The morphogenetic changes involved with the differentiation of a unicellular fertilized egg to an organised multicellular embryo pass through a cycle of events. Manifestation of differentiation in structural diversity starts from the physiological differences In the tissue. These differences can be demonstrated through biochemical variations. These ideas are examined In the gametophyte-embryo complex of Ginkgo biloba and Pinus resinose. It is shown that the embryo experiences different physiological conditions during the various phases of development. In addition, the potentialities of embryonic cells to grow and differentiate vary during these phases. Alternative developmental sequences can occur if the nutritional environment is altered. Radiosensitivity of the embryo as measured by abortion and abnormal differentiation is shown to be dependent on the stage of embryonic development. / Thesis / Doctor of Philosophy (PhD)

MELO, José Glauber Moreira. Análise molecular e proteômica de Lasiodiplodia theobromae associado a fruteiras tropicais. 2014. 88 f. Tese (Doutorado em agronomia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2014. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-08-29T20:06:07Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_jgmmelo.pdf: 2467689 bytes, checksum: e9a0fc6142e5ef3db09ac0252d32f4e7 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-08-31T23:39:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_jgmmelo.pdf: 2467689 bytes, checksum: e9a0fc6142e5ef3db09ac0252d32f4e7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-31T23:39:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_jgmmelo.pdf: 2467689 bytes, checksum: e9a0fc6142e5ef3db09ac0252d32f4e7 (MD5) Previous issue date: 2014 / Lasiodiplodia theobromae is a plant pathogenic fungus responsible for many diseases in various plants, is a fungus typically tropical and subtropical regions. The fungus attacks many tropical plants, among them, including mango, Spondias sp., coconut, cashew, and many others. His control is basically genetic performed by planting resistant clones, however to obtain it becomes necessary to know the pathogen characteristics. The information available on the genetic variability of L. theobromae is restricted to ensure success in any breeding program for resistance to this pathogen. Taking into account that proteins are functional products of genes, it is important to know them, to improve the understanding of the mode of action of pathogens, with this understanding, useful as a strategy to be used in plant breeding seeking genetic resistance. The objective of this study were to conduct a genetic study molecular in a population of L. theobromae and a differential proteomic analysis of the fungus among isolates, more and less aggressive, to identify proteins responsible for this aggressivity. A population consisting of 105 strains was used for molecular characterization, extracting the DNA from mycelia grown in liquid medium. Each sample was subjected to polymerase chain reaction (PCR) with 15 pairs of primers specific for the species, and a primer pair of the ITS region and other EF-1α region. The amplified products were visualisados agarose gel, stained with ethidium bromide and spreadsheet data in binary tabulated and analyzed by unbalanced grouping method based on the arithmetic mean (UPGMA) using the MVSP program. Genetic similarities were estimated by Jaccard’s coefficient. The results indicated a high genetic variability of the studied population. Since the proteomic study was conducted to assess qualitative differences, that is, the presence/absence of a specific protein in relation to the opposite group. To this end, we used two isolates of the same fungus, differing as their aggressiveness, in which one was highly aggressive, whereas the other had a low aggressiveness when inoculated seedlings of cashew. When the electrophoretic profile was analyzed, 96 were detected differentially expressed spots. By LC-ESI-Q-TOF MS / MS, 84 proteins were identified having the most diverse cellular functions. With this approach it was possible preliminary characterization of the protein profile of this fungus to give some evidence of the mechanisms involved in their aggressiveness. This is the first study seeking to know the proteins responsible for the aggressiveness L. theobromae. / Lasiodiplodia theobromae é um fungo fitopatogênico responsável por inúmeras doenças em variadas plantas, sendo um fungo tipicamente de regiões tropicais e subtropicais. O fungo atacadiversas plantas tropicais, dentre elas destacam-se a mangueira, as Spondiassp., o coqueiro, o cajueiro, entre tantas outras. Seu controle é basicamente genético realizado com o plantio de clones resistentes, entretanto, para sua obtenção torna-se necessário o conhecimento das características do patógeno. As informações disponíveissobre a variabilidade genética de L. theobromaesão insuficientes para assegurar o sucesso em qualquer programa de melhoramento genético visando à resistência a este patógeno. Levando-se em conta que as proteínas são produtos funcionais dos genes, torna-se importante conhecê-las, visando um melhor entendimento do modo de ação dos patógenos, sendo este entendimento, útil como estratégia a ser utilizada no melhoramento vegetal buscando a resistência genética. Assim, o objetivo desse estudo foi realizar um estudo genético molecular em uma população de L. theobromae e uma análise proteômica diferencial do fungo entre isolados, mais e menos agressivos, visando identificar proteínas responsáveis por essa agressividade.Uma população composta de 105 isolados foi usada na caracterização molecular, extraindo-se o DNA a partir do micélio do fungo crescido em meio líquido. Cada amostra foi submetida à reação em cadeia da polimerase (PCR) com 15 pares de primers específicos para essa espécie, além de um par de primer da região ITS e outro da região EF-1α. Os produtos amplificados foram visualisados em gel de agarose, corados com brometo de etídio e os dados tabulados em planilha binária e foram analisados pelo método de agrupamento não balanceado baseado na média aritmética (UPGMA) utilizando o programa MVSP. As similaridades genéticas foram estimadas pelo coeficiente de Jaccard. Os resultados indicaram uma grande variabilidade genética da população avaliada. Já o estudo proteômico foi realizado visando avaliar diferenças qualitativas, ou seja, a presença/ausência de uma determinada proteína, em relação ao grupo antagônico. Para tal, utilizaram-se dois isolados do mesmo fungo, diferenciando-se quanto a sua agressividade, em que um era altamente agressivo, enquanto o outro apresentava uma baixa agressividade quando inoculados em mudas de cajueiro. Quando o perfil eletroforético foi analisado, foram evidenciados 96 spots diferencialmente expressos. Através da LC-ESI-Q-TOF MS/MS, foram identificadas 84 proteínasapresentando diversas funções celulares.Com essa abordagem foi possível a caracterização preliminar do perfil proteico deste fungo, obtendo-se alguns indícios dos mecanismos envolvidos na sua agressividade. Este é o primeiro estudo buscando conhecer as proteínas responsáveis pela agressividade de L. theobromae.

FARIAS, F. C. Detecção da diversidade e associação de Lasiodiplodia theobromae com o cajueiro utilizando marcadores microssatélites. 2008. 42 f. Dissertação (Mestrado em Agronomia/Fitotecnia) - Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2008. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-07-02T19:50:47Z No. of bitstreams: 1 2008_dis_fcfarias.pdf: 910648 bytes, checksum: 11c32ed2ac28af3a0d3eb679e579bd04 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-07-02T20:07:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_dis_fcfarias.pdf: 910648 bytes, checksum: 11c32ed2ac28af3a0d3eb679e579bd04 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-02T20:07:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_dis_fcfarias.pdf: 910648 bytes, checksum: 11c32ed2ac28af3a0d3eb679e579bd04 (MD5) Previous issue date: 2008 / The cashew crop is one of the most important agribusiness activity in northeastern Brazil, mainly due to its social and economic impact in that region. Nevertheless, severe outbreaks of gummosis and black branch dieback, both caused by the fungus Lasiodiplodia theobromae have imposed great losses under semi-arid conditions. Presently, these diseases are the most important ones over semi-arid conditions in Northeast Region. However, the limited amount of basic knowledge about population biology, genetic structure and pathogen, host and environment interaction are likely to hinder the efforts to manage this pathogen. This study was developed in order to establish a L. theobromae population associated with cashew plant from different ecological regions in the northeastern Brazil, to determine the survival endophytic ability of this fungus in cashew tissues and to characterize this population by using microsatellite markers. Initially, samples of cashew stems were gathered from three natural ecosystems in Brazil in order to isolate L. theobromae. A population of 41 isolates associated with cashew was obtained. Bioassays aiming to determine the surviving ability of this fungus in non infected tissues close to gummosis lesions were conducted using sampled stems. A subpopulation of 15 isolates of L. theobromae was used for DNA extraction followed by polimerase chain reaction (PCR) using 15 oligonucleotides primers designed to amplify microsatellites regions. PCR products were observed on agarose gel in ethidium bromide electrophoresis and analyzed by the unweighted pair-group method with arithmetic mean (UPGMA) by the Nei and Li similarity coefficient. L. theobromae was successfully isolated from cashew tissues as far as 90 cm from the border of the gummosis lesion in both up and down directions. This result confirms the endophytic behavior of this fungus in cashew plant. A great genetic variability of L. theobromae population was observed as determined by 16 similarities groups varying from 91% to 5%. None isolate achieved 100% similarity. The greatest similarity was found between pathogenic and endophytic isolates. / A cultura do cajueiro representa uma das mais importantes atividades agroindustriais do Nordeste do Brasil, sobretudo pelo seu caráter social e econômico para esta região. Entretanto, a ocorrência epifítica de doenças como a resinose e a podridão-preta-da-haste, ambas causadas pelo fungo Lasiodiplodia theobromae, têm produzido severas perdas principalmente nas regiões semi-áridas. Essas já assumem a posição de principais doenças em algumas regiões do semi-árido nordestino. Entretanto, os conhecimentos básicos sobre a biologia populacional, constituição genética e interação do patógeno com as plantas hospedeiras, por exemplo, são reduzidos e superficiais, não permitindo significativos avanços no manejo dessas enfermidades. Este estudo teve como objetivos estabelecer uma população de isolados L. theobromae associados ao cajueiro em diferentes micro-regiões do nordeste brasileiro, determinar a capacidade deste fungo sobreviver endofiticamente em tecidos de cajueiro e caracterizar geneticamente essa população usando marcadores microssatélites. Inicialmente, foram coletadas amostras de caules de cajueiro em três ecossistemas naturais brasileiros visando isolar o patógeno. Foi estabelecida uma população de 41 isolados de L. theobromae associados ao cajueiro. Bioensaios visando a determinação da sobrevivência do fungo em tecidos não infectados, mas próximos às lesões foram desenvolvidos a partir de amostras de caules com resinose. Uma sub-população de 15 isolados de L. theobromae foi usada na extração de DNA e posterior submissão a reações de polimerase (PCR) em cadeia usando 15 primers flanqueadores de regiões contendo seqüências simples repetidas (microssatélites). Os produtos amplificados do PCR foram observados em gel de eletroforese corados com brometo de etídio e analisados pelo método de agrupamento não balanceado baseado na média aritmética (UPGMA), estimando-se as similaridades genéticas pelo coeficiente de Nei e Li. L. theobromae foi isolado de tecidos do caule do cajueiro até 90 cm de distância da extremidade da lesão característica de resinose nos dois sentidos (ascendente e descendente) em relação à lesão, confirmando o comportamento endofítico desse fungo em cajueiro. Uma grande variabilidade genética da população avaliada, representada por 16 grupos de similaridade variando de 91% a 5%, foi observada. Nenhum isolado foi igual (100% similaridade). As maiores similaridades (91%) foram observadas entre isolados comprovadamente patogênicos e supostamente endofíticos.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / Lasiodiplodia theobromae à um fungo fitopatogÃnico responsÃvel por inÃmeras doenÃas em variadas plantas, sendo um fungo tipicamente de regiÃes tropicais e subtropicais. O fungo atacadiversas plantas tropicais, dentre elas destacam-se a mangueira, as Spondiassp., o coqueiro, o cajueiro, entre tantas outras. Seu controle à basicamente genÃtico realizado com o plantio de clones resistentes, entretanto, para sua obtenÃÃo torna-se necessÃrio o conhecimento das caracterÃsticas do patÃgeno. As informaÃÃes disponÃveissobre a variabilidade genÃtica de L. theobromaesÃo insuficientes para assegurar o sucesso em qualquer programa de melhoramento genÃtico visando à resistÃncia a este patÃgeno. Levando-se em conta que as proteÃnas sÃo produtos funcionais dos genes, torna-se importante conhecÃ-las, visando um melhor entendimento do modo de aÃÃo dos patÃgenos, sendo este entendimento, Ãtil como estratÃgia a ser utilizada no melhoramento vegetal buscando a resistÃncia genÃtica. Assim, o objetivo desse estudo foi realizar um estudo genÃtico molecular em uma populaÃÃo de L. theobromae e uma anÃlise proteÃmica diferencial do fungo entre isolados, mais e menos agressivos, visando identificar proteÃnas responsÃveis por essa agressividade.Uma populaÃÃo composta de 105 isolados foi usada na caracterizaÃÃo molecular, extraindo-se o DNA a partir do micÃlio do fungo crescido em meio lÃquido. Cada amostra foi submetida à reaÃÃo em cadeia da polimerase (PCR) com 15 pares de primers especÃficos para essa espÃcie, alÃm de um par de primer da regiÃo ITS e outro da regiÃo EF-1α. Os produtos amplificados foram visualisados em gel de agarose, corados com brometo de etÃdio e os dados tabulados em planilha binÃria e foram analisados pelo mÃtodo de agrupamento nÃo balanceado baseado na mÃdia aritmÃtica (UPGMA) utilizando o programa MVSP. As similaridades genÃticas foram estimadas pelo coeficiente de Jaccard. Os resultados indicaram uma grande variabilidade genÃtica da populaÃÃo avaliada. Jà o estudo proteÃmico foi realizado visando avaliar diferenÃas qualitativas, ou seja, a presenÃa/ausÃncia de uma determinada proteÃna, em relaÃÃo ao grupo antagÃnico. Para tal, utilizaram-se dois isolados do mesmo fungo, diferenciando-se quanto a sua agressividade, em que um era altamente agressivo, enquanto o outro apresentava uma baixa agressividade quando inoculados em mudas de cajueiro. Quando o perfil eletroforÃtico foi analisado, foram evidenciados 96 spots diferencialmente expressos. AtravÃs da LC-ESI-Q-TOF MS/MS, foram identificadas 84 proteÃnasapresentando diversas funÃÃes celulares.Com essa abordagem foi possÃvel a caracterizaÃÃo preliminar do perfil proteico deste fungo, obtendo-se alguns indÃcios dos mecanismos envolvidos na sua agressividade. Este à o primeiro estudo buscando conhecer as proteÃnas responsÃveis pela agressividade de L. theobromae. / Lasiodiplodia theobromae is a plant pathogenic fungus responsible for many diseases in various plants, is a fungus typically tropical and subtropical regions. The fungus attacks many tropical plants, among them, including mango, Spondias sp., coconut, cashew, and many others. His control is basically genetic performed by planting resistant clones, however to obtain it becomes necessary to know the pathogen characteristics. The information available on the genetic variability of L. theobromae is restricted to ensure success in any breeding program for resistance to this pathogen. Taking into account that proteins are functional products of genes, it is important to know them, to improve the understanding of the mode of action of pathogens, with this understanding, useful as a strategy to be used in plant breeding seeking genetic resistance. The objective of this study were to conduct a genetic study molecular in a population of L. theobromae and a differential proteomic analysis of the fungus among isolates, more and less aggressive, to identify proteins responsible for this aggressivity. A population consisting of 105 strains was used for molecular characterization, extracting the DNA from mycelia grown in liquid medium. Each sample was subjected to polymerase chain reaction (PCR) with 15 pairs of primers specific for the species, and a primer pair of the ITS region and other EF-1α region. The amplified products were visualisados agarose gel, stained with ethidium bromide and spreadsheet data in binary tabulated and analyzed by unbalanced grouping method based on the arithmetic mean (UPGMA) using the MVSP program. Genetic similarities were estimated by Jaccardâs coefficient. The results indicated a high genetic variability of the studied population. Since the proteomic study was conducted to assess qualitative differences, that is, the presence/absence of a specific protein in relation to the opposite group. To this end, we used two isolates of the same fungus, differing as their aggressiveness, in which one was highly aggressive, whereas the other had a low aggressiveness when inoculated seedlings of cashew. When the electrophoretic profile was analyzed, 96 were detected differentially expressed spots. By LC-ESI-Q-TOF MS / MS, 84 proteins were identified having the most diverse cellular functions. With this approach it was possible preliminary characterization of the protein profile of this fungus to give some evidence of the mechanisms involved in their aggressiveness. This is the first study seeking to know the proteins responsible for the aggressiveness L. theobromae.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / The cashew crop is one of the most important agribusiness activity in northeastern Brazil, mainly due to its social and economic impact in that region. Nevertheless, severe outbreaks of gummosis and black branch dieback, both caused by the fungus Lasiodiplodia theobromae have imposed great losses under semi-arid conditions. Presently, these diseases are the most important ones over semi-arid conditions in Northeast Region. However, the limited amount of basic knowledge about population biology, genetic structure and pathogen, host and environment interaction are likely to hinder the efforts to manage this pathogen. This study was developed in order to establish a L. theobromae population associated with cashew plant from different ecological regions in the northeastern Brazil, to determine the survival endophytic ability of this fungus in cashew tissues and to characterize this population by using microsatellite markers. Initially, samples of cashew stems were gathered from three natural ecosystems in Brazil in order to isolate L. theobromae. A population of 41 isolates associated with cashew was obtained. Bioassays aiming to determine the surviving ability of this fungus in non infected tissues close to gummosis lesions were conducted using sampled stems. A subpopulation of 15 isolates of L. theobromae was used for DNA extraction followed by polimerase chain reaction (PCR) using 15 oligonucleotides primers designed to amplify microsatellites regions. PCR products were observed on agarose gel in ethidium bromide electrophoresis and analyzed by the unweighted pair-group method with arithmetic mean (UPGMA) by the Nei and Li similarity coefficient. L. theobromae was successfully isolated from cashew tissues as far as 90 cm from the border of the gummosis lesion in both up and down directions. This result confirms the endophytic behavior of this fungus in cashew plant. A great genetic variability of L. theobromae population was observed as determined by 16 similarities groups varying from 91% to 5%. None isolate achieved 100% similarity. The greatest similarity was found between pathogenic and endophytic isolates. / A cultura do cajueiro representa uma das mais importantes atividades agroindustriais do Nordeste do Brasil, sobretudo pelo seu carÃter social e econÃmico para esta regiÃo. Entretanto, a ocorrÃncia epifÃtica de doenÃas como a resinose e a podridÃo-preta-da-haste, ambas causadas pelo fungo Lasiodiplodia theobromae, tÃm produzido severas perdas principalmente nas regiÃes semi-Ãridas. Essas jà assumem a posiÃÃo de principais doenÃas em algumas regiÃes do semi-Ãrido nordestino. Entretanto, os conhecimentos bÃsicos sobre a biologia populacional, constituiÃÃo genÃtica e interaÃÃo do patÃgeno com as plantas hospedeiras, por exemplo, sÃo reduzidos e superficiais, nÃo permitindo significativos avanÃos no manejo dessas enfermidades. Este estudo teve como objetivos estabelecer uma populaÃÃo de isolados L. theobromae associados ao cajueiro em diferentes micro-regiÃes do nordeste brasileiro, determinar a capacidade deste fungo sobreviver endofiticamente em tecidos de cajueiro e caracterizar geneticamente essa populaÃÃo usando marcadores microssatÃlites. Inicialmente, foram coletadas amostras de caules de cajueiro em trÃs ecossistemas naturais brasileiros visando isolar o patÃgeno. Foi estabelecida uma populaÃÃo de 41 isolados de L. theobromae associados ao cajueiro. Bioensaios visando a determinaÃÃo da sobrevivÃncia do fungo em tecidos nÃo infectados, mas prÃximos Ãs lesÃes foram desenvolvidos a partir de amostras de caules com resinose. Uma sub-populaÃÃo de 15 isolados de L. theobromae foi usada na extraÃÃo de DNA e posterior submissÃo a reaÃÃes de polimerase (PCR) em cadeia usando 15 primers flanqueadores de regiÃes contendo seqÃÃncias simples repetidas (microssatÃlites). Os produtos amplificados do PCR foram observados em gel de eletroforese corados com brometo de etÃdio e analisados pelo mÃtodo de agrupamento nÃo balanceado baseado na mÃdia aritmÃtica (UPGMA), estimando-se as similaridades genÃticas pelo coeficiente de Nei e Li. L. theobromae foi isolado de tecidos do caule do cajueiro atà 90 cm de distÃncia da extremidade da lesÃo caracterÃstica de resinose nos dois sentidos (ascendente e descendente) em relaÃÃo à lesÃo, confirmando o comportamento endofÃtico desse fungo em cajueiro. Uma grande variabilidade genÃtica da populaÃÃo avaliada, representada por 16 grupos de similaridade variando de 91% a 5%, foi observada. Nenhum isolado foi igual (100% similaridade). As maiores similaridades (91%) foram observadas entre isolados comprovadamente patogÃnicos e supostamente endofÃticos.

MELO, J. G. M. Diversidade genética e patogenicidade de Lasiodiplodia theobromae associado ao cajueiro (Anacardium occidentale). 2010. 60 f. Dissertação (Mestrado em Agronomia/Fitotecnia) - Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2010. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-07-18T19:23:53Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_jgmmelo.pdf: 3168052 bytes, checksum: 25bb3844a3f6ad3a76bec38956b5b761 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-07-21T18:39:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_jgmmelo.pdf: 3168052 bytes, checksum: 25bb3844a3f6ad3a76bec38956b5b761 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-21T18:39:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_jgmmelo.pdf: 3168052 bytes, checksum: 25bb3844a3f6ad3a76bec38956b5b761 (MD5) Previous issue date: 2010 / The cashew has a major socio-economic and cultural development for the Northeast region, by generating employment for farmers and is frequently their only source of income. Thus, research on this fruit has increased greatly in recent years, aimed primarily to reduce damage and increase plant productivity. Diseases, as in other crops, cause significant damage. Among cashew diseases, gummosis and black stem rot, both caused by the fungus Lasiodiplodia theobromae, stand out among the major diseases in some regions of the semi-arid. However, there are few studies on the biology, morphology, genetic characterization of this pathogen, a fact that burden their management. This study aimed to characterize the genetic and pathogenic diversity of a population of 22 isolates of L. theobromae associated with cashew, using microsatellite markers and inoculations in cashew plants. For molecular characterization, DNA was extracted from mycelium of each isolated of the fungus grown in liquid medium. Each DNA sample was subjected to a polymerase chain reaction (PCR) with 15 pairs of primers designed to flank specific regions containing simple repeated sequences (microsatellites) in this species. The amplified products were observed in gel electrophoresis stained with ethidium bromide, and the data recorded on a binary and analyzed by grouping unbalanced based on arithmetic mean (UPGMA) using the program MVSP. Genetic similarities were estimated by the coefficient of Nei and Li The results indicated a large genetic variability of the population, represented by different groups of similarity ranging from 22.2% to 100%. Three of these isolates showed 100% genetic similarity with the markers tested. However, they were morphologically differences and one of them was originated from different location than the others. The data showed that the genetic similarity alone should not be applied as the only factor of diversity among isolates. To test the pathogenicity, each isolate was inoculated on cashew seedlings. Lesion development size and recovery of the fungus were recorded. The results showed no statistical differences between the isolates, which demonstrates that, regardless of place of origin, all isolates were pathogenic, and its growth rate decreases, i. e, the plant must produce some form of defense against pathogen, which hinders their infection. / O cajueiro tem uma grande importância sócio-econômica e cultural para a região Nordeste, por gerar emprego para os agricultores, sendo por muitas vezes a sua única fonte de renda. Assim, as pesquisas com esta fruteira têm aumentado bastante nos últimos anos, visando primariamente, reduzir os danos fitossanitários e elevar a produtividade. As doenças, como nas demais espécies cultivadas, causam significativos danos. Dentre as doenças do cajueiro, a resinose e a podridão preta das hastes, ambas causadas pelo fungo Lasiodiplodia theobromae, se destacando entre as principais doenças em algumas regiões do semi-árido nordestino. Porém, ainda há poucos estudos sobre a biologia, morfologia, caracterização genética desse patógeno, fato que dificulta o seu manejo. Este estudo objetivou caracterizar a diversidade genética e patogênica de uma população com 22 isolados de L. theobromae associada ao cajueiro, utilizando marcadores microssatélites e inoculações em plantas de cajueiro. Para a caracterização molecular, extraiu-se o DNA de cada isolado a partir do micélio do fungo crescido em meio líquido. Cada amostra foi submetida à reação de polimerase em cadeia (PCR) com 15 pares de iniciadores desenvolvidos para flanquear regiões especificas contendo sequências simples repetidas (microssatélites) dessa espécie. Os produtos amplificados foram observados em gel de eletroforese corados com brometo de etídio, e os dados tabulados em planilha binária e analisados pelo método de agrupamento não balanceado baseado na média aritmética (UPGMA), utilizando o programa MVSP. As similaridades genéticas foram estimadas pelo coeficiente de Nei e Li. Os resultados indicaram uma grande variabilidade genética da população avaliada, representada por diversos grupos de similaridade variando de 22,2% a 100%. Três destes isolados apresentaram entre si, 100% de similaridade genética com os marcadores testados. No entanto, eram morfologicamente diferentes e um deles era procedente de localidade diferente que os demais. Os dados mostraram que a similaridade genética por si só não deve ser aplicado como único fator de diversidade entre isolados. Para se testar a patogenicidade, os isolados foram inoculados em mudas de cajueiro, analisando-se o tamanho da lesão e a taxa de crescimento do fungo. Os resultados mostraram não haver diferenças estatísticas entre os isolados, fato que demonstra que, independente do local de origem, todos os isolados mostraram-se patogênicos, e a sua taxa de crescimento decresce, isto é, a planta deve produzir algum tipo de defesa contra o patógeno, o que dificulta a sua infecção.

LIMA, J. S. Diversidade cultural, morfológica e patogênica de isolados de Lasiodiplodia theobromae associados a frutíferas tropicais. 2011. 57 f. Dissertação (Mestrado em Agronomia/Fitotecnia) - Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2011. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-07-17T20:42:49Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_jslima.pdf: 799039 bytes, checksum: f02184b16bd28dc37fcf64844fac7c7b (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-07-21T18:41:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_jslima.pdf: 799039 bytes, checksum: f02184b16bd28dc37fcf64844fac7c7b (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-21T18:41:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_jslima.pdf: 799039 bytes, checksum: f02184b16bd28dc37fcf64844fac7c7b (MD5) Previous issue date: 2011 / Lasiodiplodia theobromae is an ubiquitous, polyphagous and opportunistic fungus with a reduced pathogenic ability. Nevertheless, it may infect several plant species over tropical and temperate regions, causing many different kinds of symptoms. The increasingly expansion of diseases caused by L. theobromae in tropical fruit plants has been imposing severe losses both at orchard level and in post-harvest at market, threaten the fruit crop industry in Northeast Region of Brazil. Therefore there is an urgent need for research pursuing basic knowledge on population biology of the fungus and host-pathogen interactions. This study aimed to characterize a L. theobromae population which has been associated to tropical plant species growing under different ecosystems in northeastern Brazil. Colony growth in culture, color and size of conidia and ability to cause disease upon inoculation on cashew nut (Anacardium occidentale), soursop (Annona muricata), yellow mombin (Spondias mombin) and Brazil plum (Spondias tuberosa) were evaluated. He study was carried out at Plant Pathology Lab and screenhouse of Embrapa Agroindustria Tropical in Fortaleza, Ceará State. Results showed a high diversity of morphology and hyphal growth among fungus isolates. Also, a very high variability on disease expression upon inoculation into four plant species was observed. However, it was found a lack of specificity of isolates as to infect cashew plants, since all isolates were able to infect cashew with similar high aggressiveness, which demonstrated a high degree of susceptibility of cashew clone used (CCP 76). Similar results were found also for soursop plants as host. Brazil plum showed a very high resistance to all isolates. The data points out for the existence of morphological and pathogenic interactions within L. theobromae population studied. According with the results, altitude and region of isolate origin has no effect on the studied features. / Lasiodiplodia theobromae é um fungo cosmopolita, polífago e oportunista, com reduzida especialização patogênica, que infecta espécies de plantas em regiões tropicais e temperadas, causando os mais variados sintomas. A crescente expansão das doenças causadas por L. theobromae em frutíferas tropicais vem causando inestimáveis perdas, tanto no sistema produtivo como em pós-colheita, representando uma ameaça à fruticultura no Nordeste. Daí a necessidade de conhecimentos básicos sobre a biologia populacional e a interação do patógeno com as plantas hospedeiras. Este estudo teve como objetivo caracterizar isolados de L. theobromae associados a frutíferas tropicais de diferentes regiões, avaliando o aspecto cultural, morfológico e patogênico. Foram avaliados o crescimento micelial, coloração da colônia, dimensões dos conídios e patogenicidade dos isolados em mudas de cajazeira, cajueiro, gravioleira e umbuzeiro. O trabalho foi realizado na Casa de Vegetação e no Laboratório de Fitopatologia da Embrapa Agroindústria Tropical. Os dados de caracterização morfocultural mostraram haver alta diversidade na população do patógeno. As inoculações realizadas nas quatro diferentes espécies hospedeiras apontaram alta variabilidade patogênica entre os isolados do fungo. Em mudas de cajueiro CCP 76 não foi possível observar especificidade patogênica, pois todos os isolados apresentaram similar nível de agressividade, demonstrando a suscetibilidade deste clone ao patógeno, suscetibilidade essa, também observada em gravioleira. O umbuzeiro foi a espécie que apresentou maior resistência ao fungo. Os dados mostraram que existe interação entre as características morfoculturais e a agressividade dos isolados de L. theobromae. De acordo com os resultados, a altitude dos locais de origem dos isolados não influencia em suas características morfoculturais e patogênicas.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O cajueiro tem uma grande importÃncia sÃcio-econÃmica e cultural para a regiÃo Nordeste, por gerar emprego para os agricultores, sendo por muitas vezes a sua Ãnica fonte de renda. Assim, as pesquisas com esta fruteira tÃm aumentado bastante nos Ãltimos anos, visando primariamente, reduzir os danos fitossanitÃrios e elevar a produtividade. As doenÃas, como nas demais espÃcies cultivadas, causam significativos danos. Dentre as doenÃas do cajueiro, a resinose e a podridÃo preta das hastes, ambas causadas pelo fungo Lasiodiplodia theobromae, se destacando entre as principais doenÃas em algumas regiÃes do semi-Ãrido nordestino. PorÃm, ainda hà poucos estudos sobre a biologia, morfologia, caracterizaÃÃo genÃtica desse patÃgeno, fato que dificulta o seu manejo. Este estudo objetivou caracterizar a diversidade genÃtica e patogÃnica de uma populaÃÃo com 22 isolados de L. theobromae associada ao cajueiro, utilizando marcadores microssatÃlites e inoculaÃÃes em plantas de cajueiro. Para a caracterizaÃÃo molecular, extraiu-se o DNA de cada isolado a partir do micÃlio do fungo crescido em meio lÃquido. Cada amostra foi submetida à reaÃÃo de polimerase em cadeia (PCR) com 15 pares de iniciadores desenvolvidos para flanquear regiÃes especificas contendo sequÃncias simples repetidas (microssatÃlites) dessa espÃcie. Os produtos amplificados foram observados em gel de eletroforese corados com brometo de etÃdio, e os dados tabulados em planilha binÃria e analisados pelo mÃtodo de agrupamento nÃo balanceado baseado na mÃdia aritmÃtica (UPGMA), utilizando o programa MVSP. As similaridades genÃticas foram estimadas pelo coeficiente de Nei e Li. Os resultados indicaram uma grande variabilidade genÃtica da populaÃÃo avaliada, representada por diversos grupos de similaridade variando de 22,2% a 100%. TrÃs destes isolados apresentaram entre si, 100% de similaridade genÃtica com os marcadores testados. No entanto, eram morfologicamente diferentes e um deles era procedente de localidade diferente que os demais. Os dados mostraram que a similaridade genÃtica por si sà nÃo deve ser aplicado como Ãnico fator de diversidade entre isolados. Para se testar a patogenicidade, os isolados foram inoculados em mudas de cajueiro, analisando-se o tamanho da lesÃo e a taxa de crescimento do fungo. Os resultados mostraram nÃo haver diferenÃas estatÃsticas entre os isolados, fato que demonstra que, independente do local de origem, todos os isolados mostraram-se patogÃnicos, e a sua taxa de crescimento decresce, isto Ã, a planta deve produzir algum tipo de defesa contra o patÃgeno, o que dificulta a sua infecÃÃo. / The cashew has a major socio-economic and cultural development for the Northeast region, by generating employment for farmers and is frequently their only source of income. Thus, research on this fruit has increased greatly in recent years, aimed primarily to reduce damage and increase plant productivity. Diseases, as in other crops, cause significant damage. Among cashew diseases, gummosis and black stem rot, both caused by the fungus Lasiodiplodia theobromae, stand out among the major diseases in some regions of the semi-arid. However, there are few studies on the biology, morphology, genetic characterization of this pathogen, a fact that burden their management. This study aimed to characterize the genetic and pathogenic diversity of a population of 22 isolates of L. theobromae associated with cashew, using microsatellite markers and inoculations in cashew plants. For molecular characterization, DNA was extracted from mycelium of each isolated of the fungus grown in liquid medium. Each DNA sample was subjected to a polymerase chain reaction (PCR) with 15 pairs of primers designed to flank specific regions containing simple repeated sequences (microsatellites) in this species. The amplified products were observed in gel electrophoresis stained with ethidium bromide, and the data recorded on a binary and analyzed by grouping unbalanced based on arithmetic mean (UPGMA) using the program MVSP. Genetic similarities were estimated by the coefficient of Nei and Li The results indicated a large genetic variability of the population, represented by different groups of similarity ranging from 22.2% to 100%. Three of these isolates showed 100% genetic similarity with the markers tested. However, they were morphologically differences and one of them was originated from different location than the others. The data showed that the genetic similarity alone should not be applied as the only factor of diversity among isolates. To test the pathogenicity, each isolate was inoculated on cashew seedlings. Lesion development size and recovery of the fungus were recorded. The results showed no statistical differences between the isolates, which demonstrates that, regardless of place of origin, all isolates were pathogenic, and its growth rate decreases, i. e, the plant must produce some form of defense against pathogen, which hinders their infection.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / No Brasil, a indÃstria do caju à uma das principais fontes de renda e trabalho no campo e representa a maior parcela da economia na regiÃo nordeste, que concentra 94% da produÃÃo, destacando-se os estados do CearÃ, Piauà e Rio Grande do Norte, respectivamente. Neste contexto, para otimizar o setor produtivo, estratÃgias de melhoramento genÃtico de cultivares tÃm focado na seleÃÃo e desenvolvimento de clones anÃos. Entretanto, essa prÃtica tem contribuÃdo para diminuiÃÃo da variabilidade genÃtica e, consequentemente, para maior vulnerabilidade ao ataque de patÃgenos. A resinose, causada pelo fungo Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griff & Maubl. à considerada a principal doenÃa do cajueiro nas condiÃÃes semiÃridas. MÃtodos eficientes de controle da doenÃa ainda nÃo foram estabelecidos. Baseado na ausÃncia de dados publicados com relaÃÃo Ãs respostas bioquÃmicas e fisiolÃgicas do cajueiro infectado com L. theobromae, associado ao fato de que as plantas, para se defenderem do ataque de patÃgenos, acionam/alteram vias metabÃlicas controladas por diversas proteÃnas, o estudo da identidade dessas proteÃnas fornecem informaÃÃes sobre os mecanismos relacionados à interaÃÃo de compatibilidade/incompatibilidade entre o cajueiro e L. theobromae. Dessa forma, nesse estudo, foi realizada anÃlise proteÃmica diferencial de caules de cajueiro (Anacardium occidentale), clone BRS 226 (resistente), mantido em condiÃÃes controladas, em tempos iniciais pÃs-infecÃÃo com o L. theobromae, assim como, de plantas de cajueiro resultantes da polinizaÃÃo aberta do BRS 226, classificadas como resistentes e suscetÃveis à resinose, em condiÃÃes de campo, onde hà alta pressÃo do patÃgeno. ProteÃnas diferencialmente expressas foram identificadas por eletroforese bidimensional (2D-PAGE) combinada com espectrometria de massas ESI-Q-TOF MS/MS. Plantas de cajueiro infectadas com L. theobromae acionam respostas fisiolÃgicas associadas à reprogramaÃÃo da expressÃo de um total de 73 proteÃnas, nos cenÃrios investigados. Destas, 36 foram identificadas no clone BRS 226, artificialmente inoculado, e 37 nas plantas de cajueiro, cultivadas em condiÃÃes de campo. Portanto, um nÃmero equivalente de proteÃnas à responsivo dentro dos cenÃrios analisados e compartilham funÃÃes celulares em rotas metabÃlicas e de produÃÃo de energia, estresse/defesa, sinalizaÃÃo celular e enovelamento/metabolismo de proteÃnas. ProteÃnas responsivas a hormÃnios e envolvidas com estrutura celular foram diferencialmente expressas somente em plantas crescidas em condiÃÃo de campo, enquanto proteÃnas de transporte foram reprogramadas no clone BRS 226. Plantas de cajueiro, cultivadas em campo, e inoculadas do clone BRS 226 compartilharam a expressÃo reprogramada de 6 proteÃnas idÃnticas, dentre as quais, proteÃnas 14-3-3 e anexinas, envolvidas com a sinalizaÃÃo celular, foram influenciadas ao mesmo tempo, aparentemente, pelos estresses abiÃtico e biÃtico. A reprogramaÃÃo de funÃÃes celulares comuns somado a alteraÃÃo na expressÃo de 6 proteÃnas idÃnticas, nas condiÃÃes estudadas, mostrou sobreposiÃÃo de respostas, que parece ser indicativo da infecÃÃo pelo L. theobromae no tecido caulinar. Essas observaÃÃes revelam proteÃnas que sÃo alvos dos mecanismos celulares acionados em plantas de cajueiro desafiadas com L. theobromae e constituem uma base inicial de resultados que podem ser, futuramente, integrados a programas de melhoramento genÃtico do cajueiro, visando resistÃncia, particularmente, à resinose. / Recent studies demonstrated the efficacy of mangrove retaining nutrients and, in particular, the ability of the mineral component of the buffer in its high soil phosphorus levels. In general, the mangroves have been considered as important sinks of nutrients due to its high capacity purification of effluents. However, depending on the geochemical conditions exist, these soils can act as a source of phosphorus to other environments and / or coastal waters. Given that the geochemical behavior of phosphorus and its role in eutrophication of water bodies, is best measured by the behavior of its different fractions, this paper aims at a fractionation of the different forms of phosphorus in wetlands impacted by different effluent. The objective of this project is to study three areas in order to assess how activities impacting interfere in the process of nutrient cycling (with special emphasis on the dynamics of phosphorus forms) and, as the marsh supports the stress caused by these activities. Also, if you evaluate the potential for eutrophication of each human activities. Taking into consideration the impact that these environments suffer as a result of separate activities, were established the following areas of study: a marsh impacted by effluents from shrimp, a marsh impacted by effluents, and a control area located in a preserved area that still finds is little affected by human impacts. The samples were determined pH, Eh, salinity, grain size and the total content of C and P. In addition, extraction was performed sequentially phosphorus which allows differentiation of fractions 7: P exchangeable (NaClP), P associated with iron oxides (Fe-P); organic P (AH-P), the bound phosphorus hydroxides Al (Al-P), P associated with compounds of calcium (Ca-P); phosphorus associated refracting matter (P-RES) and unreacted phosphorus (P-NR). The results indicate that the discharge of effluents in mangrove increases the amount of phosphorus in these environments, especially in organic form, the phosphorus bound to carbonate is the major inorganic fraction in these environments.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / Lasiodiplodia theobromae à um fungo cosmopolita, polÃfago e oportunista, com reduzida especializaÃÃo patogÃnica, que infecta espÃcies de plantas em regiÃes tropicais e temperadas, causando os mais variados sintomas. A crescente expansÃo das doenÃas causadas por L. theobromae em frutÃferas tropicais vem causando inestimÃveis perdas, tanto no sistema produtivo como em pÃs-colheita, representando uma ameaÃa à fruticultura no Nordeste. Daà a necessidade de conhecimentos bÃsicos sobre a biologia populacional e a interaÃÃo do patÃgeno com as plantas hospedeiras. Este estudo teve como objetivo caracterizar isolados de L. theobromae associados a frutÃferas tropicais de diferentes regiÃes, avaliando o aspecto cultural, morfolÃgico e patogÃnico. Foram avaliados o crescimento micelial, coloraÃÃo da colÃnia, dimensÃes dos conÃdios e patogenicidade dos isolados em mudas de cajazeira, cajueiro, gravioleira e umbuzeiro. O trabalho foi realizado na Casa de VegetaÃÃo e no LaboratÃrio de Fitopatologia da Embrapa AgroindÃstria Tropical. Os dados de caracterizaÃÃo morfocultural mostraram haver alta diversidade na populaÃÃo do patÃgeno. As inoculaÃÃes realizadas nas quatro diferentes espÃcies hospedeiras apontaram alta variabilidade patogÃnica entre os isolados do fungo. Em mudas de cajueiro CCP 76 nÃo foi possÃvel observar especificidade patogÃnica, pois todos os isolados apresentaram similar nÃvel de agressividade, demonstrando a suscetibilidade deste clone ao patÃgeno, suscetibilidade essa, tambÃm observada em gravioleira. O umbuzeiro foi a espÃcie que apresentou maior resistÃncia ao fungo. Os dados mostraram que existe interaÃÃo entre as caracterÃsticas morfoculturais e a agressividade dos isolados de L. theobromae. De acordo com os resultados, a altitude dos locais de origem dos isolados nÃo influencia em suas caracterÃsticas morfoculturais e patogÃnicas. / Lasiodiplodia theobromae is an ubiquitous, polyphagous and opportunistic fungus with a reduced pathogenic ability. Nevertheless, it may infect several plant species over tropical and temperate regions, causing many different kinds of symptoms. The increasingly expansion of diseases caused by L. theobromae in tropical fruit plants has been imposing severe losses both at orchard level and in post-harvest at market, threaten the fruit crop industry in Northeast Region of Brazil. Therefore there is an urgent need for research pursuing basic knowledge on population biology of the fungus and host-pathogen interactions. This study aimed to characterize a L. theobromae population which has been associated to tropical plant species growing under different ecosystems in northeastern Brazil. Colony growth in culture, color and size of conidia and ability to cause disease upon inoculation on cashew nut (Anacardium occidentale), soursop (Annona muricata), yellow mombin (Spondias mombin) and Brazil plum (Spondias tuberosa) were evaluated. He study was carried out at Plant Pathology Lab and screenhouse of Embrapa Agroindustria Tropical in Fortaleza, Cearà State. Results showed a high diversity of morphology and hyphal growth among fungus isolates. Also, a very high variability on disease expression upon inoculation into four plant species was observed. However, it was found a lack of specificity of isolates as to infect cashew plants, since all isolates were able to infect cashew with similar high aggressiveness, which demonstrated a high degree of susceptibility of cashew clone used (CCP 76). Similar results were found also for soursop plants as host. Brazil plum showed a very high resistance to all isolates. The data points out for the existence of morphological and pathogenic interactions within L. theobromae population studied. According with the results, altitude and region of isolate origin has no effect on the studied features.