Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-08-31T16:45:54Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_EstudoQuimicoAtividade.pdf: 7955291 bytes, checksum: fc96bd8509e5704677b38d9f0a24cf68 (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-09-12T13:07:12Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_EstudoQuimicoAtividade.pdf: 7955291 bytes, checksum: fc96bd8509e5704677b38d9f0a24cf68 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-12T13:07:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_EstudoQuimicoAtividade.pdf: 7955291 bytes, checksum: fc96bd8509e5704677b38d9f0a24cf68 (MD5) Previous issue date: 2016-09-23 / A espécie Nephrolepis brownii, conhecida popularmente como samambaia, pode ser facilmente encontrada na região amazônica. É uma espécie rasteira, que se espalha facilmente e inibe plantas de pequeno porte ao seu redor. N. brownii assim como as demais samambaias são conhecidas também como “escadinha do céu”, as quais são muito utilizadas como plantas ornamentais e fins medicinais. Este é o primeiro trabalho onde é realizado o estudo químico de N. brownii, de onde foram isoladas as substâncias Ferneno (S1) e Pinitol (S2) das partes aéreas da mesma. No estudo do óleo essencial de N. brownii foram identificadas 80 substâncias, a maioria pertencentes às funções aldeído (26,62%), álcool (25,11%) e cetona (17,15%), dentre esses Z-2-(3,3-dimetilciclohexlidene)-etanol (8,65%), safrol (8,81%), undecan-2-ona (8,89%), teaspirano (8,99%), n-tridecano (9,05%), n-undecanal (9,20%), o-metil-orcinol (9,32%) e deca-(2E,4E)-dienal (9,41%) foram majoritários. Das partes aéreas de N. brownii foi isolado como endofítico o fungo denominado NB-1, o qual foi cultivado em meio sólido (arroz) e em meio líquido (czapek) para o crescimento das colônias e obtenção dos extratos fúngicos. A partir do extrato fúngico acetato de etila (arroz) foram isoladas as substâncias p-hidróxibenzaldeído (S3), ácido p-hidroxifenilacetico (S4) e ácido 4-hidroxibenzóico (S5). A partir do cultivo em meio líquido (czapek) foram isoladas as substâncias peróxido de ergosterol (S6) e stoloniferol B (S7) ambas das fases acetato de etila (1 e 2). O fungo NB-1 se mostrou capaz de biotransformar substâncias como a chalcona 3-(2,3,4-trimetoxifenil)-1-(4-metóxi)-2-propen-1-ona e a cetona aromática 4-nitroacetofenona. Foram realizados ensaios para avaliar a fitotoxicidade dos extratos e substâncias frente às sementes das espécies invasoras de pastagem malícia e mata-pasto, onde os melhores resultados foram para os extratos EBM/Hex, EBM/AcOEt e EBM/n-But, destacando o EBM/AcOEt que teve 100% de inibição frente à germinação das sementes de malícia. O extrato EFMeOH apresentou efeito inibitório considerável sobre a germinação das sementes de malícia e mata-pasto, sendo valores elevados, 75% e 100%, respectivamente. As substâncias testadas não apresentaram resultados satisfatórios frente às sementes de malícia e mata-pasto. Foi investigado o potencial biológico das substâncias S1, S2, S3 e S5, onde não foram ativas para a espécie L. amazonensis em sua forma promastigota. / The species Nephrolepis brownii, commonly known as fern, can be easily found in the Amazon region. It is a creeping species, which spreads easily and inhibits small around plants. N. brownii like other ferns are also known as "sky ladder", which are widely used as ornamental plants and medicinal purposes. This is the first work which is carried out the chemical study of N. brownii, where the Fernene substances were isolated (S1) and Pinitol (S2) from the aerial parts of it. In the study of the essential oil of N. brownii were identified 80 substances, most belonging to the aldehyde functions (26.62%), alcohol (25.11%) and ketone (17.15%), among those Z-2-(3,3-dimetilciclohexlidene)-ethanol (8.65%), safrole (8.81%) undecan-2-one (8.89%), teaspirano (8.99%), n-tridecane (9.05 %), n-undecanal (9.20%), o-methyl-orcinol (9.32%) and deca-(2E,4E)-dienal (9.41%) were majority. Aerial parts of N. brownii was isolated as endophytic fungus called NB-1, which was grown on solid medium (rice) and liquid medium (Czapek) for the growth of fungal colonies and obtain extracts. From the ethyl acetate extract fungal (rice) were isolated p-Hydroxybenzaldehyde substances (S3), p-hydroxyphenylacetic acid (S4) and 4-hydroxybenzoic acid (S5). From the culture in liquid medium (cazpek) were isolated substances ergosterol peroxide (S6) stoloniferol B (S7) both phases ethyl acetate (1 and 2). The NB-1 fungus has been shown to biotransform substances such as chalcone 3-(2,3,4-trimethoxyphenyl)-1-(4-methoxy)-2-propen-1-one and aromatic ketone 4-nitroacetophenone. Tests were conducted to evaluate the phytotoxicity of extracts and compounds in the face of evil seeds and kills pasture where the best results were for EBM/Hex, EBM/EtOAc and EBM/n-But extracts, highlighting the EBM / AcOEt had 100% inhibition against the germination of seeds of malice. The EFMeOH extract showed significant inhibitory effect on the germination of seeds of malice and kill pasture, with high values, 75% and 100%, respectively. The substances tested showed no satisfactory results in the face of evil seeds and kills pasture. It investigated the biological potential of the substances S1, S2, S3 and S5, which have not been active for L. amazonensis promastigote form a species.

O interesse na obtenção de novos fármacos a partir de micro-organismos endofíticos vem crescendo, uma vez que esta é uma fonte ainda pouco explorada. Além disso, o estudo das interações entre plantas e micro-organismos tem sido amplamente discutido ao longo dos últimos anos. No presente trabalho, o fungo endofítico Drechslera ravenelii (SS33), isolado das folhas de Smallanthus sonchifolius (yacon), foi cultivado sob diferentes condições fermentativas, objetivando a determinação das melhores condições para produzir metabólitos secundários com atividades antimicrobiana e/ou citotóxica. Para tal avaliaram-se dois parâmetros: meio fermentativo e tempo de incubação. Os meios fermentativos líquidos utilizados foram Czapek e caldo de batata (PDB), sob agitação (120 RPM), cultivados por 216 e 480 horas. Também foi desenvolvida cultura por fermentação em substrato sólido, meio de arroz-aveia, durante 720 horas. Todos os cultivos foram realizados em temperatura de 30 ºC e precedidos por pré-fermentação. Dos cultivos em meio líquido foram obtidas frações em diclorometano e em acetato de etila. Já dos cultivos provenientes do meio fermentativo sólido foram obtidas frações em n-hexano, diclorometano, acetato de etila e n-butanol. Dessa forma, obtiveram-se 12 frações que foram concentradas em rotaevaporador até a secura, pesadas e identificadas. As frações tiveram sua atividade antimicrobiana avaliada através de duas técnicas: técnica da bioautografia e técnica da microdiluição em microplaca (determinação da Concentração Inibitória Mínima), utilizando-se como indicadores biológicos as cepas Kocuria rhizophila, Staphylococcus aureus, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa. A avaliação da atividade citotóxica foi realizada pela técnica do MTT, utilizando-se três linhagens de células tumorais MB435 (melanoma humano), HCT-8 (cólon humano) e SF-295 (glioblastoma humano). As frações tiveram também seus perfis químicos avaliados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência. Após observação dos resultados obtidos, concluiu-se que a fração diclorometânica, proveniente do meio fermentativo sólido, foi a que apresentou maior rendimento, manejo mais simples e perfil cromatográfico mais interessante, quando comparada às outras frações obtidas dos meios sólido e líquido. Desse modo, foi realizada ampliação da escala fermentativa em meio sólido e a fração diclorometânica obtida foi submetida a processos cromatográficos visando o isolamento das substâncias majoritárias. Assim, foram isoladas a substância 1 (não identificada) e a substância 2, identificada como terpestacina, um sesterpeno incomum com conhecida atividade na inibição da formação de sincícios pelo vírus HIV. A terpestacina foi isolada pela primeira vez do fungo Drechslera ravenelii no presente estudo. A substância 2 não apresentou atividade antimicrobiana quando submetida ao ensaio da microdiluição em microplaca e apresentou atividade citotóxica discreta, frente a três linhagens de células cancerígenas humanas. / The interest in obtaining new drugs from endophytic microorganisms is growing, since this is a source still little exploited. In addition, the study of the interactions between plants and microorganisms has been widely discussed over the past few years. In this work, the endophytic fungus Drechslera ravenelii (SS33), isolated from the leaves of Smallanthus sonchifolius (yacon), was grown under different conditions, targeting the determination of the best conditions to produce secondary metabolites with antimicrobial and/or cytotoxic activities. For that, two parameters were evaluated: culture medium type and incubation time. The liquid media used were Czapek and Potato Dextrose Broth (PDB), swirling (120 RPM), cultivated for 216 and 480 hours, respectively. The fungus has also been culture by fermentation in solid substrate, rice-oats medium, during 720 hours. All crops were conducted in temperature of 30 °C and preceded by pre-fermentation. The obtained liquid mediums were submitted to liquid partition to furnish dichloromethane and ethyl acetate fractions. The solid medium was submitted to extraction to furnish the fractions in n-hexane, dichloromethane, ethyl acetate and n-butanol, in sequence. |Then, the 12 fractions obtained were dried, cumbersome and identified. The antimicrobial activity of the fractions was evaluated through two techniques: bioautography and Microdiluition method (Minimum Inhibitory Concentration-MIC), and for that, the biological indicators used were Kocuria rhizophila, Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa. The cytotoxic activity evaluation was performed by MTT test, using three tumor cell lines: MB435 (human melanoma), HCT-8 (human colon) and SF-295 (human glioblastoma). The chromatographic profiles of the fractions were evaluated by High Performance Liquid Chromatography. Analysis of the results allowed to conclude that the dichloromethane fraction from the solid medium gave greater yield, was easier to manager and more displayed an interesting chromatographic profile when compared to other fractions obtained from both solid and liquid media. Thus, the fungus was cultivated in a larger scale in solid medium and the dichloromethane fraction obtained was subjected to chromatographic processes aiming the isolation of the major compounds. Thus, two compounds were isolated the substance 1 (unidentified) and the substance 2, witch was identified as terpestacin, an uncommon sesterpene, which inhibits the formation of syncytia in the course of HIV infection. The terpestacin was isolated for the first time from the fungus Drechslera ravenelii in this study. The compound 2 did not presented antimicrobial activity when subjected to the microdilution test and it displayed discreet cytotoxic activity in three human cancer cell lines.

A biodiversidade microbiana de diferentes ecossistemas tem incentivado estudos químicos e biológicos com micro-organismos dos mais variados habitats, os quais têm conduzido à obtenção de moléculas bioativas com aplicações na medicina, indústria química e agricultura, proporcionando melhorias na qualidade de vida ao homem. O presente trabalho teve como objetivos a bioprospecção por actinobactérias endofíticas e seus metabólitos, além do estudo da via biossintética dos sesquiterpenos aristoloquenos produzidos pelo fungo fitopatogênico Botrytis cinerea. No estudo de bioprospecção foram isoladas 41 linhagens de actinobactérias endofíticas de duas espécies de Asteraceae (Thitonia diversifolia e Lychnophora ericoides). A identificação através do sequenciamento de DNAr indicou predominância do gênero Streptomyces. As linhagens foram cultivadas em meio de arroz e os extratos etanólicos submetidos aos ensaios de citotoxicidade frente a células tumorais e antimicrobiano. Um total de 58,5% dos extratos apresentou atividade em pelo menos um dos ensaios realizados. Foram selecionadas as linhagens Streptomyces cattleya RLe 4 e Streptomyces sp. RLe 8 para cultivo em escala ampliada, isolamento e identificação de metabólitos bioativos. O isolamento dos compostos foi realizado através de diferentes técnicas cromatográficas e a identificação estrutural foi baseada em dados de ressonância magnética nuclear de 1H e 13C e espectrometria de massas. De S. cattleya RLe 4 foram isolados quatro compostos: 2-hidroxibenzamida, desferrioxamina E, 1-(3\',4\'-dimetoxifenil)-1-propanona e 1-(3\',4\'-dimetoxifenil)-1-etanona. Dos extratos de Streptomyces sp. RLe 8 foram isolados dez compostos: benzamida, 3- hidroxibenzamida, 3-hidróxi-4-metoxibenzamida, 4-hidróxi-3-metoxibenzamida, 3,4- dimetoxibenzamida, 2-fenilacetamida, dois isômeros de 3,4-diidro-3,4,6,8-tetraidróxi-1(2H)- naftalenona, 2,3-diidro-2,2-dimetil-4(1H)-quinazolinona e desferrioxamina B. O composto 2,3-diidro-2,2-dimetil-4(1H)-quinazolinona apresentou elevada atividade frente as células de câncer de cólon (HCT-8) e glioblastoma (SF295), com 93,9 % e 87.0 % de inibição, respectivamente. O outro enfoque da tese envolveu a otimização da produção de sesquiterpenos aristoloquenos por linhagens de B. cinerea, seguido de estudo biossintético destes produtos naturais através de experimentos de incorporação de precursores isotopicamente enriquecidos com 2H (deutério) e 13C (carbono treze). As análises dos dados obtidos de RMN de 2H e de 13C do sesquiterpeno majoritário indicaram que a biossíntese desta substância ocorre pela via do mevalonato (MVA). Os resultados também sugeriram o possível envolvimento da via do metil-eritritolfosfato ou 1-desoxi-D-xilulose-fosfato (MEP/DPX) na biossíntese deste sequiterpeno. Estes resultados podem contribuir para o planejamento racional de fungicidas seletivos com aplicação na agricultura. O trabalho desenvolvido mostrou o grande potencial de actinobactérias endofíticas para a obtenção de moléculas bioativas e que estudos usando precursores isotopicamente marcados fornecem informações precisas acerca da origem biossintética de produtos naturais. / The microbial biodiversity from different ecosystems has incited chemical and biological studies with microorganisms from several habitats, leading to the isolation of bioactive natural products with applications in medicine, chemical industry and agriculture, and thus contributing to a better quality of life. This thesis aimed the biopropecting on endophytic actinobacteria and their natural products, and also the biosynthetic study of aristolochene sesquiterpenes in the phytopathogenic fungus Botrytis cinerea. A total of 41 actinobacterial strains were isolated of two Asteraceae species (Thitonia diversifolia and Lychnophora ericoides) for the bioprospecting study. The rDNA sequencing showed predominancy of Streptomyces genus. All the strains were cultured on rice medium, and the ethanolic extracts were screened in cytotoxity and antimicrobial assays. As a result, 58.5% of the extracts showed activity in al least one bioassay. The strains Streptomyces cattleya RLe 4 and Streptomyces sp. RLe 8 were selected for scale up cultures, isolation and identification of bioactive compounds. Different chromatographic methods were applied for the isolation of compounds, and structural analysis were based on 1H and 13C nuclear magnetic resonance and mass spectrometry data. Four compounds were isolated from S. cattleya RLe 4: 2- hydroxybenzamide, desferrioxamine E, 1-(3\',4\'-dimethoxyphenyl)-1-propanone, and 1-(3\',4\'- dimethoxyphenyl)-1-etanone. Ten compounds were isolated from Streptomyces sp. Rle 8: benzamide, 3-hydroxybenzamide, 3-hydroxy-4-methoxybenzamide, 4-hydroxy-3- methoxybenzamide, 2-phenylacetamide, two isomers of 3,4-dihydro-3,4,6,8-tetrahydroxy- 1(2H)-naphthalenone, 2,3-dihydro-2,2-dimethyl-4(1H)-quinazolinone, and desferrioxamine B. Compound 2,3-dihydro-2,2-dimethyl-4(1H)-quinazolinone showed high antiproliferative activity against colon cancer cells (HCT-8) and glioblastoma cells (SF295), with 93.9 and 87.0% of inhibition, respectively. The second focus of the thesis involved the optimization of aristolochene sesquiterpenes production by two strains of B. cinerea, followed by the biosynthetic study through feeding experiments with 2H (deuterium) and 13C isotopically labeled precursors. The 2H and 13C NMR obtained data showed that the biosynthesis of the sesquiterpene proceeds by the mevalonate pathway (MVA). The results also suggested the possible participation of the non mevalonate pathway, methylerytritol phosphate ou 1-deoxy- D-xylulose phosphate (MEP/DXP), in the biosynthesis. These results might contribute to the rational design of selective fungides with application in agriculture. This thesis showed the endophytic actinobacteria as promising sources of bioactive natural products, and also showed that the isotopically labeled feeding experiments give reliable information about the natural products biosynthetic pathways.

Submitted by MAIARA STEFANINI BORGES null (borges.maiara@iq.unesp.br) on 2016-03-22T21:06:41Z No. of bitstreams: 1 MAIARA STEFANINI BORGES.pdf: 2921643 bytes, checksum: 71bed0595a70fef8c32665cc82adc905 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-23T13:30:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 borges_ms_me_araiq.pdf: 2921643 bytes, checksum: 71bed0595a70fef8c32665cc82adc905 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-23T13:30:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 borges_ms_me_araiq.pdf: 2921643 bytes, checksum: 71bed0595a70fef8c32665cc82adc905 (MD5) Previous issue date: 2016-03-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Micro-organismos endofíticos, geralmente fungos e bactérias, vivem sistematicamente no interior das plantas sem causar, aparentemente, danos a seus hospedeiros. Fungos endofíticos representam um importante grupo de fungos com potencial fármaco e biotecnológico e podem ser isolados de diversas plantas medicinais. A espécie vegetal Eugenia jambolana Lam. tem sido intensamente explorada química e biologicamente devido a seus usos populares e por apresentar diversas atividades biológicas. Logo, o estudo de fungos endofíticos, associados a esse espécie vegetal, apresenta-se como uma estratégia promissora na obtenção e identificação de substâncias potencialmente bioativas. Dentro deste contexto, este trabalho teve como objetivo principal a avaliação química do fungo endofítico Saccharicola sp. isolado de Eugenia jambolana Lam. Este endófito foi cultivado em pequena escala nos meio de cultura liquido (MDB) e sólido (Milho) e em escala ampliada no meio Czapek. O caldo foi separado dos micélios após 28 dias (meios líquidos) e 21 dias (meio sólido) por filtração e o filtrado foi submetido à partição líquido/líquido com AcOEt fornecendo, após a evaporação do solvente, os respectivos extratos brutos. Os extratos foram avaliados frente a produção metabólica por CCDC, CLAE-DAD e RMN de 1H e também avaliados frente aos ensaios biológicos. Portanto para os extratos MDB, Milho Fr.CH3CN, Milho Fr. aquosa e Milho Fr.Hexânica, foram realizados ensaios antifúngico, antioxidante e anticolinesterásico, onde estes extratos demonstraram ser promissores. O extrato obtido em escala ampliada (Czapek) foi fracionado em cartucho SPE (extração em fase sólida), resultando em seis frações (Ss.C.Fr1- Ss.C.Fr6). Do estudo da fração Ss.C.Fr1 foi possível o isolamento de uma substância o Ácido fusárico (1) e a fração Ss.C.Fr3 resultou no isolamento de 6,7 dihidroxi- 4,6 dimetil octanoato de metila (2), substância inédita. O extrato obtido em escala reduzida (Milho Fr.CH3CN) foi submetido a fracionamento em coluna de sílica gel de fase reversa (C18), resultando em oito frações (Ss.M. CH3CN Fr1 - Ss.M. CH3CN Fr8). O estudo da fração Ss.M. CH3CN Fr5 resultou no isolamento da substância 4-hidroximeleina (3). O estudo da fração Milho Fr.Aquosa-XAD resultou no isolamento de duas substâncias Timidina (4) e Adenosina (5). Portanto, o estudo químico com o fungo endofítico Saccharicola sp. resultou no isolamento de cinco substâncias puras. Sendo assim, este trabalho visou isolar substâncias potencialmente bioativas através da investigação dos extratos e frações de Saccharicola sp.. / Endophytic microorganisms, often bacteria and fungi systematically live within the plant without apparent harm their hosts. Endophytic fungi represent an important group of fungi with biotechnological potential and may be isolated from various medicinal plants. The plant species Eugenia jambolana Lam. has been intensively explored chemically and biologically due to its popular uses and it has several biological activities. Thus, the study of endophytic fungi associated with this plant species, presents itself as a promising strategy in obtaining or identifying potentially bioactive substances. Within this context, this study aimed to evaluate the chemical endophytic fungus Saccharicola sp. isolated from Eugenia jambolana Lam., encoded as Ej-c04. This endophyte was cultivated on a small scale to a liquid culture medium PDB solid Corn and enlarged scale for the Czapek medium. The broth was separated from the mycelium after 28 days (liquid media) and 21 days (solid medium) by filtration and the filtrate was subjected to liquid / liquid partition with ethyl acetate providing after evaporation of the solvent, their crude extracts. The extracts were evaluated against metabolic production by TLC, CLAE-DAD and 1H NMR also evaluated and compared to the bioassay. So for MDB extracts, Fr.CH3CN Corn, aqueous Fr. Corn and Corn Fr.Hexânica, tests were performed antifungal, antioxidant and anticholinesterase where these extracts have shown promise.The extract obtained in enlarged scale (Czapek) was fractionated on SPE cartridge (solid phase extraction), resulting in six fractions (Ss.C.Fr1- Ss.C.Fr6). From Ss.C.Fr1 fraction was possible to isolate a substance fusaric acid (1) and Ss.C.Fr3 fraction resulted in the isolation of (2E, 4E) - 6,7 dihydroxy-4,6-dimethyl octanoate (2) novel substance. The extract obtained in small scale (Corn Fr.CH3CN) was subjected to fractionation column of silica gel reversed phase (C18) resulting in eight fractions (Ss.M. CH3CN- Fr1 - CH3CN Ss.M. Fr8). The study fraction Ss.M. CH3CN Fr5 resulted in the isolation of 4-hidroximeleina substance (3). The study of fraction Corn Fr. Aqueous -XAD resulted in the isolation of two substances Thymidine (4), adenosine (5). Therefore the chemical study of the endophytic fungus Saccharicola sp. resulted in the isolation of five pure substances Thus, this study aimed to isolate potentially bioactive substances through the investigation of extracts and fractions of Saccharicola sp..

Submitted by AIRTON DAMASCENO SILVA null (airton.silva@ufv.br) on 2016-04-05T15:38:08Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Mestrado versão final.pdf: 4535490 bytes, checksum: 8bb674faf58fdd954d9ebfabaecc42b1 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-04-07T18:23:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silva_ad_me_araiq.pdf: 4535490 bytes, checksum: 8bb674faf58fdd954d9ebfabaecc42b1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-07T18:23:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silva_ad_me_araiq.pdf: 4535490 bytes, checksum: 8bb674faf58fdd954d9ebfabaecc42b1 (MD5) Previous issue date: 2016-03-18 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O fungo Hypoxylon investiens ocorre em ambientes terrestres e aquáticos, sendo que a maior parte dos estudos já realizados com o gênero Hypoxylon refere-se aos fungos terrestres. Diversas substâncias e atividades biológicas foram determinadas para o gênero e o presente estudo é o primeiro a realizar a bioprospecção de H. investiens associado à alga marinha. Neste trabalho, foram estudados os constituintes químicos produzidos pelo fungo H. investiens e avaliadas algumas atividades biológicas promissoras (antifúngica e citotóxica). O extrato bruto dos metabólitos produzidos em meio líquido de PDB obtido em escala ampliada apresentou forte atividade frente aos fungos fitopatogênicos Cladosporium cladosporioides e Cladosporium sphaerospermum e mostrou-se ativo (75,7% de inibição) frente à linhagem tumoral HCT-116 (carcinoma de cólon). O seu fracionamento por CC em Sephadex LH-20 eluída com metanol resultou em 6 frações (G1 a G6): a fração G4 mostrou forte atividade antifúngica contra linhagens de C. cladosporioides e C. sphaerospermum, além de alto potencial de inibição (97,3%) de células tumorais HCT-116. As frações G5 e G6 também se mostraram ativas frente à linhagem tumoral HCT-116 apresentando, respectivamente, 104,8% e 99,4% de inibição dessa linhagem de células tumorais. A fração G5 apresentou ainda atividade (inibição de 84,5%) contra a linhagem MCF-7 (adenocarcinoma de mama metastático). No entanto, as frações G4 e G6 mostraram-se inativas contra esta linhagem, o que evidenciou a seletividade dessas frações frente às linhagens tumorais testadas. Estes resultados indicaram elevado potencial de produção de metabólitos bioativos por H. investiens. Os procedimentos cromatográficos levaram ao isolamento de 14 substâncias da fração G5, 3 substâncias da fração G6 e de outras 2 substâncias da fração inativa G3. A análise estrutural preliminar por RMN das 17 substâncias isoladas das frações bioativas G5 e G6 indica que devam se tratar de compostos inéditos, derivados do BNT (4,4´,5,5’-tetraidroxi-1,1´-binaftila), sendo que três delas, isoladas da fração G5, tiveram seus esqueletos carbônicos completamente caracterizados, utilizando-se experimentos uni e bidimensionais de RMN e espectrometria de massas de alta resolução. Experimentos adicionais estão em andamento para se determinar a estereoquímica dos centros de quiralidade das substâncias elucidadas, e as demais estruturas estão sob processo de investigação estrutural. Uma das substâncias isoladas da fração não-ativa G3 foi o ácido 3-nitropropanóico, uma toxina mitocondrial produzida por fungos para sua defesa e que foi produzido com alto rendimento (304,5 mg a partir de 605,4 mg da fração G3) por H. investiens. Os resultados obtidos foram promissores, evidenciando a destacada quimiodiversidade de fungos obtidos do ambiente marinho e elevado potencial de bioatividade de seus extratos e frações. Sinalizam ainda para a necessidade de estudos mais aprofundados da química e das propriedades biológicas do fungo H. investiens contribuindo para a exploração sustentável da biodiversidade marinha brasileira. / The fungus Hypoxylon investiens occurs in terrestrial and aquatic environments, and most studies carried out so far on genus Hypoxylon refer to the terrestrial fungal strains. Many compounds and biological activities were determined for the genus and the present study is the first to carry out the bioprospection of H. investiens associated to marine algae. In this work, the chemical constituents produced by a fungal strain of H. investiens were investigated and some promising biological activities were evaluated (antifungal and cytotoxicity). The crude extract of the metabolites produced in PDB liquid medium by H. investiens was obtained in large scale and showed strong activity against the phytopathogenic fungi Cladosporium cladosporioides and C. sphaerospermum. It also showed inhibitory activity (75.7% of inhibition) on colon carcinoma tumor cell line HCT-116. Its fractionation by column chromatography over Sephadex LH-20 eluted with methanol afforded 6 fractions, (G1-G6). Fraction G4 showed strong antifungal activity against C. cladosporioides and C. sphaerospermum strains, in addition to high inibitory potential (97,3%,) towards tumor cells HTC-116. Fractions G5 and G6 were also active against tumor cell line HCT-116, showing 104,8% and 99,4% inhibition, respectively. Additionally, fraction G5 inhibited metastatic breast adenocarcinoma cell line MVF-7 whereas fractions G4 and G6 were inactive, which evidenced selectivity of such fractions towards the tested tumor cells lines. These results evidenced a high potential of production of bioactive metabolites by H. investiens. The chromatographic procedures led to the isolation of 14 compounds from fraction G5, 3 compounds from fraction G6 and 2 compounds from the non-active fraction G3. The preliminary analysis of the 17 isolated compounds from the bioactive fraction G5 and G6 by NMR spectroscopy indicated they are novel compounds structurally related to BNT (4,5,4',5'-tetrahydroxy-1,1'-BiNaphThyl). From those, three compounds were isolated from fraction G5 and had their carbon skeletons fully characterized and consistent with uni and bidimensional 1H and 13C NMR spectral data and high-resolution mass spectrometry. Additional experiments are being developed to determine the stereochemistry of asymmetric centers in the elucidated structures. Additionally, the non-active fraction G3 afforded high yield (304,5 mg from 605,4 mg of G3 fraction) of 3-nitropropanoic acid, a mitochondrial toxin wide spread among fungi and produced for their own defense. The results obtained were promising, pointing out the need for further in-depth investigations on the chemistry and biological properties of the fungus H. investiens. Such promising results evidence the outstanding chemodiversity of marine-derived fungi and highlight the bioactivity potencial of their extracts and fractions. They also point out the need for further studies of H. investiens chemistry and biological properties, which may contribute for the sustainable exploration of Brazilian marine biodiversity.

Submitted by CAMILA SOUZA SANTOS null (cssantos12@gmail.com) on 2016-03-26T15:11:36Z No. of bitstreams: 1 dissertação final camila.pdf: 6327362 bytes, checksum: be4f63024f7b4a50aa4f8f1e10987053 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-28T14:44:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 santos_cs_me_araiq_par.pdf: 796529 bytes, checksum: 5e16538a32b063bcef781b76b10382c2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-28T14:44:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 santos_cs_me_araiq_par.pdf: 796529 bytes, checksum: 5e16538a32b063bcef781b76b10382c2 (MD5) Previous issue date: 2016-03-14 / O presente trabalho apresenta os resultados obtidos sobre o estudo químico e biológico dos fungos endolíticos Nodulisporium sp. e Microascus sp. associados à alga vermelha Asparagopsis taxiformis. Para tanto, fez-se uso das técnicas cromatográficas de separação CLAE (cromatografia líquida de alta eficiência), CG-EM (cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas) e cromatografia em coluna (CC), além da avaliação dos potenciais antifúngico, anticolinesterásico e citotóxico dos extratos brutos, frações e subfrações de Nodulisporium sp. e Microascus sp. O estudo químico levou ao isolamento de quatro substâncias pertencentes à classe das diidroisocumarinas (substâncias S1, S2, S10 e S11), duas dicetopiperazinas (substâncias S3 e S4), um composto fenólico (S12), uma isoflavona (S8), um derivado hidroxiimino (S9), uma mistura contendo uma amida (S5) e um diol vicinal (S6), além do isolamento de um composto aromático (substância S7), ainda em fase de identificação. As estruturas das substâncias isoladas foram identificadas com base nos dados espectroscópicos de ressonância magnética nuclear uni e bidimensional (RMN de 1H, RMN de 13C, TOCSY-1D, HSQC, HMBC, COSY e HSQC-TOCSY), UV-Vis e espectrometria de massas (EM). Comporta ressaltar que o diol vicinal (S6) está sendo descrito pela primeira vez na literatura e que as demais substâncias isoladas não haviam sido relatadas para os gêneros Nodulisporium ou Microascus. A avaliação das atividades antifúngica e anticolinesterásica evidenciaram o potencial de bioatividade de extratos e frações de Nodulisporium sp. e Microascus sp, sendo reveladas atividades forte e moderada frente às enzimas acetilcolinesterase humana e de enguia elétrica. Este é o primeiro estudo químico e biológico relatado na literatura para os endófitos Nodulisporium sp. e Microascus sp. associados à alga vermelha Asparagopsis taxiformis e seus resultados promissores destacam a elevada quimiodiversidade dos extratos e frações dos fungos endofíticos obtidos do ambiente marinho, bem como seu potencial de bioatividade. Evidenciam ainda a importância de se aprofundar os estudos destas linhagens fúngicas visando contribuições relevantes na busca de protótipos para novos agentes terapêuticos através da exploração sustentável da biodiversidade marinha brasileira. / This work presents results from the chemical and biological study of endophytic fungal strains of Nodulisporium sp and Microascus sp associated to the red alga Asparagopsis taxiformis. Chromatographic separation techniques as HPLC, GC-MS and CC have been used in addition to bioassays for evaluation of the antifungal, anticholinesterasic and cytotoxic potential of crude extracts, fractions and subfractions of Nodulisporium sp and Microascus sp fungal strains. The chemical study led to the isolation of four dihydroisocoumarins (compounds S1, S2, S10 and S11), two diketopiperazines (compounds S3 and S4), one phenolic compound (S12), one isoflavone (S8), one hydroxyl-imino derivative (S9), a mixture containing one amide (S5) and one novel vicinal diol (S6), in addition to one aromatic compound (compounds S7) still under structural investigation. Their structures were identified based on 1D and 2D NMR spectroscopic data (1H and 13C NMR, TOCSY-1D, HSQC, HMBC, COSY and HSQC-TOCSY), UV-Vis and mass spectrometry (MS). Compound S6 is an aliphatic vicinal diol and is herein described as a novel compound whereas the remaining compounds had not been described before neither for Nodulisporium nor Microascus genera. Antifungal and anticholinesterase activities evaluation of extracts and fractions of Nodulisporium sp e Microascus sp evidenced their strong and moderate potential against human and electric eel acetylcholinesterase enzymes. This is the first report on the chemical and biological studies of endophytic fungi Nodulisporium sp and Microascus sp, associated to the red algae Asparagopsis taxiformis. Their promising results highlight the outstanding chemodiversity of extracts and fractions from such fungal strains from marine environment as well as their bioactivity potential. They also evidence the importance of further investigating such fungal strains aiming at relevant contributions in the search for novel therapeutic agents through sustainable exploration of Brazilian marine biodiversity.

Submitted by Geyciane Santos (geyciane_thamires@hotmail.com) on 2015-12-02T21:00:28Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Sanay Feitosa Lima.pdf: 1448310 bytes, checksum: 5f834ba306b1fec92af1d35b4e7fc328 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-12-03T18:39:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Sanay Feitosa Lima.pdf: 1448310 bytes, checksum: 5f834ba306b1fec92af1d35b4e7fc328 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-12-03T18:47:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Sanay Feitosa Lima.pdf: 1448310 bytes, checksum: 5f834ba306b1fec92af1d35b4e7fc328 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-03T18:47:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Sanay Feitosa Lima.pdf: 1448310 bytes, checksum: 5f834ba306b1fec92af1d35b4e7fc328 (MD5) Previous issue date: 2015-07-30 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The plants belonging to the family Loranthaceae are popularly known as ervas-de- passarinho. Among the various plants known belonging to this family, there is Oryctanthus alveolatus, which sparked interest due to the few phytochemicals and microbial studies with this plant. Microorganisms are mostly seen as pathogenic agents, especially fungi and bacteria. However, they are also useful in the production of chemicals such as antibiotics and antitumor. Among the existing fungi, endophytic fungi are microorganisms that inhabit the interior of plants bringing benefits to them. So the aim of this study was to obtain and evaluate the antimicrobial activity of crude extracts of 29 isolated endophytic fungi of the leaves and stems of Oryctanthus alveolatus species, in the face of pathogenic Gram-positive Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis and Gram-negative Pseudomonas aeruginosa and Escherichia coli. All extracts were subjected to antimicrobial assay using agar diffusion test at concentrations of 0,5 μg.μL-1 and 1000 μg.mL-1. Only three extracts; Coa 007, 009a and 014, were able to inhibit bacterial growth of one or more strains tested at 1000 μg.mL-1. Subsequently, the active extracts were tested at concentrations of 200, 500, 700, 800 and 900μg.mL-1, and the Coa 007 extract showed the CIM values of 900 μg.mL-1 for the bacteria E. coli and P. aeruginosa and CIM of 1000 μg.mL-1 for the bacteria S. aureus. The Coa 009a extract showed CIM of 1000 μg.mL-1 for S. aureus and E. coli bacteria and Coa 014 extract showed CIM in the amount of 900 μg.mL-1 for E. coli and 1000 μg.mL-1 for the bacteria P. aeruginosa and S. aureus. The other fungi tested did not inhibit bacterial growth. Fungi in the extracts were active, they were also evaluated the morphological point of view. The Coa 007 and Coa 014 fungi presented macromorfológicas initially similar characteristics: both possessed white coloring, with algodonosa and opaque texture. Over time, the Coa 007 now presents beige-pink color reverse, differentiating Coa 014 that pasou to present pink pigmentation spots, with reverse part of beige. The Coa 009a initially presented black color, becoming black-gray, cotton wool spots, and reverse the black colony. / As plantas pertencentes à família Loranthaceae são popularmente conhecidas como ervas- de-passarinho. Entre as mais diversas plantas conhecidas pertencentes a essa família, destaca-se Oryctanthus alveolatus, na qual despertou o interesse, devido aos poucos estudos fitoquímicos e microbianos realizados com esta planta. Os microrganismos são em sua maioria, vistos como agentes fitopatogênicos, principalmente fungos e bactérias. Entretanto, eles também são úteis na produção de substâncias químicas, como antibióticos e antitumorais. Dentre os fungos existentes, os fungos endofíticos são microrganismos que habitam o interior das plantas trazendo benefícios às mesmas. Assim o objetivo desse trabalho foi obter e avaliar a atividade antimicrobiana dos extratos brutos de 29 fungos endofíticos isolados das folhas e caules da espécie Oryctanthus alveolatus, frente às bactérias patogênicas Gram-positivas Staphylococcus aureus e Staphylococcus epidermidis e Gram-negativas Pseudomonas aeruginosa e Escherichia coli. Todos os extratos foram submetidos a ensaio antimicrobiano utilizando teste de difusão em ágar nas concentrações de 0,5 μg. μL-1 e 1000 μg.mL-1. Apenas três extratos; Coa 007, 009a e 014, conseguiram inibir o crescimento bacteriano de uma ou mais cepas testadas na concentração de 1000 μg.mL-1. Posteriormente, os extratos ativos foram testados nas concentrações de 200, 500, 700, 800 e 900 μg.mL-1, sendo que o extrato Coa 007 apresentou CIM nos valores de 900 μg.mL-1 para as bactérias E. coli e P. aeruginosa e CIM no valor de 1000 μg.mL-1 para a bactéria S. aureus. O extrato Coa 009a apresentou CIM no valor de 1000 μg.mL-1 para as bactérias S.aureus e E.coli e o extrato Coa 014 apresentou CIM nos valores de 900μg.mL-1 para a bactéria E. coli e 1000 μg.mL-1 para as bactérias P. aeruginosa e S. aureus. Os demais fungos testados não inibiram o crescimento bacteriano. Os fungos, em que os extratos apresentaram atividade, também foram avaliados do ponto de vista morfológico. Os fungos Coa 007 e Coa 014 apresentaram características macromorfológicas inicialmente parecidas: ambos possuiam coloração branca, com textura algodonosa e opaca. Com o tempo, o Coa 007 passou a apresentar coloração reversa bege-rosa, diferenciando do Coa 014 que pasou a apresentar pontos de pigmentação rosa, com parte reversa de cor bege. O Coa 009a apresentou inicialmente coloração preta, tornando-se negro-acinzentado, algodonoso, e reverso da colônia negro.

A biodiversidade microbiana de diferentes ecossistemas tem incentivado estudos químicos e biológicos com micro-organismos dos mais variados habitats, os quais têm conduzido à obtenção de moléculas bioativas com aplicações na medicina, indústria química e agricultura, proporcionando melhorias na qualidade de vida ao homem. O presente trabalho teve como objetivos a bioprospecção por actinobactérias endofíticas e seus metabólitos, além do estudo da via biossintética dos sesquiterpenos aristoloquenos produzidos pelo fungo fitopatogênico Botrytis cinerea. No estudo de bioprospecção foram isoladas 41 linhagens de actinobactérias endofíticas de duas espécies de Asteraceae (Thitonia diversifolia e Lychnophora ericoides). A identificação através do sequenciamento de DNAr indicou predominância do gênero Streptomyces. As linhagens foram cultivadas em meio de arroz e os extratos etanólicos submetidos aos ensaios de citotoxicidade frente a células tumorais e antimicrobiano. Um total de 58,5% dos extratos apresentou atividade em pelo menos um dos ensaios realizados. Foram selecionadas as linhagens Streptomyces cattleya RLe 4 e Streptomyces sp. RLe 8 para cultivo em escala ampliada, isolamento e identificação de metabólitos bioativos. O isolamento dos compostos foi realizado através de diferentes técnicas cromatográficas e a identificação estrutural foi baseada em dados de ressonância magnética nuclear de 1H e 13C e espectrometria de massas. De S. cattleya RLe 4 foram isolados quatro compostos: 2-hidroxibenzamida, desferrioxamina E, 1-(3\',4\'-dimetoxifenil)-1-propanona e 1-(3\',4\'-dimetoxifenil)-1-etanona. Dos extratos de Streptomyces sp. RLe 8 foram isolados dez compostos: benzamida, 3- hidroxibenzamida, 3-hidróxi-4-metoxibenzamida, 4-hidróxi-3-metoxibenzamida, 3,4- dimetoxibenzamida, 2-fenilacetamida, dois isômeros de 3,4-diidro-3,4,6,8-tetraidróxi-1(2H)- naftalenona, 2,3-diidro-2,2-dimetil-4(1H)-quinazolinona e desferrioxamina B. O composto 2,3-diidro-2,2-dimetil-4(1H)-quinazolinona apresentou elevada atividade frente as células de câncer de cólon (HCT-8) e glioblastoma (SF295), com 93,9 % e 87.0 % de inibição, respectivamente. O outro enfoque da tese envolveu a otimização da produção de sesquiterpenos aristoloquenos por linhagens de B. cinerea, seguido de estudo biossintético destes produtos naturais através de experimentos de incorporação de precursores isotopicamente enriquecidos com 2H (deutério) e 13C (carbono treze). As análises dos dados obtidos de RMN de 2H e de 13C do sesquiterpeno majoritário indicaram que a biossíntese desta substância ocorre pela via do mevalonato (MVA). Os resultados também sugeriram o possível envolvimento da via do metil-eritritolfosfato ou 1-desoxi-D-xilulose-fosfato (MEP/DPX) na biossíntese deste sequiterpeno. Estes resultados podem contribuir para o planejamento racional de fungicidas seletivos com aplicação na agricultura. O trabalho desenvolvido mostrou o grande potencial de actinobactérias endofíticas para a obtenção de moléculas bioativas e que estudos usando precursores isotopicamente marcados fornecem informações precisas acerca da origem biossintética de produtos naturais. / The microbial biodiversity from different ecosystems has incited chemical and biological studies with microorganisms from several habitats, leading to the isolation of bioactive natural products with applications in medicine, chemical industry and agriculture, and thus contributing to a better quality of life. This thesis aimed the biopropecting on endophytic actinobacteria and their natural products, and also the biosynthetic study of aristolochene sesquiterpenes in the phytopathogenic fungus Botrytis cinerea. A total of 41 actinobacterial strains were isolated of two Asteraceae species (Thitonia diversifolia and Lychnophora ericoides) for the bioprospecting study. The rDNA sequencing showed predominancy of Streptomyces genus. All the strains were cultured on rice medium, and the ethanolic extracts were screened in cytotoxity and antimicrobial assays. As a result, 58.5% of the extracts showed activity in al least one bioassay. The strains Streptomyces cattleya RLe 4 and Streptomyces sp. RLe 8 were selected for scale up cultures, isolation and identification of bioactive compounds. Different chromatographic methods were applied for the isolation of compounds, and structural analysis were based on 1H and 13C nuclear magnetic resonance and mass spectrometry data. Four compounds were isolated from S. cattleya RLe 4: 2- hydroxybenzamide, desferrioxamine E, 1-(3\',4\'-dimethoxyphenyl)-1-propanone, and 1-(3\',4\'- dimethoxyphenyl)-1-etanone. Ten compounds were isolated from Streptomyces sp. Rle 8: benzamide, 3-hydroxybenzamide, 3-hydroxy-4-methoxybenzamide, 4-hydroxy-3- methoxybenzamide, 2-phenylacetamide, two isomers of 3,4-dihydro-3,4,6,8-tetrahydroxy- 1(2H)-naphthalenone, 2,3-dihydro-2,2-dimethyl-4(1H)-quinazolinone, and desferrioxamine B. Compound 2,3-dihydro-2,2-dimethyl-4(1H)-quinazolinone showed high antiproliferative activity against colon cancer cells (HCT-8) and glioblastoma cells (SF295), with 93.9 and 87.0% of inhibition, respectively. The second focus of the thesis involved the optimization of aristolochene sesquiterpenes production by two strains of B. cinerea, followed by the biosynthetic study through feeding experiments with 2H (deuterium) and 13C isotopically labeled precursors. The 2H and 13C NMR obtained data showed that the biosynthesis of the sesquiterpene proceeds by the mevalonate pathway (MVA). The results also suggested the possible participation of the non mevalonate pathway, methylerytritol phosphate ou 1-deoxy- D-xylulose phosphate (MEP/DXP), in the biosynthesis. These results might contribute to the rational design of selective fungides with application in agriculture. This thesis showed the endophytic actinobacteria as promising sources of bioactive natural products, and also showed that the isotopically labeled feeding experiments give reliable information about the natural products biosynthetic pathways.

O interesse na obtenção de novos fármacos a partir de micro-organismos endofíticos vem crescendo, uma vez que esta é uma fonte ainda pouco explorada. Além disso, o estudo das interações entre plantas e micro-organismos tem sido amplamente discutido ao longo dos últimos anos. No presente trabalho, o fungo endofítico Drechslera ravenelii (SS33), isolado das folhas de Smallanthus sonchifolius (yacon), foi cultivado sob diferentes condições fermentativas, objetivando a determinação das melhores condições para produzir metabólitos secundários com atividades antimicrobiana e/ou citotóxica. Para tal avaliaram-se dois parâmetros: meio fermentativo e tempo de incubação. Os meios fermentativos líquidos utilizados foram Czapek e caldo de batata (PDB), sob agitação (120 RPM), cultivados por 216 e 480 horas. Também foi desenvolvida cultura por fermentação em substrato sólido, meio de arroz-aveia, durante 720 horas. Todos os cultivos foram realizados em temperatura de 30 ºC e precedidos por pré-fermentação. Dos cultivos em meio líquido foram obtidas frações em diclorometano e em acetato de etila. Já dos cultivos provenientes do meio fermentativo sólido foram obtidas frações em n-hexano, diclorometano, acetato de etila e n-butanol. Dessa forma, obtiveram-se 12 frações que foram concentradas em rotaevaporador até a secura, pesadas e identificadas. As frações tiveram sua atividade antimicrobiana avaliada através de duas técnicas: técnica da bioautografia e técnica da microdiluição em microplaca (determinação da Concentração Inibitória Mínima), utilizando-se como indicadores biológicos as cepas Kocuria rhizophila, Staphylococcus aureus, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa. A avaliação da atividade citotóxica foi realizada pela técnica do MTT, utilizando-se três linhagens de células tumorais MB435 (melanoma humano), HCT-8 (cólon humano) e SF-295 (glioblastoma humano). As frações tiveram também seus perfis químicos avaliados por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência. Após observação dos resultados obtidos, concluiu-se que a fração diclorometânica, proveniente do meio fermentativo sólido, foi a que apresentou maior rendimento, manejo mais simples e perfil cromatográfico mais interessante, quando comparada às outras frações obtidas dos meios sólido e líquido. Desse modo, foi realizada ampliação da escala fermentativa em meio sólido e a fração diclorometânica obtida foi submetida a processos cromatográficos visando o isolamento das substâncias majoritárias. Assim, foram isoladas a substância 1 (não identificada) e a substância 2, identificada como terpestacina, um sesterpeno incomum com conhecida atividade na inibição da formação de sincícios pelo vírus HIV. A terpestacina foi isolada pela primeira vez do fungo Drechslera ravenelii no presente estudo. A substância 2 não apresentou atividade antimicrobiana quando submetida ao ensaio da microdiluição em microplaca e apresentou atividade citotóxica discreta, frente a três linhagens de células cancerígenas humanas. / The interest in obtaining new drugs from endophytic microorganisms is growing, since this is a source still little exploited. In addition, the study of the interactions between plants and microorganisms has been widely discussed over the past few years. In this work, the endophytic fungus Drechslera ravenelii (SS33), isolated from the leaves of Smallanthus sonchifolius (yacon), was grown under different conditions, targeting the determination of the best conditions to produce secondary metabolites with antimicrobial and/or cytotoxic activities. For that, two parameters were evaluated: culture medium type and incubation time. The liquid media used were Czapek and Potato Dextrose Broth (PDB), swirling (120 RPM), cultivated for 216 and 480 hours, respectively. The fungus has also been culture by fermentation in solid substrate, rice-oats medium, during 720 hours. All crops were conducted in temperature of 30 °C and preceded by pre-fermentation. The obtained liquid mediums were submitted to liquid partition to furnish dichloromethane and ethyl acetate fractions. The solid medium was submitted to extraction to furnish the fractions in n-hexane, dichloromethane, ethyl acetate and n-butanol, in sequence. |Then, the 12 fractions obtained were dried, cumbersome and identified. The antimicrobial activity of the fractions was evaluated through two techniques: bioautography and Microdiluition method (Minimum Inhibitory Concentration-MIC), and for that, the biological indicators used were Kocuria rhizophila, Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa. The cytotoxic activity evaluation was performed by MTT test, using three tumor cell lines: MB435 (human melanoma), HCT-8 (human colon) and SF-295 (human glioblastoma). The chromatographic profiles of the fractions were evaluated by High Performance Liquid Chromatography. Analysis of the results allowed to conclude that the dichloromethane fraction from the solid medium gave greater yield, was easier to manager and more displayed an interesting chromatographic profile when compared to other fractions obtained from both solid and liquid media. Thus, the fungus was cultivated in a larger scale in solid medium and the dichloromethane fraction obtained was subjected to chromatographic processes aiming the isolation of the major compounds. Thus, two compounds were isolated the substance 1 (unidentified) and the substance 2, witch was identified as terpestacin, an uncommon sesterpene, which inhibits the formation of syncytia in the course of HIV infection. The terpestacin was isolated for the first time from the fungus Drechslera ravenelii in this study. The compound 2 did not presented antimicrobial activity when subjected to the microdilution test and it displayed discreet cytotoxic activity in three human cancer cell lines.

Orientador: Lourdes Campaner dos Santos / Resumo: Este trabalho apresenta o estudo dos efeitos de modificadores epigenéticos e eliciadores químicos na diversificação metabólica de Curvularia lunata e Fusarium fujikuroi, fungos isolados de Paepalanthus chiquitensis (Eriocaulaceae). Os fungos foram cultivados em PDB (caldo batata dextrose), e as seguintes condições foram investigadas: (PDB + SAHA) ácido hidroxâmico suberoilanilida, (PDB + AZA) 5-azacitidina, (PDB + AA) ácido anacárdico, PDB + Cu2+ e PDB + Mg2+. Essas condições foram comparadas com o controle PDB. O estudo químico de C. lunata, resultou no isolamento das novas γ-lactamas espirocíclicas C3 e C4, e outros cinco compostos conhecidos: triticonas E (C1) e F (C2), ácido 5-O-metilcurvulínico (C5), ácido curvulínico (C6) e curvulina (C7). As estruturas foram elucidadas por análises espectroscópicas e pela comparação com dados da literatura. Além disso, um estudo computacional foi realizado para determinar a configuração absoluta do C‒3' de C3 e C4. As triticonas C1 e C2 apresentaram boa atividade antibacteriana para Escherichia coli, com CIM de 62,5 μg/mL. Dos eliciadores químicos utilizados, a suplementação com Mg2+ foi a condição que apresentou as diferenças mais significativas no perfil metabólico de F. fujikuroi. O extrato PDB + Mg2+ preparado do cultivo em escala ampliada foi purificado por métodos cromatográficos e resultou no isolamento e identificação das substâncias: ácido indolacético (F3) e seus derivados F4, F8 e F17, assim como a auxina ácido fenilacético ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Eriocaulaceae, Paepalanthus chiquitensis, Fusarium fujikuroi, Curvularia lunata, fungo endofítico, epigenética / Doutor