Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-30Bitstream added on 2015-04-09T12:48:26Z : No. of bitstreams: 1 000815808.pdf: 368367 bytes, checksum: 730f4d89fb923e167df061884d63fd71 (MD5) / O objetivo deste estudo foi avaliar o empacotamento da cromatina e morfometria da cabeça de espermatozoides criopreservados de touros Bos taurus indicus da raça Nelore de diferentes idades e a influência do grau de compactação da cromatina na produção in vitro de embriões (PIV). Foram utilizados 40 animais mantidos em centro de coleta e processamento de sêmen (CCPS) e distribuídos em três grupos: Grupo Jovens (entre 1,8 e 2 anos), Grupo Adultos (entre 3,5 e 7 anos) e Grupo Senis (entre 8 e 14,3 anos). Os ejaculados foram congelados de acordo com os padrões pré-estabelecidos do CCPS. Utilizou-se a coloração de azul de toluidina, que permite a avaliação simultânea da cromatina e morfometria da cabeça espermática, a cromomicina A3 (CMA3) para analisar a protaminação espermática e a PIV para o desenvolvimento embrionário. O azul de toluidina foi avaliado pela microscopia óptica e a CMA3 pelo citômetro de fluxo. Na PIV foram realizadas quatro repetições por grupo, com 25 a 30 oócitos em cada repetição. A análise seminal revelou que espermatozoides de touros jovens obtiveram maiores valores de área (A), perímetro (P) e largura (L) quando comparados a adultos e senis (Jovens: A=1848,5±119,79, P=10,23±0,29, L=1,95±0,1; Adultos: A=1672,9±104,46, P=9,86±0,33, L=1,81±0,06; Senis: A=1723,1±124,41, P=9,97±0,33, L=1,83±0,09; P<0,0001) e apresentaram maior deficiência de protaminação quando analisado pela CMA3 (Jovens: 1,57±0,76; Adultos: 1,09±0,63, Senis: 0,90±0,59; P<0,05). Da mesma forma, variáveis de tamanho (A, P, L) e protaminação espermática, avaliado pela CMA3, obtiveram correlação negativa com a idade e positiva com a elipsidade (P<0,05). Espermatozoides com anormalidades na cromatina obtiveram maior área quando comparado àqueles sem alteração de cromatina (P<0,0001). Não houve diferença significativa na PIV quando sêmen com maior e menor parcela de alteração de cromatina foi ... / The aim of this study was to evaluate chromatin condensation and sperm head morphometry of cryopreserved semen samples from Bos taurus indicus bulls of different ages and the influence of the degree of chromatin condensation on in vitro embryo production (IVP). A total of 40 animals kept in an Artificial Insemination Centre were divided into three groups: Young Group (1.8 to 2 years), Adult Group (3.5 to 7 years) and Senile Group (8 to 14.3 years). The ejaculates were frozen in accordance with established standards of the Artificial Insemination Centre. The thawed semen samples were evaluated with toluidine blue, which analyzes the chromatin condensation and sperm head morphometry simultaneosly, chromomicin A3 (CMA3) to analyze the protamination and in vitro embryo production to analyze the embryonic development. The toluidine blue was evaluated by optical microscopy and the CMA3 by flow cytometry. Semen analyses revealed that spermatozoa of young bulls had higher values of area (A), perimeter (P) and width (W) when compared to adults and senile (Young: A = 1848.5 ± 119.79, P = 10. 23 ± 0.29, W = 1.95 ± 0.1; Adults: A = 1672.9 ± 104.46, P = 9.86 ± 0.33, W = 1.81 ± 0.06; Senile: A = 1723.1 ± 124.41, P = 9.97 ± 0.33, W = 1.83 ± 0.09; P<0.0001) and had higher protamination deficiency when analyzed with CMA3 (Young: 1.57 ± 0.76, Adults: 1.09 ± 0.63, Senile: 0.90 ± 0.59, P<0.05). Variable size (A, P, W) and sperm protamination evaluated by CMA3 showed negative correlation with age and a positive with ellipticity (P<0.05). Spermatozoa with abnormal chromatin obtained larger area when compared to those with normal chromatin (P<0.0001). There was no significant difference in IVP using semen with higher and lower altered chromatin condensation, evidencing that the proportion of spermatozoa with abnormal chromatin (4 to 16.15%) did not affect the embryonic development. Our results indicate that sperm head of young bulls are ...

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-08-10T10:28:19Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 475943 bytes, checksum: 4700679733e56fffafeea553d2dd1f56 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-10T10:28:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 475943 bytes, checksum: 4700679733e56fffafeea553d2dd1f56 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Este estudo foi realizado com o objetivo de verificar se a ação antioxidante da melatonina influencia na viabilidade in vitro pós-descongelamento dos espermatozoides caprinos, bem como verificar o potencial uso deste antioxidante em diferentes concentrações de espermatozoides caprinos criopreservados. Foram utilizados dois machos adultos da raça Alpina e dois machos adultos da raça Saanen. Para as coletas de sêmen foi utilizada vagina artificial onde se obteve seis ejaculados por animal. Após a coleta, fez-se a avaliação das características macro e microscópicas. Em seguida, o sêmen foi diluído com os seguintes tratamentos : T1 40 X 10^6 espermatozoides sem antioxidante (Controle); T2 40 X 10^6 espermatozoides com antioxidante; T3 80 X 10^6 espermatozoides sem antioxidante; T4 80 X 10^6 espermatozoides com antioxidante; T5 100 X 10^6 espermatozoides sem antioxidante e T6 100 X 10^6 espermatozoides com antioxidante.Após as diluições finais, foram avaliados a motilidade progressiva e vigor espermático de cada tratamento. O sêmen foi envasado em palhetas de 0,25mL, as palhetas foram resfriadas a cinco graus celsius, durante uma hora em refil plástico contendo álcool etílico. O pré-congelamento foi realizado em vapor de nitrogênio líquido durante 15 minutos. Após esse período, as palhetas foram imersas no nitrogênio para o congelamento do sêmen. As partidas foram descongeladas em banho-maria a 37 °C por 30 segundos, acondicionadas em microtubos e homogeneizadas para a análise imediata de motilidade e vigor espermático, teste hiposmótico e teste de termorresistência. As amostras foram avaliadas mediante patologia espermática e por meio de citometria de fluxo quanto à integridade de membrana plasmática e acrossomal, potencial mitocondrial e produção de peróxido de hidrogênio intracelular No sêmen fresco, as características físicas estavam dentro dos parâmetros normais. O melhor resultado obtido no TTR foi referente aos tratamento 100μM (p<0,05), manteve a maior média de motilidade espermática total após cinco minutos de incubação a 37°C. O potencial mitocondrial sofreu alteração frente aos tratamentos com uma concentração de 40 X 10^6 sptz/dose (p<0,05). Em relação à raça, foi observado maior viabilidade celular com presença de peróxido de hidrogênio intracelular na raça saanen comparada a raça alpina (p<0,05). Em relação à concentração espermática, foi observado maior proporção de células viáveis com presença de peróxido de hidrogênio intracelular nos tratamentos com concentração espermática de 40 e 80 x 10^6 espermatozoide/mL, enquanto a menor proporção foi observada no tratamento com 100 x 10^6 espermatozoide/mL (p<0,05). Os resultados obtidos quanto à ação da Melatonina não foram satisfatórios, porém as concentrações utilizadas neste experimento mantiveram a viabilidade seminal de acordo com as características preconizadas pelo CBRA, mas não foram superior ao tratamento controle. / The aim of this study was to evaluate the antioxidant effect of melatonin on the viability in vitro post-thaw sperm of goats, as well as to investigate the potential use of this antioxidant in different concentrations of sperm cryopreserved goats. Four Billy goats were used and six samples were colleted from each and their semen was cryopreserved in commercial diluent Botubov ® . After each collection, the semen was diluted and analyzed, and then distributed along nine experimental treatments: T1 (control) – 40 X 10^6 spermatozoa without melatonin; T2 - 40 X 10^6 spermatozoa with 1μM melatonin; T3 - 40 X 10^6 spermatozoa with 100μM melatonin; T 4 - 80 X 10 6 spermatozoa with without melatonin; T5 - 80 X 10^6 spermatozoa with 1μM melatonin; T6 - 80 X 10^6 spermatozoa with 100μM melatonin; T7 - 100 X 10^6 spermatozoa without melatonin; T8 - 100 X 10^6 spermatozoa with 1μM melatonin; T9 - 100 X 10^6 spermatozoa with 100μM melatonin. After dilutions, the semen was coled to 5°C, kept in a three- hour period of equilibrium, and then stored in previously identified and sealed 0,25mL straws. The straws were frozen in a liquid nitrogen vapor for 15 minutes, submerged in nitrogen, and then stored in cryogenic cylinder. The doses of semen in the treatments were thawed at 37°C for 30 seconds and subjected to in vitro tests: motility, vigor, morphology, membrane functionality by hypoosmotic test and thermoresistance test (TRT) at 37°C for three hours and by flow cytometry as to integrity of plasma and acrosomal membrane, mitochondrial potential and intracellular peroxide hydrogen production. The results related to Melatonin were not satisfactory, revealing with it the need for new studies about its optimal concentration and effects on semen freezing goats. The best result obtained in TTR was referring to 100μM treatment (p <0.05), maintained the highest average total sperm motility after five minutes of incubation at 37°C. Mitochondrial potential was altered to the treatments with a concentration of 40 X 10^6 sperm / dose (p <0.05). In regard to race, greater cell viability was observed with the presence of intracellular hydrogen peroxide in the Alpine compared Saanen (p <0.05). Regarding the sperm concentration was observed a higher proportion of viable cells in presence of intracellular hydrogen peroxide in treatments with sperm concentration of 40 to 80 x 10^6 sperm / ml, while the smaller proportion was observed in the treatment with 100 x 10^6 sperm / ml (p <0.05). The results obtained as to the action of melatonin were not satisfactory, however the concentrations used in this experiment maintained seminal viability according to the features prescribed by the CBRA, but not higher than the control treatment.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2015. / Submitted by Guimaraes Jacqueline (jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-06-15T14:23:55Z No. of bitstreams: 1 2015_AndrielleThainarMendesCunha.pdf: 1263718 bytes, checksum: d3e361eee393e655519a6623e0bb6ce0 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-06-15T14:24:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_AndrielleThainarMendesCunha.pdf: 1263718 bytes, checksum: d3e361eee393e655519a6623e0bb6ce0 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-15T14:24:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_AndrielleThainarMendesCunha.pdf: 1263718 bytes, checksum: d3e361eee393e655519a6623e0bb6ce0 (MD5) / A utilização de espermatozoides do epidídimo (EP) em técnicas de reprodução assistida tem um papel importante na multiplicação e armazenamento de material genético. Entretanto, melhor conhecimento sobre o comportamento fisiológico destes espermatozoides é necessário para otimizar a sua utilização. Objetivou-se avaliar a viabilidade, resistência e longevidade de EP de sete touros da raça Gir, durante e após a criopreservação, usando os espermatozoides do ejaculado (EJ) como controle. O ejaculado foi coletado através de eletroestimulação, posteriormente os animais foram castrados e os espermatozoides da cauda do epidídimo foram coletados pelo método de extravasamento. Primeiramente, verificou-se a resistência dos EJ e EP diante à criopreservação, as células foram avaliadas logo após a recuperação, após quatro horas de refrigeração e após o descongelamento. Em uma segundo etapa, foi avaliada a longevidade após a criopreservação. Foram utilizados três grupos de espermatozoides do EJ, do EP e um grupo em que EP foram incubados com plasma seminal (EPP). Após o descongelamento amostras dos três grupos foram incubadas por zero, três, seis e 24 horas. Em cada momento foi avaliada a motilidade total e progressiva, integridade de membrana plasmática, integridade acrossomal, morfologia espermática capacitação. Finalmente foi avaliada a capacidade dos espermatozoides do epidídimo de se ligarem às células da tuba uterina (CTU). Para isso foram utilizados os grupos EJ, EP e EPP, foram co-incubados, com CTU por zero, três, seis e 24 horas. Devido ao resultado obtido, um segundo teste foi realizado utilizando testículos de quatro touros, coletados em abatedouro. Um testículo de cada animal foi utilizado para o grupo de EP criopreservado (EP-C) e o outro para o grupo de EP fresco (EP-F). Os dados foram analisados usando procedimento GLIMMIX do programa SAS (P≤0,05). Os EP apresentaram características de qualidade semelhantes aos do EJ frescos e após a criopreservação (P>0,05). Entretanto, foram mais resistentes à refrigeração do que os do EJ, apresentado maior MT (79,8±4,5 e 56,8±5,6), maior MP (46,1±3,5 e 29,2±3,2) e maior porcentagem de acrossoma íntegro (68,7±5,8 e 48,5±6,1). Após o descongelamento, e 6h de incubação os grupos EP e EPP comparados com o EJ apresentaram maior porcentagem de membrana plasmática íntegra (29±4,3, 28,2±4,2 e 16,4±3,4), maior porcentagem de espermatozoides com acrossoma intacto (31,6±3,8, 31,6±3,8 e 19,9±3,2) e maior porcentagem de espermatozoides não capacitados (81±3,5, 80,9±3,5 e 70,3±3,7). O número de espermatozoides ligados após a co-incubação das CTU com EJ, EP ou EPP não diferiu (P>0,05) em nenhum grupo, a análise dentro de cada grupo mostrou que ambos apresentaram queda gradativa no número de espermatozoides ligados às CTU, sendo que o menor número foi observado às 24 h para todos os grupos. No segundo teste de ligação, o grupo EP-F apresentou maior numero de células ligadas aos 30 min (130,9±21,2) e às 24 horas (131,7±21,2) de incubação do que o grupo EP-C aos 30 min (88±21,2) e 24 h (20,4±21,2). Pode-se concluir que EP são mais resistentes à refrigeração dos que os do EJ, apresentam maior longevidade e características de capacitação tardia, quando comparados ao EJ. Além disso, os EP se ligam às CTU da mesma forma que os EJ, no entanto a criopreservação pode afetar esta ligação. / The use of epididymal sperm (ES) in assisted reproductive technologies is an important tool form multiplication and conservation of genetic material. However, a better understanding of several aspects of those sperm physiology is needed to optimize its use. The aim of this study was to evaluate the strength, the post thawed viability, longevity and sperm characteristics behavior of ES from 7 Gir bulls, during and after cryopreservation, using ejaculated sperm (EJ) as a control. After ejaculated sperm was collected the testis were removed and sperm from the cauda epididymis were recovered First we evaluate the resistance of ES and EJ to cryopreservation, sperm were evaluated just after recovering, after 4 h of cooling and after freezing. Then, we evaluate the post thawing longevity by examining the sperm after different periods of incubation. Three groups were used ES, EJ, and a third group, in which ES was incubated with seminal plasm for 10 min after thawed (ESS). After thawing, samples from the 3 groups were incubated for 0, 3, 6 e 24 h. In each moment they were evaluated for total motility and progressive motility, plasm membrane integrity. acrosome integrity, morphology and capacitation. Finally, we evaluated the ability of ES, EJ and ESS to bind to oviduct epithelium cells (OEC), Samples from EJ, EP e EPP groups were co-incubated with OEC for 0, 3, 6 e 24 h. Due to the results obtained, another test had to be done to evaluated if the cryopreservation process was affecting ES binding. To do that we used testis form 4 bulls collected at slaughter house. From each animal one testis was used for the fresh sperm (ES-F) and the other for the frozen sperm (EP-C). Data analysis was performed using GLIMMIX from SAS (P≤0.05). Fresh and cryopreserved ES presented all quality parameters similar (P>0.05) to the EJ However, after cooling at 4°C, ES showed to be more resistance to cold than the EJ presenting greater TM (79.8±4.5 and 56.8±5.6), greater PM (46.1±3.5 and 29.2±3.2) and higher percentage of cells with intact acrosome (68.7±5.8 and 48.5±6.1) than EJ. After thawed at 6 h of incubation ES and ESS compared to EJ had a higher percentage of intact membranes (29±4.3, 28.2±4.2 and 16.4±3.4), higher percentage of cells with intact acrosome (31.6±3.8 31.6±3.8 and 19.9±3.2) and higher percentage of non-capacitated sperm (81±3.5, 80.9±3.5 and 70.3±3.7). The number of bounded sperm after co-incubation with OEC was similar (P>0.05) for EJ, ES and ESS groups. The analysis within the group showed that all had a decreased on the number of bounded sperm, with the lowest number of bounded sperm found at 24 h of incubation. In the second biding test the group EF had a higher number of bounded sperm at 30 min (130.9±21.2) and at 24 h (131.7±21.2) of incubation than the EC (30 min=88±21.2 and 24 h=20.4±21.2). It can be concluded that ES are more resistant to cooling than the EJ, presenting a greater longevity and a delay on capacitation process than the EJ. In addition, ES binds to OEC similarly to EJ; however cryopreservation can affect that binding.

Orientador: Josineudson Augusto II de Vasconcelos Silva / Coorientador: Nabor Veiga / Banca: Edina de Fátima Aguiar / Banca: José Maurício Barbanti Duarte / Resumo: O objetivo do estudo foi avaliar a endogamia, características reprodutivas e de crescimento de perdizes (Rhynchotus rufescens) em cativeiro. O banco de dados genealógicos era composto pelo registro de 1500 animais nascidos entre 2005 e 2016, no qual avaliou-se os parâmetros populacionais através dos softwares ENDOG v.4.8 e o INBUPGF90. As características reprodutivas e de crescimento avaliadas foram: número de ovos/mês (NO30), peso do ovo (PO), circunferência do eixo longitudinal do ovo (CO), fertilidade, eclodibilidade, qualidade espermática, peso ao nascimento (PN), peso corporal e perímetro de peito (PP) e coxa (PC). A preparação da base de dados e a estatística inicial foram realizadas no software estatístico SAS. O modelo não-linear de Gompertz foi ajustado aos 1300 dados de peso/PP/PC por idade para explicar o crescimento dos animais. Foram criados 8 classes de peso para determinadas idades para análise de variância, sendo elas o peso aos 28 (P28), 56 (P56), 84 (P84), 112 (P112), 140 (P140), 168 (P168), 200 dias (P200) e acima de 300 dias (P>300). Os coeficientes de endogamia (F) calculados pelo ENDOG v.4.8 e INBUPGF90 foram 0,036% e 0,04%, respectivamente. O coeficiente de relacionamento médio (AR), taxa de endogamia (ΔF) e tamanho efetivo com base no ΔF foram de 0,63%, 0,02% e 463,56, respectivamente. O intervalo de geração (IG) médio quando se considera progênies que se tornaram reprodutoras e todas as progênies nascidas foi de 2,39 e 2,17 anos, respectivamente. O nú... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of the study was to evaluate inbreeding, reproductive and growth traits of Red-winged Tinamou (Rhynchotus rufescens) in captivity. The genealogical database was composed of 1500 animals registration that borned between 2005 and 2016, in which the population parameters were evaluated by ENDOG v.4.8 and INBUPGF90 softwares. The reproductive and growth traits evaluated were: number of eggs/month (NE30), egg weight (EW), circumference of the egg longitudinal axis (CE), fertility, hatchability, sperm quality, birth weight (BW), weight body and perimeters of chest (CP) and thigh (TP). The preparation of the database and the initial statistic were performed in SAS statistical program. The Gompertz non-linear model was adjusted to 1300 data of weight body, CP and TP by age to explain the animals growth. Eight weight classes for certain ages were analyzed for variance analysis: Weight at 28 (W28), 56 (W56), 84 (W84), 112 (W112), 140 (W140), 168 (W168), 200 days (W200) and above 300 days (W>300). The mean inbreeding coefficient (F) through ENDOG v.4.8 and INBUPGF90 were 0.036% and 0.04%, respectively. The average relatedness coeficient (AR), increase in inbreeding (ΔF), and effective population size (Ne) using ΔF were 0.63%, 0.02% and 463.56, respectively. The generation intervals (GI) when considering progenies that became reproductive and all progenies born was 2.39 and 2.17 years, respectively. The effective number of founders (fe) and ancestors (fa) in the reference population was 100 and 93, respectively, with 214 individuals explaining genetic diversity. The estimated mean for EW and CE were 57.3 ± 5.5 g and 15.8 ± 0.65 cm, respectively 33% of births were presented, with 44% fertility and 76% hatchability. In the semen evaluation, the mean values of volume, sperm concentrati... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:39:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-17. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:06Z : No. of bitstreams: 1 000864722.pdf: 2629115 bytes, checksum: 66c11f771d4567d46705749086273afb (MD5) / Os procedimentos durante a sexagem pelo citômetro de fluxo garantem a acuidade de 85%, mas causam danos na viabilidade espermática que levam a baixa taxa de prenhez após os 90 dias. Os objetivos dessa Dissertação foram: 1) caracterizar a expressão gênica diferencial em transcriptoma de espermatozoides congelados pelo método convencional, sexados por centrifugação em gradiente de densidade ou sexados por citometria de fluxo; 2) comparar as taxas de clivagem e de blastocistos produzidos in vitro de bovinos utilizando sêmen convencional, sexado por citometria de fluxo ou por centrifugação em gradiente de densidade. Os grupos experimentais para sêmen e embriões foram: 1) grupo controle: sêmen convencional submetido ao gradiente de PercollTM 45/90% e respectivos embriões produzidos com esse sêmen; 2) grupo gradiente: centrifugação em gradiente de densidade e respectivos embriões produzidos com esse sêmen; 3) grupo citometria: sêmen sexado pelo citometro de fluxo, submetido ao mini gradiente de PercollTM 45/90% e respectivos embriões produzidos com esse sêmen. O RNA total foi extraído dos espermatozoides (20 x 10 6 células) obtendo-se 400 ng RNA/ 20 x 10 6 células/ animal, ou seja, 20 fg RNA por espermatozoide. Entretanto, não foi posível a construção da biblioteca de cDNA, provavelmente, devido ao alto grau de degradação do RNA. Os Complexos cumulus oócito (COCs) classificados como graus 1, foram aspirados de folículos antrais de 3 a 8 mm de diâmetro a partir de ovários de abatedouros e maturados durante 18 horas em estufa a 38,5°C, 100% de umidade e atmosfera de 5% de CO2 em ar. Os oócitos maturados serão colocados em contato com os espermatozoides previamente preparados para fecundação e incubados por 20 horas em 5% de CO2, na temperatura de 38,5°C. Os prováveis zigotos serão lavados por três vezes em meio SOF (meio sintético de fluido de oviduto) sem SFB e sem glicose e cultivados e transferidos... / The procedures for sexing by flow cytometry guarantee the accuracy of 85%, but cause damage in sperm viability leading to lower pregnancy rate after 90 days of pregnancy. The objectives of this study were: 1) to characterize differential gene expression in transcriptome of spermatozoa frozen by conventional method, sexed by density gradient centrifugation, by flow cytometry. 2) Compare blastocyst and cleavageratesproduced in vitro by conventional semen sexed by flow cytometry and by density gradient centrifugation. The experimental groups for semen and embryos were: 1) control group: conventional semen subjected to PercollTM gradient of 45/90% and their embryos produced with this semen, 2) gradientgroup: centrifugation in density gradient and their embryos produced with this semen, 3) cytometry group: semen sexed by flow cytometer, subjected to PercollTMmini gradient 45/90% and their embryos produced with this semen. Total RNA was extracted from sperm (20 x 10 6 cells) and it was possible to extract 400 ngRNA/ 20x10 6 cells/animal or it means, 20 fg of RNA per spermatozoa. However cDNA libraries were not built, probably due a high RNA degradation. The cumulus oocyte complexes (COCs) were classified as grade 1, aspirated from antral follicles with 3-8 mm in diameter, ovariesfromslaughterhouse were used and matured for 18 hours in an incubator at 38.5°C, 100% humidity and atmosphere of 5% of CO2 in air. The matured oocytes are going to be placed in contact with the prepared spermatozoa for fertilization and incubated for 20 hours in 5% CO2 at a temperature of 38.5 °C. Presumptive zygotes are going to be washed three times in SOF (half synthetic oviduct fluid) without FBS and without glucose, cultivated and transferred to plates with four wells containing 500 ul of the same medium used for washing zygotes after fertilization. Embryonic development was evaluated 7-8 days after fertilization. The cleavage and blastocysts rates were ...

Orientador: Elizabeth Romagosa / Banca: Laura Helena Orfão / Banca: Luis David Solis Murgas / Banca: Marcos Weingartner / Banca: Adilson Reidel / Resumo: O objetivo do trabalho foi de adaptar metodologias de análises espermáticas e aprimorar o processo de fertilização artificial e condições de estocagem de gametas de surubim-do-paraiba, Steindachneridion parahybae: espécie de peixe criticamente ameaçada de extinção. Para tanto, foram realizados quatro ensaios experimentais: (1) validação de método e avaliação dos parâmetros espermáticos por meio de software livre. (2) determinação da dose inseminante e volume de água empregados na fertilização artificial; (3) estocagem de ovócitos in natura em quatro temperaturas ao longo de 355 minutos; (4) estocagem do sêmen in natura em quatro temperaturas ao longo 112h. Observou-se que o método de análise espermática utilizando o software de código aberto ImageJ/plugin CASA é uma ferramenta eficiente, exata, objetiva e barata, além de possibilitar uma nova perspectiva de análises em peixes nativos. As configurações estabelecidas no presente trabalho poderão servir de base para novos trabalhos relacionados às análises espermáticas do surubim-do-paraíba, bem como de outras espécies. Verificou-se que a quantidade de espermatozóides e o volume de água interferem diretamente no procedimento de fertilização artificial, com melhores resultados na utilização de 5,5×106 espermatozóides ovócito-1 e 1,0mL de água g-1 de ovócitos. Foi observado que a estocagem de ovócitos e sêmen de forma in natura não é recomendada em ambientes com temperaturas superiores a 25ºC e inferiores a 15ºC. Temperaturas intermediárias (15-25ºC) possibilitam melhores condições e prolongam a qualidade dos gametas, entretanto, recomenda-se em procedimentos de fertilização artificial da espécie, a coleta do sêmen antes que os ovócitos. Os resultados obtidos no presente trabalho além de proporcionarem aumento das... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim was to adapt methodologies of sperm analysis and to improve the artificial fertilization process and gamete storage conditions of surubim-of-paraiba, Steindachneridion parahybae: critically endangered fish species. So that, four experimental tests were performed: (1) validation of method and evaluation of sperm parameters using free software. (2) determination of the inseminating dose and water volume used in artificial fertilization, (3) storage of fresh oocytes into four temperatures over 355 minutes, (4) storage of fresh semen into four temperatures over 112h. It was observed that the sperm analysis method using open source software ImageJ/plugin CASA is an effective tool, accurate, objective and inexpensive, besides enables a new perspective of the analysis on the native fish. The settings established in this study could serve as a basis for further work related at sperm analysis of surubim-do-paraiba and other species. It was found that sperm quantity and water volume interfere directly in the procedure of artificial fertilization, with improved results on usage of 5.5×106 spermatozoa oocyte-1 and 1.0 ml of water g-1 of oocyte. It was observed that the fresh oocytes and sperm storage is not recommended in environments with temperatures above 25ºC and below 15ºC. Intermediate temperatures (15-25ºC) enable better results and prolong the gametes quality, however, it is recommended in the artificial fertilization procedures the semen collection before the oocytes. The results obtained in this study providing increased rates of fertilization and hatching, besides to allow gametes optimization through of the utilization of controlled manner, and with satisfactory quality for more time after collection. Besides, these results provide a basis for future research, contributing to the... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Laura Satiko Okada Nakaghi / Coorientador: Alexandre Ninhaus Silveira / Banca: Elizabeth Romagosa / Banca: Sergio Fonseca Zaiden / Banca: George Shigueki Yasui / Banca: Paulo Sérgio Ceccarelli / Resumo: A Tese de Doutorado foi estruturada em três capítulos, além da "Introdução Geral", que abrange uma revisão bibliográfica das espécies em estudo e dos temas abordados, e das "Considerações Finais". Os três capítulos darão origem a artigos científicos em revistas indexadas. O primeiro artigo (Capítulo I) descreve os parâmetros seminais e a ultraestrutura dos espermatozoides de Brycon vermelha, "vermelha" (Characiformes, Characidae). O sêmen da B. vermelha possuiu consistência viscosa, e concentração espermática média de 4,34 ± 0,75x1010 espermatozoides.mL-1. O tempo de motilidade espermática, quando ativado com água destilada, foi curto, sendo necessários 46,48 ± 0,07 segundos para perda da motilidade de 100% dos espermatozoides. A análise dos espermatozoides por MEV revelou três regiões distintas: cabeça, peça intermediária e flagelo, sendo cada região caracterizada detalhadamente em MET. Tais características sugerem que os espermatozoides de B. vermelha apresentam características ancestrais próprias de peixes com fecundação externa classificando-os como "espermatozoides aquáticos uniflagelados anacrossomais", ou seja, aquasperm do Tipo I. Estas informações são as primeiras em relação ao sêmen e espermatozoides de B. vermelha, podendo ser uma referência para futuros estudos, embasando especialmente pesquisas que adotem biotécnicas, como a criopreservação e androgênese. O segundo artigo (Capítulo II) descreve, ultraestruturalmente, as alterações dos espermatozoides da Brycon orbignyanus, "piracanjuba" (Characiformes, Characidae) durante o processo de criopreservação. O exame ultraestrutural dos espermatozoides descongelados criopreservados em soluções contendo DMSO, metilglicol e metanol, em três tempos de armazenamento (1 dia, 1 mês e 1 ano), revelou a presença de alterações no espermatozoide, variando desde ... / Abstract: The doctoral thesis consisted of three main chapters besides the "General Introduction", which includes a bibliographic review of the species studied and the topics discussed, and the "Final Remarks". Scientific research articles will be published from the data of the three chapters in the scientific journals listed in the index. The first scientific article (Chapter I) describes the seminal parameters and the spermatozoa structure of Brycon vermelha, "vermelha" (Characiformes, Characidae). The semen of the Brycon vermelha is viscous and contains, in average, 4.34 ± 0.75x1010 spermatozoa.mL-1. Spermatozoa motility was of short duration when activated with distilled water, 46.48 ± 0.07 seconds until 100% of spermatozoa lost their motility. Scanning transmission electron microscopy (STEM) of spermatozoa revealed three distinctive parts: head, middle piece and tail (flagellum). Each part was analysed in detail by transmission electron microscopy (TEM). The characteristics observed suggest that the spermatozoa of B. vermelha posses ancestral characteristics of fish that reproduce by external fertilization, and can thus be classified as "uniflagellate anacrosomal aquasperms", or aquasperms Type I. These are the first reports on B. vermelha semen and spermatozoa and, therefore, could be used as a reference and benchmark for research studies using biotechniques such as cryopreservation and androgenesis. The second scientific article (Chapter II) describes the ultrastructural alterations of Brycon orbignyanus, "piracanjuba" (Characiformes, Characidae) spermatozoa after cryopreservation. Spermatozoa were cryopreserved for 1 day, 1 month or 1 year in solutions containing DMSO, methyl glycol and methanol. The ultrastructural analysis of the frozen-thawed spermatozoa revealed alterations varying from small damages to the different parts of the cell to total destruction of spermatozoa ... / Doutor

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-09-04T12:41:05Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2165872 bytes, checksum: 7b20ed84916fcf93be218e2ce4393822 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-04T12:41:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2165872 bytes, checksum: 7b20ed84916fcf93be218e2ce4393822 (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A ordem Hemiptera compreende um grupo diversificado de insetos com cerca de 89 mil espécies descritas e agrupadas nas quatro subordens: Heteroptera, Sternorrhyncha, Coleorrhyncha e Auchenorrhyncha. Esta última possui mais de 25 mil espécies descritas dentro de duas grandes infraordens: Cicadomorpha (Cercopoidea, Cicadoidea e Membracoidea) e Fulgoromorpha (Fulgoroidea). A subordem Heteroptera é dividida nas infraordens: Enicocephalomorpha, Dipsocoromorpha, Gerromorpha, Nepomorpha, Leptopodomorpha, Pentatomomorpha e Cimicomorpha. Ela possui mais de 400 mil espécies descritas que podem ser predadoras, fitófagas e hematófagas caracterizando essa subordem como de importância econômica e de saúde pública. As relações filogenéticas dentro dos Auchenorrhyncha e dos Heteroptera ainda são temas de muito debate. O conhecimento da biologia reprodutiva e da morfologia dos espermatozoides podem contribuir para estudos taxonômicos e filogenéticos dessas duas subordens. Nesse contexto, no presente trabalho descrevemos, usando as microscopias de luz e eletrônica de transmissão, a estrutura e ultraestrutura dos espermatozoides de Dalbulus maidis e Collaria oleosa e Prepops zetterstedti. No primeiro capítulo, nós redescrevemos os espermatozoides de D. maidis, que mediram de 118,1-128,5 μm de comprimento, sendo este valor cerca de três vezes menor do que o descrito anteriormente. A região da cabeça é formada por acrossomo e núcleo. O acrossomo é paracristalino e tem a base bifurcada que está encaixada em duas cavidades em um lado da região anterior do núcleo. O núcleo mediu 19,3-22,9 μm de comprimento e, em corte transversal, exibiu a forma de meio lua com uma fina projeção central, mas nas extremidades ele se mostrou oval. O flagelo consistiu de um axonema com 9+9+2 microtúbulos, dois derivados mitocondriais simétricos, dois corpos acessórios associados a uma pequena estrutura sub-elipsoidal e um "material centro-flagelar". A porção final do flagelo de todos os espermatozoides era ramificada em três filamentos. No segundo capítulo nós caracterizamos morfologicamente os espermatozoides de dois percevejos da família Miridae, C. oleosa e P. zetterstedti. Os espermatozoides de C. oleosa e P. zetterstedti mediram 171,3 μm e 276,0 μm de comprimento, dos quais 24,7 μm e 27,2 μm representaram o núcleo, respectivamente. Em ambas espécies, essas células apresentaram na região de cabeça um acrossomo e núcleo, e no flagelo um axonema de 9+9+2 microtúbulos e dois derivados mitocondriais simétricos. Em C. oleosa, não em P. zetterstedti, o acrossomo é revestido por uma espessa camada de material denso. Na transição núcleo-flagelo das duas espécies foi observado um longo adjunto do centríolo cilíndrico formando uma ponte entre núcleo e os componentes flagelares, essa característica é exclusiva para Miridae. / The order Hemiptera comprises a diverse group of insects with about 89 thousand species described and group in four suborders: Heteroptera, Sternorrhyncha, Coleorrhyncha and Auchenorrhyncha. The latter has more than 25 thousand species described within two major infraorders: Cicadomorpha (Cercopoidea, Cicadoidea and Membracoidea) and Fulgoromorpha (Fulgoroidea). The suborder Heteroptera is divided in the infraordens: Enicocephalomorpha, Dipsocoromorpha, Gerromorpha, Nepomorpha, Leptopodomorpha, Pentatomomorpha and Cimicomorpha. It has more than 400 thousand species described that can be predatory, phytophagous and hematophagous, characterizing this suborder as of economic importance and public health. Phylogenetic relationships within Auchenorrhyncha and Heteroptera are still subjects of much debate. The knowledge of reproductive biology and morphology of spermatozoa can contribute to taxonomic and phylogenetic studies of these two suborders. In this context, the present work described, using light microscopy and transmission electron microscopy, the structure and ultrastructure of spermatozoa of Dalbulus maidis, Collaria oleosa and Prepops zetterstedti. In the first chapter, we redescribed the spermatozoa of D. maidis, which measured 118.1-128.5 μm in length, being about three times smaller than that previously described. The head region is formed by acrosome and nucleus. Acrosome is paracrystalline and has a bifurcated base which was docked in two cavities on one side of the anterior region of the nucleus. The nucleus measured 19.3-22.9 μm in length and, in cross section, showed a half-moon shape with a thin central projection, but at the extremities it was oval. The flagellum consisted of an axonema with 9+9+2 microtubules, two symmetrical mitochondrial derivatives, two accessory bodies associated with a small sub-ellipsoidal structure and a ‘center-flagellar material’. The final portion of the flagellum of all spermatozoa was branched into three filaments. In the second chapter, we morphologically characterized the spermatozoa of two Miridae bugs, C. oleosa and P. zetterstedti. The spermatozoa of C. oleosa and P. zetterstedti measured 171.3 μm and 276.0 μm in length, of which 24.7 μm and 27.2 μm represented the nucleus, respectively. In both species, the head region presented acrosome and nucleus, and in the flagellum an axoneme of 9+9+2 microtubules and two symmetrical mitochondrial derivatives. Only in C. oleosa, not in P. zetterstedti, acrosome is coated by a thick layer of dense material. In the nucleus-flagellum transition of the two species a long cylindrical centriole adjunct forming a bridge between the nucleus and flagellar components was observed, this feature is exclusive to Miridae.

Orientador: Maria Luiza S. Mello / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T01:07:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martins_JoaoFlavioPanattoni_M.pdf: 1565897 bytes, checksum: 4fb6eebdac2cbbdd70e0ae1e5155148e (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: A incidência de patologias do complexo DNA-proteína, medida pelo método de metacromasia induzida, bem como os parâmetros vigor e motilidade, foram estudados em espermatozóides de touro provenientes de 42 partidas seminais congeladas a partir de 1973 a 1995. Os resultados indicam que esses parâmetros diferem estatisticamente para grupos de sêmen criopreservados por tempos diferentes. As anomalias no complexo DNA-proteína foram mais elevadas para as partidas de 1973 e 1974, diferindo de todas as demais, que por sua vez não diferiram entre si. Admite-se que o tipo de envasamento e o diluidor do sêmen tenham alguma participação nesses resultados, pois apenas as partidas de 1973 e 1974 foram envasadas em ampolas. Quanto aos parâmetros vigor e motilidade, houve diminuição nos seus valores, em função do aumento no tempo de criopreservação, porém não diretamente correlacionada ao tipo de envasamento. Especialmente para o parâmetro vigor foi observada uma distribuição não simétrica de valores inclusive para tempos de criopreservação mais recentes, como 1991 a 1995. Considerando-se que as técnicas de congelação e descongelação utilizadas neste período são muito semelhantes entre si, acredita-se que a existência de partidas seminais que apresentem vigor e motilidade muito abaixo da média do grupo possa ocorrer devido a condições de manutenção da congelação fora do padrão ideal, como por exemplo, utilizando-se níveis insatisfatórios de nitrogênio líquido no botijão de armazenamento de sêmen ou por manipulação excessiva ou inadequada das partidas seminais durante o período de criopreservação, causando exposição das mesmas à temperatura ambiente por tempo excessivo. Os dados levantados sugerem cautela na utilização de sêmen criopreservado por tempos muito longos, especialmente se associado a isto tiver sido utilizada a técnica de preservação e envasamento mais antiga. Cuidados adicionais de preservação deverão ser mantidos / Abstract: The incidence of the DNA-protein complex pathologies, measured by induced metachromasy method, as welI as vigor and motility pattems, were studied in bulI sperm from 42 ftozen batches from 1973 to 1995. Results indicate that these parameters differ statistically for cryopreserved semen groups in accord to different time. Complex DNA-protein anomalies were higher for 1973 and 1974 batches, differing ftom alI the remaining, which in tum did not differ among themselves. It is acknowledged that storage type and semen dilutor have some participation in these results because on1y 1973 and 1974 batches were stored in ampules. Decrease was shown in the amounts of vigor and motility parameters, as a function of increase in cryopreservation time, however, not direct1y correlated to storage type. A non-symmetric distribution of amounts was observed especially for vigor parameter, inc1uding more recent cryopreservation time as 1991 to 1995. Considering that the fteezing and thawing techniques used by both groups during this period are very similar it is assumed that the existence of seminal batches showing vigor and motility much below group's average could be due to not maintaining ideal freezing conditions, for instance , using unsatisfying levels of liquid nytrogen in the semen storage tank or due to excessive or inadequate manipulation of semen batches during cryopreservation period, causing their exposure to environmental temperature for excessive time. ColIected data suggest caution when using cryopreserved semen for very long periods of time especialIy if the older preservation and storage technique has been utilized associated to it. Additional preservation measures need to be kept / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas

Evalúa los criterios analíticos del espermatograma y cuál es su nivel de cumplimiento en laboratorios clínicos de Lima Metropolitana en el año 2016. Realiza un estudio descriptivo de tipo transversal. Utiliza listas de chequeo para la recolección de información. Participan técnicos de laboratorio y tecnólogos médicos que realizan la prueba de espermatograma; procedentes de laboratorios clínicos de Lima Metropolitana. La lista de chequeo fue validada mediante el método de juicio de expertos y completada por un observador mientras el profesional de laboratorio procesaba la muestra. Se usaron los programas Microsoft Excel 2003 y IBM SPSS Statistics Visor versión 23 para el análisis estadístico. Se obtuvieron 31 listas de chequeo; 21 tecnólogos médicos y 10 técnicos de laboratorio clínicos; en 11 laboratorios de Lima Metropolitana. Encuentra que el mayor nivel de cumplimiento en el procesamiento del espermatograma por laboratorio fue de 64% y por total de profesionales de laboratorio fue del 51%; clasifican la movilidad total en tres categorías, utilización de la coloración de Papanicolau y evaluación de la concentración espermática fueron del 36%, 9% y 100% respectivamente por laboratorio. El porcentaje de cumplimiento del protocolo de trabajo es del 63.4% para tecnólogos médicos y 56.1% para técnicos de laboratorio clínico. Concluye que el nivel de cumplimiento del espermatograma de los laboratorios clínicos no fue del cien por ciento, asimismo, se estableció que los criterios analíticos empleados son los recomendados por la OMS; pero algunos criterios analíticos son excluidos de su protocolo de trabajo según lo crea conveniente el laboratorio. Estos hallazgos sugieren una necesidad urgente de estandarizar el análisis de semen con controles de calidad aceptables para cada parámetro, y desarrollar un programa de control de calidad nacional para que los resultados sean repetibles y significativos. / Tesis