Made available in DSpace on 2017-07-10T17:37:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Everton Ricardi Lozano da Silva.pdf: 1285547 bytes, checksum: 985ef107fc92d11abb8864885e596668 (MD5) Previous issue date: 2006-03-17 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The objective of this research was evaluation "in vitro" the effect of fungicides and herbicides on Bacillus thuringiensis var. kurstaki (Btk). The five fungicides: epoxiconazole, fentin hydroxide, azoxystrobin, tebuconazole and carbendazim, and five herbicides: sulfentrazone, lactofen, imazethapyr, fenoxaprop and metribuzin were tested at two concentrations, on cells and spores, in nutrient agar (NA) - solid medium (SM), and in nutrient broth (NB) - liquid medium (LM), in addition to their metabolization (MT) by Btk. For cells, the phytosanitary products in NA were tested incorporated into the medium and on filter paper disks impregnated with the products. The evaluation consisted, respectively, of the number of CFU/mL and of the formation of an inhibition halo. For cells, the Bt+products+NB mixture was incubated in Erlenmeyer flasks (30± 2°C, 150rpm, 24h)an then the NB was diluted and inoculated onto NA; the number of CFU/mL was evaluated. The MT and spore tests were performed in liquid medium (water for MT and NB for spores). The effects of the products varied with the category (fungicide and herbicide), their concentrations, technique used, contact time, and developmental stage of the pathogen. The LM test is the most indicated to evaluate the effect of the products on cells. It was observed that most fungicides were compatible with cells, and only epoxiconazole and azoxystrobin were metabolized. The herbicides, independents of the concentrations, were incompatible with cells, and only sulfentrazone and imazethapyr were metabolized. Fentin hydroxide was the only product incompatible with spore / Objetivou-se comparar técnicas para a avaliação in vitro do efeito de fungicidas e herbicidas sobre Bacillus thuringiensis var. kurstaki (Btk). Foram testados cinco fungicidas: epoxiconazole, fentin hidróxido, azoxystrobin, tebuconazole e carbendazin, e cinco herbicidas: sulfentrazone, lactofen, imazethapyr, fenoxaprop e metribuzin, em duas concentrações, sobre células e esporos, em ágar nutriente (AN) - sólido (MS) e caldo nutriente (CN) - líquido (ML), além da metabolização (MT) destes por Btk. Para células, em AN os fungicidas foram testados incorporados ao meio e em discos de papel-filtro impregnados nos produtos. Avaliou-se, respectivamente, as UFC/mL e a formação de halo de inibição. Para células, a mistura Bt+produtos+CN foi incubada em erlemmeyers (30± 2°C, 150rpm, 24h), e em seguida, o meio CN foi diluído e inoculado em AN, avaliando-se o número de UFC/mL. Os testes de MT e esporos foram realizados em líquido (água para MT e CN para esporos). O efeito dos produtos variou conforme a categoria destes (fungicida e herbicida), concentrações, técnica, tempo de contato e fase/estágio do desenvolvimento do patógeno. O teste ML é o mais indicado para a avaliação do efeito em células, sendo observado que a maioria dos fungicidas mostrou-se compatível às mesmas, e apenas epoxiconazole e azoxystrobin foram metabolizados. Os herbicidas, independentes das concentrações, foram incompatíveis com as células, e somente sulfentrazone e imazethapyr foram metabolizados. Fentin hidróxido foi o único produto incompatível com esporos

Orientadora: Janete Apparecida Desidério / Banca: Agda Paula Facincani / Banca: Irlan Leite de Abreu / Resumo: Como uma alternativa para diminuir as agressões constantes que o ecossistema vem sofrendo, devido à grande quantidade de produtos químicos utilizados no controle de pragas, pesquisas envolvendo microrganismos capazes de promover o controle biológico tem se intensificado. Dentre estes microrganismos a bactéria Bacillus thuringiensis tem se destacado. Essa bactéria caracteriza-se pela produção de proteínas tóxicas a representantes de diversas ordens de insetos. Em particular, as proteínas Vip3A, estão em amplo estudo devido a sua especificidade, alto potencial ativo e como alternativa para o controle da resistência de insetos às proteínas Cry. Diante disto, o objetivo deste trabalho foi selecionar, a partir de 1080 isolados de diferentes regiões brasileiras, aqueles portadores de genes vip3A e obter a sequência de nucleotídeos completa dos mesmos. As linhagens padrão B. thuringiensis var. kurstaki HD1, B. thuringiensis var. tolworthi HD125 e o isolado I187 tiveram seus DNAs amplificados com oligonucleotídeos baseados na sequência de genes vip3A, descritos no banco de dados de B. thuringiensis e, a partir dos amplicons obtidos, a sequência completa de nucleotídeos dos mesmos foi determinada, utilizando-se da estratégia de "primer walking". A proteína Vip3Aa43 (GenBank: [HQ594534]) da linhagem HD1 demonstrou ser 100% idêntica às proteínas Vip3Aa já descritas. Já as proteínas Vip3Aa42 (GenBank: [HQ587048]) da linhagem HD125 e Vip3Ag5 (GenBank: [HQ542193]) do isolado I187 demonstraram similaridade de 99% com as proteínas descritas Vip3Aa35 e Vip3Ag2, respectivamente, demonstrando serem duas novas proteínas Vip3A, devido às substituições de aminoácidos ocorridas. Os três genes vip3A obtidos poderão ser utilizados na produção de plantas Bt, piramidadas ou não, visando ao manejo da resistência dos insetos praga / Abstract: As an alternative to decrease the constant aggressions that the ecosystem has suffered due to the large amount of chemical products used in pest control, researches involving microorganisms able to promoting biological control have been intensified. Among these microorganisms the bacterium Bacillus thuringiensis has been stood out. This bacterium is characterized by the production of toxic proteins to representatives of several insect orders. In particular, the Vip3A proteins are in large study due to its specificity, and high active potential as an alternative to control of insect's resistance to Cry proteins. According to this, the aim of this work was to select from 1080 isolates in different Brazilian regions, those carrying vip3A genes and obtain the complete nucleotide sequence of the same. The standard strains B. thuringiensis var. kurstaki HD1, B. thuringiensis var. tolworthi HD125 and the isolate I187 had their DNA amplified with primers based on vip3A gene sequence described in database of B. thuringiensis, and from the amplicons obtained, the full sequence of nucleotides was determined, by the use of the strategy of "primer walking". The protein Vip3Aa43 (GenBank: [HQ594534]) of HD1 strain showed to be 100% identical to Vip3Aa proteins already described. However, the proteins Vip3Aa42 (GenBank: [HQ587048]) of HD125 strain and Vip3Ag5 (GenBank: [HQ542193]) of the isolate I187 showed 99% similarity with the Vip3Aa35 and Vip3Ag2 proteins described, respectively, showing been two new Vip3A proteins due to amino acid substitutions occurred. The three vip3A genes obtained can be used in the production of Bt crops, pyramidal or not, aiming to resistance management of pest insects / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-12-17Bitstream added on 2014-06-13T19:42:23Z : No. of bitstreams: 1 goulart_rm_dr_jabo.pdf: 1079235 bytes, checksum: e3693efdd097a8d2567db51d51f098ff (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação do produto comercial Agree® nas características biológicas de três inimigos naturais em laboratório, utilizando a traça-das-crucíferas, P. xylostella. Os experimentos foram conduzidos em sala climatizada a 25±1°C, umidade relativa de 70±10% e fotofase de 12 horas. Foram verificados os aspectos biológicos de P. nigrispinus, Orius insidiosus e Trichogramma pretiosum por meio da ação do produto. Para os predadores foram elaboradas tabelas de vida de fertilidade. Os dados biológicos obtidos indicaram que quando P. nigrispinus se alimenta de lagartas infectadas com o produto os predadores sofrem efeito negativo em sua biologia, provocado provavelmente por alterações fisiológicas na lagarta. No experimento com O. insidiosus as características duração do segundo instar ninfal, o consumo ninfal e a longevidade das fêmeas foram afetadas pela ação do produto. Para T. pretiosum o produto não apresentou efeitos negativos que possam inviabilizar sua utilização conjunta com o produto para o Manejo Integrado de P. xylostella em brassicáceas. Apesar de o produto ter provocado efeitos negativos a P. nigrispinus e O. insidiosus estudos e técnicas complementares devem ser realizados para que, no futuro, esses inimigos naturais possam ou não ser utilizados em programas de controle biológico em culturas de brassicáceas associados com a bactéria entomopatogênica / This work aimed to evaluate the action of biological insecticide Agree on biological characteristics of 3 natural enemies in laboratory, using the host diamondback moth, Plutella xylostella. The experiments were conducted in acclimatized room under 25±1°C, 70±10% relative umidity and 12 h photophase. The biological aspects of Podisus nigrispinus, Orius insidiosus and Trichogramma pretiosum were verified through the product action. Life and fertility table were elaborated to the predators. The biological data obtained showed that P. nigrispinus has the biology affected negatively when fed on infected caterpillars, probably occurred by physiological alterations in caterpillar. The characteristics duration and consumption of second nymphal instar, nymphal consumption and female longevity were affected by products in the assay with Orius insidiosus. The insecticide didn´t show negative effects that can be unfeasible the use associated with the parasitoid T. pretiosum in the Integrated Pest Management to P. xylostella in brassicas. Thus the product cause negative effects on P. nigrispinus and O. insidiosus, complementary studies need to be realized in order to the future, these natural enemies can be used in Biological Programs associated with Bt in brassicas crops

Os isolados de nematóides entomopatogênicos provenientes do solo de Monte Negro (RO) receberam o prefixo LPP seguido de um número sequencial. As linhagens de bactérias simbiontes receberam o prefixo MN como referência ao local de isolamento. As culturas dos isolados de nematóides entomopatogênicos LPP foram estabelecidas em nosso laboratório, sendo necessário cultivar também o lepidóptero Galleria mellonella para as infeções visando manter os nematóides em cultura. Os isolados, tanto de nematóides como das bactérias, foram identificados através do sequenciamento de genes ribossômicos (ITS 1 e 2 além do 5.8S para os nematóides e 16S para as bactérias). Análises integradas, abrangendo morfologia (em colaboração com a Dra. Claudia Dolinski e Inês Machado) e análises filogenéticas permitiram a identificação dos nematóides. Essas análises morfomoleculares mostram que as linhagens não podem ser descritas como novas espécies, baseadas apenas no local de isolamento, mas como pertencentes à espécies já descritas e bem caracterizadas. As linhagens de nematóides foram identificadas como pertencentes a duas espécies do gênero Heterorhabditis (Rhabditida): Heterorhabditis baujardi (LPP5, 7, 8, 10 e 11) Heterorhabditis indica (LPP1, 2, 3, 4, 9). A bactéria entomopatogênica simbionte isolada a partir do nematoide Heterorhabditis baujardi linhagem LPP7 foi identificada como pertencente à espécie Photorhabdus luminescens subsp. luminescens linhagem MN7. Análises filogenéticas mostram que há similaridade entre o isolado bacteriano e as outras linhagens já descritas de Photorhabdus luminescens subsp. luminescens. Ao mesmo tempo em que eram isoladas as bactérias simbiontes, ocorreu o isolamento de outra espécie de bactéria forética dos nematóides entomopatogênicos, identificada após sequenciamento parcial do 16S, como pertencentes ao gênero Ochrobactrum. As linhagens isoladas foram denominadas OMN2, OMN3, OMN4. / The entomopathogenic nematodes isolates from Monte Negro (RO) soils received the prefix LPP followed by a sequential number. The strains of bacterial symbionts received the prefix MN as a reference to its isolation site. Cultures of LPP entomopathogenic nematodes were established in our laboratory and the need for suitable hosts were supplied by cultivating the lepidopteran Galleria mellonella. Nematode and bacterial isolates were identified through ribosomal genes (ITS 1 and 2, 5.8S for nematodes and 16S for bacteria) sequencing. Integrated analysis, including morphology (in collaboration with Dr. Claudia Dolinski and Inês Machado) and a phylogenetic approach allowed the identification of nematodes. These morpho-molecular analysis clearly showed that our strains can not be described as new species, solely based on the isolation site critheria. It should be described as belonging to previously described and well characterized species. The nematode strains were identified as belonging to two species of the genus Heterorhabditis (Rhabditida): Heterorhabditis baujardi (LPP5, 7, 8, 10 and 11) Heterorhabditis indica (LPP1, 2, 3, 4, 9). The entomopathogenic bacterial symbiont isolated from the nematode Heterorhabditis baujardi strain LPP7 was identified as belonging to the species Photorhabdus luminescens subsp. luminescens strain MN7. Phylogenetic analysis showed similarities between isolated bacterial strains and other previously described Photorhabdus luminescens subsp. luminescens strains. In paralel work, along with bacterial symbionts isolation, other entomopathogenic nematodes foretic bacteria were isolated and identified after partial sequencing of 16S, as belonging to the genus Ochrobactrum. The isolated strains were named OMN2, OMN3, OMN4.

Orientador: Sérgio Antonio de Bortoli / Banca: Nelson Wanderley Perioto / Banca: Luis Garrigós Leite / Banca: Ricardo Antonio Polanczyk / Banca: Alexandre de Sene Pinto / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação do produto comercial Agree® nas características biológicas de três inimigos naturais em laboratório, utilizando a traça-das-crucíferas, P. xylostella. Os experimentos foram conduzidos em sala climatizada a 25±1°C, umidade relativa de 70±10% e fotofase de 12 horas. Foram verificados os aspectos biológicos de P. nigrispinus, Orius insidiosus e Trichogramma pretiosum por meio da ação do produto. Para os predadores foram elaboradas tabelas de vida de fertilidade. Os dados biológicos obtidos indicaram que quando P. nigrispinus se alimenta de lagartas infectadas com o produto os predadores sofrem efeito negativo em sua biologia, provocado provavelmente por alterações fisiológicas na lagarta. No experimento com O. insidiosus as características duração do segundo instar ninfal, o consumo ninfal e a longevidade das fêmeas foram afetadas pela ação do produto. Para T. pretiosum o produto não apresentou efeitos negativos que possam inviabilizar sua utilização conjunta com o produto para o Manejo Integrado de P. xylostella em brassicáceas. Apesar de o produto ter provocado efeitos negativos a P. nigrispinus e O. insidiosus estudos e técnicas complementares devem ser realizados para que, no futuro, esses inimigos naturais possam ou não ser utilizados em programas de controle biológico em culturas de brassicáceas associados com a bactéria entomopatogênica / Abstract: This work aimed to evaluate the action of biological insecticide Agree on biological characteristics of 3 natural enemies in laboratory, using the host diamondback moth, Plutella xylostella. The experiments were conducted in acclimatized room under 25±1°C, 70±10% relative umidity and 12 h photophase. The biological aspects of Podisus nigrispinus, Orius insidiosus and Trichogramma pretiosum were verified through the product action. Life and fertility table were elaborated to the predators. The biological data obtained showed that P. nigrispinus has the biology affected negatively when fed on infected caterpillars, probably occurred by physiological alterations in caterpillar. The characteristics duration and consumption of second nymphal instar, nymphal consumption and female longevity were affected by products in the assay with Orius insidiosus. The insecticide didn't show negative effects that can be unfeasible the use associated with the parasitoid T. pretiosum in the Integrated Pest Management to P. xylostella in brassicas. Thus the product cause negative effects on P. nigrispinus and O. insidiosus, complementary studies need to be realized in order to the future, these natural enemies can be used in Biological Programs associated with Bt in brassicas crops / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-12-03Bitstream added on 2014-06-13T20:14:46Z : No. of bitstreams: 1 marucci_sc_me_jabo_parcial.pdf: 42548 bytes, checksum: 705ccf6a74fac7e11f4cb25dc8fb9403 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-16T10:37:51Z: marucci_sc_me_jabo_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-01-16T10:38:35Z : No. of bitstreams: 1 000638549.pdf: 1096070 bytes, checksum: 93634385c53868612602ba315f79ea43 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Como uma alternativa para diminuir as agressões constantes que o ecossistema vem sofrendo, devido à grande quantidade de produtos químicos utilizados no controle de pragas, pesquisas envolvendo microrganismos capazes de promover o controle biológico tem se intensificado. Dentre estes microrganismos a bactéria Bacillus thuringiensis tem se destacado. Essa bactéria caracteriza-se pela produção de proteínas tóxicas a representantes de diversas ordens de insetos. Em particular, as proteínas Vip3A, estão em amplo estudo devido a sua especificidade, alto potencial ativo e como alternativa para o controle da resistência de insetos às proteínas Cry. Diante disto, o objetivo deste trabalho foi selecionar, a partir de 1080 isolados de diferentes regiões brasileiras, aqueles portadores de genes vip3A e obter a sequência de nucleotídeos completa dos mesmos. As linhagens padrão B. thuringiensis var. kurstaki HD1, B. thuringiensis var. tolworthi HD125 e o isolado I187 tiveram seus DNAs amplificados com oligonucleotídeos baseados na sequência de genes vip3A, descritos no banco de dados de B. thuringiensis e, a partir dos amplicons obtidos, a sequência completa de nucleotídeos dos mesmos foi determinada, utilizando-se da estratégia de “primer walking”. A proteína Vip3Aa43 (GenBank: [HQ594534]) da linhagem HD1 demonstrou ser 100% idêntica às proteínas Vip3Aa já descritas. Já as proteínas Vip3Aa42 (GenBank: [HQ587048]) da linhagem HD125 e Vip3Ag5 (GenBank: [HQ542193]) do isolado I187 demonstraram similaridade de 99% com as proteínas descritas Vip3Aa35 e Vip3Ag2, respectivamente, demonstrando serem duas novas proteínas Vip3A, devido às substituições de aminoácidos ocorridas. Os três genes vip3A obtidos poderão ser utilizados na produção de plantas Bt, piramidadas ou não, visando ao manejo da resistência dos insetos praga / As an alternative to decrease the constant aggressions that the ecosystem has suffered due to the large amount of chemical products used in pest control, researches involving microorganisms able to promoting biological control have been intensified. Among these microorganisms the bacterium Bacillus thuringiensis has been stood out. This bacterium is characterized by the production of toxic proteins to representatives of several insect orders. In particular, the Vip3A proteins are in large study due to its specificity, and high active potential as an alternative to control of insect's resistance to Cry proteins. According to this, the aim of this work was to select from 1080 isolates in different Brazilian regions, those carrying vip3A genes and obtain the complete nucleotide sequence of the same. The standard strains B. thuringiensis var. kurstaki HD1, B. thuringiensis var. tolworthi HD125 and the isolate I187 had their DNA amplified with primers based on vip3A gene sequence described in database of B. thuringiensis, and from the amplicons obtained, the full sequence of nucleotides was determined, by the use of the strategy of primer walking. The protein Vip3Aa43 (GenBank: [HQ594534]) of HD1 strain showed to be 100% identical to Vip3Aa proteins already described. However, the proteins Vip3Aa42 (GenBank: [HQ587048]) of HD125 strain and Vip3Ag5 (GenBank: [HQ542193]) of the isolate I187 showed 99% similarity with the Vip3Aa35 and Vip3Ag2 proteins described, respectively, showing been two new Vip3A proteins due to amino acid substitutions occurred. The three vip3A genes obtained can be used in the production of Bt crops, pyramidal or not, aiming to resistance management of pest insects

Submitted by GUSTAVO OLIVEIRA DE MAGALHÃES null (godemagalhaes@uol.com.br) on 2016-08-03T04:13:09Z No. of bitstreams: 1 Tese_Gustavo_Oliveira_de_Magalhaes.pdf: 1163350 bytes, checksum: aa24c79f73d6a630751c801e713ed916 (MD5) / Rejected by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica e não contém o certificado de aprovação. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-08-04T20:17:59Z (GMT) / Submitted by GUSTAVO OLIVEIRA DE MAGALHÃES null (godemagalhaes@uol.com.br) on 2016-08-05T14:58:04Z No. of bitstreams: 1 Tese_Gustavo_Oliveira_de_Magalhães_.pdf: 1456860 bytes, checksum: 9272f5a2364e18df572c352231781eec (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-08-05T19:45:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 magalhaes_go_dr_jabo.pdf: 1456860 bytes, checksum: 9272f5a2364e18df572c352231781eec (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-05T19:45:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 magalhaes_go_dr_jabo.pdf: 1456860 bytes, checksum: 9272f5a2364e18df572c352231781eec (MD5) Previous issue date: 2016-06-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo deste trabalho foi avaliar a biologia de linhagens de P. xylostella em criações para fins de pesquisa e verificar o efeito de B. thuringiensis sobre P. nigrispinus em associação de métodos para o manejo da praga em ambiente protegido. As larvas de P. xylostella foram coletadas em Brassica oleracea var. italica - brócolis Piracicaba, e mantidas em Brassica oleracea var. acephala - couve Manteiga híbrida HS-20. A cada geração aspectos biológicos dos insetos foram avaliados em ensaios de laboratório. As características biológicas analisadas foram: período larval, viabilidade de larvas, período pupal, viabilidade de pupas, peso pupal, razão sexual, número de ovos por fêmea, fertilidade de ovos, longevidade de machos e longevidade de fêmeas. Também, com os dados obtidos foi construída a tabela de vida de fertilidade. Já com predador, P. nigrispinus, foi avaliada a história de vida, o consumo de lagartas de P. xylostella em plantas de couve tratadas com bioinseticidas à base de Bacillus thuringiensis e também sua atividade de fitofagia nestas plantas, em casa de vegetação. Nas avaliações de P. xylostella, indivíduos coletados no campo apresentaram duração larval (8,2 dias) e pupal (3,8 dias) maiores, diminuindo ao longo de gerações. A viabilidade pupal (86,9%) e a fertilidade (93,0%) também foram maiores para essa população, com menor peso de pupa (4,7 mg). Além disso, apresentaram menor taxa líquida de aumento populacional (Ro), com 39 fêmeas/fêmea/dia, enquanto que, na população de P. xylostella proveniente do laboratório foi de 47,8 fêmeas/fêmea/dia. As características biológicas dos predadores, de modo geral, não sofreram alterações quando consumiram presas diretamente em plantas de couve tratadas com os bioinseticidas. Além disso, a fitofagia foi semelhante indicando que os bioinseticidas utilizados, mesmo o produto formulado, não apresentam substâncias que são repelentes para os predadores. Em conclusão, os parâmetros biológicos de P. xylostella demonstraram que o baixo desempenho em algumas características nas primeiras gerações pode ser melhorado ao longo das gerações e que o isolado HD1 ou o produto comercial Agree® à base de B. thuringiensis podem ser utilizados em associação com o predador P. nigrispinus em ambiente protegido visando o controle de P. xylostella. / This study aimed to evaluate the biology of P. xylostella strains in mass rearing for research and verify the effects of B. thuringiensis on P. nigrispinus in association methods for the management of this pest in protected environment. Larvae collected from Brassica oleracea var. italica - broccoli Piracicaba, were kept in Brassica oleracea var. acephala - kale Manteiga hibrida HS-20. The biological aspects of insects generations were evaluated in laboratory bioassays. The biological parameters evaluated were: larval period, larval viability, pupal period, pupal viability, pupal weight, sex ratio, number of eggs per female, eggs fertility, longevity of males and females. The data were used to construc of a life table fertility. The predator consuming P. xylostella larvae in kale plants treated with bionsecticides based on Bacillus thuringiensis and also their phytophagy activity in these plants, in green house was evaluated. The individuals collected in the field presented larval period (8.2 days) and pupal (3.8 days) longer, decreasing over generations. 86.9% of pupal viability and 93.0% of fertility were also high in this population, however prepal weight was significanthy low (4.7 mg). In addition, the lower net rate of population increase (Ro) with 39 females / female / day, whereas in P. xylostella population from the laboratory was 47.8 females / female / day. In general, the biological characteristics of predators did not change when the predators consumed prey directly on kale plants treated with biopesticides. In addition, phytophagy was similar indicating that biopesticides used, even the formulated product did not have substances that were repellent to predators. In conclusion, the biological parameters of P. xylostella demonstrated that the poor performance in some biological in the first generation can be improved over the generations, and HD1 strain or commercial product Agree® based of B. thuringiensis can be used in combination with the predator P. nigrispinus in a protected environment to control P. xylostella.

Os isolados de nematóides entomopatogênicos provenientes do solo de Monte Negro (RO) receberam o prefixo LPP seguido de um número sequencial. As linhagens de bactérias simbiontes receberam o prefixo MN como referência ao local de isolamento. As culturas dos isolados de nematóides entomopatogênicos LPP foram estabelecidas em nosso laboratório, sendo necessário cultivar também o lepidóptero Galleria mellonella para as infeções visando manter os nematóides em cultura. Os isolados, tanto de nematóides como das bactérias, foram identificados através do sequenciamento de genes ribossômicos (ITS 1 e 2 além do 5.8S para os nematóides e 16S para as bactérias). Análises integradas, abrangendo morfologia (em colaboração com a Dra. Claudia Dolinski e Inês Machado) e análises filogenéticas permitiram a identificação dos nematóides. Essas análises morfomoleculares mostram que as linhagens não podem ser descritas como novas espécies, baseadas apenas no local de isolamento, mas como pertencentes à espécies já descritas e bem caracterizadas. As linhagens de nematóides foram identificadas como pertencentes a duas espécies do gênero Heterorhabditis (Rhabditida): Heterorhabditis baujardi (LPP5, 7, 8, 10 e 11) Heterorhabditis indica (LPP1, 2, 3, 4, 9). A bactéria entomopatogênica simbionte isolada a partir do nematoide Heterorhabditis baujardi linhagem LPP7 foi identificada como pertencente à espécie Photorhabdus luminescens subsp. luminescens linhagem MN7. Análises filogenéticas mostram que há similaridade entre o isolado bacteriano e as outras linhagens já descritas de Photorhabdus luminescens subsp. luminescens. Ao mesmo tempo em que eram isoladas as bactérias simbiontes, ocorreu o isolamento de outra espécie de bactéria forética dos nematóides entomopatogênicos, identificada após sequenciamento parcial do 16S, como pertencentes ao gênero Ochrobactrum. As linhagens isoladas foram denominadas OMN2, OMN3, OMN4. / The entomopathogenic nematodes isolates from Monte Negro (RO) soils received the prefix LPP followed by a sequential number. The strains of bacterial symbionts received the prefix MN as a reference to its isolation site. Cultures of LPP entomopathogenic nematodes were established in our laboratory and the need for suitable hosts were supplied by cultivating the lepidopteran Galleria mellonella. Nematode and bacterial isolates were identified through ribosomal genes (ITS 1 and 2, 5.8S for nematodes and 16S for bacteria) sequencing. Integrated analysis, including morphology (in collaboration with Dr. Claudia Dolinski and Inês Machado) and a phylogenetic approach allowed the identification of nematodes. These morpho-molecular analysis clearly showed that our strains can not be described as new species, solely based on the isolation site critheria. It should be described as belonging to previously described and well characterized species. The nematode strains were identified as belonging to two species of the genus Heterorhabditis (Rhabditida): Heterorhabditis baujardi (LPP5, 7, 8, 10 and 11) Heterorhabditis indica (LPP1, 2, 3, 4, 9). The entomopathogenic bacterial symbiont isolated from the nematode Heterorhabditis baujardi strain LPP7 was identified as belonging to the species Photorhabdus luminescens subsp. luminescens strain MN7. Phylogenetic analysis showed similarities between isolated bacterial strains and other previously described Photorhabdus luminescens subsp. luminescens strains. In paralel work, along with bacterial symbionts isolation, other entomopathogenic nematodes foretic bacteria were isolated and identified after partial sequencing of 16S, as belonging to the genus Ochrobactrum. The isolated strains were named OMN2, OMN3, OMN4.

Bacillus thuringiensis (Bt) é uma bactéria entomopatogênica utilizada como biopesticida contra insetos, principalmente Lepidoptera, Coleoptera e Diptera, e na produção de organismos geneticamente modificados. Com a descoberta da capacidade de Bt se movimentar sistemicamente em plantas, potencialmente atingindo insetos sugadores, surge uma nova possibilidade para o controle de Diaphorina citri Kuwayama, que transmite bactérias associadas ao Huanglongbing, uma séria doença da citricultura. O objetivo do trabalho foi desenvolver sistemas de aquisição de Bt por D. citri, in vitro e in planta, para estudos de patogenicidade. Uma estirpe de Bt transformada com o gene green fluorescent protein (Btk-gfp), cultivada em meio NYSM, foi usada como marcador de aquisição pelo inseto e movimentação nas plantas. Para o sistema de aquisição in vitro, selecionaram-se dietas com base na sobrevivência e atividade alimentar de D. citri. Btk-gfp foi adicionada à dieta selecionada, composta por uma solução de sacarose a 30% em água mineral com corantes alimentícios (verde 0,1% e amarelo 0,4%). A dieta foi acondicionada em um sachê formado por duas membranas de Parafilm®, sobre a parte inferior de uma placa de Petri de 40 mm de diâmetro (gaiola de alimentação). Dez insetos foram confinados em cada gaiola para períodos de acesso à aquisição (PAA) de até 48 h, estabelecendo-se 10 gaiolas por tratamento; como controle, utilizou-se a dieta sem Btk-gfp. Para testes de aquisição in planta, suspensões de Btk-gfp foram inoculadas em ramos novos cortados e no solo, próximo à haste de seedlings de laranja doce [Citrus sinensis (L.) Osbeck] e de murta [Murraya paniculata (L.) Jack], e em diferentes concentrações, avaliando-se a movimentação da bactéria após um período de 48 h. Posteriormente, adultos e ninfas de D. citri foram confinados nestas plantas para avaliar a aquisição de Btk-gfp, usando-se plantas inoculadas apenas com água como controle. Para os bioensaios de patogenicidade a D. citri, 21 estirpes de Bt foram testadas no sistema de aquisição em ramos cortados de murta e 5 estirpes em ramos cortados de laranja para ninfas de 3º. ínstar. In vitro, testaram-se 3 estirpes contra ninfas de 3º. ínstar e 9 contra adultos. Btgfp foi absorvido pelas raízes e ramos novos cortados de seedlings de laranja doce e de murta, e translocado até as folhas, mostrando movimentação sistêmica. Esta estirpe foi adquirida por adultos e ninfas de D. citri que se alimentaram nos ramos novos cortados, mantidos em suspensão bacteriana. O sistema de alimentação in vitro permitiu a aquisição de Bt-gfp (pellet ressuspendido na dieta de sacarose com corantes) por adultos de D. citri com apenas 12 h de PAA, mas 30 h é um período ótimo para exposição do inseto ao sistema. Nenhuma das nove estirpes testadas no sistema in vitro foi patogênica aos adultos de D. citri. Das 21 estirpes testadas contra ninfas de 3º. ínstar em ramos novos de murta, cinco causaram mortalidade de 24 a 45%, em 5 dias. Essas cinco estirpes também foram testadas contra ninfas dem ramos de citros cortados, causando mortalidade de 35 a 75% em 48 h. / Bacillus thuringiensis (Bt) is an entomopathogenic bacterium widely used as a biopesticide against insect pests, mainly Coleoptera, Lepidoptera and Diptera, or for engineering genetically-modified plants. The recent finding that Bt is able to move systemically within plants, potentially targeting piercing-sucking insects, suggests that the bacterium may be effective for microbial control of Diaphorina citri Kuwayama, the vector of Huanglongbing-associated bacteria, a serious citrus disease. The goal of this research was to develop in vitro and in planta acquisition systems of Bt by D. citri for pathogenicity assays. A transformed Bt strain with the green fluorescent protein gene (Btk-gfp), grown in NYSM medium, was used as a marker to demonstrate bacterial acquisition by the insect and movement within the plants. Artificial diets were selected for the in vitro acquisition system based on insect survival and feeding activity. Btk-gfp was added to the selected diet, a 30% sucrose solution in mineral water with green (0.1%) and yellow (0.4%) food coloring. The diet was placed inside a Parafilm® membrane sachet, covering the opening of the lower half of a 40-mm diameter culture plate, and forming the feeding cage. Ten D. citri adults or nymphs were introduced in each cage and allowed acquisition access periods (AAP) of up to 48 h on the diet; as a control, a diet without Btk-gfp was used. For testing the in planta acquisition system, Btk-gfp suspensions were inoculated in young stem cuttings or in the soil, near the stem of Citrus sinensis (L.) Osbeck and Murraya paniculata (L.) Jack seedlings, as well as in different concentrations, and bacterial movement was assessed after 48 h; plants inoculated with water were used as controls. D. citri adults and nymphs were confined on inoculated plants to verify Btk-gfp acquisition. In pathogenicity assays, 21 Bt strains were tested against 3rd instars of D. citri using the acquisition system with stem cuttings of M. paniculata and 5 strains were tested using citrus stem cuttings. The in vitro acquisition system was used to test pathogenicity of 3 and 9 Bt strains against 3rd-instar nymphs and adults, respectively. Bt-gfp absorbed by roots or young stem cuttings of inoculated C. sinensis and M. paniculata was detected in the leaves, showing systemic movement. Bt-gfp was isolated from groups of nymphs and adults that were fed on inoculated stem cuttings or on artificial diets with bacterial suspension, showing that both in planta and in vitro acquisition take place. D. citri adults can acquire Bt-gfp within 12 h of AAP to the artificial diet with bacterium inoculum, but 30 h is the optimum AAP. None of the nine Bt strains assayed in vitro were pathogenic to D. citri adults. Of 21 strains tested for pathogenicity against nymphs using inoculated stem cuttings of M. paniculata, five caused mortality rates varying from 24 to 45% mortality within 5 days. These five Bt strains were also tested against D. citri nymphs using young stem cuttings of C. sinensis, causing mortality rates of 35 to 75% within 48 h.

Bacillus thuringiensis (Bt) é uma bactéria entomopatogênica utilizada como biopesticida contra insetos, principalmente Lepidoptera, Coleoptera e Diptera, e na produção de organismos geneticamente modificados. Com a descoberta da capacidade de Bt se movimentar sistemicamente em plantas, potencialmente atingindo insetos sugadores, surge uma nova possibilidade para o controle de Diaphorina citri Kuwayama, que transmite bactérias associadas ao Huanglongbing, uma séria doença da citricultura. O objetivo do trabalho foi desenvolver sistemas de aquisição de Bt por D. citri, in vitro e in planta, para estudos de patogenicidade. Uma estirpe de Bt transformada com o gene green fluorescent protein (Btk-gfp), cultivada em meio NYSM, foi usada como marcador de aquisição pelo inseto e movimentação nas plantas. Para o sistema de aquisição in vitro, selecionaram-se dietas com base na sobrevivência e atividade alimentar de D. citri. Btk-gfp foi adicionada à dieta selecionada, composta por uma solução de sacarose a 30% em água mineral com corantes alimentícios (verde 0,1% e amarelo 0,4%). A dieta foi acondicionada em um sachê formado por duas membranas de Parafilm®, sobre a parte inferior de uma placa de Petri de 40 mm de diâmetro (gaiola de alimentação). Dez insetos foram confinados em cada gaiola para períodos de acesso à aquisição (PAA) de até 48 h, estabelecendo-se 10 gaiolas por tratamento; como controle, utilizou-se a dieta sem Btk-gfp. Para testes de aquisição in planta, suspensões de Btk-gfp foram inoculadas em ramos novos cortados e no solo, próximo à haste de seedlings de laranja doce [Citrus sinensis (L.) Osbeck] e de murta [Murraya paniculata (L.) Jack], e em diferentes concentrações, avaliando-se a movimentação da bactéria após um período de 48 h. Posteriormente, adultos e ninfas de D. citri foram confinados nestas plantas para avaliar a aquisição de Btk-gfp, usando-se plantas inoculadas apenas com água como controle. Para os bioensaios de patogenicidade a D. citri, 21 estirpes de Bt foram testadas no sistema de aquisição em ramos cortados de murta e 5 estirpes em ramos cortados de laranja para ninfas de 3º. ínstar. In vitro, testaram-se 3 estirpes contra ninfas de 3º. ínstar e 9 contra adultos. Btgfp foi absorvido pelas raízes e ramos novos cortados de seedlings de laranja doce e de murta, e translocado até as folhas, mostrando movimentação sistêmica. Esta estirpe foi adquirida por adultos e ninfas de D. citri que se alimentaram nos ramos novos cortados, mantidos em suspensão bacteriana. O sistema de alimentação in vitro permitiu a aquisição de Bt-gfp (pellet ressuspendido na dieta de sacarose com corantes) por adultos de D. citri com apenas 12 h de PAA, mas 30 h é um período ótimo para exposição do inseto ao sistema. Nenhuma das nove estirpes testadas no sistema in vitro foi patogênica aos adultos de D. citri. Das 21 estirpes testadas contra ninfas de 3º. ínstar em ramos novos de murta, cinco causaram mortalidade de 24 a 45%, em 5 dias. Essas cinco estirpes também foram testadas contra ninfas dem ramos de citros cortados, causando mortalidade de 35 a 75% em 48 h. / Bacillus thuringiensis (Bt) is an entomopathogenic bacterium widely used as a biopesticide against insect pests, mainly Coleoptera, Lepidoptera and Diptera, or for engineering genetically-modified plants. The recent finding that Bt is able to move systemically within plants, potentially targeting piercing-sucking insects, suggests that the bacterium may be effective for microbial control of Diaphorina citri Kuwayama, the vector of Huanglongbing-associated bacteria, a serious citrus disease. The goal of this research was to develop in vitro and in planta acquisition systems of Bt by D. citri for pathogenicity assays. A transformed Bt strain with the green fluorescent protein gene (Btk-gfp), grown in NYSM medium, was used as a marker to demonstrate bacterial acquisition by the insect and movement within the plants. Artificial diets were selected for the in vitro acquisition system based on insect survival and feeding activity. Btk-gfp was added to the selected diet, a 30% sucrose solution in mineral water with green (0.1%) and yellow (0.4%) food coloring. The diet was placed inside a Parafilm® membrane sachet, covering the opening of the lower half of a 40-mm diameter culture plate, and forming the feeding cage. Ten D. citri adults or nymphs were introduced in each cage and allowed acquisition access periods (AAP) of up to 48 h on the diet; as a control, a diet without Btk-gfp was used. For testing the in planta acquisition system, Btk-gfp suspensions were inoculated in young stem cuttings or in the soil, near the stem of Citrus sinensis (L.) Osbeck and Murraya paniculata (L.) Jack seedlings, as well as in different concentrations, and bacterial movement was assessed after 48 h; plants inoculated with water were used as controls. D. citri adults and nymphs were confined on inoculated plants to verify Btk-gfp acquisition. In pathogenicity assays, 21 Bt strains were tested against 3rd instars of D. citri using the acquisition system with stem cuttings of M. paniculata and 5 strains were tested using citrus stem cuttings. The in vitro acquisition system was used to test pathogenicity of 3 and 9 Bt strains against 3rd-instar nymphs and adults, respectively. Bt-gfp absorbed by roots or young stem cuttings of inoculated C. sinensis and M. paniculata was detected in the leaves, showing systemic movement. Bt-gfp was isolated from groups of nymphs and adults that were fed on inoculated stem cuttings or on artificial diets with bacterial suspension, showing that both in planta and in vitro acquisition take place. D. citri adults can acquire Bt-gfp within 12 h of AAP to the artificial diet with bacterium inoculum, but 30 h is the optimum AAP. None of the nine Bt strains assayed in vitro were pathogenic to D. citri adults. Of 21 strains tested for pathogenicity against nymphs using inoculated stem cuttings of M. paniculata, five caused mortality rates varying from 24 to 45% mortality within 5 days. These five Bt strains were also tested against D. citri nymphs using young stem cuttings of C. sinensis, causing mortality rates of 35 to 75% within 48 h.