Orientador : Prof. Dr. Ricardo Fernandez Perez / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Fisiologia. Defesa: Curitiba, 27/10/2017 / Inclui referências : f. 52-58 / Resumo: Alguns estudos já demonstraram que o estímulo do Receptor Sensível ao Cálcio Extracelular, o CaSR, é capaz de a secreção de prótons no néfron proximal e distal. Tendo em vista que a acidificação do fluido tubular no ducto coletor é fundamental para evitar a formação de cálculos, o objetivo deste trabalho foi investigar a interação do CaSR com o transporte de prótons num modelo de células intercalares do ducto coletor de mamíferos, as células MDCK C11 (Madin-Darby canine kidney cell). As células MDCK C11 foram cultivadas em meio MEM (Minimum Essential Medium) e suplementadas com 10% de SBF (Soro Bovino Fetal). A atividade bioquímica da H+-ATPasev, sensível a concanamicina 10-8 M, foi determinada por um método colorimétrico modificado do descrito por Fisk-Subarow. Alterações do cálcio intracelular foram determinadas por microscopia de fluorescência, utilizando-se o marcador FLUO-4 10 ?M. O agonista não específico de CaSR, gadolíneo 300 ?M, e o agonista específico de CaSR, R-568 0,5 e 1 ?M, incrementaram de forma significativa a atividade da H+-ATPasev em relação à atividade basal da bomba. O agonista não específico de CaSR, neomicina 200?M, incrementou a atividade da H+-ATPasev, de forma não significativa. Foi observado que o incremento do íon cálcio no meio extracelular estimulou a atividade da H+ - ATPasev de forma dose-dependente. O antagonista seletivo de CaSR, NPS 2143 150 nM, impediu o aumento da atividade da bomba promovido pelo Ca2+o 1 mM. O inibidor das fosfolipases A e C, U-73122 5x10-8 M, reverteu parcialmente o incremento na atividade da bomba observado na presença de gadolíneo 300 ?M. O ativador de proteína quinase C aumentou a atividade da H+-ATPasev em relação à basal, mas não de forma significativa. O agonista específico de CaSR, R-568 1 ?M, promoveu um aumento significativo do cálcio intracelular nas células MDCK C11, o qual persistiu mesmo com a depleção dos estoques intracelulares de Ca2+ com tapsigargina 0,1 ?M. Entretanto, na ausência de cálcio extracelular este aumento não foi observado, o que indica que o aumento do Ca2+ intracelular induzido pela ativação do CaSR é dependente da entrada de Ca2+ do meio extracelular. Destes resultados é possível concluir que o estímulo do CaSR num modelo de célula intercalar renal provoca um incremento na concentração intracelular de cálcio e na atividade bioquímica da H+-ATPasev, sugerindo uma possível interação entre o metabolismo de cálcio e os mecanismos de secreção de prótons nos túbulos renais. Palavras-chave: H+ -ATPase vacuolar; CaSR; células MDCK C11. / Abstract: Some studies have already shown that the stimulus of a Calcium-Sensing Receptor, CaSR, is able to increase protons secretions in proximal and distal nephron. Considering that fluid acidification in collecting duct is fundamental to avoid stone formation, the aim of this study was to investigate the interaction of CaSR with proton transport in a mammalian intercalated cell model, C11-MDCK (Madin-Darby canine kidney cell) cells. C11-MDCK cells were cultured in MEM (Minimum Essential Medium) and supplemented with 10% FBS (Fetal Bovine Serum).The concanamycin-sensitive activity of the H+ -ATPasev was determined by a colorimetric method modified of that described by Fisk-Subarow. Changes in intracellular calcium levels were determined by fluorescence microscopy using 10 ?M FLUO-4 dye. The non-specific CaSR agonist, gadolinium 300?M, and the specific CaSR agonist, 0,5 and 1 ?M R-568, increased significantly the activity of H+-ATPasev in relation to the basal activity of the pump. The non-specific CaSR agonist, 200 ?M neomycin, increased the activity of H+-ATPasev but not significantly. It was observed that the increase of extracellular calcium stimulated the activity of H+ -ATPasev in a dose-dependent manner. The selective CaSR antagonist, 150 nM NPS 2143, prevented the increase of pump activity promoted by 1 mM Ca2+. The phospholipase A and C inhibitor, 5x10-8 M U-73122, partially reversed the increase in pump activity observed in the presence of 300?M gadolinium. Protein kinase C activator increased the activity of H+-ATPasev relative to baseline, but not significantly. The specific CaSR agonist, R-568 1 ?M, promoted a significant increase of intracellular calcium in C11-MDCK cells, which persisted even with the depletion of intracellular Ca2+ stores with 0,1 ?M thapsigargin. However, in the absence of extracellular calcium this increase was not observed, which indicates that the increase of intracellular Ca2 + induced by CaSR activation is dependent on the input of Ca2+ from the extracellular medium Ca2+. From these results it can be concluded that the CaSR stimulus on a model of intercalated cells increase intracellular calcium concentration and biochemical activity of H+ -ATPasev, suggesting a possible interaction between calcium metabolism and the mechanisms of proton secretion in renal tubules. Keywords: vacuolar H+ -ATPase; CaSR; C11-MDCK cells.

Orientador : Anibal Eugenio Vercesi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T01:29:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Parentoni_LuciaSimas_M.pdf: 3253683 bytes, checksum: e4c19ae29c90e01d8c222332a71eb074 (MD5) Previous issue date: 1991 / Resumo: O Ca++ possui um efeito altamente deletério sobre mitocôndrias em diversas situações patológicas, envolvendo um processo de alteração de permeabilidade da membrana interna desta organela. Resultados prévios de nosso laboratório indicaram que esta permeabilização causada por Ca++ e oxidantes é devida à formação de ligações cruzadas entre grupamentos tiol de proteínas da membrana, com o aparecimento de agregados protéicos de alto peso molecular (FAGIAN, M;M.; PEREIRA DA SILVA, L.; MARTINS, I.S. & VERCESI, A. E. Membranas Protein Thiol Cross Linking Association with Permeabilization of the Inner Mitochondrial Membrane by Ca++ plus Prooxidants. Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Jose Antonio Rocha Gontijo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-14T02:06:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_MiltonLopesde_M.pdf: 997927 bytes, checksum: 66fb62b1ec71c26c781acfcc3aa85840 (MD5) Previous issue date: 1991 / Resumo: Indivíduos clinicamente sadios (N = 1 5), normotensos, brancos, com idade compreendida entre 20 - 40 anos e dentro da faixa de peso corporal ideal, foram submetidos à 10G e observados quanto à curva glicêmica, insulinêmica, pulso, pressão arterial e a parâmetros hemodinâmicos ecocardiográficos. Os dados foram obtidos em intervalos de 30 em 30 minutos do GTTO, de TO a T120. A análise dos resultados demonstrou: 1. As curvas. glicêmica e insulinêmica apresentaram distribuição dentro da normalidade. 2. Aumento precoce, nos primeiros 30 min do GTTO, do Débito Cardíaco, Fração de Ejeção e Fração de Encurtamento do VE acompanhando o pico de elevação inicial da insulinemia. 3. Queda nos primeiros 30-60 min da GTTO, da Resistência Vascular Periférica, da Pressão Arterial Diastólica e da Pressão Arterial Média, acompanhado freqüentemente do sintoma sonolência e letargia. Estes achados sugerem, conforme a literatura, ação vasodilatadora periférica e inotrópica positiva da insulina. 4. A partir dos 60 min do GTTO ocorrem fenômenos contra-reguladores ou seja, aumento da Freqüência Cardíaca, do Duplo Produto, normalização da Resistência Vascular Periférica e da Pressão Arterial Média. Esta "segunda fase" hemodinâmica, podemos chamar compensatória, provavelmente esteja relacionada à ativação do Sistema Nervoso Simpático, quer por reflexos baroceptores, quer pela própria estimulação da insulina sobre o sistema nervoso central e sistema nervoso simpático. 5. Todas estas variações hemodinâmicas ocorreram dentro dos limites fisiológicos e homeostáticos. Os achados desta pesquisa confirmam as ações cardiovasculares da insulina demonstradas pelos diversos autores, através do método ecocardiográfico, sua interação com o SNS e acrescenta a sequência dos fenômenos no tempo, através do GTTO. As implicações clínicas estão na dependência da maior ou menor capacidade do SNS 'contra-regular os efeitos vasodilatadores da insulina, principalmente em diabéticos que recebem insulina exógena e freqüentemente apresentam neuropatia autonômica, com falência dos reflexos baroceptores. Por outro lado, pacientes com hiperinsulinemia e hiperativação do SNS podem desenvolver estados hipertensivos e cardiopatia isquêmica / Abstract: Clinically sound individuals (N = 15), normotensives, white, with ages varying between 20 to 40 years old, with body weights within the ideal range, were submitted to a "IOG" and observed as to their glucemic and insulinemic curves, pulse, blood pressure, and as to echocardiographic hemodynamic parameters. Data was obtained in intervals of 30 minutes of the GTTO, from TO to T120. The analysis of the results showed: 1. The glucemic and insulinemic curves presented a normal distribution. 2. During the first 30 minutes of the GTTO, an early increase of the Cardiac Output and the Fractional Shortening of the left ventricle, accompanying the inicial elevation of the insulinemia. 3. During the first 30 - 60 minutes of the GTTO, a decline df the Systemic Vascular Resistance, the Diastolic Blood Pression and Mean Blood Pressure, frequently accompanied by symptoms of sleepiness and lethargy. This evidence suggests, in accordance to literature, a vasodilating and positive inotropic effect of insulin. 4. After the first 60 minutes of the GTTO, counter regulating phenomenons occurred, that is, increase of Heart Rate, Double Cross Index, normalization of the Systemic Vascular Resistance and the Mean Blood Pressiono This second hemodynamic phase, which can be called .compensatory", is probably related to the activation of the Sympathetic nervous system, due to baroreceptor-reflexes, or due to the characteristic stimulation of insulin on the Central Nervous System and Sympathetic Nervous System. 5. Ali these hemodynamic variations occurred within physiologic and homeostatic limits. The results of this research confirm the cardiovascular effects of insulin demonstrated by various authors through the echocardiographic method, its interaction with the Sympathetic Nervous System and adds the sequence of the phenomenons with time through the GTTO. Clinical implications depend on the greater or smaller capacity of the SNS in counter regulating the vasodilating effects of insulin, principally in diabetics that receive exogenous insulin and frequently present autonomic neuropathy with failure of baroreceptor reflexes. On the other hand, patients with hiperinsulinemia and hiperactivation of the SNS can develop hipertensives status and isquemic cardiopathy / Mestrado / Mestre em Medicina

Orientadores: Igor Vassilieff, Vera Silvia Vassilieff / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-15T10:51:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Chagas_AnaMaria_M.pdf: 2828663 bytes, checksum: fe84d161c6b7e55f980b6f58d35bb91c (MD5) Previous issue date: 1975 / Resumo: Neste trabalho estudou-se as alterações em diversos parâmetros fisiológicos e do equilíbrio ácido básico sanguíneo e do humor aquoso de cães anestesiados pelo pentobarbital sódico (30 mg/kg) e que receberam 3 ml/10 kg/5 min de enflurano pela via pulmonar, na vigência ou não da respiração controlada. A aplicação do enflurano em cães que respiravam espontaneamente causou hipotensão arterial de 46,2 mm Hg e uma diminuição da frequência respiratória de 50%. Nestes animais houve também um aumento da pressão intra-ocular de 7,8 mm Hg. A pressão venosa não apresentou alteração. Foram realizadas avaliações do equilíbrio ácido básico do sangue arterial e do humor aquoso, aos 10, aos 25 e aos 60 minutos da administração do enflurano, contudo as maiores alterações ocorrem aos 10 minutos. Após a administração do enflurano foi observado um aumento no PCO2 e uma diminuição do PO2 e do pH, o mesmo ocorrendo no humor aquoso. Como consequência da instalação da respiração controlada observou-se após 20 minutos hipocapnia, hiperóxia e aumento de pH do sangue arterial, como resultado uma diminuição de PCO2 e um aumento de PO2 do humor aquoso. A pressão intra-ocular e arterial apresentarem-se diminuídas, todavia a pressão venosa e a freqüência cardíaca não sofreram alterações. Nos animais com enflurano na vigência da respiração controlada, as alterações das pressões arterial, venosa e do equilíbrio ácido básico do sangue arterial não foram alteradas de modo significante mas a pressão intra-ocular diminuiu lentamente até 60 minutos alcançando valores de 6,8 mm Hg. No humor aquoso houve um aumento de pH, e de PO2, uma diminuição de PCO2 somente após 60 minutos da administração da droga. A diminuição da freqüência cardíaca foi semelhante àquela ocorrida em cães com respiração espontânea / Abstract: Not informed. / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Ciências

Orientador: Samir Tufic Arbex / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-15T08:45:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Roldi_CarlosRoberto_M.pdf: 1101924 bytes, checksum: 1140c5e793d99a06a1573da7d3003d71 (MD5) Previous issue date: 1981 / Resumo: No presente trabalho, foram realizadas as determinações da concentração máxima de f1uoreto no plasma, e a excreção do mesmo na saliva e urina, antes e após a ingestão de dentifrícios fluoretados nacionais. De três voluntários foram colhidos 5,0m1 de sangue, 3,0 m1 de saliva em jejum, antes da ingestão dos dentifrícios e 15, 30,45,60 e 120 minutos após a ingestão dos mesmos. Foi coletado o volume total de urina durante 24 horas antes da ingestão dos dentifrícios, e durante 24 horas após a ingestão dos mesmos. A determinação da concentração de fluoreto no plasma e na saliva, foi feita segundo a técnica da adição conhecida da ORION NEWSLETER (1970); MOODY & THOMAS (J971), e na urina, segundo a técnica de SINGE R e Cols. ( 1 9 6 9) . Os resultados obtidos, nos permitiram verificar que o f1uoreto contido em todos os dentifrícios, e absorvido pelo plasma e excretado pela saliva e urina, em concentrações diferentes, de acordo com a concentração, de f1uoreto de cada dentifrício, e de acordo com o tipo de abrasivo de cada um. O dentifrício Aim, foi o que apresentou maior concentração de fluoreto no plasma, e maior concentração excretada na saliva e urina / Abstract: Not informed. / Mestrado / Bases Farmacologicas para a Terapeutica Medicamentosa / Mestre em Odontologia

Orientador: Anibal Eugenio Vercesi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-09-11T20:50:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_RicardodeSouza_M.pdf: 4223365 bytes, checksum: 82e5b44995fcdb536317d9e0845feb37 (MD5) Previous issue date: 1992 / Resumo: Mitocôndrias do fígado de rato quando acumulam 'CA POT. 2+¿ na presença de um prooxidante como diamida ou t-butilhidroperóxido apresentam um inchamento de grande amplitude e colapso do potencial de menbrana ('delta¿'psi¿). trifluoperazina, um neuroléptico da classe dos fenotiazínicos, em concentrações (15 ¿ 45 'um¿M) as quais não inibem a respiração ou o influxo de 'CA POT. 2+¿ para a mitocôndria, protege significativamente esta organela contra os efeitos deletérios do cátion mais um prooxidante. Em contraste a isto, em concentrações mais altas do que que 100 'um¿M a droga potencializa estes efeitos deletérios do cálcio e prooxidantes e tem efeito de danificar per se a membrana mitocondrial interna. É proposto que a proteção conferida pela droga é mediada por mudanças na estrutura tridimensional de proteínas de menbrana e que isto acarrete diminuição da produção de agregados protéicos, interligados por pontes dissulfeto, que ocorrem quando suspensões mitocondriais acumulam cálcio sob condições de estresse oxidativo. É proposto também que estes agregados estejam relacionados com o fenômeno de lipoperoxidação, pois é observado que a droga protege contra os efeitos deletérios induzidos pelo complexo citrato-'FE POT. 2+¿. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Isolated rat liver mitochondria undrego extensive swelling and disruption of membrane potencial when they accumulate 'CA POT. 2+¿ in the presence of a prooxidant such as diamide or t-butylhydroperoxide. The phenothiazinic drug trifluoperazine, at concentrations (15-45 'mu¿M) which do not inhibit either respiration or the influx of 'CA POT. 2+¿ into mitochondria, significantly protects mitochondria against the deleterious effects of 'CA POT. 2+¿ and prooxidants and presents a damaging effect per se on the inner mitochondrial membrane. It is prosed that the protection conferred by the drug is mediated by changes in membrane proteins structure that decrease the production of protein thiol cross-linking that occurs when mitochondria accumulate calcium under oxidant stress conditions. It is also proposed that the protein aggregates are correlated with the lipid peroxidation, because it is observed that the drug protects against the deleterious effects induced by citrate-'FE POT. 2+¿ complex. ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Resumo: Em estudo anterior realizado em nosso laboratório ratos expostos à fumaça de cigarro apresentaram menor mortalidade após infarto agudo do miocárdio em relação ao grupo controle. Entretanto a mortalidade aumentou nos ratos fumantes quando receberam β-caroteno. Não se sabe qual o mecanismo da diminuição de mortalidade nos animais fumantes. Formulamos a hipótese de que a fumaça de cigarro induziria estresse oxidativo que causaria efeito tipo precondicionamento cardíaco. O efeito tipo precondicionamento diminuiria a comunicação intercelular pelas junções comunicantes. A suplementação da dieta com β-caroteno inibiria os efeitos provenientes da exposição à fumaça de cigarro. Foram estudados ratos Wistar, distribuídos em 4 grupos: grupo controle (C) - formado por 30 animais, que receberam a dieta usada de rotina em nosso laboratório; 2) grupo β-caroteno (BC) - composto por 28 animais que receberam β-caroteno (na forma de cristal adicionado e misturado à dieta) na dose de 500 mg de β-caroteno/kg de dieta; 3) grupo exposto à fumaça de cigarro (EFC) composto por 28 animais, que receberam a dieta usada de rotina em nosso laboratório e foram expostos ao cigarro; 4) grupo β-caroteno/EFC (BC/EFC) - formado por 28 animais que receberam o β-caroteno na mesma forma que o grupo BC e foram expostos à fumaça de cigarro. A suplementação com β- caroteno e a EFC foram realizados simultaneamente, até que ratos, com peso inicial de 100g, 82 atingissem peso corpóreo de 200-250g. / Abstract: In previous study performed in our laboratory, we observed which the mortality rates were lower in exposure to tobacco smoke rats than in control rats. Moreover, when the exposure to tobacco smoke rats received β-carotene supplementation this reduction of mortality was abolished. The mechanisms of lower mortality in smokers are unknown. In this context we formulated the hypothesis of that the exposure to tobacco smoke produces oxidative stress which would induce precondictioning-like effect. This effect would cause reduction of gap junctional intercellular communication. The supplementation with β-carotene would abolish the effect of the tobacco smoke. Male Wistar rats were allocated in four experimental groups: 1) Control group (C), n=30: control rats were fed a standard diet without exposure tobacco smoke; 2) β-carotene group (BC), n= 28: rats fed the same diet supplemented with 500 mg of β-carotene/kg diet (Sigma) milled in the feed; 3) Exposure to tobacco smoke group (ETS), n=28: rats exposed to tobacco smoke; 4) BC/ETS group (BC/ETS), n=28: rats exposed to tobacco smoke plus BC supplementation. The BC supplementation and tobacco smoke exposure were performed simultaneously until the rats weighed 200 to 250 g (approximately 5 weeks). After this period of treatment the rats were killed and the serum, livers and hearts storaged to -80°C for study of: 1) intercellular communication by immunohistochemistry and western blotting for Cx43; 2) oxidative stress by dosages of reduced glutathione (GSH), oxidized glutathione (GSSG) and lipid 85 hidroperoxides; 3) cardiac remodeling by morphometrical and histological (picro sirius red and hematoxilin-eosin) analyses; 4) biochemical study by BC analysis in serum end tissues. The statistical analysis was performed by t students test for BC levels and two way ANOVA for the rest of variables. / Orientador: Sergio Alberto Rupp de Paiva / Coorientador: Leonardo Antônio Mamede Zornoff / Banca: Thomas Prates Ong / Banca: Alceu Afonso Jordão Junior / Banca: Katashi Okoshi / Banca: Luis Shiguero Matsubara / Doutor

Submitted by Estagiário SPT BMHS (spt@fgv.br) on 2012-03-21T13:22:50Z No. of bitstreams: 1 000007551.pdf: 6764188 bytes, checksum: bf9a2677f444663e347c07df4aad26da (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-21T13:57:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000007551.pdf: 6764188 bytes, checksum: bf9a2677f444663e347c07df4aad26da (MD5) / The heat, in the environment where the human being lives or works, is attributed to: physical factors: relation between temperature, radiation, humidity and air movement; human factors: human being as an energy source by means of his metabolism and physical activity. The heat characterized by a determinated environment is a result of interaction of the following variables: system of construction, geographical situation of the physical environment, artificial acclimation, etc.; age, sex, physical capacity, condition of acclimatization, clothing, type, load and regime of work, etc. In the moment, that the person is inserted in a determinated thermal environment, all these factors are going to influence the heat transmission between him and the environment. Claiming of having thermal balance in the hot environment, we find out the need to provide protective measures of the individual and environmental levels, in order to prevail 'confortable' situations, or at least, 'tolerable situations'. According with the definition of the tolerable and confortable thermal conditions, we have to plan work environments, which makes feasible a thermal insulation of external heat and the heat loss from inside to outside. Modifying individual and environmental variables, we will act precisely on transmission ways decreasing the heat quantity produced and/or received by organism and increasing the chances of dissipating it. / O calor, no ambiente onde o ser humano vive ou trabalha, atribui-se a: -fatores físicos: relação entre temperatura, radiação, umidade e movimento do ar; fatores humanos: o ser humano atua como fonte de energia através de seu metabolismo e atividade física. o calor caracterizado por um determinado meio ambiente é o resultado da atuação de diferentes variáveis, tais como: sistema de construção, situação geográfica do ambiente físico, climatização artificial, etc.; idade, sexo, capacidade física, estado de aclimatação, vestuário, tipo, carga e regime de trabalho, etc. A partir do momento em que o indivíduo for introduzido num determinado meio ambiente térmico, todos estes fatores vão influenciar a transmissão de calor entre ele e o ambiente. Na pretensão de haver equilíbrio térmico no meio ambiente quente, constata-se a necessidade de providenciar medidas de proteção a nível do sujeito e do ambiente, para que prevaleçam situações ambientais 'confortáveis', ou pelo menos, 'tolerantes'. Desse modo, através da: definição das condições térmicas tolerantes e de conforto, parte-se para projetar meios ambientes de trabalho, que tornem praticáveis um isolamento térmico do calor exterior, assim como a perda de calor de dentro para fora. Atuando-se sobre variáveis individuais e ambientais estaremos incidindo diretamente sobre os meios de transmissão, procurando-se diminuir a quantidade de calor que o organismo produz e/ou recebe e aumentar a possibilidade de dissipá-lo.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004Bitstream added on 2014-06-13T20:41:37Z : No. of bitstreams: 1 nogueira_rmb_dr_botfmvz.pdf: 1409163 bytes, checksum: 77f246cac8ac22e33da1c78a59c32e6e (MD5) / O presente trabalho teve por objetivo avaliar os aspectos clínico, laboratorial, histopatológico e tratamento na intoxicação experimental com o veneno da serpente Crotalus durissus terrificus em cães. Foram utilizados 21 cães, adultos, sem raça definida, divididos em três grupos com sete animais: grupo I - somente veneno; grupo II - veneno + cinco ampolas de soro antiofídico + fluidoterapia; grupo III - veneno + cinco ampolas de soro antiofídico + fluidoterapia + alcalinização da urina. O veneno da serpente Crotalus durissus terrificus liofolizado e reconstituído em solução salina foi inoculado pela via subcutânea, na dose de 1mg/kg de peso vivo, na face lateral da coxa do membro posterior esquerdo dos cães dos grupos I, II e III. Os animais foram submetidos às avaliações clínica, hematológica, hemostática, urinálise, bioquímica sérica, hemogasometria, pressão arterial sistólica, eletrocardiograma e mielograma. Três animais de cada grupo foram eutanasiados e foram colhidas amostras do tecido muscular para avaliação histopatológica. Os resultados mostraram a eficácia da soroterapia na neutralização do veneno e mostrou que o veneno da serpente Crotalus durissus terrificus provoca alterações clínica, hematológica, hemostática, de urinálise, hemogasométrica, da pressão arterial sistólica, do mielograma e histopatológica nos cães. Não houve evidências de alterações eletrocardiográficas e bioquímica. / This work evaluated the clinical, laboratorial, histological and treatment in the experimental intoxication with the venom of the Crotalus durissus terrificus snake in dogs. Twenty-one adults (mixed breed) dogs divided in three groups with seven animals were used: group I - only venom; group II - venom + five bladders of anti-ophidic serum + fluid therapy; group III - venom + five bladders of anti-ophidic serum + fluid therapy + alkalization of the urine. The lyophilized venom of the Crotalus durissus terrificus snake was reconstituted in saline solution and inoculated subcutaneous, in the dose of 1mg/kg B.W., in the lateral face of the left thigh of the dogs of the groups I, II and III. The animals were submitted to clinical, hematological evaluation, hemostatic, urinalysis, biochemical, blood gas analysis, systolic arterial pressure, electrocardiogram and mielograma. Three animals of each group were eutanasied and samples from the muscular tissue and popliteal lymphonode were collected for hitopatological evaluation. The results showed the effectiveness of the serum therapy in the neutralization of the venom and it showed that the venom of the Crotalus durissus terrificus snake causes clinical, hematological, hemostatic, of urinary, hemogasometric changes, of the systolic arterial pressure, of the mielograma and histopathological in the dogs. There were no evidences of alterations eletrocardiografic and biochemical alterations.

Resumo: As branquias de crustaceos constituem uma interface seletiva entre o ambiente externo e o eio interno e sua funcao e localizacao expoe suas celulas a alteracoes do ambiente aquatico, como, por exemplo, variacoes de salinidade e presenca de contaminantes. Metais como o chumbo (Pb) tem sido registrados em ecossistemas aquaticos em niveis acima do estabelecido pela legislacao brasileira. Alguns estudos indicam que crustaceos decapodes acumulam metais em orgaos como as branquias, sendo que a toxicidade do Pb esta associada a um desequilibrio osmotico e ionico em animais aquaticos. Portanto, o objetivo deste trabalho e avaliar in vitro a interferencia deste metal sobre celulas branquiais de especies de crustaceos com distintos padroes de osmorregulacao. Para tanto, antes de analisar a interferencia do metal foi realizada uma caracterizacao osmo-ionica de duas especies (Hepatus pudibundus . marinha e Callinectes ornatus . marinha/estuarina) diante de diluicao da agua do mar. Os animais foram expostos a condicao controle (33 ñ 0,5h) e a agua do mar diluida (25 ñ 0,5h e 25 ñ 8h), e apos exposicao foi retirada a hemolinfa para medida da osmolalidade e dosagem de ions (Na+, Cl-, K+ e Mg++). Tambem foi retirada uma amostra do musculo da quela e as branquias. No musculo e nas branquias foram medidos o teor de hidratacao e a concentracao de NPS (substancias positivas a ninidrina). Nas branquias tambem foi medida a atividade das enzimas Na+K+ATPase (NaK),e Anidrase Carbonica (AC). Conforme esperado H. pudibundus osmoconforma quando em agua diluida enquanto C. ornatus osmorregula. Ambas as especies mantiveram a hidratacao de seus tecidos sendo que o musculo de H. pudibundus utiliza a liberacao e NPS para a manutencao da agua tecidual. Nao houve alteracao na atividade da AC e a atividade da NaK diminuiu significativamente ja em 0,5 h de exposicao a agua diluida em ambas as especies. Os resultados indicam que os animais utilizam diferentes estrategias de regulacao osmotica e ionica para lidar com a diminuicao de salinidade, enquanto H. pudibundus depende mais de IIR (regulacao isosmotica intracelular) para tolerar a diluicao, C. ornatus tampona parcialmente a variacao do meio extracelular atraves de AER (regulacao anisosmotica extracelular), dependendo menos de IIR. Apos a caracterizacao osmo-ionica, foram realizados os experimentos in vitro da toxicidade do Pb. Foi analisada a toxicidade de quatro concentracoes de chumbo - Pb(NO3)2 (1, 10, 20 e 40ƒÊM) - sobre a viabilidade celular branquial em 3 diferentes tempos experimentais (1, 3 e 6 horas). Os resultados indicam que a toxicidade do Pb sobre as celulas branquiais e dose- e tempo- dependente, e que as celulas de H. pudibundus parecem ser mais sensiveis ao chumbo do que as celulas de C. ornatus. Alem disso, foi analisada a capacidade das celulas branquiais de regular volume diante de hiposmoticidade (choque hipo de 75 e 50%) e a influencia do Pb sobre a manutencao de volume celular em condicoes isosmoticas (isosmoticidade associada a duas ncentracoes de Pb . 10 e 40ƒÊM). Sem a presenca do Pb, as celulas branquiais de ambas as especies sao perfeitamente capazes de regulacao de volume celular diante do choque hiposmotico 75%. Celulas branquiais de C. ornatus entretanto apresentaram um pequeno inchaco durante o choque hiposmotico de maior intensidade (50%), enquanto celulas de H. pudibundus ainda apresentaram capacidade de regulacao de volume. Na presenca de Pb, mesmo que sob isosmoticidade, as celulas branquiais de ambas as especies perderam volume. Celulas de H. pudibundus apresentaram cerca de 15% de reducao de volume em ambas concentracoes de Pb testadas (10 e 40ƒÊM), celulas de C. ornatus foram menos sensiveis a concentracao de 10ƒÊM e apresentaram cerca de 10% de reducao de volume, enquanto na concentracao de 40ƒÊM o volume perdido foi tambem de cerca de 15%. Esses resultados indicam que o Pb promove de alguma forma um desequilibrio osmotico fazendo com que as celulas percam agua. Quando o Pb 10ƒÊM foi associado ao choque hiposmotico de 75% e 50%, celulas de C. ornatus perderam ainda mais volume enquanto celulas de H. pudibundus se mostraram capazes de regular volume celular. Foram entao analisadas as possiveis vias de atuacao do Pb sobre os mecanismos de regulacao de volume celular atraves da utilizacao de inibidores dessas vias associados a isosmoticidade, a isosmoticidade + 0ƒÊMPb e a hiposmoticidade 75% + 10ƒÊMPb. Para inibir canais de Ca2+, Na+K+ATPase e aquaporinas foram utlizados: verapamil, ouabaina e cloreto de mercurio, respectivamente. Os resultados indicam que as diferencas da influencia do Pb encontradas na regulacao de volume celular entre as duas especies se referem ao padrao de regulacao osmotica e ionica e grau de capacidade de regulacao de volume que as especies apresentam. C. ornatus parece ser mais suscetivel a alteracoes de volume celular por infl encia do Pb devido a maior entrada do metal atraves de fluxos ionicos para a absorcao de sal inerentemente presentes nas celulas branquiais, comuns a um organismo osmorregulador. Canais de Ca2+ parecem ser via de entrada de Pb, e aquaporina parece ser alvo de toxicicidade do Pb pelo menos em H. pudibundus. O Pb parece nao interferir na atividade da NaK em nenhuma das especies. Por fim foi realizada a identificacao de um possivel mecanismo de defesa branquial, o mecanismo MXR, assim como sua inducao pelas 4 concentracoes de Pb testadas. As branquias de ambos os animais apresentam esse mecanismo que possui maior atividade nas concentracoes mais baixas de Pb (1 e 10ƒÊM), e nao existe inducao do mecanismo nas concentracoes mais altas (20 e 40ƒÊM). Nossos resultados indicam que os efeitos toxicos do chumbo podem ser diferentes conforme a estrategia osmotica e ionica adotada por animais aquaticos e sugerem ainda que celulas de organismos osmorreguladores sao mais suscetiveis a contaminacao por metal do que celulas de organismos smoconformadores, principalmente em situacoes de reducao de salinidade.