Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El mecanismo que explicaría la fisiopatología de la hipertensión arterial esencial se ha vinculado con la presencia de estrés oxidativo, el que se manifestaría con disfunción endotelial y daño sobre biomoléculas. El objetivo de esta memoria fue medir parámetros bioquímicos de defensas antioxidantes y biomarcadores de estrés oxidativo en plasma y eritrocitos de pacientes hipertensos esenciales comparados con controles sanos, con el fin de poder correlacionar estos datos con la presentación de hipertensión arterial esencial. Se realizó un estudio de carácter prospectivo o longitudinal tipo cohorte, consistente en seleccionar pacientes hipertensos esenciales, sexo masculino, entre 30 y 65 años de edad, a los cuales se les aplicó una evaluación clínica estandarizada. Por cada paciente hipertenso seleccionado se incorporó al protocolo de estudio un control sano, normotenso, del mismo rango de edad. A un grupo de 31 pacientes hipertensos esenciales y 35 sujetos normotensos se les tomo muestra de sangre y plasma una vez cumplida su evaluación clínica. Para evaluar los niveles de defensas antioxidantes a nivel plasmático se midió la capacidad antioxidante del plasma (FRAP, ferric reducing ability of plasma) y a nivel del eritrocito se midió la actividad enzimática de las enzimas antioxidantes superóxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT) y glutatión peroxidasa (GSH-Px), y la relación glutatión reducido/glutatión oxidado (GSH/GSSG). La evaluación de estrés oxidativo se realizó mediante los índices de lipoperoxidacion medidos en plasma (F2-isoprostanos) y en el eritrocito (MDA, malondialdehido). Los pacientes hipertensos esenciales respecto a los sujetos controles presentaron valores menores de FRAP en plasma y actividad enzimática de SOD, CAT Y GSH-Px en el eritrocito, mostrando diferencia significativa entre ambos grupos (p<0.001). Para el caso de la relación GSH/GSSG medida en el eritrocito, pese a que se encontró disminuida en pacientes hipertensos respecto a los controles, esta no presentó diferencia significativa (p = 0.403). Por otra parte, los índices de lipoperoxidación se encontraron incrementados en pacientes hipertensos respecto a los controles, tanto para la medición de F2-isoprostanos plasmáticos, como para la concentración de MDA a nivel eritrocitario, mostrando diferencia significativa para ambos grupos (p<0.001). Los valores obtenidos para defensas antioxidantes medidos en plasma y eritrocito, se correlacionaron negativamente con las cifras de presión arterial sistólica (PAS) y presión arterial diastólica (PAD), y los valores obtenidos en los biomarcadores de lipoperoxidación se correlacionaron positivamente con las cifras de PAS y PAD. Estos resultados permiten reafirmar la contribución que tiene el estrés oxidativo en el desarrollo de hipertensión arterial esencial humana, lo que permitiría establecer las bases para instaurar un tratamiento antioxidante en aquellos pacientes portadores de esta patología con la finalidad de atenuar los efectos producidos por los radicales libres, y como beneficio adjunto la prevención de otras enfermedades crónicas mediadas por estrés oxidativo.

Se ha estudiado los efectos de xenobióticos alimentarios: el embutido hot dog (20 % dieta) y el aditivo nitrito de sodio (5 mg/d), en hígado de ratas después de un tratamiento a corto plazo (12 semanas). Se midió como indicador del estrés oxidativo el grado de lipoperoxidación usando el método de formación del complejo malondialdehido-ácido tiobarbitúrico. El sistema de detoxificación se midió en función de las actividades de la SOD (E. C. 1.15.1.1) por el método de Misra y Fridovich modificado por Sun y Zigman y de la glutation S-transferasa (E. C. 2.5.1.18) por el método de Habig y colaboradores.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor. / Describe la controversia respecto al papel que puede jugar la hipoxia asociada a grandes alturas (> 3000 msnm) en las vías de producción de especies reactivas de oxígeno (EROs). Asimismo se desconoce el papel de Mieloperoxidasa (MPO) y Ceruloplasmina (CP) en la generación de estrés oxidativo. En el presente estudio se postula que existe diferencia entre las actividades de MPO, CP y estrés oxidativo en grandes alturas y a nivel del mar. Para ello se evaluó la actividad enzimática de MPO, CP y el nivel de estrés oxidativo en pulmón, cerebro y corazón de cobayos nativos de grandes alturas (Cerro de Pasco, 4330 msnm) en comparación con un grupo control de nivel del mar (Lima, 150 msnm). Asimismo se determinó la asociación que existe entre los niveles de MPO, CP y estrés oxidativo mediante correlaciones de sus valores a grandes alturas y a nivel del mar. El estrés oxidativo se evaluó mediante la determinación de Malondialdehído (MDA) y Productos avanzados de oxidación protéica (AOPP) en pulmón, cerebro y corazón de cobayos. En esta investigación se encontró que no existe diferencia significativa entre los niveles de MPO, CP y estrés oxidativo en cerebro y corazón de cobayos nativos de grandes alturas y de nivel del mar. Sin embargo si se encontró diferencia significativa (p<0.05) entre los niveles de MPO en pulmón de cobayos de grandes alturas y de nivel del mar. Además los niveles de MDA y AOPP en corazón difieren significativamente (p<0.05) a grandes altura y a nivel del mar. Por lo tanto se concluyó que la actividad enzimática de MPO y CP en cerebro y corazón de cobayos tanto de nivel del mar como de grandes alturas son similares. Además el nivel de estrés oxidativo en corazón de cobayos es diferente a los niveles de sus similares a nivel del mar. No obstante estos niveles (MDA, AOPP) en pulmón y cerebro a grandes alturas y a nivel del mar no difieren. Por último existe diferencia entre los niveles de MDA y AOPP en corazón de cobayos de grandes alturas y de nivel del mar. / Tesis

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Actualmente se ha involucrado al estrés oxidativo en la patogenia de la hipertensión arterial esencial. El aumento de radicales libres, sumado a una disminución de las defensas antioxidantes, pueden inducir disfunción endotelial con el consiguiente aumento de la presión arterial. Es por este motivo, que durante la última década las terapias antioxidantes han generado un considerable interés por parte de los investigadores. Sin embargo, los resultados de la eficacia clínica de los tratamientos antioxidantes contra la hipertensión arterial esencial, han resultado controvertidos. El objetivo del presente estudio consiste en comprobar la hipótesis que la administración oral de vitaminas C + E reduce el estrés oxidativo, conjuntamente con la presión arterial en pacientes con hipertensión arterial esencial. Se realizó un estudio prospectivo, doble ciego, controlado con placebo, en una población de 60 pacientes hipertensos esenciales de sexo masculino, entre 35 y 65 años de edad, sin factores de riesgo tales como tabaquismo, alcoholismo, obesidad o dislipidemia. Los participantes fueron separados en forma aleatoria en 2 grupos. El primer grupo de 30 pacientes fue tratado con vitaminas C (1000 mg/día) + vitamina E (400 UI/día) durante dos meses. En cambio, el segundo grupo de 30 pacientes fue tratado con placebo durante igual período. Antes y después del tratamiento se midió la presión arterial durante 24 horas a través de un Holter. Además, se evaluaron las defensas antioxidantes a través de la determinación de la capacidad antioxidante del plasma (FRAP, ferric reducing ability of plasma) y la actividad de las enzimas antioxidantes superóxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT) y glutatión peroxidasa (GSH-Px), la relación glutatión reducido/oxidado (GSH/GSSG) en eritrocitos y las concentraciones plasmáticas de vitamina C y E. La evaluación del estrés oxidativo se realizó a través de la determinación de F2-isoprostanos en el plasma y malondialdheido (MDA) en eritrocitos. Los pacientes hipertensos esenciales tratados con vitaminas antioxidantes, respecto de los tratados con placebo, presentaron menores valores de presión arterial sistólica y diastólica (p < 0.001) y mayor actividad enzimática de SOD, CAT y GSH-Px en los eritrocitos (p < 0.001). También los pacientes hipertensos esenciales tratados con vitaminas antioxidantes presentaron mayores valores de la capacidad antioxidante del plasma y de la relación GSH/GSSG en el eritrocito, respecto de los pacientes tratados con placebo. A cerca de los parámetros relacionados con el estrés oxidativo, los pacientes hipertensos esenciales tratados con vitaminas demostraron una menor hipoperoxidación, comparados con los pacientes tratados con placebo. Por lo tanto, las concentraciones plasmáticas de F2- isoprostanos de los pacientes hipertensos tratados con vitaminas fueron significativamente más bajas que aquellas de los pacientes tratados con placebo. Finalmente, en ambos grupos, las cifras de presión arterial se correlacionaron positivamente con las concentraciones plasmáticas de F2-isoprostanos y negativamente con las concentraciones plasmáticas de FRAP. Estos resultados nos permiten confirmar que el estrés oxidativo está involucrado en la patogénesis de la hipertensión arterial esencial y que el aumento del estatus antioxidante a través de la administración oral de vitaminas C + E, reduce la presión arterial en estos pacientes.

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La fisiopatología de la preeclampsia incluiría una disfunción endotelial, que estaría estar mediada por estrés oxidativo. El objetivo de esta memoria fue establecer la presencia de estrés oxidativo a través de parámetros bioquímicos del plasma, de eritrocitos y de la placenta y compararlos en mujeres con embarazos normales y con PE al término del embarazo. Se realizó un estudio de tipo retrospectivo seleccionando mujeres embarazadas chilenas controladas en el Departamento de Obstetricia y Ginecología, Hospital Clínico de la Universidad de Chile. A un grupo de 30 mujeres con PE y a otro grupo de 30 mujeres con embarazo normal (control) se les tomó muestras de plasma, eritrocitos y placenta al término del embarazo. Se realizaron determinaciones de las defensas antioxidantes a nivel plasmático, tales como la capacidad antioxidante del plasma (FRAP, ferric reducing ability of plasma) y a nivel tisular (eritrocitos y placenta), a través de evaluar la actividad de enzimas antioxidantes como superóxido dismutasa (SOD), Catalasa (CAT) y glutatión peroxidasa (GSH-Px). Por otro lado el estrés oxidativo se cuantificó mediante los índices de lipoperoxidación [F2-isoprostanos libres y malondialdehido (MDA)] y de carbonilación de proteínas (grupos carbonilos), analizando su impacto en la actividad enzimática de la (Na+ + K+) – ATPasa en eritrocitos y placenta. Las mujeres con PE, respecto de sus controles, presentaron valores menores de FRAP, en plasma, de actividad de SOD, CAT y GSH-Px en eritrocitos y de actividad de SOD y CAT en placenta (p<0.05). Por otra parte, se detectó una mayor lipoperoxidación en las mujeres con PE respecto de sus controles, lo que se reflejó tanto en los elevados niveles plasmáticos de F2-isoprostanos libres en plasma como en el contenido de malondialdehido en eritrocitos y placenta (p<0.05). La carbonilación de proteínas en plasma fue mayor en las pacientes preeclámpticas que sus controles (p<0.05), confirmando el mayor nivel de estrés oxidativo en las primeras. También se detectó que la actividad enzimática de la (Na+ + K+) – ATPasa, tanto en eritrocitos como en placenta, era menor en las pacientes con PE que en sus controles (p<0.05). Estos resultados apoyan la participación del estrés oxidativo en la patogenia de la PE y proporcionan las bases para la aplicación de un tratamiento precoz con antioxidantes, con el propósito de prevenir o atenuar aquellas manifestaciones derivadas de un aumento de la producción de especies reactivas del oxígeno

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La preeclampsia (PE) es una de las complicaciones más frecuentes del embarazo, siendo una de las principales causas de morbi-mortalidad materna y perinatal. A pesar de la importancia de este síndrome, el conocimiento que se tiene sobre su etiopatogenia es limitado. Sin embargo, existen diversas teorías que incluyen la participación de factores genéticos, nutricionales, vasculares y autoinmunes. Existe evidencia que indica que el estrés oxidativo de la placenta está involucrado en la fisiopatología de la PE y se le ha propuesto como promotor de disfunción de células endoteliales y de un desarrollo insuficiente de la placenta, por una disminución de la angiogénesis normal, ambos característicos en los casos de PE. El presente estudio incluyó 220 muestras sanguíneas obtenidas de 1051 pacientes con control perinatal completo, que acudieron a la Unidad de Medicina Fetal del Hospital Clínico de la Universidad de Chile con 11-14 semanas de gestación entre los meses de Agosto 2004 y Marzo 2006. Las pacientes resultantes después de aplicar los criterios de exclusión detallados más adelante, se separaron en 3 grupos: preeclámpticas (32), pacientes con restricciones de crecimiento fetal (45) y el grupo control (143). Las determinaciones incluyeron: concentración de marcadores de estrés oxidativo (ácido úrico y MDA), marcadores de disfunción endotelial (PAI-1, PAI-2, ICAM, VCAM) y marcadores de actividad angiogénica (sFlt1, PIGF) en plasma de mujeres embarazadas durante el primer tercio de la gestación. Para esto se utilizaron las técnicas de HPLC, espectrofotometría, ELISA y FRAP. El análisis estadístico se realizó mediante la prueba t de Student (p<0,05) y prueba de correlación de Pearson (p<0,05). Se incluyó un control obtenido de forma aleatoria por cada paciente con patología. Los resultados mostraron que el promedio para sFlt1 en el grupo de pacientes con PE (1846,05 ± 222,30 nM/ml) fue estadísticamente diferente del grupo control (1176,44 ± 131,61 nM/ml) (p = 0,016). Para las demás variables no se observaron diferencias significativas entre los grupos. Al aumentar los niveles séricos de sFlt1, los niveles séricos de FRAP disminuyen (r = -0,56; p = 0,002), lo que indica que existe una relación inversa entre estas 2 variables. Las demás variables no presentaron correlación estadísticamente válida en esta edad gestacional. De esto se deduce que existe asociación entre la concentración plasmática de esta variable y la presentación de la enfermedad. Se concluye que de las variables medidas precozmente, la única que se encuentra asociada a la presentación de la enfermedad en este estado de gestación precoz es sFlt1. Con esto se confirma la participación de esta molécula en la patogénesis de la PE, lo cual deja abierto el tema a nuevos estudios que se realicen en etapas tempranas de gestación y que comprendan tratamientos posibles de realizar en una etapa temprana con miras a la prevención de la enfermedad / Proyecto FONDECYT N°1050482

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Antecedentes de la investigación. Las species reactivas de oxígeno (ERO), estarían involucradas en la producción de modificaciones estructurales y eléctricas, que hacen susceptible al tejido auricular a arritmias y disfunción contráctil. Por lo tanto, un reforzamiento del sistema de defensa antioxidante protegería al corazón del daño hipóxico generado por las especies reactivas al oxigeno en la cirugía cardiaca no congénita con circulación extracorpórea. Hipotesis. En pacientes sometidos a cirugía de cardiopatías no congénitas, la suplementación previa con acidos grasos omega-3 y vitaminas antioxidantes C y E, reduce la ocurrencia de fibrilación auricular postoperatoria (FAPO). Métodos. En un ensayo clínico doble-ciego, se separaron al azar 90 pacientes en dos grupos, a placebo o von una dosis diaria de omega 3, desde 7 días previos a la cirugía programada. Dos días antes de la cirugía se adicionó la suplementación de vitaminas (C y E). Estos 3 suplementos/placebos se administraron en forma ininterrumpida hasta el alta. Se obtuvieron muestras de sangre: previo a la incorporación de las vitaminas antioxidantes, al momento de la intervención quirúrgica, y postoperatoria temprana para la determinación del estatus antioxidante (relación glutatión reducido (GSH)/oxidado (GSSG), enzimas antioxidantes) y del estatus proxidante (biomarcadores de estrés oxidativo (malondialdehido y carbonilación proteica). En el acto quirúrgico se obtuvo tejido auricular (orejuela derecha) conservado en nitrógeno para su posterior análisis bioquímico del estatus antioxidante/proxidante. Se compararon a través del test de Student y el estudio de correlaciones se realizo de acuerdo al test de Pearson. Resultados. El uso de omega-3 y vitaminas antioxidantes atenuarían el daño oxidativo, logrando con la suplementación bajo este protocolo, una disminución en un 68,5% de la FAPO, junto con menores valores de biomarcadores de estrés oxidativo tanto en eritrocitos como en el tejido auricular, sumado a un mayor nivel de relación Glutatión (GSH/GSSG) en eritrocitos y mayor respuesta al estrés oxidativo de Superóxido dismutasa (SOD) eritrocitaria postoperatoria temprano y Glutatión peroxidasa (GSH-Px) operatoria en tejido auricular principalmente. Conclusiones. La suplementación con omega-3 y vitaminas antioxidantes atenúa el daño oxidativo en pacientes sometidos a cirugía cardíaca con CEC. Evidenciando posterior a la cirugía en el grupo suplementado una mayor actividad enzimática, in aumento de la relación de glutatión, y menores índices de biomarcadores de estrés oxidativo / Fondecyt: 1070948

Se determinó los niveles de actividad de las enzimas antioxidantes: Superóxido dismutasa (SOD) y catalasa (CAT); y la concentración de malondialdehído (MDA) como un indicador de la peroxidación lipídica, en eritrocitos de 48 personas aparentemente sanas: 24 residentes de Nueva Cajamarca (Región San Martín) y 24 residentes de Lima. En los sujetos de Nueva Cajamarca se encontró mayores niveles de actividad de las enzimas: catalasa (0,61  0,10 k CAT / g Hb) en relación con los de Lima (0,57  0,16 k CAT / g Hb), (p < 0,025) y superóxido dismutasa (2142,00  2685,07 U SOD / g Hb) que en los de Lima (1536,62  594,18 U SOD / g Hb), (p = NS) y mayor concentración de malondialdehído (11,55  4,68 ηmol MDA / g Hb) que los obtenidos en Lima (11,11  3,99 ηmol MDA / g Hb), (p = NS). -- Palabras clave: superóxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT), alondialdehído (MDA), peroxidación lipídica. / -- It was determined the activity levels of antioxidant enzymes: Superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT), and the concentration of malondialdehyde (MDA) as an indicator of lipid peroxidation in erythrocytes of 48 apparently healthy people: 24 residents of Nueva Cajamarca (Region San Martin, 856 m above sea level) and 24 residents of Lima (150 m above sea level). In Nueva Cajamarca subjects found higher levels of activity of the enzymes: catalase (0.61  0.10 k CAT / g Hb) in relation to those of Lima (0.57  0.16 k CAT / g Hb), (p <0.025) and superoxide dismutase (2142.00  2685.07 U SOD / g Hb) than in Lima (1536.62  594.18 U SOD / g Hb) (p = NS) and higher concentration of malondialdehyde (11.55  4.68 ηmol MDA / g Hb) than those obtained in Lima (11.11  3.99 ηmol MDA / g Hb) (p = NS) -- Key words: superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), malondialdehyde (MDA), lipid peroxidation.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La preclampsia es un síndrome del embarazo que se caracteriza por presentar hipertensión arterial, proteinuria y edema. Este síndrome tiene involucrado en su fisiopatología mecanismos como son el estrés oxidativo, una deficiente angiogenesis y disfunción endotelial. El objetivo de este estudio es evaluar un marcador de disfunción endotelial como es la dimetilarginina asimétrica y un marcador de estrés oxidativo como es el malondialdehido en mujeres preeclampticas como predictores de esta patología. Se realizó un estudio de cohorte retrospectivo seleccionando mujeres embarazadas chilenas controladas en el Departamento de Obstetricia y Ginecología, Hospital Clínico de la Universidad de Chile. A un grupo de mujeres con PE (casos) y a un grupo de mujeres con embarazos normales (controles) se les tomó muestras de plasma para determinar estos marcadores a las 12 y 22 semanas de gestación. El análisis de varianza no arrojó diferencias significativas entre mujeres preeclampticas y mujeres con embarazazos normales. Pero al analizar las mujeres que presentaron restricción de crecimiento fetal (RCF) a las 22 semanas se registró una diferencia significativa en los promedios de la dimetilarginina asimétrica entre casos y controles. Esto nos hace concluir que la dimetilarginina asimétrica tendría una importante relevancia fisiopatológica en las mujeres que cursan con restricción de crecimiento fetal.

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La exposición de ovejas a la altura disminuye la fertilidad. Esto se asocia a la hipoxia hipobárica y al estrés oxidativo secundario a la hipoxia. Este fenómeno ha sido estudiado en ovejas gestantes situadas a 3.600 m.s.n.m, a las que se les ha suministrado antioxidantes, observándose un efecto beneficioso tanto en la madre como en las crías, cuyos resultados varían según el tiempo de residencia en altura. En este trabajo se evaluó la expresión inmunohistoquímica de la óxido nítrico sintasa endotelial (eNOS) y el factor de crecimiento fibroblástico tipo 2 (FGF-2) en folículos ováricos y cuerpos lúteos, en respuesta a la exposición por largo o corto tiempo a la altura, así como el efecto de la administración de vitaminas antioxidantes, en ciclos estrales sin concepción en ovejas. A nivel folicular la expresión de la eNOS fue mayor en los animales mantenidos a baja altura y solo se observó un efecto significativo de las vitaminas en este mismo grupo de animales, provocando una disminución de la expresión del péptido. El FGF-2 en folículos no varió significativamente. La expresión de eNOS en cuerpo lúteo, aumentó significativamente (p< 0,05) en ovejas expuestas recientemente a la altura, lo que no se observó en ovejas bajo estas mismas condiciones, con suministro de vitaminas. FGF-2 fue menor en ovejas recientemente expuestas a la hipoxia. La administración de vitaminas antioxidantes disminuyó su expresión en ovejas nativas de altura, pero lo incrementó en las recién expuestas. En conclusión, la expresión inmunohistoquímica de eNOS y FGF-2 en respuesta a la hipoxia/estrés oxidativo difiere entre las diferentes estructuras ováricas / Proyecto FONDECYT 1100189