Orientador: Fernanda da Cruz Landim / Banca: Maria Dalva Cesário / Banca: Maria Denise Lopes / Resumo: O estudo da espermatogênese e, consequentemente, das células-tronco espermatogoniais (SSC), podem acarretar descobertas de novos conhecimentos sobre a biologia dessas e de outros tipos de células-tronco (SC) adultas, bem como, futuramente, proporcionar tratamentos para infertilidade masculina, entendimento sobre a origem e formação de tumores testiculares, conservação de espécies em extinção e melhoramento genético de animais de produção, entre outros temas importantes em medicina reprodutiva. No entanto, os sistemas de cultivos e composição dos meios utilizados para induzir a espermatogênese in vitro, à partir de SSC, não são totalmente conhecidos. Desta forma, o objetivo geral deste experimento foi estudar a diferenciação celular e a indução da espermatogênese in vitro de SCC oriundas da digestão testicular de camundongos Swiss (entre 6-10 dias pós-parto, dpp) cultivadas em diferentes sistemas: o bidimensional (2D) ou convencional e o tridimensional (3D). Para tanto, após a digestão testicular, a suspensão celular foi transferida para placas cobertas por uma fina camada de ágar (sistema 2D). Enquanto, uma camada mais espessa de ágar (SACS - Soft Ágar Culture System) ou metilcelulose (MCS - Methylcellulose Culture System) foram confeccionadas para mimetizar a disposição celular in vivo (sistema 3D). Além disso, também foram avaliados o efeito da adição de gonadotrofinas ao meio de cultivo, em ambos os sistemas. A formação e manutenção de clusteres de espermatogônias foram mais visíveis nas placas contendo gonadotrofinas, independente do sistema de cultivo. Porém, o sistema de cultivo 3D-MCS-gonadotrofinas(+) mostrou-se mais vantajaso em relação ao sistema de cultivo 2D, uma vez que beneficiou a neoformação de estruturas císticas semelhante a luz dos túbulos seminíferos, além de resultar em suspensão... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The study of spermatogenesis and spermatogonial stem cells (SSC) may result in the discovery of new knowledge about the biology of these and other types of adults stem cells (SC). In the future, could be provided treatments for male infertility , understanding the origin and formation of testicular tumors, preservation of endangered species and genetic improvement of livestock and others importants issues in reproductive medicine. However, culture systems and composition of culture media used to induce spermatogenesis in vitro from the SSC are not fully understood. Thus, the goal of this experiment was to study the induction of those cells differentiation and spermatogenesis in vitro from the testicular digestion of Swiss mice 6-10dpp cultivated in different systems: the two-dimensional (2D) and three-dimensional (3D). After testicular digestion, the suspension cell was transferred to plates coated with a thin layer of agar (2D). While a thicker layer of agar (SACS - Soft Agar Culture System) or methylcellulose (MCS - Methylcellulose Culture System) were made to mimic the in vivo cell (3D). We also evaluated the effect of the addition of gonadotropins. The cluster formation and maintenance of spermatogonia was more visible on gonadotropins (+), in both systems. . However, the 3D-MCS(+) was more advantageous compared to 2D culture system because benefited the formation of clusters of spermatogonia and also the newly formed cystic structures similar to lumen of the tubules seminiferous tubules. We could concluded that the 3D-MCS(+) culture demonstrated better spatial organization found in vivo. However, the potential fertility of these... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-08-16T22:53:52Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Arthur do Nascimento Cabral.pdf: 3365751 bytes, checksum: 976e5152fbbcd8fa55f5f64eba574253 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-27T22:30:01Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Arthur do Nascimento Cabral.pdf: 3365751 bytes, checksum: 976e5152fbbcd8fa55f5f64eba574253 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-27T22:30:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Arthur do Nascimento Cabral.pdf: 3365751 bytes, checksum: 976e5152fbbcd8fa55f5f64eba574253 (MD5) Previous issue date: 2017-06-20 / CAPES / O presente estudo objetivou investigar aspectos helmintológicos deMabuya arajara, bem como avaliar a relação do ciclo testicular da espécie com o desenvolvimento do segmento sexual renal(SSR) e a sazonalidade ambiental. Realizamos coletas bimensais(setembro 2009/julho 2010) na Chapada do Araripe, Nordeste do Brasil. Imediatamente após as coletas, todos os lagartos foram pesados, mensurados quanto ao comprimento rostro-cloacal (CRC) e eutanasiados. Parasitologicamente, após análises do trato digestivo deM. arajara, os helmintos foram clareados com lactofenol eidentificados com a utilização de microscópio deluz. Ao todo, 56%dos lagartos examinados foram infectados por quatro espécies de nematodes: Physalopteroidesvenancioi, Physalopterasp., Strongyluris oscarie Parapharyngodon alvarengai, sendo esta última espécie amais expressiva(prevalência de53.5%; intensidade de infecção 3,37 +2,0; índicedediscrepância0,69). Parapharyngodon alvarengai atuou constantemente no intestino de M. arajaraao longo do ano,estando suas maiores taxas de infecção associadas ao mês de julho e com extensão por toda estação seca da região. Além disso, lagartos de maiores CRC e CRC/massa foram mais infectados frente aos demais. Por outro lado, as relações entre abundância parasitária/massa e entre os sexos não foram significativas. Portanto, classificamos M.arajara como um novo hospedeiro para os nematodes descritos. Considerando aspectos reprodutivos, rins e testículos dos espécimes foram submetidos a tratamentos histológicos. Realizamos colorações com Hematoxilina e Eosina, Ácido Periódico Reativo de Schiff(PAS) e Azul de Alcian (AA)para avaliação geral do tecido, detecção de polissacarídeos neutros e ácidos, respectivamente. O pico reprodutivo foi refletido pela máxima espermatogênese durante a estação seca da região. Citologicamente, os túbulos seminíferos foram preenchidos por espermatozoides e células germinativas em diferenciação. O SSR consistiu em um epitélio colunar alto, núcleos basais e conteúdo de secreção eosinófilo ePAS+que preencheu todo o citoplasma das células. A estação chuvosa marcou o estado de inatividade reprodutiva pela não produção de espermatozoides. Em sincronia, o SSR foi formado por um epitélio cúbico e ausência ou pequena quantidade de material de secreção AA+. A reprodução de M. arajara é sazonal e, assim como os dados parasitológicos mostraram, a estação seca da região atuou no ajuste da espermatogênesee da ação suplementar do SSR. Sugerimos, portanto, que uma possível elevação dos níveis de testosterona neste período, responsável pelo desencadeamento da atividade reprodutiva da espécie, contribua para a susceptibilidade à infecção parasitária. / The present study aimed to investigate helminthological aspects of Mabuya arajara, and evaluate the relationship between testicular cycleof the species with the development of renal sexual segment (RSS) and environmental seasonality. Bi-monthly field sampling were conducted (September 2009/ July2010)in Chapada do Araripe, north eastern Brazil. Immediately after collected, all lizards were weighed, snout-vent length (SVL)was measured and euthanized. For parasitology, after analysis of the digestive tract of M. arajara, helminthes were cleared with lacto phenol and identified using light microscopy. As result,56%ofexamined lizards were infected by four species of nematodes: Physalopteroides venancioi, Physaloptera sp., Strongyluris oscariand Parapharyngodon alvarengai, with this last species the most expressive(prevalenceof53.5%; mean infection intensityof3.37 +2.0; discrepancyindexof0.69). Parapharyngodonalvarengaiwas present in the intestine of M. arajara throughout the year, being its highest rate of infection related to the month of July and extending during the dry season of the region. In addition, lizards of larger SVLand SVL/mass were more infected compared to the others. However, the relationships between parasite abundance/mass and between sexes were not significant. Therefore, we classified M. arajara as a new host for the nematodes here identified. Concerning reproductive aspects, kidneys and testicles were submitted to conventional histological processes. We performed colorations with hematoxylin and eosin, Periodic Reactive Acid of Schiff(PAS) and Alcian blue for general tissue evaluation, neutral and acid polysaccharides detection, respectively. Thereproductivepeak was reflected by the maximum spermatogenesis during the dry season. Cytologically, the seminiferous tubules were completed by spermatozoids and germ cells in differentiation. The renal sexual segment(RSS)consisted of a high columnar epithelium, with nuclei located basally and secretion of eosinophilic granules filling the cytoplasm of epithelial cells, it also showed a strong positive reaction PAS+.The rainy season marked the state of reproductive inactivity by the non-production of spermatozoids. In synchrony, the SSR was formed by cubic epithelium and the absence or low quantity of secretion content of AA+. The reproduction of M. arajara is a seasonal and, as indicated by the parasitological data, the dry season seems to influence the spermatogenesis and supplementary action of RSS. We suggest, therefore, that a possible elevation of testosterone levels in this period, responsible for triggering of the reproductive activity of the species, contributes to the susceptibility to parasitic infection.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-10-04T19:04:42Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Olávio Campos Júnior.pdf: 1483597 bytes, checksum: 42ca44fcbab056c05db880532806f7ae (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-11-14T19:13:27Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Olávio Campos Júnior.pdf: 1483597 bytes, checksum: 42ca44fcbab056c05db880532806f7ae (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-14T19:13:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Olávio Campos Júnior.pdf: 1483597 bytes, checksum: 42ca44fcbab056c05db880532806f7ae (MD5) Previous issue date: 2013-02-25 / CAPES / Partículas de exaustão do diesel (PED) contribuem substancialmente para a toxicidade crônica e aguda do material particulado inalado. A exposição a poluentes está relacionada com o aumento da ocorrência de distúrbios reprodutivos como redução da espermatogênese. Desta forma, o presente trabalho objetivou caracterizar o efeito da exposição às PED por meio do processo de nebulização sobre a espermatogênese de ratos Wistar adultos através de análises morfológicas e histomorfométricas dos testículos. Vinte ratos Wistar adultos com 105 dias de idade foram divididos em dois grupos (n=10): GT – Grupo teste exposto às partículas da exaustão do diesel; e GC – grupo controle. A exposição foi realizada por meio de dispositivo de nebulização pneumática, durante 90 dias e após a última exposição os animais foram anestesiados, eutanasiados e orquiectomizados. Os testículos foram pesados e fixados com solução Bouin, corados com Hematoxilina-Eosina e analisados por microscopia de luz. Os resultados mostraram que os animais do GT apresentaram redução no peso testicular de 8,8% e no peso corporal 6,2% com manutenção do índice gonadossomático. A proporção volumétrica dos compartimentos tubular e intertubular não foi afetada. Entretanto, o aumento de 4,7% da razão túbulo-epitélio no GT sugere comprometimento da função epitelial do túbulo seminífero. Os comprimentos do túbulo seminífero por testículo e o por grama de testículo diminuíram 54,0% e 50,0% respectivamente, comparados ao GC. As populações celulares por seção transversal do túbulo seminífero no estádio 1 com base no método morfológico apresentaram um aumento de 13,4% no número corrigido de espermátides arredondadas como para as células de Sertoli. A população de células de Sertoli por testículo e por grama de testículo mostrou uma redução significativa de 58,4% e 54,2%, respectivamente. As frequências dos estádios 2, 3, 5 e 6 do ciclo do epitélio seminífero foram diferentes no GT. A produção espermática diária PED por grama de testículo aumentou 56,8% enquanto a PED por testículo foi de 60,7% menor nos animais expostos cronicamente às partículas da exaustão do diesel. Frente a esses resultados constata-se que a exposição às DEP na concentração média estabelecida pela Organização Mundial da Saúde está associada com o comprometimento da produção diária de espermatozoides em ratos na idade adulta. Além do mais, os dados biométricos, morfológicos e estereológicos indicam que as DEP podem estar envolvidas em mecanismos que ativam mudanças na normalidade estrutural e funcional testícular de ratos expostos. / Diesel exhaust particles (DEP) contribute substantially to chronic and acute toxicity of inhaled particulate matter. Studies have investigated the possibility that exposure to pollutants may increase reproductive disorders such as spermatogenesis reduction. The present study aimed to characterize the DEP exposure effect on seminiferous tubule and spermatogenesis of adult rats through the nebulization process by morphological and histomorphometric testis analyses. Twenty adult Wistar rats 105 days of age were randomly divided into two groups (n = 10): GT – Tested group exposed to DEP and CG – non-exposed group. The animal exposure was performed using pneumatic nebulization device for 90 consecutive days. Twenty-four hours after the last treatment animals were anesthetized, euthanized and orchiectomized. The testis were weighed and fixed in Bouin solution and stained with Hematoxylin - Eosin and analyzed by light microscopy. In the GT animals presented decreased testicular weight of 8.8% and testicular weight of 6.2% while the gonadossomatic index did not change. The volume density of tubular and intertubular compartiments were not affected by exposure. However, significant increase of 4.7% in the tubule-epithelium ratio in GT suggests impairment of the compromised seminiferous epithelial function. The seminiferous tubule length per testis and the seminiferous tubule length per gram of testis significantly smaller 54.0% and 50.0% than the GC, respectively. Seminiferous epithelium cells number per seminiferous tubule cross section at based on morphological method showed increase of 3.4% in round spermatids and Sertoli cells. The Sertoli cells population per testis and per gram of testicular tissue showed reduction of 58.4% and 54.2% respectively. Frequency of stages 2, 3, 5 and 6 seminiferous tubules were different in GT group. The daily sperm production per gram of testicular tissue was higher 56.8% while the sperm production per testis was lower 60.7% in animals chronically exposed to diesel exhaust. These results indicate that exposure to DEP at levels in similar mean concentration established by the World Health Organization were associated with impairment of daily sperm production in adulthood rats. Furthermore, the biometric, morphological and stereological data indicate that DEP may be involved in the mechanisms that activate changes in normal mechanisms of testis structure and function of exposed rats testis.

Orientador: Mary Massumi Itoyama / Banca: Doralice Maria Cella / Banca: Maria Elisabete Jorge Amaral / Resumo: Os Heteroptera constituem um dos mais importantes grupos de insetos do ponto de vista econômico, pois a maioria, durante os estádios de ninfa e adulto, alimenta-se de plantações ou grãos armazenados para o consumo humano. As análises citogenéticas permitiram verificar que Antiteuchus tripterus possui um lobo composto (5/6), o qual pode estar envolvido na nutrição do lobo harlequin, evidência que pressões evolutivas ocorreram para a manutenção deste lobo, nesta espécie, o que demonstra a importância, desse lobo, para algumas espécies. Permitiram, ainda, verificar que todas as espécies apresentam sistema cromossômico do sexo XY e complemento cromossômico de 2n= 14 cromossomos. Além disso, as análises do comportamento nucleolar evidenciaram que há atividade metabólica diferenciada para os lobos 4, 5 e 6 em Antiteuchus tripterus e também em espécies não possuidoras do lobo harlequin, como Platycarenus umbractulatus, que apresentou marcações diferenciadas no lobo 5, a qual pode indicar a formação de espermatozóides não fecundantes. A espécie Euschistus heros não apresenta lobo harlequin, porém as análises da espermatogênese demonstraram que há diferenças significativas no tamanho das células dos lobos 4 e 6, os quais podem estar relacionados com a formação de espermátides não-fecundantes. Foi verificada a presença de corpos nucleolares na forma de "mushroom" nas espécies do gênero Oebalus, característica, ainda não descrita na literatura, além disso, foi observada, em P. umbractulatus, a presença de dois corpos escuros e dois mais claros, que podem demonstrar a participação dos cromossomos sexuais na formação e organização do nucléolo desta espécie. Assim, verifica-se a importância dessas análises para compreensão do cenário evolutivo da família Pentatomidae. / Abstract: The Heteroptera are the most important group of insect related with economic importance, because the most of them, during ninfal stage and adult stage, feed in plantations or stored grains to the human consumption. The cytogenetical analyses permitted verify that Antiteuchus tripterus has a compound lobe (5/6), which should be involved in the nutrition of harlequin lobe, evidences that evolutionary pressures occurred for the maintenance of this lobe in this species, which shows the importance of this lobe for some species. The analyses also permitted to evidence that all species analyzed have XY sexual chromossomic systems and a chromossomic complement 2n= 14 chromosomes. Furthermore, the analyses of the nucleolar behavior showed there are different metabolic activities in the lobes 4, 5 and 6 in Antiteuchus tripterus and in the species without the harlequin lobe, as Platycarenus umbractulatus, also had different marcation in lobe 5, which can indicate the formation of non-fertilizing sperm. The species Euschistus heros do not have harlequin lobe, but the analyses of spermatogenesis showed that there are significant differences in cell size in the lobes 4 and 6, which may be related to the formation of non-fertilizing spermatids. It was verified the presence of nucleolar bodies with morphology like "mushroom" in the species of the genus Oebalus, feature not yet observed. Moreover was observed in P. umbractulatus, the presence of two dark bodies and two lighter, which may demonstrate the participation of sex chromosomes in the formation and organization of the nucleolus in these species. Thus, this present work shows the importance of such analyses for understanding the evolutionary scenario of the family Pentatomidae. / Mestre

Orientador: Rosicleire Veríssimo Silveira / Banca: Cristiele da Silva Ribeiro / Banca: George Shigueti Yasui / Resumo: Em teleósteos, a utilização de transplante de espermatogônias tronco está criando um cenário novo e promissor na área de biotecnologia e produção em aquicultura, possibilitando a preservação de espécies em perigo de extinção. Esta técnica consiste na remoção de células tronco espermatogoniais do testículo de um animal doador e a sua transferência para o testículo de um receptor. Para garantir a eficiência desta técnica o receptor deve ter sua espermatogênese endógena suprimida, pois a eficiência do transplante depende do sucesso na competição entre células germinativas transplantadas e células germinativas endógenas nos túbulos seminíferos. Este estudo teve por objetivo promover experimentalmente a depleção da espermatogênese endógena de Devario aequipinnatus, por meio da droga quimioterápica Myleran (Busulfan) e sua associação com a temperatura de 30°C. Foram definidas quatro fases de maturação gonadal para o ciclo testicular de D. aequipinnatus: Maturação Inicial, Maturação Intermediária, Maturação Final e Regressão, essas definições tiveram como base as alterações do epitélio germinativo testicular associado aos estágios das células germinativas presentes. Para depleção foram testadas duas dosagens, no T15/18 foram aplicadas duas injeções, via intracelomática, com intervalo de 10 dias entre as mesmas, sendo a primeira dose de 15 mg kg -1 Myleran (Busulfan) e a segunda com 18 mg kg -1 de Myleran. No T40 foi aplicado somente uma injeção contendo 40 mg kg -1 de Myleran (Busulfan). Como grupo controle foi utilizado uma unidade experimental sem a inclusão de qualquer tipo de droga, em que os animais permaneceram sob as mesmas condições de temperatura, alimentação e fotoperíodo oferecidas para os animais utilizados dos tratamentos. O T15/18 e o T40 apresentaram uma redução significativa na quantidade de Espermatócitos e consequentemente um aumento na quantidade de lúmen... / Abstract: In teleosts, the use of spermatogonial stem transplant is creating a new and promising scenario in the area of biotechnology and aquaculture production, enabling the preservation of species in danger of extinction. This technique involves the removal of spermatogonial stem cells of the testis of a donor animal and its transfer to the testicle of a receiver. To ensure the efficiency of this technique the receiver shall have its endogenous spermatogenesis deleted because the transplant efficiency depends on the success in the competition between transplanted germ cells and endogenous germ cells in the seminiferous tubules. This study aimed to experimentally promote depletion of endogenous spermatogenesis Devario aequipinnatus through the chemotherapy drug Myleran (Busulfan) and its association with the temperature 30 ° C. Maturation of four phases have been defined for testicular cycle D. aequipinnatus: Maturation Home, Intermediate maturation, maturation and Final Regression, these definitions were based on the changes of the testicular germinal epithelium associated with the stages of germ cells present. For depletion two doses were tested in the T15 / 18 were applied two injections via intracelomic with an interval of 10 days between them, the first dose of 15 mg kg-1 Myleran (Busulfan) and second with 18 mg kg- 1 Myleran. T40 was applied only in an injection containing 40 mg kg-1 Myleran (Busulfan). The control group was used an experimental unit without the inclusion of any type of drug, where the animals were kept under the same conditions of temperature, photoperiod and food offered to the animals used treatments. The T15 / 18 and T40 showed a significant reduction in the number of spermatocytes and consequently an increase in the amount tubular lumen in the testes of the animals examined. Three days after application of Busulfan for both single dose and double dose of Busulfan for an increase in pyknosis in spermatogonia ... / Mestre

Orientador: Classius de Oliveira / Banca: Sebastião Roberto Taboga / Banca: John Campbell McNamara / Resumo: O presente estudo analisa as características estruturais e ultra-estruturais dos testículos, bem como as características do sistema pigmentar extracutâneo e sua relação com as outras estruturas, nos anuros Physalaemus nattereri (Steindachner, 1963) e P. fuscomaculatus (Steindachner, 1964). Dez machos adultos de cada espécie foram coletados em Nova Itapirema, distrito de Nova Aliança - SP e processados para análises em microscopia de luz e microscopia eletrônica de transmissão. Os testículos apresentaram numerosas células contendo pigmentos, aleatoriamente distribuídas na túnica albugínea e interstício, dando ao órgão uma coloração marrom escura. Essas células são estruturalmente semelhantes a melanócitos, e se caracterizam pela enorme quantidade de pigmentos melânicos no interior de corpúsculos elétron-densos contendo melanina, os melanossomos. Durante a espermiogênese ocorre condensação da cromatina e alongamento nuclear, além da perda de material citoplasmático. As células de Sertoli apresentam em seu citoplasma grande quantidade de microtúbulos e grânulos de glicogênio. O espermatozóide é fusiforme, contém uma capa acrossômica e perfuratorium na região anterior do núcleo e a peça intermediária contém uma bainha citoplasmática com mitocôndrias. O flagelo apresenta o axonema, fibra justaxonemal e membrana ondulante, e bastão axial ausente. Esta organização é semelhante à encontrada em outros anfíbios como P. biligonigerus, P. gracilis e P. fuscomaculatus. / Abstract: This paper was analyses the structural and ultra-structural characteristics of the testis, and the extracutaneous pigmentary system characteristics and the relationship with other structures, in the anurans Physalaemus nattereri (Steindachner, 1963) and P. fuscomaculatus (Steindachner, 1964). Ten males adults of each species were collected in Nova Itapirema, district of Nova Aliança - SP and processed for analyses in light and transmission electron microscopy. The testis presented numerous pigment-containing cells, randomly distributed in the albuginea tunic and interstitium, giving the organ a dark brown coloration. The intense pigmentation observed in the testis is due to great amount of cellular types containing granules of brown coloration and long citoplasmic processes, characterized by the synthesis and accumulation of great amount of melanin pigment inside of melanosomes. Spermiogenesis in the anuran P. nattereri involves chromatin condensation and nuclear elongation, with visible cytoplasmic eliminations. In this stage it can also be seen inside Sertoli cell citoplasm, surrounding each spermatid, a great amount of microtubules and glycogen. The anterior region of the nucleous presented an acrossome and perfuratorium. A mitochondrial sleeve is found around the proximal portion of the tail. The tail presents an axonema with a 9+2 axoneme pattern, a justaxonemal fiber, undulating membrane and absence of axial rod. This organization is similar to that found in other amphibians such as P. biligonigerus, P. gracilis and P. fuscomaculatus. / Mestre

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-03-27T12:24:44Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2307694 bytes, checksum: dba8ee71e2af5e8cbb7f19d83f9c4044 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-27T12:24:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2307694 bytes, checksum: dba8ee71e2af5e8cbb7f19d83f9c4044 (MD5) Previous issue date: 2017-02-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O cádmio (Cd) é um metal pesado tóxico aos organismos vivos. Alterações das funções reprodutivas após a exposição ao Cd tem sido foco de constantes pesquisas. Deste modo, tem-se buscado estratégias seguras e eficazes contra toxicidade do Cd, dentre estas, a avaliação de extratos vegetais. A polpa do fruto de Euterpe edulis, conhecida popularmente por açaí da Mata Atlântica ou por juçara, apresenta propriedades antioxidante e anti-inflamatória, in vitro e in vivo, devido principalmente ao seu alto conteúdo de antocianinas. Contudo, pouco se sabe da ação deste extrato sobre parâmetros reprodutivos masculinos. Neste trabalho foram avaliados os efeitos de diferentes doses do extrato hidroalcoólico da polpa de juçara (EJ) sobre túbulo seminífero, intertúbulo, atividade de enzimas antioxidantes e produtos de peroxidação lipídica de ratos Wistar sadios e submetidos ao cádmio. O experimento inicial testou os efeitos de três doses do extrato de juçara, 300 mg/kg, 600 mg/kg e 900 mg/kg sobre os parâmetros testiculares dos ratos sadios. No segundo experimento, o extrato de juçara foi dado após 48 horas após a exposição à dose única de 1,2 mg/kg de cloreto de cádmio. Os parâmetros biométricos, tubulares e intertubulares dos grupos que receberam somente o EJ não apresentaram variação significativa em relação ao grupo controle. Também não houve diferença significativa para a atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e glutationa S-transferase (GST), e para o marcador de peroxidação lipídica, malondialdeído. Os animais expostos ao Cd apresentaram danos morfológicos como necrose e calcificação tubular, aumento do percentual de fibras colágenas no intertúbulo, redução da testosterona sérica, aumento da peroxidação lipídica e aumento da atividade das enzimas antioxidantes SOD e CAT. O extrato hidroalcoólico da polpa de juçara, por sua vez, não promoveu recuperação testicular nos grupos expostos ao Cd. Além disto, o uso do EJ após a exposição ao Cd agravou os danos testiculares como observado pela redução do peso testicular e seu parênquima e pelo aumento da atividade de enzimas antioxidantes SOD e CAT. / Cadmium (Cd) is a toxic heavy metal to living organisms. Changes in reproductive functions after Cd exposure have been the focus of constant research. In that sense, safe and effective strategies against Cd toxicity have been sought, for instance, by evaluating plant extracts. Euterpe edulis, which is commonly known as ‘Atlantic Rainforest açaí’ or ‘juçara palm’, yields fruits whose pulp extract has antioxidant and anti-inflammatory properties both in vitro and in vivo, due mainly to its high content of anthocyanins. However, little is still known about the effect of this extract on male reproductive parameters. In this work, the effects of different doses of the hydroalcoholic extract of juçara palm pulp (JE) on the seminiferous tubule, intertubular space, activity of antioxidant enzymes, and lipid peroxidation products were evaluated in healthy and Cd-exposed Wistar rats. The initial experiment tested the effects of three JE doses, namely 300, 600, and 900 mg/kg, on the testicular parameters of healthy rats. In the second experiment, rats were fed on JE 48 hours after exposure to a single dose of 1.2 mg/kg body weight of cadmium chloride. The biometric, tubular, and intertubular parameters of groups that were only fed on JE showed no significant variation in relation to the control group. Neither was there any significant difference in the activity of enzymes superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), and glutathione S-transferase (GST), or in contents of the lipid peroxidation marker, malondialdehyde. The Cd-exposed animals showed morphological damage such as tubular necrosis and calcification, increased percentage of collagen fibers in the intertubular space, decreased serum testosterone, and increased lipid peroxidation and SOD and CAT activities. Hydroalcoholic extract of juçara palm pulp, on the other hand, promoted no testicular recovery in Cd-exposed groups. In addition, the use of JE after Cd exposure aggravated testicular damage, as observed by the reduction in testicular weight and in its parenchyma as well as by the increased SOD and CAT activities.

SOUZA, A. C. B. L. Estudos sobre as interações das proteínas seminais com as células espermáticas e componentes dos diluidores usados na criopreservação do sêmen e sobre marcadores moleculares de parâmetros do sêmen em animais de produção. 2014. 142 f. Tese (Doutorado em Zootecnia) - Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2015-01-14T18:46:12Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_acblsouza.pdf: 2376080 bytes, checksum: 9fc05cc53b72acae6b4e63d3ee08281a (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-11-25T12:26:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_acblsouza.pdf: 2376080 bytes, checksum: 9fc05cc53b72acae6b4e63d3ee08281a (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-25T12:26:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_acblsouza.pdf: 2376080 bytes, checksum: 9fc05cc53b72acae6b4e63d3ee08281a (MD5) Previous issue date: 2014 / This thesis presents two chapters. In the first chapter, its objective was to investigate the potential use of correlative microarray-based transcript pairs as candidate markers for male fertility using dysplasia of the fibrous sheath (DFS) as an affected model. It is widely recognized that microarray technology may be limited by cost and that the quality of the transcript remains relatively unknown. To address these issues, we analyzed the stable transcript pairs by qPCR with a systematic primer design process. On this experimental study, we used men with proven fertility and men with a diagnosis of DFS. Our approach was based on primer sequences for six genes of interest were designed using Oligo7 and Primer3Plus. Primer specificity was initially assessed in silico by searching the ENSEMBL, University of California Santa Cruz, and National Center for Biotechnology Information databases for nontarget complementary sequences throughout the genome. The ability of transcript pairs to classify samples from males of proven fertility away from DFS was assessed. Our results showed that in conjunction with identifying four new stable transcript pairs, comparison of the DFS qPCR C(t) correlation coefficients revealed the disruption of four stable fertile sample transcript pairs. This suite of transcript pairs resolves DFS. In conclusion, the results show that with effectively designed primers, qPCR may provide an affordable molecular assay to assess male fertility status. Second chapter includes two studies regarding evaluations of ram feeded with supplemented diet with cashew nut. On the frist study, our goal was detect transcripts for Heat Shock Protein (HSP70), Clusterin (CLU), Ovis aries T-complex protein 1 alfa subunit-like protein (TCP1) e Ovis aries chaperonin containing TCP1, subunit 8 (theta) (CCT8) on ram sperm by. For primer designing we used published ESTs from NCBI and manually annotated by us using Primer3Plus and OligoAnalizer. PRM2 was used as internal qPCR control. Semen samples from mature Morada Nova ram were collected by eletroejaculator, washed in PBS and prepared for further RNA extraction. Selected samples followed quality recommendatios from Colégio Brasileiro de Reprodução Animal regarding motility, vigor and concentration. Our results showed presence of mRNA HSP70 on ram sperm and they can possible be envolved in early embryo development, oocyte activation and post fertilization events. Further analyses will be necessary to confirm presence of TCP1 and CCT8 on ram sperm. Our findings indicate new perpectives about the effects of these chaperones during embryo development mesuring if its expression reflects male fertility on the early embryo development. On the second study the the main goal is to evaluate the effects of a lipid-enriched diet containing cashew nut brain on the expression of genes related to lipid metabolism in the longissimus dorsi muscle of Morada Nova rams. Twenty sexually mature and reproductively sound rams were divided in two groups based on ram live weight, and each ram was kept on individual pens. During three months, group 1 (G1) rams were fed with a lipid-rich diet, containing cashew nut bran (CNB), while group 2 (G2) was fed with a meal based on corn and soy. Both diets were isocaloric and isoproteic, and had a mineral mix added-in. The rams also were offered Tifton grass hay and had free access to water. The amount of diet offered (ration plus hay) was adjusted everyday to a maximum waste of 10%. Seven genes coding for proteins directly or indirectly involved in lipid metabolism were initially selected as targets, incluiding GH, ACACA, CAST, CAPN3, LPL, SCD, and FASN. Also, five genes were selected as reference genes, ACTB, GAPDH, RPL4, RPS18 and TBP. From the seven genes originally selected as targets, GH, ACACA and CAST were removed, leaving the final list with four targets. The first two genes were removed due to alternative pairing of the primers (low specificity), while CAST showed low amplification efficiency during PCR reaction. From the final target list, the expression of only two genes was affected by diet, SCD (p<0.01) and FASN (p<0.05), while LPL (p=0,1022) and CAPN3 (p=0,0939) were not different at the p<0.05 level. Both SCD and FASN genes were down-regulated in G1 (lipid-rich diet containing CNB) compared to G2. These genes are involved in lipogenic pathways, related to tissue lipid deposition; therefore, these results were expected. This is the first time that a fat-rich diet based on CNB was shown to affect gene expression of proteins involved in fat deposition in carcass muscles of rams. Longissimus dorsi is one of the finest meat cuts. Considering that human diets rich in poli-unsaturated fatty acids (PUFA) can decrease the risk of heart and other chronic diseases, a change in the fatty acid profile of this muscle could contribute to a healthier diet, aggregating value to the end-product of the lamb meat market. The effects of CNB-based diet on the gene expression of SCD and FASN support the notion that such diet, as previously shown for other sources of lipid in ruminants, can potentially change the fatty acid composition of L. dorsi, but this hypothesis needs to be experimentally verified by profiling fatty acids in animals fed CNB versus carbohydrate-based diets. CNB use as an ingredient in animal feeding is environmentally-friendly, since it contributes to by-product recycling from the agroindustrial plants in Northeast Brazil. Also, considering that CNB-based diet changes lipogenic gene expression without affecting weight gain or reproductive status of the rams, as shown in another work from our team, makes CNB a very important alternative food in ram production systems in tropical regions. / A tese é composta por dois capítulos. O primeiro capítulo inclui o trabalho cujo objetivo foi investigar o potencial uso de pares de transcritos correlativos baseados em microarranjos como marcadores de fertilidade masculina usando a displasia da bainha fibrosa (DFS) como modelo afetado. Atualmente é bastante reconhecido que a tecnologia de microarranjos pode ser limitada pelos custos e que a qualidade dos transcritos permanece relativamente desconhecida. Para responder essas questões, nós analizamos pares de transcritos estáveis por qPCR com um processo sistemático de desenho de primers sistemático. Nesse estudo experimental, nós utilizamos amostras de homens com fertilidade comprovada e de homens com diagnótico de DFS. Nossa abordagem foi baseada nas sequências de primers dos seis genes de interesse, os quais foram desenhados utilizando os programas Oligo7 e Primer3Plus. A especificidade do primer foi inicialmente analisada in silico através de pesquisas nos bancos de dados ENSEMBL, University of California Santa Cruz (UCSC), e National Center for Biotechnology Information (NCBI) para uso de sequências específicas aos genes alvos. A habilidade dos pares de transcritos em classificar as amostras de homens de fertilidade comprovada das amostras de DFS foi avaliada. Nossos resultados mostraram que em conjunção com a identificação de quatro novos pares estáveis, a comparação dos coeficientes de correlação dos valores de C(t) dos DSF revelou a interrupção de quatro pares estáveis identificados nas amostras de homens normais. Esta seleção de pares estáveis resolve a questão sobre a DSF. Em conclusão, os resultados mostram efetivamente que o desenho de primers e qPCR podem fornecer um ensaio molecular de baixo custo para avaliar a fertilidade masculina. O segundo capítulo divide-se em dois estudos e avalia em carneiros os efeitos de uma dieta suplementada com farelo de castanha de caju. No estudo 1, nosso objetivo foi detectar a presença de transcritos para Heat Shock Protein (HSP70), clusterina (CLU), proteína semelhante à subunidade alfa do complexo T (TCP1) e proteína do complexo T subunidade 8 (CCT8) no espermatozóide de ovinos, seguindo a mesma metodologia para qPCR utilizada no capitulo 1. As sequências de primers foram desenhadas utilizando os programas Primer3Plus e Oligo Analyzer. Gene para protamina 2 (PRM2) foi usado como controle interno de reação. O sêmen foi coletado de machos púberes Morada Nova utlizando eletroejaculador. As amostras selecionadas para extração de RNA espermático seguiram as recomendações do Colégio Brasileiro de Reprodução Animal quanto aos parâmetros de motilidade, vigor e concentração. Nossos resultados mostraram a presença de mRNA para a HSP70 nos espermatozóides de ovinos. Maiores estudos são necessários a fim de confirmar ou refutar a presença das chaperonas TCP1 e CCT8 no espermatozóide ovino. A presença do transcrito da HSP70 no espermatozóide de ovinos abre perspectivas para estudos futuros sobre os efeitos do mRNA HSP70 no desenvolvimento embrionário, de modo a avaliar se essa expressão ocorre de modo espontâneo, programado e seqüencial, e se esses mecanismos se refletem na fertilidade e no desenvolvimento embrionário. O segundo estudo tem como principal objetivo avaliar os efeitos de uma dieta contendo farelo de castanha de caju (FCC) na expressão de genes relacionados ao metabolismo dos lipídios no músculo Longissimus dorsi de carneiros Morada Nova. Vinte carneiros maduros sexualmente foram divididos em dois grupos baseando-se no peso vivo. Os animais foram mantidos em baias individuais. Durante três meses, o grupo castanha (GCA) foi alimentado com ração contendo FCC, enquanto o grupo controle (GCO) recebeu ração à base de milho e soja. As duas dietas eram isocalóricas e isoprotéicas, adicionadas de suplemento mineral. Os carneiros também receberam feno de Tifton e água à vontade. A quantidade de alimento ofertado (ração e feno) foi ajustada diariamente para sobra de 10%. Sete genes codificantes de proteínas envolvidas direta ou indiretamente foram selecionados como alvos, incluindo: GH, ACACA, CAST, CAPN3, LPL, SCD e FASN. Para normalização, foram selecionados cinco genes candidatos: ACTB, GAPDH, RPL4, RPS18 e TBP. Dentre os sete genes alvos selecionados anteriormente, os alvos GH, ACACA e CAST foram removidos. Os dois primeiros foram removidos devido amplificação de alinhamento múltiplo (baixa especificidade do primers), enquanto CAST apresentou baixa eficiência de amplificação. Da lista de gene alvo final, a expressão de somente dois genes foi afetada pela dieta, SCD (p<0.01) e FASN (p<0.05), enquanto LPL (p=0,1022) e CAPN3 (p=0,0939) não apresentaram diferença significativa (p<0.05). Os genes SCD e FASN foram reprimidos no GCA comparada ao GCO. Este é o primeiro relato de que uma ração contendo FCC afetou a expressão gênica de proteínas envolvidas na deposição de lipídios no músculo em ovinos. Considerando que uma dieta contendo FCC altera a expressão de genes lipogênicos sem afetar o ganho de peso nem a eficiência reprodutiva de ovinos, faz da castanha de caju uma importante alternativa para o sistema de produção de ovinos criados em regiões tropicais.

Orientador: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira / Banca: Grasiela de Campos Dias Severi Aguiar / Banca: Patrícia Simone Leite Vilamaior / Resumo: Os triatomíneos, insetos hematófagos estritos em todas as fases da vida, conhecidos popularmente como "barbeiros" ou "chupanças", pertencem à subfamília Triatominae (Heteroptera - Reduviidae) e são importantes vetores da doença de Chagas. Os interesses nos estudos desses insetos não se limitam apenas a questão médico-sanitária, pois em termos citogenéticos, também são de grande importância. Além disso, a sistemática e relações filogenéticas dos triatomíneos têm sido pautadas em análises morfológicas formando um quadro de conflitos taxonômicos. Assim, por meio da descrição cariotípica de T. baratai sugerimos que dados citogenéticos sejam incorporados aos sistemas de classificação dos triatomíneos. Também foi analisada a diversidade de bandas produzidas com o uso de enzimas de restrição AluI (AG ↓ CT) e Hae III (GG ↓ CC) nas espécies de T. tibiamaculata, T. protacta e T. platensis, alojadas em três diferentes complexos. Os dados obtidos mostraram padrões semelhantes em cromossomos autossômicos e sexuais e comportamentos ora distintos ora semelhantes em núcleos interfásicos. O estudo da proteína nucleolar fibrilarina, por meio de técnicas de imunofluorescência, foi realizada para verificar sua presença no corpo cromatoide, estrutura citoplasmática próximo do envoltório nuclear, de T. platensis e T. rubrovaria. Os dados obtidos no presente estudos aliados com outras técnicas auxiliarão na compreensão da biologia desses vetores da doença de Chagas / Abstract: The triatomine hematophagous insects strict at all stages of life, popularly known as "kissing bugs" or "chupanças" belong to the subfamily Triatominae (Heteroptera - Reduviidae) and are important vectors of Chagas disease. The interests in the studies of these insects are not limited to medical and health issue, because in terms cytogenetic, are also of great importance. Moreover, the systematic and phylogenetic relationships of the insects have been guided by morphological analyzes forming a taxonomic framework of conflict. Thus, by describing karyotype of T. baratai suggest that cytogenetic data are incorporated into the rating systems of the insects. Also analyzed the diversity of bands produced with the use of restriction enzymes AluI (AG ↓ CT) and Hae III (GG ↓ CC) on the species T. tibiamaculata, T. protacta and T. platensis, housed in three different complexes. The information obtained showed similar patterns in autosomal chromosomes and sexual behavior and sometimes different now similar in interphase nuclei. The study of nucleolar protein fibrillarin, by means of immunofluorescence was performed to verify its presence in chromatoid body, cytoplasmic structure near the nuclear envelope, T. platensis and T. rubrovaria. The information obtained in this study combined with other techniques will help understand the biology of these vectors of Chagas disease / Mestre

Orientador: Classius de Oliveira / Banca: Rosicleire Verissimo Silveira / Banca: Sebastião Roberto Taboga / Resumo: O declínio das populações de anfíbios é um problema global com causas complexas. Atualmente há uma grande preocupação sobre os efeitos provocados por compostos que atuam como desreguladores endócrinos nos sistemas naturais. Os estrogênios são os principais contaminantes encontrados em corpos d'água e são responsáveis por causar uma série de distúrbios, principalmente ligados aos aspectos reprodutivos. O hormônio feminino 17β-estradiol é um potente contaminante que prevalece em águas superficiais, provenientes principalmente de efluentes municipais e industriais. É o hormônio responsável pela formação das características femininas, comportamento sexual e ovulação. Este estudo mostra o efeito do 17β-estradiol na gametogênese dos órgãos de Bidder e testículos e na resposta hepática de machos de Rhinella schneideri. Foram utilizados 40 machos adultos e analisada a gametogênese dos testículos e órgão de Bidder, além da avaliação da pigmentação hepática. Os animais foram tratados com 17β-estradiol durante 3, 7, (efeito de curto prazo) 15 e 30 (efeito de exposição prolongada) dias, utilizando injeções subcutâneas de 2mg/kg em dias alternados. Análises histoquímicas também foram realizadas para os três órgãos. Os resultados mostraram que o 17β-estradiol promoveu alterações tanto na espermatogênese, quanto na ovogênese bidderiana. Os tratamentos de curto prazo acarretaram em uma diminuição na quantidade de espermatozoides liberados no lume e um desequilíbrio na ocorrência de células iniciais da espermatogênese. Os tratamentos de exposição prolongada acarretaram principalmente na diminuição dos lóculos seminíferos e aumento na região intersticial, além da alteração de alguns tipos celulares como espermatogônias, espermatócitos e espermátides alongadas. Para o órgão de Bidder... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Amphibian's populations decline is a global problem with complex causes. Currently, it is known that this decline is related to endocrine disruptors compounds in natural systems. Estrogens are the main compounds found in water bodies and are responsible for causing a number of disturbances, mainly linked to reproductive aspects. The female hormone 17β-estradiol is a potent organic contaminant that prevails in surface waters, mainly disposed by municipal and industrial effluents. This hormone induces the formation of feminine characteristics, sexual behavior and ovulation. In this study, we describe the effect of 17β-estradiol in the gametogenesis of the Bidder's organ and testes, beyond the liver response in males of Rhinella schneideri. We collected 40 adult males and analyzed the testis and the Bidder's organ gametogenesis and the liver pigmentation. The animals were treated with 17β-estradiol for 3, 7, (short effect) 15 and 30 (extended effect) days, by subcutaneous injection of 2mg/kg on alternate days. Histochemical analyzes were also performed for the three organs. The results showed that 17β-estradiol promoted changes in spermatogenesis and in bidderian oogenesis. Short-treatments resulted in a decrease in the quantity of spermatozoa in the lume and an imbalance in the occurrence of initial cells of spermatogenesis. Long-treatments resulted in a decreased of the seminiferous locules and increased of the interstitial area, besides the alteration of some cell types, such as spermatogonias, spermatocytes and elongated spermatids. In the Bidder's organ, the short-treatment resulted in increased of the young follicles and degeneration oocytes, establishing a possible renewal of female cells. The treatment of 15 days decreased the amount of degenerating oocytes and increased late follicles. After 30 days of treatment were... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre