also evaluated. Some of the parameters evaluated in the viral recovery process were viral potency (RPv) and recovery of viral specific potency (RPv&#248;). These two parameters measure the inactivation of Adenovirus by the extraction process and both showed improvement when compared with the viral suspension for some of the systems studied (i.e RPv: 341% and RPv&#248; 1466%). These results show that ATPMS selectively partition the infectious viral particles. According to the results of the experimental design is possible to increase, even further, these results controlling the surfactant concentration, viral suspension pH and temperature of extraction.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-09-02T12:53:33Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação CCB - Kátia Albuquerque 2016.pdf: 1508022 bytes, checksum: 82278b56e00cafb789bead747a3af48d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-02T12:53:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação CCB - Kátia Albuquerque 2016.pdf: 1508022 bytes, checksum: 82278b56e00cafb789bead747a3af48d (MD5) Previous issue date: 2016-02-19 / CAPEs / Enzimas são proteínas com atividade catalítica capazes de integrar diferentes processos biotecnológicos. Dentre as enzimas com aplicação na indústria destaca-se a tanino acil hidrolase (EC 3.1.1.20) ou simplesmente tanase, uma enzima extracelular produzida na presença de ácido tânico por fungos filamentosos, bactérias e leveduras. A tanase (TAH) catalisa a hidrólise de taninos liberando ácido gálico e glicose. TAH pode ser utilizada no tratamento de efluentes, na indústria farmacêutica, de alimentos, bebidas entre outros. Na biotecnologia, o grande desafio na produção de enzimas é extrair a molécula a partir de métodos economicamente viáveis. Assim, o sistema de duas fases aquosas (SDFA) tem sido cada vez mais utilizado para purificar parcialmente diversos produtos biológicos. Neste sentido, o presente trabalho teve como finalidade extrair em SDFA, caracterizar bioquimicamente e aplicar em chá verde a enzima tanase obtida de Aspergillus sp. SIS 25 por fermentação em estado sólido, utilizando a fibra do coco como substrato. Um planejamento fatorial 23 foi utilizado para avaliar a influência das variáveis principais: massa molar (MMPEG) do PEG (1000, 3350 e 6000 g/mol), concentração (20, 22 e 24% m/m) do PEG (CPEG) e concentração (15, 17,5 e 20% m/m) de citrato de sódio (CCIT), sobre as variáveis resposta: coeficiente de partição (K), recuperação (Rec) e aumento de pureza (AP), em pH 6. A tanase foi preferencialmente particionada para a fase sal do sistema uma vez que em todos os ensaios os valores de K foram menores do que 1. As variáveis MMPEG e a interação entre MMPEG-CPEG apresentaram os resultados mais significativos para o valor de K, sendo ambos os efeitos negativos. Com relação ao aumento de pureza, o melhor resultado (3,2) foi observado no ensaio 8 com 24% de PEG 6000 e 20% de sal. A tanase extraída do sistema apresentou temperatura ótima a 30° C e pH ótimo 5,0. A perda da estabilidade foi observada a 50 °C. A TAH desse estudo foi estimulada na presença de Na+ e completamente inibida na presença de Zn2+. Os surfactantes não interferiram significativamente em sua atividade, com exceção do Triton X-100 a 2% que diminuiu a atividade relativa em aproximadamente 50%. No processo de hidrólise dos compostos fenólicos do chá verde, a tanase pré-purificada em SDFA apresentou melhor resultado se comparada ao extrato bruto; 0,75 mL da enzima do sistema reduziu 44% dos fenóis do chá. Os resultados demonstram que o modelo estatístico montado para o SDFA além de permitir a extração de uma tanase parcialmente pura tornou conhecido outros modelos que favorecem a otimização das variáveis estudadas, principalmente o aumento de pureza. Com isso, é possível afirmar que a tanase de Aspergillus sp. SIS 25 pode ser extraída através de um método de baixo custo, que emprega material reutilizável, biodegradável e que o processo conservou as características biquímicas dessa enzima devido à abundância de água que ocorre no sistema e pela utilização de componentes inertes à maioria das bimoléculas. A criação desse ambiente favorável para separar moléculas biológicas pode explicar o fato da tanase não ter perdido sua atividade durante o estudo, mantendo sua ação catalítica principalmente durante a aplicação em chá verde. / Enzymes are proteins with catalytic activity capable of integrating different biotechnological processes. One of the enzymes with application in industry stands out the tannin acyl hydrolase (EC 3.1.1.20) or simply tannase, an extracellular enzyme produced in the presence of tannic acid by filamentous fungi, bacteria and yeast. The tannase (TAH) catalyzes the hydrolysis of tannins releasing gallic acid and glucose. TAH can be used for effluent treatment, pharmaceutical industry, food, beveragesand others. In biotechnology, the big challenge in the production of enzymes is to extract the molecule from economically viable methods. Thus, the aqueous two-phase system (ATPS) has been increasingly used to partiallypurify biological products. In this sense, the present work had as purpose to extract in ATPS, characterize biochemically and apply in green tea the tannase enzyme obtained from Aspergillus sp. SIS 25 by solid state fermentation using coconut fiber like substrate. A factorial design 23 was used to evaluate the influence of major variables: PEG molar mass (1000, 3350 and 6000 g/mol), PEG concentration (CPEG) and sodium citrate concentration (CCIT), on the response variables: partition coefficient (K), recovery (Rec) and purity increase (AP), at pH 6. The tanase was preferentially partitioned to stage the salt system once in all tests the values of K were lower than 1. The variables MMPEG and the interaction between MMPEG-CPEG presented the results more meaningful for the value of K, being both negative effects. With regard to the increase in purity, the best result (3.2) was observed in 8 test with 24% of PEG 6000 and 20% salt. The tannase extracted from system showed optimum temperature at 30 ° C and optimum pH 5.0. The loss of stability was observed at 50° c. TAH this study was stimulated in the presence of Na+ and completely inhibited in the presence of Zn2+. Surfactants not significantly interfere in their activity, with the exception of Triton X-100 2% that decreased the relative activity by approximately 50%. In the process of hydrolysis of phenolic compounds from green tea, tannase pre-purified in ATPS showed better results when compared to the crude extract; 0.75 ml of the enzyme from system has reduced 44% of tea phenols. The results show that the statistical model fitted to the ATPS and allow the extraction of a pure and partially known other models that favor the optimization of the studied variables, especially the increase in purity. With this, it is possible to affirm that the tanase of Aspergillus sp. SIS 25 can be extracted through a low-cost method, employing reusable, biodegradable material and the process preserved the biquímicas features of this enzyme because of the abundance of water that occurs in the system and by the use of inert components to most bimoléculas. The creation of this favourable environment to separate biological molecules can explain the fact of tannase didn't lose its activity during the study, keeping their catalytic action primarily during application in green tea.