The aim of the dissertation thesis was to find out the influence of fungicide and increased amount of nitrogen on the yield components of oat. The dissertation is divided into a literary overview and the thesis as such. In 2018 a pilot research was made on the land of a farm located in the district of Tábor. Atego oat was grown in four variants there: a control variant, a variant fertilized by nitrogen (without the usage of fungicide), a variant comprising fungicide application (without nitrogen fertilization) and a variant including both nitrogen fertilization and fungicide application. The highest theoretical yield was registered in the variant which contained fungicide as well as nitrogen. Regarding the yield components of oat, the highest number of plants and panicles was registered in the variant fertilized by nitrogen (without the usage of fungicide); the highest number of stolons and the maximum weight of one thousand grains was measured in the variant including both nitrogen fertilization and fungicide application. Finally, the highest number of grains in a panicle was obtained from a control variant.

Os produtos do metabolismo secundário, também conhecidos por produtos naturais, representam uma fonte inexplorada de compostos com atividade biológica. Os micro-organismos, entre eles os endófitos, são fontes promissoras de obtenção dessas substâncias. Assim sendo, essa pesquisa visou obter compostos de importância biotecnológica produzidos por fungos endofíticos isolados de folhas das plantas Anthurium alcatrazense, Begonia venosa e B. fischeri. Para isso, 5 linhagens de fungos endofíticos isolados dessas plantas (códigos P7BDA1F2, P8BDA1F1, AM29, D28 e D29) foram estudadas. A identificação desses micro-organismos foi realizada por meio de análises morfológicas e moleculares, revelando serem estas linhagens Hymenochaete-like, Trichoderma sp., Neopestalotiopsis sp., Aspergillus sp. e Diaporthe sp., respectivamente. A partir do extrato bruto de Hymenochaete-like (código P7BDA1F2) foram isolados os compostos 5,7-dimetoxiftalida e metil orselinato, os quais foram testados contra Leishmania (L.) infantum e alvo do proteassoma e não apresentaram atividade. A partir do extrato bruto de Trichoderma sp. (código P8BDA1F1) foram isolados os compostos trilongins BI-BIV. Estes apresentaram atividade inibitória ao fitopatógeno C. gloeosporioides, com MIC de 40, 320, 160 e 310 μM, respectivamente. As trilongins BI-BIV foram testadas contra a subunidade ChTL do proteassoma e apresentaram os valores de IC50 de 6,5 ± 2,7; 4,7 ± 1,8; 6,3 ± 2,2; e 2,7 ± 0,5 μM. Os compostos também foram testados ex vivo contra os amastigotas intracelulares de Leishmania (L.) infantum, mas não apresentaram seletividade. A partir do extrato bruto de Neopestalotiopsis sp. (código AM29), foi isolado um composto de massa molecular 366,0570 Da (que pode ser inédito na literatura), o qual apresentou atividade inibitória ao fitopatógeno P. sojae, com MIC de 312 μg mL-1. A partir dos extratos brutos de Aspergillus sp. e Diaporthe sp. foram isolados 9 compostos, cujas frações precursoras apresentaram atividade contra as bactérias formadoras de biofilme S. aureus e P. aeruginosa. Para a identificação desses compostos, análises adicionais precisam ser realizadas. Este é o primeiro relato do isolamento dos compostos 5,7-dimetoxiftalida e metil orselinato do basidiomiceto Hymenochaete-like. Também está sendo relatada pela primeira vez a atividade antifúngica das trilongins a C. gloeosporioides e contra o alvo do proteassoma, assim como o isolamento de um possível novo composto de Neopestalotiopsis sp. e sua atividade contra P. sojae. / Secondary metabolism products, also known as natural products, represent an unexplored source of compounds with biological activity. Microorganisms, including endophytes, are promising sources of these substances. Thus, this research aimed to obtain compounds with biotechnological importance produced by endophytic fungi isolated from leaves of the plants Anthurium alcatrazense, Begonia venosa and B. fischeri. To this end, 5 endophytic fungal strains isolated from these plants (codes P7BDA1F2, P8BDA1F1, AM29, D28 and D29) were studied. The identification of these microorganisms was carried out by morphological and molecular analyzes, revealing that these strains are Hymenochaete-like, Trichoderma sp., Neopestalotiopsis sp., Aspergillus sp. and Diaporthe sp., respectively. From the crude extract of Hymenochaete-like (code P7BDA1F2) the compounds 5,7-dimethoxyphthalide and methyl orselinate were isolated, which were tested against Leishmania (L.) infantum and proteasome target and showed no activity. From the crude extract of Trichoderma sp. (code P8BDA1F1) the trilongins BI-BIV were isolated. These compounds presented inhibitory activity to the plant pathogen C. gloeosporioides, with MIC of 40, 320, 160 and 310 μM, respectively. The trilongins BI-BIV were tested against the ChTL subunit of the proteasome and showed IC50 values of 6.5 ± 2.7, 4.7 ± 1.8, 6.3 ± 2.2, 2.7 ± 0, 5 μM. The compounds were also tested ex vivo against the intracellular amastigotes of Leishmania (L.) infantum, but did not show selectivity. From the crude extract of Neopestalotiopsis sp. (code AM29), a compound with molecular mass 366.0570 Da (which can be unpublished in the literature) was isolated, which presented inhibitory activity to the plant pathogen P. sojae, with MIC of 312 μg mL-1. From the crude extracts of Aspergillus sp. and Diaporthe sp. 9 compounds were isolated, whose precursor fractions showed activity against the biofilm forming bacteria S. aureus and P. aeruginosa. For the identification of these compounds, additional analyzes need to be performed. This is the first report of the isolation of the compounds 5,7-dimethoxyphthalide and methyl orselinate from the basidiomycete Hymenochaete-like. The antifungal activity of trilongins to C. gloeosporioides and against the proteasome target is also being reported for the first time, as well as the isolation of a possible new compound from Neopestalotiopsis sp. and its activity against P. sojae.

O aumento do consumo de agrotóxicos, em geral nos países em desenvolvimento cuja base econômica é a agricultura, como no Brasil (primeiro no ranking mundial), tem sido relacionado à expansão da degradação dos ecossistemas e à perda da biodiversidade, principalmente das espécies não alvo, incluindo ainda os riscos inerentes à saúde humana. Além disso, a ausência de políticas e programas mais efetivos relacionados à regulação e uso de agrotóxicos no Brasil, bem como o estabelecimento de normas restritivas baseadas em resultados gerados em países de clima temperado, tornam-se cada vez mais preocupantes, pois podem subestimar os reais riscos da contaminação ambiental por agrotóxicos em ecossistemas tropicais. Nesse contexto, o presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos diretos e indiretos do agrotóxico pyrimethanil, um fungicida utilizado em diversas culturas de climas temperado e tropical, sobre a comunidade aquática tropical, considerando experimentos laboratoriais e o uso de modelos ecossistêmicos para avaliação destes efeitos. Para atender aos objetivos propostos foram realizados testes de toxicidade com as espécies Pseudokirchneriella subcapitata (alga), Ceriodaphnia silvestrii e Daphnia similis (zooplâncton) e Danio rerio (peixes), além de um experimento em mesocosmos, monitorado em longo prazo (durante 15 dias antes e 366 dias após a contaminação), avaliando as variações físicas e químicas, bem como as respostas das comunidades zooplanctônicas e fitoplanctônicas frente à contaminação por pyrimethanil, em uma concentração média de 1,36 mg.L-1. Nos testes de toxicidade, as CEs obtidas foram de 0,67 mg.L-1 (crônica) e 3,26 mg.L-1 (aguda) para C. silvestrii; de 3,65 mg.L-1 (agudo) para D. similis; de 9,65 mg.L-1 para P. subcapitata e para D. rerio os valores obtidos para imobilidade foram de 10,45 mg.L-1 (96h) e 13,77 mg.L-1(48h) e para a mortalidade foram de 27,45 mg.L-1 (96h) e 32,17 mg.L-1 (48h). Pelos resultados dos experimentos em mesocosmos verificaram-se efeitos negativos diretos sobre o zooplâncton (redução da densidade e alteração na composição de espécies) e indiretos sobre o fitoplâncton, decorrentes da diminuição da pressão de pastagem, além do desaparecimento de algumas espécies mais sensíveis. Os efeitos tóxicos observados foram além do período em que foi observada a degradação completa do pyrimethanil, demonstrando o alto impacto do agrotóxico em ecossistemas aquáticos e a complexidade da dinâmica desse tipo de contaminação em ecossistemas naturais. O design experimental revelou-se adequado, gerando informações importantes sobre os impactos dos agrotóxicos nos ecossistemas aquáticos. A partir dos resultados obtidos sugere-se que a utilização de espécies nativas de regiões tropicais seja ampliada nos testes de toxicidade laboratoriais, sendo fundamental que os mesmos sejam complementados com os experimentos em modelos ecossistêmicos, o que permite uma avaliação dos efeitos diretos e indiretos dos contaminantes em nível de população e comunidade, bem como uma melhor compreensão destes efeitos nas funções e serviços ecossistêmicos. / The increase in the consumption of pesticides, mainly in developing countries whose economic base is agriculture, as Brazil (first in the world ranking), has been associated to the expansion of ecosystem degradation and biodiversity losses, especially of non-target species, also including the risks to human health. In addition, the absence of policies and effective programs related to the regulation and use of pesticides in Brazil, and the establishment of restrictive standards based on results generated in temperate countries, make it becomes increasingly worrisome because it may underestimate the real risks of environmental contamination by pesticides in tropical ecosystems. In this context, the present study aim to evaluate the direct and indirect effects of the pesticide pyrimethanil, a fungicide used in many temperate and tropical crops, upon a tropical aquatic community, considering laboratory experiments and the use of ecosystem models to evaluate these effects. To achieve the proposed objectives toxicity tests were performed with the species Pseudokirchneriella subcapitata (algae), Ceriodaphnia silvestrii and Daphnia similis (zooplankton) and Danio rerio (fish), as well as an experiment in mesocosms, monitored for a long-term (15 days before and 366 days after infection), evaluating the physical and chemical variations, and also the responses of phytoplankton and zooplankton communities across the pyrimethanil contamination in an average concentration of 1.36 mg.L-1. In toxicity tests, the ECs obtained were 0.67 mg.L-1 (chronic) and 3.26 mg L-1 (acute) for C. silvestrii; 3,65 mg.L-1 (acute) for D. similis; 9.65 mg.L-1 for P. subcapitata; and the values obtained for D. rerio immobility were 10.45 mg.L-1 (96h) and 13.77 mg.L-1 (48h) and mortality were 27.45 mg.L-1 (96h) and 32.17 mg.L-1 (48h). The results of the experiments in mesocosms showed direct negative effects on zooplankton (reduced density and change in species composition) and indirect effects on phytoplankton, resulted from the decrease in grazing pressure in addition to the exclusion of some sensitive species. Even after the complete degradation of pyrimethanil, toxic effects were observed, demonstrating the high impact of this pesticide on aquatic ecosystems and the complexity of the dynamics of this type of contamination in natural ecosystems. The design of the experiment revealed to be appropriate for the study, generating important information about the impacts of pesticides on aquatic ecosystems. From the results, it is suggested an increase in the use of native tropical species in the toxicity laboratory tests. Also, this process should be complemented with experiments in ecosystem models, allowing the evaluation of the direct and indirect effects of contaminants in the population and in community level as well as a better understanding of these effects on ecosystem functions and services.

Atualmente a soja é uma das principais culturas de interesse econômico cultivadas no Brasil, sendo que o país configura como o segundo maior produtor da oleaginosa, ficando atrás apenas da produção obtida pelos Estados Unidos da América. Para se proteger essa alta produtividade e manter o Brasil em um cenário econômico competitivo, os produtores brasileiros utilizam diversos defensivos agrícolas. Destes, os fungicidas são principalmente utilizados de maneira preventiva, ou seja, sem a presença do patógeno alvo, isso ocorre principalemnte devido ao modo de ação dos princípios ativos disponíveis comercialmente na atualidade. Essa utilização preferencial de fungicidas de maneira preventiva, fez com que crescesce também o interesse pelo estudo dos efeitos, sejam eles positivos ou negativos, na fisiologia e bioquímica das plantas cultivadas. O presente experimento foi instalado em casa de vegetação no município de Holambra-SP, tendo por objetivo avaliar os efeitos fisiológicos e bioquímicos provocados pela aplicação dos fungicidas benzovindiflupir+azoxistrobina (STL+AZT) e protioconazol+trifloxistrobina (PTZ+TFS), na cultura da soja. O delineamento experimental foi o de blocos casualizados contando com seis repetições cada. Os tratamentos com fungicidas utilizados foram: [T1] controle (testemunha); [T2] plantas que receberam aplicação de STL+AZT (30 + 60 g de ingrediente ativo por hectare), com adição do adjuvante Nimbus a 600 ml por hectare, conforme recomendação do fabricante; [T3] plantas que receberam aplicação de PTZ+TFS (70 + 60 g de ingradiente ativo por hectare), com adição do adjuvante Aureo a 400 ml por hectare, confrome recomendação do fabricante. Foram realizadas duas aplicações, sendo a primeira 42 dias após a emergência das plantas, quando estas se encontravam na fase de início de florescimento (R1) e a segunda com 15 dias de intervalo da primeira. Os tratamentos foram avaliados atraves de trocas gasosas, fluorescência da clorofila a e enzimas do sistema antioxidante. Não foram observadas alterações significativas na eficiência quântica potencial (Fv/Fm) e eficiência quântica máxima (Fv\'/Fm\') do fotossistema II (PSII) para nenhum dos fungicidas testados. Entretanto observou-se que a utilização de PTZ+TFS reduziu de maneira significativa no rendimento quântico efetivo do PSII (ΦPSII), na taxa aparente de transporte de elétrons (ETR) e na proporção de centro de reações do PSII \"abertos\" (qP), sendo que reduções na condutância estomática (gs), transpiração (E), taxa de assimilação de CO2 (A) e na velocidade máxima de carboxilação da rubisco (Vcmáx) também foram observadas quando se aplicou esse fungicida. Além das reduções observadas, constatou-se também que esse fungicida provoca uma elevação da temperatura foliar (Tf). Além dessas alterações fotoquímicas, foi também observado um aumento da atividade das enzimas dismutase da superoxido (SOD) e glutationa redutase (GR). Em contrapartida a utilização de STL+AZT aumentou ΦPSII, ETR e qP, assim como elevação em gs, E, Vcmáx e consequentemente em A também foram observados. / Currently soybean is one of the main crops of economic interest cultivated in Brazil, and the country is the second largest producer of this oilseed, behind only of the production obtained by the United States of America. In order to protect this high productivity and keep Brazil in a competitive economic scenario, brazilian growers use several agricultural pesticides. Among these pesticides, fungicides are mainly used in a preventative way, that is, without the presence of the target pathogen, this is mainly due to the mode of action of the currently commercially available active ingredients. This preferential use of preventative fungicides has also increased the interest in studying the effects, whether positive or negative, on the physiology and biochemistry of cultivated plants. The present experiment was carried out in a greenhouse in the municipality of Holambra-SP, Brazil, to evaluate the physiological and biochemical effects of the fungicides benzovindiflupir + azoxystrobin (STL+AZT) and prothioconazole + trifloxystrobin (PTZ +TFS) on soybeans. The experimental design was a randomized block design with six replicates each. The treatments with fungicides used were: [T1] control (control); [T2] plants receiving STL + AZT (30 + 60 g of active ingredient per hectare), with addition of the Nimbus adjuvant at 600 ml per hectare, according to the manufacturer\'s recommendation; [T3] plants receiving PTZ + TFS (70 + 60 g active in per hectare), with addition of the Aureo adjuvant at 400 ml per hectare, according to the manufacturer\'s recommendation. Two applications were performed, the first was 42 days after the emergence of the plants when they were in the begning of flowering (R1) and the second after 15 days of the first one. The treatments were evaluated through gas exchange, chlorophyll a fluorescence and antioxidant system enzymes. No significant changes were observed in the potential quantum efficiency (Fv/Fm) and the maximum quantum efficiency (Fv\'/Fm\') of photosystem II (PSII) for none of the fungicides tested. However, it was observed that the use of PTZ+TFS significantly reduced the effective quantum yield of PSII (ΦPSII), the apparent electron transport rate (ETR) , and reductions in stomatal conductance (gs), transpiration (E), CO2 assimilation rate (A) and the maximum rate of carboxylation of rubisco (Vcmáx) were also observed when applying this fungicide. In addition to the observed reductions, it was also verified that this fungicide causes a rise in leaf temperature (Tf). In addition to these photochemical alterations, an increased activity of the enzymes superoxide dismutase (SOD) and glutathione reductase (GR) was also observed. In contrast, the use of STL + AZT increased ΦPSII, ETR and qP, as well as elevation in gs, E, Vcmax and consequently in A were also observed.

O controle da podridão parda do pessegueiro (Monilinia fructicola) é realizado essencialmente por aplicações preventivas de fungicidas, em sua maioria sistêmicos com modo de ação específico. O uso contínuo desses fungicidas pode levar à seleção de indivíduos resistentes ao ingrediente ativo e, consequentemente, à perda da eficiência do controle nos pomares. A evolução da população de isolados resistentes ao longo do tempo, na ausência do fungicida, pode ser prevista com estudos de habilidade competitiva entre isolados resistentes e sensíveis. Portanto, a quantificação da adaptabilidade (fitness) e da estabilidade, necessárias para caracterizar os isolados encontrados em campo, auxiliarão nas estratégias antirresistência. Embora a importância da determinação da adaptabilidade de isolados resistentes seja reconhecida, há poucos métodos descritos para a análise da habilidade competitiva. Assim, esse trabalho verificou a adaptabilidade, a estabilidade e a habilidade competitiva de isolados de M. fructicola com diferentes níveis de sensibilidade à azoxistrobina em experimentos in vitro e em frutos de pêssegos (in natura e enlatado) utilizando metodologias de avaliação diversas. A caracterização dos isolados foi realizada in vitro, in vivo e molecularmente. Foram avaliados o diâmetro da colônia e a esporulação in vitro; o período de incubação e de latência, a incidência e a severidade da doença e a esporulação in vivo dos isolados separadamente. Os dados de esporulação in vitro foram submetidos ao teste de Kruskal-Wallis e os dados de crescimento micelial ao teste de Tukey com 5% de probabilidade. Para a análise dos dados in vivo, utilizou-se a análise multivariada. Dez transferências em meio de cultura sem fungicida foram realizadas para o estudo da estabilidade de dois isolados resistentes (SP08435 e SP09839) e um sensível (PR09638). A esporulação, a porcentagem de germinação de conídios e o diâmetro da colônia dos isolados em meio de cultura com fungicida foram avaliados em quatro transferências (inicial, terceira, sexta e última transferência). A habilidade competitiva foi verificada pela evolução da porcentagem de indivíduos resistentes no tempo entre um isolado resistente (SP09839) e um sensível à azoxistrobina (PR09638). Modelos lineares ou modelos lineares generalizados (GLM) foram utilizados para descrever o progresso da proporção do isolado resistente ao longo do tempo. Os isolados resistentes exibiram esporulação in vitro e taxa de crescimento micelial semelhantes aos sensíveis, além de apresentarem-se no mesmo grupo de similaridade que os isolados sensíveis. Nenhuma mutação no cyt b foi associada à resistência de M. fructicola à azoxistrobina (G143A, G137R, e F129L) e em todos os isolados foi observado o íntron antes do códon 143. Mesmo após 10 transferências em meio de cultura sem fungicida, os isolados resistentes à azoxistrobina não reduziram sua sensibilidade nem sua capacidade de esporulação e crescimento fora do pêssego. Independentemente da metodologia utilizada para avaliar a habilidade competitiva, a resistência à azoxistrobina não correspondeu a um custo adaptativo para M. fructicola, pois a proporção do isolado resistente manteve-se inalterada ao longo das transferências. O uso de pêssego enlatado é recomendado na substituição de frutos in natura para experimentos de habilidade competitiva. / Control of brown rot in peaches (caused by Monilinia fructicola) is mainly by preventive applications of fungicides, mostly single-target site. Repeated use of these fungicides can, however, select for resistant pathogen populations, which may result in failure of disease control. The evolution of resistant isolates in a population over time can be predicted with competitive ability assays between sensitive and resistant isolates. Therefore, studies quantifying pathogen fitness and stability are necessary to characterize field isolates and improve anti-resistant strategies. However, there are limited reports concerning the methodology used in competitive ability assays. This study determined the fitness of M. fructicola isolates with different levels of sensitivity to azoxystrobin in trials in vitro and in vivo (in natura and canned peaches) with different monocyclic components. Isolates characterization were carried out in vitro, in vivo and molecularly. Mycelial growth rate and sporulation were estimated in vitro, and disease incidence, severity, lesion sporulation, incubation and latent period were evaluated in peach fruit for sensitive and resistant isolates. Sporulation in vitro data were analyzed by Kruskal-Wallis test and mycelial growth rate with the Tukey test at 5% probability. For the in vivo experiments, multivariate analysis were carried out. Ten consecutive transfers on non-amended media were conducted to determine the stability of isolates (two resistant and one sensitive). Sporulation, percent spore germination and colony diameter on azoxystrobin amended media were also evaluated four times (the first, the third, the sixth and the last transfer). Competitive ability was investigated by testing the percentage increase of resistant individuals five generations after inoculation with a mix of azoxystrobin sensitive and resistant isolates. The competitive ability of sensitive and resistant isolates were compared with different variables as colony-forming unit and spore germination. Linear or generalized linear models (GLM) were adjusted to compare the progress of resistant isolates over time. All resistant isolates had in vitro sporulation and mycelial growth rate similar to sensitive isolates. All isolates sequenced presented an intron close to codon 143 and did not have any of the point mutations commonly associated with resistance to QoI fungicides (G143A, G137R, and F129L). After 10 transfers in PDA, colony diameter of resistant isolates was not reduced in azoxystrobin-amended media with 1 μg.ml-1 nor was their sporulation in vitro For all parameters used to measure competitive ability, no fitness cost was associated to M. fructicola isolates resistant to azoxystrobin. Canned peach is a viable option for studies aiming to determine fitness cost of resistant isolates.

Os fungos são decompositores primários e, portanto, ocupam uma posição estratégica na base da cadeia alimentar em diversos ecossistemas, incluindo os terrestres. Por tais características, estes organismos são de especial interesse na aplicação em bioensaios de toxicidade. As metodologias com espécies bioluminescentes são geralmente práticas, economicamente viáveis e de fácil aplicação. Ainda assim, os fungos naturalmente bioluminescentes são ainda pouco estudados para este propósito, em comparação com os organismos aquáticos, como as bactérias. Neste cenário, o presente trabalho apresenta os efeitos de diferentes condições de cultivo sobre o perfil de bioluminescência do fungo Neonothopanus gardneri, buscando o desenvolvimento de um bioensaio de toxicidade utilizando esta espécie. Estudos preliminares foram destinados à redução da variação experimental, à identificação de algumas das características intrínsecas do organismo em cultura e, ainda, à definição de procedimentos de análise e de inoculação do micélio. Em seguida, a emissão de luz foi monitorada variando as temperaturas de incubação, o pH dos meios de cultura e as concentrações das fontes de carbono e de nitrogênio, adotadas como nutrientes. Identificou-se que a incubação a 30ºC em meios com 2% de ágar, 1% de melaço de cana de açúcar, 0,02% de extrato de levedura e pH 6 resultou em um perfil de bioluminescência mais adequado ao propósito de interesse, apesar de não ter resultado na maior emissão de luz possível. Nestas condições de cultivo, foi possível desenvolver um bioensaio de toxicidade. Para isso, foi necessário avaliar o comportamento da luz emitida pelo micélio em contato tanto com ar atmosférico quanto com alguns potenciais diluentes, estabelecendo-se também o tempo de exposição necessário para uma resposta máxima do fungo N. gardneri em contato com soluções de Cu+2 (50 mM) e fenol (10 mM). Neste caso, uma solução aquosa de Triton X-100 na concentração de 0,01% (m:v) tamponada com ácido 2-(N-morfolino)etano sulfônico (MES, 50 mM, pH 5,7) foi adotada para diluir os agentes tóxicos, aos quais o micélio foi exposto durante 24 horas. Posteriormente, a metodologia foi aplicada para testar a toxicidade de dois metais e dois fenóis (Cu+2, Cd+2, fenol e 4-nitrofenol), obtendo-se respectivos valores de EC50 (concentração mediana efetiva) iguais a (0,53 ± 0,09) mM; (8,0 ± 0,5).10-3 mM; (1,7 ± 0,3) mM e (0,34 ± 0,04) mM. Entretanto, em experimentos paralelos, a quantificação espectrofotométrica de fenóis nos meios de cultura indicou que os mesmos são difundidos homogeneamente pelo ágar. Neste caso, os valores de EC50 seriam divididos por 6, para considerar a diluição dos compostos pelos meios. O bioensaio com a espécie N. gardneri possui vantagens, principalmente em relação ao comportamento reprodutível da emissão de luz, à alta intensidade da bioluminescência, ao crescimento rápido do micélio e à sensibilidade aos agentes tóxicos testados. Considerando tais características, a metodologia desenvolvida representa um procedimento viável em bioensaios de toxicidade. Assim, a mesma pode ser aperfeiçoada em trabalhos futuros e aplicada em complemento com outros métodos já desenvolvidos para outros organismos terrestres ou aquáticos. / Fungi are primary decomposers, thus occupying a strategic position at the base of the food chain in many ecosystems, including terrestrial ones. Due to such characteristics, these organisms are of special interest to toxicity bioassays. Bioluminescent-based methods are usually practical, economically viable and easy to perform. Nevertheless, naturally bioluminscent fungi are still poorly studied in this respect, compared to aquatic organisms like bacteria. In the above mentioned scenario, this work presents the effects of different culture conditions on the bioluminescence profile of the fungus Neonothopanus gardneri, aiming at the development of a toxicity bioassay using this species. Preliminary studies were intended to reduce experimental variation, identify some of the intrinsic characteristics of the organism in culture, and also to define the procedures for analysis and mycelium inoculation. Following this, light emission was monitored varying the incubation temperatures; the culture media pH and the concentrations of carbon and nitrogen nutrient sources. It was identified that the incubation at 30ºC in culture media containing 2% agar, 1% sugar cane molasses, 0.02% yeast extract and pH 6 resulted in the most appropriate bioluminescence profile for the purpose of interest, although it has not resulted in the higher light emission. Under these culturing conditions, it was possible to develop a toxicity bioassay. To this end, it was necessary to assess the behavior of light emission from the mycelium in contact with both atmospheric air and some potential diluents, also establishing the exposure time required for a maximum response of N. gardneri in contact with Cu+2 (50 mM) and phenol (10 mM) solutions. In this case, an aqueous solution of Triton X-100 in the concentration of 0.01% (w:v) buffered with 2-(N-Morpholino)ethanesulfonic acid (MES, 50 mM) was chosen to dilute the toxic agents, to which the mycelium was exposed for 24 hours. Thereafter, the methodology was applied to test the toxicity of two metals and two phenols (Cu+2, Cd+2, phenol and 4-nitrophenol), obtaining respective EC50 values (median effective concentration) equal to (0,53 ± 0,09) mM; (8,0 ± 0,5).10-3 mM; (1,7 ± 0,3) mM e (0,34 ± 0,04) mM. Meanwhile, in parallel experiments, the spectrophotometric quantification of phenols in culture media indicated that they are evenly diffused through agar. In this case, the EC50 values would be divided by 6, in order to consider the dilution of compounds by the media. The toxicity bioassay with N. gardneri species has advantages, manly in relation to the reproducible behavior of light emission, high intensity of bioluminescence, rapid growth of mycelium and sensitivity to the tested toxic agents. Considering these characteristics, the developed methodology represents a viable procedure for a toxicological bioassay. Accordingly, it can be improved in future work and performed in addition to other methods already developed for other terrestrial or aquatic organisms.

Os produtos do metabolismo secundário, também conhecidos por produtos naturais, representam uma fonte inexplorada de compostos com atividade biológica. Os micro-organismos, entre eles os endófitos, são fontes promissoras de obtenção dessas substâncias. Assim sendo, essa pesquisa visou obter compostos de importância biotecnológica produzidos por fungos endofíticos isolados de folhas das plantas Anthurium alcatrazense, Begonia venosa e B. fischeri. Para isso, 5 linhagens de fungos endofíticos isolados dessas plantas (códigos P7BDA1F2, P8BDA1F1, AM29, D28 e D29) foram estudadas. A identificação desses micro-organismos foi realizada por meio de análises morfológicas e moleculares, revelando serem estas linhagens Hymenochaete-like, Trichoderma sp., Neopestalotiopsis sp., Aspergillus sp. e Diaporthe sp., respectivamente. A partir do extrato bruto de Hymenochaete-like (código P7BDA1F2) foram isolados os compostos 5,7-dimetoxiftalida e metil orselinato, os quais foram testados contra Leishmania (L.) infantum e alvo do proteassoma e não apresentaram atividade. A partir do extrato bruto de Trichoderma sp. (código P8BDA1F1) foram isolados os compostos trilongins BI-BIV. Estes apresentaram atividade inibitória ao fitopatógeno C. gloeosporioides, com MIC de 40, 320, 160 e 310 μM, respectivamente. As trilongins BI-BIV foram testadas contra a subunidade ChTL do proteassoma e apresentaram os valores de IC50 de 6,5 ± 2,7; 4,7 ± 1,8; 6,3 ± 2,2; e 2,7 ± 0,5 μM. Os compostos também foram testados ex vivo contra os amastigotas intracelulares de Leishmania (L.) infantum, mas não apresentaram seletividade. A partir do extrato bruto de Neopestalotiopsis sp. (código AM29), foi isolado um composto de massa molecular 366,0570 Da (que pode ser inédito na literatura), o qual apresentou atividade inibitória ao fitopatógeno P. sojae, com MIC de 312 μg mL-1. A partir dos extratos brutos de Aspergillus sp. e Diaporthe sp. foram isolados 9 compostos, cujas frações precursoras apresentaram atividade contra as bactérias formadoras de biofilme S. aureus e P. aeruginosa. Para a identificação desses compostos, análises adicionais precisam ser realizadas. Este é o primeiro relato do isolamento dos compostos 5,7-dimetoxiftalida e metil orselinato do basidiomiceto Hymenochaete-like. Também está sendo relatada pela primeira vez a atividade antifúngica das trilongins a C. gloeosporioides e contra o alvo do proteassoma, assim como o isolamento de um possível novo composto de Neopestalotiopsis sp. e sua atividade contra P. sojae. / Secondary metabolism products, also known as natural products, represent an unexplored source of compounds with biological activity. Microorganisms, including endophytes, are promising sources of these substances. Thus, this research aimed to obtain compounds with biotechnological importance produced by endophytic fungi isolated from leaves of the plants Anthurium alcatrazense, Begonia venosa and B. fischeri. To this end, 5 endophytic fungal strains isolated from these plants (codes P7BDA1F2, P8BDA1F1, AM29, D28 and D29) were studied. The identification of these microorganisms was carried out by morphological and molecular analyzes, revealing that these strains are Hymenochaete-like, Trichoderma sp., Neopestalotiopsis sp., Aspergillus sp. and Diaporthe sp., respectively. From the crude extract of Hymenochaete-like (code P7BDA1F2) the compounds 5,7-dimethoxyphthalide and methyl orselinate were isolated, which were tested against Leishmania (L.) infantum and proteasome target and showed no activity. From the crude extract of Trichoderma sp. (code P8BDA1F1) the trilongins BI-BIV were isolated. These compounds presented inhibitory activity to the plant pathogen C. gloeosporioides, with MIC of 40, 320, 160 and 310 μM, respectively. The trilongins BI-BIV were tested against the ChTL subunit of the proteasome and showed IC50 values of 6.5 ± 2.7, 4.7 ± 1.8, 6.3 ± 2.2, 2.7 ± 0, 5 μM. The compounds were also tested ex vivo against the intracellular amastigotes of Leishmania (L.) infantum, but did not show selectivity. From the crude extract of Neopestalotiopsis sp. (code AM29), a compound with molecular mass 366.0570 Da (which can be unpublished in the literature) was isolated, which presented inhibitory activity to the plant pathogen P. sojae, with MIC of 312 μg mL-1. From the crude extracts of Aspergillus sp. and Diaporthe sp. 9 compounds were isolated, whose precursor fractions showed activity against the biofilm forming bacteria S. aureus and P. aeruginosa. For the identification of these compounds, additional analyzes need to be performed. This is the first report of the isolation of the compounds 5,7-dimethoxyphthalide and methyl orselinate from the basidiomycete Hymenochaete-like. The antifungal activity of trilongins to C. gloeosporioides and against the proteasome target is also being reported for the first time, as well as the isolation of a possible new compound from Neopestalotiopsis sp. and its activity against P. sojae.

Os efeitos de EPA e DHA sobre a função de neutrófilos foram comparados. Para isso, foram realizados experimentos em neutrófilos isolados de ratos. Foram analisadas células com a membrana plasmática íntegra e fragmentação de DNA com o intuito de determinar as concentrações não tóxicas de EPA e DHA. Aumento da produção de peróxido de hidrogênio ocorreu a partir de concentrações menores de DHA (50 <font face=\"Symbol\">mM comparado com 100 <font face=\"Symbol\">mM de EPA). Já para a produção de ânion superóxido, EPA estimulou em doses menores (12.5 <font face=\"Symbol\">mM e o DHA em 100 <font face=\"Symbol\">mM). Ambos AGs aumentaram a síntese e liberação das citocinas CINC-2 e TNF-<font face=\"Symbol\">&#945 e não modificaram a produção de IL1-<font face=\"Symbol\">b e óxido nítrico após incubação das células por 18 horas. Somente DHA elevou a capacidade fagocitária e a atividade fungicida dos neutrófilos. EPA e DHA apresentaram efeitos distintos na produção de citocinas, fagocitose e atividade fungicida dos neutrófilos. Já na produção das EROS, EPA e DHA apresentaram efeitos similares, embora em concentrações diferentes. / The effects of eicosapentaenoic (EPA) and docosahexaenoic (DHA) on neutrophil function were compared. For this purpose, experiments were performed in isolated rat neutrophils. Cells with intact plasma membrane and DNA fragmentation were analyzed in order to determine the non-toxic concentrations of EPA and DHA. Production of H2O2 was increased in lower concentrations of DHA (50 <font face=\"Symbol\">mM compared to 100 <font face=\"Symbol\">mM of EPA). For production of O2 -, EPA stimulated at lower doses (12.5 <font face=\"Symbol\">mM compared to 100 <font face=\"Symbol\">mM of DHA). Both FAs increased synthesis and release of cytokines, CINC-2 and TNF-<font face=\"Symbol\">&#945, and did not change the production of IL-1<font face=\"Symbol\">b and nitric oxide after incubation of the cells for 18 hours. Only DHA increased the phagocytic capacity and fungicidal activity of neutrophils. These FAs showed distinct effects on cytokine production, phagocytosis capacity and fungicidal activity by neutrophils. For production of ROS, both EPA and DHA had similar actions, although at different concentrations.

No Brasil, a soja ocupa a maior área cultivada. Problemas relacionados com doenças fúngicas na cultura têm sido responsáveis por perdas de produtividade de grãos de até 95%. A utilização de compostos a base de piraclostrobina (estrobilurina) tem provido aumento de produtividade e controle de doenças, principalmente da ferrugem asiática, considerada uma das principais doenças da soja no momento. Visando um aporte à pesquisa nas respostas fisiológicas da cultura, este estudo objetivou avaliar o efeito fisiológico de um fungicida a base da estrobilurina piraclostrobina em diferentes cultivares de soja. Realizaram-se dois experimentos, de novembro de 2005 a maio de 2006, no campo experimental da Escola Superior de Agricultura \"Luiz de Queiroz\", utilizando as variedades cultivadas \'M-SOY 8008 RR\' e \'BRS 245 RR\' e um experimento conduzido com a variedade cultivada \'BRS Conquista\', em casa-de-vegetação (condições parcialmente controladas), de janeiro a maio de 2007. Foram realizadas medidas fisiológicas (fotossíntese líquida, respiração, síntese de etileno e atividade da enzima nitrato redutase), fenométricas (fitomassa seca de folhas, caule e total e área foliar), além da produtividade. Os dados obtidos nos ensaios a campo foram utilizados nos modelos propostos por Van Keuler e Wolf (1986). Nos dois experimentos a campo, o delineamento experimental foi de blocos ao acaso com três tratamentos (T1: sem aplicação de fungicida, T2: duas aplicações da estrobilurina piraclostrobina e T3: duas aplicações de tebuconazol - triazol - em R1 e R5.1) com 4 repetições. Em casa-de-vegetação, o delineamento adotado foi o de blocos ao acaso com dois tratamentos (T1: aplicação da estrobilurina piraclostrobina e T2: sem aplicação) e cinco repetições. Na variedade cultivada \'M-SOY 8008 RR\', a aplicação da estrobilurina piraclostrobina no estádio fenológico R1 e R5.1 incrementa a taxa fotossintética nos dois períodos de aplicação. A atividade da enzima nitrato redutase somente é incrementada quando a aplicação é realizada no estádio fenológico R1. A taxa respiratória decresce após a aplicação da estrobilurina piraclostrobina (estádio fenológico R5.1). A estrobilurina piraclostrobina incrementa a taxa de assimilação bruta de CO2 da planta e a taxa de assimilação líquida de CO2 nas vagens, a massa de 1000 grãos e a produtividade de 13 e 4 sacas ha-1 em relação ao tratamento sem aplicação e ao tratamento com aplicação de triazol, respectivamente. Em relação a variedade cultivada \'BRS 245 RR\', a estrobilurina piraclostrobina aumenta o acúmulo de fitomassa seca de folhas, caule e total e da área foliar em torno de 14 dias após a primeira aplicação, mantida até o final do ciclo. Os resultados obtidos em casa-de-vegetação revelaram que a aplicação da estrobilurina piraclostrobina aumenta a taxa fotossintética e atividade da enzima nitrato redutase até o 7 dias após a aplicação, com valores máximos aos 7 DAA para a fotossíntese e ao 0 DAA para a atividade da enzima nitrato redutase. A condutância estomática e a transpiração aumentaram até 3 dias após a aplicação, momento onde é verificado o máximo efeito. O decréscimo na taxa respiratória é mantido até os 7 DAA, entretanto a biossíntese de etileno é inibida progressivamente até os 18 DAA. Com base nos resultados, conclui-se que a aplicação da estrobilurina piraclostrobina em soja causa aumento da atividade fisiológica ocasionando incremento da produtividade de grãos, sendo que a maior atividade na taxa de assimilação de carbono e nitrogênio ocorre até o os 7 DAA. / In Brazil, the soybean is one of the most cultivated crop. However, problems related to fungal diseases caused losses in yield up to 95%. The use of pyraclostrobin had provided increase in yield and diseases control, as Asian rust mainly, considered one of the main soybean disease actually. With the purpose of studying the physiological effect of the pyraclostrobin (strobilurin) application on soybean crop, three experiments were carried out at Piracicaba, State of São Paulo, Brazil (University of São Paulo, Escola Superior \"Luiz of Queiroz\"), using different cultivars (two field experiments, from November 2005 to May 2006, with \'M-SOY 8008 RR\' and \'BRS 245 RR\' cultivar and one greenhouse experiment, from January to May 2007, with \'BRS Conquista\' cultivar). Physiological (net photosynthesis, respiration, ethylene production and the nitrate reductase - enzyme - activity) and phenometric analysis (total - shoot + root - leaves and stem dry mass and leaf area) and soybean yield were evaluated. The statistical field experiment design was complete randomized block design with three treatments (T1: no fungicide application; T2: two applications of pyraclostrobin and T3: two applications of tebuconazole - triazol - at R1 and R5.1 soybean phenological stages) and four replications. The statistical greenhouse experiment design also was complete randomised block design with two treatments (T1: pyraclostrobin application and T2: no fungicide application) and five replications. The field experiment observed data had been used according to the Van Keuler and Wolf (1986) models. The nitrate reductase enzyme activity was increased when the fungicide was applied at R1 stage. The respiratory rate decreases soon after the pyraclostrobin application (stage R5.1). The pyraclostrobin (strobilurin) increased: (i) the plant CO2 gross assimilation rate; (ii) the pod CO2 net assimilation rate; (iii) the mass of 1000 seeds and (iv) yield (13 and 4 bags ha-1 in relation to T1 and T3, respectively). In relation to \'BRS 245 RR\' cultivar, the pyraclostrobin increased leaves, stem and total (shoot + root) dry mass and leaf area from 14 days after first application to end of the crop cycle. The greenhouse observed data demonstrated that the pyraclostrobin application increased the photosynthesis rate (maximum values occurred 7 days after application - DAA) and the nitrate reductase enzyme activity (maximum values occurred 0 DAA) until 7 DAA. The physiological effect of pyraclostrobin application on the stomatal conductance and transpiration rate occured until 3 DAA, period of maximum effect. The respiratory rate decreased until 7 DAA, however the ethylene biosynthesis was inhibited gradually until 18 DAA. The observed data allows to conclud that the pyraclostrobin application increased the soybean physiological activity and the yield, being that the highest activity in the carbon assimilation and nitrogen rate occurred until the 7 DAA.

A utilização de fungicidas multissítios, como é o caso do mancozebe (Mz), tem crescido bastante nas últimas safras com o intuito de evitar a resistência de fungos a fungicidas sítio-específico, além de aumentar sua eficiência no controle de doenças. No entanto, além do efeito fungicida, em áreas que receberam a aplicação destes produtos tem sido observados efeitos fisiológicos nas plantas, que vão desde a redução do nível de estresse até o aumento no teor de clorofila, o que repercute na produtividade. Associado a isto, o ácido salicílico também se torna uma estratégia importante, visto que este hormônio promove redução do nível de estresse, além de atuar na indução de resistência contra doenças. No entanto, pouco se sabe sobre os efeitos fisiológicos que este produtos isolados e em associação podem causar na cultura do feijoeiro comum. Portanto, o objetivo do trabalho foi avaliar o efeito da aplicação de Mz e ácido salicílico em características fisiológicas, componentes de produção e produtividade da cultura do feijoeiro comum. O ensaio foi conduzido em área comercial de produção de feijão irrigado em Patos de Minas-MG entre os meses de abril e agosto de 2017. Foi adotado delineamento em blocos casualizados em esquema fatorial 5 x 2 constituído por cinco doses de ácido salicílico (0, 50, 100, 200 e 400 mg ha-1) associados ou não a aplicação de Mz na dose de 400 g ha-1 e cinco repetições. Para cada tratamento, foram realizadas três aplicações, sendo estas aos 22, 37 e 52 dias após a semeadura. Foram realizadas avaliações de massa de matéria seca de vagens, produtividade, atividade da nitrato redutase, urease, enzimas antioxidantes (SOD, POD e CAT), teor de prolina, peróxido de hidrogênio e peroxidação de lipídios. A aplicação de Mz proporcionou o aumento da atividade da SOD, sendo assim também ocorreu o incremento POD e da CAT, consequentemente reduzindo o peróxido de hidrogênio em folhas de feijoeiro, o que manteve baixo os níveis de peroxidação lipídica. Além disso, os níveis de prolina caíram significativamente após a aplicação de Mz. Quando se utilizou o Mz associado com o ácido salicílico, se observou que ocorreu o aumento da atividade da SOD, atingindo o seu pico para a dose de 200 mg ha-1. Além disso o ácido salicílico promoveu o incremento de prolina quando associado ao Mz, em relação ao tratamento com Mz isolado. Nesta situação a prolina foi reponsável pela eliminação de H2O2, mantendo os níveis das enzimas SOD e CAT reduzidos. Com os baixos níveis de peróxido de hidrogênio a peroxidação lipídica reduziu significativamente. As aplicações de Mz refletiram na maior massa seca de vagens e implicando na maior produtividade do feijoeiro, ao passo que o ácido salicílico proporcionou o aumento de produtividade, porém dependente da dose utilizada que apresentou o melhor resultado na dose de 200 mg ha-1. / The use of multisite fungicides, such as mancozeb (Mz), has grown in the last few seasons in order to avoid fungal resistance to specific-site fungicides, in addition to increasing its efficiency in disease control. However, in addition to the fungicidal effect, in areas that have received the application of these products, physiological effects have been observed in the plants, ranging from the reduction of the stress level to the increase in chlorophyll content, which has an impact on productivity. Associated with this, salicylic acid also becomes an important strategy, since this hormone promotes reduction of stress level, besides acting in the induction of resistance against diseases. However, knowledge about physiological effects is well limited on what isolated and associated products can cause on the common bean crop. Therefore, the objective of this work was to evaluate the effect of Mz and salicylic acid applications on physiological characteristics, production components and productivity of the common bean crop. The experiment was carried out in a commercial area of irrigated common bean production in \'Patos de Minas\'-MG between April and August 2017. A randomized complete block design was used in a 5 x 2 factorial scheme consisting of five doses of salicylic acid (0, 50, 100, 200 and 400 mg ha-1) with or without the application of Mz at a dose of 400 g ha-1 and five replications. For each treatment, three applications were performed, being these at 22, 37 and 52 days after sowing. Nitrate reductase activity, urease, antioxidant enzymes (SOD, POD and CAT), proline content, hydrogen peroxide and lipid peroxidation were evaluated. The application of Mz provided the increase of the SOD activity, thus also the POD and CAT increase, consequently reducing the hydrogen peroxide in leaves of common bean, which kept the levels of lipid peroxidation low. In addition, proline levels dropped significantly after application of Mz. When Mz associated with salicylic acid was used, it was observed that the increase in SOD activity occurred, reaching its peak at the 200 mg ha-1 dose. In addition, salicylic acid promoted the increase of proline when associated with Mz, in relation to the treatment with Mz alone. In this situation proline was responsible for the elimination of H2O2, keeping the levels of the SOD and CAT enzymes reduced. With the low levels of hydrogen peroxide the lipid peroxidation reduced significantly. The Mz applications reflected in the higher dry mass of pods and implying a higher yield of common bean, while salicylic acid provided the increase in productivity, however, depending on the dose used, which presented the best result at 200 mg ha-1.