A introdução de novas linhagens de camundongos em biotérios deve ser realizada com cautela devido aos riscos de introdução de doenças na colônia, motivo pelo qual alguns biotérios adotam como padrão introduzir novos animais somente após o processo de rederivação, que pode ser realizado por transferência embrionária, histerectomia ou cross-fostering. A rederivação é adotada para diversas espécies de animais de laboratório e constitui uma forma de reduzir o risco de surtos de doenças em um biotério com a consequente interferência na pesquisa e perdas, tanto do status sanitário como do bem-estar dos animais. Dentre esses métodos, a transferência de embriões nos estágios de pré-implantação é considerada mais segura que os outros métodos utilizados para se rederivar linhagens de camundongos por reduzir os riscos da transmissão vertical de patógenos. Essa técnica é adotada em diversos biotérios internacionais, porém não é rotina em biotérios do Brasil. O objetivo desse trabalho foi implantar a técnica de rederivação por transferência de embriões no estágio de duas células, no biotério de camundongos livres de patógenos específicos (SPF) do Departamento de Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo. As transferências embrionárias foram realizadas para introdução de linhagens de camundongos procedentes de diferentes biotérios convencionais sem barreiras. Os embriões foram obtidos pelos métodos naturais, por meio do acasalamento das fêmeas doadoras superovuladas, com machos de genótipo ou fundo genético igual. Os embriões foram coletados por flushing e lavados em meio estéril. Realizou-se a transferência de embriões no estágio de duas células para fêmeas receptoras livres de patógenos específicos (SPF), pseudoprenhas no 0,5 dia pós coito (d.p.c.). Todos os procedimentos cirúrgicos foram realizados em condições assépticas. Total de 881 embriões, destes, 625 foram transferidos para rederivação de 18 linhagens de camundongos. Nasceram 148 filhotes vivos, dos quais 140 foram desmamados. Os seguintes patógenos foram eliminados pela técnica: vírus da hepatite murina, norovírus, Corynebacterium kutscheri, Staphylococcus aureus, Streptococcus beta hemolítico, Bordetella bronchiseptica e protozoários intestinais. Os dados apresentados foram obtidos da rotina do biotério num período de três anos. A implantação da técnica possibilitou a introdução de novas linhagens na criação, em condições sanitárias satisfatórias, com a consequente disponibilização de modelos animais com nível sanitário adequado à experimentação para a comunidade científica. / The introduction of new strains of mice should be performed carefully to avoid breaking sanitary barriers of specific pathogen free (SPF) animal facilities. In order to meet this need, animals should be rederived by embryo transfer, hysterectomy or cross-fostering and then maintained under strict biosecurity practices. Rederivation is a technique used in different species of laboratory animals to protect them from infectious agents, minimize risks of disease outbreaks and thus avoid research interference caused by loss of the health status and welfare of the animals. Among these techniques, embryo transfer at two cell stage should rather be implemented because it avoids post implantational vertical transmissions of infections. It is routine to introduce animals by embryo transfer in most animal facilities in the United States of America and Europe, however it is not seen in Brazilians rodents vivariums. The objective was to implement mice embryo transfer technique in the animal facility of the Department of Immunology of the Institute of Biomedical Science of the University of Sao Paulo, Brazil. Embryo transfers were performed to rederive strains of mice received from different sources. Fertilized eggs at two-cell stage were obtained by mating superovulated females with fertile males that had either the same genotype or the same genetic background. Embryos were collected by flushing of the oviducts and washed in sterile medium. Under general anesthesia, embryos were transferred into the oviducts of specific pathogen free (SPF) pseudo pregnant female mice at 0,5 - day post coitus (d.p.c.). All the surgical procedures were performed under asseptic conditions. Total of 881 embryos, out of these, 625 embryos at two-cell stage were transfered to rederive 18 mouse strains. It was born 148 pups, of which 140 were reared. The following mouse pathogens were eliminated by embryo transfer technique: Mouse hepatitis virus, Norovirus, Corynebacterium kutscheri, Staphylococcus aureus, Beta-Haemolytic Streptococci, Bordetella bronchiseptica and intestinal protozoa. Data were collected from routine laboratory in a period of two years. The improvement in the microbiological status of mice allowed their expansion in our SPF facility and the distribution of better models to the scientific community.

Foram avaliados os efeitos do intervalo entre aspirações foliculares (IEA; OPU) e do tratamento com somatrotopina bovina recombinante (bST) na produção in vitro de embriões bubalinos. Dezesseis fêmeas foram distribuídas aleatoriamente em quatro grupos (fatorial 2x2): (1) G-Cont7: sessões de OPU uma vez por semana; (2) G-bST7: sessões de OPU uma vez por semana + 500mg de bST a cada 14 dias; (3) G-Cont14: sessões de OPU a cada 14 dias e (4) G-bST14: sessões de OPU + 500mg de bST a cada 14 dias. Os animais do G-Cont7 e G-bST7 foram submetidos a 16 sessões de OPU, e os animais do G-Cont14 e G-bST14 a oito sessões de OPU. Nas sessões realizadas uma vez por semana (G-s/bST) reduziu-se o número de folículos aspirados, de oócitos totais recuperados e de oócitos viáveis (P0,004). O tratamento com bST aumentou o número de folículos aspirados (P<0,0001), o total de oócitos recuperados e a taxa de recuperação (P=0,07). No entanto, nem o IEA e nem o tratamento com bST aumentaram a produção in vitro de embriões bubalinos. / It was evaluated the effect of OPU interval and bST treatment on embryo production in buffalo. Sixteen females were randomly assigned in 4 groups, in a 2x2 factorial experimental design: (1) G-Cont7: OPU session each seven days; (2) G-bST7: OPU session each seven days plus 500mg of bST each 14 days; (3) G-Cont14: OPU session each 14 days and (4) G-bST14: OPU session plus 500mg of bST each 14 days. Animals of G-Cont7 and G-bST7 were submitted to 16 OPU sessions, and those of G-Cont14 and G-bST14 to 8 OPU sessions. The OPU session performed every week (G-s/bST) decreased the number of aspirated follicles, and the number of total and viable recovery oocytes (P0.004). The treatment with bST increased the number of aspirated follicles (P<0.0001), the number of recovery oocytes and the oocyte recovery rate (P=0.07). However, neither OPU interval nor bST treatment increased the in vitro embryo production in buffalo.

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A introdução de novas linhagens de camundongos em biotérios deve ser realizada com cautela devido aos riscos de introdução de doenças na colônia, motivo pelo qual alguns biotérios adotam como padrão introduzir novos animais somente após o processo de rederivação, que pode ser realizado por transferência embrionária, histerectomia ou cross-fostering. A rederivação é adotada para diversas espécies de animais de laboratório e constitui uma forma de reduzir o risco de surtos de doenças em um biotério com a consequente interferência na pesquisa e perdas, tanto do status sanitário como do bem-estar dos animais. Dentre esses métodos, a transferência de embriões nos estágios de pré-implantação é considerada mais segura que os outros métodos utilizados para se rederivar linhagens de camundongos por reduzir os riscos da transmissão vertical de patógenos. Essa técnica é adotada em diversos biotérios internacionais, porém não é rotina em biotérios do Brasil. O objetivo desse trabalho foi implantar a técnica de rederivação por transferência de embriões no estágio de duas células, no biotério de camundongos livres de patógenos específicos (SPF) do Departamento de Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo. As transferências embrionárias foram realizadas para introdução de linhagens de camundongos procedentes de diferentes biotérios convencionais sem barreiras. Os embriões foram obtidos pelos métodos naturais, por meio do acasalamento das fêmeas doadoras superovuladas, com machos de genótipo ou fundo genético igual. Os embriões foram coletados por flushing e lavados em meio estéril. Realizou-se a transferência de embriões no estágio de duas células para fêmeas receptoras livres de patógenos específicos (SPF), pseudoprenhas no 0,5 dia pós coito (d.p.c.). Todos os procedimentos cirúrgicos foram realizados em condições assépticas. Total de 881 embriões, destes, 625 foram transferidos para rederivação de 18 linhagens de camundongos. Nasceram 148 filhotes vivos, dos quais 140 foram desmamados. Os seguintes patógenos foram eliminados pela técnica: vírus da hepatite murina, norovírus, Corynebacterium kutscheri, Staphylococcus aureus, Streptococcus beta hemolítico, Bordetella bronchiseptica e protozoários intestinais. Os dados apresentados foram obtidos da rotina do biotério num período de três anos. A implantação da técnica possibilitou a introdução de novas linhagens na criação, em condições sanitárias satisfatórias, com a consequente disponibilização de modelos animais com nível sanitário adequado à experimentação para a comunidade científica. / The introduction of new strains of mice should be performed carefully to avoid breaking sanitary barriers of specific pathogen free (SPF) animal facilities. In order to meet this need, animals should be rederived by embryo transfer, hysterectomy or cross-fostering and then maintained under strict biosecurity practices. Rederivation is a technique used in different species of laboratory animals to protect them from infectious agents, minimize risks of disease outbreaks and thus avoid research interference caused by loss of the health status and welfare of the animals. Among these techniques, embryo transfer at two cell stage should rather be implemented because it avoids post implantational vertical transmissions of infections. It is routine to introduce animals by embryo transfer in most animal facilities in the United States of America and Europe, however it is not seen in Brazilians rodents vivariums. The objective was to implement mice embryo transfer technique in the animal facility of the Department of Immunology of the Institute of Biomedical Science of the University of Sao Paulo, Brazil. Embryo transfers were performed to rederive strains of mice received from different sources. Fertilized eggs at two-cell stage were obtained by mating superovulated females with fertile males that had either the same genotype or the same genetic background. Embryos were collected by flushing of the oviducts and washed in sterile medium. Under general anesthesia, embryos were transferred into the oviducts of specific pathogen free (SPF) pseudo pregnant female mice at 0,5 - day post coitus (d.p.c.). All the surgical procedures were performed under asseptic conditions. Total of 881 embryos, out of these, 625 embryos at two-cell stage were transfered to rederive 18 mouse strains. It was born 148 pups, of which 140 were reared. The following mouse pathogens were eliminated by embryo transfer technique: Mouse hepatitis virus, Norovirus, Corynebacterium kutscheri, Staphylococcus aureus, Beta-Haemolytic Streptococci, Bordetella bronchiseptica and intestinal protozoa. Data were collected from routine laboratory in a period of two years. The improvement in the microbiological status of mice allowed their expansion in our SPF facility and the distribution of better models to the scientific community.

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315 f. / Submitted by Cynthia Nascimento (cyngabe@ufba.br) on 2013-02-25T16:25:03Z No. of bitstreams: 1 Antonio Marcos Pereira Brotas - tese.pdf: 13302736 bytes, checksum: 494d2eafd389d8a2cc596834d3a0ced7 (MD5) / Approved for entry into archive by Alda Lima da Silva(sivalda@ufba.br) on 2013-02-25T16:28:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Antonio Marcos Pereira Brotas - tese.pdf: 13302736 bytes, checksum: 494d2eafd389d8a2cc596834d3a0ced7 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-02-25T16:28:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Antonio Marcos Pereira Brotas - tese.pdf: 13302736 bytes, checksum: 494d2eafd389d8a2cc596834d3a0ced7 (MD5) / A presente pesquisa identifica e analisa os quadros acionados na cobertura realizada pelas revistas Veja, Isto É, Carta Capital e Época acerca da controvérsia sobre as células-tronco embrionárias, que teve maior exposição pública em função do julgamento da Ação Direta de Inconstitucionalidade (ADIN 3150) pelo Supremo Tribunal Federal. Parte-se da premissa de que, em situação de controvérsia, a publicização de quadros sobre a ciência e a tecnologia é ampliada, permitindo a sinalização de elementos ordinários da produção científica. Esses, geralmente, ficam submersos, quando vigora o modelo de cobertura jornalística centrado nos resultados de experimentos. Defendeu-se que a produção do conhecimento científico não é desconectada do social e, por isso, a rede heterogênea que os cientistas precisam formar para estabilizar seus fatos fica mais exposta, em época de controvérsia. A translação de interesse entre cientistas e os diversos agentes desta rede é fator indispensável para que ocorra esta estabilização. Rejeitou-se a compreensão do jornalismo, enquanto simples categoria de divulgação científica, por considerar esta classificação redutora das possibilidades do jornalismo em expor os diversos quadros da ciência e da tecnologia. Realizou-se então a análise qualitativa de quadros, tomados como pacotes interpretativos que expõe percepções marcadamente culturais sobre a ciência. A análise confirmou a hegemonia do quadro progresso, reiterando sua força cultural na definição da ciência. Os quadros político, ético e incerteza técnica também foram acionados. Identificou-se que a combinação entre o quadro progresso e os demais foi a forma mais recorrente de abordagem jornalística da controvérsia. Pesquisadores, jornalistas e pacientes apresentaram-se como os principais agentes atuantes no debate público, reforçando o quadro progresso, mesmo na presença dos quadros incerteza técnica e ético. O reforço do progresso deu-se também porque os opositores do uso de embrião humano nas pesquisas foram silenciados pelas revistas. Relevante ainda é o fato de a maior visibilidade de quadros da ciência ofertar pistas para a identificação de elementos da produção científica na cobertura. Demonstrou-se, todavia, que a exposição das ações dos cientistas nesta rede heterogênea de produção, não representou verdadeira oposição ao quadro progresso. Defendeu-se que exposição dos quadros pelo jornalismo mostrou-se efetiva justamente por ser o jornalismo um componente importante desta rede. A estabilização dos fatos científicos, em tempo de controvérsia, passa pelo jornalismo, visto como espaço relevante de construção e/ou difusão de quadros que reforçam, alimentam e/ou renovam a cultura científica contemporânea. / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Comunicação. Salvador-Ba, 2011.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-08-25Bitstream added on 2014-06-13T19:26:25Z : No. of bitstreams: 1 martins_amvc_dr_botfm_prot.pdf: 1428441 bytes, checksum: e687eeb3da2bd5d051917dea14402c3d (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Fundação para o Desenvolvimento Médico e Hospitalar (Famesp) / O objetivo deste estudo foi determinar a importância do local de transferência embrionária (metade superior ou inferior da cavidade endometrial) nas taxas de implantação e gestação. Metodologia: Foram randomizadas 400 transferências embrionárias, guiadas por ultra-sonografia em dois grupos, de acordo com a distância entre a camada de basal de endométrio fúndico e a ponta do cateter de transferência, no ato do procedimento. O Grupo 1 (n200) correspondeu às transferências sendo realizadas a uma distância <50% do comprimento da cavidade endometrial, isto é, na metade superior da cavidade. O Grupo II (n=200) correspondeu às transferências realizadas a uma distância 50% do comprimento da cavidade endometrial, isto é, na metade inferior da cavidade. Os dados foram avaliados pelos testes t de Student, Mann-Whitney e exato de Fisher. Resultados: As características gerais da população estudada e das transferências tiveram distribuição igualitária (p>0,05) entre Grupos l e II. Não houve diferença estatística entre os grupos com relação às taxas de implantação embrionária (Grupo 1: 16,0%; Grupo II: 16,4% p=0,86) e gestação (Grupo 1: 35,0%; Grupo II: 29,5% p=0,28). Conclusão: As taxas de implantação e gestação são similares, quando os embriões são colocados na metade superior ou inferior da cavidade endometrial. / The objective of the present study was to determine the importance of the site of embryo transfer (upper or lower haif endometrial cavity) on implantation and clinical pregnancy rates. Methods: A total of 400 transfers guided by ultrasound were randomly assigned to two groups according to the distance between the basal layer of fundal endometrium and the catheter tip at the time of embryo placement. Group 1 (n=200) consísted of transfers corresponding to a distance of <50% of the endometrial cavity length, i.e. transfer in upper haif of the cavity; and group li (n=200) consisted of transfers corresponding to a distance of 50% of the endometrial cavity Iength, ie. transfer in lower haif of cavity. The Student's t-test, Mann-Whitney test and Fishers exact test were used where appropriate. Results: The general characteristics of the study population and the main transfer cycle characteristics had an equal distribution (p>0.05) between groups 1 and II. No significant difference in implantation (Group 1: 16.0%; Group II: 16.4% p=0.86) or pregnancy rates (Group 1: 35.0%; Group II: 29.5% p=0.28) was observed between groups 1 and II. Conclusion: The implantation or pregnancy rates were similar whether the embryos were deposited in the upper or lower half of the endometrial cavity.

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Foram avaliados os efeitos do intervalo entre aspirações foliculares (IEA; OPU) e do tratamento com somatrotopina bovina recombinante (bST) na produção in vitro de embriões bubalinos. Dezesseis fêmeas foram distribuídas aleatoriamente em quatro grupos (fatorial 2x2): (1) G-Cont7: sessões de OPU uma vez por semana; (2) G-bST7: sessões de OPU uma vez por semana + 500mg de bST a cada 14 dias; (3) G-Cont14: sessões de OPU a cada 14 dias e (4) G-bST14: sessões de OPU + 500mg de bST a cada 14 dias. Os animais do G-Cont7 e G-bST7 foram submetidos a 16 sessões de OPU, e os animais do G-Cont14 e G-bST14 a oito sessões de OPU. Nas sessões realizadas uma vez por semana (G-s/bST) reduziu-se o número de folículos aspirados, de oócitos totais recuperados e de oócitos viáveis (P0,004). O tratamento com bST aumentou o número de folículos aspirados (P<0,0001), o total de oócitos recuperados e a taxa de recuperação (P=0,07). No entanto, nem o IEA e nem o tratamento com bST aumentaram a produção in vitro de embriões bubalinos. / It was evaluated the effect of OPU interval and bST treatment on embryo production in buffalo. Sixteen females were randomly assigned in 4 groups, in a 2x2 factorial experimental design: (1) G-Cont7: OPU session each seven days; (2) G-bST7: OPU session each seven days plus 500mg of bST each 14 days; (3) G-Cont14: OPU session each 14 days and (4) G-bST14: OPU session plus 500mg of bST each 14 days. Animals of G-Cont7 and G-bST7 were submitted to 16 OPU sessions, and those of G-Cont14 and G-bST14 to 8 OPU sessions. The OPU session performed every week (G-s/bST) decreased the number of aspirated follicles, and the number of total and viable recovery oocytes (P0.004). The treatment with bST increased the number of aspirated follicles (P<0.0001), the number of recovery oocytes and the oocyte recovery rate (P=0.07). However, neither OPU interval nor bST treatment increased the in vitro embryo production in buffalo.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCV08MA028.pdf: 640511 bytes, checksum: 7739954e4535ca25f1e1be5d8d3266a8 (MD5) Previous issue date: 2008-05-26 / Animal cloning has been associated with developmental abnormalities, with the level of heteroplasmy caused by the procedure per se being one of the potential determining factors for the appearance of the problems. Embryo aggregation may be an alternative to minimize such effects during cloning. The aim of this study was to determine the effect of the heteroplasmy caused by fusion of hemi-cytoplasts or by aggregation of hemi-embryos, varying the final cytoplasmic volume, on development and cell density of embryos produced by handmade cloning (HMC), parthenogenesis or in vitro fertilization (IVF). In vitro-matured bovine oocytes, selected by the presence of a polar body, were manually bisected, followed by fluorescence screening of hemi-cytoplasts. One or two enucleated hemi-cytoplasts were paired and fused with one skin somatic cell. Activated clone and zona-free parthenote embryos and hemi-embryos were in vitro-cultured in microwells (WOW system), being allocated to one of six experimental groups, based on the volume of cytoplasm used for embryo reconstruction either by fusion of hemi-cytoplasts or by aggregation of hemi-embryos or embryo, on a per WOW basis, as follows: single clone or parthenote hemi-embryos (G1: 1 x 50%); aggregation of two (G2: 2 x 50%), three (G3: 3 x 50%) or four (G4: 4 x 50%) clone or parthenote hemi-embryos; single clone or parthenote embryos (G5: 1 x 100%); or aggregation of two clone or parthenote embryos (G6: 2 x 100%). Zona-intact parthenote or IVF embryos (G7: Zona-intact, 100%), used as controls, were in vitro-cultured in 4-well dishes. Data were analyzed by &#967;2, ANOVA, Pearson s correlation or linear regression, for P<0.05. In general, results indicated that the increase in the number of aggregated structures within each WOW was followed by a linear increase in cleavage, blastocyst rate and cell density. Even though those observations were more pronounced in parthenotes, cell density and embryo quality were superior in clone embryos. The increase in cytoplasmic volume, either by fusion or by aggregation, had a positive effect on embryo development, supporting the establishment of pregnancies after transfer to female recipients. Nevertheless, the use of only half of the normal volume did not affect the developmental potential to the blastocyst stage, but reduced cell number. In conclusion, despite the increase in embryo development and cell density per WOW, embryo aggregation did not improve blastocyst yield or cell number, on a hemi-cytoplast basis / A clonagem animal tem sido associada a anormalidades de desenvolvimento, com o nível de heteroplasmia causados pela técnica per se sendo um dos potenciais fatores determinantes do aparecimento dos problemas. A agregação embrionária pode ser uma alternativa para minimizar tais efeitos causados pela clonagem. O objetivo deste estudo foi determinar o efeito da heteroplasmia pela fusão de hemi-citoplastos ou da agregação de hemi-embriões, variando-se o volume citoplasmático final, no desenvolvimento e na densidade celular de embriões produzidos por handmade cloning (HMC), partenogênese ou fecundação in vitro (FIV). Oócitos bovinos maturados in vitro, selecionados pela presença do corpúsculo polar, foram bisseccionados manualmente, seguidos da seleção de hemi-citoplastos por fluorescência. Um ou dois hemi-citoplastos enucleados foram pareados e fusionados a uma célula somática cutânea. Embriões e hemi-embriões de clonagem e de partenogênese (sem zona pelúcida) foram ativados e cultivados in vitro em micropoços (sistema WOW), sendo alocados para um de seis grupos experimentais, baseado no volume de citoplasma utilizado para a reconstrução embrionária pela fusão de hemi-citoplastos ou agregação de hemi-embriões e embriões, por micropoço (WOW), conforme a seguir: um único hemi-embrião de clonagem ou de partenogênese (G1: 1 x 50%); agregação de dois (G2: 2 x 50%), três (G3: 3 x 50%) ou quatro (G4: 4 x 50%) hemi-embriões de clonagem ou de partenogênese; um único embrião de clonagem ou de partenogênese (G5: 1 x 100%); ou agregação de dois embriões de clonagem ou de partenogênese (G6: 2 x 100%). Embriões intactos oriundos de FIV ou de partenogênese (G7: Zona intacta, 100%), utilizados como controle, foram cultivados in vitro em placas de 4 poços. Os resultados foram analisados pelos testes do &#967;2, ANOVA, correlação de Pearson ou regressão linear, para P<0.05. Em termos gerais, os resultados indicaram que o aumento no número de estruturas agregadas em cada micropoço foi seguido por um aumento linear nas taxas de clivagem, de blastocisto e na densidade celular. Mesmo que tais observações tenham sido mais pronunciadas nos partenotos, a densidade celular e a qualidade embrionária foram superiores em embriões clonados. O aumento no volume citoplasmático por fusão ou agregação apresentou um efeito positivo no desenvolvimento embrionário, dando suporte ao estabelecimento de prenhezes após a transferência para fêmeas receptoras. No entanto, a utilização de apenas metade do volume normal não afetou o potencial de desenvolvimento até o estádio de blastocisto, mas reduziu o número de células. Em conclusão, apesar de haver um aumento no desenvolvimento e densidade celular em embriões por micropoço, a agregação embrionária não melhorou a taxa de blastocistos ou o número de células, com base no número de hemi-citoplastos utilizados por embrião