NOGUEIRA, Renato Luiz Maia. Avaliação clínica da corticoterapia intralesional em lesão central de células gigantes dos maxilares : relevância da expressão dos receptores de corticóide e calcitonina, Cox-2, p16 e amplificação da ciclina D1. 2010. 117 f. Tese (Doutorado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2010. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-03-26T14:13:09Z No. of bitstreams: 1 2010_tese_rlmnogueira.pdf: 5019298 bytes, checksum: f55a686958684439dd23ff6fbf2b8ddb (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-03-26T14:17:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_tese_rlmnogueira.pdf: 5019298 bytes, checksum: f55a686958684439dd23ff6fbf2b8ddb (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-26T14:17:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_tese_rlmnogueira.pdf: 5019298 bytes, checksum: f55a686958684439dd23ff6fbf2b8ddb (MD5) Previous issue date: 2010 / Central Giant Cells Lesion (CGCL) of the jaws is an intra-bone lesion with no predilection for sex and clinically divided into aggressive and non-aggressive subtypes. Histological, it shows as fibrous tissue with fusiform cells, as well as multinucleated giant cells (GC) clusters, he-morrhagic foci and neovascularization. Surgery is the regular treatment option. As new the-rapeutic approaches have been proposed, intralesional glucocorticoid injection is the main option. This paper assesses retrospectively 21 patients presenting CGCL, treated with intrale-sional triamcinolone hexacetonide by using the following protocol: intralesional injection of triamcinolone hexacetonide 20mg/mL, diluted in a solution of lidocain 2% plus epinephrine 1:200000, at a 1:1 proportion; 1mL of this final solution for each 1cm3 of lesion volume was the injected, with a total of 06 injections, one in every 15 days. Four clinical criteria were sta-bilished to evaluate treatment outcome: 1- Clinical regression or stabilization of the lesion; 2- Absence of symptoms; 3- Raising in density on radiographic controls; 4-Increased resistence when injecting the drug intralesionally. It was also performed immunohistochemical assess-ment for glucocorticoid receptor (GCR) expression, calcitonin receptor (CTR) expression, COX-2 expression, p16 expression and Ciclin D1 gene amplification by CISH, making com-parisons related to aggressivity and to therapeutic outcome. Eleven out of 21 patients of this study were women, and 10 were men. Nine of the patients had lesion located in the maxilla, 12 in the mandible. Ten patients showed aggressive lesions and 11 non-aggressive lesions. Fifteen patients showed good treatment outcome, four patients showed moderate outcome, and two patients showed negative answer to the treatment. Among the 11 patients with non-aggressive lesions, ten showed good outcome and the other, moderate outcome. Among the ten aggressive lesions, five patients showed good outcome, three patients showed moderate outcome and the remaining two patients showed negative answer to the treatment. None of them showed reicidive in a four to eight years follow-up period. Morphologic analysis found positive correlation between volume density of GC/mm2 and lesion aggressiveness, as well as significant reduction in number of GC/mm2 after treatment. Among the markers, only GCR in GC showed statistical relevance associated to the treatment. CTR was espresse in GC and in mononuclear cells in a varying way; p16 was expressed in 30% of the sample; COX-2 was not expressed at all in lesion samples and 33% of the sample showed gene amplification in Ciclin D1. None of the markers showed any statistical significant difference related to aggres-siveness nor to treatment outcome, except for GCR. The study showed the feasibility of the adopted treatment, with tendency to better outcomes in non-aggressive lesion, if compared to the aggressive ones. It also showed evidence pointing to GCR expression in GC as a reliable parameter to predict therapeutic responsiveness to glucocorticoids; and it showed that 33% of CGCL have neoplastic behaviour by Ciclin D1 gene amplification. / A Lesão Central de Células Gigantes dos maxilares (LCCG) é intra-óssea, não tem predileção por sexo, classifica-se em agressivas e não-agressivas, histologicamente consistem tecido fi-broso e celularizado fusiforme associado a células gigantes multinucleadas (CGM), focos de hemorragia e neovascularização, tendo na cirurgia seu habitual tratamento. Novas abordagens terapêuticas foram propostas, sendo a principal delas o uso de corticóides intralesionais. Este trabalho analisa retrospectivamente 21 pacientes portadores de LCCG que foram tratados por hexacetonido de triancinolona intralesional, através do seguinte protocolo: injeção de hexace-tonido de triancinolona 20mg/ml diluído na solução anestésica de lidocaína 2%/epinefrina 1:200.000 numa proporção de 1:1; infiltrando 1ml de solução para cada 1cm3 de lesão, totali-zando 06 aplicações em intervalos quinzenais. Estabeleceu-se 04 critérios clínicos para classi-ficar a resposta ao tratamento: 1- estabilização ou regressão clínica da lesão 2- ausência de sintomas 3- aumento da densidade nos controles radiográficos 4- aumento da resistência a infiltração intralesional da droga, bem como, fez-se uma análise imunohistoquímica quanto à expressão dos Receptores de corticóides (GCR) e Calcitonina (CTR), Cox-2, proteína p16 e amplificação gênica da Ciclina D1 por CISH, comparando quanto a agressividade e a resposta terapêutica a corticoterapia intralesional. Dos 21 pacientes incluídos neste estudo, 11 eram homens e 10 mulheres, 09 tinham lesão em maxila, 12 em mandíbula. Dez eram lesões agres-sivas e 11 não-agressivas, 15 (71,4%) apresentaram uma boa resposta ao tratamento, 04(19%) moderada e 02(9,1%) negativa. Das 11 não agressivas, 10(90,9%) apresentaram boa resposta e 01 (9,1%) resposta moderada, das 10 agressivas 05(50%), 03(30%) e 02(20%) apresentaram boa, moderada e negativa resposta respectivamente, nenhuma apresentou recidiva após o tra-tamento, com preservação que variou entre 04 a 08 anos. Os achados histopatológicos mos-traram uma redução da densidade e do tamanho das CG, e um estroma fibro-colagenoso das lesões. Dentre os marcadores pesquisados, apenas GCR em CG antes do tratamento mostrou significância estatística (p<0,004) com relação a uma boa resposta terapêutica. O CTR ex-pressou-se em células gigantes e mononucleares de forma variada. A p16 apresentou-se ex-pressa em 30% da amostra, COX2 não apresentou expressão na lesão e 33% da amostra apre-sentou amplificação gênica da ciclina D1. Não mostraram significância estatística nem quanto à agressividade, nem quanto resposta ao tratamento, nenhum dos marcadores, exceto o GCR. O estudo mostrou que a corticoterapia intralesional é efetiva e segura para o tratamento das LCCG, com tendência a melhor resposta nas lesões não-agressivas do que nas agressivas. Mostrou ainda que a marcação para GCR em CG demonstrou ser um parâmetro confiável para prever a resposta à terapêutica com a corticoterapia intralesional e que 33% das LCCG têm comportamento neoplásico pela amplificação gênica da ciclina D1.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2007. / Submitted by leandro spinola (l.spinolafla@gmail.com) on 2009-12-04T12:32:10Z No. of bitstreams: 1 2007_GiovanaAdorniMazzotti.pdf: 2286345 bytes, checksum: 47d7e5e93f84ae8f41766df47d12975e (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2009-12-04T19:57:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_GiovanaAdorniMazzotti.pdf: 2286345 bytes, checksum: 47d7e5e93f84ae8f41766df47d12975e (MD5) / Made available in DSpace on 2009-12-04T19:57:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_GiovanaAdorniMazzotti.pdf: 2286345 bytes, checksum: 47d7e5e93f84ae8f41766df47d12975e (MD5) Previous issue date: 2007 / O gato é uma espécie interessante para os estudos das emoções devido ao seu comportamento estóico e às suas particularidades fisiológicas. Gatos são facilmente estressáveis, sendo que procedimentos rotineiros como a exposição a um ambiente desconhecido já é capaz de produzir estresse nesses animais. Um marcador tradicional de estresse é o cortisol sérico, o principal glicocorticóide de felinos. A relação entre o estresse psicológico e os glicocorticóides em gatos é pouco explorada na literatura científica. A temperatura corpórea vem sendo estudada como indicativo das emoções no homem e nos animais. Sugere-se que a emoção afeta principalmente a temperatura timpânica, devido a maior atividade em um hemisfério cerebral em relação ao outro. A temperatura retal não teria a mesma eficiência para detectar modificações das emoções. Com o objetivo de relacionar o cortisol plasmático, as temperaturas timpânicas e retal com o estresse em procedimentos veterinários de rotina, realizou-se um estudo com dois grupos de gatos em situações diferentes. Em um estudo, 13 gatos adultos, de ambos os sexos, castrados, permaneceram em baias individuais durante seis horas, no setor de internação do Hospital Veterinário da Universidade de Brasília. Após esse período se aferiu as temperaturas timpânicas direita (TTD), esquerda (TTE) e retal (TR), seguido imediatamente da coleta de sangue para aferição de glicemia e cortisol. Em outro estudo, 23 gatos adultos machos inteiros permaneceram por seis horas dentro de caixas de transporte, em uma sala tranqüila do Laboratório Integrado da UnB. Logo após os animais foram soltos em outra sala com enriquecimento e seus comportamentos observados durante duas seqüências de 15 min., com e sem colarelizabethano. No intervalo e ao final, os gatos foram contidos, aferidas as temperaturas e venopuncionados, com o mesmo objetivo analítico do primeiro estudo. Em ambos os estudos, as temperaturas timpânicas foram menores do que a TR, mas todas se correlacionaram. A dinâmica térmica da TTD foi relacionada ao estresse, quando abaixava. No segundo estudo, a TR esteve relacionada ao estresse do colarelizabethano. A dinâmica da TTE se correlacionou com a glicemia, quando abaixou, no segundo estudo. Houve uma relação entre estresse e a dinâmica térmica em gatos. Os resultados estão de acordo com o princípio do ¿Resfriamento Seletivo do Cérebro¿, considerando que as temperaturas timpânicas refletem em certa proporção, o estresse e o bem¿estar em alguns mamíferos mais corticalizados. O comportamento dos gatos sob um estresse agudo apresentou relações assimétricas com a fisiologia térmica e com a fisiologia endócrina. Nos gatos domésticos, atividades rotineiras como a simples internação hospitalar, mudança de ambiente e a contenção em caixas de transporte, são capazes de estimular mecanismos de defesa semelhante aos estudados em humanos, como a alteração térmica corporal e do metabolismo endócrino. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The cat is interesting specie for studies for emotions due to its stoic behavior and to its physiological particularities. Cats easily get stressed. Routine procedures as exposition to an unknown enviroment can produce stress in these animals. A study traditional indicator of stress in the serice cortisol, the main glicocorticoid of felines. The relation between psycological stress and glicocortinoids in cats is little explored in scientific literature. The body temperature has been studied as indicator of emotions in man and animals. It is suggested that the emotions affects mainly the tympanic temperaure, due to greater activity is oe brain hemisphere in relation to the other. The rectal teperature would not have the same efficiency to detect modifications of emotions. A study with two groups of cats in different situations was made aiming at relating the plasmatic cortisol, tympanic and rectal temperature to stress in routine veterinary procedures. In a study, 13 adult cats, of both sex, neutered, remained in individual jails duiring six hours, in the interment division of the Veteranary Hospital of Brasilia University. After this period it was measured the right tympanic temperature (RTT), left tympanic temperature (LTT) an d rectal temperature (RT) followed immediately by venopunction for measuring glycemia and cortisol. In another study, 23 male adults cats, not castrated, remained for six hours inside of transporte boxes, in a quite room of Integrated Laboratory of University of Braslia. Soon after, the animals were released in another room with enrichment and their behavior observed during to sequences of 15 minutes, with and without the Elizabeth-colar. In the interval and the end, the cats were restrained, their temperature measured and hey were venunpcioned with the same analytical objective of the first study. In both studies, the tympanic temperature were lower than the RT, but they all correlate. The thermic dynamics of the RTT was related to stree, when it lowered. In the seconds study the RTT was related to the stress of the Elizabeth-colar. The dynamics of LTT correlated to the Glycemia, when it lowered, in the second study. There was a relation between stress and thermic dinamic cats. The results are in accordanc with the principle of "selective Coolin Brain", considering that the Tympanic temperature reflect, in certain proporction, the stress and the wellfare in some mammals. The behavior of cats under intense stress presented asymetrical relatons to the termic phisylogy and to the endocrine phisyology. In domestic cats, routine active as simple hospital internment, change of enviroment and restrait transport boxes, can estimulate defense mechanisms similar to the ones studied in humans, as thermic body alteration ofbthe endocrine metabolism.

Submitted by Maykon Nascimento (maykon.albani@hotmail.com) on 2016-04-29T18:40:05Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Bernando Fernandes Lopes.pdf: 548323 bytes, checksum: 122a87023dcca9152a6f9453c4829f3d (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barros (patricia.barros@ufes.br) on 2016-05-09T18:53:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Bernando Fernandes Lopes.pdf: 548323 bytes, checksum: 122a87023dcca9152a6f9453c4829f3d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-09T18:53:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Bernando Fernandes Lopes.pdf: 548323 bytes, checksum: 122a87023dcca9152a6f9453c4829f3d (MD5) / Os glicocorticóides são amplamente utilizados na prática clínica, porém importantes efeitos adversos são descritos em cães. Objetivou-se com o presente estudo verificar a influência da prednisona sobre o tamanho da adrenal e na quantidade de gordura visceral em cães. Foram realizados exames de ultrassonografia da adrenal e as imagens editadas com auxílio de programa computacional e tomografia computadorizada helicoidal para quantificação da gordura visceral em oito cães adultos jovens hígidos, imediatamente antes e após 30 dias de terapia com prednisona em dose terapêutica (2mg/kg-1 de peso, a cada 24 horas, via oral). Verificou-se significativa (p<0,005) diminuição das dimensões da adrenal e significativo (p<0,001) aumento na quantidade de gordura visceral entre os diferentes momentos experimentais. Foi possível comprovar a aplicabilidade das técnicas de diagnóstico imagenológico utilizadas. / The glucocorticoids are widely used in clinical practice, but important adverse effects are described in dog. The aim of this study was to investigate the influence of prednisone on adrenal size and amount of visceral fat in dogs. Images of adrenal ultrasound examinations were edited with the aid of computer program and helical computed tomography as made for quantification of visceral fat in eight healthy young adult dogs immediately before and after 30 days of steroid with therapy prednisone in dose (2mg for each kg, each 24 hours, orally). There was adrenocortical atrophy and increased amount of intra-abdominal fat (p <0.005) between the different experimental time. It was possible to prove the applicability of diagnostic imaging techniques used.

Submitted by PAULA CUSTÓDIO BERTOLI null (paula.bertolic@gmail.com) on 2017-05-29T17:45:25Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado_Paula Bertoli.pdf: 4889712 bytes, checksum: 7a663fdb09f282784a37d3bf0b2d916f (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-05-31T16:38:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 bertoli_pc_me_rcla.pdf: 4889712 bytes, checksum: 7a663fdb09f282784a37d3bf0b2d916f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-31T16:38:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 bertoli_pc_me_rcla.pdf: 4889712 bytes, checksum: 7a663fdb09f282784a37d3bf0b2d916f (MD5) Previous issue date: 2017-04-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O mico-leão-preto (MLP, Leontopithecus chrysopygus) é uma espécie de primata neotropical ameaçada de extinção, sendo que tanto esforços in situ, quanto ex situ devem ser feitos para sua conservação. O entendimento das condições do cativeiro que melhoram o bem-estar dos indivíduos é necessário para viabilizar o sucesso reprodutivo ex situ. No entanto, indivíduos com diferentes perfis comportamentais podem responder de formas distintas a um mesmo estímulo tendo seu bem-estar impactado de diferentes maneiras. O bem-estar animal pode ser avaliado através de variáveis comportamentais (via o estudo de comportamentos potencialmente indicativos de estresse – BPIS) e fisiológicas (via o estudo dos níveis de metabólitos fecais de glicocorticóides – MGFs). Assim, os objetivos desse trabalho foram: 1) determinar o efeito das condições de cativeiro, período do dia e estação do ano sobre o comportamento e sobre os níveis de MGFs; 2) determinar a relação entre os comportamentos e os níveis de MFGs; 3) definir os eixos que compõe o perfil de comportamento gênero-normativo e os eixos que representam as diferentes formas de reação ao estresse entre os BPIS; e 4) identificar os estilos de enfrentamento da população de MLP estudada (via a análise da relação entre os tipos comportamentais, formas de reação ao estresse e índices hormonais de MFGs). Foram observados 11 indivíduos (3 fêmeas e 8 machos) no Centro de Primatologia do Rio de Janeiro durante 15 dias em duas estações (verão e inverno), em 4 diferentes tratamentos: 1 casal com um casal de filhotes em idade adulta, um casal, uma dupla de machos – todos estes em gaiolas grandes - e três machos sozinhos em gaiolas pequenas, Coletamos dados comportamentais dos MLP usando blocos de 10 minutos de amostragem focal com registros a cada 10 segundos duas vezes ao dia (manhã e tarde) para cada indivíduo, totalizando 10 horas de observação por indivíduo, e coletamos fezes duas vezes por dia (11h e 16h). Via uma análise de covariância (MANCOVA), encontramos que MLP em gaiolas individuais apresentaram altas frequências de estereotipias, tempo dentro do abrigo e do comportamento de coçar. Machos em dupla apresentaram altas frequências de comportamentos anormais e os maiores valores de MFGs enquanto que os indivíduos em família e casal apresentaram comportamentos mais semelhantes aos observados na natureza. O período do dia e as estações do ano influenciaram a frequência de alguns comportamentos, mas não os níveis de MFGs. Com relação às diferenças individuais nas formas de reação ao estresse, encontramos quatro eixos para os tipos comportamentais (atividade, sociabilidade, exploração e necessidade) e quatro formas de enfrentamento ao estresse (introversão, auto-proteção, ansiedade e distúrbios) via uma análise de cluster. Foram encontrados quatro estilos de enfrentamento ao estresse, dois que se assemelham a uma forma pró-ativa e dois que se assemelham a uma forma reativa. Dessa forma, esse trabalho apontou a importância de recintos grandes e da composição dos grupos no bem-estar do MLP assim como importantes diferenças inter-individuais na forma de enfrentar o estresse que devem ser consideradas no futuro manejo da espécie. / The Black Lion tamarin (BLT, Leontopithecus chrysopygus) is a threatened neotropical primate species for which both in situ and ex situ efforts have to be done for its conservation. The understanding of which captive conditions improve the welfare of individuals is necessary to enable ex situ reproductive success. However, individuals with different behavioral profiles may respond differently to the same stimulus, consequently impacting their welfare in different ways. Animal welfare can be assessed through behavioral (through the study of behaviors potentially indicative of stress - BPIS) and physiological variables (through the study of fecal metabolites of glucocorticoids - MGFs). Therefore, the aims of the study were: 1) to determine the effect of the captive condition, period of the day and season on the behavior and the levels of MGFs; 2) to determine the relationship between behaviors and levels of MFGs; 3) to identify axes that make up the gender-normative behavioral profile (among normative behavioral patterns - GNBs ) and axes of the forms of stress reaction (among BPIS) and; 4) to identify coping styles (through an analysis of the relationship between behavioral types, forms of reaction to stress and hormonal indices of MFGs). We observed 11 individuals (3 females and 8 males) in the Primatology Center of Rio de Janeiro for 15 days in two different seasons (summer and winter) in 4 different treatments: 1 malefemale pair with its adult twins, 1 male-female pair, 1 male-male pair – all in large enclosures - and three single males in small cages. They were observed. We collected behavioral data for each individual twice a day using 10-minute blocks of focal sampling with records every 10 seconds (totaling 10 hours of observation per subject) and collected feces twice a day (11a.m. and 4 p.m.). Through a covariance analysis (MANCOVA), we found that BLT in individual cages presented high frequencies of stereotyped behaviors, scratching and hiding in the shelter. Male-male pair presented high frequencies of abnormal behaviors and the highest values of MFGs while individuals in family and in male-female pair presented behaviors more similar to those observed in nature. Period of the day and seasons influenced the frequency of some behaviors, but not the levels of MFGs. In relation to individual differences we found four axes for behavioral types (activity, sociability, exploration and need) and four forms of coping with stress (introversion, self-protection, anxiety and disorders) via cluster analyses. Four coping styles were found, two similar to a proactive form and two to a reactive form. In conclusion, this work pointed out the importance of large enclosures and group composition on BLT welfare as well as significant differences of coping styles among individuals that have to be considered in the future management of the species. / FAPESP: 2014/14739-0

A Síndrome do Desconforto Respiratória Aguda (SDRA) e a Lesão Pulmonar Aguda (LPA) permanecem como importantes causas de morbidade e mortalidade em pacientes com sepse. Entender os mecanismos etiopatofisiológicos da SDRA/LPA é essencial para avançar nas modalidades terapêuticas. O uso de glicocorticóides (GC) tem sido proposto para o tratamento da SDRA/LPA, mas com resultados controversos. O objetivo desse estudo foi avaliar a influência dos GC nos níveis plasmáticos de corticosterona (CCT), na área imunorreativa para os receptores de GC (GR) no pulmão, nos dados de mecânica respiratória, na morfometria pulmonar, na atividade de mieloperoxidase (MPO) e nos níveis de peróxido de hidrogênio (H2O2) no tecido pulmonar de ratos com LPA induzida por CLP (Cecal Ligation and Puncture). Foram utilizados 144 ratos Wistar (250-300g) divididos aleatoriamente em grupos Naïve, Sham e CLP (N = 8/grupo). No grupo Naïve, os animais não sofreram qualquer procedimento ou tratamento. No grupo Sham, os ratos tiveram o ceco exposto e foram pré-tratados com salina, uma hora antes da cirurgia. No grupo CLP, os animais tiveram o ceco exposto, ligado e perfurado e foram divididos em três grupos de acordo com os tratamentos prévios realizados, uma hora antes da cirurgia: CLP sal (salina em volume equivalente de 0,9 % NaCl i.p.); CLP met (metirapona 50 mg.kg-1 i.p.); CLP dex (dexametasona 0,5 mg.kg-1 i.p.). Após 6 e 24 horas da cirurgia, os animais foram anestesiados, traqueostomizados e acoplados a um ventilador mecânico para avaliação da mecânica respiratória, seguida de remoção dos pulmões para estudos histomorfométricos e da área imunorreativa para GR. Foi realizado um experimento à parte com os mesmos grupos para dosagem de corticosterona (CCT), seguido de remoção dos pulmões para medidas bioquímicas. A met aumentou a viscância tecidual (Gtis) e da histeresividade (ƞ) pulmonar, a porcentagem de células inflamatórias e a área de colapso alveolar, e a atividade de MPO, similar ao CLP sal. Todavia, a met reduziu os níveis de CCT e aumentou drasticamente os níveis de H2O2, comparado ao CLP sal, e aumentou o risco de morte dos animais. A dex reduziu os níveis de CCT e preveniu a inflamação e o estresse oxidativo pulmonar. Além disso, preveniu o colapso alveolar, melhorando Gtis e ƞ, comparado ao CLP sal. Os resultados obtidos permitem concluir que: os diferentes níveis plasmáticos de CCT, observados nos animais sépticos, com exceção dos pré-tratados com dex, não foram capazes de prevenir as alterações morfofuncionais e inflamatórias da LPA; embora tenha ocorrido aumento da sensibilidade do GR nos animais pré-tratados com met, não houve proteção contra a instalação da LPA; as anormalidades nos parâmetros de mecânica respiratória encontradas nos animais pré-tratados com met e sal demonstram que a sepse afetou a função pulmonar; o aumento da atividade de MPO no tecido pulmonar, observado nos animais sépticos, com exceção dos pré-tratados com dex, correlacionou-se com o aumento dos neutrófilos pulmonares; o aumento dos níveis de H2O2 no tecido pulmonar, ocorrido pela administração prévia de met, pode ter sido influenciado por níveis basais de CCT. / The Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS) and the Acute Lung Injury (ALI) remain as important causes of morbidity and mortality in patients with sepsis. Understanding the pathophysiology mechanisms of ARDS/ALI is essential to advance in therapeutic modalities. The use of glucocorticoids (GC) has been proposed for the treatment of ARDS/ALI, but with controversial results. The aim of this study was to evaluate the influence of GC on the parameters: corticosterone (CCT) plasma levels, immunoreactive area to GC receptors (GR) in the lung, respiratory mechanics data, lung morphometry, myeloperoxidase activity (MPO) and hydrogen peroxide levels (H2O2) in lung tissue of rats with ALI induced by CLP (Cecal Ligation and Puncture). 144 rats (250-300g) randomly divided into Naïve, Sham and CLP groups (n = 8 / group) were used. In Naïve group, the animals did not suffer any procedure or treatment. In Sham group, rats had the cecum exposed and were pretreated with saline solution an hour prior to surgery. In CLP group, animals had the cecum exposed and drilled, and were divided into three groups according to previous treatments performed an hour before surgery: CLP sal (equivalent volume of saline in 0.9% NaCl i.p.); CLP met (metyrapone 50 mg.kg-1 i.p.); CLP dex (dexamethasone 0.5 mg.kg-1 i.p.). The animals were anesthetized, tracheotomized and coupled to a ventilator for respiratory mechanics evaluation, followed by removal of the lungs for histomorphometric analysis and GR immunoreactive area, 6 and 24 hours after surgery. A different experiment was carried out with the same groups for corticosterone (CCT) plasma measurements, followed by removal of the lungs for biochemical measurements. The met increased tissue damping (Gtis) and hysteresivity (ƞ), inflammatory cells percentage, alveolar collapse area and MPO activity, similar to CLP sal. However, met reduced CCT levels and increased H2O2 levels as compared to the CLP sal, and increased risk of animals’ death. The dex reduced CCT levels and prevented inflammation and pulmonary oxidative stress. Besides, it prevented alveolar collapse, improving Gtis and ƞ, compared to CLP sal. The results showed that the different levels of plasma CCT, observed in septic animals, with exception of those pre-treated with dex, were not able to prevent the morphological and functional and inflammatory changes of the ALI; although there was an increase in GR sensitivity in met pre-treated animals, there was no protection against the installation of ALI; abnormalities in respiratory mechanics parameters found in animals pretreated with sal and met demonstrate that sepsis affects pulmonary function; increased MPO activity in lung tissue observed in septic animals, with exception of those pre-treated with dex, correlated with the increase in pulmonary neutrophils; increased H2O2 levels in lung tissues occurred in animals pretreated with met and may have been influenced by basal levels of CCT.

Os hormônios glicocorticóides causam uma completa reversão tanto \"in vitro\" quanto \"in vivo\" do fenótipo tumoral para normal, na linhagem celular ST1 de glioma de rato (Armelin & Armelin, 1983) que é um variante da linhagem C6 de glioma de rato. Neste trabalho, foram construídas bibliotecas normalizadas de cDNAs subtraídos e normalizadas, através da metodologia de PCR supressivo, para identificar genes regulados por glicocorticóides, potencialmente envolvidos na reversão fenotípica de células ST1. A construção e análise de duas bibliotecas de cDNAs subtraídos, permitiu o isolamento de 7 genes diferencialmente expressos, alguns dos quais são conhecidos efetores do controle da proliferação celular e/ou diferenciação: trombospondina-1, ciclina G, tirosina fosfatase CL100 e NRP/B. Foi isolado, também, um clone similar a tenascina-X, que apresenta um transcrito de tamanho diferente. O isolamento e caracterização de um cDNA completo correspondente a esse transcrito revelou que é constituído apenas por motivos de fibronectina tipo III e fibrinogênio. A dramática indução deste transcrito por hidrocortisona sugere um papel potencial para esse variante de TN-X no controle da proliferação celular. A análise da expressão destes genes em células P7, um variante de C6 que não sofre reversão fenotípica mediada com glicocorticóides, e em células U87 de glioblastoma humano, revelou que são expressos em níveis muito baixos ou indetectáveis, nestas células indicando que o produto destes genes pode ter um papel importante na reversão fenotípica tumoral-normal. A prevalência de transcritos raros e diferencialmente expressos nestas bibliotecas, mostra que são adequadas para o rastreamento, através de métodos automatizados de microarranjos de DNA, para a validação de clones diferencialmente expressos, podendo revelar, rapidamente, um painel de genes candidatos a estarem envolvidos nas respostas anti-proliferativa e anti-tumoral dos glicocorticóides. / Treatment of the C6 rat glioma cell variant, ST1 cells, with glucocorticoids, leads to a complete reversion of their transformed phenotype and loss of tumorigenic potential. In this work, two subtracted and equalized cDNA libraries were constructed, based on suppressive PCR, in order to identify glucocorticoid-regulated genes related to the ST1 phenotypic reversion. Analysis of both subtracted cDNA libraries revealed 7 differentially expressed genes, some of which are well known negative growth regulators: thrombospondin-1, cyclin G, tyrosine phosphatase CL 100 and NRP/B. In addition, a cDNA clone similar to TN-X, but exibiting a different transcript size was also isolated. Isolation and characterization of a full-length cDNA corresponding to this transcript, revealed that it is composed of fibronectin type III repeats and one single fibrinogen domain. Glucocorticoid induction of this transcript may suggest a different role of TN-X variants in controling cell proliferation. Expression analysis of the C6-derived glucocorticoid-resistant, P7 variant, and of the human glioblastoma U87 cells, revealed very low or undectable levels of these transcripts, further suggesting that their expression is related to the ST1 cells\' phenotypic reversion. Prevalence of rare and differentially expressed transcripts in these libraries suggests that they are likely to be useful in automated systems (DNA microarrays) to rapidly validate differentially expressed clones and to reveal a panel of candidate genes that mediate the anti-proliferative and anti-tumor effects of glucocorticoids.

Neste estudo, testamos dois novos moduladores seletivos do receptor de glicocorticóide, nomeados L5 e L7, em comparação com o dexametasona, sobre aspectos estruturais, funcionais e moleculares no músculo sóleo. Ratos Wistar foram tratados com doses progressivas de dexametasona, L5 e L7 em 1 ou 7 dias. A massa corporal e a ingestão alimentar apresentaram queda após o tratamento com dexametasona em todas as doses; os tratamentos com L5/L7 mostraram resposta semelhante aos controles. O peso do músculo foi diminuído pelo dexametasona, efeito não observado nos tratamentos com L5/L7. Apenas o tratamento com dexametasona causou uma diminuição na área de secção transversa dos tipos de fibra muscular analisada. A força tetânica do sóleo foi diminuída pela dexametasona, nos tratamentos com L5/L7 este parâmetro também não foi afetado. A expressão gênica de MAFbx/Atrogin-1 e MuRF-1 foi elevada pela dexametasona; por outro lado, L5/L7 não elevaram a expressão destes genes. Concluímos que o L5/L7, em contraste com o dexametasona, preveniu o músculo esquelético da atrofia. / In this study, we have tested two new selective modulators named L5 and L7 along with dexamethasone in skeletal muscle structural, functional and molecular aspects. Male Wistar rats were treated with progressive doses of dexamethasone, L5 and L7 for 1 and 7 days. While body weight and food intake were decreased by the dexamethasone treatment in all doses, L5/L7 treatments induced gain in body weight similarly to controls. Muscle weight was decreased by dexamethasone, while L5/L7 were ineffective. Only the dexamethasone treatment caused a decrease in the analyzed cross sectional area of the skeletal muscle fiber types. Soleus tetanic force was decreased by the dexamethasone treatment, while L5/L7 treatments did not alter this parameter. MAFbx/Atrogin-1 and MuRF-1 gene expressions were elevated by dexamethasone; on the other hand, L5/L7 did not modulate any expression of those genes. We conclude that L5/L7, in contrast to dexamethasone, spare skeletal muscle from structural and functional loss, and molecular changes, reinforcing their role as a therapeutic device.

Os hormônios glicocorticóides (GCs) têm sido amplamente empregados como agentes antiinflamatórios e anti-tumorais. Sua ação ocorre via receptores nucleares (GR) sendo dependente da remodelação da estrutura da cromatina. As proteínas Brm e BRG1, componentes essenciais de um complexo regulador global da transcrição (SWI/SNF), por remodelamento da cromatina, exercem um papel-chave na ação de GR. Para estudar o mecanismo de ação de GCs, foram utilizadas as linhagens celulares ST1 e P7, derivadas da linhagem celular C6, de glioma de rato. P7 é insensível ao tratamento com GC, enquanto ST1 apresenta reversão fenotípica tumoral&#8594;normal, gerando um bloqueio específico na fase G1. Um anti-soro policlonal específico para Brm e BRG1, foi gerado através da inoculaçâo de coelha com a proteína hBRG1 recombinante. Este antisoro foi utilizado para análisar os níveis destas proteínas nas duas linhagens celulares, sob ação de GC. Enquanto em ST1, Brm é induzida por GC, em células P7, o nível basal de Brm é relativamente alto, mantendo-se inalterado na presença de GC. A possíbilidade de existirem mutações no gene brm de células P7, foi investigada através de amplificação do DNA, por PCR, e seqüenciamento. A superexpressão de brm e BRG1 em células P7 mostrou que clones isolados apresentavam, de um modo geral, achatamento celular, diminuição da taxa de crescimento e da eficiência de plaqueamento em substrato sólido e semi-sólido. Alguns destes clones passaram a responder ao tratamento com GC, porém não tão drasticamente como as células ST1. Co-imunonoprecipitação mostrou algumas diferenças entre os complexos SWI/SNF de células ST1 e P7. / Glucocorticoid hormones (GCs) have been used as anti-inflammatory and anti-tumor agents, acting via nuclear receptors (GR) and being dependent on remodeling of the chromatin structure. As components of the global chromatin remodeling transcription complex (SWI/SNF), Brm and BRG-1 proteins play a key role in the action of GR. In order to study the mechanisms of action of GCs, we have been using the ST1 and P7 cell lines, derived from the C6, a rat glioma cell line. P7 is insensitive to the GC treatment, while ST1 displays a complete phenotypic reversion from tumoral to normal, including a G1-specific block in the cell cycle. A Brm and BRG1-specific polyclonal antiserum was generated, in rabbit, using recombinant hBRG1 protein as antigen. This antiserum was used to analyze the levels of Brm and BRG1 in these two cell lines, under GC treatment. While Brm is induced by GC, in ST1 cells, the basal level of Brm, in P7 cells, is relatively high, remaining unchanged under GC treatment. The possibility of brm mutations occurring in the P7 cells, was analyzed by DNA sequencing. Overexpression of brm and BRG1 in P7 cells led to morphological alterations (cell flattening) and decreased colony formation in agarose suspension and in solid substrate. Some of these clones became partially responsive to GC, when compared to the ST1 cell line. Co-immunoprecipitation assays revealed some differences in the SWI/SNF complex between ST1 and P7 cells.

O desmame precoce (DP) consiste na abrupta substituição do leite pela dieta sólida e este padrão de alimentação pode ter impacto sobre o crescimento do estômago. Esta situação é também estressante para os filhotes e eleva os níveis de corticosterona que age ligando-se ao receptor de glicocorticoide (GR). Estudamos a expressão e a distribuição do GR na mucosa gástrica de ratos amamentados (C) e em DP. A expressão de GR foi maior aos 17 dias no grupo C e aumentou do 17º para o 18º dia no grupo em DP (p<0,05). O DP diminuiu o nível de GR, principalmente aos 18 dias (p<0,05), porém não alterou sua distribuição tecidual. Em termos de localização subcelular o GR, ficou mais concentrado no citoplasma no C (p<0,05), enquanto no DP, a distribuição foi similar entre os compartimentos, com uma redução no citoplasma (p<0,05), e um sutil aumento no núcleo. Sugerimos que a resposta de GR ao DP indica a alteração um elemento essencial na atividade da corticosterona, e essa modificação pode ser importante na coordenação do crescimento da mucosa gástrica durante o desmame precoce. / Early weaning (EW) is the abrupt change from suckling (S) to solid food and it can impair stomach development. This is a stressful situation for pups and it augments corticosterone levels, which acts through glucocorticoid receptor (GR). We studied GR expression, tissue and subcellular distribution in the gastric mucosa of S and EW pups. GR expression was higher at 17 d in S pups (p<0,05), whereas in EW group, it increased from the 17th to 18th d (p<0,05). GR protein levels decreased throughout EW, mainly at 18 d (p<0,05). However, EW did not alter tissue distribution of GR along the gastric gland. As for GR subcellular distribution, we found that in S group GR was more concentrated in the cytoplasm, (p<0,05), whereas in EW pups, GR was similarly distributed between compartments, though we detected a decrease in the cytoplasm (p<0.05) and a slight increase in the nucleus. We suggest that GR response to EW indicates the change of an essential element of corticosterone cascade, and such alteration might be important in the coordination of gastric mucosa growth.

O estresse é um fenômeno conservado e observado evolutivamente, que tem como objetivo assegurar a sobrevivência do indivíduo. Porém quando o organismo perde a capacidade de se autorregular, torna-se uma ameaça. Algumas psicopatologias, como ansiedade e depressão, sugerem o envolvimento dos sistemas CRF e noradrenérgico e de níveis elevados de GCs. Avaliamos nesse trabalho algumas alterações morfofisiológicas e comportamentais decorrentes da exposição do estresse crônico imprevisível (EI) em ratos machos. Avaliados 24 h após o último estímulo estressor, os animais submetidos ao EI apresentaram níveis elevados de corticosterona plasmática, de RNAm de CRF2 e expressão de GR em regiões encefálicas (LSi e VmH e LSi, CeA, BST e PVH, respectivamente). Essas alterações morfofisiológicas foram, em parte, decorrentes da ação de GCs e de NE. Não foram observadas alterações comportamentais quanto à anedonia e ansiedade. Dessa maneira, podemos dizer que o EI utilizado nesse estudo, foi capaz de induzir algumas alterações morfofisiológicas, porém não comportamentais. / While acute stress initiates neuronal responses that prepare an organism to adapt to challenges, chronic stress may lead to maladaptative responses that could result in diseases. Evidence suggests the involvement of CRF system and high corticosterone levels in stress-related psychiatric disorders such as anxiety and major depressive disorders. The aim of this work was to investigate whether chronic unpredictable stress (CUS) could modulate de CRF system, GR expression in the CNS and behavior in male rats. Results showed an increase in corticosterone plasmatic levels, CRF2 mRNA and GR expression in specific regions of the CNS (LSi e VmH e LSi, CeA, BST e PVH, respectively), associated with the limbic system at 24 h after the last stress session. The chronic treatment with an inhibitor of GCs synthesis (metyrapone) and adrenergic receptor antagonists (atenolol and phentolamine) prevented the CUS effects in CRF2 mRNA levels and GR expression. No anxiety or depression-like behavior was observed in rats submitted to CUS. We conclude that CUS cause biochemical alterations since the increase CRF2 mRNA levels and GR expression in limbic region, but these changes were not able to cause behavioral changes.