Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Quimica, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-25T17:33:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 292886.pdf: 8597080 bytes, checksum: bd44b5e868e71dbd18207bcc3dad0c5e (MD5) / Este trabalho descreve a microseparação de fases em estado sólido do filme preparado a partir de um copolímero em bloco composto do bloco poli(2-(metacriloiloxi)etilfosforilcolina), um bloco altamente biocompatível, e do bloco Poli(2-(diisopropilamina) metacrilato de etila), sensível ao pH. A auto-associação em solução do copolímero a base de poliestireno (PS) e de poliácido acrílico (PAA) e sua decoração com quitosana foram estudados, verificando a sua habilidade para incorporar e liberar o fármaco finasterida, um fármaco inibidor da enzima 5-alfa-redutase, que tem sido recomendada para o tratamento de alopécia androgenética. A morfologia de filmes de PMPC30-b-PDPA60 foi analisada utilizando SAXS e (S)TEM. Os filmes preparados pelo método casting a partir de soluções em etanol exibem uma morfologia cilíndrica, que sofre uma transição do tipo ordem-ordem sob tratamento térmico a 170°C, resultando em uma estrutura lamelar que coexiste com uma menor proporção de cilindros organizados em uma fase hexagonal compacta. Por outro lado, filmes do copolímero preparados em metanol não sofrem a mesma transição morfológica, obtendo-se estruturas pobremente organizadas, independente do tratamento térmico. Finalmente, estruturas lamelares são obtidas diretamente a partir de uma solução aquosa a pH 4, sem necessidade de tratamento térmico. Estes sistemas oferecem uma nova alternativa para a fabricação de estruturas lamelares que consiste de um material biomimético e anti-incrustante, expandindo a gama de possibilidades no campo de engenharia macromolecular. Outra estratégia adotada neste trabalho foi baseada no desenvolvimento de nanopartículas organizadas com propriedades de superfície biocompatíveis, formadas por vesículas poliméricas negativamente carregadas, a base de copolímeros em bloco de poliestireno (PS) e poli(ácido acrílico) (PAA), decoradas com quitosana, um polissacarídeo de carga oposta. A adsorção da quitosana com duas massas moleculares distintas (quitosana oligossacarídeo e quitosana de baixa massa molecular) sobre a superfície opostamente carregada de nanopartículas de PS139-b-PAA17 e PS404-b-PAA63 foi demonstrada por medidas de espalhamento de luz dinâmico, potencial zeta e caracterização morfológica. Na presença de quitosana, o potencial zeta das nanopartículas (na forma de vesículas poliméricas) torna-se positivo. Este resultado foi interpretado em termos de interações eletrostáticas, que induz a adsorção das cadeias de quitosana sobre a superfície das nanopartículas. Resultado que foi confirmado por observações comparativas a partir de técnicas microscópicas. Vesículas poliméricas decoradas ou não com diâmetros inferiores a 200 nm e com uma estreitafaixa de distribuição de tamanho foram obtidas para todos os sistemas investigados. O efeito da decoração das nanopartículas com quitosana sobre a permeação cutânea da finasterida, incorporada na parede hidrofóbica das vesículas poliméricas também foi avaliado. A permeação cutânea da finasterida foi estimada por parâmetros de permeabilidade, como fluxo, tempo de latência e coeficiente de permeabilidade do fármaco através de peles de orelha suína (modelo in vitro). Foi observada uma melhora na permeação da finasterida a partir do sistema nanoparticulado, especialmente para nanopartículas decoradas com quitosana. Nanopartículas preparadas pelo copolímero PS404-b-PAA63 decorado com quitosana demonstrou ser o sistema mais apropriado uma vez que promoveu uma maior retenção do fármaco na pele e baixos valores de fluxo de permeação, sugerindo que o sistema fornece uma alternativa como veiculo de liberação transdérmica para finasterida. / This work describes the microphase separation in bulk of an diblock copolymer comprising a highly biocompatible poly[2- (methacryloyloxy)ethyl phosphorylcholine] block and a pH-sensitive poly[2-(diisopropylamino) ethyl methacrylate] block (PMPC-b-PDPA). The self-assembly of an amphiphilic diblock copolymer based on polystyrene (PS) and poly(acrylic acid) (PAA) was studied in terms of their decoration with the chitosan, verifying their ability to incorporate and transdermally release the drug finasteride, a steroidal molecule 5-alpha-reductase inhibitor that has been recommended for the treatment of androgenetic alopecia. The morphology of PMPC30-b-PDPA60 films was analyzed using SAXS and (S)TEM. PMPC30-b-PDPA60 films cast from ethanol solution at room temperature exhibit a thermodynamically quasi-stable cylindrical morphology, which undergoes an order-order transition upon thermal annealing at 170 oC: the resulting lamellar structure coexists with a minor proportion of cylinders organized into a hexagonal compact phase. In contrast, copolymer films cast from methanol do not undergo the same morphological transition. Instead, short-range liquidlike structures are obtained regardless of the annealing processes. Finally, direct self-assembly to form a lamellar morphology at room temperature can be achieved by solvent-casting from aqueous solution at pH 4. These systems offer a new alternative for the fabrication of lamellar structures in which one layer is biomimetic and non-fouling, expanding the range of possibilities in the macromolecular engineering field. Another strategy adopted in this work was based on the development of well-organized nanoparticles with nature-bioinspired surface properties, formed between negatively charged polymersomes based on polystyrene (PS) and poly(acrylic acid) (PAA) block copolymers decorated with chitosan, an oppositely charged polysaccharide. The role of chitosan with two distinct molecular weights (chitosan oligosaccharide and low molecular weight chitosan) adsorption on the surface of oppositely charged PS139-b-PAA17 and PS404-b-PAA63 nanoparticles were demonstrated by dynamic light scattering measurements, zeta potential and morphological characterization. In the presence of chitosan, the zeta potential of polymersomes becomes positive. This result was interpreted in terms of electrostatic interactions, which induce a flat adsorption of the chitosan on the surface of the polymersomes. This result was further confirmed by a comparative observation by microscopy of bare and chitosandecorated polymersomes. Polymersomes with a diameter < 200 nm and a relatively narrow size distribution were obtained for both systems. The effect of chitosan decoration of self-assembled nanoparticles on skin penetration in vitro of finasteride was also evaluated, once incorporated in the wall hydrophobic of polymersomes. The skin permeation through pig ear skin of finasteride was estimated by the permeability parameters such as flux, lag time and permeability coefficient of finasteride. An improved permeation of finasteride from the nanoparticle system was observed, especially from nanoparticles decorated with chitosan. The PS404-b-PAA63 polymersome decorated with chitosan seems to be the most appropriate system since it provided higher drug retention in skin and low permeation flux values, suggesting that the PS-b-PAA/chitosan system provides an alternative for transdermal drug delivery system of finasteride.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-05-16T13:16:47Z No. of bitstreams: 1 Sergio Clementino da Costa.pdf: 1278139 bytes, checksum: 9762e5c57a26ef77c09e890e773a4e28 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-16T13:17:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sergio Clementino da Costa.pdf: 1278139 bytes, checksum: 9762e5c57a26ef77c09e890e773a4e28 (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / Finasteride and testosterone are hormones that have anti-androgenic action (inhibition of 5α-reductase) and androgen respectively, which can act as endocrine disruptors causing negative effects on aquatic animals and their offspring. Finasteride was initially developed to treat benign prostatic hyperplasia, however, was presented as a major discovery in the treatment of androgenetic alopecia (baldness) already the testosterone is the hormone responsible for secondary sexual characteristics and has the most active metabolite the dihydrotestosterone, main responsible for baldness. However, finasteride as well as testosterone are commonly used in various situations, both by men in the treatment against hair loss (finasteride) or sexual reversal of fish (testosterone), which increases the presence of these hormones in the aquatic environment. Once in the environment both finasteride and testosterone begin to have action of endocrine disruptors, being one of the most powerful aquatic pollutants. Because it has hydrophobic properties which reduces their bioavailability, such hormones can be complexed to cyclodextrins (CDs) to reduce this limitation, therefore its use in inclusion complexes would increase its solubility and absorption, and may change one or more hormonal pathways. In view of the foregoing, the present study aims to evaluate the toxic effects of the inclusion complex Finasteride β-cyclodextrin (β-CD) and Testosterone β-cyclodextrin (β-CD), through chronic exposure to sublethal concentrations under the embryos and adults of the zebrafish (Danio rerio). The work was aimed to evaluate the toxic effects of finasteride and testosterone free and complexed into cyclodextrin on the physiological and behavioral parameters of embryos and adults of the Danio rerio fish. The embryos were exposed for periods of 96 hours post-fertilization for the evaluation of mortality, teratogenic effects, and heart rate. The groups were divided into control, free finasteride (FIN) and testosterone (T) at the concentrations of 280, 560, 1120, 2240, 4480 ng/L, and finasteride (FIN-β-CD) and testosterone (T-β-CD) complexed into β-CD at concentrations of 280 and 4480 ng/L. Adults were exposed for a period of 60 days to evaluate behavioral changes and daily survival related to exposure to free finasteride (FIN) and testosterone (T) complexed into β-CD at concentrations 280 and 4480 ng/L. The embryos did not exhibit mortality at concentrations of 280 - 4480 ng/L in the all groups exposed. Similarly, it was not observed teratogenic effects in the groups exposed to different concentrations. In the heart frequencies of the embryos, significant variations were observed (p < 0 .05) when compared to the control group. Adults exposed to free andcomplexed finasteride and testosterone had significant alterations (p < 0.05) in the most active behaviors such as slow swim and fast swim, as well as in agonistic behaviors. It can be concluded that in tests with embryos, FIN and FIN-β-CD as well T and T- β-CD, may interfere in the heart rate and the exposure of adults to the same hormones promoted a reduction in their locomotor capacity and can increase in the aggressiveness of the animals. / A finasterida e a testosterona são hormônios que possuem ação anti-androgênica (inibição da 5α-redutase) e androgênica respectivamente, que podem agir como disruptores endócrinos causando efeitos negativos aos animais aquáticos e suas proles. A finasterida foi desenvolvida inicialmente para tratar a hiperplasia prostática benigna, porém, foi apresentada como uma grande descoberta no tratamento da Alopecia androgenética (calvície), já a testosterona é o hormônio responsável pelas características sexuais secundárias e tem como metabólito mais ativo a dihidrotestosterona, principal responsável pela calvície. Entretanto, a finasterida assim como a testosterona são comumente usadas em diversas situações, tanto por homens no tratamento contra a perda de cabelo (finasterida) ou na reversão sexual de peixes (testosterona), o que eleva as presenças desses hormônios no ambiente aquático. Uma vez no ambiente tanto a finasterida como a testosterona passam a ter ação de disruptores endócrinos, sendo um dos mais potentes poluentes aquáticos. Por possui propriedades hidrofóbicas que reduz suas biodisponibilidades, tais hormônios podem ser complexados a ciclodextrinas (CDs) o que reduzir esta limitação, logo sua utilização em complexos de inclusão aumentaria sua solubilidade e absorção, podendo alterar uma ou mais vias hormonais. Diante do exposto, o presente trabalho tem como objetivo avaliar os efeitos tóxicos do complexo de inclusão Finasterida β-ciclodextrina (β-CD) e Testosterona β-ciclodextrina (β-CD), através da exposição crônica em concentrações subletais sob os e embriões e adultos de zebrafish (Danio rerio). Os embriões foram expostos por períodos de 96 horas pós-fertilização para a avaliação da mortalidade, efeitos teratogênicos e frequência cardíaca. Os grupos foram divididos em: controle, finasterida (FIN) e testosterona (T) livres nas concentrações de 280, 560, 1120, 2240, 4480 ng/L, e finasterida (FIN-β-CD) e testosterona (T-β-CD) complexadas a β-CD nas concentrações de 280 e 4480 ng/L. Os adultos foram expostos por um período de 60 dias para a avaliar alterações comportamentais e sobrevivência diária relacionadas a exposição de finasterida (FIN) e testosterona (T) livres e complexadas (β-CD) nas concentrações 280 e 4480 ng/L. Os embriões, não apresentaram mortalidade nas concentrações de 280 - 4480 ng/L em todo os todos os grupos expostos. Efeitos teratogênicos, de forma semelhante também não foram observados nos grupos nas diferentes concentrações. Nas frequências cardíacas dos embriões, foram constatadas variações significativas (p <0,05) quando comparadas ao grupo controle em todos os grupos expostos. Os adultos expostos às concentrações de finasterida e testosterona livres e complexadas apresentaram modificações (p < 0,05) na frequência de exibição de comportamentos ativos como Nadar lento e Nadar rápido, como também nos comportamentos agonísticos. Conclui-se então, que em testes com os embriões, FIN e FIN-β-CD assim como T e T- β-CD, podem modificar suas frequências cardíacas e que a exposição dos adultos aos mesmo hormônios promoveram uma redução na sua capacidade locomotora e um aumento na agressividade dos animais.

Orientadores: Luis Antonio Violin Dias Pereira, Suzana de Fatima Paccola Mesquita / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-20T22:34:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Garcia_PatrickVianna_D.pdf: 2682268 bytes, checksum: c80303a2f196fc3cdb21e73865600ba4 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Durante o processo de maturação epididimária, proteínas secretadas pelo epidídimo interagem com os espermatozoides modificando-os funcionalmente. Cerca de 75% das proteínas que participam da maturação epididimária são secretadas pelas células epiteliais do segmento inicial e cabeça do epidídimo e 48% destas proteínas tem a síntese dependente de dihidrotestosterona (DHT), a qual é sintetizada a partir da testosterona pela ação da enzima 5 ? redutase. A DHT é de extrema importância para a fisiologia do sistema reprodutor masculino. Níveis elevados de DHT na vida adulta podem predispor a vários distúrbios, tais como a alopecia androgênica. Com o intuito de se minimizar os efeitos da DHT, a finasterida foi o primeiro inibidor da 5 ? redutase que recebeu aprovação clínica para o tratamento desses distúrbios.Um público cada vez mais jovem utiliza a finasterida como um método preventivo e paliativo contra a alopecia androgênica, com isso, estudos dos efeitos da finasterida no sistema reprodutor masculino são de grande interesse clínico. O ojetivo desse estudo foi avaliar as possíveis alterações no segmento da cabeça do epidídidmo e na qualidade espermática em animais submetidos ao tratamento agudo (15 dias), crônico (56 dias) e animais que tiveram o tratamento (agudo e crônico) interrompido por um período de 30 dias. Na administração aguda (15 dias) de finasterida em ratos observou-se algumas alterações na integridade da membrana plasmática do espermatozoide. A administração crônica (56 dias) de finasterida em ratos leva a alterações no epidídimo, tais como: redução do peso, alterações morfométricas-estereológicas, diminuição do tempo de trânsito do espermatozoide, redução da motilidade, alterações na integridade da membrana do espermatozóide e redução nos parâmetros de fertilidade desses animais. Mesmo com a interrupção do tratamento com finasterida (por 30 dias) a qualidade do espermatozóide continua comprometida. Dessa forma, estudos adicionais devem ser realizados para complementar o conhecimento existente sobre a fisiologia do epidídimo após a depleção DHT, sobre o tempo que necessário para a recuperação dos parâmetros de fertilidade após a interrupção do tratamento com finasterida, e se estes parâmetros podem ser totalmente recuperados / Abstract: During epididymal maturation, proteins secreted by epididymis functionally interact with the spermatozoa modifying it. About 75% of the proteins that participate in the epididymal maturation are secreted by the epithelial cells of the initial segment and caput of the epididymis and 48% of the synthesis is dependent on dihydrotestosterone (DHT), which is synthesized from testosterone by the action of the enzyme 5 ? reductase.The DHT is extremely important for the physiology of the male reproductive system. High levels of DHT in adulthood may predispose to various disorders such as androgenic alopecia. In order to minimize the effects of DHT, medications were produced with the purpose of inhibit the action of 5 ?-reductase and among those medications the finasteride was the first 5 ? reductase inhibitor that received clinical approval for the treatment of these disorders. A public increasingly young uses finasteride as a preventive and palliative method and against androgenic alopecia, in this way; studies of the effects of finasteride in the male reproductive system are of clinical and commercial interest. The aim of this study was to evaluate the possible alterations in the caput epididymis and sperm quality in animals submitted to acute (15 days) and chronic (56 days) treatment and animals with 30 days post- treatment. Acute administration of finasteride in rats (15 days) was observed reduction in sperm membrane integrity. Chronic administration of finasteride in rats (56 days), leads to changes in the epididymis, such as weight reduction, morphometric-stereological changes, decreased transit time of sperm, motility of the sperm membrane integrity and consequently in fertility parameters of these animals. Even with the interruption of treatment with finasteride (30 days) sperm quality remains committed. Thus, further studies should be performed to complement the existing knowledge on the physiology of the epididymis after DHT depletion, on the time that is needed for the recovery of fertility parameters after interruption of finasteride treatment, and if it these parameters can be fully recovered / Doutorado / Histologia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

A finasterida (FNS) é um fármaco sintético 4-azasteróide (azaandrost-1-eno-17-carboxamida, N- (1,1-dimetil)-3-oxo-, (5 , 17 ), inibidor específico do esteróide tipo II, 5 - redutase, uma enzima intracelular que converte a testosterona ao mais potente andrógeno 5 -diidrotestosterona. É classificada como fármaco da classe II (baixa solubilidade e alta permeabilidade) no Sistema de Classificação Biofarmacêutica (SCB). A FNS é indicada no tratamento e controle de homens com hiperplasia prostática benigna (HPB), prevenção e tratamento de câncer de próstata, alopecia androgênica e em alguns casos de hirsutismo. Apesar de o medicamento manipulado oferecer vantagens em relação à facilidade posológica e preço mais acessível, são inúmeros obstáculos que dificultam o avanço do setor de manipulação. O maior destes obstáculos é a falta de credibilidade do produto manipulado pela suposta ausência de um controle de qualidade rígido das matérias-primas e produtos acabados, ausência de controle do processo de produção e sua reprodutibilidade. Para se atingir um objetivo terapêutico esperado, deve-se constatar que o fármaco esteja na concentração indicada pelo fabricante, que libere o princípio ativo na quantidade e velocidade adequadas ao efeito terapêutico. Não há monografia oficial para quantificação de FNS na forma farmacêutica cápsulas nem teste de dissolução. Com isso, desenvolver uma metodologia analítica para quantificação da FNS em cápsulas manipuladas, que seja rápida, precisa e seletiva é de grande importância a fim de que possíveis não-conformidades sejam detectadas a tempo de se tornarem medidas corretivas antes que as mesmas acarretem riscos para o paciente, os quais podem se traduzir em ineficácia, toxicidade, eventualmente, em morte. Neste trabalho foi desenvolvido e validado um método rápido, preciso, seletivo, indicador de estabilidade para a quantificação da FNS na forma de cápsulas e um teste de dissolução para a quantificação in vitro de sua liberação no meio de dissolução para fins de avaliação da qualidade desses produtos em análise de rotina em laboratórios de controle de qualidade. / Finasteride (FNS) is a synthetic drug 4-azasteróide (azaandrost-1-ene-17-carboxamide, N-(1,1-dimethyl)-3-oxo-, (5 , 17 ), specific inhibitor of steroid Type II , 5 -reductase, an intracellular enzyme that converts testosterone to the more potent androgen 5 -dihydrotestosterone. FNS is classified as Class II (low solubility and high permeability) Biopharmaceutical Classification System (BCS). FNS is indicated for the treatment and control men with benign prostatic hyperplasia (BPH), prevention and treatment of prostate cancer and androgenetic alopecia some cases of hirsutism. Although the compounded drugs offer advantages with respect to ease dosage and more affordable, there are many obstacles that hinder the advancement of industry manipulation. The largest of these obstacles is the lack of credibility of the product handled by the supposed absence of a strict quality control of raw materials and finished products, lack of control of the production process and its reproducibility. To achieve a therapeutic goal expected, it must be noted that the drug concentration is indicated by the manufacturer to release the principle active in adequate amount and speed the therapeutic effect. There is no official monograph for quantification of FNS as pharmaceutical capsules or dissolution test. Therefore, to develop an analytical methodology for quantification of FNS in compounded capsules, which is quick, precise and selective is of great importance to ensure that potential non conformities are detected in time to make corrective measures before they can entail risks for the patient, which can translate into inefficiency, toxicity, eventually, death. This work was developed and validated a rapid, precise, selective, stability indicator for the quantification of NSF in the form of capsules and a dissolution test for in vitro quantification of their release into the dissolution medium for the purpose of assessing the quality of these products in routine analysis laboratory quality control.

A hiperplasia prostática benigna (HPB) é a doença de maior incidência em cães senis. Assim, a caracterização da patogênese da doença é de suma importância, tal como a avaliação de animais submetidos a tratamento clínico ou cirúrgico (terapia com finasterida e orquiectomia). Neste contexto, o objetivo dessa pesquisa foi caracterizar as alterações seminais, hormonais e hemodinâmicas da próstata e testículos de cães com HPB, submetidos a diferentes tratamentos. Assim, foram utilizados 25 cães entre doentes e hígidos e empregados as seguintes ferramentas experimentais: ultrassonografia Doppler com o intuito de caracterizar mudanças hemodinâmicas da próstata e testículos, imunohistoquímica e PCR para a expressão do fator VEGF na próstata, avaliação morfohistológica dos testículos, dosagem hormonal (testosterona, estrógeno e di-hidrotestosterona), análise andrológica, seminal e do estresse oxidativo e enzimas antioxidantes. Foi possível observar redução do escore de vascularização prostático (Doppler Colorido) em animais tratados com finasterida ou orquiectomizados, além de redução do volume prostático. O tratamento com finasterida reduziu a imunomarcação para o VEGF na próstata, porém a orquiectomia também inibiu a expressão gênica do VEGF. A finasterida, ainda, reduziu os níveis séricos de di-hidrotestosterona, não causando impactos significativos na qualidade seminal. Já a HPB promoveu alterações significativas na concentração de testosterona e na qualidade seminal (baixa concentração espermática, alteração da cinética espermática e altos índices de fragmentação de DNA espermático). Em conclusão, a atividade prostática do VEGF é dependente da ocorrência de HPB e dos diferentes tratamentos empregados, promovendo diferenças na vascularização e volume prostático. Ademais, cães com HPB possuem alterações no perfil hormonal e na espermatogênese, porém o período de tratamento com finasterida (2 meses) favorece a recuperação da doença, auxiliando em novas abordagens de diagnóstico e prognóstico da hiperplasia prostática benigna em cães. / Benign prostatic hyperplasia (BPH) is the disease of highest incidence in senile dogs. Thus, it is essential to characterize the pathogenesis of the disease, including the evaluation of animals submitted to clinical or surgical treatment (finasteride therapy and orchiectomy). In this context, the aim of this study was to characterize BPH changes of dogs submitted to different treatments. Therefore, a total of 25 dogs were used (BPH and healthy), applying distinct experimental tools: Doppler ultrasonography to characterize prostatic and testicular hemodynamic changes involved, immunohistochemistry and PCR for the expression of prostatic VEGF factor, testicular morphohistologic analysis, hormonal assay (testosterone, estrogen and dihydrotestosterone), breeding soundness examination, seminal analysis and oxidative stress and antioxidant enzymes evaluation of the prostatic fluid. It was possible to observe a reduction in prostatic vascularization score (by Color Doppler) in finasteride treated and orchiectomized animals, with an additional reduction of the prostatic volume. Finasteride treatment reduced VEGF expression by immunohistochemistry, however, orchiectomy also reduced VEGF gene expression. In addition, finasteride treatment reduced dihydrotestosterone concentration, without significant impact to seminal quality. On the other hand, BPH promoted significant changes in testosterone concentration and seminal quality, such as poor sperm concentration, changes in the sperm kinetics and high rates of sperm DNA fragmentation. In conclusion, prostatic VEGF activity in dogs is dependent on the occurrence of BPH and different therapies, promoting also differences in prostatic vascularization and volume. Furthermore, dogs with BPH had hormonal and spermatogenesis changes, however, the short course of finasteride treatment (2 months) was able to favor the disease overcome, favoring the application of new approaches to HPB diagnosis and prognosis in dogs.

A hiperplasia prostática benigna (HPB) é a doença de maior incidência em cães senis. Assim, a caracterização da patogênese da doença é de suma importância, tal como a avaliação de animais submetidos a tratamento clínico ou cirúrgico (terapia com finasterida e orquiectomia). Neste contexto, o objetivo dessa pesquisa foi caracterizar as alterações seminais, hormonais e hemodinâmicas da próstata e testículos de cães com HPB, submetidos a diferentes tratamentos. Assim, foram utilizados 25 cães entre doentes e hígidos e empregados as seguintes ferramentas experimentais: ultrassonografia Doppler com o intuito de caracterizar mudanças hemodinâmicas da próstata e testículos, imunohistoquímica e PCR para a expressão do fator VEGF na próstata, avaliação morfohistológica dos testículos, dosagem hormonal (testosterona, estrógeno e di-hidrotestosterona), análise andrológica, seminal e do estresse oxidativo e enzimas antioxidantes. Foi possível observar redução do escore de vascularização prostático (Doppler Colorido) em animais tratados com finasterida ou orquiectomizados, além de redução do volume prostático. O tratamento com finasterida reduziu a imunomarcação para o VEGF na próstata, porém a orquiectomia também inibiu a expressão gênica do VEGF. A finasterida, ainda, reduziu os níveis séricos de di-hidrotestosterona, não causando impactos significativos na qualidade seminal. Já a HPB promoveu alterações significativas na concentração de testosterona e na qualidade seminal (baixa concentração espermática, alteração da cinética espermática e altos índices de fragmentação de DNA espermático). Em conclusão, a atividade prostática do VEGF é dependente da ocorrência de HPB e dos diferentes tratamentos empregados, promovendo diferenças na vascularização e volume prostático. Ademais, cães com HPB possuem alterações no perfil hormonal e na espermatogênese, porém o período de tratamento com finasterida (2 meses) favorece a recuperação da doença, auxiliando em novas abordagens de diagnóstico e prognóstico da hiperplasia prostática benigna em cães. / Benign prostatic hyperplasia (BPH) is the disease of highest incidence in senile dogs. Thus, it is essential to characterize the pathogenesis of the disease, including the evaluation of animals submitted to clinical or surgical treatment (finasteride therapy and orchiectomy). In this context, the aim of this study was to characterize BPH changes of dogs submitted to different treatments. Therefore, a total of 25 dogs were used (BPH and healthy), applying distinct experimental tools: Doppler ultrasonography to characterize prostatic and testicular hemodynamic changes involved, immunohistochemistry and PCR for the expression of prostatic VEGF factor, testicular morphohistologic analysis, hormonal assay (testosterone, estrogen and dihydrotestosterone), breeding soundness examination, seminal analysis and oxidative stress and antioxidant enzymes evaluation of the prostatic fluid. It was possible to observe a reduction in prostatic vascularization score (by Color Doppler) in finasteride treated and orchiectomized animals, with an additional reduction of the prostatic volume. Finasteride treatment reduced VEGF expression by immunohistochemistry, however, orchiectomy also reduced VEGF gene expression. In addition, finasteride treatment reduced dihydrotestosterone concentration, without significant impact to seminal quality. On the other hand, BPH promoted significant changes in testosterone concentration and seminal quality, such as poor sperm concentration, changes in the sperm kinetics and high rates of sperm DNA fragmentation. In conclusion, prostatic VEGF activity in dogs is dependent on the occurrence of BPH and different therapies, promoting also differences in prostatic vascularization and volume. Furthermore, dogs with BPH had hormonal and spermatogenesis changes, however, the short course of finasteride treatment (2 months) was able to favor the disease overcome, favoring the application of new approaches to HPB diagnosis and prognosis in dogs.

Orientador: Sérgio Luis Felisbino / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T21:10:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Delella_FlaviaKarina_D.pdf: 4450656 bytes, checksum: dade120d2d2bab0a5a25ef2c13d30269 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A finasterida e a doxazosina são drogas usadas no tratamento da hiperplasia prostática benigna (HPB) e, mais recentemente, estão sendo também usadas na quimioprevenção do câncer de próstata (CaP), principalmente devido aos seus efeitos na indução de apoptose das células epiteliais prostáticas. Entretanto, pouca atenção tem sido dispensada aos efeitos destes fármacos sobre o estroma glandular. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar os efeitos da finasterida e da doxazosina no arranjo estromal e em componentes específicos, como o colágeno do tipo I, colágeno do tipo III e o TGF-Beta 1. Para isso, foram empregadas técnicas morfológicas, bioquímicas e moleculares. O tratamento com finasterida promoveu apoptose epitelial, alterações na membrana basal epitelial e na membrana basal das células musculares lisas, além da diminuição na expressão dos colágenos I e III. O bloqueio ?-adrenérgico com doxazosina aumentou a quantidade de fibras do sistema elástico, promoveu apoptose nas células epiteliais, além de alterar a expressão dos colágenos I e III. Os dois fármacos influenciaram o aumento da expressão do TGF-Beta 1, que parece estar mais relacionado com o evento da apoptose no tratamento com a finasterida e com as alterações das fibras colágenas e a ativação de fibroblastos no tratamento com a doxazosina. Conclui-se que as alterações estromais pós tratamento com finasterida e doxazosina podem contribuir para a regressão prostática esperada no tratamento da HPB e na ruptura de eventos parácrinos responsáveis pela evolução tumoral no CaP / Abstract: Finasteride and doxazosin are drugs used in the benign prostatic hyperplasia (BPH) treatment and, more recently, they're have been used in the prostate cancer (PCa) chemoprevention, mainly because their apoptotic effect in the prostatic epithelial cells. However, few attentions have been given to the effects of these drugs in the glandular stroma. Thus, the objective of this study was to analyze the effects of the finasteride or doxazosin treatment on stroma arrangement and on specific components, like collagen type I, collagen type III and TGF-Beta 1. For this aim, we have used morphological, biochemical and molecular approaches. Finasteride treatment provoked epithelial apoptosis, epithelial basal membrane and smooth muscle cells basal membrane alterations, besides decrease the type I and type III collagen fibers expression. The alpha-adrenergic blockade increased the elastic fibers system, promoted apoptosis in epithelial cells, as well altered the type I and type III collagen fibers expression. Both drugs influenced the TGF-Beta 1 up-regulation that show to be related with apoptosis in finasteride treatment and with collagen fibers alterations and fibroblasts activation in doxazosin treatment. In conclusion, the stromal alterations promoted by finasteride and doxazosin treatments can contribute to the prostate regression expected in the BPH treatment and to the rupture of paracrine events responsible by tumoral evolution in the PCa / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Sergio Luis Felisbino / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Insituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T04:30:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JustulinJunior_LuisAntonio_D.pdf: 17091914 bytes, checksum: 15d52dabcde65a4f842895fd71f92ccd (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Finasterida (Fin), um inibidor da enzima 5a-redutase do tipo II e a Doxazosina (Dox), um inibidor do receptor a1-adrenérgico, tem sido amplamente utilizados no tratamento dos sintomas da Hiperplasia Prostática Benigna (HPB). Recentemente, dados clínicos demonstraram que a combinação destas drogas foi mais efetiva em prevenir o desenvolvimento de retenção urinária aguda. Além disso, tem sido demonstrado que tanto as drogas isoladas, como em associação também podem ser utilizadas na prevenção e tratamento do câncer de próstata, devido ao seu potencial de induzir apoptose em células epiteliais normais e tumorais. Apesar disso, pouco se conhece sobre os efeitos da Fin e da Dox administradas isoladas ou em associação sobre a morfofisiologia prostática, incluindo proliferação, morte celular, e indução de remodelação da matriz extracelular pelas metaloproteinases de matriz. Ratos wistar machos adultos (13 semanas) foram tratados com Dox (25mg/kg/dia) ou com a combinação de Fin+Dox (25mg/kg/dia). Após a eutanásia, os lobos prostáticos (ventral, dorsolateral e anterior) foram retirados, pesados e imersos em fixador para análises morfológicas ou congelados em nitrogênio líquido para posterior análises bioquímicas. Os resultados morfológicos e estereológicos demonstraram que o tratamento com a Dox isoladamente por 3 dias resultou em aumento do peso da próstata ventral, com acúmulo de secreção na luz glandular. Os pesos absoluto e relativo das próstatas dorsolateral e anterior não sofreram alteração neste período de tratamento. Entretanto, após 30 dias de tratamento, observou-se uma redução de aproximadamente 20% nos pesos absoluto e relativo de todos os lobos prostáticos e um aumento do volume glandular ocupado pelo colágeno no estroma nos três lobos prostáticos. O tratamento com doxazosina também reduziu o índice de proliferação celular e aumentou o índice apoptótico em todos os períodos analisados. A próstata ventral de ratos tratados com a combinação de Fin+Dox apresentou perda de peso após 30 dias de tratamento. Nos dois períodos de tratamento ocorreu diminuição do índice de proliferação celular, aumento de apoptose e do volume estromal de colágeno, mais evidentes quando comparados ao tratamento com as drogas isoladas. O tratamento combinado também provocou aumento da imunomarcação para o TGF-ß1 demonstrado por imunohistoquímica, principalmente no epitélio. A expressão dos RNAms para MMP-2, TIMPs-1 and - 2 dimunuiu após 30 dias de tratamento, enquanto o RNAm para a MMP-9 não foi detectado em nenhum grupo experimental. O tratamento com Fin+Dox por 30 dias promoveu uma diminuição na atividade gelatinolítica da MMP-2 e um aumento na atividade da MMP-9. Em conjunto, os resultados deste estudo demonstram que tanto o tratamento com doxazosina quanto o tratamento combinado de Fin+Dox induzem grandes alterações glandulares que levam a atrofia prostática, sendo ainda mais significativa com o tratamento combinado, possivelmente pela ação complementar destas duas drogas sobre o parênquima e o estroma glandulares. Nesta atrofia, a MMP-9 e o TGF-ß 1parecem desempenhar um papel importante. Desta forma, nossos resultados auxiliam o entendimento dos dados clínicos, demonstrando que a combinação dos dois fármacos pode ser mais eficaz no tratamento da HPB. / Abstract: Finasteride (Fin), an inhibitor of type II 5-a reductase, and Doxazosin (Dox), an a1- adrenergic blocker, have been widely used in treatment of Benign Prostate Hyperplasia (BPH) symptoms. Recently, clinical data have demonstrated that the combined therapy with Fin+Dox reduced the long-term risk of acute urinary retention and the need for invasive therapies than either drug alone. Moreover, both drugs, alone or in combination have been suggested to be effective in the treatment of prostate cancer by inducing apoptosis in normal and tumoral cells. However, little is known about the effects of these drugs administrated alone or their combination on prostate tissue morphohysiology, including prostate morphology, cell proliferation, apoptosis and matrix metalloproteinases activities. Male adult Wistar rats (13 weeks old) were treated with doxazosin (25mg/kg/day) or with finasteride (25mg/kg/day) or with the combination of both drugs. The ventral (VP), dorsolateral (DLP) and anterior prostate (AP) were excised and processed for histochemical, morphometric and biochemical analysis. The results of morphological and stereological analyses demonstrate that Dox treatment for 3 day resulted in an increased in ventral prostate absolute and relative weight with secretion accumulation. The weight of dorsolateral and anterior prostate did not change in this period of treatment. However, after 30 days, the prostate exhibited an absolute and relative weight reduction of about 20% and an increase in collagen volume fraction in the stromal space in the three prostatic lobes. Dox also reduced epithelial cell proliferation and increased apoptosis in the three prostatic lobes in all periods of tretament. Rat VP treated with Fin+Dox also presented a reduction in absolute and relative weight, decrease in epithelial cell proliferation, increase in apoptosis and collagen volume fraction in the stroma in all periods analyzed, more than Dox alone. Fin+Dox treatment also increased the TGF-ß 1 immunoreaction in the epithelium and in the stroma of VP. The mRNA for MMP-2, TIMPs-1 and - 2 expression after 30 days of treatment were decreased. The mRNA for MMP-9 was not detected in any groups analyzed. Fin+Dox treatment for 30 days promoted a decrease in gelatinolitic activity of MMP-2 and an increase in MMP-9. Take together, these results demonstrated that both Dox alone or in combination with Fin induced changes in glandular histoarchitecture, leading to a prostate atrophy, being the combined treatment more effective in inducing glandular atrophy, possibly to the complementary action of the Fin and Dox on prostate parenchyma and stroma, respectively. In this process, the MMP-9 and TGF-ß1 appear to participate effectively. Our results contribute to a better understanding of the clinical data, demonstrating that the combined treatment can be more effective in the BPH treatment. / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural