O bronzeamento, por ser interpretado por muitos como sinônimo de beleza e saúde, tem contribuído para exacerbar os efeitos cumulativos do sol tanto na epiderme quanto na derme. Sendo assim, tem-se aumentado a busca por tratamentos eficazes à fim de reduzir os sinais do envelhecimento extrínseco. Baseando-se neste fato, o presente trabalho apresentou como objetivo comparar duas modalidades terapêuticas, sendo elas o LED e o LASER para o tratamento do fotoenvelhecimento induzido em camundongos BALB-c. Para a realização do experimento foram utilizados, inicialmente, 40 animais sendo estes divididos em quatro grupos: grupo controle (irradiado com lâmpada isenta de RUV), grupo UV (submetido à exposição à RUV e sem tratamento), grupo UV+LED (submetido à exposição à RUV e tratados com LED) e grupo UV+LASER (submetido à exposição à RUV e tratados com LASER). A avaliação da histomorfometria foi realizada através de imagens capturadas e avaliadas por sistema de captura de imagens. Através dos resultados da análise concluiu-se que o protocolo adotado foi capaz de induzir o processo de fotoenvelhecimento sendo possível evidenciar hiperceratose, hipergranulose, acantose e espongiose na camada epidérmica. Na derme observou-se redução no número de fibras colágenas, aumento na quantidade de substância fundamental amorfa (SFA), do infiltrado inflamatório e no número de fibrócitos/fibroblastos. O LED demonstrou melhores resultados no tratamento da pele fotoenvelhecida visto que apresentou efeitos satisfatórios tanto na derme quanto na epiderme. Já o LASER foi capaz de agir de forma significativa apenas na derme.

A exposição excessiva à radiação Ultravioleta (UV) resulta em manifestações clínicas à pele humana como queimaduras, fotoenvelhecimento e câncer. A radiação UVA, preferencialmente, induz à formação de espécies reativas de oxigênio, enquanto que a radiação UVB é absorvida diretamente pelo DNA. Apesar de mecanismos endógenos auxiliarem na prevenção/reparação dos danos causados pela radiação UV, quando o dano excede a capacidade de reparação celular, diversos efeitos lesivos ocorrem na pele como alterações da matriz dérmica, resposta inflamatória e desidratação do estrato córneo. O uso de compostos fenólicos com atividade antioxidante pode auxiliar na prevenção das consequências patológicas da exposição à radiação UV. O presente trabalho teve como objetivo estudar em cultura de células da pele (HaCaT -queratinócito humano imortalizado e FHPD - fibroblasto humano primário dermal) exposta às radiações UVA e UVB a atividade fotoprotetora de 3 compostos fenólicos, ácido cafeico (AC), clorogênico (ACG) e rosmarínico (AR). Inicialmente, células HaCaT e FHPD cultivadas em monocamada foram expostas às doses crescentes de radiação UVA ou UVB e, após 24 horas, foram analisadas quanto a viabilidade, marcadores de morte celular, mediadores inflamatórios, presença de aquaporina e lesões de DNA. HaCaT quando exposta às radiações UVA e UVB são conduzidas à morte por apoptose, com aumento de Caspases 3 e 9, p53 e redução de PARP. Após a exposição à radiação UVA, HaCaT responde com aumento na liberação de IL-6, TNF-α e COX-2, internalização/redução de AQP3 da membrana, redução na liberação de MMP-2 e 9, aumento na liberação de MMP-1 e na produção de ERO. Quando expostos à radiação UVB, HaCaT aumenta a liberação de IL-6 e COX-2, promove internalização/redução de AQP3 na membrana e redução na liberação de MMP-2 e 9. FHPD são menos sensíveis à exposição a ambas as radiações, mostrando redução de viabilidade com parada de ciclo apenas frente à radiação UVA. Além disto, FHPD exposto a radiação UVA responde com aumento na liberação de IL-6 e danos no DNA do tipo 8-oxo-dG. Dentre os compostos, o ACG apresentou melhor atividade fotoquimioprotetora perante ambas as radiações UVA e UVB, pois foi capaz de reverter em HaCaT a morte celular induzida por ambas as radiações e de reverter a parada de ciclo em FHPD expostos à radiação UVA. HaCaT tratado com ACG e exposto à radiação UVA responde com aumento na expressão de AQP3 e PARP, aumento na expressão gênica de AQP3, redução na expressão gênica de CDKN1A e na liberação de MMP-1, 2 e 9. Após a radiação UVB, o tratamento com ACG aumenta a expressão gênica de AQP3, reduz a expressão gênica de CDKN1A, reduz a produção de COX-2 e aumenta a liberação de MMP-2 e 9. O tratamento com o AR apresentou atividade fotoquimioprotetora frente à radiação UVA, com HaCaT respondendo a radiação com aumento na população de células viáveis, aumento na expressão de AQP3 e PARP e na expressão gênica de AQP3, redução na liberação de MMP-1 e 9 e redução na produção de COX-2. FHPD tratados com AR apresentaram aumento na população em fase G1, na expressão de p21, e redução de danos de DNA tipo 8-oxo-dG. O tratamento de HaCaT com AC foi capaz de reverter a morte celular, aumentar a expressão de p53 e aumentar a liberação de MMP-2 e 9 frente à radiação UVB e de reduzir a produção de ERO, a expressão de p21 e a liberação de MMP-1, 2 e 9 frente à radiação UVA. Para FHPD, o tratamento com AC foi capaz apenas de reduzir a formação de danos de DNA tipo 8-oxo-dG. Os resultados indicam que o modelo proposto foi capaz de discriminar a atividade fotoprotetora dos compostos frente à radiação UVA e UVB. Além disto, foi possível demonstrar que os compostos antioxidantes se comportam de maneira distinta enquanto fotoprotetores no modelo empregado. / Excessive exposure to Ultraviolet radiation (UV) results in clinical manifestations in human skin such as burns, photo-aging and cancer. UVA radiation preferentially induces formation of reactive oxygen species, while UVB radiation is absorbed directly by the DNA. Although endogenous mechanisms are able to prevent/repair cellular damages caused by UV radiation, excess cellular damage retains cells repair capacity and also results on diverse harmful effects on skin, such as, changes in the dermal matrix, inflammatory response and dehydration of the stratum corneum. The use of phenolic compounds with antioxidant activity may help preventing pathological conditions caused by UV radiation. This work aimed to study the photoprotective activity of three phenolic compounds, caffeic (CA), chlorogenic (CGA) and rosmarinic acid (RA) in human skin cells (HaCaT - immortalized human keratinocytes and HDSF - human dermal skin fibroblast) exposed to UVA and UVB radiation. Initially, HDSF and HaCaT cells were exposed to increasing doses of UVA and UVB radiation. After 24 hours of exposure, we evaluated cell viability, cell death, inflammatory mediators, aquaporin and DNA damage. Exposure to UVA and UVB radiation in HaCaT cells results on apoptotic cell death, with an increase of caspases 3 and 9, p53 and reduction of PARP. HaCaT cells when exposed to UVA radiation resulted on increased levels of IL-6, TNF-α and COX-2, internalization of the membrane AQP3, reduction of MMP-2 and MMP-9 release, increase of MMP-1 and ROS production. After UVB radiation, HaCaT cells resulted on an increase of IL-6 and COX-2 production, it also promoted internalization of membrane AQP3 and reduced release of MMP-2 and 9. HDSF were less sensitive to both radiations. Moreover, HDSF resulted in cell viability decrease and cell cycle arrest only after UVA radiation. Furthermore, HDSF when exposed to UVA radiation resulted on an increase of IL-6 production and in DNA damage (8-oxo-dG). Among the studied compounds, CGA presented better photochemiprotective activity towards UVA and UVB radiation. Also, this compound was able to reverse cell death in HaCaT after exposure to both radiations and inhibited cell cycle arrest in HDSF after UVA radiation exposure. HaCaT cells treated with CGA and exposed to UVA radiation resulted on an increase in AQP3 and PARP expression, increased in AQP3 gene expression, reduction in CDKN1A gene expression and reduction in MMP-1, 2 and 9 release. After UVB radiation, GCA treatment increases AQP3 gene expression, reduces CDKN1A gene expression, reduces COX-2 production and increase MMP-2 and 9 releases. The AR treatment showed photochemiprotective activity towards the effects of UVA radiation, with HaCaT responding with an increase on cells viability, increased in PARP and AQP3 expression and in AQP3 gene expression, decreased MMP-1 and 9 releases and reduced COX-2c production. HDSF when treated with AR showed an increase in G1 phase population, in p21 expression and reduced DNA damage-type 8-oxo-dG. HaCaT cells treated with AC reversed cell death, increased p53 expression and increased MMP-2 and 9 releases after UVB radiation and reduced ROS production, p21 expression and MMP -1, 2, 9 release after UVA radiation. HDSF treated with AC was only able to reduce the formation of 8-oxodG DNA damage. These results indicated that the proposed model was able to discriminate the photochemiprotective activity of the studied compounds against the UVA and UVB radiation. In addition, it was demonstrated that the each studied antioxidant have different photoprotective mode of action.

O fotoenvelhecimento é uma condição dérmica decorrente da sobreposição do envelhecimento cronológico e dos efeitos da exposição crônica à radiação ultravioleta (UV) solar. A pele fotodanificada é um local propício para o desenvolvimento de lesões pré-cancerosas que podem evoluir para casos de câncer de pele. Logo, o tratamento dessa condição não é apenas de cunho estético, mas também preventivo. A Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma técnica que se baseia na fotoativação de uma molécula fotossensível, que na presença de oxigênio, produz espécies citotóxicas que levam à morte da célula e tecido alvo. Esta técnica tem sido utilizada em estudos clínicos para o tratamento da pele fotoenvelhecida, e tem apresentado bons resultados funcionais e cosméticos. São muitas as variações em parâmetros como fonte de luz, dose e tipo de fotossensibilizador. A TFD fracionada utiliza um tempo de escuro entre frações da dose total e mostra-se mais eficiente que a iluminação em uma única dose, porém seu efeito no tratamento da pele fotoenvelhecida ainda é desconhecido. Neste trabalho, um protocolo de TFD foi desenvolvido para comparar o resultado da terapia com iluminação dose única e fracionada aplicada no fotoenvelhecimento. A avaliação foi através de histologia e espectroscopia de fluorescência e tempo de vida de fluorescência. Camundongos hairless foram fotoenvelhecidos e tratados com luz LED violeta (404 nm) e creme 20% ALA (1h de incubação) com dose única (1 J.cm-2) e fracionada (duas frações de 0,5 J.cm-2 e 10 min de escuro). O efeito da TFD fracionada foi mais intenso, causando ulcerações na pele e alterações histológicas características. Esse resultado mostrou que a TFD com iluminação fracionada não foi adequada para o tratamento da pele fotoenvelhecida. A análise por tempo de vida de fluorescência foi capaz de mostrar alterações durante as semanas de recuperação. Acredita-se que essa informação venha da epiderme devido ao remodelamento observado nessa camada. / Photoaging is a skin condition resulting from the overlap of chronological aging and the effects of chronic exposure to sunlight ultraviolet (UV). Photodamaged skin is more susceptible for the development of pre-cancerous lesions, which can become skin cancer. Therefore, the treatment of this condition is not only of aesthetic concern but it is also of preventive nature. Photodynamic therapy (PDT) is a technique based on the photoactivation of a light-sensitive molecule, which, in the presence of oxygen produce cytotoxic species that lead to cell death and tissue destruction. This technique has been used in clinical trials for the treatment of photoaged skin, and it has presented good functional and cosmetic results. There are many variations on PDT parameters such as the light source, dose and type of photosensitizer. Fractionated PDT is one these variations which uses a dark interval between light fractions. Studies show that this illumination scheme enhances the therapeutic efficacy, although its effects in the treatment of photoaged skin are still unknown. In this work, a protocol was developed to compare the outcome of PDT with single and fractionated illumination applied in photoaging. The assessments were made by histology and by the optical technics: steady state and lifetime fluorescence spectroscopy. Photoaging was induced in hailess mice skin which were then treated with violet LED (404 nm) and 20% ALA cream (1h of incubation) with either single (1 J.cm-2) or fractionated (2 fractions of 0.5 J.cm-2 and 10 min of dark interval) doses. The effect of fractionated PDT was more intense, causing ulcerations on the skin and distinctive histological changes. This result shows that PDT with fractionated illumination was not suitable for the treatment of photoaged skin. The analysis by fluorescence lifetime spectroscopy was able to reveal changes during the recovery weeks. It is believed that this information comes from the epidermis due to the remodeling observed in this layer.

Introdução: A luz intensa pulsada(LIP) tem sido muito utilizada no tratamento do fotoenvelhecimento sem completo conhecimento de seu mecanismo de ação. Métodos: Foram acompanhados 26 pacientes apresentando fotoenvelhecimento grau II-III (GLOGAU, 1994), os quais foram submetidas à avaliação clínica , histológica e imunoistoquímica 6 e 12 meses após o término do tratamento com LIP. Foram realizadas cinco sessões com intervalos de trinta dias. Além da quantificação histomorfométrica das fibras colágenas e elásticas na derme, foram avaliados CD1, CD4, CD8 e ICAM-1. Resultados: Após 6 meses houve melhora clínica moderada e intensa em 76,92% dos casos e a nota média de satisfação foi 8,57 correspondendo à melhora moderada. Após 12 meses do término do tratamento observou-se que 51,52% das pacientes apresentaram uma melhora clínica moderada em relação à clínica inicial. Os efeitos colaterais foram eritema (11/26), edema (10/26), ardência (7/26) e crostas (8/26). A quantificação das fibras colágenas mostrou aumento médio de 51,33% proporção média de fibra colágena na derme após 6 meses de tratamento e o aumento em relação a 12 meses do término do tratamento foi 30,17%; as fibras elásticas mostraram aumento de 44,13% após 6 meses e aumento de 143,19% após 12 meses do término do tratamento. Na análise imunoistoquímica não houve alteração de CD1 e CD8. Em relação ao CD4 houve redução significante após 12 meses do término do tratamento. Quanto ao ICAM-1 houve aumento em 6 meses com retorno aos níveis normais após 12 meses do término do tratamento. Conclusão: A melhora clínica observada foi comprovada pelo estudo histopatológico, que mostrou aumento das fibras colágenas e elásticas na derme. Após 12 meses do término do tratamento observou-se discreta redução do aspecto clínico da pele correlacionado ao histopatológico. Poucos efeitos colaterais foram observados, sendo todos reversíveis. Desta forma, a LIP constitui boa opção de tratamento para o fotoenvelhecimento cutâneo, sendo uma técnica não ablativa, segura e eficaz. / Introduction: The intense pulsed light has been used in the treatment of photoaging without full knowledge of its mechanism of action. Material and Methods: 26 patients were followed-up presenting photoaging grade II-III (GLOGAU, 1994), who were submitted to clinical evaluation, histological and immunohistochemistry 6 and 12 months after the treatment termination with LIP. Five sessions were made with 30-day intervals. In addition to histomorphometric quantification of collagen and elastic fibers in the dermis, CD1, CD4, CD8 and ICAM-1 were evaluated. Results: After 6 months there were moderate and intense clinical improvement on 76.92% of the cases and the mean score of satisfaction was 8.57 corresponding to moderate improvement. After 12 months of the treatment termination, it was observed that 51.52% of the patients presented a moderate clinical improvement in relation to initial clinic. The side effects were erythema (11/26), edema (10/26), burning (7/26) and crusts (8/26). The quantification of collagen fibers has shown mean increase of 51.33% in the dermis after 6 months of treatment and the increase regarding to 12 months of the treatment termination was of 30.17%; the elastic fibers has shown an increase of 44.13% after 6 months and increase of 143.19% after 12 months of the treatment termination. In the immunohistochemistry analysis there was no alteration of CD1 and CD8. In relation to CD4, there was a significant reduction after 12 months of treatment termination. Regarding the ICAM-1, there was an increase in 6 months with return to normal levels after 12 months of treatment termination. Conclusion: The observed clinical improvement was verified by the histopathologic study, which showed increase in the elastic and collagen fibers in the dermis. After 12 months of treatment termination, it was observed a discrete reduction of clinical aspect of skin correlated to histopathology. A few side effects were observed, being all reversible. Thus, LIP constitutes good option of treatment for skin photoageing, being a non-ablative, safe and effective technique.

A poiquilodermia de Civatte (PC) é uma alteração dermatológica caracterizada por atrofia, pigmentação macular ou reticulada e telangiectasias na face, pescoço e tórax anterior. Várias tentativas de tratamentos não foram bem sucedidas por se mostrarem ineficazes e/ou com efeitos colaterais indesejáveis. Estudos clínicos mostram bons resultados clínicos no tratamento da PC com luz intensa pulsada (LIP). A terapia fotodinâmica (TFD) é uma modalidade terapêutica que envolve a administração tópica de um composto fotossensibilizante seguido de irradiação seletiva da lesão com luz visível. O propósito deste trabalho consiste na avaliação clínica e histopatológica da pele com PC, no tórax anterior, em 12 pacientes do sexo feminino, antes e após o tratamento com a TFD. Foram realizadas 3 sessões de tratamento com intervalos de 30 dias entre as sessões. A TFD foi realizada com a utilização prévia de cloridrato de aminolevulinato de metila 16% em creme (Metivix) 1h e 30min (oclusivo) antes da aplicação da LIP (Lime light). A avaliação clínica mostrou melhora em 84,6% no componente vascular, 80,8% no componente melanodérmico, 82,9% na textura, 77,1% nas rítides e 58,3% na flacidez de pele. Na histopatologia notou-se após o tratamento aumento estatisticamente significativo da espessura epidérmica, diminuição estatisticamente significativa do pigmento melânico e da área dos vasos marcados pelo fator VIII. Não houve nenhum efeito colateral permanente, mostrando que a TFD-MAL é uma nova opção terapêutica segura e eficaz para o tratamento da PC no tórax anterior / Poikiloderma of Civatte (PC) is the dermatological modification characterized by atrophy, macular or reticulate pigmentation and telangiectasias on the face, neck and anterior thorax. Several treatment attempts were unsuccessful, revealing to be ineffective and/or causing adverse effects. Clinical studies indicate good clinical results in the treatment of poikiloderma of Civatte with intense pulsed light (IPL). Photodynamic Therapy (PDT) is a therapeutic modality that involves the topical administration of a photosensitizing compound, followed by a selective irradiation of the lesion with visible light. The objective of this study consisted in the clinical and histopathologic evaluations of the skin with poikiloderma of Civatte (PC) on the anterior thorax of 12 female patients, before and after being treated with photodynamic therapy (PDT). Three treatment sessions were given at 30-day intervals. Photodynamic therapy was performed with methyl aminolevulinate hydrochloride 16% (Metivix) cream applied 1h and 30min under occlusion prior to LIP (Lime light) exposure. The clinical evaluation indicated an 84.6% improvement of vascular component, 80.8% of melanodermic component, 82.9% of texture, 77.1% of wrinkles and 58.3% of skin laxity. In the histopathology, a statistically significant increase of epidermal thickness was observed after the treatment, as well as a statistically significant reduction in the number of melanin pigment and of blood vessels area marked for Factor VIII. There were no permanent side effects, showing that the PDT-MAL is a new, safe and effective technic for treating PC on the anterior thorax

Introdução: A luz intensa pulsada(LIP) tem sido muito utilizada no tratamento do fotoenvelhecimento sem completo conhecimento de seu mecanismo de ação. Métodos: Foram acompanhados 26 pacientes apresentando fotoenvelhecimento grau II-III (GLOGAU, 1994), os quais foram submetidas à avaliação clínica , histológica e imunoistoquímica 6 e 12 meses após o término do tratamento com LIP. Foram realizadas cinco sessões com intervalos de trinta dias. Além da quantificação histomorfométrica das fibras colágenas e elásticas na derme, foram avaliados CD1, CD4, CD8 e ICAM-1. Resultados: Após 6 meses houve melhora clínica moderada e intensa em 76,92% dos casos e a nota média de satisfação foi 8,57 correspondendo à melhora moderada. Após 12 meses do término do tratamento observou-se que 51,52% das pacientes apresentaram uma melhora clínica moderada em relação à clínica inicial. Os efeitos colaterais foram eritema (11/26), edema (10/26), ardência (7/26) e crostas (8/26). A quantificação das fibras colágenas mostrou aumento médio de 51,33% proporção média de fibra colágena na derme após 6 meses de tratamento e o aumento em relação a 12 meses do término do tratamento foi 30,17%; as fibras elásticas mostraram aumento de 44,13% após 6 meses e aumento de 143,19% após 12 meses do término do tratamento. Na análise imunoistoquímica não houve alteração de CD1 e CD8. Em relação ao CD4 houve redução significante após 12 meses do término do tratamento. Quanto ao ICAM-1 houve aumento em 6 meses com retorno aos níveis normais após 12 meses do término do tratamento. Conclusão: A melhora clínica observada foi comprovada pelo estudo histopatológico, que mostrou aumento das fibras colágenas e elásticas na derme. Após 12 meses do término do tratamento observou-se discreta redução do aspecto clínico da pele correlacionado ao histopatológico. Poucos efeitos colaterais foram observados, sendo todos reversíveis. Desta forma, a LIP constitui boa opção de tratamento para o fotoenvelhecimento cutâneo, sendo uma técnica não ablativa, segura e eficaz. / Introduction: The intense pulsed light has been used in the treatment of photoaging without full knowledge of its mechanism of action. Material and Methods: 26 patients were followed-up presenting photoaging grade II-III (GLOGAU, 1994), who were submitted to clinical evaluation, histological and immunohistochemistry 6 and 12 months after the treatment termination with LIP. Five sessions were made with 30-day intervals. In addition to histomorphometric quantification of collagen and elastic fibers in the dermis, CD1, CD4, CD8 and ICAM-1 were evaluated. Results: After 6 months there were moderate and intense clinical improvement on 76.92% of the cases and the mean score of satisfaction was 8.57 corresponding to moderate improvement. After 12 months of the treatment termination, it was observed that 51.52% of the patients presented a moderate clinical improvement in relation to initial clinic. The side effects were erythema (11/26), edema (10/26), burning (7/26) and crusts (8/26). The quantification of collagen fibers has shown mean increase of 51.33% in the dermis after 6 months of treatment and the increase regarding to 12 months of the treatment termination was of 30.17%; the elastic fibers has shown an increase of 44.13% after 6 months and increase of 143.19% after 12 months of the treatment termination. In the immunohistochemistry analysis there was no alteration of CD1 and CD8. In relation to CD4, there was a significant reduction after 12 months of treatment termination. Regarding the ICAM-1, there was an increase in 6 months with return to normal levels after 12 months of treatment termination. Conclusion: The observed clinical improvement was verified by the histopathologic study, which showed increase in the elastic and collagen fibers in the dermis. After 12 months of treatment termination, it was observed a discrete reduction of clinical aspect of skin correlated to histopathology. A few side effects were observed, being all reversible. Thus, LIP constitutes good option of treatment for skin photoageing, being a non-ablative, safe and effective technique.

A exposição excessiva à radiação Ultravioleta (UV) resulta em manifestações clínicas à pele humana como queimaduras, fotoenvelhecimento e câncer. A radiação UVA, preferencialmente, induz à formação de espécies reativas de oxigênio, enquanto que a radiação UVB é absorvida diretamente pelo DNA. Apesar de mecanismos endógenos auxiliarem na prevenção/reparação dos danos causados pela radiação UV, quando o dano excede a capacidade de reparação celular, diversos efeitos lesivos ocorrem na pele como alterações da matriz dérmica, resposta inflamatória e desidratação do estrato córneo. O uso de compostos fenólicos com atividade antioxidante pode auxiliar na prevenção das consequências patológicas da exposição à radiação UV. O presente trabalho teve como objetivo estudar em cultura de células da pele (HaCaT -queratinócito humano imortalizado e FHPD - fibroblasto humano primário dermal) exposta às radiações UVA e UVB a atividade fotoprotetora de 3 compostos fenólicos, ácido cafeico (AC), clorogênico (ACG) e rosmarínico (AR). Inicialmente, células HaCaT e FHPD cultivadas em monocamada foram expostas às doses crescentes de radiação UVA ou UVB e, após 24 horas, foram analisadas quanto a viabilidade, marcadores de morte celular, mediadores inflamatórios, presença de aquaporina e lesões de DNA. HaCaT quando exposta às radiações UVA e UVB são conduzidas à morte por apoptose, com aumento de Caspases 3 e 9, p53 e redução de PARP. Após a exposição à radiação UVA, HaCaT responde com aumento na liberação de IL-6, TNF-α e COX-2, internalização/redução de AQP3 da membrana, redução na liberação de MMP-2 e 9, aumento na liberação de MMP-1 e na produção de ERO. Quando expostos à radiação UVB, HaCaT aumenta a liberação de IL-6 e COX-2, promove internalização/redução de AQP3 na membrana e redução na liberação de MMP-2 e 9. FHPD são menos sensíveis à exposição a ambas as radiações, mostrando redução de viabilidade com parada de ciclo apenas frente à radiação UVA. Além disto, FHPD exposto a radiação UVA responde com aumento na liberação de IL-6 e danos no DNA do tipo 8-oxo-dG. Dentre os compostos, o ACG apresentou melhor atividade fotoquimioprotetora perante ambas as radiações UVA e UVB, pois foi capaz de reverter em HaCaT a morte celular induzida por ambas as radiações e de reverter a parada de ciclo em FHPD expostos à radiação UVA. HaCaT tratado com ACG e exposto à radiação UVA responde com aumento na expressão de AQP3 e PARP, aumento na expressão gênica de AQP3, redução na expressão gênica de CDKN1A e na liberação de MMP-1, 2 e 9. Após a radiação UVB, o tratamento com ACG aumenta a expressão gênica de AQP3, reduz a expressão gênica de CDKN1A, reduz a produção de COX-2 e aumenta a liberação de MMP-2 e 9. O tratamento com o AR apresentou atividade fotoquimioprotetora frente à radiação UVA, com HaCaT respondendo a radiação com aumento na população de células viáveis, aumento na expressão de AQP3 e PARP e na expressão gênica de AQP3, redução na liberação de MMP-1 e 9 e redução na produção de COX-2. FHPD tratados com AR apresentaram aumento na população em fase G1, na expressão de p21, e redução de danos de DNA tipo 8-oxo-dG. O tratamento de HaCaT com AC foi capaz de reverter a morte celular, aumentar a expressão de p53 e aumentar a liberação de MMP-2 e 9 frente à radiação UVB e de reduzir a produção de ERO, a expressão de p21 e a liberação de MMP-1, 2 e 9 frente à radiação UVA. Para FHPD, o tratamento com AC foi capaz apenas de reduzir a formação de danos de DNA tipo 8-oxo-dG. Os resultados indicam que o modelo proposto foi capaz de discriminar a atividade fotoprotetora dos compostos frente à radiação UVA e UVB. Além disto, foi possível demonstrar que os compostos antioxidantes se comportam de maneira distinta enquanto fotoprotetores no modelo empregado. / Excessive exposure to Ultraviolet radiation (UV) results in clinical manifestations in human skin such as burns, photo-aging and cancer. UVA radiation preferentially induces formation of reactive oxygen species, while UVB radiation is absorbed directly by the DNA. Although endogenous mechanisms are able to prevent/repair cellular damages caused by UV radiation, excess cellular damage retains cells repair capacity and also results on diverse harmful effects on skin, such as, changes in the dermal matrix, inflammatory response and dehydration of the stratum corneum. The use of phenolic compounds with antioxidant activity may help preventing pathological conditions caused by UV radiation. This work aimed to study the photoprotective activity of three phenolic compounds, caffeic (CA), chlorogenic (CGA) and rosmarinic acid (RA) in human skin cells (HaCaT - immortalized human keratinocytes and HDSF - human dermal skin fibroblast) exposed to UVA and UVB radiation. Initially, HDSF and HaCaT cells were exposed to increasing doses of UVA and UVB radiation. After 24 hours of exposure, we evaluated cell viability, cell death, inflammatory mediators, aquaporin and DNA damage. Exposure to UVA and UVB radiation in HaCaT cells results on apoptotic cell death, with an increase of caspases 3 and 9, p53 and reduction of PARP. HaCaT cells when exposed to UVA radiation resulted on increased levels of IL-6, TNF-α and COX-2, internalization of the membrane AQP3, reduction of MMP-2 and MMP-9 release, increase of MMP-1 and ROS production. After UVB radiation, HaCaT cells resulted on an increase of IL-6 and COX-2 production, it also promoted internalization of membrane AQP3 and reduced release of MMP-2 and 9. HDSF were less sensitive to both radiations. Moreover, HDSF resulted in cell viability decrease and cell cycle arrest only after UVA radiation. Furthermore, HDSF when exposed to UVA radiation resulted on an increase of IL-6 production and in DNA damage (8-oxo-dG). Among the studied compounds, CGA presented better photochemiprotective activity towards UVA and UVB radiation. Also, this compound was able to reverse cell death in HaCaT after exposure to both radiations and inhibited cell cycle arrest in HDSF after UVA radiation exposure. HaCaT cells treated with CGA and exposed to UVA radiation resulted on an increase in AQP3 and PARP expression, increased in AQP3 gene expression, reduction in CDKN1A gene expression and reduction in MMP-1, 2 and 9 release. After UVB radiation, GCA treatment increases AQP3 gene expression, reduces CDKN1A gene expression, reduces COX-2 production and increase MMP-2 and 9 releases. The AR treatment showed photochemiprotective activity towards the effects of UVA radiation, with HaCaT responding with an increase on cells viability, increased in PARP and AQP3 expression and in AQP3 gene expression, decreased MMP-1 and 9 releases and reduced COX-2c production. HDSF when treated with AR showed an increase in G1 phase population, in p21 expression and reduced DNA damage-type 8-oxo-dG. HaCaT cells treated with AC reversed cell death, increased p53 expression and increased MMP-2 and 9 releases after UVB radiation and reduced ROS production, p21 expression and MMP -1, 2, 9 release after UVA radiation. HDSF treated with AC was only able to reduce the formation of 8-oxodG DNA damage. These results indicated that the proposed model was able to discriminate the photochemiprotective activity of the studied compounds against the UVA and UVB radiation. In addition, it was demonstrated that the each studied antioxidant have different photoprotective mode of action.

O fotoenvelhecimento é uma condição dérmica decorrente da sobreposição do envelhecimento cronológico e dos efeitos da exposição crônica à radiação ultravioleta (UV) solar. A pele fotodanificada é um local propício para o desenvolvimento de lesões pré-cancerosas que podem evoluir para casos de câncer de pele. Logo, o tratamento dessa condição não é apenas de cunho estético, mas também preventivo. A Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma técnica que se baseia na fotoativação de uma molécula fotossensível, que na presença de oxigênio, produz espécies citotóxicas que levam à morte da célula e tecido alvo. Esta técnica tem sido utilizada em estudos clínicos para o tratamento da pele fotoenvelhecida, e tem apresentado bons resultados funcionais e cosméticos. São muitas as variações em parâmetros como fonte de luz, dose e tipo de fotossensibilizador. A TFD fracionada utiliza um tempo de escuro entre frações da dose total e mostra-se mais eficiente que a iluminação em uma única dose, porém seu efeito no tratamento da pele fotoenvelhecida ainda é desconhecido. Neste trabalho, um protocolo de TFD foi desenvolvido para comparar o resultado da terapia com iluminação dose única e fracionada aplicada no fotoenvelhecimento. A avaliação foi através de histologia e espectroscopia de fluorescência e tempo de vida de fluorescência. Camundongos hairless foram fotoenvelhecidos e tratados com luz LED violeta (404 nm) e creme 20% ALA (1h de incubação) com dose única (1 J.cm-2) e fracionada (duas frações de 0,5 J.cm-2 e 10 min de escuro). O efeito da TFD fracionada foi mais intenso, causando ulcerações na pele e alterações histológicas características. Esse resultado mostrou que a TFD com iluminação fracionada não foi adequada para o tratamento da pele fotoenvelhecida. A análise por tempo de vida de fluorescência foi capaz de mostrar alterações durante as semanas de recuperação. Acredita-se que essa informação venha da epiderme devido ao remodelamento observado nessa camada. / Photoaging is a skin condition resulting from the overlap of chronological aging and the effects of chronic exposure to sunlight ultraviolet (UV). Photodamaged skin is more susceptible for the development of pre-cancerous lesions, which can become skin cancer. Therefore, the treatment of this condition is not only of aesthetic concern but it is also of preventive nature. Photodynamic therapy (PDT) is a technique based on the photoactivation of a light-sensitive molecule, which, in the presence of oxygen produce cytotoxic species that lead to cell death and tissue destruction. This technique has been used in clinical trials for the treatment of photoaged skin, and it has presented good functional and cosmetic results. There are many variations on PDT parameters such as the light source, dose and type of photosensitizer. Fractionated PDT is one these variations which uses a dark interval between light fractions. Studies show that this illumination scheme enhances the therapeutic efficacy, although its effects in the treatment of photoaged skin are still unknown. In this work, a protocol was developed to compare the outcome of PDT with single and fractionated illumination applied in photoaging. The assessments were made by histology and by the optical technics: steady state and lifetime fluorescence spectroscopy. Photoaging was induced in hailess mice skin which were then treated with violet LED (404 nm) and 20% ALA cream (1h of incubation) with either single (1 J.cm-2) or fractionated (2 fractions of 0.5 J.cm-2 and 10 min of dark interval) doses. The effect of fractionated PDT was more intense, causing ulcerations on the skin and distinctive histological changes. This result shows that PDT with fractionated illumination was not suitable for the treatment of photoaged skin. The analysis by fluorescence lifetime spectroscopy was able to reveal changes during the recovery weeks. It is believed that this information comes from the epidermis due to the remodeling observed in this layer.

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This research aimed to develop an oil-based sucupira nanoemulsion using a method of high energy emulsification, and to evaluate the influence of components and parameters related to the method in the stability and size of the droplets of nanoemulsions. Also, to assess its safety and effectiveness for in vitro methods. The HLB value, the association of surfactants, the ratios between the aqueous / oil phases and surfactants, operating conditions, and number of cycles in the homogenizer will influence the stability, size and size distribution of the droplets exhibited by the nanoemulsions. The nanoemulsions show pH between 4.0 and 5.0, average diameter of the droplets around 150nm and polydispersity index lower than 0.2 (indicating narrow size distribution) after being submitted to two cycles in the high pressure homogenizer at a pressure of 500 bar. Formulations containing 10% oil, 3 or 4% surfactant and 86% water with HLB values between 11 and 13 were the nanoemulsions presenting stability at all temperatures examined for a 90-day study period. NE presented IC50 of 20 μg of oil/mL on a human keratinocyte cell line (HaCat). NE did not exhibit photoprotective activity by inhibition of COX-2 and nuclear factor NFκB. However, it showed a protective effect against oxidative stress and the reduction of proinflammatory cytokines (IL-6 and IL-8) induced by UVA. The results obtained suggest that sucupira oil nanoemulsion is a potentially candidate for photoprotection by interfering with events initiated after UV exposure at keratinocytes. / Os efeitos da radiação ultravioleta sobre a pele têm sido amplamente estudados. A exposição crônica à radiação solar tem sido considerada a maior causa de câncer de pele e fotoenvelhecimento. As moléculas bioativas oriundas de produtos naturais têm sido pesquisadas para o desenvolvimento de protetores solares aliando capacidade de absorção da luz UV com potencial atividade antioxidante. O óleo de sucupira (Pterodon spp.) é citado na literatura pela sua atividade anti-inflamatória, antinoceptiva, antioxidante, dentre outras. Esta pesquisa teve como objetivo desenvolver nanoemulsão à base de óleo de sucupira a partir de método que utiliza alta energia de emulsificação, bem como avaliar a influência dos componentes e dos parâmetros relacionados ao método de obtenção na estabilidade e tamanho dos glóbulos das nanoemulsões e posteriormente avaliar a sua segurança e possível atividade fotoprotetora in vitro. O valor de EHL, a associação de tensoativos, a proporção entre as fases aquosa/oleosa e tensoativo, e condições operacionais, com número de ciclos depassagem no homogeneizador influenciaram na estabilidade, tamanho e distribuição de tamanho das gotículas. As nanoemulsões apresentaram pH entre 4,0 e 5,0, diâmetro médio das gotículas em torno de 150nm e índice de polidispersão abaixo de 0,2 (indicando estreita distribuição de tamanho), após passagem por 2 ciclos a uma pressão de 500 bar em homogeneizador de alta pressão. As formulações contendo 10% de óleo, 3 ou 4% de tensoativo e 86% de água, com EHL variando de 11 a 13 foram as nanoemulsões que se mantiveram estáveis em todas as temperaturas analisadas pelo período de estudo de 90 dias. A formulação final apresentou IC50 de 20μg de óleo/mL sobre a linhagem de queratinócitos humanos HaCaT. A NE não apresentou atividade fotoprotetora por inibição da COX-2 e do fator nuclear NFκB. Entretanto, apresentou efeito protetor contra o estresse oxidativo e a redução de citocinas pró-inflamatórias (IL-6 e IL-8) induzidas por UVA. Os dados obtidos sugerem que a nanoemulsão contendo 10% de óleo de sucupira é um potencial candidato à fotoproteção ao interferir com os eventos iniciados após a exposição à radiação UV nos queratinócitos.

A poiquilodermia de Civatte (PC) é uma alteração dermatológica caracterizada por atrofia, pigmentação macular ou reticulada e telangiectasias na face, pescoço e tórax anterior. Várias tentativas de tratamentos não foram bem sucedidas por se mostrarem ineficazes e/ou com efeitos colaterais indesejáveis. Estudos clínicos mostram bons resultados clínicos no tratamento da PC com luz intensa pulsada (LIP). A terapia fotodinâmica (TFD) é uma modalidade terapêutica que envolve a administração tópica de um composto fotossensibilizante seguido de irradiação seletiva da lesão com luz visível. O propósito deste trabalho consiste na avaliação clínica e histopatológica da pele com PC, no tórax anterior, em 12 pacientes do sexo feminino, antes e após o tratamento com a TFD. Foram realizadas 3 sessões de tratamento com intervalos de 30 dias entre as sessões. A TFD foi realizada com a utilização prévia de cloridrato de aminolevulinato de metila 16% em creme (Metivix) 1h e 30min (oclusivo) antes da aplicação da LIP (Lime light). A avaliação clínica mostrou melhora em 84,6% no componente vascular, 80,8% no componente melanodérmico, 82,9% na textura, 77,1% nas rítides e 58,3% na flacidez de pele. Na histopatologia notou-se após o tratamento aumento estatisticamente significativo da espessura epidérmica, diminuição estatisticamente significativa do pigmento melânico e da área dos vasos marcados pelo fator VIII. Não houve nenhum efeito colateral permanente, mostrando que a TFD-MAL é uma nova opção terapêutica segura e eficaz para o tratamento da PC no tórax anterior / Poikiloderma of Civatte (PC) is the dermatological modification characterized by atrophy, macular or reticulate pigmentation and telangiectasias on the face, neck and anterior thorax. Several treatment attempts were unsuccessful, revealing to be ineffective and/or causing adverse effects. Clinical studies indicate good clinical results in the treatment of poikiloderma of Civatte with intense pulsed light (IPL). Photodynamic Therapy (PDT) is a therapeutic modality that involves the topical administration of a photosensitizing compound, followed by a selective irradiation of the lesion with visible light. The objective of this study consisted in the clinical and histopathologic evaluations of the skin with poikiloderma of Civatte (PC) on the anterior thorax of 12 female patients, before and after being treated with photodynamic therapy (PDT). Three treatment sessions were given at 30-day intervals. Photodynamic therapy was performed with methyl aminolevulinate hydrochloride 16% (Metivix) cream applied 1h and 30min under occlusion prior to LIP (Lime light) exposure. The clinical evaluation indicated an 84.6% improvement of vascular component, 80.8% of melanodermic component, 82.9% of texture, 77.1% of wrinkles and 58.3% of skin laxity. In the histopathology, a statistically significant increase of epidermal thickness was observed after the treatment, as well as a statistically significant reduction in the number of melanin pigment and of blood vessels area marked for Factor VIII. There were no permanent side effects, showing that the PDT-MAL is a new, safe and effective technic for treating PC on the anterior thorax