O objetivo deste estudo foi comparar à resistência à fratura de três técnicas de colagem usadas para restaurar dentes fraturados hígidos e com tratamento endodôntico associado ou não a colocação de pino de fibra de vidro. Noventa incisivos humanos foram aleatoriamente divididos em três grupos de 30 dentes cada. No grupo A, os dentes não foram tratados endodonticamente, enquanto os dentes dos grupos B e C foram submetidos ao tratamento endodôntico, seguido de restauração da câmara pulpar com resina composta. Todos os dentes foram fraturados por uma carga axial aplicada na superfície vestibular para obter fragmentos dentais. Os dentes de cada grupo foram novamente subdivididos em três subgrupos: colagem simples [CS], chanfro vestibular [CV] e chanfro circunferencial [CC]). Antes da colagem dos fragmentos, pinos de fibra de vidro foram colocados nos dentes do grupo C. Todos os fragmentos dos dentes (grupos A, B e C) foram colados utilizando um cimento de dupla ativação (Duo- Link, Bisco Inc). No grupo CS, nenhum preparo adicional foi realizado após colagem, porém no restante dos dentes realizou-se uma canaleta vestibular (grupo CV) ou uma canaleta circunferencial ao redor da linha de colagem (CC) com aproximadamente 1,0 mm de profundidade. As canaletas foram restauradas com resina composta microhíbrida. Por fim, os espécimes foram submetidos a mesma carga axial no mesmo ponto pré-determinado. A resistência à fratura após o procedimento restaurador foi expressa em porcentagem de resistência do dente íntegro. Os dados foram submetidos a uma análise de variância de dois fatores (Grupo vs. Técnica de colagem) e teste de Tukey (?=0,05). Somente o fator principal Técnica de colagem foi estatisticamente significante (p<0,05). Nenhuma das técnicas de colagem empregadas conseguiu restabelecer a resistência à fratura do dente hígido. A confecção de uma canaleta vestibular e circunferencial proporcionaram uma recuperação de resistência similar (p>0,05) entre si e superior ao alcançado pela técnica de colagem simples (p<0,05). Concluiu-se que o uso de pino de fibra de vidro não é essencial para reforço da estrutura dental antes da colagem de fragmentos de dentes tratados endodonticamente. As técnicas de chanfro vestibular e chanfro circunferencial devem ser preferidas ao se realizar a colagem de fragmentos devido a maior recuperação da resistência do dente hígido em relação a técnica de colagem simples. / The aim of this study was to compare the fracture strength of three techniques used to reattach tooth fragments in sound and endodontically-treated fractured teeth either associated or not with fiber post placement. Ninety human lower incisors were randomly divided into three groups of 30 teeth each. In group A teeth were not subjected to endodontic treatment; while teeth from groups B and C were endodontically treated and the pulp chamber restored with a composite resin. All teeth were fractured by an axial load applied to the buccal area in order to obtain tooth fragments. Teeth from each group were divided again into three subgroups: bonded only [BO], buccal chamfer [BC] and circumferential chamfer [CC]). Before the re-attachment procedures, fiber posts were placed in teeth from group C. All teeth (groups A, B and C) had the fragments re-attached using a dual cure resin luting cement (Duo-Link, Bisco Inc., Itasca, IL). In the BO group, no additional preparation was made. Teeth from groups BC and CC groups had a 1.0 mm-depth chamfer placed in the fracture line either on buccal surface [group BC] or along the buccal and lingual surfaces [group CC]. Increments of microhybid composite resin were used in subgroups BC and CC to restore the chamfer. The specimens were loaded until fracture in the same pre-determined area. The force required to detach each fragment was recorded and a percentage of fracture strength recovery calculated for each tooth. The data was subjected to a two-way analysis of variance (Group vs. Re-attachment technique) and Tukey\'s test (?=0.05). Only the main factor Re-attachment technique was statistically significant (p<0.05). None of the techniques used for teeth re-attachment restored the fracture strength of the intact teeth. The placement of buccal and circumferential chamfer yielded statistically similar (p>0.05) fracture strength recovery, which was superior to the bonded only technique (p<0.05). The use of fiber post is not mandatory for the reinforcement of the tooth structure before reattachment of fragments in endodontically-treated teeth. When bonding a fractured fragment, the buccal or circumferential re-attachment techniques should be preferable in comparison with the simple re-attachment without any additional preparation.

A ação química, obtida pelo emprego de substâncias auxiliares de instrumentação, aliada à ação mecânica, promove a limpeza do sistema de canais radiculares. Determinadas propriedades das substâncias químicas, como a ação antimicrobiana, têm contribuído para a eliminação de microrganismos encontrados em dentes com necrose pulpar e infecção. O objetivo do estudo foi avaliar a ação antimicrobiana do hipoclorito de cálcio [Ca(OCl)2] em diferentes concentrações (0,5%, 1%, 2,5% e 5%) frente ao Enterococcus faecalis e compará-la com a ação do hipoclorito de sódio (NaOCl) pelos métodos de Difusão em Ágar e de Contato em Meio Líquido. A ampicilina 10 μg e água destilada foram utilizadas como controle positivo e negativo, respectivamente, no método de difusão em Ágar. No contato em meio líquido o microrganismo entrou em contato com a substância teste em períodos pré-determinados (15 segundos, 30 segundos, 1 minuto, 5 minutos e 10 minutos). O efeito da presença de dentina humana, albumina sérica bovina e endotoxina de Escherichia coli O55:B5 sobre as propriedades antimicrobianas das soluções foi avaliado. Os componentes teciduais e microbianos permaneceram em contato com a solução por 2 minutos, 30 minutos ou 6 horas. Os halos de inibição do crescimento microbiano verificados no Ágar foram mensurados. A presença ou ausência de turvação no meio líquido, indicando crescimento microbiano, foi determinada para cada tempo experimental, no método de contato em meio líquido. O número de unidades formadoras de colônia (UFC) por mililitro foi quantificado, após a exposição do microrganismo às substâncias químicas auxiliares, na presença dos componentes teciduais. Os resultados foram tabulados e realizou-se análise estatística. Observou-se que os maiores halos de inibição foram produzidos pelo Ca(OCl)2 5% (17,38 mm ±3,71), sendo inferior ao produzido pela ampicilina (30,35 mm ±1,64). Soluções de NaOCl e Ca(OCl)2, na mesma concentração, não apresentaram diferenças significativas entre si. Os diâmetros dos halos de inibição produzidos por NaOCl ou Ca(OCl)2 foram proporcionais ao aumento da concentração. O tempo de inibição para o crescimento do E. faecalis, em meio líquido, é menor em concentrações mais elevadas de Ca(OCl)2 e NaOCl. As soluções de NaOCl 2,5%, NaOCl 5% e Ca(OCl)2 2,5% e Ca(OCl)2 5.0% foram iguais entre si. A dentina e a endotoxina de E. coli não interferiram na ação antimicrobiana das soluções de hipoclorito testadas. A soluções de NaOCl 0,5%, 1% e 2,5% e de Ca(OCl)2 0,5% quando expostas à albumina, por 2 minutos, apresentaram seu efeito antimicrobiano reduzido. Concluiu-se que soluções de hipoclorito de cálcio apresentaram ação antimicrobiana frente ao E. faecalis, em concentrações similares às do hipoclorito de sódio empregadas em Endodontia. O efeito antimicrobiano demonstrado pelas soluções é proporcional a sua concentração, podendo ser modulado pela albumina, em curtos períodos de exposição. / The chemical action produced by the auxiliary substances can promotes the cleaning of the root canal system. Certain properties of chemical substances, such as their antimicrobial activity, have contributed to the elimination of microorganisms in infected pulp tissues. The aim of this study was to evaluate, in vitro, the antimicrobial activity of calcium hypochlorite [Ca(OCl)2] in different concentrations (0.5%, 1%, 2.5% and 5%) over Enterococcus faecalis and compare it to sodium hypochlorite (NaOCl) through the ágar diffusion method and the broth dilution method. Ampicillin 10 μg and distilled water were used as positive and negative control, respectively in the ágar diffusion method. In the broth dilution method, E. faecalis cells were exposed to the auxiliary chemical substances for (15 sec, 30 sec, 1 min, 5 min or 10 min). The effect of human dentin powder, 18% bovine serum albumin and Escherichia coli O55:B5 endotoxin over the antimicrobial properties of the solutions was evaluated, after 2 minutes, 30 minutes or 6 hours. The inhibition zones were measured. The presence of broth turbidity was recorded, for each time period, after 24 hours, in the Broth dilution method. The colony forming units (CFU) per milliliter were counted after the exposure of the E. faecalis to the tested tissue or bacterial components. Statistical analysis was carried out. The Ca(OCl)2 5% had the largest inhibition zones (17.38 mm ±3.71), however they were shorter than ampicillin zones (30.35 mm ±1.64). There was no statistical difference between NaOCl and Ca(OCl)2 solutions with the same concentration. It was observed that the highest the NaOCl or Ca(OCl)2 concentration, the largest the inhibition zone. In the broth dilution method, the time required for E. faecalis growth inhibition was shorter in highly concentrated solutions than in low concentrated solutions. There was no statistical difference among 2.5% NaOCl, 5% NaOCl, 2.5% Ca(OCl)2 and 5% Ca(OCl)2. The human dentin powder and E. coli endotoxin were not able to modulate the antimicrobial effect of the tested irrigants. In a 2 minute-period, the antimicrobial effect of 0.5% NaOCl, 1% NaOCl, 2.5% NaOCl and 0.5% Ca(OCl)2 was inhibited by bovine serum albumin. It was possible to conclude that calcium hypochlorite solutions were able to inhibit E. feacalis growth, in vitro, when diluted to concentrations that were usually employed in Endodontics. The antimicrobial effect of the solutions was proportional to their concentration and can be modulated by bovine serum albumin, in short periods of exposition.

Objetivo: Avaliar os efeitos das soluções QMiX, EDTA 17%, ácido cítrico 10% (AC), ácido peracético 1% (AP), associados à irrigação final com NaOCl 2,5%, na microdureza dentinária, e seus efeitos nos componentes orgânicos, inorgânicos e na erosão da dentina das paredes do canal radicular. Métodos: Sessenta raízes de incisivos inferiores humanos foram usadas neste estudo. Os canais foram preparados sob irrigação com água destilada e as amostras foram divididas aleatoriamente em 6 grupos (n=10): QMiX, EDTA, AC, AP, NaOCl (solução controle) e água destilada (controle negativo). Após a irrigação com as soluções quelantes, uma irrigação final com NaOCl 2,5% foi realizada. Antes e depois dos protocolos de irrigação, as amostras foram submetidas ao Teste de Microdureza de Knoop. Três endentações foram feitas na distância de 100μm e 500μm do lúmen do canal radicular. Os dados da microdureza de cada grupo, em cada distância, antes e após os protolocos de irrigação foram comparados pelo teste de Wilcoxon (α = 0,05). Para a comparação da diferença da microdureza entre os grupos foi utilizado o teste de Kruskall-Wallis, seguido pelo teste de Dunn (α = 0,05). Concluída a análise da microdureza, as amostras foram seccionadas longitudinalmente em duas metades: uma foi desingada para análise de seu componente orgânico (colágeno) em microscopia óptica de luz polarizada (MO) e a outra para análise de seu componente inorgânico e erosão em microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os dados obtidos pela análise em MO e em MEV foram submetidos ao teste de Kruskall- Wallis, seguido pelo teste de Dunn (α = 0,05). Resultados: Na profundidade de 100μm, todos os protocolos reduziram significativamente a microdureza (P<0,05), enquanto em 500μm, isso ocorreu apenas nos grupos EDTA e QMiX (P<0,05). AC foi o grupo que mais causou erosão nos túbulos dentinários, seguido do AP e do EDTA. QMiX abriu os túbulos, mas não causou erosão dentinária. Em relação à análise do componente orgânico e inorgânico da dentina, os grupos NaOCl e água destilada mostraram uniformidade na rede de colágeno e presença de smear layer obliterando os túbulos dentináros, enquanto o grupo AC apresentou alteração nos componentes orgânicos e inorgânicos. O grupo EDTA não mostrou diferença significativa em relação à alteração no componente orgânico, mas alterou a estrutura inorgânica. Os grupos QMiX e AP não causaram alteração significativa no colágeno e removeram a smear layer sem causar alteração no conteúdo inorgânico, quando os túbulos foram avaliados no sentido longitudinal. Conclusões: Os protocolos de irrigação dos grupos do QMiX e do EDTA 17% apresentaram maior redução da microdureza dentinária em 500μm, sendo que o do QMiX não causou erosão dentinária. As soluções QMiX e AP, seguidas por NaOCl 2,5%, mostraram melhor comportamento em relação às outras soluções testadas, preservando os componentes orgânicos e inorgânicos da dentina radicular humana. / Aim: The present study aimed to evaluate the effect of QMiX, 17% EDTA, 10% citric acid (CA), 1% peracetic acid (PA), associated with a final irrigation with 2.5% NaOCl, on dentin microhardness, and their effects on organic components, inorganic components and erosion of the root canal dentin. Methods: Sixty human mandibular incisors roots were used in this study. The root canals were instrumented under irrigation with destilled water and the samples were randomly divided into 6 groups (n = 10): QMiX, EDTA, CA, PA, NaOCl (control solution) and distilled water (negative control). After the use of chelating solutions, a final irrigation with 2.5% NaOCl was used. Before and after irrigation protocols, dentin microhardness was measured with a Knoop indenter. Three indentations were made at 100μm and 500μm from the root canal lumen. Microhardness data of each group, at each distance, before and after irrigation protocols were compared by Wilcoxon’s test (α = 0.05). Kruskall-Wallis’s test, followed by Dunn’s test, was applied for comparison among groups considering the microhardness difference at each distance. The specimens were longitudinally split and one half of it was designated for organic structure analysis by polarized light microscopy (PLM) and the other for inorganic structure analysis by scanning electron microscopy (SEM) analysis. The data obtained by the analyses in PLM and SEM were submitted to the Kruskal-Wallis test, followed by Dunn's test (α = 0.05). Results: At the depth of 100μm, all protocols significantly reduced microhardness (P <0.05); while in 500μm, it occurred only in EDTA and QMiX groups (P <0.05). CA was the group that caused more erosion in the dentinal tubules, followed by PA and EDTA. QMiX opened the tubules, but did not cause dentin erosion. Regarding the analysis of organic and inorganic dentin components, NaOCl and distilled water groups showed uniformity in the collagen network and presence of smear layer obliterating the dentinal tubules, while CA group showed changes in organic and inorganic components. EDTA group did not show significant difference in the organic component alteration, but changed the inorganic structure. QMiX and PA groups did not cause significant modification in collagen and removed the smear layer without causing change in the inorganic component, when the tubules were evaluated in longitudinal direction. Conclusion: QMiX and 17% EDTA protocols presented the greatest microhardness reduction at 500μm and QMiX did not cause dentin erosion. QMiX and PA solutions, followed by 2.5% NaOCl, showed better behavior from the others chelating agents tested, when used as final irrigation, preserving organic and inorganic components (tubules analyzed longitudinally) of human root dentin.

O objetivo do presente estudo foi determinar a capacidade de dissolução tecidual, tensão superficial, e capacidade de limpeza de soluções Ca(OCl)2 e compará-las ao NaOCl. A dissolução tecidual foi testada em fragmentos de polpas bovinas divididos em 18 grupos, metade deles utilizando as amostras livremente depositadas em poços de cultura de células e a outra metade utilizando as amostras fixadas em bases de dentina bovina. As soluções testadas foram o NaOCl a 0,5%, 1%, 2,5% e 5,25% e o Ca(OCl)2 a 0,5%, 1%, 2,5% e 5,25%. O grupo controle foi o soro fisiológico. Essas soluções foram empregadas sobre as amostras com dez irrigações/aspirações sucessivas de 1 minuto. A capacidade de dissolução foi mensurada pela percentagem de perda de peso. A tensão superficial do NaOCl a 0,5%, 1%, 2,5% e 5,25% e do Ca(OCl)2 a 0,5%, 1%, 2,5% e 5,25%, além de um grupo controle, água destilada, foi mensurada através da técnica do anel de platina com um tensiômetro de Du Noüy. Foram realizadas nove mensurações de cada solução e o resultado expresso em média e desvio padrão. Para a análise da capacidade de limpeza foram utilizados 50 dentes monorradiculares humanos, divididos em 5 grupos, que foram preparados com limas tipo K e irrigados com NaOCl a 2,5%, NaOCl 5,25%, Ca(OCl)2 2,5% ou Ca(OCl)2 5,25%. O grupo controle foi irrigado com soro fisiológico. Através da microscopia eletrônica de varredura foram analisados os diferentes terços dos canais quanto à remoção de debris e à presença de smear layer. Foram atribuídos escores de 1 a 4 e a frequência destes foi verificada para cada grupo. Os resultados mostraram que quanto à dissolução não houve diferença significante entre NaOCl e Ca(OCl)2 para iguais concentrações. As soluções mais concentradas foram mais eficazes na dissolução. Os valores de tensão superficial das soluções de Ca(OCl)2 variaram de 68,48 a 72,88 mJ/m. A remoção de debris do grupo do Ca(OCl)2 a 5,25% foi inferior ao grupo controle no terço cervical. Nos demais terços não houve diferença entre os grupos. Quanto à remoção de smear layer, não houve diferença entre os grupos. As soluções de hipoclorito de cálcio apresentam capacidade de dissolução tecidual, entretanto suas tensões superficiais foram superiores quando comparadas às soluções de hipoclorito de sódio. Além disso, não foram capazes de remover a smear layer e debris. / The aim of this study was to determine the tissue dissolution capacity, surface tension, and cleaning ability of Ca(OCl)2 solutions and compare to the NaOCl properties. The dissolution was tested on bovine pulps fragments divided into 18 groups, half of them was freely deposited samples in cell culture wells and the remaining samples were fixed on bovine dentin bases. The solutions tested were 0.5% NaOCl, 1.0% NaOCl, 2.5% NaOCl and 5.25% NaOCl, and 0.5% Ca(OCl)2, 1.0% Ca(OCl)2, 2.5% Ca(OCl)2, and 5.25% Ca(OCl)2. The control group was saline. These solutions were used on samples and were successively irrigated/aspirated 10 times, for 1 minute each. The dissolving capacity was measured by the percentual weight loss. The surface tension of all tested solutions and control was measured by the platinum ring technique with a Du Noüy tensiometer. Nine measurements were taken of each solution and the result expressed as mean and standard deviation. For the analysis of cleaning capacity, 50 monoradicular human teeth were divided into five groups. They were prepared with K files and irrigated with 2.5% NaOCl, 5.25% NaOCl, 2.5% Ca(OCl)2 or 5.25% Ca(OCl)2. The control group was irrigated with saline. The samples were analyzed by scanning electron microscopy. Each third of the root canals received a score regarding the removal of debris and the presence of smear layer. Scores were assigned from 1 to 4 and their frequency for each group was determined. There was no significant difference between NaOCl and Ca(OCl)2 with the same concentrations. The most concentrated solutions were more effectively in dissolution. The surface tension values of solutions for Ca(OCl)2 varied from 68.48 to 72.88 mJ/m. Debris removal for 5.25% Ca(OCl)2 was lower than the control group in the cervical third. In the other thirds there was no difference among groups. There was no difference for the smear layer removal among groups. Calcium hypochlorite solutions showed tissue dissolution ability, however their surface tensions were higher when compared with sodium hypochlorite solutions. Moreover, were not able to remove debris and smear layer.

Objetivo: O objetivo do presente estudo foi avaliar morfologicamente os tecidos pulpar e periapical de molares de ratos com a polpa vital e expostos ao meio bucal durante o desenvolvimento radicular, além de detectar a localização do STRO-1 e do BMP4 nos mesmos. Métodos: Foram utilizados 24 ratos machos da linhagem Wistar com quatro semanas de idade. A fim de induzir a necrose, foi realizada a exposição pulpar dos primeiros molares inferiores esquerdos em condições não-assépticas e deixando a polpa exposta ao ambiente oral (grupo teste). Os molares inferiores do lado direito não sofreram intervenção e serviram como grupo controle. A eutanásia dos animais foi realizada nos tempos de 7, 10, 13 e 16 semanas de vida (o equivalente a 3, 6, 9 e 12 semanas após a intervenção). Após, as mandíbulas foram dissecadas e processadas para a análise histológica através de Hematoxilina-Eosina e Imunohistoquímica. Foram comparadas, entre os grupos, em cada um dos períodos, a reação inflamatória periapical, as características do tecido pulpar (células inflamatórias, vascularização, odontoblastos, degeneração, destruição tecidual), fechamento do forame e presença de reabsorções. Resultados: Todos os dentes do grupo teste apresentaram necrose pulpar e a interrupção do desenvolvimento radicular. Enquanto isso, os dentes do grupo controle apresentaram o desenvolvimento normal dos tecidos dentários. Quanto à imunohistoquímica, foi constatada a marcação pelo BMP-4 no tecido pulpar dos dentes do grupo controle. Não houve, no entanto, marcação nos dentes do grupo teste. Para o STRO-1, a marcação foi mais evidente na região dos vasos sanguíneos, tanto no grupo controle, quanto no grupo teste. Para nenhum dos anticorpos, foi constatada marcação na região da papila apical. Conclusão: No presente estudo, a técnica imunohistoquímica não foi suficiente para a avaliação da presença de células-tronco na região da papila de dentes com rizogênese incompleta e necrose pulpar. É possível que a presença de infecção e a reação inflamatória tenham bloqueado a expressão do STRO-1 e do BMP-4. / Objective: the aim of this study was to characterize the features of live and necrotic dental pulps of molar teeth in rats with developing roots, and to assess the expression of STRO-1 and BMP-4. Methods: twenty-four 4-month-old male Wistar rats were used. To induce necrosis, the pulps of the first lower left molars were exposed to the oral environment. The lower right molars served as the control non-operated group. Euthanasia of animals was carried out at 7, 10, 13 and 16 weeks and the jaws were dissected and processed for histological analysis by hematoxylin-eosin and immunohistochemistry. The periapical inflammatory reaction, the characteristics of the pulp tissue (inflammatory cells, vascularity, odontoblasts, degeneration, tissue destruction), closure of the foramen and presence of resorptions were described at each period. Results: all teeth from the test group presented pulp necrosis, occurring discontinuation of root development. Meanwhile, the teeth of the control group showed normal development of dental tissues. BMP-4-positive cells were detected in the pulp of teeth from the control group. However, there was no expression in teeth of the test group. For STRO-1, expression was more evident in the blood vessels, both for the control group and for the test group. Apical papilla evidenced no BMP-4 nor STRO-1 expression. Conclusion: Immunohistochemistry was not sufficient to evaluate the presence of stem cells in the apical papilla region of nonvital immature teeth. It is possible that the inflammatory process has blocked the expression of STRO-1 and BMP-4., Probably, infection has negatively modulated this expression.

As células-tronco provenientes da polpa de dentes decíduos esfoliados (SHED) são uma fonte promissora de células-tronco para a terapia regenerativa. Já foi demonstrado que elas podem se diferenciar em células endoteliais, mas os mecanismos envolvidos nesse processo ainda são desconhecidos. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo elucidar os mecanismos moleculares relacionados à diferenciação endotelial dessas células. Para isso, um meio de cultura para células endoteliais (EGM-2MV), suplementado por 50ng/mL rhVEGF, foi utilizado com sucesso como estímulo para as SHED se diferenciarem em células endoteliais em cultura de monocamada. Uma vez que, elas expressaram os marcadores endoteliais VEGFR-2 e CD-31. Além disso, quando as SHED foram expostas ao meio de diferenciação, a fosforilação de STAT-3 (um marcador de células-tronco) foi inibida de acordo com a concentração utilizada, enquanto a fosforilação de ERK e AKT foi estimulada. Quando um inibidor de ERK foi adicionado ao meio, a fosforilação de STAT-3 aumentou. Por outro lado, quando um inibidor de STAT-3 foi adicionado ao meio de cultura, a fosforilação de ERK aumentou. A inibição de ERK também impediu a diferenciação endotelial. Para confirmar esse resultado, shRNA MEK-1 SHED também falharam em expressar VEGFR-2 quando estimuladas. Além disso, scaffolds de fatias dentais foram semeadas com shRNA VEGFR-1 SHED ou shRNA controle e implantadas no subcutâneo de camundongos imunodeficientes. Após recuperados, um tecido muito semelhante à polpa dental foi formado no interior das fatias. No entanto, havia menos células CD-31 positivas nos vasos sanguíneos dos implantes semeados com VEGFR-1 shRNA SHED, sugerindo um papel do VEGFR-1 na formação de vasos sanguíneos. Em conclusão, o VEGFR-1 e a via de sinalização de ERK estão envolvidos no processo de diferenciação das SHED em células endoteliais. / Stem Cells from Exfoliated Deciduous Teeth (SHED) are a promising source of stem cells for regenerative therapy. It was already shown they can differentiate into endothelial cells, but the mechanisms involved in this process remain unclear. Therefore, the following study aimed to elucidate the molecular mechanisms related to endothelial differentiation of SHED. For this purpose, a culture media for endothelial cells (EGM-2MV), supplemented with 50ng/ml rhVEGF, was successfully used as stimuli for SHED to undergo endothelial differentiation in monolayer culture, as they expressed the endothelial markers VEGFR-2 and CD- 31. Moreover, when SHED were exposed to the differentiation medium, STAT-3 phosphorilation (a stemness marker) was inhibited while the ERK and AKT phosphorilation was stimulated. When an ERK inhibitor was added to the medium, the STAT-3 phosphorilation increased in a dependent concentration manner. On the other hand, when a STAT-3 inhibitor was added the ERK phosphorilation increased. The ERK inhibition also arrested endothelial differentiation. To confirm this results, shRNA MEK-1 SHED also failed to express VEGFR-2 when stimulated. Additionally, tooth slice scaffolds were seeded with shRNA VEGFR-1 SHED or shRNA control SHED and implanted, subcutaneously, into immunodeficient mice. After retrieved, a dental pulp-like tissue had been formed inside the tooth slice. However, there were fewer CD-31 positive blood vessels in the shRNA VEGFR-1 implants suggesting a role of VEGFR-1 in the formation of blood vessels by SHED. In conclusion, the VEGFR-1 and ERK pathway are involved in the process of differentiation of SHED into endothelial cells.

O desvio apical é um fator bastante relevante na terapia endodôntica pela possibilidade de conduzir o tratamento proposto ao insucesso. Este estudo se propôs a realizar uma avaliação in vitro da ocorrência de desvio apical e sua magnitude nas instrumentações manual com limas de aço-inoxidável, rotatória de giro contínuo com o sistema K3 e rotatória de giro alternado com contra-ângulo NSK e limas de aço-inoxidável, em raízes mésio-vestibulares de molares superiores. A amostra foi formada por 60 raízes que, após a inclusão numa modificação da mufla de Bramante, foram seccionadas longitudinalmente. De acordo com o ângulo e raio da curvatura do seu canal, as raízes foram paritariamente divididas em três grupos. Uma das metades de cada raiz teve sua face interna digitalizada por scanner de mesa. As raízes foram remontadas nas muflas e seus canais instrumentados. A mesma metade de cada raiz teve sua face interna novamente digitalizada em três momentos distintos: primeiro, na confecção do preparo apical com a lima 30, após com a lima 35 e, por fim, com a lima 40. Cada imagem pós operatória (limas 30, 35 e 40) foi sobreposta à imagem pré-opertória no programa Adobe Photoshop. Após, foram transferidas ao programa AutoCad, onde o desvio apical foi mensurado. Para a comparação entre as limas dos três grupos foram utilizados os testes nãoparamétricos de Friedman e Wilcoxon que encontraram diferença significativa. (p=0,000) Para a comparação entre os três grupos foi utilizado o teste não-paramétrico Kruskal-Wallis (p=0,000) que demonstrou haver diferença significativa entre os grupos estudados. / Apical transportation has considerable relevance in endodontic therapy, as it may lead to treatment failure. This study conducted an in vitro comparative analysis of apical transportation produced in mesiobuccal roots of upper molars by (i) manual instrumentation using stainless steel files, (ii) K3 rotary Ni-Ti system, and (iii) a reciprocating NSK handpiece, also with stainless steel files. The sample comprised 60 roots that were inserted in a Bramante muffle and then longitudinally sectioned. Roots were subdivided pair-wise into three groups according to canal angle and radius. The inner surface of one root half was digitized using a scanner. Roots were then reassembled onto the muffles and had their canals instrumented. The same root half had its inner surface digitized again after instrumentation with three different file sizes: 30, 35 and 40. Each image obtained therefrom was superimposed over the pre-operative image using the Adobe Photoshop software. After, images were transferred to the AutoCad software for apical transportation measurements. The non-parametric Friedman and Wilcoxon tests were adopted to compare results for the three different file sizes, and showed the statistically significant differences between the results obtained (p=0,000). Similarly, the comparison between the three treatment groups by the nonparametric Kruskal-Wallis test revealed statistically significant differences.

O presente estudo objetivou comparar histologicamente, nos períodos de 7, 30 e 60 dias, as reações ocorridas no tecido conjuntivo subcutâneo de ratos a três cimentos endodônticos. Foi realizada a implantação de tubos de polietileno contendo um cimento endodôntico de óxido de zinco e eugenol (EndoFill), um cimento à base de resina epóxica (AH Plus), um cimento à base de resina metacrilato (EndoRez) e tubos vazios (grupo controle). Observou-se as características do componente celular inflamatório - atentando para a presença de neutrófilos, linfócitos, plasmócitos, eosinófilos, macrófagos e células gigantes - da condensação fibrosa e da formação de abscesso. Foi realizada análise estatística entre os grupos realizada por meio do teste de Friedman, complementado pelo teste de Wilcoxon. Já as comparações entre os períodos de 7, 30 e 60 dias foram realizadas pelo teste de Kruskall Wallis complementado pelo teste U de Mann-Whitney.Os resultados apontaram para maior intensidade da reação inflamatória promovida pelos cimentos EndoFill e EndoRez, especialmente no que se refere às características do infiltrado linfoplasmocitário e à presença de macrófagos, os quais se apresentaram em número estatisticamente superior aos demais grupos. A condensação fibrosa foi menos intensa nas amostras do cimento EndoFill, e a indução de abscesso foi bastante reduzida nos quatro grupos de estudo, não sendo observadas diferenças significativas. O AH Plus apresentou uma tendência à redução das características da reação inflamatória, ainda que estatisticamente não tenham sido observadas diferenças entre os períodos avaliados (7,30 e 60 dias). Já os cimentos EndoFill e EndoRez apresentaram uma tendência à manutenção da reação inflamatória por períodos mais longos. Apenas no grupo controle houve redução significativa das características da reação inflamatória ao longo dos três períodos experimentais. Tais observações tornam evidente a ausência, entre os materiais testados, de um cimento com características ideais de biocompatibilidade. / The purpose of this study was to make a histological comparison, over 7- 30- and 60-day periods, of subcutaneous conjunctive tissue reactions to three endodontic sealers in rats. Polyethylene tubes containing a zinc-oxide and eugenol sealer (EndoFill), an epoxyresin- based sealer (AH Plus), a methacrylate-resin-based sealer (EndoRez), together with empty tubes (control group) were implanted. The characteristics of the inflammatory cell component were observed for the presence of neutrophils, lymphocytes, plasmocytes, eosinophils, macrophages and giant cells, together with fibrous condensation and formation of tissue abscesses. The results indicated a greater intensity of inflammatory reaction caused by the EndoFill and EndoRez sealers, particularly in relation to the characteristics of lymphoplasmocytic infiltration, and the presence of macrophages, which were statistically more evident than in the other groups. Fibrous condensation was less intense in the EndoFill samples, and abscess induction was considerably reduced in the four study groups, with no significant differences observed. AH Plus presented a tendency for reducing the characteristics of the inflammatory reaction, although no statistical differences were noticed between the periods assessed (7, 30 and 60 days). The EndoFill and EndoRez sealers display a tendency for maintaining the inflammatory reaction for longer periods. Only the control group displayed a significant reduction in the characteristics of the inflammatory reaction over the three experimental periods. These observations demonstrate the absence of a sealer with ideal biocompatibility characteristics among the materials tested.

O objetivo deste estudo foi analisar, através de microscopia eletrônica de varredura (MEV) e transmissão (MET), a ultraestrutura dentinária após a utilização de diferentes protocolos de irrigação. Trinta e nove incisivos inferiores bovinos após ter suas coroas amputadas e polpas dentárias removidas, foram divididos randomicamente em 13 grupos (n=3). Nos grupos 2 ao 13 as paredes dos canais foram regularizadas com brocas Gates-Glidden e padronizado o diâmetro apical no tamanho correspondente a uma lima K #70. Todas as raízes foram clivadas longitudinalmente em duas metades. As seis hemirraízes pertencentes ao grupo controle foram imersas em água destilada, em cuba de ultrassom, acionada durante dois intervalos de 5 minutos. As demais foram imersas em EDTA 17%, ultrassonificadas por 5 minutos e em seguida, por mais 5 minutos, imersas em água destilada, para padronização das amostras. As hemirraízes, reunidas ao respectivo par, receberam o protocolo de irrigação específico para cada grupo: Grupo 1 (G1): água destilada (controle); G2: soro; G3: soro e EDTA 17%; G4: soro + AUP; G5: soro + AUP + EDTA; G6: NaOCl 2,5%; G7: NaOCl + EDTA; G8: NaOCl + AUP; G9: NaOCl + AUP + EDTA; G10: CHX 2%; G11: CHX + EDTA; G12: CHX + AUP; G13: CHX + AUP + EDTA. Uma hemirraiz de cada espécime foi preparada e avaliada através de MEV e, uma de cada grupo, através de MET. Os resultados da análise descritiva através da MET evidenciaram a degeneração na estrutura orgânica dentinária, caracterizada pelo afilamento das fitas de colágeno, causada pelo NaOCl, potencializado pelo EDTA e/ou AUP. A análise através da MEV mostrou que o NaOCl com AUP provocou erosão da dentina peritubular significativamente maior que todos os demais grupos (P<0,05), seguido do NaOCl com EDTA e NaOCl com EDTA e AUP, nesses três grupos também ocorreu erosão na dentina intertubular. O NaOCl 2,5% favoreceu melhor limpeza, causou erosão da dentina peri e intertubular e promoveu alterações ultraestrturais no colágeno dentinário, potencializado pelo EDTA e/ou AUP. / The aim of this study was to analyze, by scanning, and transmission electron microscopy the dentin ultrastructure after using different irrigation protocols. Thirty-nine bovine incisors after amputated their dental crowns and pulp removed, were randomly divided into 13 groups (n = 3). In groups 2-13 the root canal walls were regularized with Gates-Glidden drills and standardized apical diameter up to a size #70 K-file. All roots were split longitudinally into two halves. The six halves belonging to the control group were immersed in distilled water in the ultrasonic tank, actived during two intervals of 5 minutes. The others halves were immersed in 17% EDTA, actived for 5 minutes and then, for 5 minutes, immersed in distilled water for samples standardization. After the halves were reassembled, they received the irrigation protocol specific for each group: G1, distilled water (control); G2, 0.9% saline; G3, saline + 17% EDTA; G4, saline + PUI; G5, saline + PUI + EDTA; G6, 2.5% NaOCl; G7, NaOCl + EDTA; G8, NaOCl + PUI; G9, NaOCl + PUI + EDTA; G10, 2% CHX; G11, CHX + EDTA; G12, CHX + PUI; G13, CHX + EDTA + PUI. One half of each specimen was prepared and evaluated by SEM, and one of each group, by TEM. The results of the descriptive analysis by TEM showed changes in the dentin organic ultrastructure, characterized by thinning of the collagen fibrils, caused by 2,5% NaOCl, potentiated by 17% EDTA and/or PUI. The analysis by SEM showed that the PUI with NaOCl caused peritubular dentin erosion significantly higher than all other groups (P <0.05), followed by NaOCl with EDTA and by NaOCl with EDTA and PUI, in these three groups also occurred intertubular dentine erosion. The 2,5% NaOCl favored better cleaning, caused erosion of the peritubular and intertubular dentin and promoted ultrastructural alterations in the dentin collagen which were potentilaized by EDTA and/or PUI.

Embora diferentes estudos indiquem que há um aumento da resistência dos microrganismos aos agentes antimicrobianos prescritos, pouco se sabe a respeito da sua distribuição na cavidade oral. A presente dissertação está dividida em dois capítulos, representados por dois diferentes manuscritos. No manuscrito I, uma revisão sistemática foi realizada e teve como objetivo determinar quais genes de resistência a antimicrobianos foram pesquisados em saliva (S), no biofilme supragengival (SB) e canal radicular (RC). Os termos foram usados em várias combinações nas seguintes bases de dados eletrônicas (MEDLINE, EMBASE, ISI, SCOPUS e OPENGREY). Após seleção dos títulos e análise dos resumos, o texto integral de cada estudo foi obtido. Foram estabelecidos critérios de inclusão e exclusão. Dados epidemiológicos, características metodológicas e os resultados foram obtidos a partir dos estudos. Devido à falta de padronização da metodologia entre os trabalhos, não foi possível realizar uma meta-análise. Realizou-se análise descritiva dos dados. Um total de 151 títulos foram identificados para análise preliminar. Quarenta e nove resumos foram selecionados e 22 textos completos foram obtidos. Sete artigos contemplavam aos critérios de inclusão (S = 2; SB = 0 , e RC = 5). Vinte e seis diferentes genes-alvo foram avaliados. Os genes de resistência mais frequentemente descritos foram os relacionados às tetraciclinas e lactâmicos (5/7). Observa-se que poucos artigos foram selecionados pela estratégia de busca adotada para esta revisão sistemática. Este fato demonstra a falta de padronização nas metodologias dos estudos que utilizam técnicas moleculares para a detecção de genes de resistência bacteriana, tanto em condições de saúde ou doença. No manuscrito II, um estudo de observação clínica e laboratorial foi desenvolvido para detectar a presença de espécies-alvo de Prevotella e o gene cfxA/cfxA2 em amostras de saliva (S), biofilme supragengival (SB) e canais radiculares infectados (RC). Amostras pareadas de S, SB e RC foram coletadas de 42 indivíduos. Os pacientes foram divididos em três grupos: Grupo I - sem infecção aguda/crônica primária do canal radicular (n = 15), Grupo II - presença de infecção aguda primária no canal radicular (n = 12 ) e Grupo III - presença de infecção crônica no canal radicular (n = 15). Foram coletadas amostras de RC apenas para os Grupos II e III. Após o isolamento do DNA, a presença de Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae e do gene cfxA/cfxA2 foi detectada através de PCR. Comparou-se a frequência das espécies e do gene de resistência, considerando diferentes ambientes e condições clínicas. A análise estatística foi realizada. Todas as amostras de S, SB e RC foram positivos para a detecção de DNA bacteriano. As taxas de detecção para espécies de Prevotella foram: S= 53,97%; SB=47,62%, e RC=34,56%. O gene cfxA não foi detectado simultaneamente em três ambientes do mesmo paciente. A presença ou ausência de sintomas espontâneos não influenciou as taxas de detecção para as espécies-alvo e para o gene cfxA/A2 em amostras de RC (teste exato de Fisher , P> 0,05). Espécies de Prevotella e o gene cfxA/cfxA2 foram frequentemente detectados na saliva, placa dental e amostras de canais radiculares. / Although different studies indicate that there is an increased resistance of microorganisms to antimicrobial agents prescribed in Endodontics, little is known about their distribution in the oral cavity. The present dissertation was divided into two chapters, represented by two different manuscripts. In manuscript I, a systematic review was conducted and aimed to determine which antimicrobial resistance genes were investigated in saliva (S), the supragingival biofilm (SB) and root canal (RC). The terms were used in various combinations in the following electronic databases (MEDLINE, EMBASE, ISI, SCOPUS and OPENGREY). After title screening and abstract analysis, the full text of each study was obtained. The relevance of each study to the question of interest was determined through inclusion and exclusion criteria. Epidemiologic data, methodological characteristics and results were collected from the studies. Due to lack of methodology standardization among the papers, it was not possible to perform a meta-analysis. Descriptive data analysis was performed. A total of 151 titles were identified for preliminary analysis. Forty-nine abstracts were selected, and full texts of 22 studies were obtained. Seven articles matched the inclusion criteria (S=2; SB= 0; and, RC=5). Twenty-six different targeted genes have been evaluated. The most frequently investigated groups of resistance genes were related to tetracycline and lactamics (5/7). Few articles in the literature fit in the search strategy adopted by this systematic review, demonstrating the lack of standardization in the methodologies of studies using molecular techniques for the detection of bacterial resistance genes to antibiotics in oral cavity, either in health or disease conditions. In the manuscript II, an observational clinical and laboratorial study was developed to identify the presence of targeted Prevotella species and the cfxA/cfxA2 gene in samples from saliva (S), supragingival biofilm (SB) and infected root canals (RC). Paired samples of S, SB and RC were collected from 42 subjects. Patients were divided into three groups: Group I - no acute or chronic root canal infection (n = 15); Group II - presence of acute root canal infection (n = 12), and Group III - presence of chronic root canal infection (n=15). RC samples were collected for Groups II and III. After DNA isolation, the presence of Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Prevotella tannerae and the cfxA/cfxA2 gene was detected through gene-specific PCR. The frequency of the species and of the resistance was compared, considering different environments and clinical conditions. Statistical analysis was carried out. All samples from S, SB and RC were positive for the presence of bacteria. The overall detection rates for Prevotella species were: S = 53.97%; SB = 47.62%; and, RC = 34.56%. The cfxA gene was not detected simultaneously in the three environments from the same patient. The presence of absence of spontaneous symptoms had not influenced the detection rates for the targeted species and for the cfxA/A2 gene in RC samples (Fisher Exact Test, P>.05). Prevotella species and the gene cfxA/cfxA2 were frequently detected in saliva, dental plaque and root canal samples.