Um abortamento é a perda de uma gestação clínica intrauterina antes que o feto tenha atingido viabilidade até a 24a semana de gestação. A incidência de abortamentos clínicos espontâneos é cerca de 15 a 25% das gestações detectadas, e em 50% das concepções humanas. Os abortamentos são recorrentes em 3 a 5% dos casais em idade reprodutiva. As perdas gestacionais recorrentes ou abortamentos recorrentes (AR) são definidos como duas ou mais interrupções de gestações clínicas. A etiologia dos AR é extremamente diversa, incluindo anormalidades genéticas, imunológicas, anatômicas, endócrinas e uterinas. Em aproximadamente 50% dos AR, a etiologia não é encontrada, podendo ser chamada de idiopática. Alterações na implantação e placentação podem causar perdas gestacionais. Genes relacionados à inflamação, implantação, stress oxidativo e angiogênese poderiam estar envolvidos na etiologia dos AR. Variantes genéticas que alterem a expressão, função ou localização desses fatores poderiam afetar o risco de abortamentos recorrentes. Nesse trabalho foi investigado o efeito de variantes polimórficas nos genes VEGFA, PTGS2, NOS2, NOS3, TP53, TP63, TP73 e LIF como fator de risco para AR. Foram avaliadas 149 mulheres com AR e 208 mulheres férteis e sem perdas gestacionais como controles. A distribuição de frequências alélicas não foi diferente entre os grupos em nenhum dos polimorfismos avaliados. No entanto, portadoras do alelo polimórfico -1026A em iNOS apresentaram maior risco para AR (OR = 1,92; 95% IC: 1,18-3,11; p= 0,008). Além disso, pacientes que relataram histórico de consumo de álcool também mostram maior risco para AR (OR 2,075; IC 1,32-3,27; p = 0,002). O polimorfismo funcional -1026C/A na região promotora de iNOS provoca um aumento de 4,7 a 5,9 vezes em sua atividade promotora. O aumento da expressão de iNOS pode levar à produção excessiva de óxido nítrico (NO), estimulando a produção de peroxinitrito, um potente pró-oxidante. O stress oxidativo pode prejudicar a invasão embrionária e a proliferação placentária, e já foi associado a AR. Os achados deste trabalho reforçam a hipótese de que o NO e o stress oxidativo estão envolvidos na fisiopatologia dos AR. / A miscarriage is the unintentional termination of an intrauterine clinical pregnancy before viability is reached, before the gestational age of 24 weeks. Spontaneous clinical miscarriages occur in about 15 to 25% of clinically recognized pregnancies, and in approximately 50% of human conceptions. Miscarriages are recurrent in 3 to 5% of couples in reproductive age. Recurrent miscarriage (RM), or recurrent pregnancy loss (RPL), is defined as the loss of two or more clinical pregnancies. The etiology of RPL is diverse, including genetic, immunologic, anatomic, endocrine and uterine abnormalities. No underlying cause for RPL can be identified in approximately 50% of cases, and thus, these cases are considered unexplained RPL. Derangements in embryo implantation and placentation can cause pregnancy losses. Genes linked to inflammation, embryo implantation, oxidative stress and angiogenesis may be involved in the etiology of RPL. Genetic variants that can modify gene expression, function or location might alter the risk for RPL. In this study, the effect of genetic variants in the genes VEGFA, PTGS2, NOS2, NOS3, TP53, TP63, TP73 and LIF were investigated as a risk factor for RPL. We evaluated 149 RPL cases and 208 fertile women with no history of pregnancy loss as controls. Allele frequencies were not different between groups for the variants assessed, nonetheless, women carrying the iNOS -1026A variant presented a higher risk for RPL (OR = 1.92, 95% CI: 1.18-3.11; p= 0.008). Additionally, patients who reported a history of alcohol consumption also presented a higher risk for RPL (OR 2.075, CI 1.32-3.27; p = 0.002). The functional polymorphism -1026C/A in the iNOS promoter region is responsible for an increase of 4.7 to 5.9-fold in iNOS promoter activity. The rise in iNOS expression may lead to excessive nitric oxide (NO) production and, in turn, increase the production of peroxynitrite, a potent pro-oxidant. Oxidative stress can impair embryo implantation and placental proliferation, and it has been associated with RPL. The findings of this study support the hypothesis that NO and oxidative stress play a role in the pathophysiology of RPL.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-10-14T20:10:58Z No. of bitstreams: 1 2014_DeboraCristinaAlvesdasChagas.pdf: 831637 bytes, checksum: a97ace464e0565cfe4862b050b73d353 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-10-15T14:31:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_DeboraCristinaAlvesdasChagas.pdf: 831637 bytes, checksum: a97ace464e0565cfe4862b050b73d353 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-15T14:31:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_DeboraCristinaAlvesdasChagas.pdf: 831637 bytes, checksum: a97ace464e0565cfe4862b050b73d353 (MD5) / As características genéticas não desejadas para a produção de suínos ainda são pouco estudadas no plantel brasileiro. O gene Rendimento Nápole (gene RN) e o gene Halotano (gene HAL) são exemplos de seleção gênica de genes que apresentam influência direta na qualidade tecnológica da carne. O objetivo deste trabalho foi identificar a presença dos genes HAL e RN em rebanhos suínos do DF e Entorno, utilizando a técnica de PCR-RFLP. Os animais estudados foram provenientes de três diferentes origens do Distrito Federal e Entorno, que apresentavam diferentes finalidades de produção, as quais foram analisadas no Laboratório de Microbiologia (MicroMedVet) da Universidade de Brasília. De 52 amostras analisadas, utilizando-se a enzima de restrição Hhal, 75% foram provenientes de suínos com genótipo HALNN, com produção de dois fragmentos de 49 e 32pb; 21,1% foram oriundos de animais HALNn, apresentando a formação de três fragmentos de 81, 49 e 32pb; e 3,8%de suínos com genótipo Halotano recessivo ou mutante (HALnn), com produção de somente um fragmento de 81pb. Para o genótipo Rendimento Nápole, 84,6%apresentaram a digestão do fragmento original de 616pb com a enzima BsrBI originando 2 fragmento de aproximadamente 416pb e 200pb (rn+) e em 15,4%, não houve digestão, mantendo o fragmento original com 616pb (RN-). A análise da população total mostra que um animal da raça Moura, apresentou genótipo HALnn e RN-. Com a realização do presente trabalho, foi possível concluir que os genes Halotano e Rendimento Nápole estão presentes em plantéis de suínos do Distrito Federal e Entorno. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The unwanted genetic traits for pig raising are still poorly studied in the Brazilian breeding stock. Rendement Napole (RN gene) and Halothane genes (HAL gene) are examples of gene selection that have direct influence on the technological quality of pork. This study aimed at identifying the presence of HAL and RN genes in pig herds in the Federal District and surrounding areas, using PCR-RFLP. The animals were from three different origins in the Federal District and surrounding areas, having different farming systems, and then, samples were analyzed in the Microbiology Laboratory (MicroMedVet) at the University of Brasilia. Fifty-two samples were analyzed using the restriction enzyme Hhal and 75% of them were from pigs with HALNN genotype, producing two fragments with 49 and 32bp; 21.1% were from HALNn animals, with the formation of three fragments with 81, 49 and 32bp; and 3.8% with recessive or mutant Halothane genotype (HALnn), producing a single fragment with 81bp. For the Rendement Napole genotype, 84.6% showed digestion of the original fragment with 616bp with the BsrBI enzyme yielding 2 fragment with approximately 416bp and 200bp (rn+) and for 15.4%, there was no digestion, keeping the original fragment with 616bp (RN-). The analysis of the total population shows a Moura breed pig presenting HALnn and RN- genotypes. In accomplishing this study, it was concluded that Halothane and Rendement Napole genes are present in swineherds of the Federal District and surrounding areas.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2008. / Submitted by Thaíza da Silva Santos (thaiza28@hotmail.com) on 2010-02-27T05:31:25Z No. of bitstreams: 1 2008_LigianeOliveiraLeme.pdf: 795458 bytes, checksum: 6d819ed699aa24cf2af955c31166f54b (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-03-01T23:43:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_LigianeOliveiraLeme.pdf: 795458 bytes, checksum: 6d819ed699aa24cf2af955c31166f54b (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-01T23:43:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_LigianeOliveiraLeme.pdf: 795458 bytes, checksum: 6d819ed699aa24cf2af955c31166f54b (MD5) Previous issue date: 2008-08-18 / O sucesso da PIV está relacionado ao conhecimento das necessidades dos gametas e embriões em diferentes fases do desenvolvimento. É conhecido que embriões PIV são diferentes dos embriões in vivo em vários aspectos. As diferenças entre os dois modelos têm sido pesquisadas na tentativa de tornar os meios artificiais o mais próximo possível ao ambiente natural do embrião. Para tanto, a viabilidade desses embriões (in vivo ou in vitro, oriundos de distintos sistemas de produção) pode ser mensurada por ferramentas diversas, tais como a criotolerância, a análise do metabolismo, os níveis e a expressão de genes. A suplementação protéica dos meios de cultivo tem sido amplamente discutida, na busca pela utilização de meios definidos, onde há o conhecimento da sua composição, possibilitando a eliminação ou acréscimo de produtos benéficos ao embrião, sem que ocorra influência de fatores inerentes desconhecidos do meio – características normalmente atribuídas aos componentes séricos, os quais são mais comumente utilizados, em especial o Soro Fetal Bovino (SFB) e a Albumina Sérica Bovina (BSA). Neste estudo, os efeitos do SFB e da BSA-faf durante a PIV de embriões bovinos, foram investigados quanto à quantidade na produção de blastocistos e em termos de qualidade, quando submetidos à vitrificação e análise de expressão gênica. Foram maturados, fecundados e cultivados in vitro 2.171 ovócitos, oriundos de abatedouro. Em cada réplica, os CCOs foram distribuídos em três tratamentos (T1: suplementação com SFB; T2: suplementação com BSA; T3: suplementação inicial com BSA e final com SFB.). Quanto à taxa de clivagem (D2), não houve diferença entre os tratamentos; porém quanto às taxas de blastocisto, T1 foi superior aos T2 e T3 nos dias 6,5 a 8,5 de avaliação (P<0.001). Os embriões de todos os tratamentos que alcançaram estágio de BL e/ou BX (total de 507 embriões) nos dias 6,5 e 7,5 foram separados e, 50% deles, vitrificados pelo método da OPS, descongelados, retornando então ao CIV, e observados às 24, 48 e 72 horas pós-vitrificação; os outros 50% dos embriões permaneceram como grupo controle. Para esta análise, foram consideradas re-expansão e eclosão das estruturas analisadas como parâmetro de avaliação, mediante os fatores tratamento (T1 vs. T2 e T3), grupo (C vs. V), estágio embrionário (BL vs. BX) e tempo (D6,5 vs. D7,5). Em suma, os resultados para o teste de criotolerância foram: T1=T2>T3; C>V; BX>BL; D6,5>D7,5. Quatro pools com 9 blastocistos eclodidos do grupo controle em D8,5, de cada tratamento, foram formados para avaliação da expressão dos genes MnSOD, Bax, BCL-2, HSP-70, CIRP-b, ACAT-2 e ATP8A1. Para normalização dos dados, foram utilizados os genes constitutivos Actina e GAPDH. A expressão da maioria dos genes não foi significativamente diferente entre T1 e T2, exceto para o ACAT-2 – o qual se diferenciou devido à composição protéica do meio. A menor expressão significativa no T3, pode indicar uma condição sub-ótima deste meio à PIV de embriões. A suplementação com SFB produziu mais embriões e com qualidade semelhante a aqueles produzidos em suplementação de BSA-faf. É possível, portanto, concluir que os componentes séricos presentes no soro não afetaram os parâmetros analisados neste estudo. Possíveis efeitos no desenvolvimento embrionário avançado e fetal, bem como a variação entre as partidas de soro, devem ser analisados em outros experimentos. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The embryo IVP success is related to the knowledge of main requirements from gametes and embryos in different stages of development. It is well known that IVP embryos are quite different of those counterparts in vivo in many aspects. Dissimilarity between both has been studied in tempting to turn artificially mediums mostly similar to embryo natural environment. For that, viability of these embryos (in vivo or in vitro, from diverses systems of production) may be measured by a variety of tools, such as cryotolerance, metabolism analysis, genes levels and expression. Protein medium supplementation in cultive has been largely discussed as well, aiming the substitution for defined components, where there is comprehension of its composition, eliminating or adding benefic products to the embryo in this way, without existing unknown factors in it – characteristics usually attributed to serum components, whose most used are Bovine Calf Serum (FCS) and Bovine Serum Albumin (BSA). In this study, the effects of FCS being substituted total or partially by BSA-faf during bovine embryos IVP, were investigated to quantity (blastocysts rate) and quality, when submitted to vitrification and gene expression analysis. Two thousand one hundred seventy one (2.171) oocytes obtained from abattoir ovary were matured, fertilized and cultured in vitro. In each replicate, CCOs were distributed in three treatments: (T1: supplementation with FCS on IVM and IVC; T2: supplementation with BSA on IVM and IVC; T3: supplementation with BSA on IVM and at the beginning of IVC and FCS, at the end of IVC). For cleavage rates (D2), there were no difference among treatments; therefore for blastocysts rates, T1 was superior to T2 and T3 on days 6.5 to 8.5 of development evaluation (P<0.001). Embryos from all treatments which have reached BL and/or BX stage (507 embryos, in total) were separated and, 50% of them, vitrified by OPS method, post-thawed, returning then to IVC, and observed at 24, 48 and 72 hours post-vitrification; other 50% remaining embryos were preserved as control group. For these analysis, were considered structures re-expansion and hatching rates as a parameter to evaluate factors as treatment (T1 vs. T2 and T3), groups (C vs. V), embryo development stage (BL vs. BX) and time (D6.5 vs. D7.5). At a glance, results for cryotolerance test related to these parameters were: T1=T2>T3; C>V; BX>BL; D6.5>D7.5. Four pools with 9 hatched blastocysts from Control group on D8.5, from each treatment, were formed to evaluate the expression of genes MnSOD, Bax, BCL-2, HSP-70, CIRP-b, ACAT-2 and ATP8A1. To standardize data, the constitutive genes, Actina and GAPDH, were taken. The majority genes expressions were not significantly different between T1 and T2, except for ACAT-2 – who might be due to the medium protein source composition. The smaller and significant expression on T3, should indicate a suboptimal condition of this medium to embryo IVP. The supplementation with FCS produced more embryos with similar quality to those originated from BSA-faf supplementation. It is possible therefore, to conclude that serum components do not affected the parameters analyzed here, in this working environment. Possible effects in late embryo and fetal development, as well as variation among serum batches, should be verified in other experiments.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-02T18:09:44Z No. of bitstreams: 1 2009_AlineCostaSantosNunes.pdf: 1959721 bytes, checksum: 0ae5815db05bd293b0dcc2f7cd9cc248 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-03-04T00:14:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_AlineCostaSantosNunes.pdf: 1959721 bytes, checksum: 0ae5815db05bd293b0dcc2f7cd9cc248 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-04T00:14:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_AlineCostaSantosNunes.pdf: 1959721 bytes, checksum: 0ae5815db05bd293b0dcc2f7cd9cc248 (MD5) Previous issue date: 2009-04-15 / O folato é uma vitamina do complexo B, solúvel em água, formada por pterina, ácido para-aminobenzóico (pABA) e uma a oito partes de glutamato. Estudos sugerem que sua deficiência em gestantes está relacionada ao aborto espontâneo, e no feto a defeitos do tubo neural, anencefalia, anacefalia, coluna bífida, lábio leporino e síndrome de Down, e estabelece uma relação entre dietas com níveis inadequados de folato e o surgimento de defeitos congênitos, problemas para o desenvolvimento cognitivo, aumento do risco de doenças cardiovascures, esquizofrenia, mal de Alzheimer, anemia megaloblástica e depressão. A alface foi escolhida para ter o seu teor de folato aumentado por ser uma hortaliça cultivada e consumida em todo o mundo, in natura, e ter seu protocolo de transformação estabelecido. Foram modificadas duas vias metabólicas do folato: a via das pterinas e a via do pABA. Para isso dois sistemas em paralelo foram usados: um sistema mediado por Agrobacterium tumefaciens em que foi transferida a região codificante do gene GTP ciclohidrolase I (gchI), que catalisa o primeiro passo na via metabólica das pterinas. O gene do gchI foi sintetizado baseado em uma seqüência de Gallus gallus com a otimização de códons para expressão em alface, sob o controle do promotor 35S de CaMV duplicado. Na via de síntese do pABA foi usado o sistema de bombardeamento, para inserir a região codificante do gene Corismato Sintase (lecs) de tomate (Solanum lycopersicum =Lycopercicon esculentum) no genoma cloroplasmático de alface. A LeCS catalisa o primeiro passo desta via. 29 linhagens de alface contendo o transgene gchI e 4 linhagens contendo o transgene lecs foram obtidas. Plantas da geração T1 foram analisadas para quantificação de folatos totais pelo método microbiológico com Lactobacillus rhamnosus (ATCC7469). Os resultados mostram que houve um aumento de até 8,5 vezes no teor de folato em linhagens transgênicas expressando gchI e de 1,8 vezes nas linhagens transgênicas transformadas com lecs, quando comparadas com plantas não transformadas. Essas linhagens serão utilizadas em experimentos para a determinação da biodisponibilidade de folato em animais. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Folate is a complex B vitamin, water-soluble, formed by pterine, para-aminonzoic acid (pABA) and one to eight parts of glutamate. Some studies suggest that its deficiency in pregnant women is related to miscarriage, and that in the foetus it is related to defects of the neural tube, anencephalia, anacephalia, spine bifide, leporine lip and Down syndrome, and establish a relation between diets with inadequate folate levels and the appearance of congenital defects, problems in the cognitive development, increase in the risk of cardiovascular diseases, schizophrenia, Alzheimer´s disease, megaloblastic anemia and depression. The lettuce plant was chosen to have its folate level increased because it is a vegetable cultivated and consumed throughout the world, in natura, and because it has its transformation protocol established. We have transformed two metabolic ways of folate: the way of pterines and the way of pABA. For such purpose two systems have been used in parallel: a system mediated by Agrobacterium tumefaciens in which we have transfered the codifying region of the gene GTP ciclohidrolase I (gchI), which catalizes the first step in the metabolic way of the pterines. The gene of the gchI was synthetized based on a sequence of Gallus gallus with the optimization of codons for the expression in lettuce, under control of the promoter 35S dCaMV. In the way of pABA we used the bombardment system, in which we inserted the codifying region of the gene corismato sintase (lecs) of tomato (Solanum lycopersicum =Lycopercicon esculentum) in the lettuce chloroplastic genome, which catalyses the first step of this pathway. We obtained 29 lineages of lettuce containing the transgene gchI and 4 lineages containing the transgene lecs. Plants of the generation T1 were analysed for the quantification of total folates by means of the microbiological method with Lactobacillus rhamnosus (ATCC7469). The results show there has been a increase in up to 8.5 times in the folate level in transgenic lineages expressing gchI and 1.8 times in transgenic lineages transformed with lecs, when compared to non transformed plants. These lineages will be used in experiments for the determination of the bioavailability of folate in animals.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Tecnologia, Departamento de Engenharia Florestal, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-29T19:47:25Z No. of bitstreams: 1 2009_LeilianeSaraivadaSilva.pdf: 1461500 bytes, checksum: 1127aa3056f5e046a745541c568aab16 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-07T17:52:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_LeilianeSaraivadaSilva.pdf: 1461500 bytes, checksum: 1127aa3056f5e046a745541c568aab16 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-07T17:52:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_LeilianeSaraivadaSilva.pdf: 1461500 bytes, checksum: 1127aa3056f5e046a745541c568aab16 (MD5) Previous issue date: 2009-03 / Os objetivos do presente trabalho foram estimar os parâmetros genéticos e predizer os ganhos genéticos esperados por diferentes métodos de seleção, bem como fazer uma análise comparativa entre os mesmos, em condições de laboratório e de viveiro para a espécie Pterogyne nitens Tul. e indicar as melhores matrizes para a formação de um pomar de sementes por mudas, para os diferentes usos da espécie. Selecionaram-se 40 matrizes no Distrito Federal, seguindo-se a coleta de sementes e seu beneficiamento. Foi feito o teste de germinação, com três repetições de 25 sementes por gerbox, e avaliadas a média de dias para a germinação (Mdays), porcentagem de germinação, de sementes mofadas e de sementes anormais. No viveiro, foi feita a avaliação das mudas com base no diâmetro do coleto, altura da muda e número de folíolos, para 10 mudas por matriz e por repetição, com três repetições. Foi feita também uma repetição para a medição da biomassa, com o sorteio de quatro mudas por matriz para as análises destrutivas das folhas, caules e raízes. Após a coleta de dados, efetuaram-se análises de variâncias e a obtenção dos parâmetros genéticos, seguindo-se a predição de ganhos de seleção pelos diferentes métodos. Para o teste de germinação, a seleção direta e indireta, baseando-se na intensidade de seleção, foi a mais satisfatória para a seleção direta da porcentagem de germinação. Para viveiro, a média de sobrevivência foi de 78%, com altas herdabilidades para todos os períodos de medição e possibilidades de ganhos genéticos significantes desde a primeira medição. Para as características morfológicas, as médias apresentaram um crescimento constante ao longo do tempo. As herdabilidades foram altas para a maioria das características, principalmente dentro de famílias. A seleção combinada manteve os ganhos genéticos constantes ao longo do período de experimento, com eficiência superior a 25% em relação à seleção entre e dentro, sendo considerada a mais promissora a ser utilizada na seleção. O comprimento da parte aérea, caule verde, raiz verde e raiz seca apresentaram herdabilidades acima de 45%, indicando possibilidade de ganhos genéticos na seleção com base nestas características. O Índice Livre de Pesos e Parâmetros, ILPP, foi o método de seleção mais eficiente para as características analisadas, com ganhos melhores distribuídos entre elas e um ganho total superior aos demais. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The objectives of the following work were to estimate the genetic parameters and predict genetic gains expected by different methods of selection, to make comparative analyses among themselves in conditions of laboratory and nursery for Pterogyne nitens Tul. and to indicate the best matrices for the formation of an orchard of seeds by seedlings. Fourty matrices were selected in Distrito Federal Brazil, with the collection of seeds and their treatment. The germination test was made with three repetitions of twenty five seeds for gerbox, and the average of days, the percentage of moudly seeds, and abnormal seeds all related to germination were evaluated. In nursery, the evaluation of seedlings was made based on the steam diameter, seedling height and number of leaflets, for ten seedlings per matrix and repetition, with three repetitions. One repetition for the measurement of the biomass was also made, with the drawing of four seedlings for matrix, for the destructive analyses of leaves, steams and roots. After the collection of data, analyses of variances and also the genetic parameters estimates and the prediction of selection gains for the different methods were measured. For the germination test, the direct and indirect selection, based on the selection intensity, was the most satisfactory for the direct selection of the germination percentage. For nursery, the survival average was of 78% with high heritabilities for all the periods of measurement and possibilities of significant genetic gains since the first measurement. For the morphologic characteristics, the averages were high for the majority of the characteristics, mainly inside the families. The combined selection kept the constant genetic gains throughout the period of experiment, with superior efficiency of 25% in relation to all aspects of the selection and was considered the most promising to be used. The length of the aerial part, green stem, green root and dry root presented heritabilities of above 45%, indicating possibility of genetic gains in the selection based in these characteristics. The Free Index of Weights and Parameters, ILPP, was the method of more efficient selection for the analyzed characteristics, with better gains distributed among them and a superior total gain, in relation to the other ones.

Dissertação (mestrado)-Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2011. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-09-23T12:33:50Z No. of bitstreams: 1 2011_ElisianeFuhrmann.pdf: 1635261 bytes, checksum: de4c2c09ab5b31ab921315e5ff65522f (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-09-23T12:34:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_ElisianeFuhrmann.pdf: 1635261 bytes, checksum: de4c2c09ab5b31ab921315e5ff65522f (MD5) / Made available in DSpace on 2011-09-23T12:34:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_ElisianeFuhrmann.pdf: 1635261 bytes, checksum: de4c2c09ab5b31ab921315e5ff65522f (MD5) / A produção de maracujá vem ganhando grande importância no Brasil. Por outro lado, a alta incidência de doenças vem provocando perdas econômicas expressivas, por reduzir a produtividade, a vida útil dos pomares e a qualidade dos frutos, além de requerer uso intensivo de defensivos agrícolas. A obtenção de variedades e híbridos mais resistentes às doenças se torna uma alternativa necessária ao cultivo do maracujazeiro por ser uma medida econômica e ecológica. Dessa forma, este trabalho teve como objetivos: 1) Selecionar plantas resistentes à Xanthomonas axonopodis pv. passiflorae dentro de progênies obtidas de cruzamentos interespecíficos entre o maracujazeiro-azedo comercial e espécies silvestres, em condições de casa de vegetação e campo; 2) Determinar em campo, a produtividade e o comportamento das plantas pré-selecionadas na casa de vegetação em relação à bacteriose; 3) Avaliar o grau de resistência dos genótipos-clones selecionados a partir da análise das progênies em campo, a três isolados de X. axonopodis pv. passiflorae sob condições de casa de vegetação; 4) Determinar as características físicas, químicas e sensoriais (coloração da polpa) desses genótipos-clones. Os experimentos foram conduzidos na Embrapa Cerrados, em Planaltina-DF, sob condições de casa de vegetação sob nebulização e em campo. Foram avaliadas a Cultivar BRS Gigante Amarelo (híbrido intraespecífico) como testemunha e seis progênies oriundas de cruzamentos interespecíficos denominados CPAC – EC4, CPAC – ES4, CPAC – ES5, CPAC – EC5, CPAC – ES6 e CPAC - ERE. Em casa de vegetação, a menor incidência de bacteriose foi observada na progênie CPAC - ERE seguido pela CPAC- ES5 e CPAC-EC5. De um total de 630 plantas avaliadas na casa de vegetação, 315 plantas dessas progênies sobreviveram à infecção natural da bactéria e foram plantadas em campo. Já em campo, as progênies com menor índice de mortalidade de plantas foram as dos híbridos CPAC – ES4, CPAC - ERE e CPAC – EC5. Em seguida, as melhores plantas de cada progênie em termos de resistência à bacteriose, produtividade, maior tamanho de frutos, polpa de coloração mais intensa e maior teor de sólidos solúveis foram clonadas e propagadas por estaquia. Quando estas plantas ou genótipos-clones emitiram os primeiros ramos, elas foram levadas para casa de vegetação sob nebulização e receberam inóculo de três isolados de X. axonopodis pv. passiflorae procedentes de Rio Claro,SP, Planaltina, DF e Limeira, SP. Como padrões de resistência utilizaram os progenitores silvestres Passiflora caerulea, P. setacea e, como padrão de susceptibilidade, utilizaram de plantas pé-franco da Cv. BRS Gigante Amarelo. Cada isolado foi inoculado mecanicamente em plantas-clones com 120 dias e os sintomas foram avaliados aos 5, 10 e 15 dias após a inoculação, medindo-se o diâmetro transversal e longitudinal das lesões formadas em torno do orifício circular. Houve interação entre genótipos-clones e isolados da bactéria. Os progenitores silvestres P. caerulea e P. setacea foram os mais resistentes enquanto a cultivar BRS Gigante Amarelo (pé franco) foi a mais susceptível. Entre os 36 genótipos-clones selecionados, 65% apresentaram reações de resistência intermediária aos três isolados de bactérias. Entre estes, alguns produzem frutos com mais de 150 gramas, com polpa vermelha ou alaranjada e boa produtividade inicial e teores de sólidos solúveis maiores que 11°Brix. Estes materiais superiores foram selecionados e farão parte de um novo banco de matrizes para ser utilizado no programa de melhoramento visando resistência à bacteriose. Os híbridos envolvendo a espécie Passiflora setacea apresentaram maior resistência a bacteriose e antracnose nos frutos. Em relação à coloração da polpa, o cruzamento com a espécie Passiflora caerulea CPAC-EC5 apresentou a coloração mais vermelha. A progênie CPAC- ES4 que contém genes da P. setacea foi a mais produtiva, com 14,34 Kg de frutos por planta em duas colheitas. Os maiores frutos foram produzidos pela Cv. BRS Gigante Amarelo que foi a mais susceptível à bacteriose. Entre os 36 genótipos-clones selecionados dentro de uma população de 630 plantas de sete progênies oriundas de cruzamentos intra e interespecíficos apenas 22 genótipos apresentaram graus de resistência aos três isolados da bactéria, próximos aos de seus progenitores silvestres. Foram observadas diferenças entre as plantas dentro de cada progênie, o que evidencia a importância da seleção de plantas individuais visando a obtenção de resistência e melhoria da coloração da polpa. As três espécies silvestres utilizadas neste estudo mostraram elevado potencial para o melhoramento genético do maracujazeiro visando à obtenção de resistência à bacteriose, melhoria da qualidade dos frutos e da produtividade. ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The passion fruit production is gaining great importance in Brazil. On the other hand, the high incidence of diseases has caused significant economic losses by reducing productivity, the life of the orchards and the fruit quality, besides requiring intensive use of agricultural chemicals. The achievement of varieties and hybrids resistance to diseases becomes a necessary alternative to the cultivation of passion fruit for being an economic and ecological measure. Therefore, this study aimed to: 1) Selecting resistant plants to Xanthomonas axonopodis pv. passiflorae within progenies obtained from interspecific crosses between the commercial passion fruit and wild species under greenhouse conditions; 2) Determine in the field, productivity and behavior of pre-selected plants in the greenhouse in relation to bacterial disease; 3) Evaluate the resistance level of genotype-clones selected from the analysis of the progenies in the field, to three isolates of X. axonopodis pv. passiflorae under greenhouse conditions; 4) Determine the physical, chemical and sensorial (flesh color) characteristics of these genotypes-clones. The experiments were conducted at Embrapa Cerrados, Planaltina-DF, in greenhouse conditions with mist and field conditions. It was evaluated BRS Yellow Giant (intraspecific hybrids) as control and six progenies of interspecific crosses denominated CPAC – EC4, CPAC – ES4, CPAC – ES5, CPAC – EC5, CPAC – ES6 and CPAC – ERE. In the greenhouse, the lowest incidence of bacterial disease was observed in the progeny CPAC – ERE followed by CPAC – ES5 and CPAC – EC5. From a total of 630 plants evaluated in the greenhouse, 315 plants of these progenies survived to the natural infection of the bacteria and were planted in the field. In the field, the progenies with the lowest plant mortality were the hybrids CPAC – ES4, CPAC – ERE and CPAC – EC5. Then the best plants of each progeny in terms of resistance to bacterial disease, productivity, larger fruit size, pulp with deeper color and higher soluble solids were cloned and propagated by grafting. When these plants or genotypes-clones issued the first branches, they were taken to the greenhouse under mist and were inoculated with three isolates of X. axonopodis pv. passiflorae coming from Rio Claro, SP, Planaltina, DF and Limeira, Brazil. As resistance patterns it was used the wild progenitors Passiflora caerulea, P. setacea and, as susceptibility pattern it was used non-grafted plants of BRS Yellow Giant cultivar. Each isolate was inoculated mechanically in clone-plants with 120 days and the symptoms were evaluated at 5, 10 and 15 days after inoculation, by measuring the transverse and longitudinal diameter of lesions formed around the circular hole. There was an interaction between genotypes-clones and the bacteria isolates. The wild progenitors P. caerulea and P. setacea were the most resistant while the BRS Yellow Giant (non-grafted) was the most susceptible. Among the 36 genotypes-clones, 65% had reactions of intermediate resistance to three bacteria isolates. Among these, some produce fruit with more than 150 grams, with red or orange pulp and good productivity and initial soluble solids content higher than 11 ° Brix. These superior materials were selected and will be part of a new matrix bank to be used in breeding program seeking for resistance to bacterial diseases. The hybrids involving the species Passiflora setacea showed greater resistance to bacterial disease and anthracnose on fruits. In relation to the flesh color, the crossing with the species Passiflora caerulea CPAC – EC5 showed redder coloring. The CPAC – ES4 progeny containing genes of P. setacea was the most productive, with 14.34 kg of fruits per plant in two crops. The biggest fruits were produced by the BRS Yellow Giant cultivar that was the most susceptible to bacterial disease. Among the 36 genotypes-clones selected within a population of 630 plants from seven progenies originated of intraspecific and interspecific crosses, only 22 genotypes showed degrees of resistance to the three bacteria isolates, similar to their wild progenitors. Differences were observed among plants within each progeny, which highlights the importance of plant selection seeking to obtain resistance and improvement in the flesh color. The three wild species used in this study showed high potential for genetic improvement of passion fruit in order to obtain resistance to bacterial disease, improving fruit quality and yield.

A doença de Machado-Joseph (DMJ/SCA3) é uma doença neurodegenerativa causada pela expansão de poliglutaminas na proteína ataxina-3. O número de repetições CAG presentes no gene ATXN3 é inversamente correlacionado com a idade de início da doença, mas é responsável por somente 45-60% desta variação. O objetivo deste trabalho foi testar o efeito da metilação no promotor do gene ATXN3, de polimorfismos em genes candidatos e do alelo normal ATXN3 como modificadores do fenótipo da doença. A análise do padrão de metilação em seis sítios CpG através de um ensaio de amplificação multiplex dependente de sondas – específico para metilação foi realizada em amostras de 123 pacientes de 62 famílias. Os polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) nos genes BAX, CRYAB, GRIK2, IL1B, ITPR1, NEDD8, NEDD9 e CHIP foram analisados em 273 pacientes de 119 famílias. Os volumes cerebrais foram medidos através de ressonância magnética em 30 pacientes não relacionados. A gravidade foi medida pela Escala de Exame Neurológico para Ataxia Espinocerebelar (NESSCA) dividida pelo tempo de duração da doença. Uma correlação inversa significativa foi encontrada entre a idade de início e tamanho da repetição (r=-0,76, r2=0,58, p<0,001). Houve uma tendência de correlação direta entre o grau de metilação e a idade de início para um sítio CpG (p=0,055). Uma correlação significativa foi encontrada entre a gravidade e o tamanho da repetição CAG (r=0,48, r2=0,23, p=0,001). O SNP no gene IL1B (rs16944) apresentou um efeito significativo na idade de início de pacientes com SCA3 (p=0,042). Associação significativa foi observada entre o SNP no gene NEDD9 (rs760678) e a gravidade (p=0,003). SNPs nos genes GRIK2 (rs2227281) e NEDD8 (rs2144487) se relacionaram à medida do volume do cerebelo (p=0,006) e à medida do volume da ponte (p=0,023), respectivamente. Estes resultados sugerem que o controle epigenético no sítio CpG no promotor ATXN3 e que os SNPs nos genes GRIK2, IL1B, NEDD8 e NEDD9 podem contribuir para a variação fenotípica na SCA3. Ademais, os genótipos protetores dos genes GRIK2, IL1B e NEDD8 mostraram ter um efeito aditivo no adiamento do início da doença. O mecanismo exato pelo qual a mutação no gene ATXN3 causa a SCA3 ainda não foi determinado. A expansão da repetição CAG pode conferir uma função tóxica para a proteína, como acontece em outras doenças neurodegenerativas causadas por expansões de poliglutaminas. Considerando esta hipótese, uma maior metilação do promotor do gene ATXN3 pode se relacionar a sua menor expressão e a um menor acúmulo de poliglutaminas no neurônio. Ainda considerando esta hipótese, GRIK2, IL1B, NEDD8 e NEDD9 podem desempenhar um papel protetor, possivelmente por promover a sobrevivência de células neuronais em pacientes com SCA3. SNPs nestes genes poderiam modificar a expressão das proteínas, afetando a agregação de poliglutaminas no cérebro de tal forma que os indivíduos portadores de um genótipo de risco teriam significativamente maior perda gradual de neurônios e um início mais precoce dos sintomas. / Machado-Joseph disease (MJD/SCA3) is a neurodegenerative disease caused by expansion of a polyglutamine tract in ataxin-3. The CAG repeat number of ATXN3 gene is inversely correlated with disease age at onset (AO) but is responsible for only 45-60% of this variation in SCA3. In this study, we investigate if DNA methylation status of the ATXN3 promoter, if polymorphisms in candidate genes, and if normal ATXN3 allele are related to disease phenotype. We designed a methylation-specific multiplex ligation-dependent probe amplification (MS-MLPA) assay for quantitative analysis of methylation status at 6 CpG sites, located within the promoter region of the ATXN3 gene. We have applied this MSMLPA to 123 SCA3 Brazilian patients from 62 families. We investigated single-nucleotide polymorphisms (SNPs) in genes BAX, CRYAB, GRIK2, IL1B, ITPR1, NEDD8, NEDD9, and CHIP in 273 Brazilian SCA3 patients from 119 families. The brain volumetries were obtained from magnetic resonance imaging’s from 30 unrelated patients. The SCA3 severity degree was measured by Neurological Examination Score for Spinocerebellar Ataxia (NESSCA) divided by duration of disease. A significant inverse correlation was found between AO and repeat length (r=-0.76, r2=0.58, p<0.001). There was a trend toward direct correlation between methylation degree and AO for one CpG site in the SCA3 sample (p=0.055). A significant correlation was found between severity and CAG repeat length (r=0.483, r2=0.233, p=0.001). We have found significant associations between a GRIK2 SNP (rs2227281) and cerebellum volume (p=0.006), an IL1B SNP (rs16944) and AO (p=0.042), a NEDD8 SNP (rs2144487) and pons volume (p=0.023), and a NEDD9 SNP (rs760678) and disease severity (p=0.003). These results suggest that epigenetic control at ATXN3 CpG-site and that the SNPs in GRIK2, IL1B, NEDD8, and NEDD9 genes may contribute to the phenotypic expression of SCA3. Moreover, protective genotypes of GRIK2, IL1B, and NEDD8 genes shown to have an additive effect in delaying the onset of disease.The exact mechanism by which the mutation in the ATXN3 gene causes SCA3 has not been determined. The CAG repeat expansion may confer a novel toxic function onto the protein, as it does in other polyglutamine neurodegenerative disorders. Considering this hypothesis, increased methylation of ATXN3 gene promoter can relate to its lower expression and a smaller accumulation of polyglutamine in the neuron. Still considering this hypothesis, GRIK2, IL1B, NEDD8, and NEDD9 might play a protective role, possibly a survival promoting effect, for neuronal cells in SCA3 patients. These four SNPs could affect the protein expression and polyglutamine aggregation in the brain such that risk genotype carriers have a significantly higher gradual loss of neurons and an earlier onset of symptoms.

Um abortamento é a perda de uma gestação clínica intrauterina antes que o feto tenha atingido viabilidade até a 24a semana de gestação. A incidência de abortamentos clínicos espontâneos é cerca de 15 a 25% das gestações detectadas, e em 50% das concepções humanas. Os abortamentos são recorrentes em 3 a 5% dos casais em idade reprodutiva. As perdas gestacionais recorrentes ou abortamentos recorrentes (AR) são definidos como duas ou mais interrupções de gestações clínicas. A etiologia dos AR é extremamente diversa, incluindo anormalidades genéticas, imunológicas, anatômicas, endócrinas e uterinas. Em aproximadamente 50% dos AR, a etiologia não é encontrada, podendo ser chamada de idiopática. Alterações na implantação e placentação podem causar perdas gestacionais. Genes relacionados à inflamação, implantação, stress oxidativo e angiogênese poderiam estar envolvidos na etiologia dos AR. Variantes genéticas que alterem a expressão, função ou localização desses fatores poderiam afetar o risco de abortamentos recorrentes. Nesse trabalho foi investigado o efeito de variantes polimórficas nos genes VEGFA, PTGS2, NOS2, NOS3, TP53, TP63, TP73 e LIF como fator de risco para AR. Foram avaliadas 149 mulheres com AR e 208 mulheres férteis e sem perdas gestacionais como controles. A distribuição de frequências alélicas não foi diferente entre os grupos em nenhum dos polimorfismos avaliados. No entanto, portadoras do alelo polimórfico -1026A em iNOS apresentaram maior risco para AR (OR = 1,92; 95% IC: 1,18-3,11; p= 0,008). Além disso, pacientes que relataram histórico de consumo de álcool também mostram maior risco para AR (OR 2,075; IC 1,32-3,27; p = 0,002). O polimorfismo funcional -1026C/A na região promotora de iNOS provoca um aumento de 4,7 a 5,9 vezes em sua atividade promotora. O aumento da expressão de iNOS pode levar à produção excessiva de óxido nítrico (NO), estimulando a produção de peroxinitrito, um potente pró-oxidante. O stress oxidativo pode prejudicar a invasão embrionária e a proliferação placentária, e já foi associado a AR. Os achados deste trabalho reforçam a hipótese de que o NO e o stress oxidativo estão envolvidos na fisiopatologia dos AR. / A miscarriage is the unintentional termination of an intrauterine clinical pregnancy before viability is reached, before the gestational age of 24 weeks. Spontaneous clinical miscarriages occur in about 15 to 25% of clinically recognized pregnancies, and in approximately 50% of human conceptions. Miscarriages are recurrent in 3 to 5% of couples in reproductive age. Recurrent miscarriage (RM), or recurrent pregnancy loss (RPL), is defined as the loss of two or more clinical pregnancies. The etiology of RPL is diverse, including genetic, immunologic, anatomic, endocrine and uterine abnormalities. No underlying cause for RPL can be identified in approximately 50% of cases, and thus, these cases are considered unexplained RPL. Derangements in embryo implantation and placentation can cause pregnancy losses. Genes linked to inflammation, embryo implantation, oxidative stress and angiogenesis may be involved in the etiology of RPL. Genetic variants that can modify gene expression, function or location might alter the risk for RPL. In this study, the effect of genetic variants in the genes VEGFA, PTGS2, NOS2, NOS3, TP53, TP63, TP73 and LIF were investigated as a risk factor for RPL. We evaluated 149 RPL cases and 208 fertile women with no history of pregnancy loss as controls. Allele frequencies were not different between groups for the variants assessed, nonetheless, women carrying the iNOS -1026A variant presented a higher risk for RPL (OR = 1.92, 95% CI: 1.18-3.11; p= 0.008). Additionally, patients who reported a history of alcohol consumption also presented a higher risk for RPL (OR 2.075, CI 1.32-3.27; p = 0.002). The functional polymorphism -1026C/A in the iNOS promoter region is responsible for an increase of 4.7 to 5.9-fold in iNOS promoter activity. The rise in iNOS expression may lead to excessive nitric oxide (NO) production and, in turn, increase the production of peroxynitrite, a potent pro-oxidant. Oxidative stress can impair embryo implantation and placental proliferation, and it has been associated with RPL. The findings of this study support the hypothesis that NO and oxidative stress play a role in the pathophysiology of RPL.

Nos parasitos do gênero Echinococcus observam-se grandes diferenças genéticas entre as espécies. Mais ainda, a espécie E. granulosus apresenta uma grande variação intraespecífica. Diversas variantes com características biológicas e epidemiológicas particulares, e adaptadas a hospedeiros intermediários diferentes, foram classificadas como linhagens. De fato, estas linhagens são muitas vezes tão divergentes geneticamente quanto as demais espécies do gênero. Isto tem gerado diversas discussões quanto seu status taxonômico. Os genes do antígeno B (AgB) de Echinococcus compõem uma família multigênica. A proteína secretada, um oligômero formado a partir de subunidades de 8 kDa, tem um papel importante no estabelecimento da infecção, modulando a resposta imune do hospedeiro. Estudos demonstraram que alguns genes desta família devem estar sob seleção positiva ou diversificadora. Inclusive, a quantidade de variantes encontradas é alta em um único parasito. Este trabalho analisa amostras de E. granulosus coletadas no Rio Grande do Sul e as compara a amostras de outra populações geográficas (Argentina, Argélia e Romênia) usando um marcador mitocondrial (cox1-391 pb) e duas seqüências nucleares. Uma delas corresponde a um fragmento que inclui majoritariamente o segundo íntron do gene de cópia única codificador da malato desidrogenase citosólica (mdh - 214 pb) e a outra trata-se da seqüência parcial do gene que codifica a subunidade 4 do AgB (AgB4 - 329-355 pb), incluindo aproximadamente 80 pb da região promotora do gene até em torno de 60 pb à montante do códon de parada da tradução. A análise do fragmento de mdh utilizou a técnica de PCR-SSCP, seguida de seqüenciamento, para discriminar os alelos das amostras de cada população, totalizando 259 indivíduos (isolados). Os achados confirmam a homogeneidade das populações geográficas de E. granulosus e a divergência dos parasitos das linhagens ovina e bovina (freqüentemente denominada E. ortleppi). Apesar da divergência entre as linhagens, são encontrados em baixa freqüência alelos característicos da linhagem bovina (haplótipo G5) em parasitos com haplótipo mitocondrial ovino (G1) e vice-versa. Tal situação poderia ser conseqüência do cruzamento entre parasitos destas linhagens quando em simpatria. A abordagem adotada na análise do gene AgB4 foi a amplificação por PCR seguida do seqüenciamento direto de 151 isolados. Os dados indicam a presença de mais de duas cópias do AgB4 no genoma, e que, dada a conservação na região codificante, seria provável que estes genes estejam evoluindo em concerto. Também encontramos alta divergência entre as seqüências dos isolados com haplótipos mitocondriais G1 (AgB4 tipo 1) e G5 (AgB4 tipo 2). A divergência é tão grande que acreditamos que na linhagem bovina o gene AgB4 tenha recombinado com AgB2. Uma seqüência idêntica a nossa depositada no GeneBank foi previamente sugerida como sendo uma variante não-funcional do AgB2. Assim como no caso do mdh alguns parasitos com haplótipos mitocondriais G5 (linhagem bovina) apresentaram em baixa freqüência seqüências de AgB4 do tipo 1 características da linhagem ovina. Este achado reforça a hipótese de fluxo gênico entre as linhagens de E. granulosus. / In the parasites belonging to the genus Echinococcus large differences between species are observed. Furthermore, the E. granulosus species shows a high intraspecific variability. Different variants with particular biologic and epidemiologic features, adapted to distinct intermediate hosts, were classified as strains. Indeed, the strains are frequently as genetically divergent as the other species within the genus. This has generated several discussions about their taxonomic status. The Echinococcus antigen B (AgB) genes belong to a multigene family. The secreted protein, an oligomer built by subunits of 8kDa, has an important role in the infection establishment, modulating the host immune response. Studies have demonstrated that some genes in this family might be under positive or diversifying selection. Moreover, the quantity of variants found is high, even in a single parasite. This study analyzes samples of E. granulosus collected in Rio Grande do Sul, and compares them to samples from other geographic regions (Argentina, Algeria and Romania) using a mitochondrial marker (cox1 – 391bp) and two nuclear sequences. One corresponds to a fragment including mostly the second intron of the cytosolic malate dehydrogenase single copy gene (mdh – 214bp) and the other is a partial gene sequence encoding the fourth subunit of AgB (AgB4 – 329-355bp), which includes approximately 80bp of the promoter region until around 60bp upstream to the stop codon. The analysis of the mdh fragment was based on the PCR-SSCP technique, followed by sequencing, to discriminate among alleles within samples of each population, totalizing 259 individuals (isolates). Our findings confirm the homogeneity within E. granulosus geographic populations and a high divergence between parasites from the ovine and bovine (frequently named E. ortleppi) strains. Despite the divergence between strains, bovine strain (haplotype G5) characteristic alleles are found in low frequency in parasites with the ovine mitochondrial haplotype (G1) and vice-versa. This situation could be a consequence of interbreeding between parasites from the different strains, when in simpatry. The approach used for the AgB4 gene analysis was the PCR amplification followed by direct sequencing of 151 isolates. The data indicate the presence of more than two AgB4 gene copies inside the genome; and that, considering the conservation of the coding region, it would be probable that these genes are evolving in concert. We also found a high divergence in AgB4 sequences between isolates with haplotypes G1 (AgB4 type 1) and G5 (AgB4 type 2). The divergence is so large, that we believe that in the bovine strain the AgB4 gene might have recombined with AgB2. As well as for the mdh gene, some parasites with the G5 mitochondrial haplotype (bovine strain) showed in low frequencies AgB4 type 1 sequences, characteristic of the ovine strain. This finding reinforces the hypothesis of gene flow between strains of E. granulosus.

O câncer de mama (CM) é o segundo tipo de câncer mais freqüente no mundo e o mais comum entre as mulheres. É uma doença multifatorial causada pela combinação de fatores de risco genéticos e não genéticos (ambientais). Polimorfismos genéticos de baixa penetrância têm sido associados ao CM em diversas populações. No presente estudo, determinamos a freqüência alélica e genotípica dos polimorfismos nulos de GSTM1, GSTT1 e do polimorfismo Ile105Val em GSTP1, e correlacionamos estas freqüências com fatores de risco para CM. A amostra estudada foi constituída de 750 mulheres (40-69 anos) sem câncer de mama recrutadas na Coorte Núcleo Mama Porto Alegre (NMPOA). As freqüências genotípicas e alélicas encontradas não diferem de outros estudos nacionais, mas diferem significativamente de algumas descritas em outras populações, reforçando a necessidade de estudos de populações específicas. A amostra como um todo não apresentou fatores de risco reprodutivos significativos para CM. O risco vital médio de desenvolver CM de acordo com o modelo de Gail na amostra foi de 7.8% e a grande maioria das pacientes (n= 731, 97.5%), como esperado para uma amostra de mulheres submetida a rastreamento mamográfico, apresentou achados mamográficos benignos (BIRADS 1 ou 2). A distribuição das mulheres de acordo com a densidade mamográfica demonstrou que apesar de 56% já estarem na pósmenopausa, a maioria (n= 682, 91.0%) ainda apresentava mamas moderadamente densas. Observou-se que 77.6% das mulheres incluídas no estudo tinham um IMC correspondente a sobrepeso ou obesidade. A análise da relação entre os polimorfismos GSTM1, GSTT1 e GSTP1 A/G e fatores de risco previamente estabelecidos para CM, demonstrou, em mulheres pré-menopáusicas, uma associação entre os genótipos GSTM1 e GSTT1 nulos e imagens mamográficas com classificação BIRADS 3 e 4 e, em mulheres pós-menopáusicas, uma associação com mamas moderadamente densas e densas. Isoladamente, o genótipo GSTT1 nulo também se mostrou associado a maior densidade mamográfica em mulheres pós-menopáusicas. Não houve associação entre os alelos e genótipos de GSTP1 e fatores de risco estabelecidos. Nossos dados sugerem que os genótipo nulos de GSTM1 e especialmente de GSTT1 podem estar fortemente associados a densidade mamográfica em mulheres pós-menopáusicas. A inclusão de análises genotípicas e fatores de risco especialmente prevalentes em uma determinada população poderia ser considerada para aprimorar a estimativa de risco de câncer de mama em populações específicas. No entanto, estudos adicionais do tipo caso-controle devem ser realizados para melhor determinar a relação de risco entre polimorfismos em genes de baixa penetrância, fatores de risco para câncer de mama e ocorrência de CM em si. / Breast cancer (BC) is the second most frequent malignant tumor in the world and the most frequent in women. It is a multifactorial disease caused by a combination of genetic and non-genetic risk factors. Polymorphisms in low penetrance genes have been associated to breast cancer risk in several populations. In the present study, we determine the allelic and genotypic frequencies of the GSTM1 and GSTT1 null polymorphisms and the GSTP1 Ile105Val polymorphism, and correlate these frequencies to breast cancer risk factors. The sample studied included 750 women (40-69 years) without cancer who participed in the mammographic screening program from the Núcleo Mama Porto Alegre Cohort (NMPOA). The allelic and genotypic frequencies observed did not differ from those reported in other studies with Brazilian samples, but differed significantly from those described in other countries, reinforcing the need for population-specific investigations of polymorphisms in low penetrance genes and their associations with cancer risk. Overall, the women included did not have significant reproductive risk factors for BC. The average lifetime risk of BC estimated according to the Gail model was 7.8% and most patients (n= 731, 97.5%), as expected for women submitted to routine mammographic screening, had benign mammographic findings (BIRADS 1 ou 2). Regarding breast density, although 56% of the women studied were postmenopausal, most (n= 682, 91.0%) still presented moderately dense breasts. We observed that 77.6% of the women included in the study had a body mass index (BMI) corresponding to overweight or obesity. Furthermore, an association between the combined GSTM1 and GSTT1 null genotypes and mammographic images classified as BIRADS 3 e 4 was observed in pre-menopausal women and an association between these genotypes and moderately dense or dense breasts was observed in post- menopausal women. When each genotype was analysed individually, GSTT1 null was also associated to increased mammographic density in post-menopausal women. There was no association between the alleles and/or genotypes GSTP1 and BC risk factors in this study. Our data suggest that the GSTM1 and especially GSTT1 null genotypes may be strongly related to mammographic density in post-menopausal women. The inclusion of genotypic analyses and frequent breast cancer risk factors for specific populations in risk models could be considered to improve breast cancer risk estimates in such populations. However, aditional case-control studies should be performed to better establish the relationship of the polymorphisms studied here with breast cancer risk factors and breast cancer itself.