Em fêmeas de mamíferos, um dos cromossomos X é inativado proporcionando compensação de dose entre os produtos gênicos de machos e fêmeas. A inativação do cromossomo X (ICX) ocorre no embrião em desenvolvimento, e se caracteriza pela aquisição de marcas heterocromáticas no cromossomo X inativado (Xi), que são mantidas nas células somáticas ao longo das divisões celulares. O melhor modelo para estudo do início da ICX são as células-tronco embrionárias femininas. Provenientes da massa celular interna de blastocistos, elas representam um embrião em desenvolvimento e possuem os dois X ativos; a diferenciação das células promove a ICX in vitro, o que permite a identificação dos fatores e mecanismos moleculares envolvidos. A derivação de linhagens de célulastronco embrionárias humanas (human embryonic stem cells - hESCs) em 1998 permitiu novas possibilidades de estudo da ICX, pois a maioria dos trabalhos procurou esclarecer o mecanismo da ICX no modelo murino. Tradicionalmente, a manutenção da ICX em humanos tem sido investigada em células somáticas híbridas ou transformadas; porém, sabe-se que estas não representam um contexto celular natural. Assim, o presente trabalho teve como objetivos principais explorar a potencialidade de hESCs no estudo do início da ICX, e ainda investigar a função de três fatores na manutenção da ICX em células humanas imortalizadas: DNMT1 (enzima responsável pela manutenção da metilação do DNA), SMCHD1 (proteína da família de coesinas/condensinas), e XIST (um RNA não-codificador que inicia o processo de heterocromatinização do futuro Xi) foram selecionados para este estudo, uma vez que todos participam da manutenção da ICX em camundongos. Até o momento foram derivadas em nosso laboratório quatro linhagens de hESCs, as primeiras da América Latina. A caracterização das linhagens mostrou que, apesar de se manterem indiferenciadas, as hESCs femininas encontram-se em estágio pós-ICX, pois mesmo indiferenciadas já apresentam um dos X inativado. Nossos dados indicam que, submetidas às atuais condições de cultivo, as hESCs não são bons modelos para o estudo do início da ICX, e é possível que a inativação de um cromossomo X durante o cultivo confira alguma vantagem seletiva às células. A estratégia utilizada no estudo da manutenção da ICX foi o silenciamento dos três genes por interferência de RNA (RNAi). Não foi possível diminuir significativamente a expressão dos genes XIST e SMCHD1. Porém, o silenciamento de DNMT1 foi expressivo, e em resposta foi observada reativação do gene MAOA, localizado no cromossomo X e submetido à inativação. Apesar de nossas análises mostrarem que os efeitos da diminuição de DNMT1 foram restritos ao gene MAOA, estes resultados sugerem a existência de diferentes hierarquias de controle epigenético dos genes submetidos à ICX em células humanas / In female mammals, one of the X chromosomes is inactivated to achieve dosage compensation between males and females. The X chromosome inactivation (XCI) occurs early during embryogenesis and is characterized by the acquisition of heterochromatic features on the inactive X (Xi), which are maintained during all the subsequent cell divisions. Embryonic stem cells are the most suitable cells to study the establishment of XCI. They are obtained from the inner cell mass (ICM) of blastocysts, and can represent a developing female embryo, possessing two active X-chromosomes; when differentiated, these cells recapitulate XCI in vitro, and thus one can identify XCI regulators and factors involved. The derivation of human embryonic stem cells (hESCs) in 1998 offered new possibilities to study XCI, since most of the mechanistic studies of XCI have so far been investigated in the mouse model system. Traditionally, maintenance of XCI in humans has been addressed in somatic cell hybrids or transformed cells; however, they do not represent a natural cellular context. The main goals of the present work were to verify the potential of hESCs as models of XCI, and also to study the function of three important factors in XCI maintenance in immortalized human cells. DNMT1 (DNA-methyltransferase 1), SMCHD1 (a cohesin/condensin protein family member) and the XIST gene (a non-coding RNA which triggers XCI and promotes X heterochromatin formation on the future Xi) were selected, as they are key factors in XCI maintenance in the mouse. Until now four hESCs lines were derived in our lab. Their characterization showed that, in spite of been undifferentiated, the female hESCs have already undergone XCI. Our data suggest that, under the actual culture conditions, hESCs are not good models to study XCI, and it is also possible that X inactivation confers selective advantage to hESCs. Knockdown by RNA interference was used to study the roles of three genes in XCI maintenance. We could not efficiently knockdown XIST or SMCHD1. However, the DNMT1 silencing was substantial, and led to the reactivation of MAOA, an X-linked gene subjected to XCI. Although the effect of DNMT1 silencing was restricted to MAOA, our data suggest that there are different epigenetic hierarchies to control the expression of the genes subjected to XCI in human cells.

O estradiol secretado pelo folículo dominante (DOM) desempenha importante papel na luteólise da vaca. Em adição, o reconhecimento materno da prenhez (MRP) requer um ambiente uterino otimizado, o qual por sua vez depende da função luteínica e de adequadas concentrações de progesterona circulante. Os objetivos do presente estudo foi testar diferentes estratégias para otimizar a função luteínica e prevenir a influência de um DOM durante o período crítico (CP) para o MRP (de D13 a D20 após o estro o estro). Diferentes abordagens foram testadas. No exp.1, 23 vacas Nelore foram tratadas com o protocolo ovsynch para induzir um cio sincronizado (D0). As vacas receberam: Gc (n=7) - nada mais; ThCG (n=5) - 3000 IU de hCG no D5; TE2 (n=6) - 5mg de 17b-estradiol (E2) no D12; ThCG/E2 (n=5) - hCG/D5 + E2/D12. Ultra-sonografias e dosagens de progesterona plasmática durante o ciclo estral permitiram determinar que o E2 reprogramou o ciclo ovariano ao prevenir a presença (P⁢0,05) de um DOM durante quase todo CP (0,6±0,7 dias entre D15 e D20), porém o E2 induziu a luteólise. As vacas que receberam a hCG desenvolveram corpo lúteo acessório e tiveram [P4] mais alta até o D13 (P⁢0,05). Portanto, a fase luteínica não foi prolongada No exp.2, os mesmos tratamentos foram impostos a 220 vacas Nelore (55 por grupo) após uma inseminação artificial em tempo fixo (TAI). As taxas de prenhez (PR) à TAI ou às inseminais de repasse durante uma estação com 64 dias de duração foram diminuídas (P⁢0,05) quando o E2 foi usado e a hCG não foi capaz de aumentar aquelas PR. No exp.3, vacas Red Angus no pós-parto tiveram seu estro sincronizado (D0) e receberam: nada mais (GCT, n=5) ou 200mg de gonadorrelina no D5 mais 3000 IU hCG no D13 (GRF, n=5); ou ablação de todos folículos ³7mm através de aspiração folicular em D14, D17 e D20 (GRM, n=5). GRF teve luteólise retardada (18,2±1,0b dias, 23,6&plusmn1,0a dias e 18,7&plusmn1,2b dias para GCT, GRF e GRM, respectivamente) e maior [P4] que os outros grupos. Folículos maiores que 7mm foram observados quando das aspirações. Foi possível concluir que: a) E2 permitiu consistentemente reprogramar o desenvolvimento folicular, porém causou luteólise e o seu uso trouxe efeitos negativos sobre as PR; b) a hCG melhorou a função luteínica mas não aumentou as PR; c) a ablação dos folículos ³7mm não preveniu a presença do DOM no CP para o MRP e d) a associação GnRH/hCG otimizou a função luteínica, retardou a luteólise e prolongou a fase luteínica de modo que todo o CP esteve sob influência da progesterona / Estradiol secreted from the dominant follicle (DOM) plays a key role in triggering luteolysis in the cow. In addition, maternal recognition of pregnancy (MRP) requires an optimum uterine environment, which directly depends on luteal function and adequate levels of circulating progesterone. The aim of this study was to test different strategies to optimize luteal function and prevent the influence of a DOM throughout the critical period (CP) for MRP (from D13 to D20 after estrus). Different approaches were tested. In exp.1, 23 Nelore cows were treated with the ovsync protocol to induce a synchronized estrus (D0). Cows received: Gc (n=7) - nothing else; ThCG (n=5) - 3000 IU of hCG five days (D5) after estrus; TE2 (n=6) - 5mg of 17b-estradiol (E2) on D12; ThCG/E2 (n=5) - hCG/D5 + E2/D12. Ultrasound evaluation and plasmatic progesterone concentration ([P4]) throughout estrous cycle allowed to conclude: E2 reprogrammed ovarian cycle by preventing the presence (P⁢.05) of a DOM during almost all CP (0.6±.7 days within the D15 to D20 interval) but induced luteolysis; cows receiving hCG developed accessory corpus luteum and had higher [P4] up to D13 (P⁢.05). Therefore, luteolysis was not delayed and luteal phase was not prolonged. In exp.2, same treatments were imposed to 220 Nelore cows (55 per group) after a timed artificial insemination (TAI). Pregnancy rates (PR) at TAI or at AIs thereafter over a 64-day period were reduced (P⁢0.05) by using E2 and hCG was not capable to improve those PR. In exp.3, postpartum Red Angus cows were estrus synchronized (D0) and received: nothing else (GCT, n=5) or 200mg of gonadorrelin on D5 plus 3000 IU hCG on D13 (GRF, n=5); or ablation of all follicles ³7mm through follicular aspiration on D14, D17 and D20 (GRM, n=5). GRF had delayed luteolysis (18.2±1.0b days, 23.6±1.0a days, 18.7±1.2b days for GCT, GRF, GRM, respectively) and higher [P4] than other groups. Follicles larger than 7mm were observed in all occasions of aspiration. In could be concluded that: a) E2 allowed to consistently reschedule follicular development but caused luteolysis and its use was detrimental to PR; b) hCG improved luteal function but did not increase PR; c) ablation of 7mm follicles did not prevent a DOM throughout CP for MRP and d) GnRH/hCG association optimized luteal function, delayed luteolysis and prolonged luteal phase in such a way that all CP was under progesterone influence

Neste estudo foi analisada a expressão gênica e protéica, uterina e embrionária da quimiocina Ccl25 e de seu receptor Ccr9 nas fases iniciais da implantação embrionária (dias 3,5, 4,5, 5,5 e 7,5 de gestação). Por meio de reações imunohistoquímicas e de citometria de fluxo, foram identificadas as populações celulares envolvidas nesta expressão. Também, foram realizados ensaios de quimiotaxia com o silenciamento da expressão de Ccl25 (ODNs-Antisense) nas células trofoblásticas, para a avaliação das atividades desta quimocina. Nossos resultados sugerem o estabelecimento de uma comunicação embrião (células trofoblásticas) - endométrio (células do sistema immunológico), via Ccl25/Ccr9. Esses achados são relevantes para a compreensão das interações blastocisto/sistema immunológico materno no estabelecimento dos mecanismos imunoreguladores durante a implantação embrionária. / In this study, we analyzed the gene and protein, uterine and embryonic expression of Ccl25 chemokine and its receptor Ccr9 in early stages of embryo implantation (days 3.5, 4.5, 5.5 and 7.5 of gestation). By using immunohistochemistry and flow cytometric assays, cell populations involved in this expression were identified. In addition, chemotaxis assays were also performed after silencing of Ccl25 (ODNs-antisense) in trophoblast cells. . Our results suggest the establishment of an endometrium (immune cells) - embryo (trophoblast cells) dialogue via Ccl25/CCR9. These findings are relevant for understanding the interactions between blastocyst and maternal immune system in the establishment of immunoregulatory mechanisms during implantation.

A maconha é a droga ilícita mais consumida entre gestantes. Entretanto, os efeitos do uso materno sobre a gestação e o desenvolvimento fetal não são bem esclarecidos. Estudos experimentais e epidemiológicos apresentam resultados conflitantes devido à via de administração, tempo de exposição, dose e como a toxicidade da Cannabis é testada. Neste estudo experimental foram investigados os efeitos da inalação materna da fumaça de Cannabis sativa, aproximando as reais condições de uso da droga por humanos. Camundongas gávidas (n=20) foram expostas diariamente durante 5 minutos à fumaça decorrente da queima de maconha ( 0,2 g de Cannabis), ou ao ar filtrado, a partir do 5,5° dia gestacional (DG) ao 17,5° DG. A ingestão de alimentos e o peso materno foram registrados. Análise por ultrassom foram realizadas entre o 10,5° e o 16,5° DG. No 18,5° DG metade das fêmeas foram eutanasiadas para a a avaliação dos fetos a termo, reabsorções e placentas. A duração da gestação, desfechos neonatais e comportamentais (reflexo, força muscular, ansiedade e memória) em neonatos e adultos foram avaliados na outra metade das fêmeas. A exposição diária de 5 min (dose baixa) durante a gestação resultou em redução do peso ao nascer mas o tamanho da prole não foi alterado; No entanto, o número de filhotes machos por prole foi maior. Além disso, o peso líquido da placenta foi aumentado e a proporção feto/placenta foi diminuída em machos, mostrando um efeito específico do sexo. A exposição também alterou a força muscular e reflexos em neonatos, além de causar prejuízos na memória e efeito ansiolítico na prole exposta. Em conclusão, os resultados indicam que o fumo da maconha durante a gestação, mesmo em doses baixas, pode ser embriotóxico, fetotóxico e pode alterar o comportamento em neonatos e adultos / Marijuana is the most used illegal drug among pregnant women. However, the effects of maternal use on pregnacy and fetal development are not well understood. Experimental and epidemiologicals studies have show conflicting results due to the route of administration, duration of exposure, dose, and a toxicity of Cannabis is tested. In this experimental study we investigated the effects of maternal inhalation of smoke Cannbis sativa , approaching the actual drug use conditons for humans. Pregnant mice (n=20) were exposed (only noise) daily for 5 min to smoke resulting from burning marijuana (0.2g Cannabis), or filtered air, from gestational day (GD) 5.5° to GD 17.5°. Food intake and maternal weight were recorded. Ultrasound analysis was performed on 10.5 and 16.5° GD. On 18.5° GD half the mice were euthanized for evaluation of term fetus, resorptions and placenta. The duration of pregnancy , neonatal outcomes and behavioral reponses (reflex,muscle strenght, anxiety and memory) were assessed in the other half of the females. The daily exposure of 5 min (low dose) during pregnancy resulted in reduced brth weiht but the size of the offspring was not changed; however, the number of males per offspring pups was higher. In addition, placental weight was increased and fetus/placenta ratio was decreased in males, showing a particular effect of sex.The exposure also altered muscle strength and reflexes in newborns and cause impars in memory and anxiolytic effects in exposed offspring. In conclusion, the results indicate that smoking marijuana during pregnancy, even in low doses, can be embryotoxic, foetotoxic and may change in the behavior in neonates and adults

O estradiol secretado pelo folículo dominante (DOM) desempenha importante papel na luteólise da vaca. Em adição, o reconhecimento materno da prenhez (MRP) requer um ambiente uterino otimizado, o qual por sua vez depende da função luteínica e de adequadas concentrações de progesterona circulante. Os objetivos do presente estudo foi testar diferentes estratégias para otimizar a função luteínica e prevenir a influência de um DOM durante o período crítico (CP) para o MRP (de D13 a D20 após o estro o estro). Diferentes abordagens foram testadas. No exp.1, 23 vacas Nelore foram tratadas com o protocolo ovsynch para induzir um cio sincronizado (D0). As vacas receberam: Gc (n=7) - nada mais; ThCG (n=5) - 3000 IU de hCG no D5; TE2 (n=6) - 5mg de 17b-estradiol (E2) no D12; ThCG/E2 (n=5) - hCG/D5 + E2/D12. Ultra-sonografias e dosagens de progesterona plasmática durante o ciclo estral permitiram determinar que o E2 reprogramou o ciclo ovariano ao prevenir a presença (P⁢0,05) de um DOM durante quase todo CP (0,6±0,7 dias entre D15 e D20), porém o E2 induziu a luteólise. As vacas que receberam a hCG desenvolveram corpo lúteo acessório e tiveram [P4] mais alta até o D13 (P⁢0,05). Portanto, a fase luteínica não foi prolongada No exp.2, os mesmos tratamentos foram impostos a 220 vacas Nelore (55 por grupo) após uma inseminação artificial em tempo fixo (TAI). As taxas de prenhez (PR) à TAI ou às inseminais de repasse durante uma estação com 64 dias de duração foram diminuídas (P⁢0,05) quando o E2 foi usado e a hCG não foi capaz de aumentar aquelas PR. No exp.3, vacas Red Angus no pós-parto tiveram seu estro sincronizado (D0) e receberam: nada mais (GCT, n=5) ou 200mg de gonadorrelina no D5 mais 3000 IU hCG no D13 (GRF, n=5); ou ablação de todos folículos ³7mm através de aspiração folicular em D14, D17 e D20 (GRM, n=5). GRF teve luteólise retardada (18,2±1,0b dias, 23,6&plusmn1,0a dias e 18,7&plusmn1,2b dias para GCT, GRF e GRM, respectivamente) e maior [P4] que os outros grupos. Folículos maiores que 7mm foram observados quando das aspirações. Foi possível concluir que: a) E2 permitiu consistentemente reprogramar o desenvolvimento folicular, porém causou luteólise e o seu uso trouxe efeitos negativos sobre as PR; b) a hCG melhorou a função luteínica mas não aumentou as PR; c) a ablação dos folículos ³7mm não preveniu a presença do DOM no CP para o MRP e d) a associação GnRH/hCG otimizou a função luteínica, retardou a luteólise e prolongou a fase luteínica de modo que todo o CP esteve sob influência da progesterona / Estradiol secreted from the dominant follicle (DOM) plays a key role in triggering luteolysis in the cow. In addition, maternal recognition of pregnancy (MRP) requires an optimum uterine environment, which directly depends on luteal function and adequate levels of circulating progesterone. The aim of this study was to test different strategies to optimize luteal function and prevent the influence of a DOM throughout the critical period (CP) for MRP (from D13 to D20 after estrus). Different approaches were tested. In exp.1, 23 Nelore cows were treated with the ovsync protocol to induce a synchronized estrus (D0). Cows received: Gc (n=7) - nothing else; ThCG (n=5) - 3000 IU of hCG five days (D5) after estrus; TE2 (n=6) - 5mg of 17b-estradiol (E2) on D12; ThCG/E2 (n=5) - hCG/D5 + E2/D12. Ultrasound evaluation and plasmatic progesterone concentration ([P4]) throughout estrous cycle allowed to conclude: E2 reprogrammed ovarian cycle by preventing the presence (P⁢.05) of a DOM during almost all CP (0.6±.7 days within the D15 to D20 interval) but induced luteolysis; cows receiving hCG developed accessory corpus luteum and had higher [P4] up to D13 (P⁢.05). Therefore, luteolysis was not delayed and luteal phase was not prolonged. In exp.2, same treatments were imposed to 220 Nelore cows (55 per group) after a timed artificial insemination (TAI). Pregnancy rates (PR) at TAI or at AIs thereafter over a 64-day period were reduced (P⁢0.05) by using E2 and hCG was not capable to improve those PR. In exp.3, postpartum Red Angus cows were estrus synchronized (D0) and received: nothing else (GCT, n=5) or 200mg of gonadorrelin on D5 plus 3000 IU hCG on D13 (GRF, n=5); or ablation of all follicles ³7mm through follicular aspiration on D14, D17 and D20 (GRM, n=5). GRF had delayed luteolysis (18.2±1.0b days, 23.6±1.0a days, 18.7±1.2b days for GCT, GRF, GRM, respectively) and higher [P4] than other groups. Follicles larger than 7mm were observed in all occasions of aspiration. In could be concluded that: a) E2 allowed to consistently reschedule follicular development but caused luteolysis and its use was detrimental to PR; b) hCG improved luteal function but did not increase PR; c) ablation of 7mm follicles did not prevent a DOM throughout CP for MRP and d) GnRH/hCG association optimized luteal function, delayed luteolysis and prolonged luteal phase in such a way that all CP was under progesterone influence

Em relação à reprodução, notamos que os equídeos, ao contrário dos bovinos e outros animais de produção, não são selecionados para tal característica. Isto se deve ao fomento das competições equestres onde são julgadas características de performance atlética, conformação, pelagem e andamento. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar por meio de estudo retrospectivo, durante 10 estações de monta, os aspectos reprodutivos dos equídeos do Setor de Equideocultura da Prefeitura do Campus Fernando Costa da Universidade de São Paulo, localizado na cidade de Pirassununga, SP. Foram utilizados 60 éguas, Puro Sangue Inglês, Brasileiro de Hipismo e mestiças com faixas etárias variando de 2 a 23 anos. Ainda, 13 garanhões e 2 jumentos. Para as análises estatísticas foi utilizado o programa SAS (versão 9.3, SAS Institute Inc., Cary, NC, USA), onde probabilidades de P≤0,05 e entre P>0,05 e < 0,10 indicaram diferenças significativas e tendências, respectivamente. A incidência de perda embrionária precoce entre 14 e 35 dias de gestação (PEP de 14 a 35d) foi maior (P≤0,05) quando as éguas apresentaram dupla ovulação, éguas que receberam de 4 a 7 aplicações da hCG ao longo vida reprodutiva apresentaram diminuição significativa (P≤0,05) da resposta esperada, a idade das éguas (2 a 4, 5 a 8 e 9 a 23 anos) não influenciou (P>0,05) no desenvolvimento de folículos hemorrágicos anovulatórios, a presença de cistos endometriais influenciou (P≤0,05) nos índices de PEP de 14 a 35d, éguas inseminadas artificialmente com sêmen in natura diluído apresentaram maior (P≤0,05) incidência de endometrite pós-cobertura, éguas de 9 a 23 anos de idade apresentaram maior (P≤0,05) incidência de infecção uterina, a endometrite influenciou (P≤0,05) na maior ocorrência de PEP de 14 a 35d e quanto maior o diâmetro do folículo dominantes menores são as chances da égua desenvolver endometrite. O intervalo entre o parto e a primeira ovulação não sofreu efeito (P>0,05) da faixa etária das éguas, não há diferença quanto à fertilidade do primeiro estro após o parto e demais ciclos, não houve efeito (P>0,05) do reprodutor (garanhão ou jumento) no tempo das éguas estudadas, éguas de 9 a 23 anos de idade apresentaram tempo de gestação maior (P≤0,05) aquelas de 2 a 4 e 5 a 8 anos. Éguas de 9 a 23 anos apresentaram menor (P≤0,05) taxa de prenhez aos 60 dias e, por fim, todas as estações reprodutivas estudas apresentaram taxa de prenhez próximo ou superior a 80%, exceto a estação reprodutiva 2012/2013. Os resultados obtidos indicam quais possíveis fatores podem interferir nos aspectos reprodutivos e, consequentemente, na eficiência reprodutiva de criações de equídeos. / Regarding reproduction, it has been noticed that equidae, unlike cattle and other farm animals, are not selected for this characteristic. This is due to the promotion of equestrian competitions where athletic performance, conformation, coat and pace are evaluated. In this context, the present work had as objective to evaluate through the retrospective study along 10 breeding seasons, the reproductive aspects of equidae bred in the equideocultural sector of the Fernando Costa Campus administration of the University of São Paulo, located at Pirassununga, SP. Sixty Thoroughbred, Brazilian Sport Horse and mixed breed mares were used, with ages varying from 2 to 23 years. Also, 13 stallions and 2 donkeys were used. Statistical analyzes were performed by SAS program (version 9.3, SAS Institute Inc., Cary, NC, USA), where probabilities of P≤0.05 and between P>0.05 and <0.10 indicated significant differences and tendencies, respectively. The incidence of early embryonic loss between 14 and 35 days of gestation (PEP from 14 to 35 d) was higher (P≤0.05) when mares presented double ovulation, mares that received 4 to 7 hCG applications throughout their reproductive life showed a significant decrease (P≤0.05) of the expected response, the age of the mares (2 to 4, 5 to 8 and 9 to 23 years) did not influence (P> 0.05) the development of anovulatory haemorrhagic follicles, presence of endometrial cysts influenced (P≤0.05) in PEP rates from 14 to 35 d, artificially inseminated mares with diluted semen showed higher (P≤0.05) incidence of postbreed endometritis, mares from 9 to 23 years (P≤0.05) had a higher (P≤0.05) incidence of uterine infection, endometritis influenced (P≤0.05) on higher occurrence of PEP from 14 to 35d and the larger the diameter of the dominant follicle the lower the chances of the mare to develop endometritis. The interval between birth and first ovulation did not showed effect (P>0.05) on the age of the mares, there was no difference in the fertility of the first estrus after foaling and other cycles, there was no effect (P>0.05) of the reproductor (stallion or donkey) in the gestation period of the studied mares, mares from 9 to 23 years of age showed a longer gestation period (P≤0.05 ) than those from 2 to 4 and 5 to 8 years old. Mares aged 9 to 23 years presented lower (P≤0.05) pregnancy rate at 60 days and, finally, all the reproductive seasons studied presented pregnancy rate close to or greater than 80%, except the reproductive season 2012/2013. The results indicate which possible factors may interfere in the reproductive aspects and, consequently, on the reproductive efficiency of equine breeding.

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Além disso, estudamos os mecanismos de liberação de glutamato com relação a sua dependência de Ca2+ extracelular e a participação de transportadores dependentes e independentes de Na+. Uma vez que, níveis elevados de glutamato estão implicados na ocorrência de estresse oxidativo, investigamos também os efeitos de NGF sobre a liberação de compostos tióis. Para isto, tecidos retinianos íntegros de embrião de galinha (E11) foram incubados com NGF (10, 50, 100 ng/ml) por diferentes períodos de incubação (15, 30, 120). Os níveis extracelulares de glutamato e tióis foram medidos por cromatografia líquida de alta eficácia (CLAE) e ensaio colorimétrico, respectivamente. Observamos que NGF aumenta rapidamente a liberação basal de glutamato e também pode induzir a liberação de tióis em um tempo maior de incubação. De maneira interessante, o aumento dos níveis extracelulares de glutamato induzido por NGF foi revertido em meio sem Ca2+ somente em retinas tratadas por 15 min. Retinas que foram incubadas com NGF por 30 min apresentaram liberação de glutamato independente de Ca2+. Dado que, a liberação de glutamato e tióis induzida por NGF não foi bloqueada por Zn2+ e ocorreu na ausência de Na+, sugerimos o possível envolvimento do sistema independente de Na+, o trocador Xc- em ambos os processos. O aumento de tióis extracelulares induzido por NGF poderia representar um importante mecanismo protetor, possibilitando que os neurônios mantenham seu estado redox durante o desenvolvimento. / Nerve growth factor (NGF) belongs to the neurotrophin family and induces its effects through activation of two distinct receptor types. NGF was first described by Rita Levi-Montalcini and collaborators as an important factor involved in nerve differentiation and survival. Another role for NGF has been established in neurotransmitter release in the hippocampus, developing visual cortex and cerebellar neuron. However, this phenomenon has not been demonstrated in retina to date. We therefore investigated whether NGF can modulate the glutamate release in the retinal tissue at its peak of the neurotrophic activity (E10-E12). In addition this, we aimed to study the mechanisms of this effect about its dependence on extracellular Ca2+ and participation of Na+-dependent and Na+-independent glutamate transporters. Since high levels of glutamate signalization have been implicated in the oxidative stress, we also investigated the effects of NGF on the thiols compounds. We used intact retinal tissue from chicken embryos (E11) incubated with NGF (10, 50, 100 ng/ml) for different periods (15, 30, 45, 60, 120 min). Extracellular glutamate and thiols content was measured by HPLC methods and colorimetric assay, respectively. We found that NGF rapidly enhances the release of basal glutamate and it can induce thiol release in a more prolonged time of incubation, as well. Interestingly, the NGF-induced increase in the extracellular levels of glutamate was blocked by Ca2+-free medium only in retina treated for 15 min. Retina incubated for 30 min showed a non-vesicular NGF-induced glutamate release. Since glutamate and thiol release was not blocked by Zn2+, we suggested the possible involvement of system Xc- in both processes.NGF-induced increase in the extracellular thiol could be an important protective mechanism enabling retinal neurons to maintain their redox status during development.

Em relação à reprodução, notamos que os equídeos, ao contrário dos bovinos e outros animais de produção, não são selecionados para tal característica. Isto se deve ao fomento das competições equestres onde são julgadas características de performance atlética, conformação, pelagem e andamento. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar por meio de estudo retrospectivo, durante 10 estações de monta, os aspectos reprodutivos dos equídeos do Setor de Equideocultura da Prefeitura do Campus Fernando Costa da Universidade de São Paulo, localizado na cidade de Pirassununga, SP. Foram utilizados 60 éguas, Puro Sangue Inglês, Brasileiro de Hipismo e mestiças com faixas etárias variando de 2 a 23 anos. Ainda, 13 garanhões e 2 jumentos. Para as análises estatísticas foi utilizado o programa SAS (versão 9.3, SAS Institute Inc., Cary, NC, USA), onde probabilidades de P≤0,05 e entre P>0,05 e < 0,10 indicaram diferenças significativas e tendências, respectivamente. A incidência de perda embrionária precoce entre 14 e 35 dias de gestação (PEP de 14 a 35d) foi maior (P≤0,05) quando as éguas apresentaram dupla ovulação, éguas que receberam de 4 a 7 aplicações da hCG ao longo vida reprodutiva apresentaram diminuição significativa (P≤0,05) da resposta esperada, a idade das éguas (2 a 4, 5 a 8 e 9 a 23 anos) não influenciou (P>0,05) no desenvolvimento de folículos hemorrágicos anovulatórios, a presença de cistos endometriais influenciou (P≤0,05) nos índices de PEP de 14 a 35d, éguas inseminadas artificialmente com sêmen in natura diluído apresentaram maior (P≤0,05) incidência de endometrite pós-cobertura, éguas de 9 a 23 anos de idade apresentaram maior (P≤0,05) incidência de infecção uterina, a endometrite influenciou (P≤0,05) na maior ocorrência de PEP de 14 a 35d e quanto maior o diâmetro do folículo dominantes menores são as chances da égua desenvolver endometrite. O intervalo entre o parto e a primeira ovulação não sofreu efeito (P>0,05) da faixa etária das éguas, não há diferença quanto à fertilidade do primeiro estro após o parto e demais ciclos, não houve efeito (P>0,05) do reprodutor (garanhão ou jumento) no tempo das éguas estudadas, éguas de 9 a 23 anos de idade apresentaram tempo de gestação maior (P≤0,05) aquelas de 2 a 4 e 5 a 8 anos. Éguas de 9 a 23 anos apresentaram menor (P≤0,05) taxa de prenhez aos 60 dias e, por fim, todas as estações reprodutivas estudas apresentaram taxa de prenhez próximo ou superior a 80%, exceto a estação reprodutiva 2012/2013. Os resultados obtidos indicam quais possíveis fatores podem interferir nos aspectos reprodutivos e, consequentemente, na eficiência reprodutiva de criações de equídeos. / Regarding reproduction, it has been noticed that equidae, unlike cattle and other farm animals, are not selected for this characteristic. This is due to the promotion of equestrian competitions where athletic performance, conformation, coat and pace are evaluated. In this context, the present work had as objective to evaluate through the retrospective study along 10 breeding seasons, the reproductive aspects of equidae bred in the equideocultural sector of the Fernando Costa Campus administration of the University of São Paulo, located at Pirassununga, SP. Sixty Thoroughbred, Brazilian Sport Horse and mixed breed mares were used, with ages varying from 2 to 23 years. Also, 13 stallions and 2 donkeys were used. Statistical analyzes were performed by SAS program (version 9.3, SAS Institute Inc., Cary, NC, USA), where probabilities of P≤0.05 and between P>0.05 and <0.10 indicated significant differences and tendencies, respectively. The incidence of early embryonic loss between 14 and 35 days of gestation (PEP from 14 to 35 d) was higher (P≤0.05) when mares presented double ovulation, mares that received 4 to 7 hCG applications throughout their reproductive life showed a significant decrease (P≤0.05) of the expected response, the age of the mares (2 to 4, 5 to 8 and 9 to 23 years) did not influence (P> 0.05) the development of anovulatory haemorrhagic follicles, presence of endometrial cysts influenced (P≤0.05) in PEP rates from 14 to 35 d, artificially inseminated mares with diluted semen showed higher (P≤0.05) incidence of postbreed endometritis, mares from 9 to 23 years (P≤0.05) had a higher (P≤0.05) incidence of uterine infection, endometritis influenced (P≤0.05) on higher occurrence of PEP from 14 to 35d and the larger the diameter of the dominant follicle the lower the chances of the mare to develop endometritis. The interval between birth and first ovulation did not showed effect (P>0.05) on the age of the mares, there was no difference in the fertility of the first estrus after foaling and other cycles, there was no effect (P>0.05) of the reproductor (stallion or donkey) in the gestation period of the studied mares, mares from 9 to 23 years of age showed a longer gestation period (P≤0.05 ) than those from 2 to 4 and 5 to 8 years old. Mares aged 9 to 23 years presented lower (P≤0.05) pregnancy rate at 60 days and, finally, all the reproductive seasons studied presented pregnancy rate close to or greater than 80%, except the reproductive season 2012/2013. The results indicate which possible factors may interfere in the reproductive aspects and, consequently, on the reproductive efficiency of equine breeding.

A influência do momento da ablação do folículo dominante antes do início do tratamento superovulatório, e seu efeito sobre a dinâmica folicular ovariana e a taxa de produção de embriões, ainda permanece indeterminada em bovinos. O presente estudo foi desenvolvido com objetivo de avaliar a resposta superovulatória de fêmeas da raça Limousin, determinando os efeitos da influência do dia de início da superovulação (SOV) de animais no diestro; da presença ou ausência de folículos palpáveis nos ovários no momento de início do tratamento (status ovariano); e do tempo, em horas, entre a ablação folicular e o início da SOV. Foram realizadas 244 lavagens uterinas para coleta de embriões em novilhas (n=98) e vacas (n=146), divididas em cinco grupos de acordo com o status ovariano no momento de início da SOV, durante o intervalo de 8 a 12 dias após o estro: grupo sem folículo perceptível (n=106); grupo com folículo mantido intacto (n=62) e grupos com folículo puncionado 48 h (n=10), 24 h (n=35) e 0 h (n=31) antes do início da SOV. Nos grupos em que foi realizada a ablação, utilizou-se uma cânula de metal contendo uma agulha para transposição da parede vaginal e ovariana até a aspiração do conteúdo folicular sob controle tátil por via retal. Os resultados obtidos determinaram que a presença de folículos palpáveis no momento de início da SOV reduz significativamente a resposta superovulatória. Os dados de ablação folicular realizada imediatamente ou até 24 h antes do início do tratamento de SOV aumentaram significativamente o número total de embriões viáveis. Entretanto, a resposta do tratamento superovulatório não foi afetada pelo dia do início da aplicação de gonadotrofina no período de 8 a 12 dias após o estro e nem pela categoria animal (novilha ou vaca). Em conclusão, a ablação de folículos perceptíveis por palpação retal entre os dias 8 a 12 do ciclo estral, quando realizada até 24 h antes do início do tratamento de SOV, aumentou o número total de embriões transferíveis por coleta em gado de corte (Bos taurus taurus). / The influence of the timing for the ablation of dominant follicle prior to superovulatory treatment, and its effect on ovarian follicular growth and embryo yield, still remain elusive in cattle. The present study was designed to evaluate the superovulatory response of Limousin cattle, aiming to determine the effect of the day at mid-diestrus for the onset of superovulation (SOV); presence or absence of large ovarian follicles (ovary status); and the time of follicular ablation, in hours, prior to the SOV. A total of 244 uterine flushings for embryo collections were made using two female categories (heifers or cows) at 8 to 12 days after the estrous. Based on ovary status, the females were allocated into 5 groups: group without palpable follicle(s) (n=106); group with intact follicle(s) (n=62), and groups with follicle ablation at 48 h (n=10), 24 h (n=35) and 0 h (n=31) before the beginning of SOV. Follicles were aspirated transvaginally using a specially designed custom-built steel cannula for follicular cyst puncture. Ovaries bearing follicles were positioned adjacent to the vaginal wall by rectal manipulation. The needle was pushed through the vaginal wall for the puncture and aspiration of the follicular contents. Data obtained demonstrated that the presence of large follicles at the onset of SOV treatment reduced the superovulatory response. The follicular ablation performed immediately or up to 24 h before the SOV increased the total number of viable embryos. However, the superovulatory response was not affected by the day of the start the SOV and by the animal category (heifer or cow) at the period of 8 to 12 days after estrus. In conclusion, the ablation of palpable follicles between days 8 to 12 of the estrous cycle, when accomplished up to 24 h before the beginning of the treatment of SOV, increased the total number of transferable embryos per flushing in beef cattle (Bos taurus taurus).

Orientadora: Profa. Dra. Marcella Pecora Milazzotto / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, 2014. / Atualmente, diversas tecnologias vêm sendo exploradas e têm sido sugeridas para evidenciar diferenças metabólicas entre embriões que resultem na identificação daqueles mais aptos a gerarem prenhes. Na produção in vitro de embriões bovinos podemos observar diferentes velocidades de desenvolvimento embrionário que apresentam características diferencias em relação ao metabolismo energético, o que se reflete na viabilidade destes embriões. Além disso, por se desenvolverem diferencialmente e apresentarem características metabólicas diferentes, esses embriões também poderão secretar e consumir diferencialmente moléculas no meio de cultivo que serviriam como biomarcadores da viabilidade embrionária. O objetivo principal deste trabalho foi é a identificação de biomarcadores relacionados ao metabolismo energético e sua possível relação com a qualidade embrionária. Para isso, embriões foram classificados, de acordo com sua cinética de clivagem, em embriões rápidos (4 ou mais células) e embriões lentos (2 ou 3 células) às 22 horas após o início do cultivo in vitro (40hpi). Desta forma, foi gerado dois grupos (rápido e lento) que foram avaliados nos estágios de clivagem (40hpi), mórula (96hpi) e blastocisto (168hpi). Em cada momento de análise os grupos foram avaliados em relação a quantidade de glicose, piruvato, lactato e glutamato no meio de cultivo, quantidade de glicogênio intracelular e expressão dos genes candidatos GLUT1, GLUT3, G6PD e GSK3. Como resultado embriões dos grupos rápido e lento variaram em relação ao consumo de glutamato, piruvato e glicose no meio de cultivo, sugerindo uma maior atividade metabólica dos embriões do grupo rápido. O estoque de glicogênio, apesar de similar entre os grupos nas fases de clivagem e mórula, na fase de blastocisto apenas embriões do grupo lento o apresentaram. Embriões de desenvolvimento rápido e lento apresentam diferenças em relação ao padrão de expressão de genes relacionados ao metabolismo energético em algumas das fases analisadas. De acordo com os dados obtidos, nenhum dos metabolitos parece ser um biomarcador que reflita relação com a qualidade embrionária. No entanto, os padrões encontrados associados com dados de expressão gênica obtidos pelo nosso grupo sugerem que embriões lentos são mais próximos do que seria o padrão in vivo.