Orientador: Shirlei Maria Recco Pimentel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T04:12:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Introini_GiseleOrlandi_M.pdf: 3314388 bytes, checksum: bf79294ca706599f733d1e5bf15dca35 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Numerosos estudos têm demonstrado a relevância da morfologia dos espermatozóides para determinação da filogenia no filo Mollusca. Adicionalmente, o estudo da morfologia e do número de cromossomos tem correspondido a uma eficiente ferramenta para a identificação de espécies, de híbridos e, menos usualmente, de populações. O presente trabalho analisou a ultra-estrutura dos espermatozóides de duas espécies do gênero Brachidontes e uma espécie do gênero Isognomon. As espécies B. darwinianus e I. bicolor foram também estudadas citogeneticamente. Moluscos pertencentes ao gênero Brachidontes vivem na zona entre marés de enseadas e baías e se fixam pelo bisso ao substrato rochoso, formando aglomerados de centenas de indivíduos. Brachidontes solisianus encontra-se distribuído da Costa Atlântica do México até o Uruguai e B. darwinianus é encontrado do Rio de Janeiro a Patagônia. Na costa do Estado de São Paulo, populações dessas duas espécies que exibem caracteres conquiológicos muito semelhantes, compartilham áreas em comum. A utilização da forma da concha como característica para separar mitilídeos é questionável, pois suas conchas, por possuírem grande plasticidade, podem apresentar variações morfológicas devido às influências ambientais. A espécie I. bico/ar é encontrada no litoral brasileiro com distribuição do Rio Grande do Norte até Santa Catarina. O extremo norte da distribuição da espécie é Bermudas, com ocorrência pelo litoral da Flórida, Golfo do México e Caribe. Acredita-se que I. bico/ar tenha sido sistematicamente, e de longa data, confundido com I. a/atus. A grande similaridade nas características externas da concha de I. a/atus e I. bico/ar, a variabilidade intra-específica na forma de ambas espécies, mais o fato de terem hábitos e habitats semelhantes, podem conduzir a equívocos de identificação. Os espécimes ocorrem desde o supralitoral até sete metros de profundidade no infralitoral. Os espermatozóides de B. darwinianus, B. solisianus e I. bic%r, como aqueles produzidos por muitas espécies de bivalves, apresentam uma morfologia típica de animais marinhos que lançam seus gametas fertilizando seus ovos na água do mar. Os gametas masculinos de B. darwinianus, de B. so/isianus e de /. bico/ar contém: acrossomo conspícuo (cônico e alongado em Brachidontes e arredondado em /sognomon); núcleo esferiforme condensado; um par de centríolos e 4-5 mitocôndrias situadas na peça intermediária e um axonema portador de 9 pares de microtúbulos ao redor de um par central. A estrutura geral do espermatozóide de Brachidontes é bastante semelhante a de outras espécies da mesma sub-família e parece agrupar esse gênero adequadamente na classificação atualmente aceita, ou seja, sub-família Modiolinae. A única característica que permite distinguir o espermatozóide destas duas espécies é o comprimento do acrossomo. A presença de um prolongamento acrossomal em B. solisianus pode significar um aumento da eficiência reprodutiva e deste modo contribuir para a maior distribuição geográfica desta espécie. Em relação a ultraestrutura do espermatozóide de /. bico/ar, estudos sobre a biologia da fertilização desta espécie são necessários para melhor compreender o significado biológico da presença de um filamento axial no espaço subacrossomal e de grânulos de glicogênio na peça intermediária. Considerando o fato de que esta espécie apresenta ampla distribuição geográfica e que tem se tomado uma espécie invasora em muitas regiões, especialmente no Brasil, seria interessante, verificar se estas características morfológicas do espermatozóide são capazes de proporcionar aumento na eficiência reprodutiva. A análise citogenética revelou a presença de 2n = 30 cromossomos para B. darwinianus e 2n = 28 cromossomos para J. bico/ar. Os resultados obtidos foram comparados com cariótipos de outros bivalves. Os números encontrados são comuns dentro da família Mytilidae e super-família Pteriacea, respectivamente, deste modo, estas espécies estão adequadamente classificadas, de acordo com os caracteres cromossômicos estudados / Abstract: Although bivalve species are well known anatomically, the taxonomic relationships among many of the species in this class are controversial. Numerous investigations have demonstrated the usefulness of sperm morphology in evaluating molluscan phylogeny. In this work, we used transmission and scanning electron microscopy to study the structure of mature spermatozoa from three bivalves, Brachidontes darwinianus, Brachidontes solisianus and Isognomon bicolor from the southeastern Brazilian coast, and compared them with those of other bivalves, particularly other members of the sub-class Pteriomorphia. The Giemsa-stained karyotypes of B. darwinianus and I. bicolor were also determined and compared with those of other bivalves. The genus Brachidontes has a wide geographic distribution and is particularly abundant in the intertidal zone of many rocky shores along the Brazilian coast, often in areas with strong water currents. Brachidontes darwinianus occurs from the state of Rio de Janeiro, Brazil, to Patagonia, in Argentina, whereas B- solisianus is distributed from Mexico to Uruguay. The spermatozoa of both species were of the primitive or ect-aquasperm type. In both species, the spermatozoan head contained a spheroidal nucleus capped by a conical acrosome with an anterior extension. No actin was detected in the subacrosomal region. However, immunocytochemical staining identified actin throughout the sperm nucleus of both species. The chromatin was highly electrondense, homogenous and compact, and the nuclei contained randomly distributed, electron-Iucent regions formed by invaginations of the nuclear envelope. These invaginations were detected by E-PT A staining for glycoproteins at low pH. The midpiece region consisted of five spherical mitochondria grouped in a ring around a pair of short cylindrical centrioles. The flagellum exhibited the typical 9+2 microtubule structure (nine double outer tubules + two single central tubules). The only marked difference in the morphology of spermatozoa from these two species was the longer anterior extension of the acrosomal vesicle in B. solisianus. This elongated acrosome may facilitate penetration of the jelly coat and cytoplasm of large oocytes and could increase the efficiency of fertilization. The resulting enhanced reproductive success could account for the wider geographic distribution of B. solisianus. Isognomon bicolor is distributed throughout many countries in the Americas. This species has an epifaunal existence and is usually found attached by its byssus to jetty pilings or growing in crevices on rocky shores exposed to strong water currents. The spermatozoa of this species were of the primitive or ectaquasperm type. The sperm head consisted of a round-to-oval, electron-dense nucleus (with an anterior fossa) capped by a small acrosome that contained an outer electron-dense and inner electron-Iucent region. The subacrosomal region had a thin filament that could play an important role in fertilization. Immunocytochemical analysis revealed the presence of actin throughout the nucleus of I. bicolor sperm, but no actin was detected in the subacrosomal area. Hence, the chemical nature of the amorphous material and of the tenuous filament present in the subacrosomal area remains unknown. The midpiece contained four ar five spherical mitochondria surrounding the centriole apparatus. Depasits of electron-dense granules, considered to be perimitochondrial glycogen, were observed around the centrioles and mitochondria. The flagellum had the typical 9+2 microtubular pattern. Ali of the B. darwinianus specimens studied had a diploid number of 2n=30 chromosomes whereas those of I. bico/ar had a diploid number af 2n=28. This chromosomal number is relatively common among closely related species of Brachidontes and Isognomon / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Os parasitas nematóides afetam homens e animais, causando graves prejuízos à saúde pública e consideráveis perdas econômicas. A disponibilidade de anti-helmínticos de amplo espectro de ação tem auxiliado na redução de um grande número de perdas em decorrência das infestações parasitárias. Foram objetivos deste trabalho avaliar os efeitos do tratamento com moxidectina, na forma de longa-ação (LA), em sua dose terapêutica em touros, sobre a consistência e perímetro testicular, as características físicas (motilidade e vigor) e morfológicas do sêmen e o comportamento sexual. Foram utilizados 12 touros com idade de 48 ± 10 meses. Os animais foram alocados em 6 blocos com dois tratamentos. Os animais foram divididos nos grupos: controle (n=6), no qual cada animal recebeu 5 mL de solução fisiológica, via subcutânea, na orelha esquerda e grupo tratado (n=6), no qual cada animal recebeu 5 mL de moxidectina a 10% via subcutânea, na orelha esquerda. Os animais foram submetidos a exames andrológicos semanais, por um período de até 60 dias após o tratamento, sendo avaliadas as características testiculares (consistência e perímetro) e características seminais (motilidade, vigor e morfologia). Foram realizados testes de libido a cada 15 dias, num total de cinco testes. Os resultados obtidos indicam que não houve diferença significativa (P>0,05) para a consistência testicular, perímetro testicular, motilidade progressiva, vigor espermático, morfologia espermática e libido entre os touros dos grupos controle e tratado. Esses resultados indicam que o tratamento com moxidectina a 10% não influencia negativamente as características reprodutivas de touros. / The helminths affect human beings and animals, causing serious damage to public health and considerable economic losses. The availability of anthelminthic of a broad-spectrum has helped reducing a large number of losses due to parasitic infestation. The objectives of this work were to evaluate the effect of the treatment with moxidectin, in Long Action (LA) formulation, in therapeutic doses in bulls, on the testicular consistency and perimeter, physical characteristics (motility and strength) and morphological of the semen and sexual behaviour. Twelve bulls, age 48 ± 10 months used. These animals were put in six, 06 blocks with two treatments. The animals were divided in groups: Control group (n=6) each animal received 5 ml of physiological solution subcutaneously in the left ear, and Treated group (n=6) each animal received 5 ml of moxidectin at 10% subcutaneously in the right ear. The animals were submitted to andrological examinations weekly, within a period of 60 days after the treatment. The testicular characteristics (consistency and perimeter) and seminal characteristic (motility, strength and morphology) were evaluated. Libido tests were done every fortnight, in five tests all together. The results indicated that there were not significant differences. (P>0.05) for the testicular consistency, perimeter, progressive motility, spermatic strength, morphology and libido among bulls of the control and treated groups. These results indicated that the treatment with moxidectin at 10% does not influence negatively on the reproductive characteristics of the bulls.

Os parasitas nematóides afetam homens e animais, causando graves prejuízos à saúde pública e consideráveis perdas econômicas. A disponibilidade de anti-helmínticos de amplo espectro de ação tem auxiliado na redução de um grande número de perdas em decorrência das infestações parasitárias. Foram objetivos deste trabalho avaliar os efeitos do tratamento com moxidectina, na forma de longa-ação (LA), em sua dose terapêutica em touros, sobre a consistência e perímetro testicular, as características físicas (motilidade e vigor) e morfológicas do sêmen e o comportamento sexual. Foram utilizados 12 touros com idade de 48 ± 10 meses. Os animais foram alocados em 6 blocos com dois tratamentos. Os animais foram divididos nos grupos: controle (n=6), no qual cada animal recebeu 5 mL de solução fisiológica, via subcutânea, na orelha esquerda e grupo tratado (n=6), no qual cada animal recebeu 5 mL de moxidectina a 10% via subcutânea, na orelha esquerda. Os animais foram submetidos a exames andrológicos semanais, por um período de até 60 dias após o tratamento, sendo avaliadas as características testiculares (consistência e perímetro) e características seminais (motilidade, vigor e morfologia). Foram realizados testes de libido a cada 15 dias, num total de cinco testes. Os resultados obtidos indicam que não houve diferença significativa (P>0,05) para a consistência testicular, perímetro testicular, motilidade progressiva, vigor espermático, morfologia espermática e libido entre os touros dos grupos controle e tratado. Esses resultados indicam que o tratamento com moxidectina a 10% não influencia negativamente as características reprodutivas de touros. / The helminths affect human beings and animals, causing serious damage to public health and considerable economic losses. The availability of anthelminthic of a broad-spectrum has helped reducing a large number of losses due to parasitic infestation. The objectives of this work were to evaluate the effect of the treatment with moxidectin, in Long Action (LA) formulation, in therapeutic doses in bulls, on the testicular consistency and perimeter, physical characteristics (motility and strength) and morphological of the semen and sexual behaviour. Twelve bulls, age 48 ± 10 months used. These animals were put in six, 06 blocks with two treatments. The animals were divided in groups: Control group (n=6) each animal received 5 ml of physiological solution subcutaneously in the left ear, and Treated group (n=6) each animal received 5 ml of moxidectin at 10% subcutaneously in the right ear. The animals were submitted to andrological examinations weekly, within a period of 60 days after the treatment. The testicular characteristics (consistency and perimeter) and seminal characteristic (motility, strength and morphology) were evaluated. Libido tests were done every fortnight, in five tests all together. The results indicated that there were not significant differences. (P>0.05) for the testicular consistency, perimeter, progressive motility, spermatic strength, morphology and libido among bulls of the control and treated groups. These results indicated that the treatment with moxidectin at 10% does not influence negatively on the reproductive characteristics of the bulls.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2008. / Submitted by Jaqueline Oliveira (jaqueoliveiram@gmail.com) on 2008-12-16T15:33:20Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_KhesllerPatriciaOlaziaName.pdf: 4643181 bytes, checksum: 7929b5a30eb0eadefed71af0b29adf98 (MD5) / Approved for entry into archive by Georgia Fernandes(georgia@bce.unb.br) on 2009-02-19T15:43:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_KhesllerPatriciaOlaziaName.pdf: 4643181 bytes, checksum: 7929b5a30eb0eadefed71af0b29adf98 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-02-19T15:43:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_KhesllerPatriciaOlaziaName.pdf: 4643181 bytes, checksum: 7929b5a30eb0eadefed71af0b29adf98 (MD5) / Os Diptera constituem uma das quatro maiores ordens de insetos. Chrysomya megacephala (Fabricius), a mosca-das-latrinas do Oriente, pertence à família Calliphoridae e encontra-se associada a questões médico-veterinárias, sanitárias e forenses. O objetivo desse trabalho foi caracterizar os aspectos ultra-estruturais da espermiogênese e do espermatozóide na referida espécie, incluindo a anatomia dos testículos e dos órgãos de armazenamento de espermatozóides nas fêmeas – as espermatecas. Estes dados são particularmente importantes em análises taxonômicas e filogenéticas, uma vez que tais células apresentam estruturas altamente conservadas. Nesta espécie, assim como na maioria dos insetos, a espermiogênese é caracterizada pelos seguintes eventos: formação do acrossoma, alongamento nuclear com condensação da cromatina, formação do flagelo e perda do excesso de citoplasma. No final do processo de espermiogênese, o espermatozóide em C. megacephala apresenta-se longo e delgado, medindo aproximadamente 590μm de comprimento. O espermatozóide é formado por acrossoma, núcleo com cromatina densamente compactada, centríolo, adjunto do centríolo, dois derivados mitocondriais preenchidos por material paracristalino e um axonema contendo: dois microtúbulos centrais, nove duplas periféricas e nove microtúbulos acessórios intercalados por fibras densas. O sistema reprodutor interno de machos e fêmeas possui modificações morfológicas que podem ser constantes em todos os ciclórrafos. O testículo de C. megacephala consiste de um único folículo e a parede do órgão é formada por uma camada de células pigmentadas e uma camada de tecido muscular. A espermateca consiste, externamente, de uma camada de células secretoras e internamente, de uma camada de cutícula que circunda a cavidade do órgão. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Diptera constitutes one of the four largest orders of insects. The Oriental latrine-fly Chrysomya megacephala (Fabricius) belongs to the family Calliphoridae and is associated with medic, veterinary, sanitary and forensic issues. The aim of this research was to characterize the utrastructural aspects of the spermiogenesis and spermatozoa of the C. megacephala, including the anatomy of testis and female sperm storage organs – the spermatheca. This data is particularly important in taxonomic and phylogenetic analysis, since in these cells their structure is highly conserved. In this species as with insects in general, the spermiogenesis is characterized by the following events: acrosome formation, nuclear elongation with chromatin condensation, flagellar formation and sheading of excess cytoplasm. At the end of spermiogenesis process, the spermatozoon in C. megacephala is a long and thin cell measuring 590 μm in length. The spermatozoon comprises acrosome, nucleus with compact dense chromatin, centriole, centriolar adjunct, two mitochondrial derivatives with paracrystalline material and axoneme with: two central microtubules, nine peripheral doublets, nine accessory microtubules and dense fibers. The internal reproductive system of the male and female has morphological modifications that may be constant in all Cyclorraphous. The testis of the C. megacephala consists of a unique follicle and the wall of the organ is formed by a layer of pigmented cells and a layer of muscular tissue. The spermatheca consists externally of a secretory cell layer, and internally of a cuticle layer witch surrounds the cavity of the organ.

O presente trabalho constou de três estudos. No primeiro estudo, cinco ejaculados de 30 machos foram analisados conforme a manutenção da MOT a 17ºC, sendo classificados em três tipos: MOT <60% nas 72h (EI); MOT ≥60% nas 72h e <60% nas 144h (EII) e MOT ≥60% nas 144h (EIII). Doze machos foram selecionados e distribuídos em três grupos: MAIOR, MÉDIA e MENOR sensibilidade espermática ao resfriamento. Em seguida, foram coletados cinco ejaculados de cada macho, sendo a MOT avaliada a cada 24h, e a integridade da membrana espermática (IM) e de acrossomas normais (NAR) nas 24, 72, 120 e 168h. Machos menos sensíveis ao resfriamento apresentaram menor variação na MOT do período pré- para o pós-seleção. Diferenças entre os machos foram observadas desde as 24 até 168h para MOT, nas 120 e 168h para MI e nas 72 e 168h para NAR. A MOT foi mais afetada que MI e NAR durante o armazenamento do sêmen in vitro. No estudo 2 foi avaliada a possibilidade de reverter a sensibilidade espermática ao resfriamento pela troca de plasma seminal (PS) entre machos com diferente manutenção da MOT a 17ºC. Foram utilizados ejaculados de cinco cachaços selecionados e classificados como: menor (MES) e maior sensibilidade ao resfriamento (MAS). Foram utilizados seis tratamentos, com cinco repetições cada. Nos tratamentos T1 e T3, o sêmen dos machos MES e MAS, respectivamente, foram processados de acordo com o protocolo convencional. Foi efetuada centrifugação (800g por 10 min) e adição do PS (10mL) homólogo para os espermatozóides MES e MAS, respectivamente, nos T2 e T4. Após a centrifugação, foi realizada a troca do PS, sendo que espermatozóides dos machos MES foram expostos ao PS dos machos MAS (T5) e o PS dos machos MES foi adicionado aos espermatozóides dos machos MAS (T6). A MOT foi avaliada a cada 24h, durante sete dias de conservação. NAR e de IM foram avaliados nas 24, 72, 120 e 168h. Diferenças na MOT, entre os machos MES (T1) e MAS (T3), foram observadas após armazenamento de 48h. Não foram observadas alterações em MOT e IM, quando foi efetuada a troca de PS entre os machos MES e MAS. Não foi possível reverter a maior sensibilidade ao resfriamento de espermatozóides suínos, após a ejaculação, com a adição de 10% do PS de machos com sêmen de menor sensibilidade. No terceiro estudo, foi avaliada a fertilidade de sêmen suíno pelo teste de ligação de espermatozóides a um substrato sintético. A MOT e o percentual de espermatozóides ligados (PEL) foram avaliados nas 5, 24, 48 e 72 horas de armazenamento a 17ºC. O PEL foi determinado em soluções contendo 6,25 ou 12,5 milhões de espermatozóides/mL, com ou sem albumina sérica bovina (BSA), preparadas a partir de dois a cinco ejaculados de cada um dos quatro machos. Houve correlação positiva (r=0,33) entre a MOT e o PEL. Os machos diferem quanto à capacidade de ligação de seus espermatozóides ao substrato sintético, a partir de 24 horas de armazenamento do sêmen. Maior percentual de espermatozóides ligados ao substrato sintético é verificado com a inclusão de BSA e com o aumento da concentração espermática.

MATOS, M.N.C. Efeito da sazonalidade no perfil de proteínas de espermatozóides de caprinos da raça Moxotó. 2012. 73 f. Dissertação (MESTRADO EM BIOTECNOLOGIA) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2012. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-01T12:24:59Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_mncmatos.pdf: 1852275 bytes, checksum: 92d388e34188c10beb7b23a3216898b0 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-27T15:12:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_mncmatos.pdf: 1852275 bytes, checksum: 92d388e34188c10beb7b23a3216898b0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-27T15:12:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_mncmatos.pdf: 1852275 bytes, checksum: 92d388e34188c10beb7b23a3216898b0 (MD5) Previous issue date: 2012 / Proteomic studies of sperm cells may be contribute in the biological reproduction potential by mapping biomarkers of fertility. The present study aims to evaluate the effect of seasonality in the protein profile of sperm Moxotó breed goats, in order to identify markers of fertility. We used six animals in reproductive age (24-36 months) for the collection of semen in artificial vagina, which was carried out weekly during the dry and rainy seasons. After collection, semen was submitted to evaluation of sperm parameters (motility, vigor, concentration and testis volume). The profile of sperm proteins was obtained using the two-dimensional electrophoresis technique . Analysis of seminal parameters showed no significant differences between periods. We detected 330 and 246 spots for 2D gels representing the rainy and dry seasons. The distribution of spots through isoelectric point in the two study periods are concentrated in the pH range 5-6, both in the dry season (PS) and in the rainy season (PC) this region contains about 50% of the total protein . Regarding the molecular weight of 20-40 kDa proteins showed greater frequency over the years. It was observed the presence of 56 spots similar and constant expression in six animals. The qualitative and quantitative differences were observed between the season, highlighting the 349 spot that was present only in the PC, while the 566 and 1115 spots were differentially expressed in the dry season. Individual differences have been identified yet and it seems is correlated with sperm parameters evaluated. In general there was greater expression of proteins in the PS. In conclusion, the results show the influence of seasonality on the expression of some proteins, which may be strong candidates for biomarkers of fertility and may be related to some characteristics such as sperm maturation, capacitation, acrosome reaction and interaction between the gametes. / Estudos proteômicos da célula espermática podem contribuir para a utilização do potencial biológico reprodutivo através do mapeamento de biomarcadores de fertilidade. O presente trabalho tem o objetivo de avaliar o efeito da sazonalidade no perfil proteico de espermatozóides da raça caprina Moxotó, visando à identificação de marcadores de fertilidade. Foram utilizados seis reprodutores em idade reprodutiva (24 a 36 meses) para a coleta de sêmen em vaginal artificial, a qual foi realizada semanalmente durante os períodos seco e chuvoso. Após a coleta, o sêmen foi submetido à avaliação dos parâmetros espermáticos (motilidade, vigor, concentração e volume espermático). O perfil das proteínas espermáticas foi obtido através da técnica de eletroforese bidimensional (2D). A análise dos parâmetros seminais não apresentou diferenças significativas entre os períodos. Foram detectados 330 e 246 spots em géis 2D para os períodos chuvoso e seco, respectivamente. A distribuição dos spots pelo ponto isoelétrico nos dois períodos estudados, encontram-se majoritariamente concentrados na faixa de pH de 5 a 6, tanto no período seco (PS) quanto no período chuvoso (PC) essa região contem cerca 50% do total de proteínas. Em relação a massa molecular as proteínas de 20-40 kDa apresentaram maior frequência ao longo do ano. Observou-se a presença de 56 spots similares e com expressão constante nos seis animais. As diferenças qualitativas e quantitativas foram observadas entre os períodos, destacando-se o spot 349 que esteve presente apenas no PC, enquanto que os spots 566 e 1115 foram diferencialmente expressos no PS. Foram identificadas ainda diferenças individuais e estas parecem está correlacionadas com os parâmetros espermáticos avaliados. De uma forma geral observou-se maior expressão de proteínas no PC. Em conclusão, os resultados apontam influência da sazonalidade na expressão de algumas proteínas, as quais podem ser fortes candidatas a biomarcadores de fertilidade e podem estar relacionadas a várias características do espermatozóide como maturação, capacitação, reação acrossômica e interação entre os gametas.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-30Bitstream added on 2014-06-13T19:45:11Z : No. of bitstreams: 1 villaverde_aisb_dr_botfmvz.pdf: 3478993 bytes, checksum: d5ea0090ec4786ded2155ff7802d56fe (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O estudo da proteína fosfolipase C zeta (PLCζ), considerada o fator espermático ativador do oócito em mamíferos, pode beneficiar algumas técnicas de reprodução assistida, como a injeção espermática intracitoplasmática e transferência nuclear, por propiciar conhecimento a respeito do processo de fertilização e a possibilidade de utilização da PLCζ presente nos extratos espermáticos. Portanto, o objetivo deste estudo foi localizar a PLCζ em extratos provenientes do citosol e matriz perinuclear de espermatozóides de gatos domésticos normospérmicos e teratospérmicos. Amostras de sêmen foram colhidas de seis gatos adultos: normospérmicos (n=3), teratospérmicos (n=2) e de qualidade seminal intermediária (n=1). As proteínas do citosol foram extraídas utilizando os procedimentos de sonicação, ultracentrifugação, ultrafiltração e precipitação em sulfato de amônio. Por sua vez, as proteínas da matriz perinuclear foram extraídas após incubação em Na2CO3, sonicação, ultracentrifugação, ultrafiltração e precipitação em sulfato de amônio. Com base na avaliação ultraestrutural dos espermatozóides e dosagem de proteína total, foi confirmada a eficiência de ambos os protocolos de extração. As amostras da matriz perinuclear apresentaram 3,3 vezes menos proteína total e diferente perfil protéico na eletroforese unidimensional e bidimensional quando comparadas as amostras obtidas do citosol. Após análise das proteínas encontradas, foi concluído que nos extratos espermáticos do citosol e matriz perinuclear de gatos domésticos normospérmicos e teratospérmicos estão presentes proteínas de peso molecular semelhante ao previamente descrito para a proteína PLCζ em outras espécies de mamíferos / The study of phospholipase C zeta protein (PLCζ), considered as the oocyte activating sperm factor in mammals, could benefit some assisted reproductive techniques, such as intracytoplasmic sperm injection and nuclear transfer, by providing knowledge about the process of fertilization and the possibility of using the PLCζ contained in the sperm extracts. Thus, the aim of this study was to localize the phospholipase C zeta (PLCζ) protein in extracts from the spermatozoa cytosol and perinuclear matrix of normospermic and teratospermic domestic cat. Sperm samples were collected from six adult male cats: normospermic (n=3), teratospermic (n=2) and with intermediate sperm quality (n=1). Proteins from the cytosol were extracted using the procedures of sonication, ultracentrifugation, ultrafiltration and precipitation in ammonium sulfate. On the other hand, proteins from perinuclear matrix were extracted after incubation in Na2CO3, sonication, ultracentrifugation, ultrafiltration and precipitation in ammonium sulfate. Based on the ultrastructural analysis of the spermatozoa and total protein determination, the efficiency of both extraction protocols was confirmed. Samples from perinuclear matrix showed 3.3 times less total recovered protein and different protein profile in the uni- and bidimensional electrophoresis when compared to the samples obtained from the cytosol. After protein profile analysis, it can be concluded that several proteins showing similar molecular weight to that previously described for PLCζ protein in other mammalian species are presented in both sperm extracts from cytosol and perinuclear matrix of normospermic and teratospermic domestic cats

O presente trabalho constou de três estudos. No primeiro estudo, cinco ejaculados de 30 machos foram analisados conforme a manutenção da MOT a 17ºC, sendo classificados em três tipos: MOT <60% nas 72h (EI); MOT ≥60% nas 72h e <60% nas 144h (EII) e MOT ≥60% nas 144h (EIII). Doze machos foram selecionados e distribuídos em três grupos: MAIOR, MÉDIA e MENOR sensibilidade espermática ao resfriamento. Em seguida, foram coletados cinco ejaculados de cada macho, sendo a MOT avaliada a cada 24h, e a integridade da membrana espermática (IM) e de acrossomas normais (NAR) nas 24, 72, 120 e 168h. Machos menos sensíveis ao resfriamento apresentaram menor variação na MOT do período pré- para o pós-seleção. Diferenças entre os machos foram observadas desde as 24 até 168h para MOT, nas 120 e 168h para MI e nas 72 e 168h para NAR. A MOT foi mais afetada que MI e NAR durante o armazenamento do sêmen in vitro. No estudo 2 foi avaliada a possibilidade de reverter a sensibilidade espermática ao resfriamento pela troca de plasma seminal (PS) entre machos com diferente manutenção da MOT a 17ºC. Foram utilizados ejaculados de cinco cachaços selecionados e classificados como: menor (MES) e maior sensibilidade ao resfriamento (MAS). Foram utilizados seis tratamentos, com cinco repetições cada. Nos tratamentos T1 e T3, o sêmen dos machos MES e MAS, respectivamente, foram processados de acordo com o protocolo convencional. Foi efetuada centrifugação (800g por 10 min) e adição do PS (10mL) homólogo para os espermatozóides MES e MAS, respectivamente, nos T2 e T4. Após a centrifugação, foi realizada a troca do PS, sendo que espermatozóides dos machos MES foram expostos ao PS dos machos MAS (T5) e o PS dos machos MES foi adicionado aos espermatozóides dos machos MAS (T6). A MOT foi avaliada a cada 24h, durante sete dias de conservação. NAR e de IM foram avaliados nas 24, 72, 120 e 168h. Diferenças na MOT, entre os machos MES (T1) e MAS (T3), foram observadas após armazenamento de 48h. Não foram observadas alterações em MOT e IM, quando foi efetuada a troca de PS entre os machos MES e MAS. Não foi possível reverter a maior sensibilidade ao resfriamento de espermatozóides suínos, após a ejaculação, com a adição de 10% do PS de machos com sêmen de menor sensibilidade. No terceiro estudo, foi avaliada a fertilidade de sêmen suíno pelo teste de ligação de espermatozóides a um substrato sintético. A MOT e o percentual de espermatozóides ligados (PEL) foram avaliados nas 5, 24, 48 e 72 horas de armazenamento a 17ºC. O PEL foi determinado em soluções contendo 6,25 ou 12,5 milhões de espermatozóides/mL, com ou sem albumina sérica bovina (BSA), preparadas a partir de dois a cinco ejaculados de cada um dos quatro machos. Houve correlação positiva (r=0,33) entre a MOT e o PEL. Os machos diferem quanto à capacidade de ligação de seus espermatozóides ao substrato sintético, a partir de 24 horas de armazenamento do sêmen. Maior percentual de espermatozóides ligados ao substrato sintético é verificado com a inclusão de BSA e com o aumento da concentração espermática.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-07-07T17:52:47Z No. of bitstreams: 1 2014_JulianaLisMendesdeBrito.pdf: 1565666 bytes, checksum: 0b992a5d1c58461e8e4548f4a5ab4bac (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-08-17T15:42:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_JulianaLisMendesdeBrito.pdf: 1565666 bytes, checksum: 0b992a5d1c58461e8e4548f4a5ab4bac (MD5) / Made available in DSpace on 2015-08-17T15:42:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_JulianaLisMendesdeBrito.pdf: 1565666 bytes, checksum: 0b992a5d1c58461e8e4548f4a5ab4bac (MD5) / A caracterização histomorfométrica dos testículos de morcegos de quatro diferentes espécies comumente encontradas na região de Cerrado, do Distrito Federal foi realizada durante as estações de seca e chuva, visando um maior conhecimento sobre os padrões reprodutivos sazonais destes animais. Machos das espécies Artibeus lituratus, Platyrrhinus lineatus, Sturnira lilium e Carollia perspicillata foram coletados, eutanasiados e pesados. Os testículos e epidídimos foram retirados, pesados e medidos. Foi realizado um lavado do epidídimo direito para a retirada dos espermatozoides, que foram então fixados e processados para a microscopia eletrônica de varredura. Os testículos e epidídimos esquerdos foram fixados e processados para histologia, cinco lâminas foram montadas e coradas para cada animal e analisadas em microscópio de luz. Foram analisados os parâmetros de área do túbulo, área da luz do túbulo, diâmetro do túbulo, diâmetro da luz do túbulo e altura do epitélio. Foi calculado também o índice Gonadossomático (IGS) e calculada a relação entre área tubular/área intersticial. Todos os dados obtidos foram expressos pela Média ± Erro Padrão da Média, foi empregada a Analise de Variância (ANOVA) e teste de Tukey, com um critério de significância mínimo de 5%. Todos os dados foram comparados tanto entre as espécies como entre as estações do ano. O peso corporal foi significativamente maior durante a estação de seca para as quatro espécies. O IGS foi significativamente diferente entre as estações para todas as espécies, maior na estação chuvosa para A. lituratus, P. lineatus e C. perspicillata, e na estação seca somente para S. lilium. O peso e o comprimento testicular foram maiores na estação chuvosa para A. lituratus e P. lineatus e na estação seca para S. lilium e C. perspicillata, mostrando diferenças significativas entre as estações para todas as espécies. A espécie A. lituratus apresentou todos os parâmetros tubulares maiores de forma significativa em comparação com as outras espécies, nas duas estações, com exceção das áreas do túbulo e da luz do túbulo na seca. Somente C. perspicillata apresentou diferença significativa entre as estações para todos os parâmetros tubulares, sendo maiores durante a seca. Já para a relação área tubular/área intersticial somente o C. perspicillata apresentou relação significativamente maior na estação de seca. Foi possível observar espermatozoides nos túbulos seminíferos e epidídimos de todos os animais coletados, tanto na seca quanto na chuva. Os espermatozoides da espécie A. lituratus apresentou uma cabeça em forma de seta, enquanto os das outras três espécies possuem a cabeça com formatos arredondados. Os espermatozoides de P. lineatus foram os maiores dentre os estudados. Concluindo, os espermatozoides das quatro espécies são semelhantes em formato da cabeça com a exceção da espécie A. lituratus. Existem diferenças significativas entre as quatro espécies estudadas em relação ao peso corporal, peso e comprimento testicular e parâmetros tubulares. No entanto não foi possível observar sazonalidade reprodutiva nos machos das quatro espécies estudadas nas condições de Cerrado do Distrito Federal. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The histomorphometric characterization of testicles from four species of bats commonly found in the savanna area of Distrito Federal (Brazil) was performed during the dry and wet seasons. Male bats from Artibeus lituratus, Platyrrhinus lineatus, Sturnira lilium and Carollia perspicillata species were collected, killed and weighted. Testicles and epididymides were removed, weighted and measured. The right epididymides were washed to collect spermatozoa, which were fixed and processed for scanning electron microscopy. Left testicles and epididymides were fixed and processed for histology, five sections were mounted and stained with hematoxylin and eosin and analyzed under a light microscope. The analyzed parameters were: tubular area and diameter, luminal area and diameter, and height of seminiferous epithelium. The gonadossomatic index (GSI) and the relation tubular area/interstitial tissue area were calculated. Data are presented as Mean ± SEM, and compared between seasons and species using ANOVA and Tukey’s test. Body weight was significantly higher on the dry season for the four species. GSI was significantly different between seasons for all four species, being higher on the wet season for A. lituratus, P. lineatus and C. perspicillata, and on the dry season for S. lilium. Testicular weight and length were higher on the wet season for A. lituratus, P. lineatus and on the dry season for S. lilium and C. perspicillata.The tubular parameters studied were significantly greater in A. lituratus than in the other three species, on both seasons, except for tubular and luminal areas on the dry season. All analyzed parameters differed between season only for C. perspicillata, being greater on the dry season. C. perspicillata also showed a higher relation tubular area/interstitial tissue area on the dry season. Spermatozoa were visible on seminiferous tubules and epididymides of all collected animals, in both seasons. Spermatozoa from A. lituratus presented an arrow-shaped head, while the head was round-shaped on the other three species. Spermatozoa from P. lineatus were bigger than the other studied sperm cells. In conclusion, the spermatozoa from the four studied species are similar, except for the shape of the head for A. lituratus. There are significant differences among species concerning body weight, testicle weight and length and tubular parameters. However, no reproductive seasonality could be observed on males from the four studied species on the savanna area of Distrito Federal, Brazil.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-01-26Bitstream added on 2014-06-13T18:58:50Z : No. of bitstreams: 1 farras_mc_me_botfmvz.pdf: 544796 bytes, checksum: 513d0af00d97f12c80a9d388b7fd8f78 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Nas últimas décadas, muitos estudos têm sido realizados nas diferentes espécies com o intuito de se determinar os fatores envolvidos no processo da fragmentação do DNA espermático. A biologia molecular voltada à área da reprodução tem resultado em inúmeras técnicas para a avaliação da qualidade da cromatina e determinação da fragmentação do DNA espermático. Em trabalhos recentes, um novo teste denominado Halomax® tem se mostrado tão eficiente quanto a outros tradicionais para a avaliação da fragmentação do DNA espermático, apresentando como vantagens a sua praticidade e o fato não requerer o uso de equipamentos de alto custo. O presente experimento teve por objetivo comparar as raças Mangalarga Marchador (MM) e Quarto de Milha (QM) quanto à resistência à refrigeração, bem como utilizar o Teste Dispersão de Cromatina Espermática denominado Halomax® para avaliar a fragmentação da cromatina espermática do sêmen refrigerado dos garanhões dessas raças em duas temperaturas de armazenamento de sêmen refrigerado (5°C e 15°C). Os resultados deste trabalho demonstraram que não houve diferença entre as temperaturas de armazenamento (5°C e 15°C), mostran do que ambas são eficientes na manutenção da viabilidade espermática pelo período de 24 horas para ambas as raças estudadas. Além disso, foi observada uma característica espermática superior dos garanhões da raça Quarto de Milha quando comparada aos da raça Mangalarga Marchador, tanto nos parâmetros de velocidade espermática, avaliado pelo CASA, quanto com relação à fragmentação do DNA espermático, revelando uma maior sensibilidade dos animais da raça Mangalarga ao processo de refrigeração do sêmen / Many studies have been conducted in different species in order to determine the factors involved in the process of sperm DNA fragmentation. Molecular biology studies focused on the reproductive area has resulted in several techniques for assessing the quality of chromatin and sperm DNA fragmentation. Recently, a new test called HALOMAX ® has been shown to be as efficient as other traditional assessment of sperm DNA fragmentation, having the advantage of practicality and not require the use of expensive equipment. The aim of this study was to compare breeds Mangalarga and Quarter Horses for cooling resistance and use the Sperm Chromatin Dispersion Test called HALOMAX ® to evaluate the sperm chromatin fragmentation using two cooled semen storage systems (5°C and 15°C). Our results showed no difference between storage systems (5°C and 15°C), showing that both are effective in maintaining sperm viability for a period of 24 hours for both breeds studied. In addition, the Quarter Horse shown superiority in semen quality parameters assessed by CASA and sperm DNA fragmentation when compared with the Mangalarga, revealing higher sensitivity of the Mangalarga stallions for cooling semen