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Thesis (Ph. D.)--Cornell University. / Cover title. Reprinted from Annals of botany, Vol. XXV, No. XCVII. "Bibliography": p. 150-152.

MELO, José Glauber Moreira. Análise molecular e proteômica de Lasiodiplodia theobromae associado a fruteiras tropicais. 2014. 88 f. Tese (Doutorado em agronomia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2014. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-08-29T20:06:07Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_jgmmelo.pdf: 2467689 bytes, checksum: e9a0fc6142e5ef3db09ac0252d32f4e7 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-08-31T23:39:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_jgmmelo.pdf: 2467689 bytes, checksum: e9a0fc6142e5ef3db09ac0252d32f4e7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-31T23:39:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_jgmmelo.pdf: 2467689 bytes, checksum: e9a0fc6142e5ef3db09ac0252d32f4e7 (MD5) Previous issue date: 2014 / Lasiodiplodia theobromae is a plant pathogenic fungus responsible for many diseases in various plants, is a fungus typically tropical and subtropical regions. The fungus attacks many tropical plants, among them, including mango, Spondias sp., coconut, cashew, and many others. His control is basically genetic performed by planting resistant clones, however to obtain it becomes necessary to know the pathogen characteristics. The information available on the genetic variability of L. theobromae is restricted to ensure success in any breeding program for resistance to this pathogen. Taking into account that proteins are functional products of genes, it is important to know them, to improve the understanding of the mode of action of pathogens, with this understanding, useful as a strategy to be used in plant breeding seeking genetic resistance. The objective of this study were to conduct a genetic study molecular in a population of L. theobromae and a differential proteomic analysis of the fungus among isolates, more and less aggressive, to identify proteins responsible for this aggressivity. A population consisting of 105 strains was used for molecular characterization, extracting the DNA from mycelia grown in liquid medium. Each sample was subjected to polymerase chain reaction (PCR) with 15 pairs of primers specific for the species, and a primer pair of the ITS region and other EF-1α region. The amplified products were visualisados agarose gel, stained with ethidium bromide and spreadsheet data in binary tabulated and analyzed by unbalanced grouping method based on the arithmetic mean (UPGMA) using the MVSP program. Genetic similarities were estimated by Jaccard’s coefficient. The results indicated a high genetic variability of the studied population. Since the proteomic study was conducted to assess qualitative differences, that is, the presence/absence of a specific protein in relation to the opposite group. To this end, we used two isolates of the same fungus, differing as their aggressiveness, in which one was highly aggressive, whereas the other had a low aggressiveness when inoculated seedlings of cashew. When the electrophoretic profile was analyzed, 96 were detected differentially expressed spots. By LC-ESI-Q-TOF MS / MS, 84 proteins were identified having the most diverse cellular functions. With this approach it was possible preliminary characterization of the protein profile of this fungus to give some evidence of the mechanisms involved in their aggressiveness. This is the first study seeking to know the proteins responsible for the aggressiveness L. theobromae. / Lasiodiplodia theobromae é um fungo fitopatogênico responsável por inúmeras doenças em variadas plantas, sendo um fungo tipicamente de regiões tropicais e subtropicais. O fungo atacadiversas plantas tropicais, dentre elas destacam-se a mangueira, as Spondiassp., o coqueiro, o cajueiro, entre tantas outras. Seu controle é basicamente genético realizado com o plantio de clones resistentes, entretanto, para sua obtenção torna-se necessário o conhecimento das características do patógeno. As informações disponíveissobre a variabilidade genética de L. theobromaesão insuficientes para assegurar o sucesso em qualquer programa de melhoramento genético visando à resistência a este patógeno. Levando-se em conta que as proteínas são produtos funcionais dos genes, torna-se importante conhecê-las, visando um melhor entendimento do modo de ação dos patógenos, sendo este entendimento, útil como estratégia a ser utilizada no melhoramento vegetal buscando a resistência genética. Assim, o objetivo desse estudo foi realizar um estudo genético molecular em uma população de L. theobromae e uma análise proteômica diferencial do fungo entre isolados, mais e menos agressivos, visando identificar proteínas responsáveis por essa agressividade.Uma população composta de 105 isolados foi usada na caracterização molecular, extraindo-se o DNA a partir do micélio do fungo crescido em meio líquido. Cada amostra foi submetida à reação em cadeia da polimerase (PCR) com 15 pares de primers específicos para essa espécie, além de um par de primer da região ITS e outro da região EF-1α. Os produtos amplificados foram visualisados em gel de agarose, corados com brometo de etídio e os dados tabulados em planilha binária e foram analisados pelo método de agrupamento não balanceado baseado na média aritmética (UPGMA) utilizando o programa MVSP. As similaridades genéticas foram estimadas pelo coeficiente de Jaccard. Os resultados indicaram uma grande variabilidade genética da população avaliada. Já o estudo proteômico foi realizado visando avaliar diferenças qualitativas, ou seja, a presença/ausência de uma determinada proteína, em relação ao grupo antagônico. Para tal, utilizaram-se dois isolados do mesmo fungo, diferenciando-se quanto a sua agressividade, em que um era altamente agressivo, enquanto o outro apresentava uma baixa agressividade quando inoculados em mudas de cajueiro. Quando o perfil eletroforético foi analisado, foram evidenciados 96 spots diferencialmente expressos. Através da LC-ESI-Q-TOF MS/MS, foram identificadas 84 proteínasapresentando diversas funções celulares.Com essa abordagem foi possível a caracterização preliminar do perfil proteico deste fungo, obtendo-se alguns indícios dos mecanismos envolvidos na sua agressividade. Este é o primeiro estudo buscando conhecer as proteínas responsáveis pela agressividade de L. theobromae.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / Lasiodiplodia theobromae à um fungo fitopatogÃnico responsÃvel por inÃmeras doenÃas em variadas plantas, sendo um fungo tipicamente de regiÃes tropicais e subtropicais. O fungo atacadiversas plantas tropicais, dentre elas destacam-se a mangueira, as Spondiassp., o coqueiro, o cajueiro, entre tantas outras. Seu controle à basicamente genÃtico realizado com o plantio de clones resistentes, entretanto, para sua obtenÃÃo torna-se necessÃrio o conhecimento das caracterÃsticas do patÃgeno. As informaÃÃes disponÃveissobre a variabilidade genÃtica de L. theobromaesÃo insuficientes para assegurar o sucesso em qualquer programa de melhoramento genÃtico visando à resistÃncia a este patÃgeno. Levando-se em conta que as proteÃnas sÃo produtos funcionais dos genes, torna-se importante conhecÃ-las, visando um melhor entendimento do modo de aÃÃo dos patÃgenos, sendo este entendimento, Ãtil como estratÃgia a ser utilizada no melhoramento vegetal buscando a resistÃncia genÃtica. Assim, o objetivo desse estudo foi realizar um estudo genÃtico molecular em uma populaÃÃo de L. theobromae e uma anÃlise proteÃmica diferencial do fungo entre isolados, mais e menos agressivos, visando identificar proteÃnas responsÃveis por essa agressividade.Uma populaÃÃo composta de 105 isolados foi usada na caracterizaÃÃo molecular, extraindo-se o DNA a partir do micÃlio do fungo crescido em meio lÃquido. Cada amostra foi submetida à reaÃÃo em cadeia da polimerase (PCR) com 15 pares de primers especÃficos para essa espÃcie, alÃm de um par de primer da regiÃo ITS e outro da regiÃo EF-1α. Os produtos amplificados foram visualisados em gel de agarose, corados com brometo de etÃdio e os dados tabulados em planilha binÃria e foram analisados pelo mÃtodo de agrupamento nÃo balanceado baseado na mÃdia aritmÃtica (UPGMA) utilizando o programa MVSP. As similaridades genÃticas foram estimadas pelo coeficiente de Jaccard. Os resultados indicaram uma grande variabilidade genÃtica da populaÃÃo avaliada. Jà o estudo proteÃmico foi realizado visando avaliar diferenÃas qualitativas, ou seja, a presenÃa/ausÃncia de uma determinada proteÃna, em relaÃÃo ao grupo antagÃnico. Para tal, utilizaram-se dois isolados do mesmo fungo, diferenciando-se quanto a sua agressividade, em que um era altamente agressivo, enquanto o outro apresentava uma baixa agressividade quando inoculados em mudas de cajueiro. Quando o perfil eletroforÃtico foi analisado, foram evidenciados 96 spots diferencialmente expressos. AtravÃs da LC-ESI-Q-TOF MS/MS, foram identificadas 84 proteÃnasapresentando diversas funÃÃes celulares.Com essa abordagem foi possÃvel a caracterizaÃÃo preliminar do perfil proteico deste fungo, obtendo-se alguns indÃcios dos mecanismos envolvidos na sua agressividade. Este à o primeiro estudo buscando conhecer as proteÃnas responsÃveis pela agressividade de L. theobromae. / Lasiodiplodia theobromae is a plant pathogenic fungus responsible for many diseases in various plants, is a fungus typically tropical and subtropical regions. The fungus attacks many tropical plants, among them, including mango, Spondias sp., coconut, cashew, and many others. His control is basically genetic performed by planting resistant clones, however to obtain it becomes necessary to know the pathogen characteristics. The information available on the genetic variability of L. theobromae is restricted to ensure success in any breeding program for resistance to this pathogen. Taking into account that proteins are functional products of genes, it is important to know them, to improve the understanding of the mode of action of pathogens, with this understanding, useful as a strategy to be used in plant breeding seeking genetic resistance. The objective of this study were to conduct a genetic study molecular in a population of L. theobromae and a differential proteomic analysis of the fungus among isolates, more and less aggressive, to identify proteins responsible for this aggressivity. A population consisting of 105 strains was used for molecular characterization, extracting the DNA from mycelia grown in liquid medium. Each sample was subjected to polymerase chain reaction (PCR) with 15 pairs of primers specific for the species, and a primer pair of the ITS region and other EF-1α region. The amplified products were visualisados agarose gel, stained with ethidium bromide and spreadsheet data in binary tabulated and analyzed by unbalanced grouping method based on the arithmetic mean (UPGMA) using the MVSP program. Genetic similarities were estimated by Jaccardâs coefficient. The results indicated a high genetic variability of the studied population. Since the proteomic study was conducted to assess qualitative differences, that is, the presence/absence of a specific protein in relation to the opposite group. To this end, we used two isolates of the same fungus, differing as their aggressiveness, in which one was highly aggressive, whereas the other had a low aggressiveness when inoculated seedlings of cashew. When the electrophoretic profile was analyzed, 96 were detected differentially expressed spots. By LC-ESI-Q-TOF MS / MS, 84 proteins were identified having the most diverse cellular functions. With this approach it was possible preliminary characterization of the protein profile of this fungus to give some evidence of the mechanisms involved in their aggressiveness. This is the first study seeking to know the proteins responsible for the aggressiveness L. theobromae.

Made available in DSpace on 2016-06-02T18:57:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3966.pdf: 1565566 bytes, checksum: c60e9f28a9a2929d932432587bd3f8e0 (MD5) Previous issue date: 2011-11-09 / Universidade Federal de Sao Carlos / Among the problems faced by the plant citrus sector, stands out of Phytophthora gummosis, which affects all stages of plant development. For disease control chemicals are used, but seeking a more sustainable agriculture, alternative control techniques have been adopted, including the use of biofertilizers. Therefore, this work aimed to: (i) to produce a biofertilizer from the anaerobic digestion of cattle manure with crushed sugar cane, (ii) determine the microbial diversity present in compost, (iii) verify the effect of compound on mycelial growth of Phytophthora parasitica, (iv) to observe its effect on plant growth, and finally (v) evaluate its effect on induction of resistance to the pathogen. It was found that in the period between 25 to 35 days of production of biofertilizer met the highest microbial population, specially composed by Bacillus spp. and other bacteria. The biofertilizer at concentrations of 10 and 20% favored the vegetative growth of rootstock Poncirus trifoliata, Rangpur, sunki and sour oranges, and the concentration of 20% in orange plants Caipira favored disease control. The genes encoding β 0.1-3-glucanase (PR-2), chalcone synthase (CHS) and lipoxygenase (LOX) were activated in plants treated with biofertilizer and inoculated into susceptible rootstock, the biofertilizer was able to activate genes encoding chitinase (CHI) and chalcone synthase (CHS), possibly involved with the resistance of citrus plants to P. Parasitica. / Dentre os problemas fitossanitários enfrentados pelo setor citrícola, destaca-se a gomose de Phytophthora, que acomete todos os estágios de desenvolvimento da planta. Para o controle da doença são utilizados produtos quimicos, porém visando uma agricultura mais sustentável, técnicas alternativas de controle têm sido adotadas, dentre elas o uso de biofertilizante. Portanto, com este trabalho pretendeu-se: (i) produzir um biofertilizante a partir da fermentação anaeróbia de esterco bovino com bagaço de cana-de-açúcar; (ii) determinar a diversidade microbiana presente no composto; (iii) verificar o efeito do composto no crescimento micelial de Phytophthora parasitica; (iv) observar seu efeito no desenvolvimento das plantas e, finalmente, (v) avaliar seu efeito na indução de resistência ao patógeno. Verificou-se que, no período entre 25 a 35 dias de produção do biofertilizante encontrou-se a maior população microbiana, composta especialmente por Bacillus spp. e outras bactérias. O biofertilizante nas concentrações de 10 e 20% favoreceu o crescimento vegetativo dos porta-enxertos Poncirus trifoliata, limão Cravo, tangerina Sunki e laranja Azeda; e na concentração de 20%, em plantas de laranja Caipira, favoreceu o controle da doença. Os genes que codificam β,1-3- glucanase (PR-2), chalcona sintase (CHS) e lipoxigenase (LOX) foram ativados nas plantas tratadas com o biofertilizante e inoculadas em porta-enxerto suscetível, o biofertilizante foi capaz de ativar os genes que codificam quitinase (CHI) e chalcona sintase (CHS), possivelmente envolvidos com a resistência de plantas cítricas a P. parasitica.

Uma alternativa de manejo das doenças de citros causadas por Phytophthora spp. é o uso de matéria orgânica. Com o objetivo de avaliar os efeitos da incorporação de lodo de esgoto ao solo na indução de supressividade a Phytophthora nicotianae Breda de Haan (1896) em plântulas de limão cravo (Citrus lemonia (L.) Osbeck), foram realizados diversos experimentos em laboratório, casa de vegetação e campo. O aumento nas doses de lodo de esgoto, nos experimentos em laboratório, em casa de vegetação e em campo, resultou na redução do pH e aumento da condutividade elétrica do solo; aumento da atividade microbiana do solo (avaliada pela hidrólise de diacetato de fluoresceina - FDA e pela respiração microbiana); além de uma redução na recuperação de P. nicotianae, tanto do substrato e do solo como das raízes de plântulas e mudas. Em alguns experimentos, a recuperação do patógeno correlacionou-se significativa e negativamente com a atividade microbiana do solo(FDA) e com a condutividade elétrica. Um melhor desenvolvimento de plântulas e mudas foi observado com a incorporação de lodo até 20%. Esses resultados indicam um efeito supressivo do lodo de esgoto a P. nicotianae, nas condições avaliadas, explicado por fatores químicos e biológicos. Dentre os fatores químicos destacam-se o aumento da condutividade elétrica e a inibição do crescimento das colônias do patógeno em meio de cultura com extratos ácidos de lodo. Os fatores biológicos envolveram o aumento da atividade microbiana do solo e a presença de fungos (Aspergillus sp. e Trichoderma sp.) e actinomicetos antagonistas a P. nicotianae. / Soil organic matter amendments may provide an alternative for the management of citrus soil diseases caused by Phytophthora spp. The effects of incorporating residential sewage sludge into the soil in order to induce suppressiviness to Phytophthora nicotianae Breda de Haan (1896) in seedlings and plantlets of rangpuor lime (Citrus limonia (L.) Osbeck) were evaluated. For this, several experiments under laboratory, greenhouse and field conditions were conducted. In almost all experiments, while sewage sludge doses enlarged, soil pH values decreased and soil electrical conductivity increased; soil microbial activity (evaluated by the fluorescein diacetate hydrolysis - FDA and microbial respiration) increased, and P. nicotianae recovery from soil and roots tended to decreased. In some experiments, significantly and negative correlations were observed between P. nicotianae recuperation and microbial activity (FDA), and between P. nicotianae recuperation and soil electrical conductivity. Seedlings and plantlets development improved at a maximum of 20% v/v sewage sludge soil incorporation. These results suggest a sewage sludge suppressive effect on P. nicotianae, explained by chemical and biological factors, under the experimental conditions of the tests performed. Among chemical factors, the increase of the soil electrical conductivity and colony growth inhibition of P. nicotianae on culture media amended with an acid sewage sludge extract, were indicated. The biological factors involved in suppressiviness were the increase of soil microbial activity and the presence of fungi (Aspergillus sp. and Trichoderma sp.) and actinomyces antagonistic to P. nicotianae.

Laranjeiras ‘Valência’ enxertadas em citrandarins e outros híbridos de trifoliata foram plantadas em 1988, em Itirapina (SP), num Latossolo Vermelho-amarelo-textura arenosa e conduzidas sem irrigação. Os citrandarins Sunki x English (1.628), Cleópatra x Rubidoux (1.660) e Cleópatra x English (710), induziram as maiores produções de frutos nas cinco e nas treze colheitas. Os citranges ‘Troyer’ e ‘Carrizo’ foram significativamente menos produtivos que o Sunki x English (1.628) nas cinco primeiras e no total das treze colheitas. Os citrandarins Clementina x Trifoliata (1.615), Cleópatra x Swingle, seleções (715) e (1.614), Cleópatra x Rubidoux (1.600) e Cleópatra x Christian (712) induziram plantas nanicas. Sunki x English (1.628), ‘Troyer’ e ‘Carrizo’ proporcionaram as maiores plantas e lideraram a produção de frutos e de sólidos solúveis no período 2001-2003. Nenhuma planta mostrou sintomas de suscetibilidade à tristeza ou ao declínio. As plantas enxertadas no trangpur Cravo x Carrizo (717), mostraram sintoma de incompatibilidade na região de enxertia. "Seedlings" dos citrandarins Cleópatra x Swingle (1.587), Cleópatra x Trifoliata (1.574) e Cleópatra x Rubidoux (1.600) foram mais resistentes à gomose de Phytophthora parasitica que os demais porta-enxertos. / ‘Valência’ sweet orange trees budded onto citrandarins and others trifoliate hybrids rootstocks were planted in 1988 on a sandy textured Oxisol in São Paulo state, Brazil, and managed without irrigation. Tristeza and blight diseases are endemic in the area. Trees on Sunki x English (1628), Cleopatra x Rubidoux (1660) and Cleopatra x English (710), produced the highest cumulative yields in the first five and in the thirteen crops. ‘Carrizo’ and ‘Troyer’ citranges gave the lowest productions in the first five yields but were similar to Sunki x English (1628) in 13-years cumulative yields. Clementine x Trifoliate (1615), Cleopatra x Swingle (715) and (1614) selections, Cleopatra x Rubidoux (1600) and Cleopatra x Christian (712) induced dwarfed trees. Sunki x English (1628) and ‘Troyer’ and ‘Carrizo’ citranges induced the largest trees and fruit and soluble solids production by tree in the 2001-2003 period. None tree showed symptoms of tristeza or declinio. Trees on Cravo x Carrizo (717) showed bud-union-ring symptom of incompatibility. Seedlings of Cleopatra x Swingle (1587), Cleopatra x Trifoliate (1574) and Cleopatra x Rubidoux (1600) were more resistent to Phytophthora parasitica infections than the others rootstocks.

Phytophthora spp are responsible for a major disease of citrus crops. The difficulties of control and the impact caused by the use of agrochemicals have led the search for alternative control methods. Thus, this study aimed to evaluate the control of Phytophthora sp using natural products, thermotherapy, and Trichoderma spp rhizobacteria. Experiments were performed to evaluate the effect of manipueira, Ecolife ®, neem oil, eucalyptus oil, citronella oil, oil of Piper aduncum and fungicide (metalaxyl + mancozeb) at different concentrations, as well as the effect of rhizobacteria and Trichoderma spp, on the inhibition of mycelial growth of the pathogen in potato-dextrose-agar medium. Orange fruits variety pêra inoculated with a suspension of the pathogen (20 sporangia/fruit) were sprayed with oils and plant extracts (5 mL/fruit) or underwent thermotherapy in a water bath, at different temperatures, to assess the ability of the treatments decrease in the percentage of injured areas. Seeds of cravo lemon were microbiolized and sown in test tubes containing water-agar and incubated at 28 °C under constant light, to assess the ability of microorganisms to colonize the root system. In another experiment, microbiolized seeds were sown in pots and infested autoclaved substrate, kept in a greenhouse for 45 days. The incidence of the disease and the promotion of growth were measured at the end of the incubation period. In all tests were used a randomized design and means were compared by Tukey test (5%). Among the concentrations of oils, extracts and the fungicide concentrations stood out: manipueira 20%, citronella oil 1.5%, eucalyptus oil 1.0%, oil of Piper aduncum 0.5%, Ecolife ® 1.0%, neem oil 1.5% and fungicide 2.5 g. L-1 showed that the percentage of inhibition of mycelial growth of the pathogen, ranging from 73.8% to 100%. Some of rhizobacteria and Trichoderma spp tested were able to inhibit the mycelial growth of the pathogen. Treatment with oil of Piper aduncum presented the injured areas in the smaller fruits with an average of 8.57%. The disease control was obtained treating orange fruits variety pêra at 52 °C for three minutes and 50 °C, 51 ºC, 52 ºC and 53 °C for five minutes. The isolates of rhizobacteria have the ability to colonize the roots of citrus, but Trichoderma spp didn‟t show this behavior. All isolates studied had the ability to control the severity of disease caused by Phytophthora sp under controlled conditions. Alternative methods showed promise in control of Phytophthora sp. / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Alagoas / Phytophthora spp são responsáveis por uma das principais doenças da cultura dos citros. As dificuldades de controle e o impacto causado pelo uso de agroquímicos têm levado a procura de métodos alternativos de controle. Assim, este trabalho teve por objetivo avaliar o controle de Phytophthora sp, utilizando produtos naturais, termoterapia, Trichoderma spp e rizobactérias. Foram realizados experimentos visando avaliar o efeito da manipueira, Ecolife®, óleo de nim, óleo de eucalipto, óleo de citronela, óleo de pimenta-de-macaco e fungicida (metalaxyl + mancozeb) em diferentes concentrações, bem como o efeito de rizobactérias e Trichoderma spp, sobre a inibição do crescimento micelial do patógeno em meio batata-dextrose-ágar. Frutos de laranja pêra inoculados com uma suspensão do patógeno (20 esporângios/fruto) foram pulverizados com os óleos e extratos vegetais (5 mL/fruto) ou foram submetidos à termoterapia em banho-maria, sob diferentes temperaturas, para avaliar a capacidade dos tratamentos em diminuir a porcentagem das áreas lesionadas. Sementes de limão cravo foram microbiolizadas, semeadas em tubos de ensaio contendo Ágar-Água e incubados a 28°C sob luz constante, para avaliar a capacidade dos microrganismos em colonizar o sistema radicular. Em outro ensaio, as sementes microbiolizadas foram semeadas em vasos contendo substrato autoclavado e infestado, mantidos em telado por 45 dias. A incidência da doença e a promoção de crescimento foram avaliados ao final do período de incubação. Em todos os ensaios foi utilizado delineamento inteiramente casualizado e as médias comparadas pelo teste de Tukey (5%). Dentre as concentrações de óleos, extratos e do fungicida destacaram-se as concentrações: manipueira 20%, óleo de citronela 1,5%, óleo de eucalipto 1,0%, óleo de pimenta-de-macaco 0,5%, Ecolife® 1,0%, óleo de nim 1,5% e fungicida 2,5 g. L-1 que apresentaram porcentagem de inibição de crescimento micelial do patógeno, variando de 73,8% a 100%. Algumas das rizobactérias testadas e Trichoderma spp foram capazes de inibir o crescimento micelial do patógeno. O tratamento com óleo de pimenta-de-macaco foi o que apresentou as menores áreas lesionadas nos frutos com média de 8,57%. O controle da doença foi obtido tratando-se os frutos de laranja pêra a 52ºC por três minutos e 50ºC, 51ºC, 52ºC e 53ºC por cinco minutos. Os isolados de rizobactérias possuem a capacidade de colonizar as raízes de citros, mas Trichoderma spp não apresentaram esse comportamento. Todos os isolados estudados apresentaram a capacidade de controlar a severidade da doença causada por Phytophthora sp sob condições controladas. Métodos alternativos se mostraram promissores no controle de Phytophthora sp.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O cajueiro tem uma grande importÃncia sÃcio-econÃmica e cultural para a regiÃo Nordeste, por gerar emprego para os agricultores, sendo por muitas vezes a sua Ãnica fonte de renda. Assim, as pesquisas com esta fruteira tÃm aumentado bastante nos Ãltimos anos, visando primariamente, reduzir os danos fitossanitÃrios e elevar a produtividade. As doenÃas, como nas demais espÃcies cultivadas, causam significativos danos. Dentre as doenÃas do cajueiro, a resinose e a podridÃo preta das hastes, ambas causadas pelo fungo Lasiodiplodia theobromae, se destacando entre as principais doenÃas em algumas regiÃes do semi-Ãrido nordestino. PorÃm, ainda hà poucos estudos sobre a biologia, morfologia, caracterizaÃÃo genÃtica desse patÃgeno, fato que dificulta o seu manejo. Este estudo objetivou caracterizar a diversidade genÃtica e patogÃnica de uma populaÃÃo com 22 isolados de L. theobromae associada ao cajueiro, utilizando marcadores microssatÃlites e inoculaÃÃes em plantas de cajueiro. Para a caracterizaÃÃo molecular, extraiu-se o DNA de cada isolado a partir do micÃlio do fungo crescido em meio lÃquido. Cada amostra foi submetida à reaÃÃo de polimerase em cadeia (PCR) com 15 pares de iniciadores desenvolvidos para flanquear regiÃes especificas contendo sequÃncias simples repetidas (microssatÃlites) dessa espÃcie. Os produtos amplificados foram observados em gel de eletroforese corados com brometo de etÃdio, e os dados tabulados em planilha binÃria e analisados pelo mÃtodo de agrupamento nÃo balanceado baseado na mÃdia aritmÃtica (UPGMA), utilizando o programa MVSP. As similaridades genÃticas foram estimadas pelo coeficiente de Nei e Li. Os resultados indicaram uma grande variabilidade genÃtica da populaÃÃo avaliada, representada por diversos grupos de similaridade variando de 22,2% a 100%. TrÃs destes isolados apresentaram entre si, 100% de similaridade genÃtica com os marcadores testados. No entanto, eram morfologicamente diferentes e um deles era procedente de localidade diferente que os demais. Os dados mostraram que a similaridade genÃtica por si sà nÃo deve ser aplicado como Ãnico fator de diversidade entre isolados. Para se testar a patogenicidade, os isolados foram inoculados em mudas de cajueiro, analisando-se o tamanho da lesÃo e a taxa de crescimento do fungo. Os resultados mostraram nÃo haver diferenÃas estatÃsticas entre os isolados, fato que demonstra que, independente do local de origem, todos os isolados mostraram-se patogÃnicos, e a sua taxa de crescimento decresce, isto Ã, a planta deve produzir algum tipo de defesa contra o patÃgeno, o que dificulta a sua infecÃÃo. / The cashew has a major socio-economic and cultural development for the Northeast region, by generating employment for farmers and is frequently their only source of income. Thus, research on this fruit has increased greatly in recent years, aimed primarily to reduce damage and increase plant productivity. Diseases, as in other crops, cause significant damage. Among cashew diseases, gummosis and black stem rot, both caused by the fungus Lasiodiplodia theobromae, stand out among the major diseases in some regions of the semi-arid. However, there are few studies on the biology, morphology, genetic characterization of this pathogen, a fact that burden their management. This study aimed to characterize the genetic and pathogenic diversity of a population of 22 isolates of L. theobromae associated with cashew, using microsatellite markers and inoculations in cashew plants. For molecular characterization, DNA was extracted from mycelium of each isolated of the fungus grown in liquid medium. Each DNA sample was subjected to a polymerase chain reaction (PCR) with 15 pairs of primers designed to flank specific regions containing simple repeated sequences (microsatellites) in this species. The amplified products were observed in gel electrophoresis stained with ethidium bromide, and the data recorded on a binary and analyzed by grouping unbalanced based on arithmetic mean (UPGMA) using the program MVSP. Genetic similarities were estimated by the coefficient of Nei and Li The results indicated a large genetic variability of the population, represented by different groups of similarity ranging from 22.2% to 100%. Three of these isolates showed 100% genetic similarity with the markers tested. However, they were morphologically differences and one of them was originated from different location than the others. The data showed that the genetic similarity alone should not be applied as the only factor of diversity among isolates. To test the pathogenicity, each isolate was inoculated on cashew seedlings. Lesion development size and recovery of the fungus were recorded. The results showed no statistical differences between the isolates, which demonstrates that, regardless of place of origin, all isolates were pathogenic, and its growth rate decreases, i. e, the plant must produce some form of defense against pathogen, which hinders their infection.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / No Brasil, a indÃstria do caju à uma das principais fontes de renda e trabalho no campo e representa a maior parcela da economia na regiÃo nordeste, que concentra 94% da produÃÃo, destacando-se os estados do CearÃ, Piauà e Rio Grande do Norte, respectivamente. Neste contexto, para otimizar o setor produtivo, estratÃgias de melhoramento genÃtico de cultivares tÃm focado na seleÃÃo e desenvolvimento de clones anÃos. Entretanto, essa prÃtica tem contribuÃdo para diminuiÃÃo da variabilidade genÃtica e, consequentemente, para maior vulnerabilidade ao ataque de patÃgenos. A resinose, causada pelo fungo Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griff & Maubl. à considerada a principal doenÃa do cajueiro nas condiÃÃes semiÃridas. MÃtodos eficientes de controle da doenÃa ainda nÃo foram estabelecidos. Baseado na ausÃncia de dados publicados com relaÃÃo Ãs respostas bioquÃmicas e fisiolÃgicas do cajueiro infectado com L. theobromae, associado ao fato de que as plantas, para se defenderem do ataque de patÃgenos, acionam/alteram vias metabÃlicas controladas por diversas proteÃnas, o estudo da identidade dessas proteÃnas fornecem informaÃÃes sobre os mecanismos relacionados à interaÃÃo de compatibilidade/incompatibilidade entre o cajueiro e L. theobromae. Dessa forma, nesse estudo, foi realizada anÃlise proteÃmica diferencial de caules de cajueiro (Anacardium occidentale), clone BRS 226 (resistente), mantido em condiÃÃes controladas, em tempos iniciais pÃs-infecÃÃo com o L. theobromae, assim como, de plantas de cajueiro resultantes da polinizaÃÃo aberta do BRS 226, classificadas como resistentes e suscetÃveis à resinose, em condiÃÃes de campo, onde hà alta pressÃo do patÃgeno. ProteÃnas diferencialmente expressas foram identificadas por eletroforese bidimensional (2D-PAGE) combinada com espectrometria de massas ESI-Q-TOF MS/MS. Plantas de cajueiro infectadas com L. theobromae acionam respostas fisiolÃgicas associadas à reprogramaÃÃo da expressÃo de um total de 73 proteÃnas, nos cenÃrios investigados. Destas, 36 foram identificadas no clone BRS 226, artificialmente inoculado, e 37 nas plantas de cajueiro, cultivadas em condiÃÃes de campo. Portanto, um nÃmero equivalente de proteÃnas à responsivo dentro dos cenÃrios analisados e compartilham funÃÃes celulares em rotas metabÃlicas e de produÃÃo de energia, estresse/defesa, sinalizaÃÃo celular e enovelamento/metabolismo de proteÃnas. ProteÃnas responsivas a hormÃnios e envolvidas com estrutura celular foram diferencialmente expressas somente em plantas crescidas em condiÃÃo de campo, enquanto proteÃnas de transporte foram reprogramadas no clone BRS 226. Plantas de cajueiro, cultivadas em campo, e inoculadas do clone BRS 226 compartilharam a expressÃo reprogramada de 6 proteÃnas idÃnticas, dentre as quais, proteÃnas 14-3-3 e anexinas, envolvidas com a sinalizaÃÃo celular, foram influenciadas ao mesmo tempo, aparentemente, pelos estresses abiÃtico e biÃtico. A reprogramaÃÃo de funÃÃes celulares comuns somado a alteraÃÃo na expressÃo de 6 proteÃnas idÃnticas, nas condiÃÃes estudadas, mostrou sobreposiÃÃo de respostas, que parece ser indicativo da infecÃÃo pelo L. theobromae no tecido caulinar. Essas observaÃÃes revelam proteÃnas que sÃo alvos dos mecanismos celulares acionados em plantas de cajueiro desafiadas com L. theobromae e constituem uma base inicial de resultados que podem ser, futuramente, integrados a programas de melhoramento genÃtico do cajueiro, visando resistÃncia, particularmente, à resinose. / Recent studies demonstrated the efficacy of mangrove retaining nutrients and, in particular, the ability of the mineral component of the buffer in its high soil phosphorus levels. In general, the mangroves have been considered as important sinks of nutrients due to its high capacity purification of effluents. However, depending on the geochemical conditions exist, these soils can act as a source of phosphorus to other environments and / or coastal waters. Given that the geochemical behavior of phosphorus and its role in eutrophication of water bodies, is best measured by the behavior of its different fractions, this paper aims at a fractionation of the different forms of phosphorus in wetlands impacted by different effluent. The objective of this project is to study three areas in order to assess how activities impacting interfere in the process of nutrient cycling (with special emphasis on the dynamics of phosphorus forms) and, as the marsh supports the stress caused by these activities. Also, if you evaluate the potential for eutrophication of each human activities. Taking into consideration the impact that these environments suffer as a result of separate activities, were established the following areas of study: a marsh impacted by effluents from shrimp, a marsh impacted by effluents, and a control area located in a preserved area that still finds is little affected by human impacts. The samples were determined pH, Eh, salinity, grain size and the total content of C and P. In addition, extraction was performed sequentially phosphorus which allows differentiation of fractions 7: P exchangeable (NaClP), P associated with iron oxides (Fe-P); organic P (AH-P), the bound phosphorus hydroxides Al (Al-P), P associated with compounds of calcium (Ca-P); phosphorus associated refracting matter (P-RES) and unreacted phosphorus (P-NR). The results indicate that the discharge of effluents in mangrove increases the amount of phosphorus in these environments, especially in organic form, the phosphorus bound to carbonate is the major inorganic fraction in these environments.