Orientadores: Concetta Kascheres, Claudimir Lucio de Lago / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-22T13:41:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Juliano_ValmirFascio_D.pdf: 7238111 bytes, checksum: 024bc2b93237864cf7b0bce33abf418b (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Um espectrômetro de massas pentaquadrupolar foi interfaceado a um microcomputador 486DX 50 MHz através de um cartão de interface AT-MIO-16X da National Instruments e de um outro desenvolvido em nosso laboratório. Foi desenvolvido um conjunto de programas para controlar o instrumento e adquirir dados de experimentos MS, MS e MS multidimensionais em espectrometria de massas sequencial. Também foi desenvolvido um programa para o monitoramento de íons em função do tempo e do potencial de ionização. O monitoramento em função do tempo permite trabalhar com a técnica de espectrometria de massas por introdução via membrana (MIMS), bem como com outros processos que gerem produtos gasosos. O potencial de ionização é controlado através de um conversor D/A, permitindo adquirir espectros enquanto é feita sua varredura. Esta técnica está sendo avaliada para emprego como ferramenta auxiliar na interpretação de espectros, assim como na eliminação de contaminações. Todo o software foi desenvolvido em Turbo Pascal 1.5 para Windows utilizando a técnica de programação orientada a objetos e programação motivada por eventos a fim de permitir um completo controle e expansão do sistema. Com o objetivo de eliminar e impedir a interferência de sinais espúrios, foi feito um estudo do efeito de um filtro digital robusto por mediana móvel sobre um sinal analítico, comparando-o com o método de filtragem por média móvel, o qual tem sido bastante utilizado nestes processos de filtragem. Posteriormente, implementou-se o método nos programas de aquisição de dados do equipamento, obtendo-se resultados bastante satisfatórios. Um circuito oscilador foi acoplado ao controlador do potencial elétrico da lente de focalização de saída do primeiro quadrupolo de reação a fim de aumentar o tempo de residência dos íons em seu interior e, consequentemente, aumentar o rendimento das reações íon-molécula. Aumentos da ordem de 30 a 260% foram observados no experimentos testados. / Abstract: A pentaquadrupole mass spectrometer was interfaced to a 486DX 50-MHz microcomputer by an AT-MIO-16X interface card (National Instruments) and by another home made card. A set of programs was developed to control the instrument and to acquire data from multidimensional MS, MS and MS experiments in sequential mass spectrometry. A program to monitorize ions as a function of the time and ionization potential was also developed. The time monitoring allows one to work with membrane inlet mass spectrometry as well as with other processes that yield gas products. The ionization potential is controlled by a DAC that allows one to acquire spectra while varying it. This technique is being evaluated as a tool for interpretation of spectra and elimination of contamination in spectra. All programs were developed in Turbo Pascal 1.5 for Windows using object oriented programming and event-driven programming to allow complete control of the system as well as its upgrading. The effect of a robust digital filter, based on the moving mediam method, was studied. This method was compared to the moving average procedure, commonly used in analytical signal filtering. Later, this method was implemented in all data acquisition programs and good results were obtained. An oscillator circuit was connected to the potential controller of the focussing lens at the exit of the first reaction quadrupole to increase the residence time of the ions inside it and therefore increase the yield of the ion-molecule reactions. For the reactions studied the yields were increased in the range of 30 to 260%. / Doutorado

Orientador: Gilberto de Nucci / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T18:13:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guzzo_GiovanniCarvalho_D.pdf: 1951061 bytes, checksum: eddc16b466ad966ac80f17737bb7d32d (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Diidroergocristina (DHEC) é um fármaco semi-sintético, derivada do alcalóide do Ergot, principalmente utilizada para enxaqueca e estudada em distúrbios cognitivos relacionados ao envelhecimento. No presente estudo, o seu principal metabólito 8-hidroxidiidroergocristina (8'-OH-DHEC) foi produzido através de incubação de preparações enzimáticas de fígado de boi usando o Mesilato de Diidroergocristina como substrato. Foi feita uma avaliação de qual o melhor método de preparação enzimática a ser utilizado para produção do padrão do metabólito ativo em grande escala através da comparação de atividade enzimática entre microssomos e S12, ambos extraídos de heptócitos de fígado bovino. A purificação desse metabólito foi feita através da utilização de uma coluna cromatográfica clássica com sílica gel e cromatografia líquida de fase reversa. Sua identificação foi baseada em mensuração de sua massa molecular por espectro de fragmentação de massa e Ressonância Magnética (NMR - 1H/13C). Através da produção dessa substância in vitro, um método rápido, sensível e robusto de determinação da DHEC e seu principal metabólito foi desenvolvido e validado em LC-MS/MS a partir de análise de plasma humano. Bromocriptina foi utilizado com padrão interno e os limites de quantificação da DHEC e 8-OH-DHEC foram 10 pg/ml e 20 pg/ml, respectivamente. Os parâmetros farmacocinéticos foram investigados em 12 voluntários masculinos através da administração de uma dose única oral de 18mg de DHEC, via oral (Ikevert®). O Cmax de DHEC observado foi 0,28 ± 0,22 µg/l; o Tmax 0,46 ± 0.26h; a ASC 0,39 ± 0,41 µg/l.h; com meia-vida de 3,50 ± 2.27 h. O pico de concentração do 8-OH-DHEC foi 5,63 ± 3,34 µg/l; com Tmax de 1,04 ± 0,66 h; e ASC de 13,36 ± 5,82 µg/l.h; observando uma meia-vida de 3,90 ± 1,07 h. A administração de 18mg de DHEC foi bem tolerada, sem associação com qualquer reação adversa. Os resultados farmacocinéticos obtidos foram comparados com dados anteriores obtidos para a DHEC por meio de radioimunoensaio (RIA). Uma diferença nos parâmetros farmacocinéticos de Cmax e ASC é observada entre os métodos analíticos e sua possível relação na prática clínica é discutida / Abstract: Dihydroergocristine (DHEC) is a semi-synthetic drug mainly used for migraine and studied in age-related cognitive impairment. In this study, its major metabolite 8'-hydroxy-dihydroergocristine (8'-OH-DHEC) was produced in incubates of a bovine liver preparation using dihydroergocristine mesylate (DHECM) as substrate. An evaluation of the best enzymatic preparation method was done in order to verify the adequate process for massive production of the metabolite. A comparison between microssomes and S12 was performed, where both preparations were extracted from bovine hepatocytes. Purification was achieved by flash silica gel column and reverse phase liquid chromatographies, and identification was based on accurate molecular mass measurements, mass fragmentation spectra and NMR (1H/13C) chemical shifts. By using the substance produced in vitro, a fast, sensitive, specific and robust LC/MS/MS method for the simultaneous determination of DHEC and its major metabolite in human plasma was developed and validated. Bromocriptine was used as internal standard and limits of quantification for DHEC and 8'-OH-DHEC were 10 pg/ml and 20 pg/ml, respectively. Pharmacokinetic parameters were investigated on 12 male healthy volunteers to whom a single dose of 18 mg DHECM was administered in tablets (Iskevert®). The peak of DHEC was 0.28 ± 0.22 µg/l, the tmax 0.46 ± 0.26 h, the AUClast 0.39 ± 0.41 µg/l.h and the terminal elimination half-life 3.50 ± 2.27 h. The peak of 8'-OH-DHEC was 5.63 ± 3.34 µg/l, the tmax 1.04 ± 0.66 h, the AUClast 13.36 ± 5.82 µg/l.h and the terminal elimination half-life 3.90 ± 1.07 h. Dosing of 18 mg DHECM was well tolerated, causing no adverse events. The pharmacokinetics parameters observed on this study were compared to those obtained in DHEC analysis by radioimmunoassay (RIA). A difference in Cmax and AUC is observed between both methods and its clinical implications are discussed / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Fisiopatologia Medica

Submitted by Alisson Mota (alisson.davidbeckam@gmail.com) on 2015-07-06T19:29:41Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Jefferson Ferreira dos Santos.pdf: 12615415 bytes, checksum: 28e029e2822cb4b7e87ef5b2dc18919b (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-06T19:38:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Jefferson Ferreira dos Santos.pdf: 12615415 bytes, checksum: 28e029e2822cb4b7e87ef5b2dc18919b (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-06T19:42:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Jefferson Ferreira dos Santos.pdf: 12615415 bytes, checksum: 28e029e2822cb4b7e87ef5b2dc18919b (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-06T19:42:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Jefferson Ferreira dos Santos.pdf: 12615415 bytes, checksum: 28e029e2822cb4b7e87ef5b2dc18919b (MD5) Previous issue date: 2014-04-11 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The ever increasing consumption of fossil fuels puts oil as one of the most important products of human consumption. Undeniable technological and even social breakthroughs are coming era of "post-oil" . But this unbridled consumption has led to serious environmental aquatic ecosystems and land damage. Viable alternatives that promote the recovery of areas affected by these compounds are undoubtedly of utmost importance given the current scenario. Bioremediation has proven very promising in this area . And increasingly, new technology are aggregated to this field of research in an attempt to obtain more conclusive results, thus improving the overall understanding of how microorganisms interact in promoting bioremediation. This is precisely what has been proposed in this work. The use of Mass Spectrometry (MS) for identification of proteins of bacteria capable of growth in xenobiotics. Initially was selected near the Refinaria Isaac Sabbá (REMAN) species B. pumilus, with the potential ability to grow in petroleum and diesel. After conducting tests using oil and diesel separately with unique carbon sources, was proven capacity for growth of the species in these xenobiotics. Better growth/biomass production was recorded in crops having diesel as finte carbon, as well as the best protein yield. The proteomic profile in petroleum, diesel and yeast extract was determined. Comparisons between these profiles showed very marked difference between them. For analysis via mass spectrometry were selected 96 spots of B. pumilus were selected and identified by Peptide Mass Fingerprint (PMF) . Of this total 54 protein spots were identified. Some with potential involvement in direct bioremediation processes by B. pumilus. However, further studies are necessary to effective proof of proteins in the pathways of degradation of xenobiotics. / O consumo cada vez crescente dos combustíveis fósseis coloca o petróleo como um dos mais importantes produtos do consumo humano. Inegáveis avanços tecnológicos e até mesmo sociais são advindos da era “Pós-Petróleo”. Porém, esse consumo desenfreado tem gerado graves danos ambientais aos ecossistemas aquáticos e também terrestres. Alternativas viáveis capazes de promover a recuperação de áreas afetadas por esses compostos são sem dúvida de extrema importância diante do cenário atual. A biorremediação tem se mostrado bastante promissora nessa área. E cada vez mais novas tecnologia são agregadas a esse campo de investigação na tentativa de obter resultados mais conclusivos, melhorado assim, o entendimento global de como os microorganismos interagem na promoção da biorremediação. É justamente isso o que foi proposto nesse trabalho. O emprego da espectrometria (MS) de massa para identificação de proteínas de bactéria com capacidade de crescimento em xenobióticos. Inicialmente foi selecionada nas proximidades da Refinaria Isaac Sabbá (REMAN) a espécie B. pumilus, com potencial capacidade de crescer em petróleo e diesel. Após a realização de testes usando petróleo e diesel, separadamente, com fontes únicas de carbono, foi comprovada a capacidade de crescimento da espécie nesses xenobióticos. Melhor crescimento/produção de biomassa foi registrado nos cultivos tendo o diesel como finte de carbono, bem como o melhor rendimento protéico. O perfil proteômico em petróleo, diesel e extrato de levedura foi determinado. As comparações entre tais perfis demonstrou diferenças bastante acentuadas entre eles. Para análise via espectrometria massas foram selecionados 96 spots de B. pumilus e identificados por Peptide Mass Fingerprint (PMF). Desse total de spots, 54 proteínas foram identificadas. Algumas delas com potencial envolvimento nos processos diretos de biorremediação apresentada por B. pumilus. Porém, mais estudos são necessário para efetiva comprovação dessas proteínas nas vias de degradação de xenobióticos.

Submitted by Alisson Mota (alisson.davidbeckam@gmail.com) on 2015-07-16T19:00:01Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Priscila Ferreira de Aquino.pdf: 5652638 bytes, checksum: 2ba6118eee211cd155bc26326e843efd (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-17T14:18:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Priscila Ferreira de Aquino.pdf: 5652638 bytes, checksum: 2ba6118eee211cd155bc26326e843efd (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-17T14:25:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Priscila Ferreira de Aquino.pdf: 5652638 bytes, checksum: 2ba6118eee211cd155bc26326e843efd (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-17T14:25:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Priscila Ferreira de Aquino.pdf: 5652638 bytes, checksum: 2ba6118eee211cd155bc26326e843efd (MD5) Previous issue date: 2012-08-06 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / ancer is a disease in expansion, whose mortality is one of the highest in the world, motivating the scientific community to increasingly seek early diagnosis, as the chances of cure are higher in this case. Gastric cancer is of particular interest as it is the fourth most common in malignancy and the second leading cause of death worldwide. In this work, we compared tissue samples from control subjects (without the disease) and patients with gastric cancer and their corresponding ressection margin by using proteomics, metabolomics, and molecular biology. The proteomic analysis comprised an offline MudPIT shotgun proteomic approach with label-free quantitation by extracted ion chromatograms (XICs); it revealed that each of these tissue-types is very distinct. The resection margin presented several proteins previously correlated with cancer, but also several other proteins that could be related to tumor nourishment and metastasis. Some examples are: collagen alpha-1, ceruloplasmin, calpastatin, and E-cadherin. The multivariate analysis, according to Ward’s method and k-means clustering, of our metabolomics data revealed that was able to group the different samples according to their tissue type. Our metabolomic analysis results are aligned with those from the proteomics in that these tissue-types are very distinct, particularly the ressection margin which may be the result of an ongoing biochemical battle between the body and the cancer cells. Furthermore, a viral investigation of the samples by PCR (Polymerase Chain Reaction) showed that the Epstein-Barr virus (EBV) should be considered as a risk factor for gastric cancer in Manaus. In all, the proteomic results poses the ressection margin as playing a key role in the nutrition of the cancer cells. Regardless, we still need a better understanding of this disease at the molecular level to provide more effective treatments. / O câncer é uma doença em expansão, cuja mortalidade é elevada no mundo, fazendo com que a comunidade científica busque cada vez mais diagnosticar precocemente, visto que as chances de curá-lo neste caso são maiores. O câncer gástrico é de especial interesse devido ser o quarto em malignidade e o segundo que mais causa mortes no mundo. Neste trabalho, amostras de tecidos tumorais e respectivas margens de ressecção de pacientes com câncer gástrico, e de biópsia do estômago de indivíduos controles (sem essa doença), foram investigadas através de abordagens proteômica, metabolômica e por biologia molecular. A análise proteômica utilizando uma abordagem da proteômica shotgun, o MudPIT off-line e a quantificação label-free pelo cromatogramas de íons extraídos (XICS) demonstrou que cada tipo de tecido é bem distinto. A margem de ressecção apresentou várias proteínas previamente correlacionadas ao câncer, assim como algumas proteínas superexpressadas que podem estar relacionadas ao crescimento tumoral e a metástase. Alguns exemplos são: colágeno alfa-1, ceruloplasmina, calpastatina e E-caderina. A análise multivariada, segundo o método de Ward e o agrupamento de k-Means, dos dados de metabolômica revelou que foi capaz de agrupar os diferentes tipos de amostras de acordo com seu tipo de tecido. De maneira que os resultados da análise metabolômica estão alinhados com os da proteômica em que os tipos de tecidos são muito distintos, particularmente a margem de ressecção, o qual pode ser resultado de uma contínua batalha bioquímica entre o corpo e as células cancerígenas. Além disso, uma investigação viral das amostras mediante a técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction) evidenciou que o virus Epstein-Barr (EBV) deve ser considerado um fator de risco para o câncer gástrico em Manaus. Os resultados proteômicos deste trabalho indicam que a margem de ressecção pode desempenhar um papel fundamental para a nutrição das células cancerígenas. O presente trabalho corrobora com a idéia de que é necessário um maior entendimento da doença em nível molecular, o que pode proporcionar tratamentos mais efetivos, e que o EBV deve ser levado em consideração para a incidência do câncer gástrico.

Há na literatura um grande número de publicações versando sobre métodos analíticos para a determinação de razões isotópicas através das mais diversas modalidades de espectrometria. Entretanto, praticamente todos esses métodos possuem umarestrição comum em relação à gama de íons moleculares que podem ser utilizados nessas determinações: eles devem ser, ou íons elementares, ou íons cujo único átomo poli-isotópicoé o elemento de interesse. Isto é obtido, ou mediante adestruição das moléculas da amostra, ou complexos tratamentosquímicos para a obtenção de espécies poli-atômicas adequadas.Neste trabalho, foi desenvolvido um método matemático capazde deconvolver o padrão isotopomérico de um íon molecular,isto é, calcular os padrões isotópicos dos átomos que ocompõem dados a sua fórmula elementar e o seu espectro .A principal contribuição de um método desse tipo é a ampliaçãoda variedade de espécies químicas e modalidades de espectrometria aceitáveis para análises isotópicas. O algoritmo desenvolvidofoi caracterizado através da sua aplicação a um grande númerode espectros simulados visando modelar a resposta do métodoquando submetido a algumas imperfeições experimentais típicasde espectrometria e relevantes para análises isotópicas,tais como ruído, discriminação instrumental de massas, nãolinearidade de detecção, falta de resolução e má compensaçãode espectral. Os resultados obtidos permitiram concluirque, ao contrário do que o senso comum às vezes possa sugerir,determinações isotópicas realizadas através de espéciespoli-atômicas podem, muitas vezes, ser mais exatas e precisasque as efetuadas pelas abordagens convencionais. Concluiu-seque, de maneira geral, os resultados tendem a ser tantomelhores quanto maior for o número de instâncias do elementode interesse na fórmula do íon molecular escolhido. Foiestudada experimentalmente a viabilidade de métodos analíticosde equilibração para determinações de razões isotópicashidrogênio/deutério em amostras aquosas utilizando polióiscomo sondas e espectrometria com ionização electrospray.Os polióis testados foram o manitol, o ácido glucônico,a glucosamina e a N-metilglucamina (através do seu complexocom o ácido bórico). Os resultados obtidos mostraram algunsdesvios sistemáticos que sugerem que haja troca parcialde hidrogênios não lábeis dos polióis na fase gasosa, oque impossibilitaria esta aplicação. Sondas aternativasaos polióis são propostas. / Several articles can be found in the literature describing methods forthe determination of isotopic ratios through the various modalities ofmass spectrometry. However, almost all of them have a commonrestriction on the type of molecular ion that can be employed in thesedeterminations: they must be either elemental ions, or polyatomic ionswhose sole polyisotopic element is the one being analysed. This isusually achieved through the destruction of the molecules, or throughcomplex synthetic procedures. In this work, a mathematical methodcapable of deconvolving the isotopomeric pattern of a molecular ion,i.e., calculating the isotopic pattern of its constituent atoms givenits formula and its mass spectrum, has been developed. The maincontribution of such a method to the field is the broadening of therange of acceptable chemical species for isotopic analyses. Thedeveloped algorithm was characterized by applying it to a large numberof simulated spectra with the objective of modelling its response tosome experimental imperfections common to mass spectrometry andrelevant for isotopic analyses, such as noise, instrumental massdiscrimination, detection non-linearity, lack of resolution and badbaseline compensation. The results allowed us to conclude that, inspite of whatever commonsense might suggest, isotopic analysescarried out through the polyatomic approaches can, in many cases, bemore exact and precise than those performed through conventionalapproaches. It could also be concluded that, in general, the largerthe number of instances of the element of interest in the formula ofthe chosen ion, the better the results become. Also as part of theproject, the viability of employing polyols as probes for thehydrogen/deuterium ratio in aquous samples in equilibration methodsand electrospray mass spectrometry has been studied. The studiedpolyols were: manitol, gluconic acid, glucosamine and N-metilglucamine(through its complex with boric acid). The obtained results showedsome systematic errors that suggest that there might be a partialexchange of non-labile hydrogen atoms during the electrosprayphenomenon. Alternative probes are proposed.

O valor nutricional do milho é limitado devido ao seu alto conteúdo de proteínas de reserva (zeínas), que são deficientes em aminoácidos essenciais como lisina e triptofano. Por esse motivo, a Embrapa (Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária) desenvolveu a variedade de milho BR473, que tem um excelente valor energético e um maior conteúdo protéico quando comparado ao milho comum. Tal variedade possui 0,9 e 4,0 g/kg de grão de triptofano e lisina, respectivamente, contra 0,6 e 2,6 do milho comum. O alto conteúdo de lisina em algumas variedades de milho como a opaco-2 (o2), por exemplo, é relacionado à presença de proteínas não-zeínas. Para identificar essas proteínas, o que poderia explicar o alto conteúdo protéico da variedade BR473, foi analisado o proteoma dos corpos protéicos dos grãos desse milho. Para tal, foram usadas e avaliadas as cromatografias uni e bidimensional, acopladas a espectrometria de massas (LC-MS/MS e LC/LC-MS/MS), uma vez que tais técnicas se tornaram ferramentas poderosas para seqüenciamento e identificação de proteínas. Neste trabalho, foram identificadas seis proteínas por LC-MS/MS e dezesseis proteínas por LC/LC-MS/MS. / The nutritional value of maize seed is limited due to its high content of zeins (storage proteins), which are deficient in essential amino acids as lysine and tryptophan. Because of this, Embrapa (Brazilian Agricultural Research Corporation) developed the BR 473 maize variety, which has excellent energetic value and higher proteic content than the normal maize. BR 473 maize variety has 0.9 and 4.0 g/kg of grain of tryptophan and lysine, respectively, against the 0.6 and 2.6 from normal maize. The high lysine content in some maize varieties as opaque-2 (o2), for example, has been related to the presence of non-zein proteins. In order to identify them, which could explain the high proteic content of BR 473 maize variety, the protein bodies proteome of these grains were analyzed. For this purpose, one and two-dimensional liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS and LC/LC-MS/MS) were used and evaluated, since these techniques have become a powerful tool for protein sequencing and identification. We have identified six proteins by LC-MS/MS and sixteen proteins by LC/LC-MS/MS.

Neste trabalho foram estudados os produtos gerados pela eletrooxidação do 2,6-bis(dietanolamina)-4,8-dipiperidinapirimida-[5,4-d] pirimidina, Dipiridamol. Atualmente o Dipiridamol é um dos fármacos que induzem vasodilatação coronariana mais utilizados em Cardiologia Nuclear em diferentes técnicas aplicadas na aquisição e processamento de imagens (cintilografia miocárdica de perfusão, cintilografia de necrose miorcárdica, ressonância magnética do coração, ventriculografia e angiocardiografia radio-isotópica). Na prática clínica, o emprego do dipiridamol baseia-se na diminuição da agregação plaquetária, elevação dos níveis de adenosina e na potencialização dos efeitos da Aspirina®. A eletrooxidação do Dipiridamol em acetonitrila é caracterizada por dois processos consecutivos envolvendo a perda de um elétron em cada etapa de oxidação. Diferentemente do meio aprótico, a eletrooxidação do Dipiridamol em meio aquoso ácido, apresenta apenas uma única etapa de oxidação que corresponde à perda de dois elétrons. A eletrooxidação foi realizada em condições de potencial controlado para a retirada de um ou de dois elétrons. Espectros de Absorção Ótica e de Fluorescência foram obtidos após as eletrooxidações para o acompanhamento da estabilização e caracterização parcial dos produtos de oxidação eletroquímica nos diferentes meios. Após a estabilização dos produtos utilizou-se a técnica de Extração em Fase Sólida para a retirada do sal eletrolítico, obtendo-se dois tipos de frações, uma aquosa e outra metanólica, na eletrooxidação em acetonitrila. Essas frações foram estudadas por meio de Espectrometria de Massas acoplada à Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (LC-MS). Não foi utilizada Extração em Fase Sólida para os compostos obtidos pela eletrólise em meio aquoso ácido, os quais, foram analisados diretamente por LC-MS. Os produtos obtidos das eletrooxidações do Dipiridamol foram parcialmente caracterizados. Todas as eletrólises levaram à formação de isômeros com m/z de 472 [M+H]+, 269 [M+H]+, 519 [M+H]+ e 505 [M+H]+. A elucidação estrutural completa destes produtos não foi possível devido à instabilidade e à baixa concentração dos mesmos o que impossibilitou a realização de estudos mais detalhados de caracterização estrutural. / In this work the products obtained in the eletrooxidation reactions of 2,6- bis(diethanolamino)-4,8-dipiperidinopyrimido-[5,4-d] pyrimidine (Dipyridamole) were studied. Dipyridamole is a drug that induce the coronary vasodilatation mostly used in Nuclear Cardiology in different techniques based on acquisition and image processing ( perfusion heart cintilography, heart necrosis cintilography, heart magnetic resonance, ventriclegraphy and radio-isotopic coronary angioplasty). In clinical medicine, Dipyridamole is used for decreasing platelet aggregation, increasing the adenosine levels and co-activating Aspirine® effects. The eletrooxidation of the Dipyridamole in acetonitrile is characterized by two consecutives processes involving the release of one electron in each stage of oxidation. Differently from aprotic medium, the electrooxidation of Dipyridamole in acid aqueous media shows a single oxidation stage corresponding to the release of two electrons. Electrooxidation was performed in Controlled Potential Conditions using a potential necessary to remove one or two electrons. Optical Absorption and Fluorescence Emission Spectra were obtained after the electrooxidation to monitor the electrochemical oxidation products stabilization in different media. After allowing the products stabilization Solid Phase Extraction tecnique was used to remove the electrolytical salt, and, two different fractions were obtained, an aqueous one and a methanolic one upon the electrooxidation in acetonitrile. These fractions were studied by Mass Spectrometry combined with High Performance Liquid Chromatography. (LC-MS). Solid Phase Extraction was not used for the products obtained in acid aqueous medium eletrolysis, and they were directly analyzed by LCMS. The products obtained from Dipiridamol eletrooxidations were partially characterized. Every electrooxidation formed isomers with m/z de 472 [M+H]+, 269 [M+H]+, 519 [M+H]+ and 505 [M+H]+. The complete structural elucidation of these products was not possible due to their instability and the low concentration obtained in the purification, which was insufficient for futher detailed studies such as nuclear magnetic resonance analysis.

O presente estudo teve como propósito o desenvolvimento de um método para a determinação e a validação de uma metodologia para a identificação e quantificação de Neonicotinóides em águas superficiais coletadas na região de Bauru, no estado de São Paulo. As técnicas analíticas estudadas para o desenvolvimento deste método foram a cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrometria de massas em tandem (HPLC - MS/MS), a cromatografia a gás acoplada a espectrometria de massas (GC/MS) e a cromatografia a gás acoplada ao detector de captura de elétrons (GC/ECD). A classe de pesticidas Neonicotinóides foi escolhida para este trabalho por estar relacionada com um súbito desaparecimento de abelhas em colônias de todo o mundo. Este fenômeno é conhecido como colapso de desordem das colônias (Colony Collapse Disorder CCD) e o mesmo é caracterizado por uma rápida perda na população de abelhas adultas. Os Neonicotinóides utilizados neste estudo foram os compostos Clotianidina, Imidacloprido e Tiametoxam que foram proibidos na sua utilização como pesticidas na Europa pelo regulamento de execução nº 540/2011. As amostras foram concentradas utilizando as técnicas de extração em fase sólida (SPE) e extração líquido líquido (LLE) e injetadas no HPLC MS/MS, GC/MS e GC/ECD. As técnicas de GC/ECD e GC/MS não foram satisfatórias para a determinação na matriz água, pois, o limite de detecção (10 mg L-1), esta acima do valor máximo permitido na legislação da agência de proteção ambiental americana (0,6 μg L-1). A técnica de HPLC MS/MS utilizando o modo de monitoramento de reações múltiplas (MRM) provou se adequada para este estudo por obter limites de quantificação entre 5,89 a 8,06 μg L-1 e uma linearidade entre 0,9963 e 0,9993 para os três compostos. / The present study aimed to develop a method for the determination and validation of a method for the identification and quantification of Neonicotinoids in surface waters collected in the Bauru region, in the state of São Paulo. The analytical techniques studied for the development of this method were the high performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry (HPLC - MS / MS), gas chromatography with mass spectrometry (GC / MS) and gas chromatography with electron capture detector (GC / ECD). The class of pesticides Neonicotinoids was chosen for this work because it is related to a sudden disappearance of bees in colonies around the world. This phenomenon is known as Colony Collapse Disorder (CCD) and it is characterized by a rapid loss in the population of adult bees. The Neonicotinoids used in this study were the compounds Clothianidin, Imidacloprid and Thiamethoxam which were banned in their use as pesticides in Europe by Implementing Regulation No. 540/2011. The samples were concentrated using solid phase extraction (SPE) and liquid liquid extraction (LLE) techniques and injected into HPLC-MS / MS, GC / MS and GC / ECD. The GC / ECD and GC / MS techniques were not satisfactory for determination in the water matrix because the detection limit (10 mg L-1) is above the maximum allowed by the US Environmental Protection Agency (0.6 μg L-1). The HPLC - MS / MS technique using the multiple reaction monitoring (MRM) proved to be adequate for this study because it obtained quantification limits between 5.89 and 8.06 μg L-1 and a linearity between 0.9963 and 0.9999 for the three compounds.

A composição dos lipídeos de membrana está entre os fatores que podem influenciar a capacidade fecundante do espermatozoide. Sabidamente os lipídeos desempenham papéis indispensáveis na membrana dos espermatozoides, participando dos processos de interação entre gametas e influenciando o comportamento físico-químico dos espermatozoides durante os procedimentos de criopreservação. Estas moléculas apresentam uma ampla gama de propriedades químicas que tornam complexa a sua análise. Atualmente a espectrometria de massas (MS) por ionização e dessorção a laser assistida por matriz (MALDI) representa uma potente ferramenta para a análise de lipídeos. Assim, a proposta deste trabalho buscou verificar a ocorrência de diferença no perfil lipídico de espermatozoides bovinos obtidos por MALDI utilizado técnica de análise direta dos espermatozoides e análise após a extração lipídica pelo método de Bligh e Dyer. Além disso, este trabalho analisou o perfil lipídico de espermatozóides bovinos que receberam ou não suplementação de antioxidantes. Após coleta, lavagem e separação dos espermatozoide, estes foram submetidos à extração lipídica ou destinados íntegros à obtenção do perfil lipídico (método direto). O perfil lipídico do extrato lipídico ou de espermatozoides íntegros foi adquirido por MALDI em modo positivo e com matriz DHB (ácido dihidroxibenzoico). A análise dos dados foi realizado com o software Metaboanalist utilizando ferramentas de análise multivariada (análise de componentes principais - PCA) e de identificação de íons com intensidade diferencial entre grupos de comparação (teste t, volcano plot). Com essas análises foi possível identificar que ocorre diferença no perfil lipídico dos espermatozoides bovinos quando obtidos a partir de análise direta ou extração de lipídeos. Não foram observadas diferentes entre grupos submetidos ou não à suplementação com vitaminas. O método direto é capaz de proporcionar um perfil lipídico representativo e de fácil aquisição. / The membrane lipid composition is amongst the factors that influence the fertilization competence of the spermatozoa. It is also known that lipids play fundamental roles at spermatozoa membranes, participating in many processes, such as spermatozoaoocyte interaction and determining the physical-chemical behavior of spermatozoa membranes during cryopreservation. These molecules show a wide range of chemical properties, making complex its analysis. Currently, mass spectrometry (MS) through matrix-assisted laser desorption ionization (MALDI) represents a powerful tool for lipids analysis. Hence, this proposal aimed to evaluate differences in bovine spermatozoa lipid profile obtained through MALDI using direct sample analysis of spermatozoa or analysis of spermatozoa lipid extract obtained by Bligh-Dyer technique. Moreover, this proposal evaluated lipid profile of spermatozoa from bull that received or not antioxidant supplementation. After collection, washing and separation, the spermatozoa were submitted to lipid extraction or straightforward destined to lipid profile acquisition (direct method). The lipid profiles of spermatozoa lipid extracts or from whole spermatoloza were obtained by MALDI in positive mode with DHB matrix (dihydrozybenzoic acid). Data analysis was performed with Metaboanalyst software using multivariated analysis (Principal component analysis - PCA) and tools for identification of differential ions between comparison groups (t-test, volcano plot). Results show differences in spermatozoa lipid profile obtained by direct method or after lipid extraction. No differences were observed in bovine spermatozoa derived from bulls supplemented or not with vitamins. The direct method can generate a representative and easily obtained lipid profile.

Orientador: Rodrigo Ramos Catharino / Texto em português e inglês / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T16:45:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_DiogoNoinde_M.pdf: 1761420 bytes, checksum: 44f281d866001f2469fed828f8218583 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Com a larga distribuição e o crescimento de mercado da indústria de cosméticos, esta deve sempre seguir processos de produção e controle de qualidade altamente eficazes. Ensaios analíticos dessa natureza são realizados utilizando-se técnicas de cromatografia, podendo ou não ser acopladas a análises por espectrometria de massas. Entretanto, esses procedimentos requerem fases extensas de preparo de amostra, englobando desde processos de extração até mesmo a reações de derivatização. Num cenário industrial, isso se reflete em grande demanda de tempo e, portanto, custos adicionais. Tendo em vista esse escopo, apresentamos uma nova plataforma "ômica" ¿ a Cosmetômica, que propõe o uso de metodologias simplificadas e de grande eficácia em termos de preparo de amostra e facilidade na aquisição de dados. Amostras de diferentes tipos de cosméticos são analisadas através da técnica de espectrometria de massas por imagem (MALDI-MSI), qualitativa e quantitativamente, através da integração de dados tanto analíticos quanto estatísticos. É possível controle total de toda a cadeia produtiva, desde a matéria-prima até o produto acabado, sendo esse último o objeto de estudo do presente trabalho / Abstract: With the large distribution and the increasingly promising market of cosmetic industry, highly-qualified productive and quality control processes are mandatory for companies to follow. Analytical procedures for QC are commonly carried out using instrumental approaches such as chromatography ¿ coupled or not with mass spectrometry. However, these procedures require sample preparation steps, which may comprise extraction and even sample derivatization. In an industrial scenario it may reflect in great demand of time, with elevated costs as the main consequence. Within this scope, we present a new "omic" platform ¿ Cosmetomics, which proposes the use of simple and effective methods in terms of sample preparation and readiness of data acquisition. Samples from different types of daily use cosmetics are analyzed by mass spectrometry imaging (MALDI-MSI), both qualitative and quantitatively, through the integration of analytical and statistical data. It is possible, therefore, full control of the whole productive chain, from the raw material up to the finished product, which was the elected sample class of our study / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas